JPS62134559A

JPS62134559A - 血液細胞自動分析方法および装置

Info

Publication number: JPS62134559A
Application number: JP60275491A
Authority: JP
Inventors: Mitsuo Watanabe; 光男渡辺; Masao Yamazaki; 山崎　真雄; Hiroshi Masago; 央真砂
Original assignee: Japan Spectroscopic Co Ltd
Current assignee: Jasco Corp
Priority date: 1985-12-07
Filing date: 1985-12-07
Publication date: 1987-06-17

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】

産業上の利用分野この弁明１は、臨床医学、遺伝子工学、生化学等の分野
においてヒト等の生体の血液細胞を分析する方法および
装置に関し、将に各種の血液細胞を含む試料中から特定
の種類の細胞を選別してその特定の種類の細胞の陽［１
率を判定する方法および装置に関するものである。従来の技術周知のように、ヒト等の生体の血液について、１伺えば
リンツマ球等の特定の（手順の血）１りｆ田胞の閾１生
率を調べることは、その生体の疾病その他の情報を得る
ために↑（めて璽要てめり、従来から臨２味医学等の分
野において広く適用されている。−ａ！ここのような血
）々細胞の陽性率の判定は、モノクロナール抗体等に特
異蛍光発色剤を付加した試薬を血液に添加して、その血
液細胞の蛍光強度を調べることによって行なわれる。血液中の細胞としては、赤血球のほか、白血球として代
表的にはリンパ球、犀球、果粒法が含まれ、これらのう
ち例えばリンパ球について陽ｊ生≦を判定したい場合、
予め赤血球を溶血剤によつ−Ｃ破壊してあけば、残りの
血液細胞（リンパ耐（、単球、果粒法）については、そ
れらの大きざ、構造が異なるから、光学的に選別子るこ
とか可能でめる。このように血液中の各血液細胞、将にリンパ球、単球、
果粒法を光学的に選別する装置としては、最近に至りフ
ローサイトメータと称される装置か開発されている。フローサイトメータの原理的な、溝成を第１３図に示す
。第１３図において、円筒状をなしかつ先端の中心軸線
延長位置にノズル部２が形成されたフローセル１内にそ
の周囲から生理食塩水等の不活性液（シース液〉３をｈ
目皿して送り込み、一方前記フローセル１内の中心＠線
位置に配設された試料供恰管４を介して多数の血液細胞
を含む試料５をｎ０圧供給して、その試料５をフローセ
ル１内において中心＠線に沿って流れる＠流となし、こ
れにより試料５中の各血液細胞が１個ずつ分離された状
態でノズル部２を流れるようにし、さらにそのノズル部
２を通過する各血液細胞にレーザ光８、東６から雫−波
長のレーザ光を照則し一部、２種以上の散乱光強度、す
なわら代表的には前方散乱光（微小角散乱光）および９
０°敗乱光と、蛍光強度を；測定する。上述のようなフローサイメータにおいて、前方散乱光強
度は血液細胞の犬ぎさの゛同報を与え、また９０°散乱
光強度は血液細胞の構造に関する情報を与え、したかっ
て両者の組合から、リンパ球、単球、果粒法を識別する
ことができ、ざらに蛍光強度から各細胞についての陽匪
率を求めることができる。このようにしてフローサイトメータを用いて、各種の血
液細胞か含まれる試料中の必る佳の血液辛田胞１９：］
えばワンノマエ求を識別し、ざら（こそのｌリンツマ球
の陽性率を判定するための従来の方法について次に説明
する。前述のようにして多数の血液細胞を含む訊科（但し既に
赤血球は）ａｆＩＩｌ剤によって破壊己れ−Ｃいるもの
）についてフローサイトメータて各血ＧＴ田胞の前方散
乱光強度、９０°敗乱光強度および蛍光強度を測定し、
これをリストモードて記旧する。その試料中に含まれる全血液細胞についてｉｉｉ’１定
が終了した後、前方散乱光強度および９０°敗乱光強度
に応じた血液細胞の頻度分布表、すなわちサイトグラム
を作成する。例えば９０°散乱光強度を横軸（×＠）、
前方散乱光強度を縦軸（ｙ＠）とし、そのｘ−ｙ平面上
における各点の血液細胞出現頻度を高さくＺ＠）として
三次元のサイトグラムを作成ターる。但し実際のＣＲＴ
ディスプレー上の画面あるいはプリンタにより出力され
た表においてはｘ−ｙ平面に対して血液細胞の出現頻度
が黒点の（且密問るいはｉ賛さ−Ｃめられされる。この
よう（こして１昇られたサイトグラムの一例を第１４図
に示す。この図は一般的なヒトの正富な血）夜について
最も典型的な例を示ブもので必り、一般にサイトグラム
上において血液細胞はいくつかの群（し、Ｖ１、Ｇ）に
分離され、Ｌの群はリンパ球に相当し、Ｎ１の詳は単球
に相当し、Ｇの群は果粒球に相当する。なお第１４図に
おいて下はこれらの血液細胞以外の夾雑物群である。し
たがって例えば第１４図中に破線で示すようにＬの群の
部分にＸ値、ｙ直の範囲によって定まる二次元の判別領
域（ウィンドウ）Ｗを設定し、そのウィンドウＷ内に含
まれる血液細胞をリンパ球と判別づることができる。そしてこのようにリンパ球と判別された各血液細胞、す
なわちウィンドウＷ内に含まれる各面）々細胞（以下こ
れを便宜的にリンパ球と記ず）についてその蛍光強度を
読出して陽性率を算出する。例えば第１５図に示すよう
に＠軸を蛍光強度、縦軸を頻度（リンパ丹（の１円数）
とずれば、相対的に蛍光強度か昌い陽ｉ生のリンパ球と
、゛実演的に自然蛍光のみ（こよる１氏い蛍光弓条度の
陰；生のワンツマ王木とか分わｔされるから、塩１ｔピ
ークと１局′１生ビーりとの間のめる蛍光強度を陽；生
、・陽性ギ１１別漠界晒とし１、その境界−よりも蛍光
強度か高いリンパ球を壜、寸のリンパ球と判別して全リ
ンパ床中に含まれる陽’ｊ′ｌ：リンパ球教の９１合を
リンパ球の陽゛ａ品として出力する。発明か解）夫すべき間９３点前述のような分析過程にあい−Ｃ、サイトグラム上にお
