JPS6119235B2 - - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】

本発明は微生物を利用する油脂の製造方法、特
に一名「ハードバター」又は「ハードフアツト」
として知られるカカオバター代用脂の製造方法に
関する。 チヨコレートが重要な製菓材料であることは周
知である。チヨコレートの本質的な特徴が常温で
は固体であるが口中に含んだとき直ちに融解する
独特の融解性状に在り、かつこの特性がカカオバ
ターの特異なグリセライド組成に起因することは
既によく知られている。即ち、カカオバター中に
は多量の１・３−ジ飽和−２−不飽和グリセライ
ド（以下SUSと呼ぶ）を含有し、ある分析例では
１・３−ジステアロ−２−オレイン24.2％：１−
パルミト−２−オレオ−３−ステアリン32.8％：
１・３−ジパルミト−２−オレイン12.1％と報告
されている（J.Sampuguna.et al.、Lipi−ds、
４、444（1969）。しかしながら、カカオバターは
天産物であるのみならず、かつ高価でもある。ま
たカカオバターの融点は34℃〜35℃（但しβ型）
と略一定しているため、季節、地域等のチヨコレ
ートに対する特殊需要に応じて変化を与えること
も不可能である。このため従来よりカカオバター
と類似の融解性を持つたカカオバター代用脂が工
夫されて来た。その一つはシア脂、イリツペ脂、
ボルネオ脂、プルワナ脂、コクム脂などの植物バ
ター又はパーム油などのSUS成分に富む油脂をそ
のまま、又は該成分に富む画分を分別して代用脂
として使用することである。その二は大豆油など
の液体油を水素添加（後所望により分別）して利
用することである。 第一の方法によれば、代用脂自体そのグリセラ
イド組成がマクロ的にカカオバターと類似してい
るので、自由な比率でカカオバター中に混ぜるこ
とができ、かつその製品は優秀である（勿論、代
用脂のSUS成分が相当富化されていることを条件
とする）。しかしこの場合も原料が天産物である
ため、カカオ脂と同様の制約を受ける。殊に植物
バターの原料として商業的に価値のある
Butyrosperumum parkii（シア脂の原料植物）
及びMadhucalongifolia（イリツペ脂の原料植
物）は共に野生であり、その採取は専ら野生果実
の採取に頼つているため、その産地国のナシヨナ
リズムや政情不安と相俟つてその入手は年々困難
の度を加えつつある。 第二の方法は大豆油の如き国際的農産品を原料
とする関係で、その入手自体格別の問題はない。
しかしその反面、この代用脂のグリセライド組成
はカカオバターと全く異質のものであるため、こ
れをカカオバター中に相当量混入することは困難
である。したがつて、この代用脂を用いて作られ
たチヨコレートは主としてカカオビターにより風
味付された模造品となり得るに過ぎない。故にこ
れは厳密な意味でカカオバター代用脂（cacao
butter substitute）の枠外に置かれるべきもので
ある。 以上の理由で、カカオバターの代用脂として本
命に挙げられるものは依然としてカカオバターと
類似の組成を有する油脂であり、従つて、熱帯地
の野生植物に頼ることなく優れた代用脂を開発す
ることは、当業者及びその利用者にとつて極めて
重要な関心事であつた。本発明は直接かかる課題
の解決に志向するものである。 今日発酵工業の発展には目覚ましいものがあり
抗生物質、酵素、アミノ酸、微生物蛋白などの生
産において著しい発展が見られる。油脂類の生産
に関する研究も多数報告されているが、未だ工業
的規模の生産には至つていない。微生物がその体
内に脂質を合成蓄積することは古くより周知であ
り、糸状菌、細菌、酵母、単細胞藻類など広汎な
微生物において含油量50〜60％、例外的には80％
にも及ぶものが報告されている事実からすると、
この事実は一見不可解とも云えるが、その主たる
理由は通常の安価な油脂では採算上普通の動植物
