JPS62132173A - 免疫学的物質の定量法 - Google Patents
免疫学的物質の定量法Info
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- JPS62132173A JPS62132173A JP27157585A JP27157585A JPS62132173A JP S62132173 A JPS62132173 A JP S62132173A JP 27157585 A JP27157585 A JP 27157585A JP 27157585 A JP27157585 A JP 27157585A JP S62132173 A JPS62132173 A JP S62132173A
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- immunological
- immunological substance
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
産業上の利用分野
本発明は、免疫学的物質すなわち抗原または抗体を、化
学発光法により定量する方法に関するものである。
学発光法により定量する方法に関するものである。
従来の技術
従来、抗原または杭木の定量法としてはオフタロニー法
、−元放射状免疫拡散法、赤血球凝集反応法、ラジオイ
ムノアッセイ法、酵素免疫測定法などが知られているが
、これらの中では酵素免疫測定法が種々の点で有利なた
め、近年もっとも広〈実施されている。酵素免疫測定法
は、酵素活性をマーカーとして抗原抗体反応の程度を知
り、これから抗原または抗体の量を知る方法である。し
かしながら、この方法は、最終的には酵素活性を測定す
ることになるため、吸光法による酵素活性測定を行う場
合においては感度が低く、また蛍光法による酵素活性測
定を行う場合においては、吸光法よりも高感度の測定が
可能であるものの、蛍光測定に必要な蛍光光度計が吸光
法に用いる分光光度計に比べると高価であり、また光散
乱によって測定が妨害され易く、更には測定値が相対値
であって励起光強度により影響されるなどの問題があっ
た。
、−元放射状免疫拡散法、赤血球凝集反応法、ラジオイ
ムノアッセイ法、酵素免疫測定法などが知られているが
、これらの中では酵素免疫測定法が種々の点で有利なた
め、近年もっとも広〈実施されている。酵素免疫測定法
は、酵素活性をマーカーとして抗原抗体反応の程度を知
り、これから抗原または抗体の量を知る方法である。し
かしながら、この方法は、最終的には酵素活性を測定す
ることになるため、吸光法による酵素活性測定を行う場
合においては感度が低く、また蛍光法による酵素活性測
定を行う場合においては、吸光法よりも高感度の測定が
可能であるものの、蛍光測定に必要な蛍光光度計が吸光
法に用いる分光光度計に比べると高価であり、また光散
乱によって測定が妨害され易く、更には測定値が相対値
であって励起光強度により影響されるなどの問題があっ
た。
発明か解決しようとする問題点
本発明は、従来の免疫学的物質定量法における上述のよ
うな問題点を解決し、蛍光光度計を必要としない高感度
の免疫学的物質定量法を提供しようとするものである。
うな問題点を解決し、蛍光光度計を必要としない高感度
の免疫学的物質定量法を提供しようとするものである。
問題点を解決するための手段
本発明は、上記課題を解決する手段として、次の二つの
方法を提供するものである。
方法を提供するものである。
Ａ法：定１しようとする免疫学的物質Ｘを含有する検体
に、該検体が含有する免疫学的物質Ｘに対応する免疫学
的物質Ｙと蛍光物質Ｆとの結合物である蛍光物質標識免
疫学的物質Ｙ−Ｆの過剰量を作用させ、抗原抗体反応に
より生成した新たな蛍光性物質Ｘ−Ｙ−Ｆと残存する蛍
光物質標識免疫学的物質Ｙ−Ｆとを分離し、それらのい
ずれかにシュウ酸ジエステルおよび過酸化水素を加えて
発光させ、発光強度を測定して測定結果より検体中の免