けるリンパ球の群りの泣言（，１、測定対象とされるヒ
トの個人差、病因、：浅域、細胞処理状態、経過時間等
によって異なるのか過密て必り、したかって陽性率を求
めるべきリンパ球を判別するためのウィンドウＷの位置
は、従来はサイトグラムをＣＲＴディスプレイ上で操作
員が断視しながら設定していた。しかしなからこのよう
な従来のウィンドウ設定方法で（は操作員の監視を要り
るとともに、ウィンドウ設定のために熟練を要戻る等の
問題があり、さらには操作員の個人差によって判別精度
のばらつきも大きくなる等の問題もあった。そこで、サイトグラム上において陽性率を求めるべき特
定の種類の血液を判別するだめのウィンドウを、操作員
の竪視−手動入力によらずに、自動的に設定し得る方法
および装置の開発が強く望まれている。また従来は、試料をフローサイトメータに供給する過程
から最終的にリンパ球等の特定細胞の陽性≧を算出ずろ
過程までを全自動で行なう方法、装置はなく、したかっ
て省力化等のためにその全過程を自動的に行なう方法、
装置の開発か望まれている。この発明は以上の事情を背景としてなされたもので、試
料中の血液細胞についての２種の散乱光強度と血液細胞
出現頻度によって定まるサイトグラム上において、陽性
率を判定すべき特定種類の血液細胞を判別するための判
別領域（ウィンドウ）の設定について、ディスプレー画
面上での艷視に基づく手作業での設定を行なうことなく
、自動的に設定するようになし、しかもそればかりてな
く試料のフローサイトメータへの供給から将定血仮細胞
の陽性率の算出までを全て自動的に行なうようにした方
法および装置を提イ共することを目的とするもので必る
。問題点を解決するための手段この発明の血液細胞自動分析方法は、暴風的ｌこは、複
数の種類の多数の血液細胞を含む試料を吸引してこれを
フローサイトメータへ送給する試料供給過程と、前記試
料中の各血液紬暇について少なくとも２種の散乱光強度
と蛍光強度とをフローサイトメータにより順次）１１１
定する；測定過程と、前記測定過程により測定されＴこ
各測定１面を各血：睨細胞について）頃次記・屏で゛る
測定側聞″旧過程と、前記測定過程および兆’ｉ’ｌ　
ｉｌＮ記１．憑過程終了者、各ｉｌす定）血のうち、２
種の敗乱光強喰測定１１σ゛［貴報を各面）汐細胞につ
いて読出し−Ｃ１その２種の散乱光強度滑１定１直の４
目関によるサイトグラムを１乍成する過（呈と、前記サ
イトグラム内の一部に所要の判別領域を設定する判別領
域設定過程と、前記２種の肢乱光強喰）４１１定１１Ｎ
か前記判別領域内にある多数の血液細胞についで、各血
；々抽ｑ程の蛍光強度を読出し−Ｃ１それらの血）浚細
胞の陽ＩＪ率を判定する陽性率判定過程とを有し、前記
判別領域設定過程においては、予め紀ＩＥ、されている
復故伸頌の領域パターンに塞いて、陽性率を判定ｙへき
特定種類の血液細胞群に適合する判別領域を定めるよう
になし、かつ前記試料供給過程から陽性率判定過程まで
を自動的に（１ない、しかも面配測定値記源過程終了後
から陽斗率刊゛ボ過程終了後までのいずれかの段階て次
の試１′旧こついての試料供給過程を自１り的に開始ざ
ぜるようにしたこと（！−持特赦するものである。まＴここの発明の血：ｆＲｌｉｅ胞自動分析装置は、暴
風的には、試料中に含まれる各面２４１　ｉｒｌ’！胞
について少なくとも２種の散乱光強度と蛍光強度とを順
次測定７るフローサイトメータと、多数の異なる試料を
′１Ｈ次吸引してこれを前記フローサイトメータへ送給
するオートサンプラと、前記フローサイトメータにより
測定された各測定１日を各血液細胞についてリストモー
ドで記はする記′臣手段と、前記各測定値のうら２仔の
駿乱光強度測定１面を’ｆ４ｉ　、ｉｄ　７ｄ　：息手
段から同一試料中の各面）内輔、胞について技量して、
その試料について旧聞２種の散乱光強度’＋’Ａｌｌ　
’、Ｆｌ碩によるサイ１〜グラムを作成するとともに、
そのサイトクラム内の一部に所要の判別領域を股だし、
さらにその判別領域内に市る多数の血））ダ細胞の蛍光
強度油ＩＴ値を前記記゛巳手段から読出し−Ｃそれらの
多数の血液細胞の陽性率を再出フる判別辺理手段とを有
してなることを１寺ｉ斂とするものてめる。作　　　用この発明の方法および装置に６いては、先す１．ノンパ
球、単球、果粒法などの復数の多数の血液’ｊ’ｉｎ胞
を含むヒト等の血液試料（は、フローサイトメータへ供
給己れ、このフローサイトメータによって少なくとも２
種の散乱光強度、例えば前方散乱光強度（微小角散乱光
強度）および９０’歌乱光強度と、蛍光強度とか各血液
細胞について順次１Ｉｉ１１定される。そしてその各血
液細胞の測定直は例えばリストモードで順次配・旧され
る。次いでその記ｉ徴されたｍｌり定値のうち、血液細
胞の種項を決定するために荷動な血液細胞の＠造、大ぎ
ざに関する２種の散乱光強度測定値、例えば前方散乱光
強度あよひ゛９０°敗乱光強度が読出され、それらの相
関によるサイトグラムか作成される。丁なわち例えばＸ
相を９０°敗乱光強度、ｙ！Ｉを前方散乱光強度とする
平面上に、血液細胞の出現頻度をＺ軸方向にとったサイ
１〜グラムを作成する。次いでこのサイトグラム上の平
面（ｘ−ｙ平面）上に、陽性率を判定丁べき特定種類の
血液細胞群に適合する判定領域（ウィン１−ウ）が設定
されるが、この際には、予め記匣己れている復数種類の
領域パターンに基いて最適なウィンドウが自動的に設定
される。このようにして最適なウィンドウが設定されれ
ば、そのワイントウ内に存在覆る（）なわち各散乱光強
度かウィンドウ内の債に相当覆る）特定種類の血液細胞
の蛍光強度か読出されて、蛍光強度からその特定種類の
血液細胞の陽性率が判定される。そしてこれらの−浬の過程は自動的に行なわれ、かつ次
の試料についての分析も自動的に開始される。上述のように、サイトグラム上におけるウィンドウの設
定は予め記巴されている複数伸頂の領域パターンに塁い
て自動的になされるから、ウィンドウの設定に必たって
はディスプレー画面上ての直視に嬌づく手作業ての設定
