JPS62143683A - グリコシド水解酵素抑制因子生産性微生物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 放射菌科の多数の微生物、なかんずく、アクチノプラナ
セアエ（Ａ　ｅｔｉｎｏｐｌａｎａｃｅａｅ）が、グリ
コシド水解酵素、好ましくは消化管の炭水化物分解酵素
のための抑制因子を生成することは、公知である（西ド
イツ特許出願公開明細書２，０６４，０９２号）。

更に、ストレプトマイシス（Ｓ　ｔｒｅｐｔｏｓｙｅｅ
ｓ）属の微生物の菌株から誘導する、制菌作用を有する
抗生物質である、ノジリマイシンが、ある種の微生物の
ａ−グルコシダーゼを抑制するということが公知である
（Ｔ、Ｎｉｗａら、Ａｇｒ、　Ｂ　ｉｏｌ、Ｃｈｅｗ。

几、９６６（１９７０）］。

本発明によって、バチルス（Ｂａｃｉｌｌａｅｅａｅ）
科の微生物の培養によって、特に桿菌（Ｂａｃｉｌｌｕ
ｓ）属の菌株によって、消化管中で活性である、グリコ
シド水解酵素に対する抑制因子（抑制剤）、特にグルコ
シグーゼ抑制因子（抑制剤）、特にサッカラーゼ抑制因
子（抑制剤）を生成せしめる。

加うるに、われわれは、バチルス科の微生物のある種の
菌株、特に０８Ｍ７、ＤＳＭ７０４およびＤＳＭ６７５
菌株が、１−デスオキシノジリマイシンとして公知の抗
生物質を生産することをも見出した。それ故、本発明は
、バチルス属の１−デスオキシノジリマイシン生産微生
物を培養することから成る、１−デスオキシノジリマイ
シンの製造方法を提供する。

本発明は、特には、菌株ＦＴ’：ＲＭ−ＰＮｏ、４２３
　５（０８Ｍ７　０　４）、　　ドＥ１°（Ｍ−ＰＮｏ
、４　２　４　９（ＤＳＭ７４０）、ＦＥＲＭ　　ＰＮ
ｏ、４２５０（ＤＳＭ７４１）またはＦ　ＥＲＭ−ＰＮ
ｏ、４２５１　（ＤＳＭ７４２）の桿菌属に属するグリ
コシド水解酵素抑制因子生産性微生物に関する。

以下に記す方法は、本発明の方法において用いる適当な
菌株を発見するために用いる。

バチルス科の菌株、特に桿菌属の菌株は、公知のように
して土の試料から単離することができる。

これらの菌株の成長を可能とする栄養溶液を含有する培
養フラスコに、これらの菌株の転移接種（ｔｒａｎｓｉ
ｎｏｃｕｌａｔｉｏｎ）で接種する。たとえば、１リッ
トル当９５ｇのヘプトンおよび３ｇの肉エキスを含有す
る栄養溶液を用いることができるが、原則として、適当
な炭素および窒素源ならびに栄養素塩類を含有する多く
のその他の種類の栄養溶液を使用することができる。栄
養溶液のｐＨ値は広い範囲内で変えることができる。６
．０〜８．０の栄養溶液の初期ｐＨを選ぶことが好まし
い。

きわめて多種の有機物質を、栄養溶液中に炭素を供給す
る物質として使用することができる。例として炭水化物
、有機酸訃」＝びアルコールを挙げることができる。

酵母エキス、大豆粉、ペプトン、肉エキスおよびその他
の多ぐの物質を、窒素源ならびに適当な無機窒素源とし
て用いることができる。

炭素および窒素源ならびに、例としてｐｅｓ’ｏ４、ｃ
ａｃｏ、、およびＭｇＳＯ４を挙げることができる栄養
塩類の濃度は、広い範囲内で変えることができる。

ある場合には、栄養塩類は、複雑な窒素源中に、付随す
る物質として、しばしば含有されているから、これらの
塩類の別個の添加を省くことができる。

抑制因子の生成は、しばしば、栄養培地の組成に著るし
ぐ依存するから、生産能力を最高とするために酊株を異
なる栄養溶液中で培養することが望ましい。適当な計画
は実施例により知ることができる。

たとえば１００〜２００−の栄養溶液を１召の円錐フラ
スコ中Ｉｃ入れ、公知のようにして滅菌したのち、試験
すべき菌株を接種し、次いでフラスコを、搗とり機上で
、１５〜８０℃において、好ましくは２４〜４０°Ｃ１
または好熱性の細歯の場合には５０〜７０℃において、
培養する。培養物が、一般に１〜１０日後に、通常は１
〜５日後に、認めることができる生長を示すときは、た
とえば５ｄの試料を取出して、この試料中の細胞を、濾
過または遠心分離によって分離する。以下に記す試験に
おいては、１〜１００μβの培養液を用いて、ｌｄ当り
の抑制能力を計算する。

細胞を、各回５容量（細胞の容量に対して）のアセトン
を用いて２回抽出し、次いで５容量のジエチルエーテル
によって１回抽出する。併せた抽出物を乾固するまで濃
縮し、水中に取って凍結乾燥する。凍結乾燥物を１０〜
１０００μＰ／ばの濃度で、以下に記す試験に用いる。

アミラーゼ単位 アミラーゼ抑制因子単位（ＩＡＩＵ　）は、２アミラ一
ゼ単位ｔｌ−５０％の範囲才で抑制する抑制因子の量と
定義する。アミラーゼ単位（ＡＵ）は、下記の試験条件
下に、１分間に一粉中の１μ当量のグルコシド結合を分
解する酵素の量である。分解した結合のμ当量数は、比
色的に、ジニトロサリチル酸を用いて、生成する還元糖
のμ−当量として測定し且つマルトース標準Ｓ線の助け
をかりて、マルトース当量のμ−当量として示す。試験
を行なうためには、ｐＨ６，９の０．４−の０．０２Ｍ
グリ七ロ燐酸ナトリウム緩衝液／　０．００１　Ｍ　Ｃ
ａＣ１２中の１０〜１０００μ２の抑制因子、すなわち
１〜１００ｐ＃の試験すべき培養液を、０．１−のアミ
ラーゼ溶液（２０〜２２ＡＵ１ゴ）に加え、且つその混
合物を３５℃の水浴中で約１０〜２０分間平衡化する。

次いで、予め３５°Ｃに加温しである、濃度１％の殿粉
溶液０．５ｍ７！と共に３５℃において５分間培養した
のち、１ｄのジニトロサリチル酸試薬（Ｃｏｌｏｗｉｃ
ｋ−Ｋａｐｌａｎ、、Ｍｅｔｈ−Ｅｎｚｙｎｏｌ、　。

第１巻、１４９頁中のＰ、　Ｂｅ　ｒｎｆｅ　ｌｄによ
る）を加える。発色させるために、このバッチを沸とう
水浴上で５分間加熱し、次いで冷却し且り１０−の蒸留
水を加える。５４０７Ｌｍにおける吸光を同様にして調
製した、アミラーゼを含有しないブランク値に対比して
測定する。評価のために、抑制因子の添加後になお有効
なアミラーゼの活性を、予め記録しであるアミラーゼ標
準凹線から読み取り、この値から使用したアミラーゼの
抑制百分率を計算する。抑制百分率を、商 抑制因子μ？ ＡＵ※※ ×　乾燥物質に対して ※※　抑制せしめてない同系列のバッチ中のＡＵの関数
としてプロットし、この凹線から５０％抑制点を読み取
り、抑制因子のＡＩＵ／ｍｇに換算する。

サッカラーゼ抑制因子単位（ＳＩＩＪ）は、２サツ力ラ
ーゼ単位を５０％の範囲まで抑制する抑制因子の量とし
て定義する。１サツ力ラーゼ単位（ＳＵ）は、下記の試
験条件下に、１分間に１μモルのスクロースヲクルコー
スとフルクｌ−−スに分解する酵素の量である。生成す
るグルコースのμモル数は、サッカラーゼによるスクロ
ースのそれ以上の分解がもはや生じない条件下に、グル
コースオキシダーゼの助けをかりて、定量する。この試
験を行なうためには、１〜２０μ２の抑制因子、すなわ
ち１〜２０μβの測定すべき溶液を、０．１２ＳＵの含
量に調節した０、０５−のサッカラーゼ溶液に加え、そ
の混合物をｐＨ６，０の０．１　Ｍマレイン酸ナトリウ
ム緩衝液を用いて０．１　ｒｎｌにする。ｐＨ６，０の
０．１Ｍマレイン酸ナトリウム緩衝液を用いて適当なＳ
Ｕ含量に希釈した、Ｂ。

Ｂ　ｏｒｇ、？ｔｒｏｍ、Ａ＋Ｄａｈｌｑｕ、ｉ　ｅｔ
　、ＡＣｔａ　、Ｑｈ　ｅｍ、Ｓ　ｃａｎｄ、。

Ｊス（１９５８）、１９９７頁による豚の小腸粘膜から
の可溶化したサッカラーゼを用いることが適当である。

この混合物を３５℃で１０分間平衡化させたのち、予め
３５℃に加温した、ｐＨ６，０の０．１　Ｍマレイン酸
ナトリウム緩衝液中にかける０、０５Ｍのスクロース溶
液０．１−を加える。この混合物を３５℃で２０分間培
養し、１−のグルコースオキシダーゼ試薬の添加によっ
てサッカラーゼの反応を停止させ、次いで混合物を３５
℃において更に３０分間培養する。グルコースオキシダ
ーゼ試薬は、２■のグルコースオキシダーゼ（メツサー
ズベーリングル、純度Ｉ）をｐＨ７，０の１００艷の０
．５６５＆）リスーＨＱＩ中に溶解し、次いでＩＷｄ！
の洗剤溶液（２？のトリトンｘ＋８Ｐ溶液（２０ｄのＨ
２Ｏ中の２６０ηの０−ジアニシジン・２ＨＣｌ）およ
び０．５＋＋＋／のペルオキシダーゼ（メツサーズペー
リンダル、凍結乾燥物、純度■）の濃度０．１％水溶液
を加えることＫよって調製することが適当である。次い
で１ｄの濃度５０％のＨｔＳＯ４を加えたのち、混合物
を、相当するブランク値と対比して、５４５＆ｍにおい
て測定する。

