JPS61275300A - ポリペプチド、その製法、形質転換微生物、その製法、複製可能なプラスミド表現ベヒクル、その製法、ｄｎａ配列、ポ−タブル表現ユニツト、ポリペプチド含有抗ウイルス剤 - Google Patents
ポリペプチド、その製法、形質転換微生物、その製法、複製可能なプラスミド表現ベヒクル、その製法、ｄｎａ配列、ポ−タブル表現ユニツト、ポリペプチド含有抗ウイルス剤Info
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- JPS61275300A JPS61275300A JP61018264A JP1826486A JPS61275300A JP S61275300 A JPS61275300 A JP S61275300A JP 61018264 A JP61018264 A JP 61018264A JP 1826486 A JP1826486 A JP 1826486A JP S61275300 A JPS61275300 A JP S61275300A
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- leu
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- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
産業上の利用分野
本発明は、ポリペプチド殊にインターフェロン類縁体、
例えばヒトインターフェロンα２の類縁体、その製法及
びこれを含有する医薬組成物並びに前記類縁体を表現す
るように微生物を遺伝学的に変性すること、この際に得
られる微生物、変性に使用される遺伝学的物質及びその
ためのベクターに関する。本発明によるヒトインター７
二ロンα２（以後これをＩＦＮ−Ｃ２と称する）類縁体
は、重要な生理学的活性を有する。
例えばヒトインターフェロンα２の類縁体、その製法及
びこれを含有する医薬組成物並びに前記類縁体を表現す
るように微生物を遺伝学的に変性すること、この際に得
られる微生物、変性に使用される遺伝学的物質及びその
ためのベクターに関する。本発明によるヒトインター７
二ロンα２（以後これをＩＦＮ−Ｃ２と称する）類縁体
は、重要な生理学的活性を有する。
従来の技術
天然のインターフェロンは、生体内及び試験管内の双方
で、組織培養液中の種々の生細胞によシ、特定の誘導物
質例えば細菌感染、免疫刺激及び化学的誘導物質類に応
答して産出される公知物質１ある。これらは、新ＲＮＡ
及び蛋白質の合成を包含する細胞代謝法１０種々のＲＮ
Ａ及びＤＮＡウィルスの複製を阻害することのできる蛋
白質として定義されている〔インターフェロン命名委員
会（Ｃｏｍｍ１ ｔｔｅｅ ｏｎ Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏ
ｎＮｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ ） ｌ ９８０ ） ｏ
天然インターフェロンの３種の主要群は、データ分類さ
れており、通例、抗原塵に基ずきアルファ（ＩＦＮ−α
）、ベータ（ｇＦＮ−β）及びガンマ（ＩＦＮ−γ）と
称されている。インターフェロン例えば１ＦＮ−αは、
抗ウィルス、抗増殖性及び免疫変性活性を有する。
で、組織培養液中の種々の生細胞によシ、特定の誘導物
質例えば細菌感染、免疫刺激及び化学的誘導物質類に応
答して産出される公知物質１ある。これらは、新ＲＮＡ
及び蛋白質の合成を包含する細胞代謝法１０種々のＲＮ
Ａ及びＤＮＡウィルスの複製を阻害することのできる蛋
白質として定義されている〔インターフェロン命名委員
会（Ｃｏｍｍ１ ｔｔｅｅ ｏｎ Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏ
ｎＮｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ ） ｌ ９８０ ） ｏ
天然インターフェロンの３種の主要群は、データ分類さ
れており、通例、抗原塵に基ずきアルファ（ＩＦＮ−α
）、ベータ（ｇＦＮ−β）及びガンマ（ＩＦＮ−γ）と
称されている。インターフェロン例えば１ＦＮ−αは、
抗ウィルス、抗増殖性及び免疫変性活性を有する。
インターフェロンの生物学的特性の情報は、主として、
細胞培養技術マ形成された物質の研究から得られている
。組換えＤＮＡ技術を用いている最近の結果は、ヒト白
血球インターフェロン（Ｈｕ−１ＦＮ−α）は、少なく
とも８種の異なる分子の１集団であることを示している
〔ゲデル（Ｇｏｅｄｄｅｌ ）等によル：＊イチｚ７（
Ｎａｔｕｒｅ ）１９８１．２９０．２０〜２６頁参照
〕。更に、７ ｖン（Ａ１１ｅｎ ）及びフ７：／テス
（Ｆａｎｔｅｓ）は＄ イチュ７ （Ｎａｔｕｒｅ ）
、１９８０．２８７，４０８〜４１１頁に、ナ−ｒ Ａ
／ Ａ Ｊｌ胞（Ｎａｍａｌｗａ ｃｅｌｌｓ）からの
インターフェロン製造時の小異質性は、異なるアミノ酸
配列を有する少なくとも６葎の同族蛋白質の存在及び従
って異なる構造の遺伝子に帰因しうることを記載してい
る。この進展にもかかわらず、Ｈｕ−ＩＦＮ−αの個々
の亜種の“明確な生理学的特性に関しては非常に僅かく
知られているだけ１ある。
細胞培養技術マ形成された物質の研究から得られている
。組換えＤＮＡ技術を用いている最近の結果は、ヒト白
血球インターフェロン（Ｈｕ−１ＦＮ−α）は、少なく
とも８種の異なる分子の１集団であることを示している
〔ゲデル（Ｇｏｅｄｄｅｌ ）等によル：＊イチｚ７（
Ｎａｔｕｒｅ ）１９８１．２９０．２０〜２６頁参照
〕。更に、７ ｖン（Ａ１１ｅｎ ）及びフ７：／テス
（Ｆａｎｔｅｓ）は＄ イチュ７ （Ｎａｔｕｒｅ ）
、１９８０．２８７，４０８〜４１１頁に、ナ−ｒ Ａ
／ Ａ Ｊｌ胞（Ｎａｍａｌｗａ ｃｅｌｌｓ）からの
インターフェロン製造時の小異質性は、異なるアミノ酸
配列を有する少なくとも６葎の同族蛋白質の存在及び従
って異なる構造の遺伝子に帰因しうることを記載してい
る。この進展にもかかわらず、Ｈｕ−ＩＦＮ−αの個々
の亜種の“明確な生理学的特性に関しては非常に僅かく
知られているだけ１ある。
前記のように、ヒト白血球インターフェロンは多数の異
なる分子例えばＩＦＮ−α、及びＩＦＮ−α２の１集団
であり、本発明は特にＩＦＮ−α２の類縁体に関する。
なる分子例えばＩＦＮ−α、及びＩＦＮ−α２の１集団
であり、本発明は特にＩＦＮ−α２の類縁体に関する。
ＩＦＮ−ａ２ｏ特定ノ切端（ｔｒｕｎｃａｔｅｄ ）
類縁体の製造は文献に記載されている。例えば、これは
、””Ｉ （ＷｅＣｋ ）、Ｐ、 Ｋ、等によるジャー
ナル・オブ・セル、ビオタム。サブレ、（Ｊ。
類縁体の製造は文献に記載されている。例えば、これは
、””Ｉ （ＷｅＣｋ ）、Ｐ、 Ｋ、等によるジャー
ナル・オブ・セル、ビオタム。サブレ、（Ｊ。
Ｃｅ１１． Ｂｉｏｃｈｅｍ、 ５ｕｐｐ１． ）６
： ｌ ０４ 、 ｌ Ｑ ８２中には、ハイブリッド
白血球インターフェロン１の研究が、白血球インターフ
ェロンのＮ−及びＣ−末端部の双方がレセッター結合に
包含されることを示していると記載されている。これら
の研究は、特定のハイブリッドを包含してお夛、Ｃ−末
端１５アミノ酸は明らかにこれらインターフェロンの活
性に重大な作用を有することを包含している。切端され
九Ｃ−末端を有する多くのインターフェロンα２の類縁
体が製造されておシ、例えば１ＦＮ−α２（１−１６０
）、１ＦＮ−α２（１−１５５）及びＩＦＮ−α２（１
−１５２）が、すべて、それらの抗ウィルス活性を保持
することが報告されているにもかかわらず、ＩＦＮ−α
２に比べて抗増殖性又はＮに一細胞刺激活性から抗ウィ
ルス活性の適当な分離は明らかでない。
： ｌ ０４ 、 ｌ Ｑ ８２中には、ハイブリッド
白血球インターフェロン１の研究が、白血球インターフ
ェロンのＮ−及びＣ−末端部の双方がレセッター結合に
包含されることを示していると記載されている。これら
の研究は、特定のハイブリッドを包含してお夛、Ｃ−末
端１５アミノ酸は明らかにこれらインターフェロンの活
性に重大な作用を有することを包含している。切端され
九Ｃ−末端を有する多くのインターフェロンα２の類縁
