JPS619285A - 細胞表面及び細胞内抗原に対するヒトモノクローナル抗体 - Google Patents
細胞表面及び細胞内抗原に対するヒトモノクローナル抗体Info
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- JPS619285A JPS619285A JP60120341A JP12034185A JPS619285A JP S619285 A JPS619285 A JP S619285A JP 60120341 A JP60120341 A JP 60120341A JP 12034185 A JP12034185 A JP 12034185A JP S619285 A JPS619285 A JP S619285A
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- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/566—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor using specific carrier or receptor proteins as ligand binding reagents where possible specific carrier or receptor proteins are classified with their target compounds
- G01N33/567—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor using specific carrier or receptor proteins as ligand binding reagents where possible specific carrier or receptor proteins are classified with their target compounds utilising isolate of tissue or organ as binding agent
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- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
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- C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
この発明は保健局（Ｄｅｐａｒｔ＋ｎｅｎｔ ｏｆ Ｈ
ｕｍａｎＨｅａｌｔｈ ａｎｄ ５ｅｒｖｉｅｓ）、国
立ガン研究所（ｔｈｅＮａｔｉｃｑｎａｌ ’Ｃａｎｃ
ｅｒ Ｉｎ５ｔｉｔｕｔｅ）によって提供された基金に
よって全体が、あるいは一部がなされた。従ってアメリ
カ合衆国政府はこの発明にある権利を有している。
ｕｍａｎＨｅａｌｔｈ ａｎｄ ５ｅｒｖｉｅｓ）、国
立ガン研究所（ｔｈｅＮａｔｉｃｑｎａｌ ’Ｃａｎｃ
ｅｒ Ｉｎ５ｔｉｔｕｔｅ）によって提供された基金に
よって全体が、あるいは一部がなされた。従ってアメリ
カ合衆国政府はこの発明にある権利を有している。
この発明はヒト細胞の表面抗原と細胞内成分を認識する
ヒトモノクローナル抗体を産生ずるハイブリドーマに関
する。これらのヒトモノクローナル抗体はガンの診断に
有用である。
ヒトモノクローナル抗体を産生ずるハイブリドーマに関
する。これらのヒトモノクローナル抗体はガンの診断に
有用である。
背 −Ｊ」
モノクローナル抗体は蛋白を同定するのに非常に特異的
で鋭敏な試薬である。いくつかのタイプのヒトのガンの
表面抗原構造についての知見が、血清学的なプローブと
してのマウスのモノクローナル抗体でもって急速に得ら
れており、これらの試薬をガンの診断や治療に応用する
ことが行われている。しかしながら、ヒトのモノクロー
ナル抗体の生産はなかなかむづかしいことが認められて
いる。世界中の多く研究室での努力にも拘らず、文献上
成功した報告は比較的少ない。
で鋭敏な試薬である。いくつかのタイプのヒトのガンの
表面抗原構造についての知見が、血清学的なプローブと
してのマウスのモノクローナル抗体でもって急速に得ら
れており、これらの試薬をガンの診断や治療に応用する
ことが行われている。しかしながら、ヒトのモノクロー
ナル抗体の生産はなかなかむづかしいことが認められて
いる。世界中の多く研究室での努力にも拘らず、文献上
成功した報告は比較的少ない。
悪性のミエローマ（骨髄腫）の患者のリンパ球からとっ
た細胞表面抗原及−び細胞内抗原を認識するヒトモノク
ローナル抗体が報告されている〔ヒユートン等、ジャー
ナル・オブ°エキスペリメンタル・メデイシン（Ｈｏｕ
、ｇｈｔｏｎ、 ｅｔ ａｌ。
た細胞表面抗原及−び細胞内抗原を認識するヒトモノク
ローナル抗体が報告されている〔ヒユートン等、ジャー
ナル・オブ°エキスペリメンタル・メデイシン（Ｈｏｕ
、ｇｈｔｏｎ、 ｅｔ ａｌ。
Ｊ、 Ｅｘｐ、 Ｍｅｄ、）１９８２年６月）。その他
の細胞性抗原を認識するヒトモノクローナル抗体は、正
常な個体または胃ガン、肺ガン、乳ガン、あるいはリン
パ増殖疾患などのリンパ球から作られている〔コート等
、プロシーディンゲス・オブ・ザ・ナショナル・アガデ
ミー・オブ・サイエンス（Ｃｏｔｅ 。
の細胞性抗原を認識するヒトモノクローナル抗体は、正
常な個体または胃ガン、肺ガン、乳ガン、あるいはリン
パ増殖疾患などのリンパ球から作られている〔コート等
、プロシーディンゲス・オブ・ザ・ナショナル・アガデ
ミー・オブ・サイエンス（Ｃｏｔｅ 。
ｅｔ ａｌ。Ｐｒｏｃ、 Ｎａｔ ’ １． Ａｃａｄ
、Ｓｃｉ、）１９８３年４月〕りこれまで未知の細胞表
面及び細胞内抗原を検出することのできるその他のヒト
モノクローナル抗体も検索されている。
、Ｓｃｉ、）１９８３年４月〕りこれまで未知の細胞表
面及び細胞内抗原を検出することのできるその他のヒト
モノクローナル抗体も検索されている。
本発明のヒトモノクローナル抗体（ＨｍＡｂ）を産生す
るハイブリドーマ細胞系統は、マウスの骨髄腫（ミエロ
ーマ）細胞株あるいはヒトのリンパ芽球細胞株と、正常
な個体及び乳ガン、大腸ガン、肺ガン、黒色腫あるいは
胃ガン患者からとったヒトのリンパ球とを融合すること
によって作成された。リンパ球は正常な個体あるいは腎
ガン患者からの末梢血リンパ球から得たが、リンパ増殖
疾患や腎ガン患者からの肺細胞や腫瘍標本または肺、乳
、腎などのガンや黒色腫からのリンパ節標本も融合に使
われた。
るハイブリドーマ細胞系統は、マウスの骨髄腫（ミエロ
ーマ）細胞株あるいはヒトのリンパ芽球細胞株と、正常
な個体及び乳ガン、大腸ガン、肺ガン、黒色腫あるいは
胃ガン患者からとったヒトのリンパ球とを融合すること
によって作成された。リンパ球は正常な個体あるいは腎