評価のために、使用するサッカラーゼの抑制百分率を計
算し且つグルコース標準凹線の助けをかシて、５０％抑
制点からＳＩＵ／９−またはＳ　Ｉ　Ｕ／１３に換算す
る。

マルターゼ抑制因子単位（ＭＩＵ　）は、２マルク一ゼ
単位を５０％の範囲まで抑制する抑制因子の量として定
義する。１マルタ一ゼ単位（ＭＵ）は、下記の試験条件
下に１分間に１μモルのマルトースを２μモルのグルコ
ースに分解する酵素の量である。生成するグルコースの
μモルハ、マルターゼによるマルトースのそれ以上の分
解がもはや生じない条件下に、グルコースオキシダーゼ
反応の助けによって、定量する。試験を行なうために、
１〜２０ｐ’？の抑制因子、すなわち１〜２０μβの試
験すべき溶液を、０．０６０〜０．０７０ＭＵの含量に
調節した０、０５ｍのマルターゼ溶液に加える。Ｂ、　
ＢｏｒｌｓｔｒｏｍおよびＡ、　Ｉ）ａｈｌｑｕ、ｉｚ
ｔ。

Ａｃｔａ　Ｑｈｔｍ−５ｃａｎｄ、　１２　、１９９７
　（１９５８）に従がい、豚の小腸粘膜からの可溶化し
たマルターゼを使用し、７１．７７６．０のα１Ｍ１＃
マレイン酸ナトリウム緩衝液って適当なＭＵ含量に希釈
することが適当である。この混合物をｐＪＩ６．０のＯ
−１＃マレイン酸ナトリウム緩衝液を用いて０．１　ｍ
／！とじ旧つ３５℃において１０分間平衡化させる。次
いで、予め３５℃に加温した、ｐＨ６，０の０．１Ｍマ
レイン酸ナトリウム緩衝液中の０．０５Ｍマルトース溶
液０．１　ｍ７！を加える。この混合１ｔｙＩ’＆３５
℃にｊ？いて２０分間培養し、マルターゼ反応を、サッ
カラーゼ試験方法例おいて記したグルコースオキシダー
ゼ試薬１−の添加によって、停止させたのち、混合物を
３５℃において更に３０分間培養する。次いで１ゴの濃
度５０％Ｈ，Ｓｏ、を加え且つ混合物を、相当するブラ
ンク値に対比させて、５４５ｒＬｍで測定する。

計画のために、使用するマルターゼの抑制百分率を計算
し且つグルコース標準曲線の助けによって、５０％抑制
点からＭ　Ｉ　Ｕｌ　９−またはＭ　Ｉ　ＵｌＥに換算
する。

バチルス科の多数の菌株を、上記の方法によって試験し
た。グリコシド水解酵素に対する顕著な抑制活性が、特
にバチルス属の菌株の場合に、ここに認められた。枯草
菌（７３，５Ｗｈｔｉｌｉ、？’）、枯草菌＝　ｙ　Ａ
／変種（Ｂ、　ｓｕ、ｈｔｉｌｉｓ　ｖａｒ、　ｎｉｇ
ｅｒχアミロリケファシエンス菌（Ｂ６ｍｎｙｌ　ｏｌ
　１ｑｕｅ　ｆａｃｉ　ｅｎｐ）、０７ギスポルス菌（
Ｂ、　ｌｏｎｇｉｓｐｏｒｕ、？’）、　　ポリミクサ
菌（Ｂ、ｐｏｌｙｍｙｘα）およびコアギユランス閑（
、ａｃｏａｇｕ、１ａＦＬ、？）の種は、収率に関して
もつとも有利であることが認められた。

試験において活性な抑制剤であることが記載の方法によ
って認められた菌株における頻度は、５％を超えた。特
に活性な菌株の例を、第１表に示す： 上の表の菌株は、ダツチンダンにあるドイツ微生物蒐果
所（Ｄｅｔｂｔｓｃｈｅ　Ｓａｍｍｕｌｕ、ｒＬｇ　ｆ
ｔｉ；ｒｙ・ＭｉｋｒｏｏｒｌａｒＬｉｓｍｅｎ、）（
ＤＳＭ　）　において、規定したＤＳＭ番号のもとに保
管されておシ、且つそこから取得することができる。

菌株ＤＳＭ７０４．７４０．７４１および７４２は新菌
株である。それ故、本発明は、これらの醒抹の試験管内
培養をも包含する。これらの菌株の性質を第２表に示す
。残りの笛株は、文献によシ公矧であシ且つＤＳＭの“
１９７４年呵株カメログ中に記されている。

第２表 菌株の性質　　　７４０７４１７４２７０４杆の長さ、
μ　　　　　　　　３−６　２−５　３−７　２−４グ
ラム反応　　　　　　　＋　　士　　十　　十第　２　
表（続き） ＤＳＭ　ＤＳＭ　ＤＳＭ　ＤＳＭ 菌株の性質　　　７４０７４１７４２７０４胞子、楕円
状／円筒状　　　　＋　　＋＋＋内形　　　　　−−−
− 末端／末端近＜　　　　　　　　　＋　　　−１−＋　
　　＋中心／副中心　　　　　　　　　＋　　ト＋＋膨
化胞子母細胞　　　　　　　＋　　＋十−町動性　　　
　　＋　ト＋＋ 最高生長温度−生長陽性’Ｃ４０４０４５５５生長陰性
温度、℃　　　　　　４５　　４５　　５０　６０カタ
ラーゼ　　　　　　　　　＋　　＋＋＋嫌気性生長　　
　　　　　千　　十十−ホダスー１０スカウエル反応　
　　　　＋　　＋　　＋ＶＰ培地中のｐＨ６，２”６．
５　　６．５　　５．６卵黄反応　　　　　　　−−一
一 生長 ＤＳＪｆ　　ＤＳＭ　　ＤＳＭ　　ＤＳＭ菌株の性質　
　　７４０　７４１７４２７０４ｐＨ５，７−ｌ−−ｌ
−−１−−ト ５％の）ｉ　ａ　Ｃ１±　　　　　−−−ドア％のＡ’
　ａ　Ｃ１−＋ １０％のＮｘＱｌ　　　　　　　　−−４リゾチーム（
０，００１％）　　　　　　−＋−−Ｄ−グルコースか
υつ酸の生成　　１−　　　−１−　　　　＋　　　　
＋Ｄ−キシロースか６ペ浚の生成　　＋　　　＋＋＋グ
ルコースからυガラスの形成−ト＋十−殿粉の減成　　
　　　　　　　＋　　＋＋＋カゼインの減成　　　　　
　　＋　　＋＋＋ゼラチンの減成　　　　　　　＋　　
＋＋＋チロシンの減成　　　　　　　−−ｍ−馬尿酸塩
の減成　　　　　　−一一− ＤＳＭ　　ＤＳＭ　　ＤＳＭ　　ＤＳＭ菌株の性質　　
７４０７４１　７４２７０４波クチンの減成　　　　　
　　＋　　＋　　→−（えん酸塩の評価　　　　　　−
−−１プａピオン酸塩の評価　　　　−−ｍ−フェニル
アラニンの脱アミノ化−−− ＮＯ３−からＮＯ，−へ４刃！元　　　　十　　　十−
ト＋硝酸塩からのガスの主成　　　　　−−ｍ−結晶性
デキストリン類０主成　　　−−−インドールの生成　
　　　　−−ｍ− ジヒドロキシアセトンの生成＋＋− 胞子の形成および好気性生長の故に、菌株ＤＳＭ７４０
、ＤＳＭ７４１、ＤＳＭ７４２オヨヒＤＳＭ７０４は、
桿笛属として帰属せしめるべきである。

菌株ＤＳＭ’ｌ　４０、ＤＳＭ７４１およびＤｓＭ７４
２１Ｃついて測定した形態学的２よび生理学的特性はボ
＋７（フサ菌のそれに相当するが、菌株ＤＳＭ７０４は
枯草菌の種に帰属せしめるべきである。

同定は、Ｒ，Ｅ　、Ｇｏｒｄｏ２Ｗ、Ｃ，Ｈａｙｎｔｓ
およびａＨｏｒ−Ｈａｙ　ｐｏｒＬ！ｌ：桿直属、ワシ
ントン１９７３、に従って行なった。

グリコシド水解酵素抑制因子を取得するために、上に表
示した菌株を、たとえば、前記のような栄蕃溶液中で培
養する。本発明において用いる微生物の培養物は一般に
、微生物に加えて、炭素および窒素源を含有する栄養培
地から成っている。しかしながら、最高の生産のために
は、はとんどすべての菌株が、異なる定性的な組成およ
び具なる定量的な組成の栄養溶液を必要とするというこ
とに注意すべきである。

一般に、微生物は、異なる大きさの振とうフラスコ−ま
たは醗酵器中で、１５〜８０℃、好ましくは２４〜４０
℃、または、好熱性の場合には、５０〜７０℃にお込て
１〜１０日間培養する。次いで培養液から細胞を分離し
且つ、抑制因子の存在に依存して、活性化合物を、培養
液および／または細胞から濃縮する。

抑制因子は、培養液から、凍結乾燥によって、または塩
あるいは水溶性有機溶剤（たとえば低級アルコールおよ
びケトン類）を用いる沈殿によって、または活性化合物
のイオン交換体上における吸着によって、単離する。

抑制因子は、細胞からは、たとえばアルコール、ケトン
、エーテル、エステルおよびスルホキシドのような有機
溶剤を用いる抽出によって、単離する。

そのためには、醗酵パッチを、３，０００〜２０．００
０回転／分、好ましくは６，０００〜ｔｏ、ｏｏｏ回転
／分で１０〜６０分、好ましくは３０分間遠心分離する
か、あるいは好ましくは圧刀下に且つ濾過助剤を使用し
て、濾過し、且つこのようにして培養液と細胞残渣に分
離する。