体が製造されておシ、例えば１ＦＮ−α２（１−１６０
）、１ＦＮ−α２（１−１５５）及びＩＦＮ−α２（１
−１５２）が、すべて、それらの抗ウィルス活性を保持
することが報告されているにもかかわらず、ＩＦＮ−α
２に比べて抗増殖性又はＮに一細胞刺激活性から抗ウィ
ルス活性の適当な分離は明らかでない。
ＩＦＮ−α２ （４−１６０）及びＩＦＮ−α２（４−
１６６）も記載されているが、これら切端された類縁体
も、ＩＦＮ−α２に比べて、抗増殖性又はＮＫ−細胞刺
激活性からの抗ウイルス性の有意義な分離も開示されて
いない。しかしながら、１ＦＮ−α２（４−１５５）は
、Ｉウディ細胞増殖０５０％阻害をすることが要求され
る抗ウイルス単位の数値がＩＦＮ−α２の一貫した１０
倍の増加を示すことを発見した。
１６６）も記載されているが、これら切端された類縁体
も、ＩＦＮ−α２に比べて、抗増殖性又はＮＫ−細胞刺
激活性からの抗ウイルス性の有意義な分離も開示されて
いない。しかしながら、１ＦＮ−α２（４−１５５）は
、Ｉウディ細胞増殖０５０％阻害をすることが要求され
る抗ウイルス単位の数値がＩＦＮ−α２の一貫した１０
倍の増加を示すことを発見した。
文献には、ＩＦＮ−α２とＩＦＮ−α、又は１ＦＮ−α
■との末端ハイブリッＰの製造に関する多くの記載も包
含されている。ここで、末端ハイブリッドに関する記載
は、ハイブリッドが２セクション即ち１インターフエロ
ンの配列中のアミノ酸を構成するハイブリッドのＮ−末
端セクション及び他のインターフェロンの配列中のアミ
ノ酸を構成するＣ−末端セクションよシなる２種のイン
ターフェロン分子のハイブリッドを意味すると理解され
る。従って、ＩＦＮ−α、（ｌ−９２）／α２（９２−
１６５）、ＩＦＮ−α、（１−６２）／α２（６２−１
６５）、１ＦＮ−α２（１−９１）／α１（９３−１６
６）及びＩＦＮ〜α２（１−６１）／α、（６３−１６
６）はすべて、抗ウィルス活性を有すると記載されてい
る〔ヴ工：、／り（ＷｅＣｋ）、Ｐ、 Ｋ、等による（
１９８１）アンチグイラル・アクティビティス・オプ・
ハイブリッド・オツ・ツー・メージャ・ヒユーマン・ロ
イコサイト・インターフェロンズ（ＡｎｔｉＶｊｒａｌ
ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ ｏｆ ｈｙｂｒｉｄｓ ｏｆ
ｔｗｏ ｍａｊｏｒ ｈｕｍａｎｌｅｕｋＯｃｙｔｅ
１ｎｔｅｒｆｅｒｏｎｓ ）、ヌクレイツク・アシ！
−＋） ｆ−ｆ （Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃ１ｄｓ Ｒｅ
５ｅａｒｃｈ） ｇ、６１５３〜６１６６参照〕。ＩＦ
Ｎ−α２（１−１４９）／α−１（１５１−１６６）、
ＩＦＮ−α−Ｉ （１−１５０）／ｃ！２（１５０−１
６５）、ＩＦＮ−α２（１−１４９）／α、（１５１−
１６６）及びＩＦＮ−α、（１−１５０）／α２（１５
０−１６５）は、すべて抗ウィルス活性を有すると記載
石れている〔フランク（Ｆｒａｎｋｅ ） 、 Ａ−Ｅ
ｏ等による（１９８２）、カル−キシターミナル・リジ
オン・オブ・ハイブリッド・ロイコサイト・インター７
エロンズ・アフェクッ・アンチヴイラル・スペシフィシ
ティ（Ｃａｒｂｏｘｙｔｅｒｍｉｎａｌ ｒｅｇｉｏｎ
ｏｆ ｈｙｂｒｉｄ １ｅｕｋｏｃｙｔｅ １ｎｔｅ
ｒｆｅ−ｒｏｎｓ ａｆｆｅｃｔｓ ａｎｔｉｖｉｒａ
ｌ ５ｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ ） 、 ＤＮＡ。
■との末端ハイブリッＰの製造に関する多くの記載も包
含されている。ここで、末端ハイブリッドに関する記載
は、ハイブリッドが２セクション即ち１インターフエロ
ンの配列中のアミノ酸を構成するハイブリッドのＮ−末
端セクション及び他のインターフェロンの配列中のアミ
ノ酸を構成するＣ−末端セクションよシなる２種のイン
ターフェロン分子のハイブリッドを意味すると理解され
る。従って、ＩＦＮ−α、（ｌ−９２）／α２（９２−
１６５）、ＩＦＮ−α、（１−６２）／α２（６２−１
６５）、１ＦＮ−α２（１−９１）／α１（９３−１６
６）及びＩＦＮ〜α２（１−６１）／α、（６３−１６
６）はすべて、抗ウィルス活性を有すると記載されてい
る〔ヴ工：、／り（ＷｅＣｋ）、Ｐ、 Ｋ、等による（
１９８１）アンチグイラル・アクティビティス・オプ・
ハイブリッド・オツ・ツー・メージャ・ヒユーマン・ロ
イコサイト・インターフェロンズ（ＡｎｔｉＶｊｒａｌ
ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ ｏｆ ｈｙｂｒｉｄｓ ｏｆ
ｔｗｏ ｍａｊｏｒ ｈｕｍａｎｌｅｕｋＯｃｙｔｅ
１ｎｔｅｒｆｅｒｏｎｓ ）、ヌクレイツク・アシ！
−＋） ｆ−ｆ （Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃ１ｄｓ Ｒｅ
５ｅａｒｃｈ） ｇ、６１５３〜６１６６参照〕。ＩＦ
Ｎ−α２（１−１４９）／α−１（１５１−１６６）、
ＩＦＮ−α−Ｉ （１−１５０）／ｃ！２（１５０−１
６５）、ＩＦＮ−α２（１−１４９）／α、（１５１−
１６６）及びＩＦＮ−α、（１−１５０）／α２（１５
０−１６５）は、すべて抗ウィルス活性を有すると記載
石れている〔フランク（Ｆｒａｎｋｅ ） 、 Ａ−Ｅ
ｏ等による（１９８２）、カル−キシターミナル・リジ
オン・オブ・ハイブリッド・ロイコサイト・インター７
エロンズ・アフェクッ・アンチヴイラル・スペシフィシ
ティ（Ｃａｒｂｏｘｙｔｅｒｍｉｎａｌ ｒｅｇｉｏｎ
ｏｆ ｈｙｂｒｉｄ １ｅｕｋｏｃｙｔｅ １ｎｔｅ
ｒｆｅ−ｒｏｎｓ ａｆｆｅｃｔｓ ａｎｔｉｖｉｒａ
ｌ ５ｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ ） 、 ＤＮＡ。
１．２２３〜２３０参照〕。
内部α、／α２ハイゾリッＰ（ここでＩＦＮ−α。
セグメントハ、インターフェロンα２のセグメントによ
シ側面接合されている）は、抗ウィルス活性を有すると
記載されておシ、この類縁体は［： Ｔｈｒ６８． Ａ
ｓｐ” 、 Ｃｙｓ”５） ＩＦＮ−α２である。
シ側面接合されている）は、抗ウィルス活性を有すると
記載されておシ、この類縁体は［： Ｔｈｒ６８． Ａ
ｓｐ” 、 Ｃｙｓ”５） ＩＦＮ−α２である。
この類縁体はレーベルク（Ｒｅｈｂｅｒｇ ）、Ｅ、等
に！る（１９８２）スペシフィック・モレキュラール・
アクティビティス・オツ・レコンビナント・アンド・ハ
イブリツＰ・ロイコサイト・インターフェロンス１ジャ
ーナル・オブ・ノ々イオロジカル・ケミストリイ（５ｐ
ｅｃｉｆ ｉｃ ｍｏｌｅｃｕｌａｒａｃｔｉｖｉｔｉ
ｅｓ ｏｆ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ａｎｄ ｈｙｂ
ｒｉｄ １ｅｕｋｏ−ｃｙｔｅ １ｎｔｅｒｆｅｒｏｎ
ｓ ＠Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ＢｉｏｌｏｇｉｃａｌＣ
ｈｅｍｉｓｔｒｙ）２５７ 、１１４９７〜１１５０２
に記載されている。
に！る（１９８２）スペシフィック・モレキュラール・
アクティビティス・オツ・レコンビナント・アンド・ハ
イブリツＰ・ロイコサイト・インターフェロンス１ジャ
ーナル・オブ・ノ々イオロジカル・ケミストリイ（５ｐ
ｅｃｉｆ ｉｃ ｍｏｌｅｃｕｌａｒａｃｔｉｖｉｔｉ
ｅｓ ｏｆ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ａｎｄ ｈｙｂ
ｒｉｄ １ｅｕｋｏ−ｃｙｔｅ １ｎｔｅｒｆｅｒｏｎ
ｓ ＠Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ＢｉｏｌｏｇｉｃａｌＣ
ｈｅｍｉｓｔｒｙ）２５７ 、１１４９７〜１１５０２
に記載されている。
発明を達成する手段
本発明は、少なくとも確実に天然インターフェロンの特
性を有し、特に良好な抗ウィルス活性を有する新規ポリ
ペプチドが、後の記載のようにＩＦＮ−α２又はその公
知類縁体の構造に１種以上のアミノ酸又は配列変化をも
たらすことＫより製造フきることに基ずく。ＩＦＮ−α
２に関するアミノ酸配列は公知″Ｔ％あるが、抗ウィル
ス活性を失なわずにいかなる変化がＩＦＮ−α２ポリペ