ガン患者からの末梢血リンパ球から得たが、リンパ増殖
疾患や腎ガン患者からの肺細胞や腫瘍標本または肺、乳
、腎などのガンや黒色腫からのリンパ節標本も融合に使
われた。
これらのＨｍＡｂはヒト細胞の細胞表面抗原あるいは原
形質成分を認識し、悪性化細胞の組織起源を分別する場
合と同様、悪性化した細胞を検出するうえで有効である
６ 細胞表面抗原や細胞質成分を認識する）１．ｍＡｂはＥ
ｖ２４８．Ｃｈ５．Ｃｈ１３．Ｔｅ３９．Ｈｕ４４、Ｇ
ｅ−１’、Ｇｒ１６９．Ｓｐ９０９及びＧｒ４３１の抗
体である。これらのＨｍＡｂを含む検索群（パネル）が
作られた。、 この発明の好ましい態様はヒトの杭体Ｅｖ２４８でＥｖ
２４８抗原系を免疫的に分析することを含む正常なヒト
細胞と悪性化したヒト細胞を区別する方法にある。Ｅｖ
２４８抗原は固形腫瘍細胞上に見られ、上皮細胞に限ら
れているが、警務したあるいは神経外胚葉性起源の固形
腫瘍上には存在しない。かくして乳ガンのような上皮細
胞起源の固形腫瘍を、神経外胚葉性起源の黒色腫と区別
するのに、 Ｅｖ２４８抗原は有用となる。
形質成分を認識し、悪性化細胞の組織起源を分別する場
合と同様、悪性化した細胞を検出するうえで有効である
６ 細胞表面抗原や細胞質成分を認識する）１．ｍＡｂはＥ
ｖ２４８．Ｃｈ５．Ｃｈ１３．Ｔｅ３９．Ｈｕ４４、Ｇ
ｅ−１’、Ｇｒ１６９．Ｓｐ９０９及びＧｒ４３１の抗
体である。これらのＨｍＡｂを含む検索群（パネル）が
作られた。、 この発明の好ましい態様はヒトの杭体Ｅｖ２４８でＥｖ
２４８抗原系を免疫的に分析することを含む正常なヒト
細胞と悪性化したヒト細胞を区別する方法にある。Ｅｖ
２４８抗原は固形腫瘍細胞上に見られ、上皮細胞に限ら
れているが、警務したあるいは神経外胚葉性起源の固形
腫瘍上には存在しない。かくして乳ガンのような上皮細
胞起源の固形腫瘍を、神経外胚葉性起源の黒色腫と区別
するのに、 Ｅｖ２４８抗原は有用となる。
ＨｍＡｂのＧｒ１６９はいろいろなガンの細胞表面抗原
と反応する。Ｓｐ９０９は広範囲のガンの細胞表面抗原
と反応する。Ｔｅ３９．Ｈｕ、４４．Ｇｒ、４３１．Ｃ
ｈ１３．Ｇ’ｅｌ及びＣ６０はいろいろなガン細胞の細
胞内成分と反応する。Ｓｐ９０９とＣ６０、ＧｅｌとＣ
ｈ１３は正常細胞成分とも反応する。これらのＨｍＡｂ
はガン細胞の■ 有用な検索剤である。この目的のために一連の検査群が
作られた。
と反応する。Ｓｐ９０９は広範囲のガンの細胞表面抗原
と反応する。Ｔｅ３９．Ｈｕ、４４．Ｇｒ、４３１．Ｃ
ｈ１３．Ｇ’ｅｌ及びＣ６０はいろいろなガン細胞の細
胞内成分と反応する。Ｓｐ９０９とＣ６０、ＧｅｌとＣ
ｈ１３は正常細胞成分とも反応する。これらのＨｍＡｂ
はガン細胞の■ 有用な検索剤である。この目的のために一連の検査群が
作られた。
この発明の検査法は細胞表層抗原あるいは原形質成分を
認識する抗体と細胞を接触させ、そ、のモノクローナル
抗体と抗原との間の反応を観察することを包含する。こ
の発明の好ましい態様では、検査されるべき組織がまず
採取され。
認識する抗体と細胞を接触させ、そ、のモノクローナル
抗体と抗原との間の反応を観察することを包含する。こ
の発明の好ましい態様では、検査されるべき組織がまず
採取され。
生のままか凍結した後、またはこの分野゛ではよく知ら
れた方法によってパラフィンに包埋した後、上記のモノ
クローナル抗体と接触される。
れた方法によってパラフィンに包埋した後、上記のモノ
クローナル抗体と接触される。
、この態様においては、上記の抗体は着色した基、ある
いは酵素特にペルオキシダーゼとその基質のような色を
出す物質、蛍光物質または放射性元素が付けられ、それ
によって抗体の所在が追跡できるようにしである。採取
された組織の血清学的検査も本発明の内容である。かく
して受動的血球凝集法、抗体阻害試験法あるいは糖脂質
介在の免疫付着法などが用いられる。同様に抗マウス及
び抗ヒト免疫グロブリン法やプロティンＡ分析法も用い
られる。
いは酵素特にペルオキシダーゼとその基質のような色を
出す物質、蛍光物質または放射性元素が付けられ、それ
によって抗体の所在が追跡できるようにしである。採取
された組織の血清学的検査も本発明の内容である。かく
して受動的血球凝集法、抗体阻害試験法あるいは糖脂質
介在の免疫付着法などが用いられる。同様に抗マウス及
び抗ヒト免疫グロブリン法やプロティンＡ分析法も用い
られる。
■凰久ｌ凰
この発明の方法に用いられるＨｍＡｂの調製は発明者ら
によって報告されている【ヒユートン等：ジャーナル・
オブ・エキスペリメンタル・メデイシン（Ｈｏｕｇｈｔ
ｏｎ、 ｅｔ ａｌ、 Ｊ、 Ｅｘｐ、 Ｍｅｄ、）（
１９８２年）〕この報文はここに引用文献として入れら
れている。
によって報告されている【ヒユートン等：ジャーナル・
オブ・エキスペリメンタル・メデイシン（Ｈｏｕｇｈｔ
ｏｎ、 ｅｔ ａｌ、 Ｊ、 Ｅｘｐ、 Ｍｅｄ、）（
１９８２年）〕この報文はここに引用文献として入れら
れている。
曵版： ＬＴＣＲ−２＝ＬＩＣＲ−ＬＯＮ−ＨＭｙ２
； Ｉｇ＝イムノグロブリン；ＰＡ＝プロティンＡ：Ｉ
Ａ＝免疫付着；抗−Ｉｇ＝ウサギ抗ヒトＩｇ ； ＥＢ
Ｖ ＝エプスタインーバー・ウィルス；ＰＢＳ＝リン酸
塩緩衝化生理的食塩水；ＨｍＡｂ＝ヒトモノクローナル
抗体；ＩＦ＝中間線維：ＧＦＡＰ＝神経膠線維性酸性タ
ンパク質。
； Ｉｇ＝イムノグロブリン；ＰＡ＝プロティンＡ：Ｉ
Ａ＝免疫付着；抗−Ｉｇ＝ウサギ抗ヒトＩｇ ； ＥＢ
Ｖ ＝エプスタインーバー・ウィルス；ＰＢＳ＝リン酸
塩緩衝化生理的食塩水；ＨｍＡｂ＝ヒトモノクローナル
抗体；ＩＦ＝中間線維：ＧＦＡＰ＝神経膠線維性酸性タ
ンパク質。
以下の記述はここに記述し、請求されたものと本質的に
同等な機能を有する細胞株間して、この発明を限定する
ものではない。
同等な機能を有する細胞株間して、この発明を限定する
ものではない。
ハイブリドーマ細胞系統の利用性
本発明で明らかにされた細胞株は、アメリカ標準株集合
所（ｔｈｅ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕ１ｔｕ
ｒｅＣｏｌｌｅｃｔｉｏｎ 、メリーランド州ベセスダ
）に寄託され、ブダペスト会議に従って維持されよう。
所（ｔｈｅ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕ１ｔｕ
ｒｅＣｏｌｌｅｃｔｉｏｎ 、メリーランド州ベセスダ
）に寄託され、ブダペスト会議に従って維持されよう。
それらは次の寄託番号がつけられている。
スローンケタリング番号 ＡＴＣＣ番号Ｅｖ２４
８ ＨＢ ８５６５Ｇｅ ｌ
ＨＢ ８５７４Ｃｈ５
ＨＢ８５７２Ｃｈ１３
ＨＢ ８５７３Ｔｅ３９ ＨＢ
８５７７Ｈｕ４４ 、 ＨＢ
８５７６Ｇｒ４３１ − ＨＢ ８５
７５寄託は発明を完成させる目的のためのみであって、
本発明の概念を寄託された特定のものに限定するつもり
ではない。
８ ＨＢ ８５６５Ｇｅ ｌ
ＨＢ ８５７４Ｃｈ５
ＨＢ８５７２Ｃｈ１３
ＨＢ ８５７３Ｔｅ３９ ＨＢ