特定の培養液からの抑制因子の単離は、いろいろな方法
で行なうことができる： α）培養液の、減圧下（１０〜５０　ｍＩＨ！ｉ’　）
における２０〜１００℃、好ましくは４０〜８０℃の浴
温に訃いての、出発容量の約％〜’Ａｏへの濃縮。

濃縮した抽出物全濾過または遠心分離し、透明な戸液（
透明な上澄液）を、必要に応じ、予め塩の除去後に、凍
結乾燥する。

６）たとえば、アルコールまたはケトン、好ましくはメ
タノール、エタノールまたはアセトンのような水溶性Ｍ
機溶剤を６０〜９０％の含量に至るまで添加することに
よる培養液から（あるいはα）Ｋ従って濃縮した培養液
から）の抑制因子の沈殿。

不活性な共存物質（は、比較的低い溶剤濃度において沈
殿するから、この沈殿方法は、望ましくない共存物質を
分離するための分別沈殿に対して特に適している。

Ｃ）たとえば硫酸アンモニウム、塩化ナトリウデなどを
用いる、抽出物（あるいはα）に従って濃縮した抽出物
）からの抑制因子の塩析。分離する沈殿物を遠心分離ま
たは濾過によって捕集し、且つ直ちにアセトンおよびエ
ーテルで洗浄したのち、真空乾燥するか、あるいは水中
に再溶解したのちに、透析および凍結乾燥する。

ｄ）抑制因子のイオン交換体上における吸着。この方法
は、化学的性質の故に電荷を有している抑制因子の単離
のために適当である。抑制因子の脱着は、溶出媒体のイ
オン強度またはｐＨ値を変えることによって行なう。

培養液中には、抑制因子のほかに、しばしば、望ましく
ない共存物質が存在する。これらの共存物質は、いろい
ろな方法によって、たとえば熱に対して安定な抑制因子
の場合には加熱によって共存物質を変性することによシ
、あるいは、低分子量抑制因子の場合には適当な膜を用
いて透析して望ましくない共存物質を膜上に留置せしめ
ることによって、あるいは分別沈殿（ｈ滲照）によって
、あるいはイオン交換体上における共存物質の吸着によ
って、分離することができる。

抑制因子は、細胞からは、細胞全有機溶剤によって数回
抽出することにより、好寸しくは細１泡を３〜５容量の
アセトン（湿った細胞の容量に対して）により１０〜２
０分間２回曲出し、次いでそれをエーテルによって５〜
１０分間１回抽出することによって単離する。アセトン
抽出物およびエーテル抽出物を真空下に乾固するまで濃
縮し、残渣を水中に取り且つ凍結乾燥する。

新規物質は、水中に容易に溶解する。これらの抑制因子
の１グループは、中性のｐＨ値において熱に対し安定で
あシ、酸（ＰＨ２）に対して安定であり且つアルカリ（
ＰＨ１２）に対して安定であり且つ透析することができ
る。これらの抑制因子はトリプシンおよびペプシンによ
って不活性化されず、一方、それらは先に挙げた酵素を
抑制しない。これらは典型的な蛋白質染料で染色するこ
とができる。グル濾過による推定によれば、これらの抑
制因子の分子量は、１００より大であるが２．０００よ
シも小である。

これらのグループの中の最良の抑制因子は、サッカラー
ゼに対するきわめて高い抑′Ａｉｊ１作用によって顕著
である。

菌株ＤＳＭ７を、組成Ａ（実施例４参照）の栄養溶液中
で醗酵させるときは、４日間の醗酵後に、４００．０Ｏ
Ｏ５ＩＵ／Ａ以上を取得することができ且つこの菌株を
、栄養浴液Ｓｓ　　（実施例３参照）中で培養するとき
は、６日間の醗酵後に、３００，０００ＳＩＵ／Ｊ３以
上を取得することができる。

約４０．０００　ＳＩＵ／ｆ／−の粗製抑制因子は、Ｈ
の形態にある強酸性カチオン交換樹脂上の吸着およびそ
の後のＮＨ３水溶液による脱着ならびに脱着溶液の濃縮
および凍結乾燥によって取得することができる。粗製抑
制因子のメタノールによる抽出、抽出物の乾固して至る
までの濃縮、残留物の水中への再溶解訃工びその水溶液
のデキストランまたはセルロース、特にカルぎキシメチ
ルセルロースに基づく弱酸性変換体上のクロマトグラフ
ィー、希鉱酸、好ましくは１０３〜１０’＃塩酸による
脱着、サッカラーゼ抑制作用を有する両分の濃縮ならび
にこれらの両分の凍結乾燥は、約２５０，０００ＳＩ　
Ｕ／　９−の濃縮粗生成物を与える。この濃縮粗生成物
のメタノール中の修飾デキストラン（セファデックス■
ＬＨ２０）上におけるクロマトグラフィー、サッカラー
ゼ抑制作用を有する両分の濃縮および濃鉱酸、好ましく
は濃塩酸の添加による１〜３のｐＨ値までのｐＨの低下
は、５４０，０００ＳＩＵ／ｆｉの結晶性生成物を与え
る。この物質はクロマトグラフィーによると純粋である
。ＣＪＩ、、、０４Ｎまたは、塩酸塩に対して、Ｃ６Ｈ
Ｉ３０４＃　Ｃ１が、経験式として、測定された。その
物理的ノソラメータ（ＪＲ，ＮＭＲおよびＵＶスペクト
ル：融点および比旋光度）すらびに化学的性質（過ヨウ
素酸塩酸化および元素分析）に基づいて、これらはＳ。

ｌＮ０ＹＥら（Ｔｅｔｒａｈｙｄｒｏｎ　２３．２１２
５（１９６８））によって記されている経験式Ｃ，Ｈ，
，０４Ｎまたは、塩酸塩に対する、ｃａ　Ｈｓ　４０４
Ａ’Ｃｌ、の化合物と同一であるが、この化合物は上記
の著者らによって、構が与えられ且つこれに対して“１
−デスオキシノジリマイシン”の名称が提案されている
。

この化合物は、上記著者らにより、抗生物質ノジリマイ
シンの水酸化により、化学的な手段によって、取得され
た。出発物質のノジリマイシンは、Ｔ、ＮＩＩＤＡら（
ＬＡｎｔｉｂｉｏｔｉｃｖ、Ｓｅｒ、Ａ、２０　。

６２（１９６７））によって、ストレアトマイシス属の
微生物の醗酵によって、得ることができる。

本発明は、比較的不安定であり、そのために取扱いが難
しいノジリマイシンを経る、回りくどい手順を用いるこ
となく、直接的な微生物学的合成により、１回の操作で
、良好な収率でデスオキシノジリマイシンｔ−ａ造する
ことを始めて可能にするものである。

このような化合物が桿菌属の微生物によシ生産されると
いうことは、これらの微生物は一般に二次的な物質の生
産者としてはあまシ適しておらず、２′６ よくても本質的にペプチド状の二次物質を生成するに過
ぎないから、きわめて意外なことであり且つ予想し得な
かったことである。

その上、個々の菌株、たとえばＤＳＭ３７’２、は、混
合物として、デスオキシノジリマイシンおよび／または
ノジリマイシンに加えて１．薄層クロマトグラムによっ
て明確に区別することができる、サッカラーゼ抑制作用
を有する、その他の成分をも生産する、サッカラーゼ抑
制因子を生成する。

他の菌株、たとえばＤＳＭ７４１は、デスオキシノジリ
マイシンまたはノジリマイシンを薄層クロマトグラム中
に検出することができず且つかぐして別の化学構造を有
している、抑制因子を生成する。

動物および人間において、炭水化物含有食品および炭酸
飲料（たとえば穀物殿粉、じゃがいも殿粉、果物、果物
ジュース、ビールおよびチョコレ−ト）の摂取後に、下
式に従って、グリコシド水解酵素（７′ｃとえば唾液お
よび膵臓アミラーゼ、マルターゼおよびサッカラーゼ）
による炭水化物の迅速な減成の結果として生ずる過血糖
症が起るということは公知である： 糖尿病患者の場合には、このような過血糖症は、特に強
く且つ長（Ｉ−〒ｌ１−ｉする顕著な性質のものである
。脂肪質の被験者の場合には、食餌性送血、糖症が、し
ばしば特に激しいインシュリン分秘をみちびき、一方、
それが脂肪合成の増大および脂肪減成の低下をもたらす
。このような過血糖症に続いて、健全な代謝を有する脂
肪性肥満者の場合には、インシュリン分秘の結果として
、しばしば、低血糖症が起る。低血糖症および胃中に残
存する食物泥の両者が、胃液の生産を促進し、−万、そ
れは胃炎または胃あるいは十二指腸潰瘍の生成を起すか
、または起しやすぐすることが知られている。

炭水化物、特にスクロースは、微生物によって口腔中で
分解され、それによって酷歯の生成が促進されるという
ことも、公知である。

たとえばｉ腸管内のサッカラーゼ不足の結果としての、
炭水化物の病的吸収は、下痢を起させる。

グルコシダーゼ抑制剤の適当な投与は、合成的病的吸収
に効果があシ、それによって便秘の治療に対して適して
いる。

かぐして、本発明による抑制因子は、下記の適応症に対
する治療剤として使用するために適している：脂肪症、
過脂肪蛋白質症、アテローム性動脈硬化症、糖尿病、糖
尿病前期、胃炎、便秘および執歯。

活性のスペクトルを拡大するためには、互にそれぞれの
作用を補足する、グリコシド水解酵素に対するいくつか
の抑制因子を組み合せることが望ましいと思われるが、
この組合わせは、本発明による抑制因子同士の組合わせ
、あるいは本発明による抑制因子と既に公知の抑制因子
との組合わせの何れであってもよい。かぐして、たとえ
ば、本発明によるサッカラーゼ抑制因子と公知のアミラ
ーゼ抑制因子を併用することが適当である場合がある。