質油と競走できないことが主たる理由である。 しかるに、本発明者は製品価値の高いカカオバ
ターに着目し、微生物による採算上天然油脂と競
争できる油脂生産について広汎な研究を行つた。
その結果カカオバター代用脂としてのSUS含量の
高い油脂を生産する微生物を多数見出し、特願昭
50−47253及び特願昭51−39918で報告した。該報
告の微生物は微生物体内の油脂の蓄積性及び蓄積
された油脂の組成に於けるカカオバターとの類似
性で他の微生物よりも遥かに優れカカオバター代
用脂生産の一応の目的は達成された。 しかしながら、更にその油脂の蓄積性及び脂肪
酸組成を改良するべく研究を行つたところ、高級
アルキル誘導体資化性でSUS生産性微生物を炭素
源としてステアリン酸低級アルコールエステル
類、ステアリン酸ビニル、ステアリルアセテー
ト、ステアリルアルコール及びステアリルクロラ
イドから選ばれるステアリル誘導体の１種又は２
種以上を含有させ、更に他の炭素源としてパルミ
チル誘導体、オレイル誘導体及び糖類の少くとも
１種を併用する混合炭素源培地に培養することに
より優れた結果を得た。該微生物の代表的な菌種
乃至は菌株はキヤンデイダ属、トルロプシス属、
トリコスポロン属、ピチア属、スポロボロミセス
属に多く存在し、例えばキヤンデイダ．グイリエ
ルモンデイ（Candida guilliermondii）IFO 0838
株、同IFO 0566株、キヤンデイダ・トロピカリ
ス（Candida tropicalis）OUT 6019株、キヤン
デイダ．アルビカンス（Candida albicans）
OUT 6266株、キヤンデイダ．リポリチカ
（Candida lipolytica）OUT 6337株、キヤンデイ
ダ属の微工研菌奇第3900号株、同第3901株、トリ
コスポロン．プルランス（Trichosporon
pullulans）OUT 6260株、トリコスポロン属の被
工研菌寄第3902株、同第3903号株、トルロプシ
ス．キヤンデイダ（Torulopsis candida）OUT
6186株、トルロプシス・エトチエルシ
（Torulopsis etchellsii）OUT 6322、トルロプシ
ス・キシリヌスＡ（Torulopsis xylinus Ａ）
OUT 6205株、トルロプシス・バーサチイリス
（Torulopsis versatilis）OUT 6204株、トルロ
プシス属の微工研菌奇第3904号株、ピチア．フア
リノザ（Pichia farinosa）OUT 6121株及びスポ
ロボロミセス・パラロセウス（Sporobolomyces
pararoseus）OUT 6145株等である。これらの微
生物を前記混合炭素源培地に好気的に培養するこ
とにより、微生物体内にカカオバターに類似する
組成を有する油脂を効率よく蓄積させることがで
きる。蓄積された油脂を回収し、そのまゝ或は必
要に応じて分別してSUSに富む画分を分取するこ
とによりカカオバター代用脂として優れた特性を
有する油脂が得られる。 例えば、ステアリン酸メチル、パルミチン酸メ
チルおよびグルコースの混合炭素源を含有する培
地を用いトルロプシス属の微工研受理番号第3904
号株を培養して得た菌体油脂は下記の脂肪酸組成
を有し、これを更にパンクレチアン・リパーゼ法
（J.Amer Oil chem.Soc 41巻 693〜696頁）に
よりそのトリグリセライド組成を分析したとこ
ろ、２−不飽和−１・３−パルミチン6.2％、１
−パルミト−２−不飽和−３−ステアリン22.5
％、２−不飽和−１・３−ステアリン20.5％を含
有し（以上SUS計49.2％）、他のトリ飽和体が
12.8％、ジ不飽和体が27.5％、１又は３位モノ不
飽和体が6.9％である事実より、この油脂はその
ままでもカカオバター代用脂として利用が期待で
きるのみならず、これを１回分別して低融点部を
除去すれば優秀なカカオバター代用脂を収得でき
る。