８５７７Ｈｕ４４ 、 ＨＢ
８５７６Ｇｒ４３１ − ＨＢ ８５
７５寄託は発明を完成させる目的のためのみであって、
本発明の概念を寄託された特定のものに限定するつもり
ではない。
ハイブリドーマの調製
Ｒａ１Ｌ！！ＬＬＩＣＲ−２ヒトリンパ芽球株がら得た
ＡＲＨ−７７はルードウィヒ癌研究所ロンドン支局（Ｌ
ｏｎｄｏｎ Ｂｒａｎｃｈ ｏｆ ｔｈｅ Ｌｕｄｗｉ
ｇ Ｉｎ５ｔｉｔｕｔ、ｅ、 ｆｏｒＣａｎｃｅｒ Ｒ
ｅ５ｅａｒｃｈ）の阿、オヘア博士（Ｍ、 Ｏ’ Ｈａ
ｒｅ）、Ｐ、エドワーズ博士（Ｐ、 Ｅｄｗａｒｄｓ）
及びＡ、Ｍ、ネビル博士（Ａ、 Ｍ、 Ｎｅｖｉｌｌｅ
）によって提供された。
ＡＲＨ−７７はルードウィヒ癌研究所ロンドン支局（Ｌ
ｏｎｄｏｎ Ｂｒａｎｃｈ ｏｆ ｔｈｅ Ｌｕｄｗｉ
ｇ Ｉｎ５ｔｉｔｕｔ、ｅ、 ｆｏｒＣａｎｃｅｒ Ｒ
ｅ５ｅａｒｃｈ）の阿、オヘア博士（Ｍ、 Ｏ’ Ｈａ
ｒｅ）、Ｐ、エドワーズ博士（Ｐ、 Ｅｄｗａｒｄｓ）
及びＡ、Ｍ、ネビル博士（Ａ、 Ｍ、 Ｎｅｖｉｌｌｅ
）によって提供された。
マウスのミエローマ株のＭＳ−１は１９７９年スローン
ケタリング癌研究所のＵ、ハマーリング博士（Ｄｒ。
ケタリング癌研究所のＵ、ハマーリング博士（Ｄｒ。
Ｕ、Ｈａｍｍｅｒｌｉｎｇ、、５ｌｏａｎ−Ｋｅｔｔｅ
ｒ、ｉｎｇ Ｉｎ５ｔｉｔｕｔｅｆｏｒ Ｃａｎｃｅ
ｒ Ｒｅ５ｅａｒｃｈ）から得た・この細胞株もＡＴＣ
Ｃに寄託されている。これらの細胞株の特徴は次の通り
である。
ｒ、ｉｎｇ Ｉｎ５ｔｉｔｕｔｅｆｏｒ Ｃａｎｃｅ
ｒ Ｒｅ５ｅａｒｃｈ）から得た・この細胞株もＡＴＣ
Ｃに寄託されている。これらの細胞株の特徴は次の通り
である。
ＬＩＣＲ−２γ に ２４（時間） ヒト
Ｎ５−１ − に ２４ マウス細
胞を７．５％のウシ胎児血清、１％の非必須アミノ酸（
ＧＩＢＣＯ、グランドアイランド、ニューヨーク州）
、 １０００／ｍＱのペニシリン、１００ ｐ ｇ／ｍ
Ｑのストレプトマイシン、２０μｇ／ｍ Ｑの８−アザ
グアニンを添加したＲＰＭＩ−１６４０で培養した。４
×ｌ０−７Ｍのアミノプテリンを含む培地では生育は起
らなかった。
Ｎ５−１ − に ２４ マウス細
胞を７．５％のウシ胎児血清、１％の非必須アミノ酸（
ＧＩＢＣＯ、グランドアイランド、ニューヨーク州）
、 １０００／ｍＱのペニシリン、１００ ｐ ｇ／ｍ
Ｑのストレプトマイシン、２０μｇ／ｍ Ｑの８−アザ
グアニンを添加したＲＰＭＩ−１６４０で培養した。４
×ｌ０−７Ｍのアミノプテリンを含む培地では生育は起
らなかった。
リンパ球の給源 無菌的な標本はメモリアル、
ホスピタルの病理部から腫瘍調達機関を通じて得
た。リンパ球は（ａ）局部的なリンパ節（乳ガン、大腸
ガン、肺ガン、メラノーマ、腎ガンの患者）、（ｂ）末
梢血（６人の腎ガン患者と３人の正常人）。
ホスピタルの病理部から腫瘍調達機関を通じて得
た。リンパ球は（ａ）局部的なリンパ節（乳ガン、大腸
ガン、肺ガン、メラノーマ、腎ガンの患者）、（ｂ）末
梢血（６人の腎ガン患者と３人の正常人）。
（ｃ）肺臓（４人のリンパ増殖疾患患者と１人の腎ガン
患者）、 （ｄ）腫瘍標本（４人の肺ガン、４人の乳ガ
ン及び１人の乳ガンからの悪性滲出液）から得た。
患者）、 （ｄ）腫瘍標本（４人の肺ガン、４人の乳ガ
ン及び１人の乳ガンからの悪性滲出液）から得た。
リンパ球の調製 腫瘍、リンパ節、肺臓を無菌条件下で
まわりの正常組織から取除き、標本を細かく砕いて５０
０μｍの細胞用篩を通過させた。
まわりの正常組織から取除き、標本を細かく砕いて５０
０μｍの細胞用篩を通過させた。
得られた懸濁液は遠沈して再びＲＰＭＩ−１６４０に懸
濁し、フィコール−ハイバーク液（ファルコシア製、ニ
ューヨーク州 ビスカタウェ”イ）の上におき、４００
ＸＧで２０分間遠沈したう中間の細胞層を洗って融合の
ためのリンパ球の供給源として使用した。末梢血リンパ
球は同様にフィコール−ハイバーク密度勾配で分離した
。リンパ球（１〜２Ｘ１０’細胞／ＩＩＩＱ）は、７．
５％ＦＣ５を含むＲＰＭＩ−１６４０培地で融合前に２
４〜４８時間３７℃でインキュベートした。
濁し、フィコール−ハイバーク液（ファルコシア製、ニ
ューヨーク州 ビスカタウェ”イ）の上におき、４００
ＸＧで２０分間遠沈したう中間の細胞層を洗って融合の
ためのリンパ球の供給源として使用した。末梢血リンパ
球は同様にフィコール−ハイバーク密度勾配で分離した
。リンパ球（１〜２Ｘ１０’細胞／ＩＩＩＱ）は、７．
５％ＦＣ５を含むＲＰＭＩ−１６４０培地で融合前に２
４〜４８時間３７℃でインキュベートした。
細胞融合 リンパ球とミエローマ／リンパ芽球細胞を１
＝１または２：１の比率で混合し、ＲＰＭＩ−１６４０
で３回洗った。最終洗浄の後、上清を取り除き、０．２
ｍＱの４２％（ｗ／ｖ）のポリエチレングリコール（分
子量４０００） ［１５％（ｖ／ｖ）のＤＭＳＯを含む
リン酸塩緩衝化生理的食塩水（ＰＢＳ）溶液］を３７℃
、３分間で穏やかに混合しながら細胞塊にゆっくり加え
た。１５％ＦＣ５，ペニシリン／ストレプトマイシン、
非必須アミノ酸、２Ｘ１０−’Ｍの２−メルカプトエタ
ノール、ｌＸｌ０−’Ｍヒポキサンチン、１．６ Ｘ
１０−’ Ｍチミジンを含むＲＰＭＩ−１６４０１０ｍ
Ｑを加えた。３７℃で一晩細胞をインキュベートして遠
沈し、４Ｘ１０−’Ｍアミノプテリンを含む融合後用の
培地に細胞を再懸濁した後、ＢＡＬＢ／ｃまたはＣ５７
ＢＬ／６の腹水細胞をフィーダーレーヤー（Ｉ Ｘ １
０’ ｃｅｌｌｓ／ウェル、２４〜４８時間前に移注し
た）とした９６ウエルの組織培養プレー）（Ｃｏｓｔａ
ｒ ３５９６）に、ウェル当り１〜２Ｘ１０’のリンパ
球になる濃度で移注した。培地は一週に１回交換し、細
胞を４〜６週間４Ｘ１０−’Ｍのアミノプテリンの存在
下で維持した。
＝１または２：１の比率で混合し、ＲＰＭＩ−１６４０
で３回洗った。最終洗浄の後、上清を取り除き、０．２
ｍＱの４２％（ｗ／ｖ）のポリエチレングリコール（分
子量４０００） ［１５％（ｖ／ｖ）のＤＭＳＯを含む
リン酸塩緩衝化生理的食塩水（ＰＢＳ）溶液］を３７℃
、３分間で穏やかに混合しながら細胞塊にゆっくり加え
た。１５％ＦＣ５，ペニシリン／ストレプトマイシン、
非必須アミノ酸、２Ｘ１０−’Ｍの２−メルカプトエタ
ノール、ｌＸｌ０−’Ｍヒポキサンチン、１．６ Ｘ
１０−’ Ｍチミジンを含むＲＰＭＩ−１６４０１０ｍ
Ｑを加えた。３７℃で一晩細胞をインキュベートして遠
沈し、４Ｘ１０−’Ｍアミノプテリンを含む融合後用の
培地に細胞を再懸濁した後、ＢＡＬＢ／ｃまたはＣ５７
ＢＬ／６の腹水細胞をフィーダーレーヤー（Ｉ Ｘ １
０’ ｃｅｌｌｓ／ウェル、２４〜４８時間前に移注し
た）とした９６ウエルの組織培養プレー）（Ｃｏｓｔａ
ｒ ３５９６）に、ウェル当り１〜２Ｘ１０’のリンパ
球になる濃度で移注した。培地は一週に１回交換し、細
胞を４〜６週間４Ｘ１０−’Ｍのアミノプテリンの存在
下で維持した。
融合条件ニ一般的な注釈。 融合法における数多くの要
因を検討した。融合ごとに変化するために、最適な条件