プチドに得られるかは知られていないし、正確には予言
フきない。このポリペブチＰの１領域でなされたポリペ
プチド分子への明らかに僅かな変化は、すべての生物学
的活性を破壊することができ、生物学的活性の改良は、
このポリペプチドの異なる領域における同様に僅かな変
化によって得ることが１きることが公知である。
性を有し、特に良好な抗ウィルス活性を有する新規ポリ
ペプチドが、後の記載のようにＩＦＮ−α２又はその公
知類縁体の構造に１種以上のアミノ酸又は配列変化をも
たらすことＫより製造フきることに基ずく。ＩＦＮ−α
２に関するアミノ酸配列は公知″Ｔ％あるが、抗ウィル
ス活性を失なわずにいかなる変化がＩＦＮ−α２ポリペ
プチドに得られるかは知られていないし、正確には予言
フきない。このポリペブチＰの１領域でなされたポリペ
プチド分子への明らかに僅かな変化は、すべての生物学
的活性を破壊することができ、生物学的活性の改良は、
このポリペプチドの異なる領域における同様に僅かな変
化によって得ることが１きることが公知である。
本発明のポリペプチドは、生化学的用具としても使用フ
き、例えば適当な支持体上での不動態化の後に、これら
はインターフェロンレセプターの装飾のため及び精製の
ために使用できるか又は、これらは天然インターフェロ
ンに対して生起されたモノクロナール抗体の集団間の識
別に有用であシうる。
き、例えば適当な支持体上での不動態化の後に、これら
はインターフェロンレセプターの装飾のため及び精製の
ために使用できるか又は、これらは天然インターフェロ
ンに対して生起されたモノクロナール抗体の集団間の識
別に有用であシうる。
本明細書中フ、アミノ酸に関して用いられている略字は
、ペプチＰ部門フ用いられている標準略字である〔ピュ
ア・アンド・アプライド・Ｃ式中Ｘ１ｒ Ｘ ２＋ Ｘ
’ ｒ Ｘ’ ｔ Ｘ” 、Ｘ６ｔ Ｘ７．Ｘ８ｒＸ
９ 、 Ｘ１０ 、 Ｘ１１ 、）（１５５、Ｘ１５６
、 Ｘ１５７ 、 ）（１５８゜）（１５？ 、 Ｘ
１６０ 、 Ｘ１６１ 、 ）（＋６２ 、 Ｘ１６Ｓ
、 Ｘ１６４及びＸ１６５は各々、天然のα−アミノ
酸を表わし、）（１２はＡｒｇ又はＡｌａを表わし、Ｘ
”はＡｒｇ３ＩＡｌａを表わし、Ｘ１４はＴｈｒ又はＡ
ｔａヲ表わし、Ｘ１５はＬｅｕ又はＡｌａを表わし、Ｘ
１６はＭｅｔ。
、ペプチＰ部門フ用いられている標準略字である〔ピュ
ア・アンド・アプライド・Ｃ式中Ｘ１ｒ Ｘ ２＋ Ｘ
’ ｒ Ｘ’ ｔ Ｘ” 、Ｘ６ｔ Ｘ７．Ｘ８ｒＸ
９ 、 Ｘ１０ 、 Ｘ１１ 、）（１５５、Ｘ１５６
、 Ｘ１５７ 、 ）（１５８゜）（１５？ 、 Ｘ
１６０ 、 Ｘ１６１ 、 ）（＋６２ 、 Ｘ１６Ｓ
、 Ｘ１６４及びＸ１６５は各々、天然のα−アミノ
酸を表わし、）（１２はＡｒｇ又はＡｌａを表わし、Ｘ
”はＡｒｇ３ＩＡｌａを表わし、Ｘ１４はＴｈｒ又はＡ
ｔａヲ表わし、Ｘ１５はＬｅｕ又はＡｌａを表わし、Ｘ
１６はＭｅｔ。
Ｌｅｕ又はｌｉｅを表わし、）（２１はＭｅｔ又はＬｅ
ｕを表わし、Ｘ２２はＳｅｒ 、 Ａｒｇ又ハＧｌｙ
を表ｂ Ｌ、、）（２３はＡｒｇ又はＬｙｓｔ−表わし
、Ｘ２６はＬｅｕ又ハＰｒｏを表わし、Ｘ２７はＳｅｒ
又はｐｈｅ１表わし、Ｘ２１３はＳｅｒ又はＡｌａ ｆ
表わし、Ｘ２９はＳｅｒ又はＣｙｓを表わし、）（ｌは
Ｌｅｕ又ハ１ｌｅ１表わし、Ｘ”ハＭｅｔ又はＬｙｓを
表わし、）（５２はＡｌａ 。
ｕを表わし、Ｘ２２はＳｅｒ 、 Ａｒｇ又ハＧｌｙ
を表ｂ Ｌ、、）（２３はＡｒｇ又はＬｙｓｔ−表わし
、Ｘ２６はＬｅｕ又ハＰｒｏを表わし、Ｘ２７はＳｅｒ
又はｐｈｅ１表わし、Ｘ２１３はＳｅｒ又はＡｌａ ｆ
表わし、Ｘ２９はＳｅｒ又はＣｙｓを表わし、）（ｌは
Ｌｅｕ又ハ１ｌｅ１表わし、Ｘ”ハＭｅｔ又はＬｙｓを
表わし、）（５２はＡｌａ 。
Ａｓｎ 、 Ａｓｐ又はＧｌｕを表わし、Ｘ３４はＨｉ
ｓ又はＰｒｏ ヲ宍わし、Ｘ３７はａｎｙ又はＡｌａｔ
−表わし、Ｘ３８はＰｈｅ 又はＬｅｕヲ＆ワＬ、Ｘ”
ａは単結合又はＡｓｐを衆わし、Ｘ４４はＧｔｙ又はＡ
ｌａを表ワし、Ｘ５ＧはＡｌａ又はＴｈｒ ’＆表わし
、）（５１はＧｌｕ 。
ｓ又はＰｒｏ ヲ宍わし、Ｘ３７はａｎｙ又はＡｌａｔ
−表わし、Ｘ３８はＰｈｅ 又はＬｅｕヲ＆ワＬ、Ｘ”
ａは単結合又はＡｓｐを衆わし、Ｘ４４はＧｔｙ又はＡ
ｌａを表ワし、Ｘ５ＧはＡｌａ又はＴｈｒ ’＆表わし
、）（５１はＧｌｕ 。
Ｐｒｏ又はＧｌｕを表わし、Ｘ５２はＡｌａ 又ハＴｈ
ｒ ｔ−表ワシ、Ｘ５４ハＳｅｒ 又１ｒｉ Ｐｒｏ
ｅ［ｂ Ｌ、Ｘ”はＬｅｕ又はＮ７１ｅｔを表わし、Ｘ
６１はＧｌｕ又はＡｌａを表わし、）（６３はｔｔｅ又
はＴｈｒヲ表ワＬ、Ｘ６４ハＰｈｅ又はＡｌａを表わし
、Ｘ６７はＰｈｅ又はＡｌａを−ｐｂし、Ｘ６８はＴｈ
ｒ又は５ｅｒｌ辰わし、Ｘ７０はＬｙｓ又はＧｌｕを表
わし、Ｘ７７はＡｓｐ又はＧｌｕを表わし、Ｘ７８はＧ
ｌｕ又はＧＩｎｔ表ワし、Ｘ”はＡｓｐ 、 Ｔｈｒ又
はＳｅｒを表わし、Ｘ８２はＡｓｐ 又はＧｌｕを表わ
し、Ｘ８５ハＣｙｓ 、 Ｔｈｒ 又はＳｅｒを表ワシ
、Ｘ” ハＡｓｐ 又ハＡｓｎ ｔ 表ｂ Ｌ、）（９
８ハＣｙｓ又はＬｅｕを表わし、Ｘ９９はＶａｌ又はＴ
ｈｒを表わし、ｘｌｏｏはＭｅｔ 、 ｌｌｅ又はＡｓ
ｎ ヲ表わし、Ｘ１０１はＧｌｎ 、 Ｔｈｒ又はＰｈ
ｅを表わし、×１０２ハＧｌｕ 、 Ｇｌｙ 、 Ｓｅ
ｒ 又はＡｌａを表わし、×１０３ハＧｌｕ 、 Ｖａ
ｌ又はＬｙｓを表わし、Ｘ１０４はＡｒｇ 。
ｒ ｔ−表ワシ、Ｘ５４ハＳｅｒ 又１ｒｉ Ｐｒｏ
ｅ［ｂ Ｌ、Ｘ”はＬｅｕ又はＮ７１ｅｔを表わし、Ｘ
６１はＧｌｕ又はＡｌａを表わし、）（６３はｔｔｅ又
はＴｈｒヲ表ワＬ、Ｘ６４ハＰｈｅ又はＡｌａを表わし
、Ｘ６７はＰｈｅ又はＡｌａを−ｐｂし、Ｘ６８はＴｈ
ｒ又は５ｅｒｌ辰わし、Ｘ７０はＬｙｓ又はＧｌｕを表
わし、Ｘ７７はＡｓｐ又はＧｌｕを表わし、Ｘ７８はＧ
ｌｕ又はＧＩｎｔ表ワし、Ｘ”はＡｓｐ 、 Ｔｈｒ又
はＳｅｒを表わし、Ｘ８２はＡｓｐ 又はＧｌｕを表わ
し、Ｘ８５ハＣｙｓ 、 Ｔｈｒ 又はＳｅｒを表ワシ
、Ｘ” ハＡｓｐ 又ハＡｓｎ ｔ 表ｂ Ｌ、）（９
８ハＣｙｓ又はＬｅｕを表わし、Ｘ９９はＶａｌ又はＴ
ｈｒを表わし、ｘｌｏｏはＭｅｔ 、 ｌｌｅ又はＡｓ
ｎ ヲ表わし、Ｘ１０１はＧｌｎ 、 Ｔｈｒ又はＰｈ
ｅを表わし、×１０２ハＧｌｕ 、 Ｇｌｙ 、 Ｓｅ
ｒ 又はＡｌａを表わし、×１０３ハＧｌｕ 、 Ｖａ
ｌ又はＬｙｓを表わし、Ｘ１０４はＡｒｇ 。
Ｇｌｙ 、 Ｔｈｒ 、 Ｌｅｕ 又はＡｌａを表わし
、Ｘ１０５ハＶａＩ 、 Ａｓｐ 、 Ｍｅｔ 又ハＴ
ｈｒ ｔｕｂシ、×１０６ハＧｌｙ 、 Ｔｈｒ 、
Ｇｌｕ 、 Ｌｅｕ 又はＡｓｎ ヲ表わし、Ｘ１０７
はＧｌｕ 、 Ａｓｎ 又ハＴｙｒ ｔｕｂ Ｌ、ｘ１
０８ハＴｈｒ又はＶａｌを表わし、Ｘ１０９はＰｒｏ又
はＧｉｎを表わし、Ｘ はＬｅｕ又はＡｒｇを表わし、
Ｘ１１１はＭｅｔ 、 Ｌｙｓ又はＬｅｕを表わすか又
は−Ｘ１０１ −Ｘ１０２−Ｘ１０５ −Ｘ１０４ −
Ｘ１０５−ｘｌＱ６−Ｘ１０り−Ｘ’ ０８−Ｘ”’−
Ｘ” ０− ｘ”’−は随１＃ Ｌ）／Ｓ 又はＬｅｕ
を表わし、−）（１１２はＡｓｎ 、 Ｌｙｓ又はＡｌ
ａを表わし、Ｘ”３ハＡＩａ 、 Ｇｌｕ又は１ｌｅｔ
？ｐわし、Ｘ１１４はＡｓｐ又はＨｉｓヲ表わし、Ｘ１
１３はＡｌａ 。
、Ｘ１０５ハＶａＩ 、 Ａｓｐ 、 Ｍｅｔ 又ハＴ
ｈｒ ｔｕｂシ、×１０６ハＧｌｙ 、 Ｔｈｒ 、
Ｇｌｕ 、 Ｌｅｕ 又はＡｓｎ ヲ表わし、Ｘ１０７
はＧｌｕ 、 Ａｓｎ 又ハＴｙｒ ｔｕｂ Ｌ、ｘ１
０８ハＴｈｒ又はＶａｌを表わし、Ｘ１０９はＰｒｏ又
はＧｉｎを表わし、Ｘ はＬｅｕ又はＡｒｇを表わし、
Ｘ１１１はＭｅｔ 、 Ｌｙｓ又はＬｅｕを表わすか又
は−Ｘ１０１ −Ｘ１０２−Ｘ１０５ −Ｘ１０４ −
Ｘ１０５−ｘｌＱ６−Ｘ１０り−Ｘ’ ０８−Ｘ”’−
Ｘ” ０− ｘ”’−は随１＃ Ｌ）／Ｓ 又はＬｅｕ
を表わし、−）（１１２はＡｓｎ 、 Ｌｙｓ又はＡｌ
ａを表わし、Ｘ”３ハＡＩａ 、 Ｇｌｕ又は１ｌｅｔ
？ｐわし、Ｘ１１４はＡｓｐ又はＨｉｓヲ表わし、Ｘ１
１３はＡｌａ 。
Ｇｌｕ又はｌｉｅを表わし、Ｘ１１４はＡｓｐ又は）−
ＩＩｓを表わし、Ｘ１１５はＳｅｒ又はＰｈｅｙ、（Ｈ
わし、Ｘ１２０はＬｙｓ又はＡｒｇを表わし、Ｘ１２４
はＡｒｇ 又はＧｌｎｔ−２１Ｌ、Ｘ” ハＴｈｒ 又
ハｔ−ｙｓ ｔ−表ワＬ、Ｘ１３７はＰｒｏ又はＡｌａ