【表】 本発明の目的に適した菌が比較的容易に分離で
きる菌源は野菜の葉、茎、その他の植物体地上部
である。これらの分離菌株について上記諸属に帰
属することが種々の菌学的特徴により認められた
ものの中から、実験的にSUS産生能の高いものを
選択する。もつとも、SUS含量の定量が比較的面
倒であるところから、簡単なガスクロマトグラフ
法によつてC₁₆及びC₁₈飽和脂肪酸ならびにＣ_18F1
脂肪酸の多いものを予備的にスクリーニングする
のも有効ではあるが、Ｃ_18F1脂肪酸が必ずしもト
リグリセライドの２位に配列するとは云えない以
上この簡易スクリーニングは飽くまで補足的意義
を有するに留る。工業化可能性を基準にすれば、
菌体の含油量30％以上、対消費炭素源油脂収率10
％以上、菌体油脂中のSUS含量30％以上のものが
好ましい。勿論、普通に行われている変異手段、
例えばＸ線、γ線などの放射線照射、ナイトロジ
エンマスタード、代謝桔抗物質などによる被毒操
作は、菌の能力アツプを期待して行われてもよ
い。 本発明を実施するには、予め選ばれた高級アル
キル誘導体資化性でSUS生産性菌体の純粋培養物
を前記の混合炭素源培地中に接種し好気的条件下
にその菌の増殖に適した温度で培養を行う。前掲
した微生物は全部好気性菌である関係から、静置
培養より振盪培養が適している。工業的には液内
通気培養が好ましい。培地としては前記混合炭素
源の他に、資化可能な窒素源、カリウム、ナトリ
ウム、カルシウム、マグネシウム、鉄、亜鉛、
燐、マンガン、銅などの必須無機塩を含有すべき
である。その他菌種によりビタミン類、アミン酸
類などの微量有機栄養源を要求する。 混合炭素源としては、前記ステアリル誘導体類
の１種又は２種以上とパルミチル誘導体類、オレ
イル誘導体類及び糖類から選ばれる少くとも１種
とを混合したものを用いる。 一般に、微生物は培地中の炭素源を体内に取り
込み、体内に分泌される酵素の作用などで炭素源
を低分子物質に分解し、該低分子物質の一部を生
育乃至は増殖等に必要なエネルギーに変え、消費
し他の部分は体内で重合して、脂肪酸或はアミノ
酸の中間体を経由し、油脂或は蛋白質等を合成し
て体内に蓄積する。一方、微生物の油脂合成に関
しては、使用する炭素源が分解する過程で脂肪酸
の形を経由する場合該脂肪酸の一部は更に分解さ
れることなく、直接的に油脂合成に使用されて微
生物の体内に油脂として蓄積されるといわれてい
る。 本発明は上記の微生物が油脂を合成蓄積する生
体機構の内、後者を利用し効率よくカカオ代用脂
を生産しようとするものである。カカオバターは
周知の如くその脂肪酸組成としてステアリン酸を
多く含有している。従つて、微生物の体内で分解
される過程で中間体としてステアリン酸を経由す
る物質を炭素源として供給することが好ましく、
この様な物質について種々検討を行つた。 一般に本発明で用いる微生物はこの様な炭素源
を体内で分解する場合、先ず該物質分子の未端部
分或は比較的に結合力の弱い部分に酵素の作用が
働き、酸化或は加水分解によつて脂肪酸を形成す
る。更に形成された脂肪酸の一部は酵素の作用を
受けて主鎖部分の結合が酸化されて不飽和化し、
更に低分子物質に分解されるか或は不飽和化され
ずに低分子物質に分解される。本発明者は中間体
として脂肪酸を生成する炭素源について更に検討
したところ、微生物の種類或は培養条件により微
生物が体内に分泌する酵素の種類及び量に差が生
じるために若干の変動はあるが、主としてこの反
応の過程で脂肪酸が形成されるために酵素作用を
受ける部分の結合エネルギーと形成された脂肪酸
が更に酵素作用を受ける部分の結合エネルギーと
の関係で蓄積される油脂の脂肪酸組成が変動する
ことを知つた。例えば〔炭素源〕→〔飽和脂肪
酸〕→〔不飽和脂肪酸〕→〔低分子物質〕の如き
経路の酵素分解反応を考えた場合、第１段階の分
解（〔炭素源〕→〔飽和脂肪酸〕）の速度が以降の
各段階の速さに比べて大きい時には、飽和脂肪酸
の形で菌体内に存在する確率が高くなり、菌体内
での油脂合成に該飽和脂肪酸が費される確率が高
くなる。 この様な観点で炭素源として中間体にステアリ
ン酸を生成する各種物質を検討したところ、ステ
アリン酸メチル、ステアリン酸エチル、ステアリ
ン酸ブチル、ステアリン酸ビニル、ステアリルア
セテート、ステアリルアルコール及びステアリル
クロライドを用いることにより一般に好ましい結
果を得た。 しかしながら上記のステアリル誘導体を炭素源
として用い微生物が蓄積する油脂の脂肪酸中のス
