JPS62135434A - ペプチドを有効成分とする貧血改善剤及びその調製法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 １１上！且几分肪 本発明は、貧血の改善に利用さるペプチドを有効成分と
する製剤及びその調製法に関する。

従来旦汰両立ｌ旦 元来、貧血には鉄欠乏性貧血が最も多く、本邦において
も特発性造血器障害調査研究班の調査結果によると、全
血液疾患１９１０例中９２ｏ例（４８，２％）に鉄欠乏
性貧血が報告されている（内野、“臨床血液皿、５６１
．１９７９）。また、胃切除、萎縮性胃炎、慢性炎症吸
収阻害症候群等においては鉄の吸収が阻害されるため、
貧血は更に増加することが予想される。

従来、貧血の治療には鉄則の投与が広く行なわれてきた
が、鉄剤には悪心、嘔吐、心窩部痛、胸やけ、腹痛、下
痢、便秘等の副作用が報告されており、且つこれら副作
用は、鉄剤の投与量によつ−では４０％以上の高い割合
の頻度で出現すると言われている。（内円等、“鉄欠乏
性貧血”第１０２頁、１９８４）。

したがって、このような副作用が出現する場合には健胃
剤の併用もしくは鉄剤の投与の減量乃至中止を余儀なく
されている。

−１１１が　ンしようとするμ 本発明は、貧血治療上の問題点に鑑みなされたものであ
って、上述したような副作用を呈する鉄剤の投与を必要
と廿ず、通常摂取する食物中に含有される鉄分の存在下
で貧血改善作用を十分に発揮し得る、低分子ペプチドを
有’ＡＪ成分とする貧血改善剤を提供することを目的と
する。また、本発明は、上記貧血改善剤を開裂するため
の方法を提供することも目的とする。

以下本発明の詳細な説明する。

介皿立盪底 本発明の特徴は、■乳蛋白質をパパイン及び中性プロテ
アーゼで酵素分解して得られる平均分子量２００乃至１
０００を有する低分子ペプチドを有効成分とする貧血改
善剤、及び■乳蛋白質を水中に分散させた分散液にその
ｐｏを５．１乃至５．５に調整した後、パパインを添加
して酵素分解を行ない、次いで得られた液にそのｐＨを
６乃至８付近に調整した後、中性プロテアーゼを添加し
て酵素分解を行なって得られる分子量２００乃至１００
０を有するペプチドを有効成分として製剤化することに
ある。

。　占　ｎ“　るための 本発明に係る貧血改善剤の有効成分である低分子ペプチ
ドは、乳蛋白質を下記手順により酵素分解することによ
り得られる。

出発原料の乳蛋白質としては、乳＋１９蛋白濃縮物、ホ
エーパウダー、ラクトアルブミン、カゼイン、脱脂粉乳
、全粉乳等を例示し得る。

本発明では、これら乳蛋白質を水に分散させたン夜に、
そのｐｆｌを５．１〜５．５、好ましくは５．３（１近
に調整した後、まずパパインを添加して酵素分解を行な
う。この際、乳蛋白質を２〜２０　Ｗ／Ｖ％の割合にな
るように水に分散させることが酵素分解上好ましい。ま
た、酵素分解は、パパインの活性化剤としてのシスティ
ンをパパインに対して５〜０．１Ｗ／Ｗ％添加して３０
℃〜６０℃の温度下で６〜２４時間行なうことが好まし
い。なお、パパインによる酵素分解をｐＨ　５．１〜５
．５、好ましくは５．３付近で行なうのは、基質として
の乳蛋白質の消化性を高めるためであり、また、その際
、乳蛋白質分散液を８５℃以上で５分間程度以上加熱し
てゲル化させたものを細砕してパパインを作用させると
乳蛋白質の消化を極めて迅速に行なうことができる。