疫学的物質Ｘの量を求める方法。
に、該検体が含有する免疫学的物質Ｘに対応する免疫学
的物質Ｙと蛍光物質Ｆとの結合物である蛍光物質標識免
疫学的物質Ｙ−Ｆの過剰量を作用させ、抗原抗体反応に
より生成した新たな蛍光性物質Ｘ−Ｙ−Ｆと残存する蛍
光物質標識免疫学的物質Ｙ−Ｆとを分離し、それらのい
ずれかにシュウ酸ジエステルおよび過酸化水素を加えて
発光させ、発光強度を測定して測定結果より検体中の免
疫学的物質Ｘの量を求める方法。
方法：抗原または抗体のいずれかである免疫学的物質Ｘ
を含有する検体を、該検体が含有する免疫学的物質Ｘと
同種の免疫学的物質Ｘ′に蛍光物質Ｆを結合させた蛍光
物質標識免疫学的物質Ｘ′−Ｆとともに免疫学的物質Ｘ
に対応する免疫学的物質Ｙに作用させ、残存する上記蛍
光物質標識免疫学的物質Ｘ′−Ｆを除去した後、検体中
の免疫学的物質Ｘと競合する抗原抗体反応により蛍光物
質標識免疫学的物質Ｘ′−Ｆから生成した新たな蛍光性
物質Ｙ−Ｘ′−Ｆにシュウ酸ジエステルおよび過酸化水
素を加えて発光させ、発光強度を測定して測定結果より
検体中の免疫学的物質Ｘの量を求める方法。
を含有する検体を、該検体が含有する免疫学的物質Ｘと
同種の免疫学的物質Ｘ′に蛍光物質Ｆを結合させた蛍光
物質標識免疫学的物質Ｘ′−Ｆとともに免疫学的物質Ｘ
に対応する免疫学的物質Ｙに作用させ、残存する上記蛍
光物質標識免疫学的物質Ｘ′−Ｆを除去した後、検体中
の免疫学的物質Ｘと競合する抗原抗体反応により蛍光物
質標識免疫学的物質Ｘ′−Ｆから生成した新たな蛍光性
物質Ｙ−Ｘ′−Ｆにシュウ酸ジエステルおよび過酸化水
素を加えて発光させ、発光強度を測定して測定結果より
検体中の免疫学的物質Ｘの量を求める方法。
すなわち、本発明では酵素免疫測定法における酵素に相
当するものとして蛍光物質を使用しており、更に、これ
を光により励起することなくシュウ酸ジエステルと過酸
化水素との化学反応を利用して発光させる。この反応は
、シュウ酸ジエステルと過酸化水素とを反応させて前者
のシュウ酸部分からジオキシセタンジオンを経由して炭
酸〃スを生成させ、その過程におけるジオキシセタンジ
オンからのエネルギー転移により蛍光物質を励起し発光
させるものであって、これにより、従来の酵素免疫測定
法における酵素活性測定にともなう前述の問題点が回避
され、かつ高感度の定量が可能になる。
当するものとして蛍光物質を使用しており、更に、これ
を光により励起することなくシュウ酸ジエステルと過酸
化水素との化学反応を利用して発光させる。この反応は
、シュウ酸ジエステルと過酸化水素とを反応させて前者
のシュウ酸部分からジオキシセタンジオンを経由して炭
酸〃スを生成させ、その過程におけるジオキシセタンジ
オンからのエネルギー転移により蛍光物質を励起し発光
させるものであって、これにより、従来の酵素免疫測定
法における酵素活性測定にともなう前述の問題点が回避
され、かつ高感度の定量が可能になる。
本発明の定量法において必要な蛍光物質標識免疫学的物
質は、免疫学的物質に対して、その免疫学的物質と反応
性を有する蛍光物質たとえばフルオレセインイソチオシ
アネートを反応させるか、あるいは免疫学的物質と蛍光
物質とを、架橋剤たとえばカルボンシイミド類、Ｎ−エ
チルマレイミドなどを用いて反応させることにより製造
することができる。
質は、免疫学的物質に対して、その免疫学的物質と反応
性を有する蛍光物質たとえばフルオレセインイソチオシ
アネートを反応させるか、あるいは免疫学的物質と蛍光
物質とを、架橋剤たとえばカルボンシイミド類、Ｎ−エ
チルマレイミドなどを用いて反応させることにより製造
することができる。
上記Ａ法による場合、定量対象となる検体中の免疫学的
物質Ｘに対応する免疫学的物質Ｙ（すなわち、定量対象
が抗原の場合はその抗体）から調製された蛍光物質標識
免疫学的物質Ｙ−Ｆを免疫学的物質Ｘに作用させるとき
は、反応生成物の分離を容易にするため、いわゆるサン
ドインチ法による酵素免疫測定法にならって、定量しよ
うとする免疫学的物質Ｘを結合し得る別の免疫学的物質