テアリン酸を増加させようとする場合、多くの微
生物はその傾向を示し、ステアリン酸含量の高い
油脂を生産するが、その油脂はかならずしもカカ
オバターに類似する脂肪酸配列のトリグリセライ
ドとはなり難い。又ステアリル誘導体を炭素源と
して用いるにもかゝわらず、極端に不飽和脂肪酸
の多い油脂となることがあり、この場合もカカオ
代用脂として不適当なものである。これらの現象
は、主として微生物の生育する環境に対する順応
性に基づくものと考えられ、その油脂の生産性或
は蓄積性が炭素源の特性を含む環境により特定化
されるための現象であると考えられる。 即ち、油脂の脂肪酸組成に於いてステアリン酸
含有量が多い場合、他の不飽和酸含有量の多い油
脂に較べて融点が非常に高くなる。この融点の高
い油脂を蓄積する場合、微生物はその蓄積に適す
る分泌物を体内に分泌して、蓄積に適する条件を
形成するが、その資化性は悪く、油脂の蓄積は低
下する。生育環境がこの特殊な条件を形成可能で
あれば、ステアリル誘導体を炭素源とした場合、
炭素源の多くはステアリン酸の形まで分解して、
油脂合成に消費される。この様な生育環境下では
蓄積される油脂はステアリン酸含量の極めて高い
油脂となり、この様な油脂は、仮りに高融点部を
分別除去し、残部よりカカオ代用脂を得ようとし
ても、その収率は低く経済性の点で実用性の乏し
いものとなる。又高融点の油脂を蓄積するに適し
た条件を形成しない場合、ステアリル誘導体の分
解はステアリン酸の形にとゞまらず、更に融点の
低い不飽和脂胞酸（オレイン酸）或は低分子物質
まで分解してから適当な脂肪酸を合成する傾向を
示す。この場合の多くはステアリン酸と不飽和酸
の比率がカカオバターのその比率に類似する範囲
にとゞまらず、不飽和酸の極めて高い油脂とな
る。これらの現象は、微生物の種類、或は培養の
条件により変動し、カカオ代用脂を得るのに適す
る中間的な蓄積条件を設定することは非常に困難
である。 本発明者は上記の現象に鑑み、更に検討を重ね
たところ、炭素源としてステアリル誘導体の他に
このものよりも資化されやすい他の炭素源を併用
することにより、多くの微生物は極めて安定した
形でカカオ代用脂に適する油脂の生産を行い得る
ことを見出した。即ち、ステアリル誘導体にパル
ミチル誘導体類、オレイル誘導体類及び糖類から
選ばれる１種又は２種以上の炭素源を配合するこ
とにより、微生物は効率よく安定してカカオバタ
ー類似の油脂を生産する。パルミチル誘導体とし
てはパルミチン酸メチル、パルミチン酸エチル、
パルミチン酸ブチル、パルミチン酸ビニル、パル
ミチルアセテート、パルミチルアルコール及びパ
ルミチルクロライドが好ましく、オレイル誘導体
としてはオレイン酸、オレイン酸メチル、オレイ
ン酸エチル、オレイン酸ブチル、オレイン酸ビニ
ル、オレイルアセテート、オレイルアルコール及
びオレイルクロライドが好ましい。又、糖類とし
ては単糖類、少糖類又は水溶性多糖類のいづれで
もよい。 これらの炭素源は単独或は２種以上を混合して
ステアリル誘導体と配合して用いる。ステアリル
誘導体は炭素源の重量に対して10〜95％の範囲で
使用するのが好ましく、上記ステアリル誘導体以
外の炭素源は５〜90％用いられる。ステアリル誘
導体を炭素源として95％以上用いると前記の如く
カカオ代用脂としてのバランスのとれた油脂は生
産され難く、又10％以下では生産される油脂のス
テアリン酸含有量が上昇せず目的は達成されな
い。 更に、カカオ代用脂としての脂肪酸組成を安定
に生産するにはステアリル誘導体を炭素源重量に
対して25〜85％の範囲とするのが特に好ましい
が、前記範囲であつても一応の目的は達成され
る。 上記の割合で配合した炭素源に、更に必須無機
塩類及び微量有機化合物等を添加する。 この様にして得られる培地に於て、微生物はス
テアリル誘導体とそれ以外の炭素源をどの様に利
用し、油脂合成に利用するかは明確でない。しか
し、一般に資化性の劣るステアリル誘導体の利用
は他の炭素源を或る程度利用した後に行われると
考えられ、その時点では融点の高いステアリン酸
も容易に油脂合成に利用されるものと考えられ
る。 以上述べた諸栄養源は使用菌にとつて最適の発
育条件となる一定の配合で培地中に含有せしめら
れる。この条件は菌種により多少の巾はあるが、
大体、全量に対しＣ：0.8〜5.0％、Ｎ：0.006〜
0.17％の範囲である。特にＣ／Ｎ比は菌体の増殖
にとつて重要であるので綿密な実験により決定さ
るべきである。一般に炭素側の減少による本比