を狭わし、Ｘ１３８はＣｙｓ又はＳｅｒを表わし、Ｘ１
４８はＭｅｔ又はＬｅｕを表わし、Ｘ１５１はＬｅｕ
又はＰｈｅ ヲ表わし、Ｘ’ ” ｉｊ Ｌｅｕ又はＰ
ｈｅ ヲ表わし、これらのアミノ酸は、ＩＦＮ−Ｃ２，
１ＦＮ−α、及びＩＦＮ−αＩの相応する位置のアミノ
酸とは異なる１個のアミノ酸がＣ２位置１２〜１６゜２
１．２８，２９．３０，３２．３７，４４゜６１．６４
，６７．９８〜１１５，１３７．１３８及び１４８から
選択した少なくとも１個所に存在するように７択されて
いるか又はＣ２位置１０１〜１１０から選択された少な
くとも１個所で１ｇのアミノ酸が欠落しているように選
択されているか 又はこれらアミノ酸は、ＩＦＮ−Ｃ１の相応する位置の
アミノ酸と同じ１個のアミノ酸がＣ２位置２７．３１．
５９．１５１．１６０及び１６３から選択した少なくと
も１個所に存在するように選択されていて位置１〜１１
．２７．３１．４３ａ 、５９．１００．１０２〜１０
４− 、１０６ 。
ＩＩｓを表わし、Ｘ１１５はＳｅｒ又はＰｈｅｙ、（Ｈ
わし、Ｘ１２０はＬｙｓ又はＡｒｇを表わし、Ｘ１２４
はＡｒｇ 又はＧｌｎｔ−２１Ｌ、Ｘ” ハＴｈｒ 又
ハｔ−ｙｓ ｔ−表ワＬ、Ｘ１３７はＰｒｏ又はＡｌａ
を狭わし、Ｘ１３８はＣｙｓ又はＳｅｒを表わし、Ｘ１
４８はＭｅｔ又はＬｅｕを表わし、Ｘ１５１はＬｅｕ
又はＰｈｅ ヲ表わし、Ｘ’ ” ｉｊ Ｌｅｕ又はＰ
ｈｅ ヲ表わし、これらのアミノ酸は、ＩＦＮ−Ｃ２，
１ＦＮ−α、及びＩＦＮ−αＩの相応する位置のアミノ
酸とは異なる１個のアミノ酸がＣ２位置１２〜１６゜２
１．２８，２９．３０，３２．３７，４４゜６１．６４
，６７．９８〜１１５，１３７．１３８及び１４８から
選択した少なくとも１個所に存在するように７択されて
いるか又はＣ２位置１０１〜１１０から選択された少な
くとも１個所で１ｇのアミノ酸が欠落しているように選
択されているか 又はこれらアミノ酸は、ＩＦＮ−Ｃ１の相応する位置の
アミノ酸と同じ１個のアミノ酸がＣ２位置２７．３１．
５９．１５１．１６０及び１６３から選択した少なくと
も１個所に存在するように選択されていて位置１〜１１
．２７．３１．４３ａ 、５９．１００．１０２〜１０
４− 、１０６ 。
１１２．１１３，１５１及び１５６〜１６５以外のＣ２
位置の所のアミノ酸は、ＩＦＮ−Ｃ２の相応する位置に
存在するアミノ酸と同じである〕のポリペプチド又はそ
のＮ、〜１．及び／又はＣ４〜１゜切端類縁体及び所望
によりＣ４〜、１切端されていてよいＩＦＮ−Ｃ２のＮ
３〜４．切端類縁体（但し、ＩＦＮ−Ｃ２のＮ３−切端
類縁体はＣ２〜７．も切端されている）が得られる。
位置の所のアミノ酸は、ＩＦＮ−Ｃ２の相応する位置に
存在するアミノ酸と同じである〕のポリペプチド又はそ
のＮ、〜１．及び／又はＣ４〜１゜切端類縁体及び所望
によりＣ４〜、１切端されていてよいＩＦＮ−Ｃ２のＮ
３〜４．切端類縁体（但し、ＩＦＮ−Ｃ２のＮ３−切端
類縁体はＣ２〜７．も切端されている）が得られる。
位置１〜工１及び１５５〜１６５のアミノ酸は分子の全
体的構造を破壊しないように選択されているのが有効！
あると認められる。従って、稲々異なるアミノ酸がＮ１
２アミノ酸残基の前に存在し Ｎ１５４アミノ酸残基の
後にくるのが有利？６る。Ｎ１２の前に存在するか又は
Ｎ１５４の後にくるすべてのアミノ酸が同じ殊にこのア
ミノ酸カシステインフあるポリペブチＰは避けるべきフ
ある。同様に、このポリペプチドのＮ、〜１．又はＣ４
〜１４位に連続した繰シ返しく例えば６よシ多い）疎水
性の又は繰シ返しく例えば６よシ多い）負荷されたアミ
ノ酸残基の存在は避けるのが有利である。
体的構造を破壊しないように選択されているのが有効！
あると認められる。従って、稲々異なるアミノ酸がＮ１
２アミノ酸残基の前に存在し Ｎ１５４アミノ酸残基の
後にくるのが有利？６る。Ｎ１２の前に存在するか又は
Ｎ１５４の後にくるすべてのアミノ酸が同じ殊にこのア
ミノ酸カシステインフあるポリペブチＰは避けるべきフ
ある。同様に、このポリペプチドのＮ、〜１．又はＣ４
〜１４位に連続した繰シ返しく例えば６よシ多い）疎水
性の又は繰シ返しく例えば６よシ多い）負荷されたアミ
ノ酸残基の存在は避けるのが有利である。
１式のポリペプチド中ｒ、Ｘ’はＣｙｓを表わし、ｘ２
はＡｓｐ又はＴｒｐを表わし、Ｘ’ ハＬｅｕ又はＣｙ
ｓを表わし、ｘ４はＰｒｏ又はＧｌｎｔ−ｆｉわし、×
５はＧｌｕ 、 Ｇｌｎ又はＡＳｐ’ｔ−Ｗワし、Ｘ’
ハＴｈｒ又はＰｒｏｔ表ｂＬ、、Ｘ’ ハＨｉｓ 又
ｔｒｉ ７ｙｒ ｔ−表ワｔ、、×８はＳｅｒ ヲ表わ
し、×９はＬｅｕ ヲ表わし、）（１０はＡｓｐ 、
Ｇｔｙ又はＡｌａを表わし、Ｘ１１はＡｓｎ 。
はＡｓｐ又はＴｒｐを表わし、Ｘ’ ハＬｅｕ又はＣｙ
ｓを表わし、ｘ４はＰｒｏ又はＧｌｎｔ−ｆｉわし、×
５はＧｌｕ 、 Ｇｌｎ又はＡＳｐ’ｔ−Ｗワし、Ｘ’
ハＴｈｒ又はＰｒｏｔ表ｂＬ、、Ｘ’ ハＨｉｓ 又
ｔｒｉ ７ｙｒ ｔ−表ワｔ、、×８はＳｅｒ ヲ表わ
し、×９はＬｅｕ ヲ表わし、）（１０はＡｓｐ 、
Ｇｔｙ又はＡｌａを表わし、Ｘ１１はＡｓｎ 。
Ｓｅｒ又はＡｌａを表わし、Ｘ１５５はＴｈｒを表わし
、Ｘ１５６はＡｓｎを表わし、Ｘ１５７はＬｅｕを表わ
し、Ｘ はＧｌｎヲ表ワＬ、Ｘ はＧｌｕ 又ハＬｙｓ
を表わし、Ｘ’ ” ハＡｒｇ 、 Ｓｅｒ又はｌｉ
ｅを表ワシ、Ｘ１６１はＬｅｕを表ワシ、Ｘ１６２はＡ
ｒｇを表わし、Ｘ１６３はＡｒｇ 又ハＳｅｒを表わし
、Ｘ１６４はＬｙｓ ヲ表わし Ｘ１６５はＧｌｕ又は
Ａｓｐを表わすのが有利″ｔ％ある。
、Ｘ１５６はＡｓｎを表わし、Ｘ１５７はＬｅｕを表わ
し、Ｘ はＧｌｎヲ表ワＬ、Ｘ はＧｌｕ 又ハＬｙｓ
を表わし、Ｘ’ ” ハＡｒｇ 、 Ｓｅｒ又はｌｉ
ｅを表ワシ、Ｘ１６１はＬｅｕを表ワシ、Ｘ１６２はＡ
ｒｇを表わし、Ｘ１６３はＡｒｇ 又ハＳｅｒを表わし
、Ｘ１６４はＬｙｓ ヲ表わし Ｘ１６５はＧｌｕ又は
Ａｓｐを表わすのが有利″ｔ％ある。
ここで、Ｎ 切端類縁体なる記載は、配列１〜１１
変更なしに、ポリペプチドのＮ−末端からの最初の１〜
１１アミノ酸の任意のものの欠落によシ短縮されている
１式のポリペプチドの類縁体を意味すると理解てれる。
１１アミノ酸の任意のものの欠落によシ短縮されている
１式のポリペプチドの類縁体を意味すると理解てれる。
このような記載は、１式のポリペプチドのＮ−末端から
最初、最初の２個又は最初の３個のアミノ酸が欠落して
いる１式のポリペブチｒの類縁体を示すのが有利である
。同様に、こと−１％Ｇ、〜１．切端類縁体なる記載は
、ポリペプチドのＣ−末端が、配列変更なしに、最後の
１〜ｌｌＣ末端アミノ酸の任意のものの欠落によシ短縮
されているポリペプチドの類縁体を意味する。有利に、
このような記載は、ポリアミドのＣ−末端から最後、最
後の２個、最後の３個、最後の４個、最後の６個、最後
の６個、最後の７個、最後の８個、最後の９個、最後の
１０個のアミノ酸が欠落していることを示している。
最初、最初の２個又は最初の３個のアミノ酸が欠落して
いる１式のポリペブチｒの類縁体を示すのが有利である
。同様に、こと−１％Ｇ、〜１．切端類縁体なる記載は
、ポリペプチドのＣ−末端が、配列変更なしに、最後の
１〜ｌｌＣ末端アミノ酸の任意のものの欠落によシ短縮
されているポリペプチドの類縁体を意味する。有利に、
このような記載は、ポリアミドのＣ−末端から最後、最
後の２個、最後の３個、最後の４個、最後の６個、最後
の６個、最後の７個、最後の８個、最後の９個、最後の
１０個のアミノ酸が欠落していることを示している。
１式のポリペブチＰは、そのＮ−末端に１個のメチオニ
ンを有していてよいことが認められる。更に、１式のポ
リペプチドは、そのＮ−末端に付加的なアミノ酸を有し
ていてよく、これ自体はメチオニンが前に付いていてよ
い。１式のポリペプチドは、そのＮ−末端に１７個よシ
少ない付加的アミノ酸残基を有するのが有利１ある。
ンを有していてよいことが認められる。更に、１式のポ
リペプチドは、そのＮ−末端に付加的なアミノ酸を有し
ていてよく、これ自体はメチオニンが前に付いていてよ
い。１式のポリペプチドは、そのＮ−末端に１７個よシ
少ない付加的アミノ酸残基を有するのが有利１ある。
本発明のポリペプチドは、所望の場合には放射能ラベル
されていてよいことも認められる。
されていてよいことも認められる。