Ｙをポリスチレンチューブ、マイクロタイタープレート
等の支持体に感作結合させて固相化したものに検体を接
触させ、定量対象Ｘを上記免疫学的物質Ｙに結合させて
おくことが望ましい。結合処理後の上澄を除いてから蛍
光物質標識免疫学的物質Ｙ−Ｆを作用させると、支持体
上の免疫学的物質Ｘとの抗原抗体反応により、新たな蛍
光性物質Ｘ−Ｙ−Ｆが支持体上に形成される。支持体と
液相を分離すれば、結合しなかった過剰の蛍光物質標識
免疫学的物質Ｙ−Ｆと上記あらたな蛍光性物質Ｘ−Ｙ−
Ｆとが分離されるので、それらのいずれかについて、標
識として結合している蛍光物質Ｆの定量を行う。
物質Ｘに対応する免疫学的物質Ｙ（すなわち、定量対象
が抗原の場合はその抗体）から調製された蛍光物質標識
免疫学的物質Ｙ−Ｆを免疫学的物質Ｘに作用させるとき
は、反応生成物の分離を容易にするため、いわゆるサン
ドインチ法による酵素免疫測定法にならって、定量しよ
うとする免疫学的物質Ｘを結合し得る別の免疫学的物質
Ｙをポリスチレンチューブ、マイクロタイタープレート
等の支持体に感作結合させて固相化したものに検体を接
触させ、定量対象Ｘを上記免疫学的物質Ｙに結合させて
おくことが望ましい。結合処理後の上澄を除いてから蛍
光物質標識免疫学的物質Ｙ−Ｆを作用させると、支持体
上の免疫学的物質Ｘとの抗原抗体反応により、新たな蛍
光性物質Ｘ−Ｙ−Ｆが支持体上に形成される。支持体と
液相を分離すれば、結合しなかった過剰の蛍光物質標識
免疫学的物質Ｙ−Ｆと上記あらたな蛍光性物質Ｘ−Ｙ−
Ｆとが分離されるので、それらのいずれかについて、標
識として結合している蛍光物質Ｆの定量を行う。
結合状態の蛍光物質Ｆを発光させるために加えるシュウ
酸ジエステルおよび過酸化水素は、あらかじめ親水性の
比較的高い有機溶媒（たとえばアセトニトリル、アセト
ン、酢酸エチルなど）に溶解しておく。ここで用いるシ
ェフ酸ジエステルとしては、ビス（２，４，６−）リク
ロロフェニル）オキザレート、ビス（２，４−ジニトロ
フェニル）オキザレートなどの、フェニルエステル特に
ハロゲン置換フェニルエステル、ニトロ基置換フェニル
エステルなどが好ましい。これら化学発光のための試薬
を加えて蛍光物質を発光させる反応は、通常、約２０〜
４０°Ｃ，Ｉ］Ｈ８〜１２で行わせる。反応系における
好適試薬濃度は、シュウ酸ジエステル０．１〜５０ｍＭ
、過酸化水素０．１〜５０ｍＭである。
酸ジエステルおよび過酸化水素は、あらかじめ親水性の
比較的高い有機溶媒（たとえばアセトニトリル、アセト
ン、酢酸エチルなど）に溶解しておく。ここで用いるシ
ェフ酸ジエステルとしては、ビス（２，４，６−）リク
ロロフェニル）オキザレート、ビス（２，４−ジニトロ
フェニル）オキザレートなどの、フェニルエステル特に
ハロゲン置換フェニルエステル、ニトロ基置換フェニル
エステルなどが好ましい。これら化学発光のための試薬
を加えて蛍光物質を発光させる反応は、通常、約２０〜
４０°Ｃ，Ｉ］Ｈ８〜１２で行わせる。反応系における
好適試薬濃度は、シュウ酸ジエステル０．１〜５０ｍＭ
、過酸化水素０．１〜５０ｍＭである。
次いで、反応による発光のピーク強度値を測定する。測
定用装置としては、ラボサイエンス社のルミ７オトメー
ターＴＤ４０００．バーソールド社のビオルマットＬＢ
９５００、アロカ社のルミネッセンスリーグＢＬＲ−１
０２、パラカード社のピコライトルミノメータ−等を用
いることができる。
定用装置としては、ラボサイエンス社のルミ７オトメー
ターＴＤ４０００．バーソールド社のビオルマットＬＢ
９５００、アロカ社のルミネッセンスリーグＢＬＲ−１
０２、パラカード社のピコライトルミノメータ−等を用
いることができる。
ピーク発光強度は発光強度測定に供した試料中の蛍光物
質の量に比例し、したがって、上記あらたに形成された
蛍光性物質Ｘ−Ｙ−Ｆについて測定を行なった場合は検
体中の免疫学的物質Ｘの量に比例するから、あらかじめ
免疫学的物質Ｘの標準溶液と発光強度との関係について