ある場合には、本発明による抑制因子の、公知の経口抗
糖尿病剤（β−内向細胞スルホニル尿素誘導体および／
または血糖に対する作用を有するビグアニド類）との併
用および、たとえば、クロフイプラット、ニコチン酸、
コレスチラミンその他のような、血液脂質低下活性化合
物との併用もまた、有利である。

本発明の化合物は、希釈せずに、たとえば粉末としてま
たはゼラチン包装中で、あるいは製薬組成物中で賦形剤
と組み合わせて、投与することができる。

かぐして本発明は、固体または液化ガス状の希釈剤との
混合物中で、あるいは界面活性剤の存在する場合を除い
ては、２００よりも小さい（好ましくは３５０．［：り
も小さい）分子量をＭする溶剤以外の液体希釈剤との混
合物中で、本発明の化合物を活性成分として含有する製
薬組成物を提供する。

更に本発明は、本発明の化合物を活性成分として含有す
る、滅閑または等張水溶液の形態にある製薬組成物を提
供する。

また本発明は、本発明の化合物を包含する服用単位形態
にある薬剤を提供する。

更に本発明は、本発明の化合物を包含する、錠剤（ロゼ
ンジおよび顆粒を含む）、糖剤、カプセル剤、丸剤、ア
ンプ剤または坐薬を提供する。

本明細書において使用する場合の”薬剤”とは、医療投
与に対して適する物理的に分離した合着部分を意味する
。パ服用３１１位形態にある薬剤”とは、本明細書にお
いて用いる場合には、担体と組み合わせたおよび／また
は外包内に封入した本発明の化合物の１日分投与量ある
いは１日分投与量の倍量（４倍に至るまで）または約量
（低くは４０分の１まで）を含有する医療投与に対して
適する物理的に分離した合着部分を意味する。その薬剤
が１日分の投与量または、たとえば、１日分投与量の半
分、３分の１あるいは４分の１を含有しているかどうか
は、その薬剤を、それぞれ、１日に１回、または、たと
えば２回、３回あるいは４回投与せしめるべきかによっ
てきまる。

本発明による製薬組成物は、たとえば、軟膏、グル剤、
泥膏、クリーム剤、噴霧剤（エーロゾルを含む）、洗浄
剤、懸濁剤、水性または非水性希釈剤中の活性成分の液
剤および乳剤、シロップ、粒剤あるいは散剤の形態をと
ることができる。

錠剤、糖剤、カプセル剤および丸剤として成形せしめる
ために適する製薬組成物（たとえば粒体）において使用
すべき希釈剤は、次のものを包含する： （勾　充填剤および増量剤、たとえば殿粉、糖類、マン
ニトール、および珪酸；（ｈ］　　結合剤、たとえばカ
ルボキシメチルセルロースおよびその他のセルロース誘
導体、アルギン酸塩、ゼラチンならびにポリビニルピロ
リドン；（Ｃ）　　給湿剤、たとえば、グリセリン；　
Ｌｄｌ　　崩壊剤、たとえば寒天、炭酸カルシウムおよ
び重炭酸ナトリウム：（ｅ）溶解遅延剤、たとえばパラ
フィン：Ｖｌ　　吸収促進剤、たとえば四級アンモニウ
ム化合物；ｔｅｌ　　’ｆ＋−面活性剤、たとえばセチ
ルアルコール、グリセリンモノステアレー）　：　（Ａ
）　　吸着性１１体、たとえばカオリンおよびベントナ
イト：（旬　潤ｔけ剤、たとえばタルク、ステアリン酸
カルシウムおよびマグネシウムならびに固体ポリエチレ
ングリコール。

散剤である製薬組成物は、たとえば、通常の希釈剤、た
とえばラクトース、タルク、珪酸、水酸化アルミニウム
、珪酸カルシウムおよびポリアミド粉末ならびにこれら
の物質の混合物を含有することができる。エーロゾル噴
霧剤は、たとえば、通常の抛射薬、たとえばクロロフル
オロ炭化水素を含有することができる。

散剤は、活性物質を適当ｒ、Ｈ大きさまで粉砕し且つそ
れを、同じく粉砕しである製薬賦形剤と混合することに
よって、喪造する。通常は、そのために、たとえば殿粉
、ラクトース、スクロースまたはグルコースのような食
用となる炭水化物を使用し且つまたここで使用すること
ができるけれども、たとえばセルロース誘導体のような
、代謝不可能な炭水化物を使用することが望ましい。

甘味剤、香味剤、防腐剤、分散剤および染料を存在せし
めることもできる。

本発明の製薬組成物から形成せしめる錠剤、糖剤、カプ
セル剤および丸剤は、不透明化剤を含有していてもよい
、通常の剤皮、外包および保護基質を有することができ
る。これらは、活性成分金、腸管内の特定部分のみで、
または特定部分で優先的に、できつれば一定の時間にわ
たって、放出するように構成せしめることができる。剤
皮、外包および保護基質は、たとえば重合体物質または
ワックスから成るものとすることができる。

活性成分は、上記希釈剤の１種または数種と共に、ミク
ロカプセル状に仕上げることもできる。

カプセル剤は、前記の散剤混合！ｍｋ配合し、且つ既に
形成せしめであるゼラチンケーシング中に充填すること
によって、製造することができる。

たとえばシリカダル、タルク、ステアリン酸マグネシウ
ム、ステアリン酸カルシウムまたは固体ポリエチレング
リコールのような潤滑剤を、充填作業前に、散剤混合物
に添加することができる。たとえば、寒天、炭酸カルシ
ウムまたは炭酸ナトリウムのような崩壊剤または可溶化
剤を、カプセルを飲むときの接触性の改善のために、混
合物に添加することもできる。

錠剤は、たとえば、粗い、！ｆ、だは微細な散剤混合物
を調製し且つ潤滑剤および崩壊剤を添加することによっ
て、製造することができる。錠剤は、この混合物から成
形せしめる。散剤混合物は、適当な方法によって粉砕し
である活性物質を混合し且つ前記のような希釈７′ｉｌ
Ｊ′！ｆ、たけその他の賦形剤を加えることによって、
製造する。場合によっては、結合剤、たとえば、カルが
キシメチルセルロース、アルギン酸塩、ゼラチンまたは
ポリビニルピロリドン、溶解遅延剤、たとえばノぐラフ
イン、吸収促進剤、たとえば四級塩お工び／または吸着
剤、たとえばベントナイト、カオリンまたは燐酸二カル
シウムを加える。散剤混合物は、たとえばシロップ、殿
粉ペーストまたはアカシアゴム、あるいはセルロースま
たは重合体材料の溶液のような結合剤と共に、造粒する
ことができる。然るのち、製品を粗いふるいを通して圧
縮する。また別の方法として、散剤混合物を錠剤製造機
中に供給し且つ生成する均一でない成形体を粒子状の大
きさに粉砕することも可能である。生ずる粒子が錠剤成
形機のノズルをふさぐことがないように、たとえばステ
アリン酸、ステアリン酸塩、メルクまたは鉱油のような
潤滑剤音訓えることができる。潤滑しであるこの混合物
音、次いで錠剤の形態に圧縮する。活性化合物を自由流
動性の不活性賦形剤と混合し、且つ造８１２または粉砕
工程に省略して、直接に、錠剤の形態とすることもでき
る。生成物には、透明または不透明な保護ケーシング、
たとえばシェラツクの剤皮、糖または重合体物質の剤皮
、およびワックスによる光沢あるケーシングを与えるこ
とができる。異なる適量単位の間の区別を行なうことが
できるように、これらの剤皮に染料を加えることができ
る。

液剤および乳剤である製薬組成物は、たとえば、通常の
希釈剤（いうまでもなく、界面活性剤が存在する場合を
除いて２００よシ低い分子量を有する溶剤の前記のよう
な除外のもとて）、たとえば溶剤、溶解剤および乳化剤
を含有することができる；このような希釈剤の特定的な
例は、水、エチルアルコール、イソプロビルアルコール
、炭酸工ｆ’ｋ、酢ｖエチル、インジルアルコール、安
息香酸ベンジル、プロピレングリコール、１．３−ブチ
レングリコール、ジメチルホルムアミド、油類（たとえ
ば落花生油）、グリセリン、テトラヒドロフルフリルア
ルコール、ポリエチレングリコールおヨヒソルビトール
の脂肪酸エステルまたはこれらの混合物である。

懸濁剤である製薬組成物は、たとえば液体希釈剤のよう
な通常の希釈剤、たとえば水、エチルアルコール、プロ
ピレンクリコール、界面活性剤（りとえばエトキシル化
インステアリルアルコール、ポリオキシエチレンタルク
くイトおよびソルビタンエステル類）、ミクロクリスタ
リンセルロース、メタ水酸化アルミニウム、ベントナイ
ト、寒天、およびトラガカントまたはこれらの混合物を
含有することができる。

たとえば液剤、シロップ剤およびエリキシルのような、
経口的に投与すべき配合形態物は、その配合物の特定量
が特定量の活性化合ｊＦｇを含有するように、服用単位
にＰＪＷ　ｆｆすることができる。シロップ剤は、活性
化合物を適当な香味物質を含有する水溶液中に溶ｊ質す
ることによって、調製することができる。エリキシルは
、無毒性のアルコール系賦形剤を用いて取得する。懸濁
剤１は、化合物を無毒性の賦形剤中に分散させることに
よって、裏道することができる。たとえばエトキシル化
イソステアリルアルコールおよびポリオキシエチレンソ
ルビトールエステルのような可溶化剤訃よび乳化剤、防
腐剤ならびにたとえば薄荷油またはサッカリンなどのよ
うな香味や甘味を与えるための添加剤をも、加えること
ができる。

カプセル剤には、服用注意を与えることができる。その
上、たとえば活性化合物を重合体物質、ワックスなど中
に保持することによって、活性化合物を遅延させる具合
に放出させるように、安全を図ることもできる。