か不要となり、したかって省力化か連成てきるとともに
、操作員に熟練を要することもなく、かつ個人差による
判別清度のばらつきも解消される。ざらに、上記のウィ
ンドウ設定のみならず、試料の供給から最終的な陽性率
の範囲まで全て自動的になされるため、操作員の手数を
煩わすことなく、著しい省力化か図れ、しかも操作員の
経験や熟練を不要とすることかできるのである。実施例第１図にこの発明の血液細胞自動分析方法を実施するた
めの装置の仝体慣成の一例を概略的に示す。第１図においてオートサンプラ１０は、復だでの種類の
多数の血液細胞を含有する多数の血）（全試料を順次１
試料ずつ吸引し一部これをフローサイトメ−夕１１へ自
動的に送給するためのものでおり、フローサイメータ１
１は前述のように試料中の各血液ｆｆｆｌ胞について少
なくとも２種の散乱光強度、代表的には前方散乱光強度
（微小角散乱光強度）あよひ９０°散乱光強度と、蛍光
強度（例えば緑色蛍光強度および／′または赤色蛍光強
度）を同時的に’、ｉ！ｊ　’ｉする。これらの沖１定
値信号は判別処理手段１２に付設された記・阻手段１３
において各血液細胞についてリストモードで順次記憶さ
れる。判別君理手段１２では、同一試料についての測定
修了１な、前記各測￥頃のうち２種の散乱光強度測定値
を前配記憶手段１３から同一試料中の各血液細胞につい
一部読出し−Ｃ１その試料について前記２種の散乱光強
度によるサイトグラムを作成するとともに、そのサイト
グラム内の一部に所要の判別領域（ウィンドウ）を設定
し、さらにそのウィンドウ内におる血液細胞の蛍光強度
測定ＩＢを前記記゛臣手段１３から読出してそれらの血
液細胞の陽性率を痺出するためのもので市る。なお第１
図において１４は前記サイトグラム等を表示するための
ディスプレー装置−Ｃおる。前記オートサンプラ１０の具体的構成は持に限定しない
か、１９（えば第２図に示すように構成することかてき
る。丁なわら試料容器支持・移動装置１５内に、試験管
等の試料゛容器１６を複数不完支持する容器支持枠１７
を多数配列保持させ、かつその試料゛容器支持・移動装
置１５は前記写器支（１伜１７を順次移動８ぜ冑るよう
に構成ｙる。またその試料容器支持・移動装置１５は、
各試料容器１６内の試料温度を例えば４〜ｉｏ’ｃ程度
に保持し１仔るように１盾Ｉ來Ｃ亘温？曹１８に連結し
ておく。ざらに試料容器支持・移動装置１５の所定の位
置には、その位置のに１′１各器１６内の試料を吸引吸
引してこれをフローサイトメータへ送るための試料吸引
装置１９を設けておぎ、また試ね容器支持・移動装置１
５の他の位置には、血）々細胞の蛍光発色のための試薬
を注入するための分注装置２０を配設し−Ｃおく。前記フローサイトメータ１１は、既にｊホべた第１３図
のような構成と同じ構成とずれば良い。また前記判別逃
理手段１２はコンピュータによって４Ｒ成することが一
部きる。次にこの発明の方法における判別領域設定過程について
説明する。既に述べたように、試料（こ含まれる各血液細胞につい
゛（測定した２種の散乱光強度、代表的には９０°敗乱
光強度および前方散乱光強度によって例えばＸ％＋を９
０’散乱光強度、ｙ＠を前方散乱光強、度とし、高さ方
向（２軸）を血液細胞の出現＠度としたサイトグラムが
作成される。この時、サイトグラムにあられれる血液細
胞は、例えばリンパ球群し、単球群Ｍ、果粒球群Ｇに分
離され、さらに一部には夾雑物群下もあられれる。その
典型例は既に第１４図に示した通りであるが、ここでリ
ンパ球群りのみを選別したい場合、そのリンパ球群を含
むような判別領域（ウィン１〜つ）Ｗを設定すれば良い
か、リンパ球群りと認められる群の位置や拡がりは既に
迩ぺたように個人差、病因等によって異なるから、ウィ
ンドウＷは一義的に定めることはできない。そこでこの
発明の方法では第３図のＷ１〜Ｗ４で示すように、予め
異なる榎故の領域パターン（ウィンドウパターン＞Ｗ１
〜〜■４を記憶させておき、それらのウィンドウパター
ンＷ１〜Ｗ４を基準としてウィンドウを定める。その具体的なウィンドウ設定手法としては例えば次の（
イ）、（ロ）、（ハ）、（ニ）、（ホ）また１ハ（へ）
に記すような手法を用いることかてぎる。（イ）　先ず前述のように予め記憶されている復数のウ
ィンドウパターン〜■１〜Ｗ４のうち、適宜のものを仮
のウィンドウＷｐとする。この仮のウィンドウＷｐとしでは、リンパ球群しに概略
適合づるウィンドウパターンを設定することが望ましく
、そのためには例えばそれまでの測定において最も適合
度か高かったパターンを仮のウィンドウ設定のための第
１準泣のパ傘−ンとし、先ずその第１県位のパターンを
呼出して仮のウィンドウとすれば良い。またもちろん経
歴的に最も適合する可能性が高いと思われるパターンを
第１隼位のパターンとしておいても良い。このようにし
て仮のウィンドウ〜ＶＤを設定した後、第４図（Ａ＞ま
たは第４図（Ｂ）に示すようにその仮のウィンドウＷｐ
内における血液細胞出現頻度の最大ｉ直Ｚｎ１ａＸを求
め、その最大値Ｚ　ｍａｘに対し予め定めた０、１以下
の係数ｋを乗じてその値Ｚｋ　　（Ｚｋ　＝Ｚｍａｘ　
ｘｋ）を境界値とする。なおここで係数には０．１以下の小さい故であれば任意
に設定できるが、実用上は０．０５以下、望ましくは０
．０２〜０．０３程度に設定する。続いて前記仮ウィン
ドウＷｐ１こ６ける境界線上のすべての位置での血液細
胞出現頻度Ｚｐか前記境界値Ｚｋ以下もしくは境界値Ｚ
１（未満てめるか否かを判定し、その条件か満足されて
いる場合（Ｚｐ≦ＺｋもしくはＺｐ　＜Ｚｋ　：第４図
（Ａ＞の場合）には、その仮ウィンドウＷｐを真のウィ
ンドウとして次の陽性率判定過程へ進む。このような操作は、換言すれば第４図（Ａ）、（Ｂ）に
あい−Ｃ境界１血Ｚｋの個の血彼＋ｆｉ胞田現項度の等
高線Ｃを描ぎ、その等幅線Ｃか金−ｃ　ｈ、ｒ２のパタ
ーンＷｌ）（７）境界線よりも内ｉＱ’ｉ　（１旦し等
高線上を含んても良い）にあるか否かを判定することと
同して市る。 −万、最初に設定された仮つィンドウＷｌ）について上
述の条件か満足されない場合、すなわち仮つィンドウＷ