検量線を作っておけば、発光強度の測定値から検体中の
免疫学的物質Ｘの量を求めることができる。なお、支持
体上の免疫学的物質Ｘと結合しなかった蛍光物質標識免
疫学的物質Ｙ−Ｆについて測定を行なった場合は、空試
験の結果との差から同様にして定量対象Ｘの量を知るこ
とができる。
質の量に比例し、したがって、上記あらたに形成された
蛍光性物質Ｘ−Ｙ−Ｆについて測定を行なった場合は検
体中の免疫学的物質Ｘの量に比例するから、あらかじめ
免疫学的物質Ｘの標準溶液と発光強度との関係について
検量線を作っておけば、発光強度の測定値から検体中の
免疫学的物質Ｘの量を求めることができる。なお、支持
体上の免疫学的物質Ｘと結合しなかった蛍光物質標識免
疫学的物質Ｙ−Ｆについて測定を行なった場合は、空試
験の結果との差から同様にして定量対象Ｘの量を知るこ
とができる。
またＢ法の場合は、検体が含有する免疫学的物質Ｘと同
種の免疫学的物質（すなわち、定量対象Ｘが抗原の場合
はそれと同種の抗原）Ｘ′に蛍光物質Ｆを結合させた蛍
光物質標識免疫学的物質Ｘ′−Ｆとともに検体を、免疫
学的物質Ｘに対応する免疫学的物質Ｙ（すなわち、定量
対象が抗原の場合はその抗体）に作用させると、免疫学
的物質Ｙに対して免疫学的物質又と蛍光物質標識免疫学
的物質Ｘ′−Ｆとが競合して反応する。この方法の場合
は、いわゆる競合法のなかでも第−抗水固相法による酵
素免疫測定法にならって、上記免疫学的物質Ｙを適当な
支持体に固定しておくことが以後の繰作を容易にするた
めに望ましいが、２抗体法にならって、支持体を用いな
い方法も可能である。免疫学的物質Ｙに検体と蛍光物質
標識免疫学的物質Ｘ′−Ｆをイヤ用させた後、結合しな
がつた蛍光物質標識免疫学的物質Ｘ′−Ｆを除去してか
呟生成した新たな蛍光性物質Ｙ−Ｘ”Ｆに、前記Ａ法の
場合と同様にしてシュウ酸ジエステルおよび過酸化水素
を作用させて発光させ、発光強度を測定する。この測定
結果を、あらかじめ免疫学的物質Ｘの標準溶液について
同様の処理と測定を行なって作成しておいた検量線と照
合すれば、検体中の免疫学的物質Ｘの量を求めることが
できる。
種の免疫学的物質（すなわち、定量対象Ｘが抗原の場合
はそれと同種の抗原）Ｘ′に蛍光物質Ｆを結合させた蛍
光物質標識免疫学的物質Ｘ′−Ｆとともに検体を、免疫
学的物質Ｘに対応する免疫学的物質Ｙ（すなわち、定量
対象が抗原の場合はその抗体）に作用させると、免疫学
的物質Ｙに対して免疫学的物質又と蛍光物質標識免疫学
的物質Ｘ′−Ｆとが競合して反応する。この方法の場合
は、いわゆる競合法のなかでも第−抗水固相法による酵
素免疫測定法にならって、上記免疫学的物質Ｙを適当な
支持体に固定しておくことが以後の繰作を容易にするた
めに望ましいが、２抗体法にならって、支持体を用いな
い方法も可能である。免疫学的物質Ｙに検体と蛍光物質
標識免疫学的物質Ｘ′−Ｆをイヤ用させた後、結合しな
がつた蛍光物質標識免疫学的物質Ｘ′−Ｆを除去してか
呟生成した新たな蛍光性物質Ｙ−Ｘ”Ｆに、前記Ａ法の
場合と同様にしてシュウ酸ジエステルおよび過酸化水素
を作用させて発光させ、発光強度を測定する。この測定
結果を、あらかじめ免疫学的物質Ｘの標準溶液について
同様の処理と測定を行なって作成しておいた検量線と照
合すれば、検体中の免疫学的物質Ｘの量を求めることが
できる。
本発明による定量法は、ヒト血清中のホルモン類たとえ
ばインスワン、発癌マーカーたとえばα−７エトプロテ
イン、薬剤たとえばジゴキシン、その池１ｇＥ抗体など
、あるいはヒト尿中のホルモン類や発癌マーカー（ポリ
アミン等）など、各種生体試料中の多くの抗原または抗
体の定量法としてきわめてすぐれたものである。
ばインスワン、発癌マーカーたとえばα−７エトプロテ
イン、薬剤たとえばジゴキシン、その池１ｇＥ抗体など
、あるいはヒト尿中のホルモン類や発癌マーカー（ポリ
アミン等）など、各種生体試料中の多くの抗原または抗
体の定量法としてきわめてすぐれたものである。
発明の効果
上述のように、本発明は従来の酵素免疫測定法の場合と