本発明によるすべての製薬組成物は、着色剤および防腐
剤ならびに香料および香味添加剤（たとえば薄荷油およ
びユーカリ油）ならびに甘味剤（たとえばサッカリン）
をも含有することができる。

本発明による製薬組成物は一般に、全組成物の重量の０
．１〜９９．５％、通常は０．５〜９５％の活性物質を
含有している。

本発明の化合物に加えて、本発明による製薬組成物およ
び薬剤は、その他の医薬として活性な化合物を含■する
こともできる。また、これらは、複数の本発明の化合物
を含有することもできる。

本発明の薬剤中の希釈剤は、本発明の製薬組成物に関し
て先に記したものの中の任意のものとすることができる
。かかる薬剤は、単独希釈剤として２００よシも低い分
子量を有する溶剤を包含す４す ることかできる。

本発明例よる薬剤を構成する分離した合着部分は一般に
、その形状および包装によって、医療投与に対して適応
せしめておυ且つ、たとえば、次のものの中のどれかと
することができる：錠剤（ロゼンジおよび顆粒を含む）
、丸剤、糖剤、カプセル剤、生薬およびアンプル剤。こ
れらの形態の中のいくつかは、活性成分の遅延した放出
を行なうように仕上げることができる。たとえばカプセ
ル剤のような、ある種のものは、物理的に分離し且つ合
着した薬品の部分ならしめる保護外包を有している。

本発明の薬剤の投与のための好適な１日分の投与量は、
１５００〜３Ｘ１０？ＡＩＵ乃至５０〜１ｘｌＯ’、ｔ
ＩＵの活性成分である。

本発明は更に、炭水化物代謝を調節し且つ／または人間
および非人間動物における前記の病気と戦う（予防、軽
減および治癒を含む）ための方法をも提供するが、この
方法は、動物に対して本発明の化合物を単独で、または
希釈剤との混合物として、あるいは本発明による薬剤の
形態として、投与することから成っている。

これらの活性化合物は、経口的に投与することが期待さ
れる。

一般に、有効な結果を達成するためには、１日当り体重
Ｉ　Ｋ９について３０〜３Ｘ１０’　ＡＩＵ乃至１〜１
×１０４ＳＩＵＯ量を投与することが有利であることが
認められている。しかしながら、時によると、このよう
な投与率から外れる必要があることもあシ、特に治療す
べき人間または動物対象の本質および体重、この対象の
治療に対する個々の反応、活性成分を投与せしめる配合
物の形態および投与を行なう方式、ならびに病気の進行
上の時点または薬剤を投与すべき間隔に応じて、そのよ
うにしなければならない。かぐして、ある場合には、上
記の最低投与率よシも少ない量を用いて充分であるのに
対して、他の場合には望ましい結果を得るためには、前
記の」二限を超えねばならない。比較的多量を投与する
場合には、１日の経過にわたって、これらを何回かの個
々の投与に分けることが望ましいことがある。

上記の製薬組成物および薬剤に加えて、本発明は、更に
本発明の活性化合物および栄養材料を含有する薬物を添
加した食品（人間または動物の消費のために配合するこ
とができる）をも包含する。

人間の消費に適するこのような食品の例は、本発明によ
る抑制因子の少なくとも１種の医薬として活性な量が添
加しである、砂糖、ノ９ン、じゃがいも製品、果物ジュ
ース、ビール、チョコレートおよびその他の菓子類、な
らびに、たとえばジャムのような保存食品である。

その上、本発明による抑制御因子は、動物において、望
ましくない脂肪の望ましい低脂肪含量の肉に対する割合
を、低脂肪の肉を増大させる方向で、高度に左右すると
いう性質’ｒ！している。これは、農業用家畜動物の飼
育、たとえば豚の肥育において特に重要なことであるば
かυでなく、その他の家畜動物およびペット動物の飼育
に対しても、かなり重要である。その上、本発明の抑制
因子の使用は、時間、量および質の何れの点においても
、動物の飼育の合理化をみちびくことができる。これら
は一定の消化の遅延を生じさせるから、腸管内における
栄養物の滞留時間が延長され、それによって費用の低下
を伴なう任意量の飼育が可能となる。その上、本発明に
よる抑制剤を使用する場合には、多くの場合１（、高価
な蛋白質飼料のかなりの節約が可能である。

かぐして本発明の活性化合物は、動物の栄養のはとんど
すべての部分において脂肪層の形成の低下のだめ、およ
び飼料蛋白質の簡約のための薬品として、用いることが
できる。

活性化合物の活性は、この場合において、本質的に動物
の本質および性には無関係である。活性化合物は一般に
、比較的多量の脂肪を蓄積する傾向があるか、またはそ
の寿命の特定段階において、そのような傾向がある、動
物の種において、特に価値があることがわかっている。

脂肪層の形成の低減のためおよび／捷たけ飼料蛋白質の
節約のために本発明の抑制因子を使用することができる
動物の例としては、以下の家畜動物およびペット動物を
挙げることができる：温血動物、たとえば、牛、豚、馬
、羊、山羊、猫、犬、兎、毛皮動物、たとえばミンクお
よびチンチラ、ならびにその他のイツト動物、たとえば
てんじ（ねすみおよびハムスター、実験動物および動物
園の動物、たとえば、ラット、マイス、猿など、家禽、
たとえばブロイラー、にわとり、ガチョウ、鴨、七面鳥
および鳩、おおむおよびカナリヤ、ならびに冷血動物、
たとえば鯉のような魚および爬虫類、たとえば蛇。

活性化合物の好都合な性質の故に、望ましい効果全達成
するために動物に対して投与する活性化合物の量は、実
質的に変化させることができる。

飼料Ｉ　Ｋｑ当シに約０．５ｍ９〜２．５ｇ−１特に１
０〜１００■が好ましい。活性化合物を投与せしめる期
間は、数時間または数日から、数年に至るまで、とする
ことができる。適当な量の活性化合物および適当なその
投与期間に飼育の対象物と密接な関係がある。特に、そ
れは動物の種類、年令、性および健康状態ならびに動物
の飼育の方法に依存するが、この技術分野の熟練者であ
れば容易に決定することが可能であろう。

本発明による活性化合物は、通常の方法によって動物に
投与する。投与の方法は、特に、動物の種類、機能およ
び全般的な状態に依存する。かぐして、経口的に１日に
１回または数回、規則的または不規則的な間隔で、投与
を行なうことができる。多くの場合に、特に動物の飼料
および／または飲料摂取の周期において、経口的に投与
することが、便宜上の理由で好適である。

活性化合物は、純粋な物質として、または配合した形態
として、投与することができる。配合形態は、プレミッ
クスとして、すなわち任意の望ましい種類の無毒性不活
性賦形剤と混合して、且つまたは補充飼料の形態として
全給餌量の一部として、且つまた混合飼料自体の混合物
の成分としての何れをも包含する。飲料水による適当な
配合物の投与もまた、包含される。

場合によっては、配合形態にある活性化合物は、他の栄
養物および活性化合物、たとえば、無機塩類、痕跡元素
、ビタミン類、蛋白質、エネルギー担体（たとえば殿粉
、砂糖または脂肪）、染料および／または香味物質、あ
るいはその他の飼料添加剤、たとえば生長促進剤と共に
、適当な形態で投与することができる。活性化合物は、
飼料の摂取の前、間または後に投与することができる。

飼料および／または飲料水と同時の経口投与が有利であ
り、活性化合物ケよ、必要に応じ、て、飼料および／ま
たは飲料水の全量に対して、あるいはその一部に対して
のみ、加えることができる。

活性化合物は、常法に従がい、好ましくは細かく粉砕し
た状態で、純物質として単に混合することにより、ある
いは食用となる無毒性の賦形剤と混合した配合形態で、
且つ場合によってはプレミックスまたは濃厚飼料の形態
で、飼料訃よび／または飲料水に対して添加することが
できる。

飼料および／または飲料水は、たとえば、約０．００１
〜５．０％、特に０．０２〜２．０Ｘ（重量）の濃度で
、本発明による活性化合物を含有することができる。飼
料および／または飲料水中における活性化合物濃度の最
適水準は、特に、動物の飼料および／または飲料水の摂
取量に依存し、専門家によれば容易に決定することが可
能であろう。

飼料の種類およびその組成は、この場合には重要ではな
い。調和のとれた栄養の供給に対して必要な、ビタミン
および無機物質を含む、エネルギー物質と蛋白質の通常
の釣合を有することが好ましい、現在布中で入手するこ
とができる飼料または特別な飼料組成物のすべてを使用
することができる。飼料はたとえば、植物質のもの、た
とえば細断した油かす、粉砕した穀類および穀類副製品
、更に乾草、生牧草飼料、ビート、およびその他の飼料
植物、動物質のもの、たとえば肉および魚製品、骨粉、
脂肪およびビタミン類、たとえばビタミン、４．ｎＳｚ
、’ｘおよびＢ−複合体、ならびに特別な蛋白質源、た
とえば酵母およびある種のアミノ酸、ならびに無機物質
および痕跡元素、たとえば燐および鉄、亜鉛、マンガン
、銅、コバルト、沃素など、から成ることができる。

プレミックスは、何らかの望ましい食用賦形剤および／
または無機塩、たとえば炭酸性飼料石灰に加えて、約０
．１〜５０％、特に０．５〜５．０％（重量）の式Ｉの
活性化合物を含有することが好ましく、且つ通常の混合
方法によって調製することができる。

混合飼料は、それに対する通常の原材料成分、たとえば
細断した穀類または穀類副産物、細断した油かす、動物
蛋白質、鉱物質、微量元素およびビタミンに加えて、０
．００１〜５．０％、特に０．０２〜２０％（重量）の
式Ｉの活性化合物を含有することが好ましい。これらは
通常の混合方法によつ丁、調製することができる。

プレミックスおよび混合飼料中の活性化合物は、その表
面を被覆する適当な物質によって、たとえば無毒性のワ
ックス′−！たはゼラチンを用いて、空気、光、および
／または湿気から適当に保護することもまた、好ましい
。