（Ｃ／Ｎ）の減少は含油量及びSUS成分の著しい
減少を招く。理想的なＣ／Ｎ比の下では菌体収量
のみならず、含有量及びSUS含量もまた大きい。 上記の菌は大体25〜45℃の間の温度領域内で発
育するが、特に良好な発育は30〜37℃の範囲に見
られる。本発明者の知見によれば、良好な発育を
示す温度範囲内では培養温度が上昇する程菌体油
脂中の飽和グリセライドが増加することが認めら
れた。従つて、SUS分の収率を高めるには或る程
度培養温度を高めた方が有利である。この培養温
度の高温化は、工業的な（連続）発酵時における
発酵熱の制御上からも都合が良い。 本発明における発酵時間は普通72時間以内であ
ることを可とする。96時間又はそれ以上にも及ぶ
発酵は不経済であるのみでなく一旦生成した油脂
の飽和脂肪酸が酵素の作用等により不飽和化する
ことがあり好ましくない。 以上の如くして得られた菌体増殖物から油脂を
抽出するには、先づ培養液をろ過又は遠心分離し
て湿つた菌体を集める。この場合ろ過を容易にす
るには、ブロスを酸性側にした方がよい。湿つた
菌体はそのままコロイドミル又はボールミル等を
用いて磨砕し、次いでヘキサンの如き溶媒で抽出
するか又は一旦凍結もしくは噴霧乾燥後、ケージ
プレス、エキスペラー等を用いて搾油するか、又
はヘキサン等により抽出するか、或いは両者を併
用して抽出を行う。別法として湿つた菌体を凍結
して細胞膜を破壊した後常温に戻し、次いで溶媒
抽出を行つてもよい。以上の他、抽出を容易化す
るための手段として超音波による菌体の破壊及び
ヘミセルラーゼ等による細胞膜の除去も有効補助
な手段である。なお、実験室的には、湿つた菌体
を乳鉢中硅砂、ガラスペレツト等と共に磨砕する
のが簡便な方法である。かくして油脂を回収した
後の脱脂菌体は濃厚な蛋白源であると共に豊富な
ビタミン源、及び補酵素源でもあるのでこれはそ
のまま飼料として利用できるのみならず、更にこ
れから蛋白質を抽出すれば、人の食料として有用
な微生物蛋白となる他、また栄養品医薬などの原
料としても利用できる。一方、抽出された粗油脂
は通常夾雑物、例えばモノ−及びジーグリセライ
ド、遊離脂肪酸、フイトステロール類、フオスフ
オリピド、カロテノイドなどを含むので精製には
通常の油脂の精製に準じ、脱酸、脱色及び脱臭の
各工程に附す。 以上の如くして得た精製油は場合によりそのま
までも代用脂として利用できるが、成るべくは分
別を行つてSUS分の含量を高めるのが望ましい。
分別には単に油を冷却して固形部と液体部とに分
離するウインタリング法、油を界面活性剤の水溶
液中に分散後冷却して結晶部（固形部）と液体部
と水性層とに分離する湿式ウインタリング法及び
油を有機溶剤中に溶解後段階的に冷却して種々の
融点部分に分別する溶剤分別法などがあるが、発
明目的上最も好適なのは後者である。後者の溶剤
分別法によれば、溶剤の種類の量の選択により所
望のSUSを多量に含む画分を容易に収得しうる利
点がある。分別は先づ高融点のトリ飽和グリセラ
イド（このものの多量混入はチヨコレートの粘度
を上昇せしめテンパリングを困難ならしめる原因
となる）を析出物として除去し、次いで所望のジ
飽和−モノ−不飽和グリセライド分画を第２の析
出物として分離採取し、最後に液状部としてモノ
飽和−ジ−不飽和−及びトリ不飽和グリセライド
を剰す三段法（勿論、トリ飽和グリセライドの量
が少なければ初段階を省略できる）によるのが普
通である。なお分別は所望により脱臭工程の前に
行つてもよい。カカオバター代用脂として望まし
い油脂中のSUSの含量は少くとも15％以上、好ま
しくは25％以上であるのが望ましい。溶媒として
はヘキサン、メチルエチルケトン、アセトン、エ
タノールなど油脂の分別に利用できる公知の溶媒
は全て使用可能である。 実施例 １ 撹拌機及び送気ダクト付150醗酵槽に下記組
成の半合成培地を100入れ、これにキヤンデイ
ダ（Candida）属微工研菌寄第3901号株、キヤン
デイダ．グイリエルモンデイ（Candida
guilliermondii）IFO 0838株、キヤンデイダ．ト
ロピカリス（Candida tropicalis）OUT 6019
株、トリコスポロン（Trichosporon）属微工研
菌寄第3902号株、同第3903号株及びトルロプシ
ス・バーサテイリス（Torulopsis versatilis）
OUT 6204株の純粋培養物１を接種し、各々通
気量1VVM、撹拌速度300r.p.m、温度35℃の条件
で28時間培養した。 〔培地組成〕