同様に抗原抗体反応を利用するものではあるが酵素にか
えて蛍光物質を標識化合物として用い、かつ蛍光物質を
蛍光光度計による定量に付することなく化学発光法によ
り発光させるものであって、この発光が、通常の蛍光法
における蛍光よりもはるかに安定しており且つ強力であ
るから、従来の吸光法による酵素免疫測定法よりも１〜
２オ一ダー高感度の定量が可能である。本発明の方法の
特に有利な点は、蛍光物質の発光を利用するものではあ
っても高価な蛍光光度計を必要とせず、安価な発光測定
装置を用いて発光強度を測定することができることであ
る。
同様に抗原抗体反応を利用するものではあるが酵素にか
えて蛍光物質を標識化合物として用い、かつ蛍光物質を
蛍光光度計による定量に付することなく化学発光法によ
り発光させるものであって、この発光が、通常の蛍光法
における蛍光よりもはるかに安定しており且つ強力であ
るから、従来の吸光法による酵素免疫測定法よりも１〜
２オ一ダー高感度の定量が可能である。本発明の方法の
特に有利な点は、蛍光物質の発光を利用するものではあ
っても高価な蛍光光度計を必要とせず、安価な発光測定
装置を用いて発光強度を測定することができることであ
る。
犬１あ
以下実施例を示して本発明を説明する。
実施例 １ ：Ａ法によるα−７二トプロテインの定量
０、ＩＭ−ＮａＨＣＯ３に溶解した抗α−７二トプロテ
イン抗体０．２ｍｌをポリスチレンチューブ（Ｓｍｌ容
量）に添加して感作結合させ、４℃で一夜放置後、生理
食塩水で洗浄し、更に牛血清アルブミン（ＢＳＡ、
１ｍｇ／ｍｌ） ０．５１１１１を加えて４℃で一夜放
置してから生理食塩水で洗浄して、抗α−７工トプロテ
イン抗体結合ポリスチレンチューブを得た。
０、ＩＭ−ＮａＨＣＯ３に溶解した抗α−７二トプロテ
イン抗体０．２ｍｌをポリスチレンチューブ（Ｓｍｌ容
量）に添加して感作結合させ、４℃で一夜放置後、生理
食塩水で洗浄し、更に牛血清アルブミン（ＢＳＡ、
１ｍｇ／ｍｌ） ０．５１１１１を加えて４℃で一夜放
置してから生理食塩水で洗浄して、抗α−７工トプロテ
イン抗体結合ポリスチレンチューブを得た。
別に、抗α−７エトプロテイン２０ＢにペプシンＩＢを
加えて３７°Ｃで一夜分解したのち分解液をセフ７デツ
クスＧ−１５０を用いてゲルろ過することにより、抗α
−アニドプロティン抗体のＦ （ａｂ’ ）２７ラグメ
ントを得、これに０．ＩＭの２−メルカプトエチルアミ
ン０．２１を加えて３７℃で９０分間反応させ、さらに
セファデックスＧ−２５でゲルろ過して、抗α−フェト
プロティン抗体のＦ ａｂ’フラグメントを得た。次い
でこれにフルオレセインインチオシアネートｌｌ１１８
を加えて３７℃で３時間撹拌し、その後セフアゾ７クス
Ｇ−２００でデルろ過することにより遊離のフルオレセ
インインチオシ７ネートを除去して、フルオレセイン標
識Ｆａｂ’７ラグメントを得た。
加えて３７°Ｃで一夜分解したのち分解液をセフ７デツ
クスＧ−１５０を用いてゲルろ過することにより、抗α
−アニドプロティン抗体のＦ （ａｂ’ ）２７ラグメ
ントを得、これに０．ＩＭの２−メルカプトエチルアミ
ン０．２１を加えて３７℃で９０分間反応させ、さらに
セファデックスＧ−２５でゲルろ過して、抗α−フェト
プロティン抗体のＦ ａｂ’フラグメントを得た。次い
でこれにフルオレセインインチオシアネートｌｌ１１８
を加えて３７℃で３時間撹拌し、その後セフアゾ７クス
Ｇ−２００でデルろ過することにより遊離のフルオレセ
インインチオシ７ネートを除去して、フルオレセイン標
識Ｆａｂ’７ラグメントを得た。
上記抗α−７工トプロテイン抗体結合ポリスチレンチュ
ーブにα−７エトプロテインの標準溶液ＳＯＵ＋を加え
、さらに１０ｍＭ’７ン酸塩緩衝液２００μｌを添加し
て３７℃で１時間反応させたのち生理食塩水で洗浄した
。次いでこれに上記フルオレセイン標識抗α−フェトプ
ロティン抗体溶液（０，５％牛血清フルブミン加リン酸
塩緩衝液で５００倍に希釈したもの）２５０ｕｌを添加
し、３７℃で１時間反応させたのち生理食塩水で洗浄し
た。