についての確かな結論を得のにはむづかしい。しかしな
がら、いくつかの要因が一般に一定の様式で結果に影響
することが見つけられた。これらには次の事柄が含まれ
る。
因を検討した。融合ごとに変化するために、最適な条件
についての確かな結論を得のにはむづかしい。しかしな
がら、いくつかの要因が一般に一定の様式で結果に影響
することが見つけられた。これらには次の事柄が含まれ
る。
（１）ミエローマ／リンパ芽球株の条件。細胞株は８５
％の生細胞率で対数増殖期に維持された。生育しすぎた
培養で融合すると、クローンの増殖の頻度が低まった。
％の生細胞率で対数増殖期に維持された。生育しすぎた
培養で融合すると、クローンの増殖の頻度が低まった。
（２）融合比率。リンパ球とミエローマｌリンパ芽球細
胞を１：１または２：１の比にすると、５：１゛または
１０：１での融合よりも２〜８倍高いクローンの増殖が
得られた。
胞を１：１または２：１の比にすると、５：１゛または
１０：１での融合よりも２〜８倍高いクローンの増殖が
得られた。
（３）アミノプテリン′加の時期。融合した細胞にアミ
ノプテリンの添加を２４時間遅らせると、クローンのよ
り活発な増殖がみられた。
ノプテリンの添加を２４時間遅らせると、クローンのよ
り活発な増殖がみられた。
（４）ウシ胎児血清（ＦＣ３）。ＦＣ５のロットの差に
よりクローンの増殖の割合に著しい差がみられた。
よりクローンの増殖の割合に著しい差がみられた。
エドワーズ等によってはじめに見られたようにＣＰ、Ａ
、Ｗ、 ｍドワーズ、Ｃ，Ｍ、スミス、Ａ、Ｍ、ネヴイ
ル及びＭ、Ｊ、オヘア（１９８２年）ヨーロピアン。
、Ｗ、 ｍドワーズ、Ｃ，Ｍ、スミス、Ａ、Ｍ、ネヴイ
ル及びＭ、Ｊ、オヘア（１９８２年）ヨーロピアン。
ジャーナル・オブ・イムノロジー（Ｅｄｖａｒｄ、 Ｐ
、Ａ。
、Ａ。
１、 ５ｒｎｉｔｈ、 Ｃ，Ｍ、、 Ｎｅｖｉｌ
ｌｅ、 Ａ、Ｍ、 ＆ ０ ’ Ｈａｒｅ。
ｌｅ、 Ａ、Ｍ、 ＆ ０ ’ Ｈａｒｅ。
ＭＪ、（１９８２） Ｅｕｒ、Ｊ、 Ｉｍｍｕｎｏｌ、
）１２ ： ６４１−６４８１、あるロットのＦｅ２は
ミエローマｌリンパ芽球細胞株の成育とクローン化や融
合から得られるＩｇ分泌性のクローンの成育を阻害した
。それ故ＦＣ５のロットはこれらのタイプの細胞を使っ
て最適の成長促進特性をもつものを予め検索した。最適
の融合成功率は約１０〜１５％のＦＣ３Ｃ１０とき得ら
れた。
）１２ ： ６４１−６４８１、あるロットのＦｅ２は
ミエローマｌリンパ芽球細胞株の成育とクローン化や融
合から得られるＩｇ分泌性のクローンの成育を阻害した
。それ故ＦＣ５のロットはこれらのタイプの細胞を使っ
て最適の成長促進特性をもつものを予め検索した。最適
の融合成功率は約１０〜１５％のＦＣ３Ｃ１０とき得ら
れた。
（５）その他の培地添 物。数種の異なったタイプの細
胞で調整された培養上清は、クローンの増殖の頻埠を改
善しなかった。ＰＨＡで４〜６日 ゛間刺激された末
梢血単核球の培養上清を融合後の培地に添加すると、得
られるべきクローンが著しいく減少する結果をもたらし
た。
胞で調整された培養上清は、クローンの増殖の頻埠を改
善しなかった。ＰＨＡで４〜６日 ゛間刺激された末
梢血単核球の培養上清を融合後の培地に添加すると、得
られるべきクローンが著しいく減少する結果をもたらし
た。
Ｎ５−１とＬＩＣＲ−２の ム 果。 ＭＳ−１から得
られるクローンは融合後２〜４週間で一般に現われたが
、ＩＪｃＲ−２からのクローンは融合後４〜７週間で現
われた。ヒトのリンパ球とＮ５−１の間での融合は１つ
を除いて全て生育した（９５％）が、ＬＩＣＲ−２との
融合は７９％が生育した（第１表）。ＬＩＣＲ−２を末
梢血リンパ球と融合すると、最低の結果で夫々６０％と
４０％の生育であった。与えられた数のリンパ球に対し
てＭＳ−１との融合は、ＬＩＣＲ−２との融合よりも平
均して８倍多いクローンをもたらした。
られるクローンは融合後２〜４週間で一般に現われたが
、ＩＪｃＲ−２からのクローンは融合後４〜７週間で現
われた。ヒトのリンパ球とＮ５−１の間での融合は１つ
を除いて全て生育した（９５％）が、ＬＩＣＲ−２との
融合は７９％が生育した（第１表）。ＬＩＣＲ−２を末
梢血リンパ球と融合すると、最低の結果で夫々６０％と
４０％の生育であった。与えられた数のリンパ球に対し
てＭＳ−１との融合は、ＬＩＣＲ−２との融合よりも平
均して８倍多いクローンをもたらした。
イムノグロブリンの検出と定量 培養上清を酵素給金免
疫的分析法によってヒトＩｇの産生について検索した。
疫的分析法によってヒトＩｇの産生について検索した。
クローンが成育したウェルから培養上清１０μＱをとり
、ファルコン３０３４プレートにプレコートし、４℃で
一晩インキュベー Ｉ−１、た。プレートをＰＢＳで洗
い、アルカリフォスファターゼを結合したヤギの抗ヒト
α−１μ−またはγ−Ｈ鎖特異的抗体（シグマケミカル
社、ミズーリ州セントルイス）を１０μＱ各ウエルに加
えた（１／１００希釈で）６全Ｉｇの定量にはクラスに
特異的な試薬を混合した（各試薬の最終希釈はｌ／１０
０）。３０分間３７℃でインキュベートした後プレート
を洗い、１０％のエタノールアミン緩衝液（ｐＨ９，６
）にとかしたＰ−ニトロフェニル燐酸二ソーダ（１＋ｎ
ｇ／＋ｎ Ｑ ）１０μ０を各ウェルに加え、３７℃で
３０分間インキュベートした。Ａｒｔｅｋ ２１０型リ
ーダーによって色の変化を測定した。この試験は各々の
Ｉｇクラスに対して５００ｎｇ／ｍ Ｑから５０％ｇ／
ｌ１ＩＱの範囲で特異的であった。間接免疫蛍光法（下
記をみよ）による細胞内のにまたはλ型り鎖の検出には
、ＦＩＴＣ（カッペル・ラボラトリーズ製、ペンシルバ
ニア州コクランヴイル）を結合したヤギの抗ヒトにまた
はλ型り鎖抗体が使われた（ １／４０希釈して）。
、ファルコン３０３４プレートにプレコートし、４℃で
一晩インキュベー Ｉ−１、た。プレートをＰＢＳで洗
い、アルカリフォスファターゼを結合したヤギの抗ヒト
α−１μ−またはγ−Ｈ鎖特異的抗体（シグマケミカル
社、ミズーリ州セントルイス）を１０μＱ各ウエルに加
えた（１／１００希釈で）６全Ｉｇの定量にはクラスに
特異的な試薬を混合した（各試薬の最終希釈はｌ／１０
０）。３０分間３７℃でインキュベートした後プレート
を洗い、１０％のエタノールアミン緩衝液（ｐＨ９，６
）にとかしたＰ−ニトロフェニル燐酸二ソーダ（１＋ｎ
ｇ／＋ｎ Ｑ ）１０μ０を各ウェルに加え、３７℃で
３０分間インキュベートした。Ａｒｔｅｋ ２１０型リ
ーダーによって色の変化を測定した。この試験は各々の
Ｉｇクラスに対して５００ｎｇ／ｍ Ｑから５０％ｇ／
ｌ１ＩＱの範囲で特異的であった。間接免疫蛍光法（下
記をみよ）による細胞内のにまたはλ型り鎖の検出には
、ＦＩＴＣ（カッペル・ラボラトリーズ製、ペンシルバ
ニア州コクランヴイル）を結合したヤギの抗ヒトにまた
はλ型り鎖抗体が使われた（ １／４０希釈して）。
細胞表面抗原及び細胞内抗原に対する血清学的測定。
プロティンＡ （ＰＡ）、免疫付着（ＩＡ）、ウサギの