この放射能ラベルは、例えばメチオニンの硫黄の所に存
在してよいか又は、チロシン上の沃素置換分として存在
していてもよい。
在してよいか又は、チロシン上の沃素置換分として存在
していてもよい。
従って、本発明のポリペプチドは、ＩＦＮ−Ｃ２の特定
のＮ３〜１．切端類縁体そのもの例えばＩＦＮ−Ｃ２（
１０−１６５）及びＩＦＮ−Ｃ２（１２−１６５）並び
に付加的にＣ４〜、１有利にＣ１〜、。
のＮ３〜１．切端類縁体そのもの例えばＩＦＮ−Ｃ２（
１０−１６５）及びＩＦＮ−Ｃ２（１２−１６５）並び
に付加的にＣ４〜、１有利にＣ１〜、。
Ｃ−切端された類縁体例えばＩＦＮ−Ｃ２（４−１５５
）を包含する。冥際に、ＩＦＮ−Ｃ２（＋−１５５）は
、抗ウイルス活性対抗増殖活性の比フ表わされる特に良
好な相対的抗ウイルス能を有し、従ってＩＦＮ−Ｃ２（
＋−１５５）は本発明の有利なポリペプチドであること
が判明した。
）を包含する。冥際に、ＩＦＮ−Ｃ２（＋−１５５）は
、抗ウイルス活性対抗増殖活性の比フ表わされる特に良
好な相対的抗ウイルス能を有し、従ってＩＦＮ−Ｃ２（
＋−１５５）は本発明の有利なポリペプチドであること
が判明した。
本発明による特別な実施態様においては、本発明は、切
端類縁体以外の１式のポリペプチドに関する。
端類縁体以外の１式のポリペプチドに関する。
本発明は、例えば次の■式：
ＬＬｅｕ−Ａｒｇ−Ｘ％６３ａ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ〔式中
Ｘ ＆１Ｇｌｕ又はＧｌｎを表わし、Ｘ はＡｓｐ又
はＧｉｙを表わし、×１１ａはＡｓｎ又はＳｅｒを表ワ
シ、×２７ａ ｄ ｐｈｅ又はＳｅｒを表わし、×３１
ａはＬｙｓ又はＭｅｔを表わし、Ｘ はＡｓｐ又は単結
合を表わし、Ｘ５９８はＭｅｔ又はＬｅｕを表わし、Ｘ
１００ａハＭｅｔ 又ハｌｉｅ ｔ−表ワｔ、、、）（
１０２ａ ハＱｌｕ又ハＧＩＶｔ−ｆｉワＬ、Ｘ”５ａ
ハＧｌｕ又ｄＶａｌ ヲｆｉｒｔ）し、Ｘ”４ａハＡｒ
ｇ 又Ｆｉ ａｌｙ ｔ−表ワＬ、×１０６８ハＧＩＶ
又ハＴｈｒ を表ｂＬ、、、ＸＩ １２ａ ハＡＳｎ
又ハｔ−ｙｓ；を表わし、Ｘ１１３ａ ハＡｈａ 又ハ
Ｇｌｕ ｔ−表ワｔ、、）（１５１ａ６０ａ はＬｅｕ又はＰｈｅを表わし、Ｘ はＡｒｇ又はＳｅ
ｒ ヲ表わし、Ｘ１６３ａはＡｒｇ又はＳｅｒヲ表ｂｌ
、、これらのアミノ酸は、Ｘ 、Ｘ 、Ｘ
。
Ｘ ＆１Ｇｌｕ又はＧｌｎを表わし、Ｘ はＡｓｐ又
はＧｉｙを表わし、×１１ａはＡｓｎ又はＳｅｒを表ワ
シ、×２７ａ ｄ ｐｈｅ又はＳｅｒを表わし、×３１
ａはＬｙｓ又はＭｅｔを表わし、Ｘ はＡｓｐ又は単結
合を表わし、Ｘ５９８はＭｅｔ又はＬｅｕを表わし、Ｘ
１００ａハＭｅｔ 又ハｌｉｅ ｔ−表ワｔ、、、）（
１０２ａ ハＱｌｕ又ハＧＩＶｔ−ｆｉワＬ、Ｘ”５ａ
ハＧｌｕ又ｄＶａｌ ヲｆｉｒｔ）し、Ｘ”４ａハＡｒ
ｇ 又Ｆｉ ａｌｙ ｔ−表ワＬ、×１０６８ハＧＩＶ
又ハＴｈｒ を表ｂＬ、、、ＸＩ １２ａ ハＡＳｎ
又ハｔ−ｙｓ；を表わし、Ｘ１１３ａ ハＡｈａ 又ハ
Ｇｌｕ ｔ−表ワｔ、、）（１５１ａ６０ａ はＬｅｕ又はＰｈｅを表わし、Ｘ はＡｒｇ又はＳｅ
ｒ ヲ表わし、Ｘ１６３ａはＡｒｇ又はＳｅｒヲ表ｂｌ
、、これらのアミノ酸は、Ｘ 、Ｘ 、Ｘ
。
）（１５１ａ 、 ）（１６０ａ及びＸ１６５８の少な
くとも１個がＩＦＮ−α、の相応する位置にあると同じ
アミノ酸を表わすように選択されている〕のポリペプチ
ド又はそのＮ、〜１．又はＣ１〜４．切端類縁体をも包
含する。
くとも１個がＩＦＮ−α、の相応する位置にあると同じ
アミノ酸を表わすように選択されている〕のポリペプチ
ド又はそのＮ、〜１．又はＣ１〜４．切端類縁体をも包
含する。
抗ウイルス活性対抗増殖活性の比フ衣わされる改良され
た相対的抗ウイルス能に基ずくｎ式の有利なポリペプチ
ドは、式中のｘａ ｓａがＡＳｐをＲｂ ＬＳＸ”０ａ
ｔｘ ｌｌｅ を表ｂ Ｌ、Ｘ１０２８ カ（ｉｌｙを
表わし、）（１０５ａがＶａｌを表わし、）（ＩＱ４ａ
がＧｌｙｔ−表ワシ、Ｘ１０６ａ カＴｈｒ ｔ−Ｗワ
Ｌ、）（１１２ａカｔ−ｙｓヲ表ワｔ、、Ｘ”’ａハＧ
ｌｕヲ表ワＬ、、）（５ａ。
た相対的抗ウイルス能に基ずくｎ式の有利なポリペプチ
ドは、式中のｘａ ｓａがＡＳｐをＲｂ ＬＳＸ”０ａ
ｔｘ ｌｌｅ を表ｂ Ｌ、Ｘ１０２８ カ（ｉｌｙを
表わし、）（１０５ａがＶａｌを表わし、）（ＩＱ４ａ
がＧｌｙｔ−表ワシ、Ｘ１０６ａ カＴｈｒ ｔ−Ｗワ
Ｌ、）（１１２ａカｔ−ｙｓヲ表ワｔ、、Ｘ”’ａハＧ
ｌｕヲ表ワＬ、、）（５ａ。
Ｘ”ａ＊ Ｘ”ａ、Ｘ１５１ａ、Ｘ”Ｏａ及びＸ””ｏ
少なくとも１個がＩＦＮ−Ｃ２の相応する位置のアミ
・）酸とは異なるアミノ酸を表わすｎ式の化合物′ｔ％
ある。
少なくとも１個がＩＦＮ−Ｃ２の相応する位置のアミ
・）酸とは異なるアミノ酸を表わすｎ式の化合物′ｔ％
ある。
抗ウイルス対抗増殖活性の良好な比に基ずくｎ式の殊に
有利な化合物は、エンド−ＡＳｐ４３ａ−［Ｌｅｕ１５
１． Ａｒｇ”’＋１６３：］ ＩＦＮ−ａ２’ある。
有利な化合物は、エンド−ＡＳｐ４３ａ−［Ｌｅｕ１５
１． Ａｒｇ”’＋１６３：］ ＩＦＮ−ａ２’ある。
本発明のポリペプチドは殊に、式中のＣ２位置１２〜１
６．２１，２８．２９，３０，３２゜３７、＋４．６１
．６４，６７．９８〜１ ｌ ５ 。
６．２１，２８．２９，３０，３２゜３７、＋４．６１
．６４，６７．９８〜１ ｌ ５ 。
１３７．１３８及び１４８から選択した少なくとも１個
所に、ＩＦＮ−Ｃ２，１ＦＮ−α、及びＩＦＮ−α■の
相応する位置のアミノ酸とは異なる１個のアミノ酸が存
在する１式のＩＦＮ−Ｃ２の類縁体に関する。
所に、ＩＦＮ−Ｃ２，１ＦＮ−α、及びＩＦＮ−α■の
相応する位置のアミノ酸とは異なる１個のアミノ酸が存
在する１式のＩＦＮ−Ｃ２の類縁体に関する。
本発明のもう１つの態様において、式中の×１カＣｙｓ
を表わし、Ｘ２；６１ Ａｓｐ又はＴｒｐを表わし、Ｘ
ｓカＬｅｕ又はＣｙｓｔ−表：ｂし、Ｘ’ カＰｒｏ
又はＧｌｎを表わし、×５カＧｌｎ又はＡｓｐ ヲ表わ
し、Ｘ６がＴｈｒ又はＰｒｏを表わし、Ｘ’カＨｉｓ又
はＴｙｒ ヲ表わし、×８がＳｅｒを表わし、ｘ９がＬ
ｅｕを表わし、Ｘｌ ０ カＧｌｙ又はＡｌａを表ワし
、Ｘ” カＳｅｒ又はＡｌａを表わし、×１６カＬｅｕ
又はＭｅｔヲ９わし、Ｘ２２力Ａｒｇ ｔ 表ｂ Ｌ、
Ｘ２３カＬＹＳ １１） Ｌ、Ｘ” カＬｅｕを表わし
、Ｘ” カＰｈｅ ｔ−表わし、Ｘ５１力Ｌｙｓｆｔ表
ｂシ、Ｘ３４２＞Ｉ Ｈｉｓ ヲ表ワＬ、Ｘ５８ カＰ
ｈｅを表わし、Ｘ が単結合を表わし、Ｘ５０がＡｌａ
を表わし、）（５１カＧＩｕｔ表わし、Ｘ５２ カＴｈ
ｒｔ表−ｂし、Ｘ５４カＰｒｏ ｆ表ｆ） Ｌ、Ｘ”
カｇ Ｉｅを表わし、）（４８がＳｅｒ ＠表わし、Ｘ
” カＬｙｓ ｔ−ｅ、ｂシ、Ｘ” カＡＳＩ） ヲｕ
ワＬ、、Ｘ７８カＧｌｕ ｔ−表ワシ、Ｘ７８カＴｈｒ
を表ｂ Ｌ、Ｘ８２カＡｓｐ ｔ 表りし、Ｘ” カ
Ｔｙｒ ’ｋ ａワＬ、Ｘ９４カＡｓｐ’に表ワシ、Ｘ
”５カＶａｌ 、 Ａｓｐ又はＴｈｒを表わし、Ｘ
１０６ カＴｈｒ 、 Ｇｌｙ 、 Ｌｅｕ又はＡＳｎ
を表わし、Ｘ １２０ ｔ、１Ａｒｇを表わし、Ｘ
がＧｌｎを表わし、Ｘ がＬｙｓ ｔ 表ｂ Ｌ、Ｘ
” カＰｈｅヲ表ワＬ、、）（１５５カＬｅｕ ヲ表わ
し、Ｘ１５’ カＡｓｎを表わし、）（１５７カＬｅｕ
を表わし、Ｘ１５８がＧｉｎを表わし、答１５９がＧｌ
ｕを表わし、Ｘ”’ カＳｅｒを表わし、）（１６１カ
Ｌｅｕを表わし、Ｘ＋ ４２．５ｔ Ａｒｇ ｆ： Ｒ
わし、Ｘ ｊ ６５ カＳｅｒを表わし、Ｘ’ ” ２
＞Ｉ Ｌｙｓを表わし、Ｘ １６５．５１Ｇｌｕ ｆ、
表わす１式の化合物及びそのＮ、〜４．及びＣ４〜１．
切端類縁体が得られる。このような切端類縁体が得られ
る際には、これらは、Ｎ、〜３及び／又はＣ４〜、。切
端類縁体）あるのが有利である。
を表わし、Ｘ２；６１ Ａｓｐ又はＴｒｐを表わし、Ｘ
ｓカＬｅｕ又はＣｙｓｔ−表：ｂし、Ｘ’ カＰｒｏ
又はＧｌｎを表わし、×５カＧｌｎ又はＡｓｐ ヲ表わ
し、Ｘ６がＴｈｒ又はＰｒｏを表わし、Ｘ’カＨｉｓ又
はＴｙｒ ヲ表わし、×８がＳｅｒを表わし、ｘ９がＬ
ｅｕを表わし、Ｘｌ ０ カＧｌｙ又はＡｌａを表ワし
、Ｘ” カＳｅｒ又はＡｌａを表わし、×１６カＬｅｕ
又はＭｅｔヲ９わし、Ｘ２２力Ａｒｇ ｔ 表ｂ Ｌ、