ーブにα−７エトプロテインの標準溶液ＳＯＵ＋を加え
、さらに１０ｍＭ’７ン酸塩緩衝液２００μｌを添加し
て３７℃で１時間反応させたのち生理食塩水で洗浄した
。次いでこれに上記フルオレセイン標識抗α−フェトプ
ロティン抗体溶液（０，５％牛血清フルブミン加リン酸
塩緩衝液で５００倍に希釈したもの）２５０ｕｌを添加
し、３７℃で１時間反応させたのち生理食塩水で洗浄し
た。
以上の処理後のポリスチレンチューブを発光測定装置の
暗室部に収め、０．５ｍｌの発光試薬（あらカルめ酢酸
エチルに溶解したトリクロロフェニルオキザレートと過
酸化水素をア七ト二トリルに溶解して０．５ａ＋Ｍ）リ
クロロオキザレートおよび２ｍＭ過酸化水素の溶液とし
、測定開始３０分前にアセトニトリルで５倍に希釈した
もの）を注射器で注入し、発光ピークをカウントさせた
。
暗室部に収め、０．５ｍｌの発光試薬（あらカルめ酢酸
エチルに溶解したトリクロロフェニルオキザレートと過
酸化水素をア七ト二トリルに溶解して０．５ａ＋Ｍ）リ
クロロオキザレートおよび２ｍＭ過酸化水素の溶液とし
、測定開始３０分前にアセトニトリルで５倍に希釈した
もの）を注射器で注入し、発光ピークをカウントさせた
。
種々の濃度のび一７二トプロテイン標準液について上記
測定を行なった結果、０．１ｎｇ／＋ｎｌ〜１００ｎｇ
／ｌｏｌの範囲で、精度よくα−７エトプロテインを定
量できることが確認された。
測定を行なった結果、０．１ｎｇ／＋ｎｌ〜１００ｎｇ
／ｌｏｌの範囲で、精度よくα−７エトプロテインを定
量できることが確認された。
実施例 ２ ：Ｂ法によるα−７二トプロテインの定量
０．１Ｍ−ＮａＨＣＯ，に溶解した抗α−７エトプロテ
イン抗１１０．２＋ｎｌをポリスチレンチューブに加え
、４°Ｃで一夜放置後、生理食塩水で洗浄し、更に牛血
清アルブミン（ＢＳＡ。
０．１Ｍ−ＮａＨＣＯ，に溶解した抗α−７エトプロテ
イン抗１１０．２＋ｎｌをポリスチレンチューブに加え
、４°Ｃで一夜放置後、生理食塩水で洗浄し、更に牛血
清アルブミン（ＢＳＡ。
１ｍｇ／ｍ１）０．５ｍｌを加えて４℃で一夜放置して
から生理食塩水で洗浄して、抗α−７工トプロテイン抗
体結合ポリスチレンチューブを得た。
から生理食塩水で洗浄して、抗α−７工トプロテイン抗
体結合ポリスチレンチューブを得た。
別に、α−フェトプロティンを１ｍＭのフルオレセイン
インチオシアネートと３７°Ｃで３時間攪拌し、その後
セファデックスＧ−２００でデルろ過することにより遊
離のフルオレセインイソチオシアネートを除去して、フ
ルオレセイン標識α−フェトプロティンを得た。
インチオシアネートと３７°Ｃで３時間攪拌し、その後
セファデックスＧ−２００でデルろ過することにより遊
離のフルオレセインイソチオシアネートを除去して、フ
ルオレセイン標識α−フェトプロティンを得た。
上記抗α−７工トプロテイン抗体結合ポリスチレンチュ
ーブにα−７エトプロテイン含有血清０．２ｍｌおよび
上記フルオレセイン標識抗α−７二トプロテイン溶液０
．２ｍｌを同時に添加し、３７°Ｃで１時間反応させた
のち生理食塩水で洗浄した。
ーブにα−７エトプロテイン含有血清０．２ｍｌおよび
上記フルオレセイン標識抗α−７二トプロテイン溶液０
．２ｍｌを同時に添加し、３７°Ｃで１時間反応させた
のち生理食塩水で洗浄した。
以上の処理後のポリスチレンチューブを発光測定装置の
暗室部に収め、実施例１の場合と同様に発光試薬を注入
して発光ピークをカウントさせた。測定結果を、あらか
じめα−７エトプロテインの標準溶液について同様の処
理と測定を行なって作成しておいた検量線と照合するこ
とにより、検体中のび一フェトプロティンの量を求める
ことができた。
暗室部に収め、実施例１の場合と同様に発光試薬を注入
して発光ピークをカウントさせた。測定結果を、あらか
じめα−７エトプロテインの標準溶液について同様の処
理と測定を行なって作成しておいた検量線と照合するこ
とにより、検体中のび一フェトプロティンの量を求める
ことができた。
Claims (2)