ｐの境界線上の血液細胞出現頻度Ｚｐが一部でも前記境
界ＩＩＩＺｋより大きいかまたはそれ以上である場合に
は、その仮ウィンドウ〜■ｐをウィンドウとし−Ｃは不
適当と判定する。そして予め記′庶されているウィンド
ウパターンのうちから新たに別のウィンドウパターンを
仮のウィンドウとして、上記と同峠な操作を行なう。最
終的に全てのウィンドウパターンが前記条件に適合せず
に不適当と判定された場合には、俊）ホするようにその
血液細胞のデータを一旦保存し、別の試料の分析へ移１
′：ｆ￥る。（ロ）　前記（イ）の場合と同様に予め記′慮されてい
るウィンドウパターンＷ１〜Ｗ４のうちから仮のウィン
ドウＷｐを設定し、（イ）と同様にその仮つィンドウＷ
ｐ内における最大値Ｚ　ｍａｘを求め、係数ｋを乗じて
そのｆａＺｋ　　（＝　Ｚｍａｘ　ｘ　ｋ　）を境界値
とし、仮ウィンドウＷｐにおける境界線上のすべての位
置での血液細胞出現頻度Ｚｐか前記境界値Ｚｋ以下（も
しくは来訪）であるか否かを判定する。そして仮ウィン
ドウＷｐの境界線上の位置の頻度Ｚｐか一部でも境界値
Ｚｋを越え（あるいはＺｋ以上）である場合にはその仮
ウィンドウＷｐを不適当と判定し、新たな別のウィンド
ウパターンを仮ウィンドウとして同様な操作を行なう。ここまでは（イ）の場合と同じであるが、（ロ）場合に
は仮ウィンドウＷｐにおける境界線上のすへての位置に
おける出現頻度Ｚρが前記境界値Ｚｋ以下（もしくは未
満）でめった場合でも、直らにはその仮ウィンドウＷＤ
を真のウィンドウとせず、ざらに次のような条件ての判
定を行なう。すなわちその仮つィンドウＷｐ同における
血液細胞数ｒ）を求め、そのｎが予め定めた最小値Ｎｍ
１ｎ　　（ＨＢえば５００）から最大値＼ｍａｘ（例え
ば２０００）までの範囲内にあるか否かを判定し、ｎが
その範囲内である場合にはその仮ウィンドウＷｐを真の
ウィンドウとし−Ｃ次の陽性坐〒１１定過程へ進む。一
方ｎか＼ｍ　ｉ　ｎ〜＼ｍａｘの範囲外である場合にｌ
よその仮ウィンドウ’ｖＶｌ）を不適当と判定し、新た
な別のウィンドウパターンを仮ウィンドウと設定し一部
、以上の操作を慄返丁か、必るいはその時点で８ＩＱ定
データを異當と判定してそのデータを保存し、別の試料
の分析へ移行する。このように仮つィンドウＷＶＪ内の
血液細胞数ｎが＼ｍｉｎ〜Ｎ　ｍａＸの範囲内にあるか
否かを判定することは、その故ｎかリンパ球の常識的な
故と予想される範囲内におるか否かを判定づることを恩
吠する。すなわちｎか：＼ｍ！ｎ未）菌ではそのウィン
ドウの信頼性が乏しく、一方「）がＮｍａＸを越える二
ｉ合は何らかの＠富゛か必る場合と考えられる。（ハ）　前記（イ）、（ロ）の場合と同様に、予め記・
げされている神放の１ツイントウパターン〜＼ｔ１〜Ｗ
４のうちから仮のウィンドウ〜Ｖｐを設定し、その仮つ
ィンドウＷｐ内における最大値７　ｍａｘを求め、係数
ｋを乗じてその埴Ｚｋを境界値とし、仮ウィンドウＷｐ
の境界線上のすべての位置の血液細胞出現頻度Ｚｐか前
記境界値Ｚｋの値以下（もしくは未満）であるか否かを
判定りる。そして仮ウィンドウ〜■ｐの境界線上の位置での頻度Ｚ
ｐか一部でも境界＋ｍ　Ｚ　ｋを毬え（勺るい

【よ以上
）である場合にはその仮ウィンドウＷｐを不適当と判定
し、新たな別のウィンドウパターンを仮ウィンドウとし
て同様な操作を行なう。−力板ウイントウ〜■ｐにおけ
る境界線上のすべての位置における出現士ｎ度ＺＤか酌
記境界１旧ｚＨ＜以下（もしくは未満）て必っだ場合に
は、前記（ロ）の場合と同様に仮つィンドウ〜Ｖｒｌ内
の血液細胞の総数ｎを求める。一方第５図１こ示すよう
にサイトグラム上において仮ウィンドウＷｐを含みかつ
その仮ウィンドウよりも格段賑こ大きい領域を比較領域
〜ＶＱと設定し、その比較領域ＷＱ内の血液細胞の総数
ＮＱを求め、仮ウィンド「りＷＱ内の血）ａ細胞数ｎと
の比（ｒ）／’　ｌ＼ｑ〉を求める。そしてこの比の値（ｎ／、ＮＱ）が予め定めた範囲内で
ある場合にはその仮ウィンドウＷｐを真のウィンドウと
じ一〇次の陽性率判定過程へ進む。一方前記比の直が予
め定めた範囲外である場合にはその試料についてのデー
タを異常と判定してそのデータを保存し、次の試料の分
析へ移行するか、市るい１ハ新たなウィンドウパターン
により仮のウィンドウＷｐを設定し、上記同様な操作を
行なう。このように比較領域ＷＱを設定しで仮のウィン
ドウＷＱ内の細胞数日と比較領域ＷＱ内の細胞数ＮＱと
の比を求めることは、仮のウィンドウＷＱ内のリンパ球
と予想される細胞の数が他の細胞と比較し−Ｃどの程度
の割合となっているかを調べることを意味する。すなわ
ち血液中のリンパ球の故と他の血液細胞例えば単球ヤ果
粒球の故との比は、正電゛な場合には常識的な範囲かあ
り、その常識的な範囲を逸脱している場合には、何らか
の異常かめるかまたは仮のウィンドウＷｐが適切でなか
ったと考えられる。そこて前）ボのように比較領域〜ｖ
ｑ　／！！−設定して異常の有無や信頼性の有無を調べ
るので必る。ここで比較領域Ｗｑは、　　（第５図に示
しているように仮のウィンドウＷＱ内に含まれる血液細
胞の種類（例えばリンパ球）とは異なる種類の血液細胞
（例えば単球および／または果粒法）の群を含むように
設定することが望ましい（但し夾雅吻群は除いて〉か、
もちろん第５図の鎖線Ｗｑ゛で示すように、一般的に単
球や果粒法か含まれないと予想されるような比ｉり領域
〜ＶＱ’を設定しても艮い。この比較領域〜■０°の場
合、１シ、１えば第５図のＱの位置には正電−７：ｉ：
場合には細胞かはと／Ｖど出現しない筈てめるか、何ら
かの異常てＱの位置に多数の細胞が出現した場合、前記
比の１直（ｎ、７′、＼ｑ）か小さくなり、その異常を
見出すことか−Ｃぎる。もらろん比較領域を２重に設定
（例えば゛第５図の〜ｖｑおよびＷｑ’）Ｌ−Ｃ１各比
較領域について前述のような比の値を求め、それぞれか
予め定めた範囲内にあるか否かを判定づることもで８る
。二）　先ず前述のように予め配゛慮され−Ｃいる痩故の
ウィンドウパターン〜■１〜〜ｖ４のうち、適宜のもの