【表】 培養後、ブロス中の菌体を遠心分離機で集め、
噴霧乾燥し、この菌体の重量を測定する。次に菌
体を静圧110Kg/cm²の圧力でケージ中で加圧搾油し
残渣を５倍量のｎ−ヘキサンを用いて２回抽出
し、溶媒を除いて得た油脂を先きの搾出分と併合
する。併合した油脂の重量を測定した後、そのヨ
ウ素価、酸価、脂肪酸組成及びトリグリセライド
配列を測定した。測定結果を第１表に示す。

【表】

【表】

【表】 実施例 ２ 撹拌機及び送気ダクト付150醗酵槽に炭素源
が下記のＡ〜Ｇ及び比較例としてＸの配合に他の
培地組成としてKH₂PO₄ ７ｇ、MgSO₄・7H₂O
2.5ｇ、NaCl 0.1ｇ、酵母エキス３ｇ及び水１
が共通する半合成培地100を入れ、各々PH6.0及
び温度35℃でトルロシプス（Torulopsis）属の微
工研菌奇第3904号株の純粋培養物１を接種し、
通気量1VVM、撹拌速度300r.p.mで28時間培養し
た。 ＜培地の炭素源配合＞ Ａ培地 ステアリン酸メチル 18ｇ Ｂ 〃 ステアリン酸エチル 13ｇ Ｃ 〃 ステアリルアルコール 17ｇ Ｄ 〃 ステアリン酸ビニル 13ｇ Ｅ 〃 ステアリン酸メチル ９ｇ オレイン酸 ７ｇ Ｆ 〃 ステアリルクロライド 18ｇ Ｘ 〃 ステアリン酸メチル 20ｇ パルミチン酸メチル ２ｇ パルミチン酸ブチル ７ｇ パルミチン酸メチル ３ｇ パルミチン酸ビニル ７ｇ パルミチン酸メチル ４ｇ パルミチルアセテート ２ｇ 培養後、実施例１と同様に菌体を採取し、油脂
を回収して、更に各特性を測定した。結果は第２
表に示す。 本発明の培地組成であるＡからＧ培地で培養し
て得た油脂はトリグリセライド配例中の２位不飽
和のジ飽和グリセライドの含有率が高いが比較例
のステアリン酸メチル単独で培養したＸ培地では
菌体収量が低く油脂収率としても低く２位不飽和
のジ飽和グリセライドの含有率も低い値を示し
た。