また、パパインの添加量は乳蛋白質に対して０．０５〜
ＩＯＷ／賀％、好ましくは０．５〜５Ｗ／Ｗ％である。

本発明では、次いで上記パパインによる酵素分解液に、
そのｐＨを６〜８付近に再調整した後、中性プロテアー
ゼを添加して更に酵素分解を行なって、平均分子量２０
０〜１０００の低分子ペプチドを生成させる。

上記中性プロテアーゼによる分解をｐ１１６〜８付近で
行なうのは、この範囲のｐＨが消化性の点で至適である
ことに因る。なお、中性プロテアーゼの基質に対する添
加量は０．１〜１０Ｈ／−％、好ましくは０．５〜５−
八％である。

上記酵素分解は３０℃〜６０℃の温度下で６〜２４時間
行なうことが好ましい。

本発明は、上述のように、乳蛋白質にパパインと中性プ
ロテアーゼによる２段階の酵素分解を施すことにより、
貧血改善作用を有する低分子ペプチドを効率よく生成さ
せることができる。すなわち、乳蛋白質に直接中性プロ
テアーゼを作用させるとアミノ酸配列又は蛋白の構造上
消化しにくい部位が生じ、分子量１０００以下のペプチ
ドにまで分解することが困難であるが、乳蛋白質を予め
パパインで分解して分子量３．０００以下にしておくと
、中性プロテアーゼによる分解がし易くなる。

上述のようにして乳蛋白質を２段階で酵素分解して得ら
れる分解物を１００℃程度に加熱して酵素を失活させ、
それから不溶物を除去した後、濃縮、脱塩し、凍結乾燥
（ないしは噴霧乾燥）することにより、目的とする平均
分子量２００〜１０００の低分子ペプチドが得られる。

このようにして得られる低分子ペプチドのアミアミノ酸
組成を例示すると表１のとおりである。

表１ 本発明に係る貧血改善剤は、上記低分子ペプチドを有効
成分とするものであって、上記凍結乾燥（ないしは噴霧
乾燥）して得られる粉末状のペプチドをそのまま製剤と
して投与してもよく、また、公知の製剤化手法を適用し
て種々の形態に製剤化して投与することも勿論可能であ
る。

次に、本発明によって得られる低分子ペプチドの貧血改
善作用の効果を確認するために下記試験を行なった結果
を示す。

試験方法： ■試料の調製 平均分子ｌ５６０を有する低分子ペプチド（ｆ＆記実施
例により調製したもの）を有効成分とする下記表２に示
した組成の食餌を調製した。なお、比較として低分子ペ
プチドに代えて乳蛋白質とアミノ酸混合物をそれぞれ用
い下記表２に示した組成の食餌を調製して試験に供した
。

なお、表２に示した各食餌において、造血に深く関与す
ると考えられる鉄、銅等のミネラル、及びビタミンＢ１
２や葉酸等のビタミン類の量をほぼ同一にした。

また、上記各食餌のアミノ酸組成は表３に示すとおりで
ある。

表３ ■動物試験 手術後における鉄欠乏性貧血の最適モデルである胃全摘
ラットの１０匹から成る各群に、上記各食餌を４週間自
由摂取させた後の鉄欠乏性貧血の状況を調べた。結果は
表４に示すとおりである。

表４にみられるとおり、鉄欠乏性貧血に特徴的な低色素
性の術後貧血が進行してゆく過程で、本発明に係る低分
子ペプチドを有効成分とする貧血改善剤を配合した食餌
を投与したラット群では、低分子ペプチドに代えて乳漿
蛋白質ならびにアミノ酸混合物を配合した比較例（イ）
ならびに（ロ）の食餌を投与したラット群に比べて、血
清鉄の上昇をもたらすと共に血球容積比、赤血球数及び
ヘモグロビン量の明らかな改善が認められた。