を仮のウィンドウＷｐとする。この仮つィンドウＷＤとして゛は、（イ）の場合と同様
にリンパ球群りに概略適合するウィンドウパターンを設
定することか望ましく、そのためには例えばそれま−こ
の）制定におい−〇最も適合度か高かったパターンを仮
ウィンドウ設定のための第１準イ立のパターンとし、先
ずその第］隼位のパターンを呼出して仮のウィンドウと
したり、必るい（，１経験的に最も適合する可能性か高
いと思われるパターンを第１準位のパターンとしておい
て＋：）良い。このようにし−Ｃ仮のウィン１−ウＷｐ
を設定した後、第６図に示づように仮ウィンドウ’ＩＩ
ＶＩ）内における血液細胞出現頻度の最大Ｉａｚｍａｘ
を求め、その最大値Ｚ　ｍａｘに女・］シ予め定めた０
、１以下の係数２を乗じ、その’ｍＺ’ｌ　（＝Ｚｍａ
ｘ　ｘ＆　）の等凸線Ｈ！を境界線としてウィンドウ〜
■を定め、次の陽性率判定過程へ進む。なおここで係数
２は０．１以下であれば任意に定めることかできるか、
通常は０．０５以下、望ましくは０．０２〜０．０３程
度に定めることか望ましい。（不）　前記の（ニ）と同様に最初に仮のウィン［〜つ
Ｗｐを定め、その内側での最大値ＺｍａＸを求め、ぞれ
に係数２を乗じたｚ、ｇ　＜＝ｚｎｌａｘｘ）〉の等凸
線Ｈ２を求める。ここまで（は（ニ）の場合と同様て詰
るか、（爪）の場合にはその等高原ト１２をただちにウ
ィンドウＷとはぜず、６ら前記（ロ）の場合の使手の過
程と類似した手法により次のよに判定ｌ゛る。すなわち
前記等凸線Ｈ！２内（こおける面）（りｆ；ｌ胞係歎口
を求め、そのｎが予め定めた最小須＼旧口　（例えば５
００）から最大１１引＼１ｉｌａＸ　　（ｉ５Ｊえば２
０００）までのｍｌ　Ｉｆ−４ｔ内にあるか否かを判定
し、ｎかその範囲内でめる場合には等ｃ５線Ｈ２を真の
ウィンドウ〜■として次の陽性率判定過程へ進む。口／
〕）前記範囲外にある場合に（よデータを異常として保
存し、次の試１斗の分析ｌ＼進む。（へ）　このｊ場合も前記（ニ）と同様に最初に仮のウ
ィンドウＮへｌｌ）を定め、その内側での最大値Ｚ　ｍ
ａｘを求め、それに係数２を乗じたＺｆ　（＝Ｚｍａｘ
　ｘ＆　）の等凸線Ｈ２を求める。続い−Ｃ前記（ハ）
の後半の過程と項似した手法により次のように判定する
。すなわら前記等凸線Ｈ！内における血液細胞の係数「
）を求める一方、その等凸線Ｈｆを含みかつその等傷線
Ｈ１内の領域よりも格段に広いサイトグラム上の領域を
比較領域Ｗｑとして設定し、その比較領域Ｗｐ内の血液
細胞の総数ＮＱを求める。そして前記等凸線ト１；２内
の故ｎと比較領ＶＸ’ＶＶ　ｑ内の数＼ｑとの比ｎ　／
　Ｎ　Ｑが予め“尼めた範囲内て躬るｊ場合には等凸線
Ｈ１をウィンドウＷとして次の陽性率判定過程へ進む。一方ｎ／″ＮＯが予め定めた範囲を外れ−Ｃいる場合に
はそのデータを異常として保存し、別の試料の分析ｌ＼
移行する。以上のような（イ）〜（へ）のいずれかの手法によりウ
ィンドウを設定するが、もちろんこのほか例えば（ロ）
と（ハ）を組合せたり、（ホ）と（へ）を組合せたりす
ることによって、より厳しい判定を行なってウィンドウ
をΔ２定しても良い。次いでそのウィンドウ内に市る血液細胞、すなわち例え
ばリンパ球と考えられる血）汐細胞の蛍光強度を記′隠
手段から読出し、第７図に示すように蛍光強度の頻度分
イｌｊについ＝Ｃ、予め定めた蛍光強度を陽性／陰性判
定境界線Ｆｏとし、その境界線Ｆｏの蛍光強度以十ちし
く（よそれを越える蛍光強度を杓する細胞を陽Ｉ生、境
界線Ｆｏの蛍光強１咬禾局もしくはそれ以下の蛍光強度
を有する細胞を陽ｉ１と判定し、下肥（１）式て示すよ
うに陽性の縮Ｉ］包故Ｎ＋を、陽・１住結胞賓父＼＋と
μス１生キｉｕ１危各父＼−との和（すなわち総数）で
除した値を陽ｉ生串として出力する。陽性率（：≦）　＝　　　　＼＋　　ｘ　　１００：＼
＋＋Ｎ−・・・（１）ここ−Ｃ，陽性／′陰性判定境界線Ｆｏを設定する具体
的手法とし−Ｃは、経験的に最も適当とイえられる圃−
Ｃ設定しても良いが、より判定精度を高めるためには次
の（ａ）、（ｂ）、（Ｃ）、または（ｄ）に示すような
手法を用いることか望ましい。（ａ）予め実質的に陰ｌの血液細胞のみを含む参照試ｆ
′４、′？Ｊ−なわら１幻えば蛍光発色のための試梁を
添り目しなかった参照試料につい−にの発明のシステム
と同作なシステムで蛍光強度を調べ、例えば第８図に示
すように蛍光強度の頻度分１ｈを描く。そしてその頻度
分布におけるピーク〜１の蛍光強度よりＫ＜ｊ）ｓつピ
ークＭの値に予め定めた０、０５以下の係数Ｕ、例えば
０．００１　（０，１％〉もしくは０．０１　　（１％
）を乗じた頻度Ｍｏ（＝ｕ・Ｍ）の蛍光強度を陽ｉ生／
陰ｊ生判定境界牟泉）でとする。（１））前記の（ａ）と同様に実質的に陰性の細胞のみ
からなる試料を用いて頻度Ｍｏの位置を仮の陽性陰性判
定境界線ＦＤとする。おるいはまた経験によって仮の陽
性陰性判定境界線Ｆｐを定めておく。続い−Ｃ，第９図
に示すように実際の試料による蛍光強度の頻度分布にお
いて前記仮の境界線Ｆｐの近１カでの頻度の最小圃もし
くは恒小値の位置を真の境界線Ｆｏとする。この場合、
実際には例えば仮の境界線Ｆｐの前後にある範囲を設定
し、その範囲内での最小値となる位置を真の境界線Ｆｏ
とすれば良い。（Ｃ）前記（ａ）の場合と同１葉に゛支質的（こ陰ＩＡ
ｒの４．■邸のみからなる訊１′１を、甲いてｒ＠記穎
反＼）１つのｉフヨを仮の境界線Ｆｐとするか、または
経験によって仮の境界線Ｆ　ｐを定めておく。涜いて第
１０図に示すように実際の試料による蛍光強度の頻度分
作において前記仮の境界線「ｐの近ＩＡでしかもその実
際の試ｆ」についでの陰性ピーク頻度、Ｍ゛の値に０．
０５以下の所だの係数Ｖ、例えば０．０１めるいは０．
００１を乗じた頻度、＼ＩｉＯ’（−・’ｖｌｏ’）の
位置を陽性７．陽１刊定境界線Ｆｏとする。この場合実
際の試ｆ１１こあげる前記頻度１°＼／ｌｏ’は複数の
異なる蛍光強度のＱ　＠−Ｃ′表われることか多いか、
それらの１１置のうち最も仮の境界１；泉Ｆｐｔこ近い
１ｑ声を陽性、／陰件判定乃界１！Ｎ　Ｆ　Ｏとづれば