【表】

【表】

【表】 実施例 ３ 撹拌機及び送気ダクト付150醗酵槽を用いス
テアリン酸メチル14ｇ、パルミチン酸メチル６
ｇ、KH₂PO₄1ｇ、MgSO₄・7H₂O0.5ｇ、NaC11
ｇ、酵母エキス３ｇ、CaCl₂・2H₂O0.5ｇ、ビタ
ミンB₁300μｇ、FeCl₃・6H₂O2mgZnSO₄・7H₂O2
mg及び水１の配合割合から成るPH4.5の培地を
100入れ、これにトルロプシス（Torulopsis）
属微工研菌寄第3904号株の純粋培養液２を接種
し、通気量1VVM、撹拌速度800r.p.m、培養温度
35℃で培養する。28時間培養後ノズルセパレータ
式遠心分離機で菌体を分離採取する。採取された
菌体を凍結乾燥し、重量を測定したところ1115ｇ
であつた。この菌体を実施例１と同様にし、油脂
を回収しこの粗油脂を各特性を測定した。又、得
られた粗油脂550ｇ中の200ｇを常法で脱酸し、脱
酸後800ｇのｎ−ヘキサンに溶解し−15℃で１時
間撹拌して析出した結晶（中高融点部）を別採
取後、更に11℃で１時間撹拌して析出した結晶
（高融点部）と液状部（中融点部）を別した。
得られた各融点部からｎ−ヘキサンを蒸発除去し
重量を測定したところ高融点部10.2％、中融点部
53.9％及び低融点部35.9％の割合であつた。この
中融点部の各油脂特性を測定し、その結果を上記
粗油脂の特性と併せて第３表に示す。

【表】

【表】 又、中融点部の油脂のクーリングカーブを測定
したところ、第１図に示す結果であつた。

【図面の簡単な説明】

第１図は実施例３で得た油脂の中融点部及びカ
カオバターのクーリングカーブを示し、図中１は
上記中融点部、同２はカカオバターのクーリング
カーブである。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ キヤンデイダ（Candida）属、トルロプシス
   （Torulopsis）属、トリコスポロン
   （Trichosporon）属、ピチア（Pichia）属、スポ
   ロボロミセス（Sporobolomyces）属に属する高
   級アルキル誘導体資化性で１・３−ジ飽和−２不
   飽和グリセライド生産性微生物を培養し、菌体か
   ら１・３−ジ飽和−２不飽和グリセリライドに富
   む油脂を生産する方法に於いて、培地の炭素源と
   してステアリン酸低級アルコールエステル類、ス
   テアリン酸ビニル、ステアリルアセテート、ステ
   アリルアルコール及びステアリルクロライドから
   選ばれるステアリル誘導体の１種又は２種以上を
   含有させ、更に他の炭素源としてパルミチル誘導
   体、オレイル誘導体及び糖類の少なくとも１種を
   併用する混合炭素源の培地に、該微生物を好気的
   に培養して菌体を採取し、採取した菌体から油脂
   を回収することを特徴とするカカオバター代用脂
   の製造方法。 ２ ステアリル誘導体の１種又は２種以上を培地
   の炭素源の重量に対して10〜95重量％含有させる
   特許請求の範囲第１項記載の方法。 ３ ステアリン酸低級アルコールエステルがステ
   アリン酸メチル、ステアリン酸エチル及びステア
   リン酸ブチルである特許請求の範囲第１項記載の
   方法。 ４ パルミチル誘導体がパルミチン酸メチル、パ
   ルミチン酸エチル、パルミチン酸ブチル、パルミ
   チン酸ビニル、パルミチルアセテート、パルミチ
   ルアルコール及びパルミチルクロライドから選ば
   れる１種又は２種以上である特許請求の範囲第１
   項記載の方法。 ５ オレイル誘導体がオレイン酸、オレイン酸メ
   チル、オレイン酸エチル、オレイン酸ブチル、オ
   レイン酸ビニル、オレイルアセテート、オレイル
   アルコール及びオレイルクロライドから選ばれる
   １種又は２種以上である特許請求の範囲第１項記
   載の方法。 ６ 糖類が単糖類、少糖類又は水溶性多糖類から
   選ばれる１種又は２種以上である特許請求の範囲
   第１項記載の方法。