抗ヒトＩｇ（ａｎｔｉ−Ｉｇ）赤血球ロゼツト形成法お
よび細胞表面抗原の検出のための吸収法などはすでに記
述されている［８．シフ、Ｔ、タカハシ。
抗ヒトＩｇ（ａｎｔｉ−Ｉｇ）赤血球ロゼツト形成法お
よび細胞表面抗原の検出のための吸収法などはすでに記
述されている［８．シフ、Ｔ、タカハシ。
Ｈ，Ｆ、、エトケン及びり、 Ｊ、オールド（１９７６
年）、ジャーナル・オブ・エキスペリメンタル・メディ
シン（Ｓｈｉｋｕ、 Ｉ（、、Ｔａｋａｈａｓｈｉ、
Ｔ、、 Ｏｅｔｔｇｅｎ、 Ｉ（。
年）、ジャーナル・オブ・エキスペリメンタル・メディ
シン（Ｓｈｉｋｕ、 Ｉ（、、Ｔａｋａｈａｓｈｉ、
Ｔ、、 Ｏｅｔｔｇｅｎ、 Ｉ（。
Ｆ、、 Ｏｌｄ、 １、 Ｊ、 （１９７６） Ｊ、
Ｅｘｐ、 Ｍｅｃｌ、） １４４゜８７３−８８１
； Ｍ、’ Ｇ、フロイントシュー、Ｒ，ウエダ、Ｅ、
Ｌ ラウターベルク、Ｂ、Ｈ，ドルケン及びＨ，シフ
（１９８０年）ジャーナル・オブ・イムノロジカルメソ
ッド（Ｐｆｒｅｕｎｄｓｃｈｕｈ、 Ｍ、Ｇ、、 Ｕｅ
＋ｊａ、 Ｒ，ＩＲａｕｔｅｒｂｅｒｇ、Ｅ、 Ｗ、
、 Ｄａｒｋｅｎ、 Ｂ、 ）１． ａｎｄ
５ｈｉｋｕ。
Ｅｘｐ、 Ｍｅｃｌ、） １４４゜８７３−８８１
； Ｍ、’ Ｇ、フロイントシュー、Ｒ，ウエダ、Ｅ、
Ｌ ラウターベルク、Ｂ、Ｈ，ドルケン及びＨ，シフ
（１９８０年）ジャーナル・オブ・イムノロジカルメソ
ッド（Ｐｆｒｅｕｎｄｓｃｈｕｈ、 Ｍ、Ｇ、、 Ｕｅ
＋ｊａ、 Ｒ，ＩＲａｕｔｅｒｂｅｒｇ、Ｅ、 Ｗ、
、 Ｄａｒｋｅｎ、 Ｂ、 ）１． ａｎｄ
５ｈｉｋｕ。
Ｈ，（１９８０）Ｊ、 Ｉｍｍ、ｕｎｏｌ、 Ｍｅｔｈ
ｏ、） ３７．７１−８１ ； Ａ。
ｏ、） ３７．７１−８１ ； Ａ。
Ｐ、アルピノ、 Ｋ、 Ｏ，ロイド、Ａ、 Ｎ、七ニー
トン、Ｈ，Ｆ、エトケン及びり、 Ｊ、オールド（１９
８１年）ジャーナル・エキスペリメンタル・メディシン
［Ａｌｂｉｎｏ、Ａ、 Ｐ、、 Ｌｌｏｙｄ、 Ｋ、
０．、 Ｈｏｕｇｈｔｏｎ、 Ａ。
トン、Ｈ，Ｆ、エトケン及びり、 Ｊ、オールド（１９
８１年）ジャーナル・エキスペリメンタル・メディシン
［Ａｌｂｉｎｏ、Ａ、 Ｐ、、 Ｌｌｏｙｄ、 Ｋ、
０．、 Ｈｏｕｇｈｔｏｎ、 Ａ。
Ｎ、、 ０ｅｔｔ４ｅｎ、 Ｈ，Ｆ、、 ａｎｄ Ｏｌ
ｄ １、 Ｊ、 （１９８１）Ｊ、 Ｅｘｐ、 Ｍｅｄ
、］ １５４．１７６４−１７７８］ 、細胞内抗原は
ファルコン３０３４プレート全面に生育した標的細胞を
使って間接免疫蛍光試験で検出した。プレートを洗浄し
、細胞を１：１のメタノール：アセトン混液（ｖ／ｖ）
により室温で５分間固定した。検査すべき培養上清の１
０μＱを各ウェルに移注し、室温で１時間インキュベー
トした。細胞を洗ってからＦＩＴＣ（ＤＡＫＯ社、コペ
ンハーケン）を結合したヤギの抗ヒトＩｇ’の１０μＱ
を各ウェルに添加（１／４０希釈で）し、室温で１時間
インキュベーとした。洗浄後蛍光をダイア・ダイアラッ
クス２０型蛍光顕微鏡で観察した。血清学的な検査法に
使われたヒト細胞株はすでに記載されている［Ｈ，シフ
、Ｔ、タカハシ、Ｈ，Ｆ、エトケン、し。
ｄ １、 Ｊ、 （１９８１）Ｊ、 Ｅｘｐ、 Ｍｅｄ
、］ １５４．１７６４−１７７８］ 、細胞内抗原は
ファルコン３０３４プレート全面に生育した標的細胞を
使って間接免疫蛍光試験で検出した。プレートを洗浄し
、細胞を１：１のメタノール：アセトン混液（ｖ／ｖ）
により室温で５分間固定した。検査すべき培養上清の１
０μＱを各ウェルに移注し、室温で１時間インキュベー
トした。細胞を洗ってからＦＩＴＣ（ＤＡＫＯ社、コペ
ンハーケン）を結合したヤギの抗ヒトＩｇ’の１０μＱ
を各ウェルに添加（１／４０希釈で）し、室温で１時間
インキュベーとした。洗浄後蛍光をダイア・ダイアラッ
クス２０型蛍光顕微鏡で観察した。血清学的な検査法に
使われたヒト細胞株はすでに記載されている［Ｈ，シフ
、Ｔ、タカハシ、Ｈ，Ｆ、エトケン、し。
Ｊ、オールド（１９７６年）、ジャーナル・エキスペリ
メンタル・メディシン（Ｓｈｉｋｕ、 Ｈ，、Ｔａｋａ
ｈａｓｈｉ。
メンタル・メディシン（Ｓｈｉｋｕ、 Ｈ，、Ｔａｋａ
ｈａｓｈｉ。
Ｔ、’、’Ｏｅｔｔｇｅｎ、’ Ｈ，Ｆ、、ａ’ｎｄ
Ｏｌｄ、’ １、Ｊ’、（１９７６） Ｊ’。
Ｏｌｄ、’ １、Ｊ’、（１９７６） Ｊ’。
Ｅｘｐ、Ｍｅｄ、） １４４．’ ８７３−８８１ ：
Ａ、 Ｐ、アルピノ、Ｋ。
Ａ、 Ｐ、アルピノ、Ｋ。
０、ロイド゛、Ａ、 Ｎ、 ヒユートン、ｈ：Ｆ、工１
〜ゲン及びり、 ′Ｊ’、オールド（１９８１年）ジャ
ーナル・エキスペリメンタル・メディシン［Ａ’１ｂｉ
ｎｏ、Ａ、 ’Ｐ’、’。
〜ゲン及びり、 ′Ｊ’、オールド（１９８１年）ジャ
ーナル・エキスペリメンタル・メディシン［Ａ’１ｂｉ
ｎｏ、Ａ、 ’Ｐ’、’。
Ｌｌｏｙｄ、 Ｋ−０，＋ Ｈｏｕｇｈｔｏｎ、 Ａ、
Ｎ、、 Ｏｅｔｔｇｅｎ、 Ｈ。
Ｎ、、 Ｏｅｔｔｇｅｎ、 Ｈ。
Ｆ、、 ａｎｄ Ｏｌｄ １、 Ｊ、（１９８１）Ｊ、
Ｅｘｐ’、” Ｍｅｄ、］ １５４゜１７６４−１７
７８ ： Ｒ，ウエダ、Ｓ’、 Ｔ、オガタ、Ｄ、Ｍ、
モリセイ、ｃ、１、フィンスタッド、Ｊ、スフトラレフ
、ｖ、Ｆ、 ウィトモア、Ｊｒ、、 ）１．Ｆ” ｘト
ケン、Ｋ。
Ｅｘｐ’、” Ｍｅｄ、］ １５４゜１７６４−１７
７８ ： Ｒ，ウエダ、Ｓ’、 Ｔ、オガタ、Ｄ、Ｍ、
モリセイ、ｃ、１、フィンスタッド、Ｊ、スフトラレフ
、ｖ、Ｆ、 ウィトモア、Ｊｒ、、 ）１．Ｆ” ｘト
ケン、Ｋ。
０ロイド及びり、Ｊ、オールド（１９８１年）プロシー
ディングズ・オブ・ザ・ナシゴナル・アカデミ−・オブ
・サイエンス、Ｕ、Ｓ、Ａ’、 （Ｌｌｅｄａ、 Ｒ，
、Ｏｇａｔａ、 Ｓ、 １．。
ディングズ・オブ・ザ・ナシゴナル・アカデミ−・オブ
・サイエンス、Ｕ、Ｓ、Ａ’、 （Ｌｌｅｄａ、 Ｒ，
、Ｏｇａｔａ、 Ｓ、 １．。
Ｍｏｒｒｉｓｓｅｙ、 ｌｊ、Ｍ、、 Ｆｉｎｓｔａｄ
、Ｃ，１、、 ５ｚｋｕｄｌａｒｅｄｋ。
、Ｃ，１、、 ５ｚｋｕｄｌａｒｅｄｋ。
Ｊ、、 Ｗｈｉｔｍｏｒｅ、ｌｉｔ、 Ｆ、、
Ｊｒ、、 Ｏｅｔｔｇｅｎ、 Ｈ，Ｆ、。
Ｊｒ、、 Ｏｅｔｔｇｅｎ、 Ｈ，Ｆ、。
Ｌｌｏｙｄ、 Ｋ、 Ｏ，ａｎｄ Ｏｌｄ、 １、 Ｊ
、 （１９８１） Ｐｒｏｃ。
、 （１９８１） Ｐｒｏｃ。
Ｎａｔ ’ Ｉ Ａｃａｄ、Ｓｃｉ、、 Ｕ、Ｓ、Ａ、
）胆、 ５１２２〜５１２６］。
）胆、 ５１２２〜５１２６］。
イムノグロブリンの分泌：量的範囲と安定性。
クローンの増殖したウェルをＩｇの分泌について検査し
た。２０〜８０％が培養上清ＩＩＩＱ当り５００ｎｇの
Ｉｇを含んでいた。［ＬＩＣＲ−２株によって分泌され
る鎖の量（１００ｎｇ／ｍ Ｑ ）は一般に我々のＩｇ
検査系の感度より低かった。しかしながら、ＬＩＣＲ−
２で得られるＩｇ鎖の産生が、その後の融合で増加する
可能性は排除できない。ヒト及びマウスのし鎖とε鎖は
これらの検査系で検）出できなかった。］クローンによ
って産生されるＩｇの量はミエローマ／リンパ芽球細胞
株によらず、またリンパ球の給源によらず同程度であっ