因に、上記結果について推計学的処理による有意差の検
討を行なったところ、１％以下の僅少な危険率で有意に
改善されたことがわかった。

免班立処来 上記試験結果から明らかなように、本発明に従って乳蛋
白質をパパイン及び中性プロテアーゼを用いて２段階で
酵素分解して得られる、平均分子量２００−１０００を
有する低分子ペプチドは飲料用性を改善して血清鉄の含
量を上昇し、血色素や血球容積化を高めるので、貧血、
特に手術後の貧血に対し強力な改善効果を示す。

したがって、本低分子ペプチドを有効成分として製剤化
したものは貧血改善剤として有効に利用でき、また、本
低分子ペプチドを栄養剤や健康食品に適量添加すること
によっても貧血改善効果を有する製品が得られる。

以下に実施例を示して本発明に係る貧血改善剤の調製法
を具体的に説明する。

実施例 ホエー蛋白質としてのバイオプロ（バイオアイソレート
社製）　１０ｇを水ｌＩ！に分散した液に、そのｐｉ（
を５．３に調整した後、パパイン（和光紬薬社製）　０
．３ｇ及びシスティン（和光紬薬社製）０．０１ｇを添
加して５５℃の温度で８時間酵素分解を行なった。次い
で、得られた酵素分解液に、そのｐＨを６．８に再調整
した後、中性プロテアーゼ（ナガセ生化学工業社製）　
０．３ｇを添加して５５℃の温度で１０時間酵素分解を
行なった。

得られた酵素分解液を１００℃の温度に加熱して酵素を
失活させ、次いで不ン容物を除去した後、濃縮、脱塩し
、凍結乾燥して粉末状のペプチド混合物７．６ｇを得た
。

このペプチド混合物の平均分子量をセファデックスＧ−
１０（１，５Ｘ　１５０ｃｍ）カラムによるゲル濾過ク
ロマトグラフィー（溶出液１−／讐％酢酸）及びＴＳＫ
−Ｇｅｌ　ＳＷ　２０００−Ｇカラムにより測定したと
ころ５６０である。また、ペプチドの分布は分子ｉ　２
００〜１　、０００の範囲である。

また、ペプチド混合物の平均ペプチドの鎖長（ＡＰＬ）
及び遊離アミノ酸含量を下記により測定した結果、２．
８及び６匈／一％であった。

平均ペプチド鎖長（ＡＩ”Ｌ）の測定は下記により算出
した。

（アミノ基の定量はＴＮＢＳ法により、完全加水分解は
６Ｎ　ＩＩｃＩ中で１１０℃、２４時間加水分解により
行なった。） 遊離アミノ酸定量は日立８３５方アミノ酸自動分析計で
行なった。

次に、上述のようにして得られた低分子ペプチド（粉末
状）を常法により適当な賦形剤を用いて粉剤、錠剤等に
製剤化して製品とする。

Claims (5)

【特許請求の範囲】
1. （１）乳蛋白質をパパイン及び中性プロテアーゼで酵素
   分解して得られる平均分子量２００乃至１０００を有す
   る低分子ペプチドを有効成分とする貧血改善剤。
2. （２）乳蛋白質を水中に分散させた液に、そのｐＨを５
   ．１〜５．５に調整した後、パパインを添加して酵素分
   解を行ない、次いで得られた酵素分解液にそのｐＨを６
   〜８付近に調整した後、中性プロテアーゼを添加して酵
   素分解を行なつて平均分子量２００〜１０００を有する
   ペプチドを得、該ペプチドを有効成分として製剤化する
   ことを特徴とする貧血改善剤の調製法。
3. （３）乳蛋白質の水中への分散を２乃至２０Ｗ／Ｖ％の
   割合になるように行なう特許請求の範囲第（２）項記載
   の調製法。
4. （４）パパインによる酵素分解を、乳蛋白質を加熱して
   ゲル化した状態で３０℃乃至６０℃の温度で６乃至２４
   時間行なう特許請求の範囲第（２）項記載の調製法。
5. （５）中性プロテアーゼによる酵素分解を３０℃乃至６
   ０℃の温度で６〜２４時間行なう特許請求の範囲第（２
   ）項記載の調製法。