Ｘ２３カＬＹＳ １１） Ｌ、Ｘ” カＬｅｕを表わし
、Ｘ” カＰｈｅ ｔ−表わし、Ｘ５１力Ｌｙｓｆｔ表
ｂシ、Ｘ３４２＞Ｉ Ｈｉｓ ヲ表ワＬ、Ｘ５８ カＰ
ｈｅを表わし、Ｘ が単結合を表わし、Ｘ５０がＡｌａ
を表わし、）（５１カＧＩｕｔ表わし、Ｘ５２ カＴｈ
ｒｔ表−ｂし、Ｘ５４カＰｒｏ ｆ表ｆ） Ｌ、Ｘ”
カｇ Ｉｅを表わし、）（４８がＳｅｒ ＠表わし、Ｘ
” カＬｙｓ ｔ−ｅ、ｂシ、Ｘ” カＡＳＩ） ヲｕ
ワＬ、、Ｘ７８カＧｌｕ ｔ−表ワシ、Ｘ７８カＴｈｒ
を表ｂ Ｌ、Ｘ８２カＡｓｐ ｔ 表りし、Ｘ” カ
Ｔｙｒ ’ｋ ａワＬ、Ｘ９４カＡｓｐ’に表ワシ、Ｘ
”５カＶａｌ 、 Ａｓｐ又はＴｈｒを表わし、Ｘ
１０６ カＴｈｒ 、 Ｇｌｙ 、 Ｌｅｕ又はＡＳｎ
を表わし、Ｘ １２０ ｔ、１Ａｒｇを表わし、Ｘ
がＧｌｎを表わし、Ｘ がＬｙｓ ｔ 表ｂ Ｌ、Ｘ
” カＰｈｅヲ表ワＬ、、）（１５５カＬｅｕ ヲ表わ
し、Ｘ１５’ カＡｓｎを表わし、）（１５７カＬｅｕ
を表わし、Ｘ１５８がＧｉｎを表わし、答１５９がＧｌ
ｕを表わし、Ｘ”’ カＳｅｒを表わし、）（１６１カ
Ｌｅｕを表わし、Ｘ＋ ４２．５ｔ Ａｒｇ ｆ： Ｒ
わし、Ｘ ｊ ６５ カＳｅｒを表わし、Ｘ’ ” ２
＞Ｉ Ｌｙｓを表わし、Ｘ １６５．５１Ｇｌｕ ｆ、
表わす１式の化合物及びそのＮ、〜４．及びＣ４〜１．
切端類縁体が得られる。このような切端類縁体が得られ
る際には、これらは、Ｎ、〜３及び／又はＣ４〜、。切
端類縁体）あるのが有利である。
一般に、本発明の１式の化合物は天然ＩＦＮ−α２中に
おけるように１個のＣ，Ｓ２９ 、 ＣｙＳ３８ジスル
アアイドブリッジを有するのが有利フある。
おけるように１個のＣ，Ｓ２９ 、 ＣｙＳ３８ジスル
アアイドブリッジを有するのが有利フある。
しかし＆ カら（Ｓｅｒ” 、 ５ｅｒ１３８） −１
ＦＮ −Ｃ２は抗ウィルス活性を有するだけでなく、抗
ウィルスと抗増殖活性との比（ＡＶ／ＡＰ）′″ｒ！表
わされる、Ｈｕ−ＩＦＮ−Ｃ２に関する報告よシも実質
的に大きい相対的活性能を有することを発見した。
ＦＮ −Ｃ２は抗ウィルス活性を有するだけでなく、抗
ウィルスと抗増殖活性との比（ＡＶ／ＡＰ）′″ｒ！表
わされる、Ｈｕ−ＩＦＮ−Ｃ２に関する報告よシも実質
的に大きい相対的活性能を有することを発見した。
これは、文献中でＣ：ｙＳ１２９ 、 ＣｙＳ１８ジス
ルアアイドブリッジが活性に関して重要ｔあると信じら
れていた観点から、特に意想外の発見受ある。
ルアアイドブリッジが活性に関して重要ｔあると信じら
れていた観点から、特に意想外の発見受ある。
式：
％式％
〔（式中ｘ２はＡｓｐ又はＴｒｐを表わし、×３はＬｅ
ｕ又はＣｙｓを表わし、×４はＰｒｏ又はＧｌｎを表わ
し、Ｘ５ハＧｌｎ 又１ｒｉ Ａｓｐ ヲｉワｔ、、Ｘ
’ ハＴｈｒ 又ハＰｒ。
ｕ又はＣｙｓを表わし、×４はＰｒｏ又はＧｌｎを表わ
し、Ｘ５ハＧｌｎ 又１ｒｉ Ａｓｐ ヲｉワｔ、、Ｘ
’ ハＴｈｒ 又ハＰｒ。
ヲ表ｔ）Ｌ、Ｘ’ ハＨｉｓ 又ハＴｙｒ を表ワＬ、
Ｘ１０ＣはＧＩｙ又はＡｌａを表わし、Ｘ” ハＧｌｙ
又１ｄ、 Ａｌａｔ−表ｔ） Ｌ、Ｘ” ｔｄ Ｇｌ
ｙ 又ハＡｌａ ｆ、表ｂ Ｌ、Ｘ５９はＭｅｔ又はＬ
ｅｕを表わし、Ｘ９８０はＣｙｓ又はＬｅｕｔ−表ワＬ
、Ｘ”’ ｔｒｉ Ｖａｔ 又ハＴｈｒ ｔｔＲｂＩ、
、、Ｘ１０（Ｉｃはｌｌｅ 、 Ｍｅｔ又はＡｓｎを表
わし、）（１０１０はＧｌｎ又はＴｙｒを表わし、Ｘ１
０２ＣはＧｌｙ 、 Ａｌａ又はＳｅｒヲ表ワシ、）（
１０”ＣハＶａｌ を表ワシ、Ｘ１０” ハＧｌｙ ＊
Ａｌａ 又はＴｈｒを表わし、Ｘ１０５ＣはＶａｌ又は
Ａｓｐを表わし、Ｘ１０６ＣはＴｈｒ又はＬｅｕを表わ
し、Ｘ１０７ＣはＧｌｕ又はＡｓｎを表わし、Ｘ１０８
はＴｈｒ又はＶａｌを表わし、Ｘ１０９はＰｒｏ又はＧ
ｌｎ ヲ表ｔ）Ｌ、Ｘ１１０はＬｅｕ又はＡｒｇ ｔ−
表わし、Ｘ１１１ＣはＭｅｔ又はＬｙｓを表わし、Ｘ１
１２ＣはＬｙｓ又はＡｌａを表わし：）（１１３ＣはＧ
ｌｕ又は１ｉｅｕを表わし、Ｘ”’はＡｓｐ又はＨｉｓ
を表わす）及び２９及び１３８の位置のＣｙｓがＳｅｒ
″１４代えられていて、アミノ酸は、２〜７，１０，３
７，４４．５９及び９８〜１１４の位置の少なくとも１
個所に、ＩＦＮ−Ｃ２の相応する位置のアミノ酸とは異
なる１個のアミノ酸が存在するように選択されてい不相
応するポリベンチＰ〕の化合物及びそのＮ、〜１．（有
利にＮ、〜３）及びＣ１〜４．（有利にＣ１〜、。）切
端類縁体は、その抗つィルス体抗増殖活性の比１表わさ
れる良好な相対的抗ウイルス能に基すき有利である。
Ｘ１０ＣはＧＩｙ又はＡｌａを表わし、Ｘ” ハＧｌｙ
又１ｄ、 Ａｌａｔ−表ｔ） Ｌ、Ｘ” ｔｄ Ｇｌ
ｙ 又ハＡｌａ ｆ、表ｂ Ｌ、Ｘ５９はＭｅｔ又はＬ
ｅｕを表わし、Ｘ９８０はＣｙｓ又はＬｅｕｔ−表ワＬ
、Ｘ”’ ｔｒｉ Ｖａｔ 又ハＴｈｒ ｔｔＲｂＩ、
、、Ｘ１０（Ｉｃはｌｌｅ 、 Ｍｅｔ又はＡｓｎを表
わし、）（１０１０はＧｌｎ又はＴｙｒを表わし、Ｘ１
０２ＣはＧｌｙ 、 Ａｌａ又はＳｅｒヲ表ワシ、）（
１０”ＣハＶａｌ を表ワシ、Ｘ１０” ハＧｌｙ ＊
Ａｌａ 又はＴｈｒを表わし、Ｘ１０５ＣはＶａｌ又は
Ａｓｐを表わし、Ｘ１０６ＣはＴｈｒ又はＬｅｕを表わ
し、Ｘ１０７ＣはＧｌｕ又はＡｓｎを表わし、Ｘ１０８
はＴｈｒ又はＶａｌを表わし、Ｘ１０９はＰｒｏ又はＧ
ｌｎ ヲ表ｔ）Ｌ、Ｘ１１０はＬｅｕ又はＡｒｇ ｔ−
表わし、Ｘ１１１ＣはＭｅｔ又はＬｙｓを表わし、Ｘ１
１２ＣはＬｙｓ又はＡｌａを表わし：）（１１３ＣはＧ
ｌｕ又は１ｉｅｕを表わし、Ｘ”’はＡｓｐ又はＨｉｓ
を表わす）及び２９及び１３８の位置のＣｙｓがＳｅｒ
″１４代えられていて、アミノ酸は、２〜７，１０，３
７，４４．５９及び９８〜１１４の位置の少なくとも１
個所に、ＩＦＮ−Ｃ２の相応する位置のアミノ酸とは異
なる１個のアミノ酸が存在するように選択されてい不相
応するポリベンチＰ〕の化合物及びそのＮ、〜１．（有
利にＮ、〜３）及びＣ１〜４．（有利にＣ１〜、。）切
端類縁体は、その抗つィルス体抗増殖活性の比１表わさ
れる良好な相対的抗ウイルス能に基すき有利である。
次の態様は単独でも又は組合せても有利フある：
１） Ｈｕ −ＩＦＮ−α２／リペプチド中の９８〜
１１４殊に１０１〜１１４の位置におけるｒ９８〜１１
４殊にｒ１０８〜１１４の存在；２） Ｈｕ−ＩＦＮ
−ｃＸ２中（７）１０．３７，４４，１０２及び１０４
位の少なくとも１個所中のアラニンの存在； ３） Ｈｕ −ＩＦＮ−ａ２ポリペプチドの２９及び
１３８の双方の位置のセリンの存在； ４） Ｈｕ −ＩＦＮ−（！２ポリペプチドの５９位
のロイシンの存在。
１１４殊に１０１〜１１４の位置におけるｒ９８〜１１
４殊にｒ１０８〜１１４の存在；２） Ｈｕ−ＩＦＮ
−ｃＸ２中（７）１０．３７，４４，１０２及び１０４
位の少なくとも１個所中のアラニンの存在； ３） Ｈｕ −ＩＦＮ−ａ２ポリペプチドの２９及び
１３８の双方の位置のセリンの存在； ４） Ｈｕ −ＩＦＮ−（！２ポリペプチドの５９位
のロイシンの存在。
これらの態様の任意の１つを単独で又は本発明のポリペ
ブチＰの一般的又は特別な態様と組合せて採用する際に
、ポリペプチドの有利な亜群が得られる。
ブチＰの一般的又は特別な態様と組合せて採用する際に
、ポリペプチドの有利な亜群が得られる。
その良好な相対的抗ウイルス能に基ずく殊に有利なポリ
ペプチドには次のものが包含される：（ｒ（９８〜１１
４）”〜１１４ ） ＩＦＮ −（１２、（Ｍｅｔ”’
、ｒ（１０１〜１１４）”’〜”’ 〕ＩＦＮ−α２
、（ｒ（２〜７）、ｒ（９８〜１１４））ＩＦＮ−Ｃ２
、［Ｌｅｕ５９］ ＩＦＮ −Ｃ２、 （（！ｌ、！７，４４，１０２，１０４ 〕ＩＦＮ−α
２及び（５ｅｒ２９ｅ１３８） ＩＦＮ −Ｃ２゜添付
の第１図には、Ｈｕ−ＩＦＮ−α２遺伝子のヌクレオチ
ド配列及び相応するアミノ酸配列が示されている。第２
図は、プラスミドｐｓＴＰ１の構造を図示したものフあ
る。
ペプチドには次のものが包含される：（ｒ（９８〜１１
４）”〜１１４ ） ＩＦＮ −（１２、（Ｍｅｔ”’
、ｒ（１０１〜１１４）”’〜”’ 〕ＩＦＮ−α２
、（ｒ（２〜７）、ｒ（９８〜１１４））ＩＦＮ−Ｃ２
、［Ｌｅｕ５９］ ＩＦＮ −Ｃ２、 （（！ｌ、！７，４４，１０２，１０４ 〕ＩＦＮ−α
２及び（５ｅｒ２９ｅ１３８） ＩＦＮ −Ｃ２゜添付