以下のものは、本発明の活性化合物を含有する家禽用の
、仕上がった配合飼料の組成の１例である：２００５’
の小麦、３４ｏｚのとうもろこし、３６０．３　Ｐの粗
い大豆粉、６０Ｐの牛脂、１５１の燐酸二カルシウム、
１０Ｐの炭酸カルシウム、４？の法度化塩化ナトリウム
、７５１のビタミン／無機物混合物および３．２１の活
性化合物プレミックス。これは注意深ｒ混合後に、ＩＫ
ｇの飼料を与える。

ビタミン／無機物混合物は、次のものからｒｖ）：６．
０００ＩＵのビタミンＡ、　　１，０００１．Ｕ、のビ
タミンＤ１．１０ｒｎｇのビタミンＥ、１■のビタミン
に３．３ηのりデフラビン、２Ｔｎｇのビリドキヅン、
２０■のビタミンＢＨ２，５ｒｎｇのノぐントテン次酸
カルシウム、３０ηのニコチン酸、２００■の塩化ナト
リウム、２００■のＭ７１．ＳＯ４・Ｈ，０１１４０■
のＺｎＳＯ４・７Ｈ２０，１００Ｍ’のＦｅＳＯ４・７
Ｈ２０および２０〜のＣｕ、Ｓ　Ｏ，・５　Ｈ，Ｏｏ活
性化合物プレミックスは、たとえば、所望量、たとえば
１，６００ηの１−デスオキシノジリマイシン、および
それに加えて１１のＤＬ−メチオニンならびに３．２５
１−のプレミックスを与えるに充分な量の大豆粉を含有
する。

式■の活性化合物を含有する、豚用の、混合飼料の組成
の１例を次に示す：６３０５１−の細断した穀物飼料（
２００Ｓ’の粉砕とうもろこし、１５０Ｊの粉砕大麦１
５０ｇ−の粉砕カラス麦および１３０１の粉砕小麦から
成る）、８０ｆｆ）魚粉、６偏り粗い大豆粉、５８．８
！９−のタピオカ粉、３８１のビール酵母、５０Ｐの豚
用ビタミン／無機物混合物（組成は、たとえば家禽飼料
用と同じ）、３０Ｐのアマニ油かす粉、３０ρとうもろ
こしグルテン飼料、１０ｇ−の大豆油、１０？の砂糖き
び糖電および２Ｆの活性化合物プレミックス（組成は、
たとえば、家禽飼料と同じ）。これは、注意深い混合後
に、ＩＫりの飼料を与える。

上記の飼料混合物は、好ましくはそれぞれ、鶏および豚
の飼育および肥育の；ｒめのものである；しかしながら
、これらは、同一または類似の組成において、その他の
動物の飼育および肥育に対しても使用することができる
。

既に述べたように、抑制因子は純粋な活性化合物および
、場合によっては大ざっばな精製後の製造において取得
した粗活性化合物の両者を使用して、個々に、または何
らかの望ましい相互の混合物として、用いることができ
る。

以下の実施例は本発明を例証するものである。

組成： ２．０％のとうもろこし殿粉 １．０％のグルコース ０．５％のカゼイン加水分解物 １．０％の酵母エキス ｐＨをＮαｚＣＯ３によって７．２に調節子０．４％の
ＣｃＬＣＯ３ １２１℃において３０分間滅菌 を有する栄養溶液１２０４を含有する円錐フラスコを菌
株ＤＳＭ７０４の胞子懸濁物で接種し且つフラスコを回
転振とう機上で２８℃で培養するときは、５日後に培養
溶液は、７０ＳＩＵ／ｍｅの活性を示す。

実施例２ 組成ニ ア、５％の麦芽エキス ０．３％のカゼイン加水分解物 ０．７％の酵母エキス ０．３％のＣａ、ＣＯ３ ０，３％のに２ＨＰＯ４ 水道水、１２１℃で３０分滅菌し、その後にｐＨをに２
ＣＯ３によって６．６〜６．８に調節を有する栄養溶液
１２０＋＋ｆを含有する円錐フラスコを菌株ＤＳＭ７０
４の胞子懸濁物で接種し且つフラスコを回転振とう機上
で２８℃にかいて培養するときは、５日後に、培養溶液
は、１９７ＳＩＵ／ゴの活性を示す。

実　施　例　ａ□栄養溶液Ｓ３ 組成ニ ア、５％の麦芽エキス ０・３％のカゼイン加水分解物 ０．７％の酵母エキス ０．３％のＣｃＬＣＯ３ ０，３％のに２ＨＰ　Ｏ４ 水道水、１２１℃で３０分間滅菌、 滅菌後にに２　ＣＯ３によって７３Ｈを６．６〜６．８
に調節 を有する１００ｔの栄養溶液を含有する１４０ｔの醗酵
器を、それぞれ１２０ゴの同一組成の栄養溶液を含有す
る１０ｔの円錐振とうフラスコに菌株ＤＳＭ７０４を接
種して培養することによって取得した、１．２ｔの予備
培養物で接種し、且つ醗酵器を、２８℃において５日間
、攪拌し且つ通気しながら、培養すると、２６０ＳＩＵ
／Ｗｄ！を含有する培養液を取得する。

実　施　例　屯−栄養溶液Ａ 組成： ３・０％の大豆粉 ３．０％のグリセリン ０．２％のＣａＣＯ５ 水道水 １２１℃において３０分滅菌 を有する１２０−の栄養溶液を含有する１ｔの円錐フラ
スコを菌株ＤＳＭ７の胞子懸濁物で接種し且つフラスコ
を回転振とり機上で２８℃で培養すると、４日後に、培
養溶液は４３７ＳＩＵ／ｍｌの活性を示す。

実施例１による栄養溶液１２０ｄを含有する１ｔの円錐
フラスコを菌株ＤＳＭ７の胞子懸濁物で接種し且つフラ
スコを回転振とり機上で２８℃において培養すると、５
日後に、培養液は１６２ＳＩＵ／ｍｔの活性を示す。

実施例代 組成： １．０％のグルコース １．０％の可溶性殿粉 ０．５％のカゼイン加水分解物 ０．７５％の肉エキス ０．７５％のペプトン ０．５％の酵母エキス ０・１％のに２ＨＰ　０４ ０．３％のＮａＣ１ ０，１％のＭｇＳＯ４・７１ｈＯ 水道水、Ｎα２（１’Ｑ３によｐｐＨを７．２に調節減
菌：１２１℃で３０分 を有する１２０ゴの栄養溶液を菌株ＤＳＭ７の胞子懸濁
物によって接種し、且つフラスコを回転振とう機上で２
８℃において培養すると、５日後に、培養液は３６．４
ＳＩＵ／ｍｌの活性を示す。

実施例７ 実施例３による栄養溶液２００−を含有する１リツトル
の円錐フラスコを菌株ＤＳＭ７の胞子懸濁物で接種し且
つフラスコを回転振とう機上で２８℃にかいて培養する
と、６日後に、培養液は２２４　Ｓ　Ｉ　Ｕ　／　ｍｌ
の活性を示す。

実施例＆ 実施例４による栄養溶液１００ｔを含有する１４０ｔの
醗酵器を、同一組成の１２０−の栄養溶液をそれぞれ含
有する１０ｔの振とぅする円錐フラスコに菌株ＤＳＭ７
によって接種し且つ培養することによって取得した１、
２６の予備培養物で接種し、且つ醗酵器を、攪拌し且つ
通気しながら、２８℃において５日間培養すると、２８
６ｓＩＵ／ゴを含有する培養液を取得する。

実施例ａ 実施例２による栄養溶液１２０＋＋＋／を含有する１ｔ
の円錐フラスコを菌株ＳＤＭ１の胞子懸濁物によって接
種し且つフラスコを回転振とり機上で２８℃において培
養するときには、６日後に、培養液は２Ｂ、４ＳＩＵ／
−の活性を示す。

実施例１ａ 実施例１による栄養溶液１２０ｍ７！を含有する１ｔの
円錐フラスコを菌株ＤＳＭ３６５の胞子懸濁物で接種し
且つフラスコを回転振とり機上で２８℃において培養す
ると、４日後に、培養液は１妬ＳＩＵ／−の活性を示す
。

実施例ＩＬ 実施例２による１２０ｉの栄養溶液を含有する１ｔの円
錐フラスコを菌株ＤＳＭ３６５の胞子懸濁物によって接
種し且つフラスコを回転振とぅ機上で２８℃において培
養すると、４日後に、培養液は２５ｔ８　Ｓ　Ｉ　Ｕ／
ｍｅの活性を示す。

実施例１２゜ 実施例４による栄養溶液１２０ｍ７！を含有するＩＬの
円錐フラスコを菌株ＤＳＭ７４１の胞子懸濁物によって
接種し且つフラスコを回転振とり機上で２８℃において
培養するときは、５日後に、培養液は３−２ＳＩＵ／ｒ
ｒｔの活性を示す。

実施例１ａ 実施例１による組成の栄養溶液１２０ｍｊを含有する１
ｔの円錐フラスコを菌株７４１の胞子懸濁物によって接
種し且つフラスコを回転振とう機上で２８℃にかいて培
養すると、５日後に、培養液は２６．４　Ｓ　Ｉ　Ｕ／
ｍｌの活性を示す。

実施例１４ 実施例２による組成の栄養溶液１２０−を含有する１ｔ
の円錐フラスコを菌株ＤＳＭ７４１の胞子懸濁物によっ
て接種し且つフラスコを回転振とう機上で２８℃におい
て培養すると、３日後に、培養液は２４．０ＳＩＵ／−
の活性を示す。