艮い。（ｄ）前記（ａ）の場合と同様に実質的に陰性の細胞の
みからなる試料を用いて前記頻度ＭＯの位置を仮の境界
線Ｆｐと】るかまたは経験によって仮の境界線Ｆｐの位
置を定めておく。涜いて第１１図に示すように実際の試
料による蛍光強度の頻度分布において前記仮の境界線Ｆ
ｐの近傍でしかも陽性ピーク側から克て頻度が零に近い
予め定めた故Ｗまで減少した位置を真の隔１生／′陰性
判定境界線ＦＯとする。以上のようないづ゛れかの手法によって実際の試１“１
の蛍光強度頻度分子Ｂについて陽性陰性判定境界線Ｆｏ
を定めれば、前記（１）式によって陽性率が求められる
。但し、上述の（ｂ）、　（Ｃ）、　（ｄ）の場合、仮
の境界Ｖ、９　Ｆ　ｐの近ＩＺで真の陽性／陰性判）Ｅ
境界線Ｆｏを決定することができない場合、りなわら実
際の試料につい＝Ｃの蛍光強度分布において仮の境界線
Ｆｐの前後のある範囲内に頻度極小飽（（ｂ）の場合）
や頻度ＭＯ’の位置（（Ｃ）の場合）めるいは頻度Ｗの
位置（（ｄ）の場合）が存在しない場合に（は、そのデ
ータを異常と判断して、陽性率の判定を行なうことなく
そのデータを保存し、次の試料の分析へ移行することか
望ましい。なお場合によっては試料に対して２種以上の試薬を添ｂ
Ｏシて胃なる種類の蛍光、例えば緑色蛍光と赤色蛍光と
の両省を呈するようにし、かつフローサイトメータにお
いて各面）汐ｆｉｆｌ胞についてそれらの２種以上の蛍
光強度を測定！れば、蛍光強度分布１】を多次元化する
ことかできる。例えば第１２図に承りようにＸ軸に緑色
蛍光強度、ｙ軸に赤色蛍光強度をとり、ｘ−ｙ平面にＲ
＝ｊする高さ方向（ｚ１１９）に血液細胞の頻度をとり
、緑色蛍光および赤色蛍光の両者についてそれぞれ陽Ｉ
生／陰性ギ１１宇境界線ＦＯＩ、ＦＯ２を鰻定丁れば、
緑色蛍光、赤色蛍光の両者について陰性の群ＦＡ、緑餡
蛍尤についてのみ陽性の群ＦＢ、赤色蛍光についＣのみ
陽性の群ＦＣ１赤色蛍光および緑色蛍光の両尚について
陽性の？；￥ＦＤに区分し−（、それぞれの１遇１生率
を求めることが−（８、したかつ−Ｃ試ギ１１にヌ・１
ザる清報を豊富化することかできる。この場合の各陽性
／陰Ｉ生判定境界線ＦＯ１、ＦＯ２も前記と同作にして
設定することができる。この発明の分析方法および装置におい−Ｃは、上述のよ
うな判別領１？ｙ、股定過程と陽性率判定遊理とを含め
、分析の開始すむわら試料の吸引から最終的に陽性率を
判定してそのデータを出力するまでの間の全ての操作か
自動化されている。Ｖなわち、第１図に示１判別処理手
段１２は通常はコンピュータ（こよって構成されるが、
このコンピュータはシステム金１小の制御手段を兼ねる
ことが−Ｃき、そのυＪ’ｊＤ手段によって全自動化が
達成できる。例えばその制御手段から先すオートサンプ
ラ１０の作動を開始ざゼる作動開始信号を発生させ、こ
の信号によりオートサンプラ１０の試料吸引装置１９の
吸引ノズル１９Ａか所定の吸引位置の試料容器１Ｇ内に
挿入されてその試料容器１Ｇ内の試料が吸引され、この
試料はフローサイトメータ１１へ込恰され、既に第１３
図について説明したように試料か暖流化されてその試料
中の血液細胞が１個１つ分極８れた状態でノズル部２を
通過し、ここで各散乱光強度および蛍光強度が測定され
、各血：碌細胞についてのそれらの測定データが記憶手
段１．３に入力されてリストモードで自動的に記・直さ
れる。そし−Ｃフローサイトメータ１１から得られた測
定終了信号によって判別処理手段１２が作動を開始し、
既に述べたようにして各面１ｉＮ　ｆｌＢ胞についての
２種の散乱光強度を読出してそれによるサイトグラムを
作成するとともに、そのサイトグラムの一部にウィンド
ウ〈判別領域）を設定［・、そのウィンドウが設定され
ればその苫艮定辛冬了１言号（こよつ゛Ｃウィンドウ内
の血液細胞の蛍光強度力弓先出され、既に述べた陽性７
・′陰性判定過程により陽四率が判定される。そしてそ
の試料についての陽性率か出力されれば、その信号に伴
なって例えば前記オートサンプラ１０の試料容器支持・
移動装置１５における駆動手段（図示せす）を作動８ぜ
て容器支持枠１７をルテ定距ｈ「移動σせ、次の試料容
器か吸引位置に至ったことを感知すれば、再び前記作動
開始信号か発せられて、その試料容器内の試料について
の測定か開始される。なあここて容器支持枠１７の移動
は、前の試料についての吸引が終了した直後に行なつ−
（おいても良い。なお、既に述べたように２種の散乱光強度によるサイト
グラム上において判別領域（ウィンドウ）設定するにあ
たって、予め記゛匣８れているウィンドウパターンの全
てが不適当とされた場合、おるいは仮のウィンドウＷｐ
の判定に際してデータが異常と判断された場合、ざらに
は陽性率判定過程においてデータか異常と判断された場
合には、その時点で処理を停止してその試料についての
データを保存し、次の試料の７１ｉｊｌ定を開始される
。このようにし−Ｃ保存されたデータについ一部は熟練
者による目視による判定等に委ねれば良い。な、６また、＠迩の説明ではめる試料についての剣足過
程か金て終了してから（すなわち陽性率判定過程か終了
してから）次の試料についての測定を開始（丁なわち試
料供給過程を開始）するものとしたか、場合によっては
ある試料についてのフローサイトメータでの測定か終了
して全てのデータを記憶手段に記・巳させた後、ただち
に次の試料についての測定を開始（すなわち試料供給過
程を開始）しても良い。この場合は前の試料についての
データ処理（サイトグラム作成から陽性率判定まで）の
過程と次の試料についての測定とが併行して行なわれる
ことのなる。発明の効果この発明の方法によれば、試料のフローサイトメータへ
の供給から特定の種類の細胞の陽性率の判定までを全て
自動的に行なうことかでき、将に′ｌ）定の種類の細胞
を選別するために２種の散乱光強度によるサイトグラム
上において判別領域（ウィンドウ）を設定するにあたっ
て操作員の監視−手動入力を行なうことなく、自動的に
最適なウィンドウを設定し−（−１判定］肯度の向上を