た。Ｉｇ分泌性クローンの７０〜７５％が１〜１０μｇ
／ｍＱのＩｇを産生し、２５〜３０％は１１〜１００μ
ｇ／ｍ Ｑの工ｇを生産した。８０〜９０％のウェルで
は、１種のクラスのＩｇのみが検出された。主要なＩｇ
クラス（ＩｇＭｐＩｇＧ、ＩｇＡ）の各々を分泌するク
ローンの相対的な比率は、ミエローマまたはリンパ芽球
の融合相手には左右されなかったが、リンパ球の給源に
影響されるようである。末梢血リンパ球から採取された
クローンと、乳ガン患者のわきの下の９２３節から採取
したものとの間には差がみられた。ＩｇＡ分泌性のクロ
ーンがわきの下のリンパ節との融合から高比率で得られ
、一方末梢血リンパ球との融合では一般にＩｇＭを分泌
するクローンが多かった。
た。２０〜８０％が培養上清ＩＩＩＱ当り５００ｎｇの
Ｉｇを含んでいた。［ＬＩＣＲ−２株によって分泌され
る鎖の量（１００ｎｇ／ｍ Ｑ ）は一般に我々のＩｇ
検査系の感度より低かった。しかしながら、ＬＩＣＲ−
２で得られるＩｇ鎖の産生が、その後の融合で増加する
可能性は排除できない。ヒト及びマウスのし鎖とε鎖は
これらの検査系で検）出できなかった。］クローンによ
って産生されるＩｇの量はミエローマ／リンパ芽球細胞
株によらず、またリンパ球の給源によらず同程度であっ
た。Ｉｇ分泌性クローンの７０〜７５％が１〜１０μｇ
／ｍＱのＩｇを産生し、２５〜３０％は１１〜１００μ
ｇ／ｍ Ｑの工ｇを生産した。８０〜９０％のウェルで
は、１種のクラスのＩｇのみが検出された。主要なＩｇ
クラス（ＩｇＭｐＩｇＧ、ＩｇＡ）の各々を分泌するク
ローンの相対的な比率は、ミエローマまたはリンパ芽球
の融合相手には左右されなかったが、リンパ球の給源に
影響されるようである。末梢血リンパ球から採取された
クローンと、乳ガン患者のわきの下の９２３節から採取
したものとの間には差がみられた。ＩｇＡ分泌性のクロ
ーンがわきの下のリンパ節との融合から高比率で得られ
、一方末梢血リンパ球との融合では一般にＩｇＭを分泌
するクローンが多かった。
Ｎ５−１及びＬＩＣＲ−２との融合から得られ細胞によ
るＩｇ分泌の安定性を２〜３ヶ月継代培養して比較する
と、Ｉｇを分泌しつづける培養のパーセントは２つの融
合相手の場合で同等であった（６２〜７０％）。融合後
４ケ月と７ケ月では、Ｎ５−１及びＬＩＣＲ’−２融合
体からの培養物の約５％がＩｇを分泌しつづれた。２ケ
月目゛にＩｇを分泌している３２゛ 株のＮ５−１由来
の細胞と１９株のＬＩＣＲ−２由来の細胞を１回または
２回クローン化したところ（ｌウェル当り１細胞として
）、７０〜８０％の事例に安定したＩｇ分泌性゛クロー
ンを選択できた（５ケ月間観察した）。
るＩｇ分泌の安定性を２〜３ヶ月継代培養して比較する
と、Ｉｇを分泌しつづける培養のパーセントは２つの融
合相手の場合で同等であった（６２〜７０％）。融合後
４ケ月と７ケ月では、Ｎ５−１及びＬＩＣＲ’−２融合
体からの培養物の約５％がＩｇを分泌しつづれた。２ケ
月目゛にＩｇを分泌している３２゛ 株のＮ５−１由来
の細胞と１９株のＬＩＣＲ−２由来の細胞を１回または
２回クローン化したところ（ｌウェル当り１細胞として
）、７０〜８０％の事例に安定したＩｇ分泌性゛クロー
ンを選択できた（５ケ月間観察した）。
細胞表面抗原に反応するヒトモノクローナル抗体ヒトの
リンパ球をＭＳ−１及びＬＩＣＲ−２と融合して得た培
養体は、細胞表面抗原と反応する抗体を分泌することが
同定された。腎性の自己免疫疾患患者の肺臓からとった
リンパ球とＮ５−１を融合してヒトモノクローナル抗体
Ｅｖ２４８を得た。このヒトモノクローナル抗体は検査
した正常細胞には存在しない悪性化細胞の表面抗原を検
出する。固形腫瘍細胞では、抗原は上皮細胞に限定され
でおり、間充織または神経性外胚葉起源の固形腫瘍には
みられない（第３表）。造血幹細胞起源の細胞ではＥｖ
２４８ヒトモノクローナル抗体は全てのあるいは大抵の
造血幹性の悪性化したものの抗原を検出する。、ＥＢＶ
（Ｅｐｓｔｅｉｎ−Ｂａｒｒウィルス）でトランスフ
オーム（形質転換）したＢ細胞の全てにも同様である。
リンパ球をＭＳ−１及びＬＩＣＲ−２と融合して得た培
養体は、細胞表面抗原と反応する抗体を分泌することが
同定された。腎性の自己免疫疾患患者の肺臓からとった
リンパ球とＮ５−１を融合してヒトモノクローナル抗体
Ｅｖ２４８を得た。このヒトモノクローナル抗体は検査
した正常細胞には存在しない悪性化細胞の表面抗原を検
出する。固形腫瘍細胞では、抗原は上皮細胞に限定され
でおり、間充織または神経性外胚葉起源の固形腫瘍には
みられない（第３表）。造血幹細胞起源の細胞ではＥｖ
２４８ヒトモノクローナル抗体は全てのあるいは大抵の
造血幹性の悪性化したものの抗原を検出する。、ＥＢＶ
（Ｅｐｓｔｅｉｎ−Ｂａｒｒウィルス）でトランスフ
オーム（形質転換）したＢ細胞の全てにも同様である。
しかしながら、ＥＶ２４８抗原は、造血幹起源のいかな
る悪性化していない細胞（Ｂ細胞、■細胞、マクロファ
ージ、顆粒球、血小板、赤血板）では検出されなかった
。（第２表）。ｔｉｖ２４ｇ抗原は脂質である。その分
布はこれが第■群の腫瘍抗原であることを示している〔
１、オールド、キャンサー・リサーチ（Ｏｌｄ、１、、
Ｃａｎｃｅ； Ｒｅ５ｅａｒｃｈ） ４１、（３６１−
３７５）（１９８１”ｌ）。
る悪性化していない細胞（Ｂ細胞、■細胞、マクロファ
ージ、顆粒球、血小板、赤血板）では検出されなかった
。（第２表）。ｔｉｖ２４ｇ抗原は脂質である。その分
布はこれが第■群の腫瘍抗原であることを示している〔
１、オールド、キャンサー・リサーチ（Ｏｌｄ、１、、
Ｃａｎｃｅ； Ｒｅ５ｅａｒｃｈ） ４１、（３６１−
３７５）（１９８１”ｌ）。
ヒトのモノクローナル抗体ＥＶ２４８はガンの診断に有
用である。ＥＶ２４８抗２原１日対する細胞の免疫測定
は、正常な細胞と悪性化細胞とを区別し、また上皮性起
源の腫瘍を間充織性の腫瘍からあるいは神経外肝葉性起
源の腫瘍から区別する手段である（第３表）。この検査
法は、特に初代ガンの給源が腫瘍の管理及び治療方法を
決めるようなところでは、転移した腫瘍の診断にとって
重要である。ヒトモノクローナル杭体ＥＶ２４８に許 よる分析は正常細胞を造血幹細胞起源の悪性化細胞と区
別するために有用である。
用である。ＥＶ２４８抗２原１日対する細胞の免疫測定
は、正常な細胞と悪性化細胞とを区別し、また上皮性起
源の腫瘍を間充織性の腫瘍からあるいは神経外肝葉性起
源の腫瘍から区別する手段である（第３表）。この検査
法は、特に初代ガンの給源が腫瘍の管理及び治療方法を
決めるようなところでは、転移した腫瘍の診断にとって
重要である。ヒトモノクローナル杭体ＥＶ２４８に許 よる分析は正常細胞を造血幹細胞起源の悪性化細胞と区
別するために有用である。
ヒトのモノクローナル、抗体Ｇｅ−１はＬＩＣＲ−２を
肺ガンにかかった患者のリンパ節からのリンパ球と融合
して調製した（第３表）。このＨｍ Ａ ｂは肺ガン細
胞の細胞抗原及び間充織あるいは神経外胚葉的に得られ
る腫瘍を検出する。それ故に、この抗体はこれらガンの