実施例１＆ 組成： ２．０％のとうもろこし殿粉 ０．５％のグルコース ０．３％のカゼイン加水分解物 ＮαｚｃＯ３によって７）Ｈを７．２に調節０．４％の
ＣｃＬＣＯ３ 滅菌＝１２１℃で３０分間 を有する１２０ｍ７！の栄養溶液を含有する１ｔの円錐
フラスコを菌株ＤＳＭ７４１の胞子懸濁物によって接種
し且つフラスコを回転振とう機上で２８℃において培養
すると、２日後に、培養液は８１７ゴの活性を示し、３
日後に、それは１２１ＳＩＵ／ｍ１！の活性を示す。

実施例ＩＧ 実施例４による栄養溶液１２０ゴを含有する１ｔの円錐
フラスコを菌株ＤＳＭ６７５の胞子懸濁物で接種し且つ
フラスコを回転振とう機上で２８℃において培養すると
、５日後に、培養液は８．６ＳＩＵ／ａｔの活性を示す
。

実施例１による栄養溶液１２０ｇを含有する１ｔの円錐
フラスコを菌株ＤＳＭ６７５の胞子懸濁物によって接種
し且つフラスコを回転振とう機上で２８℃にかいて培養
すると、５日後に、培養液は５３．０ＳＩＵ／−の活性
を示す。

実施例２による栄養溶液１２０ｍ／！を含有する１ｔの
円錐フラスコを菌株ＤＳＭ６７５の胞子懸濁物によって
接種し且つフラスコを回転振とう機上で２８℃において
培養すると、４日後に、培養物は１７．８ＳＩＵ／ゴの
活性を示す。

実施例１９゜ 実施例４による栄養溶液１２０ｍＪを含有する１ｔの円
錐フラスコを菌株ＤＳＭ３７２の胞子懸濁物によって接
種し且つフラスコを回転振とう機上で２８℃において培
養すると、５日後に、培養液は６０　Ｓ　Ｉ　Ｕ　／　
ｍｅの活性を示す。

実施例２α 実施例１による栄養溶液１２０　ｍｌを含有する１ｔの
円錐フラスコを菌株ＤＳＭ３７２の胞子懸濁物によって
接種し、且つフラスコを回転振とう機上で２８℃にかい
て培養すると、４日後に、培養液は２１．６　Ｓ　Ｉ　
Ｕ／ｍｌの活性を示す。

実施例２１゜ 実施例２による栄養溶液２００　ｍｌを含有する１ｔの
円錐フラスコを菌株ＤＳＭ３７２の胞子懸濁物によって
接種し且つフラスコを回転振とり機上で２８℃にかいて
培養するときは、３日後に培養液は２６．８　Ｓ　Ｉ　
Ｕ／ｒｎｌの活性を示す。

実施例２２゜ 組　成： ２．０％のとうもろこし殿粉 １．０％のグルコース ０．５％のカゼイン加水分解物 ０．５％の酵母エキス ｐＨをＮα２ＣＯ３によって７．２に調節＋０．４％の
Ｃａ、ＣＯ３ 殺菌＝１２１℃において３０分間 を有する栄養溶液１２０−を含有する１ｔの円錐フラス
コを菌株ＤＳＭ３７２の胞子懸濁物によって接種し且つ
フラスコを回転振とう機上で２８℃において培養すると
、３日後に、培養液は２６．５ＳＩＵ／ｒｄの活性を示
す。

実施例２ａ 実施例２２による栄養溶液１２０ゴを含有する１ｔの円
錐フラスコを菌株ＤＳＭ４７９の胞子懸濁物によって接
種し且つフラスコを回転振とり機上で２８℃において培
養すると、３日後に、培養液は７．９ｓＩＵ／−の活性
を示す。

実施例２４ 実施例６による栄養溶液１２０　ｍｌを含有する１ｔの
円錐フラスコを菌株ＤＳＭ３６の胞子懸濁物によって接
種し且つフラスコを回転振とう機上で２８℃において培
養すると、３日後に、培養液は５．４ＳＩＵ／ゴの活性
を示す。

実施例２五 実施例２による栄養溶液１２０ゴを含有する１ｔの円錐
フラスコを菌株ＤＳＭ３６の胞子懸濁物によって接種し
且つフラスコを回転振とう機上で２８℃において培養す
ると、３日後に、培養液は５．４ＳＩＵ／ｍｅの活性を
示す。

実施例２ａ 実施例２による栄養溶液１２０ゴを含有するＩＬの円錐
フラスコを菌株ＤＳＭ３５６の胞子懸濁物によって接種
し且つフラスコを回転振とう機上で２８℃において培養
すると、３日後に、培養液は８．８　Ｓ　Ｉ　Ｕ／　ｍ
ｌの活性を示す。

実施例１による栄養溶液１２０−を含有する１ｔの円錐
フラスコを菌株ＤＳＭ２９２の胞子懸濁物によって接種
し且つフラスコを回転振とり機上で２８℃において培養
すると、３日後に、培養液は９．０　Ｓ　Ｉ　Ｕ／ｍｌ
の活性を示す。

実施例２による栄養溶液１２０ゴを含有する１ｔの円錐
フラスコを菌株ＤＳＭ２９２の胞子懸濁物によって接種
し且つフラスコを回転振とう機上で２８℃に卦いて培養
すると、３日後に、培養液は９−２　Ｓ　Ｉ　Ｕ　／　
ｍｌ！の活性を示す。

実施例２ａ 実施例２による栄養溶液１２０ｄを含有する１ｔの円錐
フラスコを菌株ＤＳＭ７４２の胞子懸濁物によって接種
し且つフラスコを回転振とう機上で２８℃において培養
すると、３日後に培養液は９．８ＳＩＵ／−の活性を示
す。

実施例３へ 実施例１による栄養溶液１２０−を含有する１ｔの円錐
フラスコを菌株ＤＳＭ７４０の胞子懸濁物によって接種
し且つフラスコを回転振とう機上で２８℃において培養
すると、４日後に、培養液は５．７　Ｓ　Ｉ　Ｕ／ｄ、
の活性を示す。

実施例３Ｌ 実施例３による１００ｔの醗酵器からの醗酵液を半濃縮
ＭＣＩによってｐＨ３，０〜３．５に調節し且つ、綿化
後に、細菌体を遠心分離する。２２０，０００ＳＩＵ／
ＬのＳＩＵ含量を有する７ｏｔの濃褐色の培養液を取得
する。この溶液を２０ｔ／時間の流速で、Ｈ＋形態にあ
る１２ｋｇのレワチットの（Ｊ、ｅｗａｔｉｔ）　Ｓ　
Ｃ１０４ｋ充填した直径３０６ｎのカラム上に送る。透
過物は、はとんど全くサッカラーゼ抑制作用を有してい
ないので廃棄する。カラムを５０ｔの蒸留水（洗浄水工
）、２０１の０．０１ＮＨＣＩ、次いで再び２０１の蒸
留水（洗浄水■）によって洗浄する。次いで活性物の脱
着のために、濃度２．５％のアンモニアを通す。サッカ
ラーゼ抑制活性物を、溶出液の伝導度の上昇および褐色
の増大と平行して、溶出させる。伝導度が上昇するまで
の最初の流出物（２０ｔ）を棄て、活性を有する両分（
３５ｔ）を、回転エバポレーター上中で濃縮したのち、
少量の水中に再溶解する（濃縮物、３ｔ）。この濃縮液
を凍結乾燥する。２８８？の３’ＢＯＯＯ８ＩＵ／ｆｔ
の濃褐色粗生成物■を得る。

実施例３ｚ 実施例８による１００ｔの醗酵器からの醗酵液を半濃縮
ＨＣ１によってｐＨ３，０〜３．５に調節し、且つ綿化
後に、菌体を遠心分離する。２４０，０００ＳＩＵ／ｌ
のＳＩＵ含量を有する６０ｔの濃褐色培養液を取得する
。この溶液を２０ｔ／時間の流速で、Ｈ＋形態にある１
２に５ｉ！のダウエックスＣＤｏｗｅｙ；）　　５０　
ＷＸ　４を充填した直径３０ｍのカラム上に送る。透過
液はほとんど全くサッカラーゼ抑制活性を有しておらず
、これを廃棄する。このカラムを５０ｔの蒸留水（洗浄
水工）、２０１の０．０１　Ｎ　ＥＣ１、次いで再び２
０１の蒸留水（洗浄水■）で洗浄する。次いで活性物の
脱着のために２．５％の濃度のアンモニアを通す。サッ
カラーゼ抑制活性物を、溶出液の伝導度の上昇および褐
色の増大と平行して、溶出させる。伝導度が上昇するま
での最初の流出物（２０ｔ）を棄て、活性を有する両分
（３５ｔ）を、回転エバポレーター中で濃縮し且つ少量
の水で再溶解する（ａ縮液３ｔ）。この濃縮液を凍結乾
燥する。３６０？の２４．０ＯＯ８ＩＵ／ｆ／−の＃褐
色の粗生成物■を得る。

実施例３１からの５０５’の粗生成物を乳鉢中で細かく
粉砕したのち、そノ１．それ３００ｍ１の工業用メタノ
ールで３回抽出する。そのためには、先ずバッチをウル
トラッラックス均−等器中で２分間均等化したのち、水
浴中で４０〜５０℃に加温し左から２０分間攪拌する。

各抽出後に、混合物を、ひだ付き済紙を用いて濾過する
。３回目の抽出液に戸紙上に残留する残渣を真空乾燥す
る（　２　’ｓ、４？）。この残渣は、試験の結果、低
い比活性を示すのみであるので棄てる。メタノール抽出
物を合わせて、真空下に乾固するまで濃縮する。フラス
コ中に残留する活性残渣を７５０ｒｎＡのＩｈＯ（Ｌ　
＝２−８　ａｒＳ、　ｐＨ＝　７−２　）中に溶解し、
その溶液を５００ｍ／時間の流速で、Ｈ形態にあるＣＭ
セルロースＣＣＥセルロース、メッサーズ　ウォットマ
ン製、Ｃ５２形）を充填した５×５０ｃｒｎのカラム上
に通ずる。このカラムを５ｔの水で洗浄し、次いで２０
ｔの０．００２　Ｎ　ＨＣＩを用いて溶出する。