- （１）抗原または抗体のいずれかである免疫学的物質Ｘ
を含有する検体に、上記免疫学的物質Ｘに対応する免疫
学的物質Ｙと蛍光物質Ｆとの結合物である蛍光物質標識
免疫学的物質Ｙ−Ｆの過剰量を作用させ、抗原抗体反応
により生成した新たな蛍光性物質Ｘ−Ｙ−Ｆと残存する
蛍光物質標識免疫学的物質Ｙ−Ｆとを分離し、それらの
いずれかにシュウ酸ジエステルおよび過酸化水素を加え
て発光させ、発光強度を測定して測定結果より検体中の
免疫学的物質Ｘの量を求めることを特徴とする免疫学的
物質の定量法。 - （２）抗原または抗体のいずれかである免疫学的物質Ｘ
を含有する検体を、上記免疫学的物質Ｘと同種の免疫学
的物質Ｘ′に蛍光物質Ｆを結合させた蛍光物質標識免疫
学的物質Ｘ′−Ｆとともに免疫学的物質Ｘに対応する免
疫学的物質Ｙに作用させた後、残存する上記蛍光物質標
識免疫学的物質Ｘ′−Ｆを除去し、検体中の免疫学的物
質Ｘと競合する抗原抗体反応により蛍光物質標識免疫学
的物質Ｘ′−Ｆから生成した新たな蛍光性物質Ｙ−Ｘ′
−Ｆにシュウ酸ジエステルおよび過酸化水素を加えて発
光させ、発光強度を測定して測定結果より検体中の免疫
学的物質Ｘの量を求めることを特徴とする免疫学的物質
の定量法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP27157585A JPS62132173A (ja) | 1985-12-04 | 1985-12-04 | 免疫学的物質の定量法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP27157585A JPS62132173A (ja) | 1985-12-04 | 1985-12-04 | 免疫学的物質の定量法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS62132173A true JPS62132173A (ja) | 1987-06-15 |
Family
ID=17501989
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP27157585A Pending JPS62132173A (ja) | 1985-12-04 | 1985-12-04 | 免疫学的物質の定量法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS62132173A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH0443898U (ja) * | 1990-08-15 | 1992-04-14 |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5596458A (en) * | 1979-01-18 | 1980-07-22 | Miles Lab | Method of analyzing specific linkage by fluorescent substance label |
-
1985
- 1985-12-04 JP JP27157585A patent/JPS62132173A/ja active Pending
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5596458A (en) * | 1979-01-18 | 1980-07-22 | Miles Lab | Method of analyzing specific linkage by fluorescent substance label |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH0443898U (ja) * | 1990-08-15 | 1992-04-14 |
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