の第１図には、Ｈｕ−ＩＦＮ−α２遺伝子のヌクレオチ
ド配列及び相応するアミノ酸配列が示されている。第２
図は、プラスミドｐｓＴＰ１の構造を図示したものフあ
る。
本発明のポリペプチドは、有利に、遺伝子操作技術によ
シ、例えば欧州特許機構公開特許第００６２９７１Ａ２
号明細書に記載の方法フ製造される。
シ、例えば欧州特許機構公開特許第００６２９７１Ａ２
号明細書に記載の方法フ製造される。
本発明のもう１つの態様によシ、前記定義のよりな１式
のポリペプチドの製法が得られ、この方法は、１式の前
記ポリペプチドに関してコードする遺伝学的物質よシな
る複製可能なグラスミ１表現ベヒクル１形質転換されて
いる微生物を培養しくこの際前記ポリペプチドを発現さ
せ）、かつその際に発現された前記ポリペプチドを回収
することよシなる。
のポリペプチドの製法が得られ、この方法は、１式の前
記ポリペプチドに関してコードする遺伝学的物質よシな
る複製可能なグラスミ１表現ベヒクル１形質転換されて
いる微生物を培養しくこの際前記ポリペプチドを発現さ
せ）、かつその際に発現された前記ポリペプチドを回収
することよシなる。
前記方法は、適当な微生物例えばダラム陰性のＥ、コ！
ｊ−（Ｃｏｌｉ）又は独立栄養性バクテリア（例えば単
独又は主要炭素源として無機炭素例えば二酸化炭素又は
重炭酸塩を使用することの１きるもの）又はメチロトロ
フィックバクテリア （ｍｅｔｈｙｌｏｔｒｏｐｈｉｃ
ｂａｃｔｅｒｉｕｍ ） （例えば、単独又は主要炭
素源としてメタン又は例えばメタノールからのメチル炭
素を使用することのできるもの）の使用によシ実施ｔき
る。しかしながら、欧州特許機構公開特許第００６２９
７１Ａ２号明細曹に記載の微生物の任意のものの使用を
排除しない。
ｊ−（Ｃｏｌｉ）又は独立栄養性バクテリア（例えば単
独又は主要炭素源として無機炭素例えば二酸化炭素又は
重炭酸塩を使用することの１きるもの）又はメチロトロ
フィックバクテリア （ｍｅｔｈｙｌｏｔｒｏｐｈｉｃ
ｂａｃｔｅｒｉｕｍ ） （例えば、単独又は主要炭
素源としてメタン又は例えばメタノールからのメチル炭
素を使用することのできるもの）の使用によシ実施ｔき
る。しかしながら、欧州特許機構公開特許第００６２９
７１Ａ２号明細曹に記載の微生物の任意のものの使用を
排除しない。
嫌気性及び好気性の双方の種々の微生物は、任意のかつ
必須の生物と同様に本発明の方法１重要１あシ、１生物
の選択は、他の認容しうる特性を有する１生物の生化学
的又は生合成能力と同様に有利な処理条件を考慮して行
なわれる。
必須の生物と同様に本発明の方法１重要１あシ、１生物
の選択は、他の認容しうる特性を有する１生物の生化学
的又は生合成能力と同様に有利な処理条件を考慮して行
なわれる。
本発明の前記方法１０使用に好適な微生物には、Ｅ、コ
リーＫ１２（ＪＡ２２１）及び殊にＥ。
リーＫ１２（ＪＡ２２１）及び殊にＥ。
コリーに−１２（ＤＳ４１０）が包含される。
これら微生物ＪＡ２２１及びＤＳ４１０は、そて公知で
アシ、公に自由に入手可能フあシ、１９８５年２月１日
以降公に自由に入手可能〒ある。更に、Ｅ、コリーＪＡ
２２１及びＥ、コリー０８４１０は、ブダペスト条約に
基づきインダストリアル＆マリーン・ノ々クチリア・
リミテッド、トリイ・リサーチ・ステーション、ＰＯｙ
／ックスＡ３１．１３５アベイ・ロード、アノ々ディー
ｙＡＢＱ ８０Ｇ ス：ｒット、；ンｒ（ｆｎｃｌ
ｕｓｔｒｉａｌ＆ Ｍａｒｉｎｅ Ｂａｃｔｅｒｉａ
Ｌｔｄ 、 Ｔｏｒｒｙ Ｒｅ５ｅａｒｃｈｓｔａｔｉ
ｏｎ 、ＰＯＢＯＸ Ａ ３１．１３５ Ａｂｂ
ｅｙＲｏａｄ 、 Ａｂｅｒｄｅｅｎ ＡＢ９８ＤＧ
５ｃｏｔｌａｎｄ ） ノ国際寄託を寄託番号ＮＣｌＢ
１２０９９及びＮＣｌＢ１２１００−ｔ’それぞれ寄託
されている。
アシ、公に自由に入手可能フあシ、１９８５年２月１日
以降公に自由に入手可能〒ある。更に、Ｅ、コリーＪＡ
２２１及びＥ、コリー０８４１０は、ブダペスト条約に
基づきインダストリアル＆マリーン・ノ々クチリア・
リミテッド、トリイ・リサーチ・ステーション、ＰＯｙ
／ックスＡ３１．１３５アベイ・ロード、アノ々ディー
ｙＡＢＱ ８０Ｇ ス：ｒット、；ンｒ（ｆｎｃｌ
ｕｓｔｒｉａｌ＆ Ｍａｒｉｎｅ Ｂａｃｔｅｒｉａ
Ｌｔｄ 、 Ｔｏｒｒｙ Ｒｅ５ｅａｒｃｈｓｔａｔｉ
ｏｎ 、ＰＯＢＯＸ Ａ ３１．１３５ Ａｂｂ
ｅｙＲｏａｄ 、 Ａｂｅｒｄｅｅｎ ＡＢ９８ＤＧ
５ｃｏｔｌａｎｄ ） ノ国際寄託を寄託番号ＮＣｌＢ
１２０９９及びＮＣｌＢ１２１００−ｔ’それぞれ寄託
されている。
それぞれの微生物の寄託日は１９８５年６月２日！ある
。
。
これら微生物は典型的に、同化性炭素源として、必要な
無機栄養と共に含有する水性培地中１好気的に培養する
ことが１きる。一般に、例えばインターフェロン類縁体
が、商業的に有用な割合〒細胞から出ない場合、この微
生物を培養し、例えば培地からの分離の後に、有利に細
胞を引続き抽出することによシ完全な細胞を収穫するこ
とが！きる。しかしながら、インターフェロン類縁体が
細胞から周囲の培養液中に出る場合は、この類縁体を慣
用法でこれから抽出することができる。このような技術
は公知であシ、更に説明する必要はない。
無機栄養と共に含有する水性培地中１好気的に培養する
ことが１きる。一般に、例えばインターフェロン類縁体
が、商業的に有用な割合〒細胞から出ない場合、この微
生物を培養し、例えば培地からの分離の後に、有利に細
胞を引続き抽出することによシ完全な細胞を収穫するこ
とが！きる。しかしながら、インターフェロン類縁体が
細胞から周囲の培養液中に出る場合は、この類縁体を慣
用法でこれから抽出することができる。このような技術
は公知であシ、更に説明する必要はない。
本発明のもう１つの態様によれば、こうして、前記定義
の１式のポリペプチドを発現することのできる形質転換
微生物が得られ、この微生物は、複製可能なプラスミド
表現ベヒクルを有し、このベヒクルは、前記ポリペプチ
ドに関してコードする遺伝物質よシなる。
の１式のポリペプチドを発現することのできる形質転換
微生物が得られ、この微生物は、複製可能なプラスミド
表現ベヒクルを有し、このベヒクルは、前記ポリペプチ
ドに関してコードする遺伝物質よシなる。
この形質転換微生物は、有利に、Ｅ、コリー」Ａ２２１
形質転換体、殊にＥ、コリーＤＳ４−１０形質転換体″
ｔ’ある。
形質転換体、殊にＥ、コリーＤＳ４−１０形質転換体″
ｔ’ある。
本発明のもう１つの態様によれば、前記定義のような形
質転換微生物の製法が得られ、これは、微生物を、これ
に前記定義の１式のポリペプチドに関してコーＰする遺
伝物質よシなる複製可能なプラスミド表現ベヒクルを挿
入することによシ形質転換することよシなる。
質転換微生物の製法が得られ、これは、微生物を、これ
に前記定義の１式のポリペプチドに関してコーＰする遺
伝物質よシなる複製可能なプラスミド表現ベヒクルを挿
入することによシ形質転換することよシなる。
外来遺伝物質を微生物中に導入する方法は文献に広く記
載されている。このような方法は、ベクター及び外来遺
伝物質よシなる複製可能なプラスミド表現ベヒクルの形
成及び微生物へのこのベヒクルの導入よシなる。微生物
中へのこのベヒクルの導入は、微生物を適当な処理例え
ば塩化カルシウム溶液で処理することによシ有利に促進
することが１きる。本発明の遺伝学的に変性された微生
物が、メチロトローフイック又は独立栄養性である場合
、本発明のインターフェロン類縁体の遺伝子よりなる複
製可能なプラスミド表現ベヒクルは、有利に、細胞接合
によシ他の微生物からの転写（よシ、よシ有利には、Ｅ
、コリーの１Ｍ株からの複製可能なプラスミド表現ベヒ
クルの転写によシ導入することが１きる。
載されている。このような方法は、ベクター及び外来遺
伝物質よシなる複製可能なプラスミド表現ベヒクルの形
成及び微生物へのこのベヒクルの導入よシなる。微生物
中へのこのベヒクルの導入は、微生物を適当な処理例え
ば塩化カルシウム溶液で処理することによシ有利に促進
することが１きる。本発明の遺伝学的に変性された微生
物が、メチロトローフイック又は独立栄養性である場合
、本発明のインターフェロン類縁体の遺伝子よりなる複
製可能なプラスミド表現ベヒクルは、有利に、細胞接合
によシ他の微生物からの転写（よシ、よシ有利には、Ｅ
、コリーの１Ｍ株からの複製可能なプラスミド表現ベヒ