診断に有用である。
肺ガンにかかった患者のリンパ節からのリンパ球と融合
して調製した（第３表）。このＨｍ Ａ ｂは肺ガン細
胞の細胞抗原及び間充織あるいは神経外胚葉的に得られ
る腫瘍を検出する。それ故に、この抗体はこれらガンの
診断に有用である。
細胞内抗体と反応するヒトのモノクローナル抗体ＭＳ−
１あるいはＬＩＣＲ−２を大腸ガンあるいは乳ガビ患者
のリンパ節からとったリンパ球と融合すると、細胞内抗
原と反応するヒトモノクローナル抗体を分泌するハイブ
リドーマが得られる（第１表）。Ｃｈ５、Ｔｅ３９、Ｈ
ｕ４４、Ｇｒ４３１及びＣｈ１３の抗原系を含み、これ
らの抗体と夫々反応する細胞系統が第５表にあげられて
いる。
１あるいはＬＩＣＲ−２を大腸ガンあるいは乳ガビ患者
のリンパ節からとったリンパ球と融合すると、細胞内抗
原と反応するヒトモノクローナル抗体を分泌するハイブ
リドーマが得られる（第１表）。Ｃｈ５、Ｔｅ３９、Ｈ
ｕ４４、Ｇｒ４３１及びＣｈ１３の抗原系を含み、これ
らの抗体と夫々反応する細胞系統が第５表にあげられて
いる。
（以下余白）
第 １ 表
Ｉｇクラス 融合相手 リンパ球の給源ＥＶ２４８
ＩｇＭ Ｎ５−１ 肺臓、腎性自
己免疫疾患Ｃｈ ５ ＩｇＭ Ｎ５−１
リンパ節、大腸ガンＴｅ３９ ＩｇＭ
’Ｎ５−１ リンパ節、大腸ガンＨｕ４４
ＩｇＡ −、ＬＩＣＲ−２リンパ節、乳ガンＧｒ４
３１ ＩｇＭ 、 Ｎ５−１ リンパ
節、乳ガンＣｈ１３ ＩｇＭ Ｎ５−１
リンパ節、大腸ガンＧｅ Ｉ ＩｇＡ ”
、 ’ＬＩＣＲ−２リンパ節、肺腫瘍（以下余白） 第２表 ヒトモノクローナル抗体によって認識される細胞表面抗
原造血幹細胞起源の細胞における分布 ｖ２４８ 末梢血 Ｂ細胞 ｏｏｏｏ。
ＩｇＭ Ｎ５−１ 肺臓、腎性自
己免疫疾患Ｃｈ ５ ＩｇＭ Ｎ５−１
リンパ節、大腸ガンＴｅ３９ ＩｇＭ
’Ｎ５−１ リンパ節、大腸ガンＨｕ４４
ＩｇＡ −、ＬＩＣＲ−２リンパ節、乳ガンＧｒ４
３１ ＩｇＭ 、 Ｎ５−１ リンパ
節、乳ガンＣｈ１３ ＩｇＭ Ｎ５−１
リンパ節、大腸ガンＧｅ Ｉ ＩｇＡ ”
、 ’ＬＩＣＲ−２リンパ節、肺腫瘍（以下余白） 第２表 ヒトモノクローナル抗体によって認識される細胞表面抗
原造血幹細胞起源の細胞における分布 ｖ２４８ 末梢血 Ｂ細胞 ｏｏｏｏ。
□ □、 Ｔ細胞 ｏｏｏ
ｏ。
ｏ。
１マクロフアージ ｏｏ。
顆粒球 ｏｏｏ。
−赤血球 −ｏｏｏｏ。
リンパ節
Ｂ細胞 ｏ。
Ｔ細胞 ００
肺細胞 ０
ＥＢＶ−形質転換細胞 −・・・・リンパ腫 び
、血 Ｂ細胞 ・・・・ Ｔ細胞 ・・・・ 細胞内成分は間接免疫蛍光法によって分析された。
、血 Ｂ細胞 ・・・・ Ｔ細胞 ・・・・ 細胞内成分は間接免疫蛍光法によって分析された。
第３表
Ｓ讐１２２２ ＋ ＳＫ−ＭＥＬ−
６４１１−３Ｋ−ＬＣ−２１＋ ５Ｋ−ＲＣ−２９＋ Ｔ−２４−ＥＮ − 第４表 細胞表層抗原と反応するヒトモノクローナル抗体乳ガン
・・・・ ・・０・ ・・・・大腸ガ
ン ０・・ ０００ ・・・。
６４１１−３Ｋ−ＬＣ−２１＋ ５Ｋ−ＲＣ−２９＋ Ｔ−２４−ＥＮ − 第４表 細胞表層抗原と反応するヒトモノクローナル抗体乳ガン
・・・・ ・・０・ ・・・・大腸ガ
ン ０・・ ０００ ・・・。
肺ガン ｏｏ・・ ・・０・ ・・・・
腎ガン ｏＯ・ ・・・ ・・・膀
胱ガン ・０・０ ０・Ｑ・ ・・・・卵巣
ガン ０・Ｏ＠Ｑ・ ・・・子宮／子宮頚
ガン ・・ Ｏ・メラノーｖ
００００ ００００ ・・・・アストロサイトーマ
ｏｏＯ・・・ ・・・造血幹腫瘍 ・・
・ ＥＢＶ−形質転換細胞 ・・・ ＯｏＯ・・・
″繊維芽細胞 ｏｏｏｏ ｏｏｏｏ
・・・・正常腎 ｏｏｏ ｏｏｏ ｅ・・
細胞表面抗原は吸収による解析と赤血球ロゼツト形成法
で解析した。
腎ガン ｏＯ・ ・・・ ・・・膀
胱ガン ・０・０ ０・Ｑ・ ・・・・卵巣
ガン ０・Ｏ＠Ｑ・ ・・・子宮／子宮頚
ガン ・・ Ｏ・メラノーｖ
００００ ００００ ・・・・アストロサイトーマ
ｏｏＯ・・・ ・・・造血幹腫瘍 ・・
・ ＥＢＶ−形質転換細胞 ・・・ ＯｏＯ・・・
″繊維芽細胞 ｏｏｏｏ ｏｏｏｏ
・・・・正常腎 ｏｏｏ ｏｏｏ ｅ・・
細胞表面抗原は吸収による解析と赤血球ロゼツト形成法
で解析した。
細胞内成分は間接的免疫蛍光法で解析した。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、ヒトの細胞の表面抗原及び細胞内成分に作用するヒ
トモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマ細胞系
統。 ２、Ｅｖ２４８、Ｃｈ５、Ｃｈ１３、Ｔｅ３９、Ｈｕ４
４、Ｇｅ−１、Ｇｒ４３１、Ｇｒ１６９及びＳｐ９０９
からなる群から選択される特許請求の範囲第１項記載の
モノクローナル抗体を産生するハイブリドーマ細胞系統
。 ３、特許請求の範囲第１項記載の細胞株によって産生さ
れるヒトモノクローナル抗体。 ４、Ｅｖ２４８、Ｃｈ５、Ｃｈ１３、Ｔｅ３９、Ｈｕ４
４、Ｇｅ−１、Ｇｒ４３１、Ｇｒ１６９及びＳｐ９０９
からなる群から選択される特許請求の範囲第３項記載の
ヒトモノクローナル抗体。 ５、細胞内成分あるいは表面抗原と反応しうるヒトモノ
クローナル抗体とヒトの細胞を接触させ、抗体と成分あ
るいは表面抗原との反応を観察することを含むコトの細
胞表面抗原あるいは細胞内成分を検出する方法。 ６、上記の細胞が培養されたヒトの細胞あるいは個体か
ら取った組織標本であり、その組織標本が新鮮であるか
、凍結してあるかまたはワックスに包埋されている特許
請求の範囲第５項記載の方法。 ７、上記のヒトモノクローナル抗体がＥｖ２４８、Ｃｈ
５、Ｃｈ１３、Ｔｅ３９、Ｈｕ４４、Ｇｅ−１、Ｇｒ４
３１、Ｇｒ１６９及びＳｐ９０９からなる群から選ばれ
る特許請求の範囲第５項記載の方法。 ８、上記の細胞表面抗原がＥｖ２４８抗原で、上記の抗
体がＨｍＡｂ Ｅｖ２４８である特許請求の範囲第５項
記載の方法。 ９、上記の細胞表面抗原がＧｒ１６９抗原かＳｐ９０９
で、上記の抗体がＨｍＡｂ Ｇｒ１６９かＳｐ９０９で
ある特許請求の範囲第５項記載の方法。 １０、上記の細胞内成分がＣｈ５、Ｃｈ１３、Ｔｅ３９
、Ｈｕ４４及びＧｅ−１からなる群から選ばれたＨｍＡ
ｂによって接せられる特許請求の範囲第５項記載の方法
。 １１、上記の細胞を含む標本とＨｍＡｂ Ｅｖ２４８と
を接触させ、その反応を観察することを含む悪性化細胞
を検出する方法。 １２、上記の細胞がかきとられた組織にあり、その組織
が新鮮であるか、凍結してあるか、またはワックスに包
埋されている特許請求の範囲第１１項記載の方法。 １３、固形腫瘍のかきとった標本をＨｍＡｂ Ｅｖ２４
８と接触させ、細胞と抗体の間の反応を観察することを
含む固形腫瘍中の上皮細胞を検出する方法。 １４、上記の悪性化した細胞が造血幹細胞起源である特
許請求の範囲第１１項記載の方法。 １５、腫瘍からの細胞を、既知の起源の細胞と反応しう
るヒトモノクローナル抗体と接触させ、細胞と抗体の間
の反応を観察することを含む組織の起源に対して転移し