図ることかできる等種々の効果が得られる。またこの発
明の装置によれば上述のような方法を冥際的に芙廁する
ことか−Ｃきる。

【図面の簡単な説明】

第１図はこの発明の血液細胞自動分析装置の全体、構成
を示すブロック図、第２図はこの発明の装置に使用され
るオートサンプラリ−例を示す略解的な平面図、第３図
はサイトグラム上におけるリンパ球群についてのウィン
ドウパターンの１９１１を示す模式図、第４図（Ａ＞、
（Ｂ）は判別領域（ウィンドウ）設定手法の一例を説明
づるための模式図、第５図はウィンドウ設定手法の他の
例を説明フ“るための、模式図、第６図はウィンドウ設
定手法のさらに他の１列を説明するための１１式図、第
７図はリンパ球についての蛍光強度の頻度分布の一例を
承り分ｑ５図、第８図から第１１図まではそれぞれ蛍光
強度の頻度弁ｉｈにおける陽円、陰性判定境界〒♀股Ｔ
手法の一例を説明するための模式図、第１２図（よ２種
の蛍光強度を測定した場合の蛍光強度分布の一例を示１
分布図、第１３図はフローサイトメータの一例を示す略
解図、第１４図はヒトのｆｆＤ液ＩＦＩ胞の９０’散乱
光強度および前方散乱光強度によるサイトグラムの一例
を示す図、第１５図はリンパ球の蛍光強度分布の一例を
示す図で市る。 ′ＩＱ・・・オートサンプラ、　　１１・・・フローサ
イトメータ、　１２・・・　判別鷺理手段、　１３・・
・記′１急手段、　１４・・・ディスプレー装置、　Ｗ
ｐ・・・仮の領域パターン（ウィンドウパターン）、　
Ｗ・・・判別領域（ウィンドウ）、　Ｆｌ）・・・仮の
陽性／陰性判定境界線、　ＦＯ・・・陽性／陰性判定境
界線。第１図第２図 ↑ 第３図（Ａ）　　　　第４Ｅ　　　（Ｂ）第７図９・Ｒ属ｉ粱がべ　　７

Claims

【特許請求の範囲】

（１）複数の種類の多数の血液細胞を含む試料を吸引し
てこれをフローサイトメータへ送給する試料供給過程と
、前記試料中の各血液細胞について少なくとも２種の散乱
光強度と蛍光強度とをフローサイトメータにより順次測
定する測定過程と、前記測定過程により測定された各測定値を各血液細胞に
ついて順次記憶する測定値記憶過程と、前記測定過程お
よび測定値記憶過程終了後、各測定値のうち、２種の散
乱光強度測定値情報を各血液細胞について読出して、そ
の２種の散乱光強度測定値の相関によるサイトグラムを
作成する過程と、前記サイトグラム内の一部に所要の判別領域を設定する
判別領域設定過程と、前記２種の散乱光強度測定値が前記判別領域内にある多
数の血液細胞について、各血液細胞の蛍光強度測定値を
読出して、それらの血液細胞の陽性率を判定する陽性率
判定過程とを有し、前記判別領域設定過程においては、予め記憶されている
複数種類の領域パターンに基いて、陽性率を判定すべき
特定種類の血液細胞群に適合する判別領域を定めるよう
になし、かつ前記試料供給過程から陽性率判定過程まで
を自動的に行ない、しかも前記測定値記憶過程終了後か
ら陽性率判定過程終了後までのいずれかの段階で次の試
料についての試料供給過程を自動的に開始させるように
したことを特徴とする血液細胞自動分析方法。
（２）前記判別領域設定過程において、予め記憶されて
いる異なる複数の領域パターンのうちある領域パターン
を仮の判別領域とし、前記サイトグラム上における仮の
判別領域内の各位置での血液細胞の出現頻度のうちの最
大値を求め、その最大値に対し予め定めた０．１より小
さい係数を乗じた値を境界値とし、前記仮の判別領域の
境界線上での頻度が前記境界値以下もしくは境界値未満
である場合に前記仮の判別領域を真の判別領域と判定し
て、その判別領域により次の陽性率判定過程を実施する
特許請求の範囲第１項記載の血液細胞自動分析方法。
（３）前記判別領域設定過程において、予め記憶されて
いる複数の領域パターンのうちある領域パターンを仮の
判別領域とし、前記サイトグラム上における仮の判別領
域内の各位置での血液細胞の出現頻度のうちの最大値を
求め、その最大値に対し予め定めた係数を乗じた値を境
界値とし、前記仮の判別領域の境界線上での頻度が前記
境界値以下もしくは境界値未満であるか否かを判定し、
境界値以下もしくは境界値未満である場合には、さらに
その仮の判別領域内の血液細胞数を求めて、その血液細
胞数が予め設定した範囲内である場合に仮の判別領域を
真の判別領域と判定して、その判別領域により次の陽性
率判定過程を実施する特許請求の範囲第１項記載の血液
細胞自動分析方法。
（４）前記判別領域設定過程において、予め記憶されて
いる複数の領域パターンのうちある領域パターンを仮の
判別領域とし、前記サイトグラム上における仮の判別領
域内の各位置での血液細胞の出現頻度のうちの最大値を
求め、その最大値に対し予め定めた係数を乗じた値を境
界値とし、前記仮の判別領域の境界線上での頻度が前記
境界値以下もしくは境界値未満である場合に、さらにそ
の仮の判別領域内の血液細胞数を求め、一方前記サイト
グラム上に、前記仮の判別領域を含みかつそれより大き
い比較領域を設定して、その比較領域内の血液細胞数を
求め、前記仮の判別領域内の血液細胞の数と比較領域内
の血液細胞の数との比が予め定めた範囲内である場合に
仮の判別領域を真の判別領域として、その判別領域によ
り次の陽性率判定過程を実施することを特徴とする特許
請求の範囲第１項記載の血液細胞自動分析方法。
（５）前記仮の判別領域が真の判別領域と判定されなか
った場合に、予め記憶されている複数の領域パターンの
うち他の領域パターンを新たな仮の判別領域として、真
の判別領域と判定されるか否かの操作を繰返す特許請求
の範囲第２項、第３項、もしくは第４項記載の血液細胞
自動分析方法。
（６）前記判別領域設定過程において、予め記憶されて
いる複数の領域パターンのうちある領域パターンを仮の
判別領域とし、前記サイトグラム上における仮の判別領
域内の各位置での血液細胞の出現頻度のうちの最大値を
求めその最大値に対し０．１以下の予め定めた係数を乗
じてその値を境界値とし、サイトグラム上における各位
置での血液細胞の出現頻度の前記境界値に相当する等高