透過液、洗浄水および溶出液を約０．５ｔの部分に分別
的に捕集する。サッカラーゼ抑制活性を測定して、３０
，０００　Ｓ　ＩＵ／ｌよりも大きな活性を有する両分
をすべて合わせる。透過液においては、これらはａ褐色
の両分２〜４であり、淡黄色の溶出液においては両分１
６〜３５である。合わせた両分を濃縮し且つ凍結乾燥す
る。４，０００　ＳＩＵ／Ｊの比活性を有する１　８．
２９−の透過液画分２〜４（廃棄した）および２５０，
０００ＳＩＵ／９−の３、ＩＰのいわゆる粗生成物■（
約５０〜６０％の純度）を得る。粗生成物■は強く吸湿
性であり且つ空気中で短時間に潮解して粘稠物を与える
。

実施例３４ 付随するペプチドの大部分を分離するために、実施例３
３からの２．５１の粗生成物■を１５−のメタノール中
に溶解し且つメタノール中でセファデツクスＬＨ２０を
充填した５×９０ωのカラム上でクロマトグラフィーを
行々う。１０ｍ１の両分を１００ｍｔ／時間の流速およ
び４〜５℃の温度で集める。１０μｔのこれらの両分を
、シリカダルプレート（メツサーズメルク）に付着させ
て、エタノール／濃度２５％ＮＨ３／ＩｈＯ（８０／　
１０　／１０）の系中で薄層クロマトグラフィーによシ
調べる。薄層クロマトグラフィーに従って、抑制因子を
含有する両分を合わせ、５〜１０ｍ７＋に濃縮し、同じ
カラム上で再びクロマトグラフィーを行なう。

各両分を薄層クロマトグラフィーによって分析し、抑制
因子を含有する両分を合わせるが、きわめて狭い範匣の
ものを切シ捨てるのみである。合わせた両分を乾固する
まで濃縮する。ＬＨ２０を用いて、このようにして精製
した抑制因子は、約９０％の純度である。残存する最後
のペプチド不純物を分離するために、回転蒸発器中の蒸
発後に残渣として残留する物質を２〜３ｒｎＩ！のメタ
ノール中に取り、この黄色のメタノール溶液に５ｏμｔ
の濃ＨＣＩを加える。短時間後に、抑制因子は僅かに黄
色の立方体または平行六面体の形状で晶出する。

ペプチドは母液中に残る。結晶を遠心分離し、氷冷した
メタノールで１回洗浄し、洗浄した沈殿を再び２ｒｎｔ
のメタノール中に、加熱しガから、溶解する。４−のブ
タノールを加え、混合物を４℃で終夜貯蔵する。翌朝、
沈殿している無色の結晶を遠心分離し、氷冷したメタノ
ールで１回、アセトンで１回、エーテルで１回洗浄した
のち、真空乾燥する。収量：４６０ｔｎｐの、塩酸塩の
形態にある、５４０．０ＯＯ８ＩＵ／Ｐの抑制因子。

実施例３５〜４ｚ これらの各実施例にかける、培養液または粗生成物中の
サッカラーゼ抑制成分を検出するために、抑制成分をプ
レート上で直接に検出することを可能とする、プレート
上における後続する酵素反応を伴なう、下記の薄層クロ
マトグラフィ一方法をも使用する。この薄層クロマトグ
ラフィーにかいては、１〜５μｔの醗酵液、すなわち１
〜５μ２の配合物を、シリカゲルの仕上がυプレート（
メツサーズメルク、ＫＧ６０Ｆ２５４形）に付着させ、
且つプレートを、（Ｉ）エタノール／ＮＨ３／Ｈ２０（
８／１／１）または（ＩＩ）酢酸エチル／メタノール／
水（１０／６／４　）中で展開する。サッカラーゼ抑制
成分を直接に目視できるようにするために、展開し且つ
完全に乾燥させたプレートを、酵素ダル（２０ｍＡ／　
２０ｃｔｎ×２０−プレート）で噴霧し、且つダルを固
化させる。次いでプレートを湿った室中で室温において
５分間予備培養したのち、受媒質グルによって飽和する
まで噴霧する。

この２回目のダル層が固化したのち、プレートを湿った
室に入れて４０℃で培養する。抑制因子の着色（赤褐色
の背景上の明るいスポット）が６０〜９０分の間に生ず
る。最適の発色の時点において培養を中止し、寒天層で
かおったプレートラ、ファンからの温空気によって乾燥
する。

ダルの調製： 酵素ダル：１．５！？−のアガロースＣＬ’Ｉｎｄｒｂ
ｓｔｒｉｅＢｉｏｌｏｇｉｑｘａ　ｐｒａ、？Ｌｃａｉ
ｓ）をｐＨ６，０の１０ｍｇの０．２Ｍマレイン酸ナト
リウム緩衝液中に懸濁させたのち、沸とうによって溶解
する。透明なアガロース溶液を５０℃まで冷却し且つ２
５０μｔのトリトンＸ−１００溶液Ｃ２９−のトリトン
Ｘ−１００＋８１の分析級エタノール）および０．５−
のジアニシジン溶液（２０■のジアニシジン／１−のア
セトン）を、攪拌しながら、加える。１−のＧＯＤ／Ｐ
ＯＤ試薬（１２，５ｍｇのグルコースオキシダーゼ、純
度Ｉ、メツサーズベーリングル注文番号１５，４２３、
および２．５■のベルオキシダーゼ、純度■、メツサー
ズペーリンダル注文番号１５．３０２、を５ｄのマレイ
ン酸塩緩衝液中に溶解）および４〜５単位の豚の小腸か
らのサッカラーゼ（サッカラーゼ抑制試験において先に
記したもの）を、ダルの使用直前に添加する。ダルは噴
霧するまで５０℃に保たねばならないが、その理由は、
さもないとダルは噴霧操作の間に噴出口中で固化するか
らである。

受媒質グル：　０．５９−のアガロースを１００ｍｇの
ｐＨ６，０のマレイン酸ナトリウム緩衝液中に懸濁させ
、且つ沸とうさせることによって、溶解する。

次いでこの溶液を５０℃まで冷却し、１００μｔのトリ
トン（２Ｐのトリトン、￥−１００＋８５’の分析級エ
タノール）オよび１１のスクロース（セルハ３５，５７
９　）を加える。スクロースの溶解後に、ダルは使用可
能である。

この方法を用いる菌株の培養液の試験は、系１において
は、下記のＲｆ値を有するサッカラーゼ抑制成分を与え
た： ３５　　ＤＳＭ　７　　０．２５ ３６　　ＤＳＭ　７４１　０．２５：０．４１：０．５
０：０．５９および０．７１ ３７　　ＤＳＭ　７０４　０．２５ また系■にかいては下記のＲｆ値を与えた＝３９　　Ｄ
ＳＭ　７０４　０．０５ ４０　　ＤＳＭ　４７９　　（０，０５）：０．２２−
０．３５：０．６２−０．６７および０．８８ ４１　　ＤＳＭ７４１　（０，０５）：０．２３−０．
３５および０．６２−０．６７ ４２　　ＤＳＭ３７２　　（０，０５）：０．２０−０
．２２実施例４ａ 組成： １・０％の殿粉 ０．１％のグルコース ０．５％のカゼイン加水分解物 １・０％の酵母エキス ｐＨをＮｃＬ２ＣＯ３によって７．２に調節＋０．４％
のＣａＣＯ３ 滅菌＝１２１℃において３０分 を有する栄養溶液１２０ｍｐ、を含有する１ｔの円錐フ
ラスコを菌株ＤＳＭ４７９の胞子懸濁物によって接種し
且つフラスコを回転振とう機上で２８℃において培養す
ると、２日後に、培養液は２０．２ＳＩＵ／ゴの活性を
示す。

組成： ２．０％のとうもろこし殿粉 １．０％のグルコース ０．５％のカゼイン加水分解物 １．０％の酵母エキス ０．１％のＫｚＨＰ　Ｏ４ ｆ）ＨをＮｃＬ２ＣＯ３によって７．２ニ調節十０．４
％のＣａ、ＣＯ３ 滅菌＝１２１℃に卦いて３０分 を有する栄養溶液１２０ｍ７＋ｉ有する円錐フラスコを
菌株ＤＳＭ３７２の胞子懸濁物によって接種し且つフラ
スコを回転振とう機上で２８℃で培養すると、２・５日
後に、培養液は、５０．３　Ｓ　ＩＵ／ｍｌの活性を示
す。

実施例４５〜６！ａ これら実施例の各々に於いて、下表に示した様に、実施
例１．２．４又は６の組成物の培養液１２０ｄを含む１
を円錐フラスコに、表に示した菌株の胞子懸濁液を接種
し、そしてフラスコを回転振とう機上に於いて２８℃で
培養した、４日後に培養液は下表に示す活性を表わした
：４５　　ＫＡ−６３Ｄ：ＳＭ　　　　　　４　　　３
１４６　　　　’　　　１０６０　　　　　１　　　６
．６４８　　　　　　　　　　　　　　２　　　７．９
４９　　ＩＡＭ　１５２３　ＤＳＭ　　　　　４　　５
０５０　　　　　　　１０６１　　　１　　　４．３５
１　　　　　　　　　　　　　　６　　　３．８５２　
　　　　　　　　　　　　　２　　　２．７５３　０Ｕ
Ｔ８１０８ＤＳＭ　　　　　４　　　８．４５４　　　
　＃　　　　１０６２　　　１　　　３．６２３．１

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. １、菌株ＦＥＲＭ−ＰＮｏ．４２３５（ＤＳＭ７０４）
   、ＦＥＲＭ−ＰＮｏ．４２４９（ＤＳＭ７４０）、ＦＥ
   ＲＭ−ＰＮｏ．４２５０（ＤＳＭ７４１）またはＦＥＲ
   Ｍ−ＰＮｏ．４２５１（ＤＳＭ７４２）の桿菌属に属す
   るグリコシド水解酵素抑制因子生産性微生物。