た腫瘍または初代腫瘍の表現型をきめる方法。 １６、上記のＨｍＡｂがＥｖ２４８で、組織の起源が上
皮性ガンである特許請求の範囲第１５項記載の方法。 １７、Ｅｖ２４８、Ｃｈ５、Ｃｈ１３、Ｔｅ３９、Ｈｕ
４４、Ｇｅ−１、Ｇｒ４３１、Ｇｒ１６９及びＳｐ９０
９からなる群から選ばれる細胞表面抗原または細胞内成
分と反応しうるＨｍＡｂ含む悪性化細胞を測定する検定
群。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US616397 | 1984-06-01 | ||
| US06/616,397 US4695538A (en) | 1984-06-01 | 1984-06-01 | Human monoclonal antibodies to cell surface antigens |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS619285A true JPS619285A (ja) | 1986-01-16 |
Family
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Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP60120341A Pending JPS619285A (ja) | 1984-06-01 | 1985-06-01 | 細胞表面及び細胞内抗原に対するヒトモノクローナル抗体 |
Country Status (4)
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|---|---|
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| EP (1) | EP0163303A3 (ja) |
| JP (1) | JPS619285A (ja) |
| CA (1) | CA1246473A (ja) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS61103837A (ja) * | 1984-10-26 | 1986-05-22 | Wakunaga Seiyaku Kk | 抗ヒト癌モノクロ−ナル抗体 |
| JPS61104783A (ja) * | 1985-09-10 | 1986-05-23 | Wakunaga Seiyaku Kk | 抗ヒト癌モノクロ−ナル抗体生産性ハイブリド−マ |
| JPH02502586A (ja) * | 1987-12-10 | 1990-08-16 | ブリテツシユ・テレコミユニケイシヨンズ・パブリツク・リミテツド・カンパニー | 光学装置 |
| JP2008246644A (ja) * | 2007-03-30 | 2008-10-16 | Daihen Corp | 搬送装置 |
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| US4938948A (en) * | 1985-10-07 | 1990-07-03 | Cetus Corporation | Method for imaging breast tumors using labeled monoclonal anti-human breast cancer antibodies |
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| FR2606034B1 (fr) * | 1986-10-31 | 1989-06-02 | Cird | Nouvelle proteine de surface des cellules basales de l'epiderme, anticorps capables de reconnaitre cette proteine, et leur utilisation, et lignees cellulaires hybrides capables de secreter de tels anticorps |
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| US5212085A (en) * | 1987-12-09 | 1993-05-18 | The General Hospital Corporation | Sf-25 colon adenocarcinoma antigen, and antibodies with recognize this antigen |
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| US4443427A (en) * | 1982-06-21 | 1984-04-17 | Sidney Farber Cancer Institute, Inc. | Monoclonal antibody |
| US4613576A (en) * | 1983-03-09 | 1986-09-23 | Sloan-Kettering Institute For Cancer Research | Human monoclonal antibodies to cancer cells |
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-
1984
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-
1985
- 1985-05-30 EP EP85106645A patent/EP0163303A3/en not_active Ceased
- 1985-05-31 CA CA000482989A patent/CA1246473A/en not_active Expired
- 1985-06-01 JP JP60120341A patent/JPS619285A/ja active Pending
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| JPH02502586A (ja) * | 1987-12-10 | 1990-08-16 | ブリテツシユ・テレコミユニケイシヨンズ・パブリツク・リミテツド・カンパニー | 光学装置 |
| JPH07109462B2 (ja) * | 1987-12-10 | 1995-11-22 | ブリテツシユ・テレコミユニケイシヨンズ・パブリツク・リミテツド・カンパニー | 光学装置 |
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| EP0163303A2 (en) | 1985-12-04 |
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