線を境界線として真の判別領域を定め、その判別領域に
より次の陽性率判定を実施する特許請求の範囲第１項記
載の血液細胞自動分析方法。
（７）前記判別領域設定過程において、予め記憶されて
いる複数の領域パターンのうちある領域パターンを仮の
判別領域とし、前記サイトグラム上における仮の判別領
域内の各位置での血液細胞の出現頻度のうちの最大値を
求めその最大値に対し０．１以下の予め定めた係数を乗
じてその値を境界値とし、サイトグラム上における各位
置での血液細胞の出現頻度の前記境界値に相当する等高
線を求めてその等高線内の血液細胞数を求め、その血液
細胞数が予め設定した範囲内である場合に前記等高線を
境界線として真の判別領域を定め、その判別領域により
次の陽性率判定過程を実施する特許請求の範囲第１項記
載の血液細胞自動分析方法。
（８）前記判別領域設定過程において、予め記憶されて
いる複数の領域パターンのうちある領域パターンを仮の
判別領域とし、前記サイトグラム上における仮の判別領
域内の各位置での血液細胞の出現頻度のうちの最大値を
求めその最大値に対し０．１以下の予め定めた係数を乗
じてその値を境界値とし、サイトグラム上における各位
置での血液細胞の出現頻度の前記境界値に相当する等高
線を求めてその等高線内の血液細胞数を求め、一方前記
サイトグラム上に、前記等高線により囲まれる領域を含
みかつそれより大きい比較領域を設定して、その比較領
域内の血液細胞数を求め、前記等高線内の血液細胞の数
と比較領域内の血液細胞の数との比が予め定めた範囲内
である場合に前記等高線を境界線として真の判別領域を
定め、その判別領域により次の陽性率判定過程を実施す
ることを特徴とする特許請求の範囲第１項記載の血液細
胞自動分析方法。
（９）前記仮の判別領域が真の判別領域と判定されなか
った場合に、試料中の血液細胞についての測定値データ
を保存して、次の別の試料についての分析に移行する特
許請求の範囲第２項、第３項、第４項、第６項、第７項
、もしくは第８項記載の血液細胞自動分析方法。
（１０）前記陽性率判定過程において、前記判別領域内
にある血液細胞の蛍光強度の頻度分布に対し、予め定め
た蛍光強度を陽性／陰性判定境界線として、その境界線
の蛍光強度以上もしくはそれを越える蛍光強度を有する
血液細胞を陽性、境界線の蛍光強度未満もしくはそれ以
下の蛍光強度を有する血液細胞を陰性とし、陽性の血液
細胞の数と陰性の血液細胞の数とを求め、陽性血液細胞
の数を両者の和で除した値を陽性率として出力する特許
請求の範囲第１項記載の血液細胞自動分析方法。
（１１）前記陽性／陰性判定境界線を定めるにあたり、
予め実質的に陰性の血液細胞のみを含む参照試料につい
て蛍光強度分布を調べておき、その蛍光強度分布におけ
る頻度ピーク位置よりも蛍光強度か高い位置てあってし
かも頻度ピーク値に０．０５以下の予め定めた係数を乗
じた頻度の位置の蛍光強度を陽性／陰性判定境界線とす
る特許請求範囲第１０項記載の血液細胞自動分析方法。
（１２）前記陽性／陰性判定境界線を定めるにあたり、
予め実質的に陰性の血液細胞のみを含む参照試料につい
て蛍光強度分布を調べておき、その蛍光強度分布におけ
る頻度ピーク位置よりも蛍光強度が高い位置であってし
かもその頻度ピーク碩に０．０５以下の所定の係数を乗
じた頻度の位置の蛍光強度を仮の陽性／陰性判定境界線
とするか、または経験則によって仮の陽性／陰性判定境
界線を定めておき、前記仮の陽性／陰性判定境界線の近
傍であってしかも実際の測定対象となる試料の血液細胞
についての蛍光強度分布の最小値の位置を真の陽性／陰
性判定境界線と定める特許請求の範囲第１０項記載の血
液細胞自動分析方法。
（１３）前記陽性／陰性判定境界線を定めるにあたり、
予め実質的に陰性の血液細胞のみを含む参照試料につい
て蛍光強度分布を調べておき、その蛍光強度分布におけ
る頻度ピーク位置よりも蛍光強度か高い位置であってし
かもその頻度ピーク値に０．０５以下の所定の係数を乗
じた頻度の位置の蛍光強度を仮の陽性／陰性判定境界線
とするか、または経験則によって仮の陽性／陰性判定境
界線を定めておき、前記仮の陽性／陰性判定境界線の近
傍であってしかも実際の測定対象となる試料の血液細胞
についての蛍光強度分布における陰性ピーク値に０．０
５以下の所定の係数を乗じた頻度の位置の蛍光強度を真
の陽性／陰性判定境界線と定める特許請求の範囲第１０
項記載の血液細胞自動分析方法。
（１４）前記陽性／陰性判定境界線を定めるにあたり、
予め実質的に陰性の血液細胞のみを含む参照試料につい
て蛍光強度分布を調べておき、その蛍光強度分布におけ
る頻度ピーク位置よりも蛍光強度が高い位置であってし
かもその頻度ピーク値に０．０５以下の所定の係数を乗
じた頻度の位置の蛍光強度を仮の陽性／陰性判定境界線
とするか、または経験則によって仮の陽性／陰性判定境
界線を定めておき、前記仮の陽性／陰性判定境界線の近
傍であってしかも実際の測定対象となる試料の血液細胞
についての蛍光強度分布において陰性ピーク側から見て
血液細胞の頻度が予め定めた零に近い数以下に減少した
位置の蛍光強度を真の陽性／陰性判定境界線と定める特
許請求の範囲第１０項記載の血液細胞自動分析方法。
（１５）試料中に含まれる各血液細胞について少なくと
も２種の散乱光強度と蛍光強度とを順次測定するフロー
サイトメータと、多数の異なる試料を順次吸引してこれを前記フローサイ
トメータへ送給するオートサンプラと、前記フローサイ
トメータにより測定された各測定値を各血液細胞につい
てリストモードで記憶する記憶手段と、前記各測定値のうち２種の散乱光強度測定値を前記記憶
手段から同一試料中の各血液細胞について読出して、そ
の試料について前記２種の散乱光強度測定値によるサイ
トグラムを作成するとともに、そのサイトグラム内の一
部に所要の判別領域を設定し、さらにその判別領域内に
ある多数の血液細胞の蛍光強度測定値を前記記憶手段か
ら読出してそれらの多数の血液細胞の陽性率を算出する
判別処理手段とを有してなることを特徴とする血液細胞
自動分析装置。