クルの転写によシ導入することが１きる。
本発明によるもう１つの態様によれば形質転換微生物中
１前記定義の１式のポリペブチＰを発現することのでき
る複製可能なプラスミド表現ベヒクルを得ることが１き
る。本発明の更にもう１つの態様によシ、複製可能なプ
ラスミド表現ベヒクルの製法が得られ、これは前記定義
の１式のポリペプチドに関してコードする遺伝子を又は
前記ポリペプチドの１ｔｆｌＳをエンコーＰする２本鎖
ＤＮＡフラグメントをベクター内に、そのために好適な
挿入部位に挿入することよシなシ、この際形質転換微生
物中に前記定義の１式のポリペブチｒを合成することの
できる複製可能なプラスミド表現ベヒクルが得られる。
１前記定義の１式のポリペブチＰを発現することのでき
る複製可能なプラスミド表現ベヒクルを得ることが１き
る。本発明の更にもう１つの態様によシ、複製可能なプ
ラスミド表現ベヒクルの製法が得られ、これは前記定義
の１式のポリペプチドに関してコードする遺伝子を又は
前記ポリペプチドの１ｔｆｌＳをエンコーＰする２本鎖
ＤＮＡフラグメントをベクター内に、そのために好適な
挿入部位に挿入することよシなシ、この際形質転換微生
物中に前記定義の１式のポリペブチｒを合成することの
できる複製可能なプラスミド表現ベヒクルが得られる。
従って、本発明の１態様で、１式のポリペプチドに関し
てコードする遺伝子をそのためのベクター内に挿入する
ことにより複＃！可能なプラスミド表現ベヒクルが製造
できる。もう１つの態様１は、プロモータ配列及び１ヌ
クレオチド配列又は１式のポリペプチドの１部に関して
コードするヌクレオチＰ配列よ〕なるベクターを用い、
１式のポリペプチドの残シに関してコードするヌクレオ
チＰ配列フラグメントをベクター内に挿入して複製可能
な表現ベヒクルを形成させる。
てコードする遺伝子をそのためのベクター内に挿入する
ことにより複＃！可能なプラスミド表現ベヒクルが製造
できる。もう１つの態様１は、プロモータ配列及び１ヌ
クレオチド配列又は１式のポリペプチドの１部に関して
コードするヌクレオチＰ配列よ〕なるベクターを用い、
１式のポリペプチドの残シに関してコードするヌクレオ
チＰ配列フラグメントをベクター内に挿入して複製可能
な表現ベヒクルを形成させる。
本発明の複製可能な表現ベヒクルは、有利に、スミ）＋
１ベクター有利に欧州特許機構公開特許第００６２９７
１号明細書に記載のプラスミドベクターの使用によ）製
造される。１式の４リペプチドに関してエンコードする
遺伝子の表現は、ンオペロンのプロモータ）の影響下に
成しとげれる。
１ベクター有利に欧州特許機構公開特許第００６２９７
１号明細書に記載のプラスミドベクターの使用によ）製
造される。１式の４リペプチドに関してエンコードする
遺伝子の表現は、ンオペロンのプロモータ）の影響下に
成しとげれる。
Ｅ、コリーＫ１２のトリプトファンオペロンを基礎とす
る合成ｔｒｐプロモータが有利に使用され、第２図に示
されているプラスミドベクターｐｓＴＰｌ中に存在する
〔ウインダス（ＷｉｎｄａＳＳ ）等によるヌクレイツ
ク・アンス・リサーチ（Ｎｕｃｌｅｉｃ ａｃｉｄｓ
Ｒｅ５ｅａｒｃｈ ） ｌ ０巻（１９８３年）６６３
９頁参照〕。このようなプラスミドベクターは、１式の
ポリペプチドに関してコーｒする遺伝子が位置的に強力
なプロモータの直下で、このプラスミドベクター〇Ｃ１
ａｌとＳａ目部位との間に導入されるのを許容するので
、特に重要１ある。
る合成ｔｒｐプロモータが有利に使用され、第２図に示
されているプラスミドベクターｐｓＴＰｌ中に存在する
〔ウインダス（ＷｉｎｄａＳＳ ）等によるヌクレイツ
ク・アンス・リサーチ（Ｎｕｃｌｅｉｃ ａｃｉｄｓ
Ｒｅ５ｅａｒｃｈ ） ｌ ０巻（１９８３年）６６３
９頁参照〕。このようなプラスミドベクターは、１式の
ポリペプチドに関してコーｒする遺伝子が位置的に強力
なプロモータの直下で、このプラスミドベクター〇Ｃ１
ａｌとＳａ目部位との間に導入されるのを許容するので
、特に重要１ある。
このｔｒｐプロモータは、このような遺伝子（ＥｃｏＲ
Ｉ −Ｓａｌ ｌセグメント）と−緒にこのベクターか
ら除去１き、本発明のもう１つの態様を構成するポータ
プル表現ユニットとして使用されうる。
Ｉ −Ｓａｌ ｌセグメント）と−緒にこのベクターか
ら除去１き、本発明のもう１つの態様を構成するポータ
プル表現ユニットとして使用されうる。
本発明のもう１つの態様によれば、前記定義の！弐のポ
リペプチドに関してエンコードするＤＮＡ配列が得られ
る。前記ＤＮＡ配列から選択されたオリゴヌクレオチド
も本発明のもう１つの態様を構成する。
リペプチドに関してエンコードするＤＮＡ配列が得られ
る。前記ＤＮＡ配列から選択されたオリゴヌクレオチド
も本発明のもう１つの態様を構成する。
前記ＤＮＡ配列及びオリゴヌクレオチドは、それ自体任
意の慣用法１製造１きるが、前記ＤＮＡ配列の製造に有
利であることが判明し、本発明のもう１つの態様を成す
１方法は、適当なオリゴヌクレオチドをリゲーテイング
（ｌ ｉｇａｔｉｎｇ ）して本発明のＤＮＡ配列を形
成することよシなる。
意の慣用法１製造１きるが、前記ＤＮＡ配列の製造に有
利であることが判明し、本発明のもう１つの態様を成す
１方法は、適当なオリゴヌクレオチドをリゲーテイング
（ｌ ｉｇａｔｉｎｇ ）して本発明のＤＮＡ配列を形
成することよシなる。
この遺伝子コーＰの同義性は、本発明の適当なポリペプ
チドを得るための遺伝子を構成するために使用されうる
コドンの選択１実質的な自由を許容する。コドンは通例
、特別なホスト例えばＥ、コリー中の微生物学的ゲノム
の表現に有利ｆあるように選択された。この考察によシ
、本発明の有利なヌクレオチド配列（これは、本発明の
ポリペプチドが発現されうるように選択された）、例え
ば後の実施例に詳述されたヌクレオチド配列に至った。
チドを得るための遺伝子を構成するために使用されうる
コドンの選択１実質的な自由を許容する。コドンは通例
、特別なホスト例えばＥ、コリー中の微生物学的ゲノム
の表現に有利ｆあるように選択された。この考察によシ
、本発明の有利なヌクレオチド配列（これは、本発明の
ポリペプチドが発現されうるように選択された）、例え
ば後の実施例に詳述されたヌクレオチド配列に至った。
本発明のポリペブチＰの遺伝子の合成は、１牛又は１５
個のヌクレオチドよシなるオリゴヌクレオチドを合成し
、次い！１例えば４〜６個のオリゴヌクレオチドを、適
当な配列でリゲートしてフラグメントを形成することに
よシ促進することが１き、次いでこのフラグメントは集
められて配列を形成し、この配列はリゲートされて遺伝
子を形成することができることが判明した。
個のヌクレオチドよシなるオリゴヌクレオチドを合成し
、次い！１例えば４〜６個のオリゴヌクレオチドを、適
当な配列でリゲートしてフラグメントを形成することに
よシ促進することが１き、次いでこのフラグメントは集
められて配列を形成し、この配列はリゲートされて遺伝
子を形成することができることが判明した。
１式のポリペプチドに関してエンコードするＤＮＡ配列
は、例えば適当な開始及び終止コドン及びプラスミドベ
クターの適当な１部位ｔのリゲーション（Ｉｉｇａｔｉ
ｏｎ ）を許す適当な１重鎖末端！側面結合されている
。
は、例えば適当な開始及び終止コドン及びプラスミドベ
クターの適当な１部位ｔのリゲーション（Ｉｉｇａｔｉ
ｏｎ ）を許す適当な１重鎖末端！側面結合されている
。
従って、このＤＮＡ配列は、例えば
５！ ＣＧＡＣＧＡＴＧ
３’ ＴＧＣＴＡＣ
ｆ先行され、この配列は、メチオニンに関する開始コド
ン及びＣ１ａｌ／Ｔａｑｌ制限部位１挿入されるべきＤ
ＮＡ配列を可能とするリンカ−ヌクレオチド（１ｉｎｋ
ｅｒ ｎｕｃｌｅｏｔｉｄ ） ヨｊｎ ルｏ コｔｖ
ＤＮＡ配列は、例えば ５’ ＴＡＡＧ ３’ ＡＴＴＣＡＧＣＴ で後続され、この配列は、終止コドン及び例えばＳａｌ
１位置ｆのベクターに作用するように連結することの１
きるリンカーヌクレオチＰよシなる。
ン及びＣ１ａｌ／Ｔａｑｌ制限部位１挿入されるべきＤ
ＮＡ配列を可能とするリンカ−ヌクレオチド（１ｉｎｋ
ｅｒ ｎｕｃｌｅｏｔｉｄ ） ヨｊｎ ルｏ コｔｖ
ＤＮＡ配列は、例えば ５’ ＴＡＡＧ ３’ ＡＴＴＣＡＧＣＴ で後続され、この配列は、終止コドン及び例えばＳａｌ
１位置ｆのベクターに作用するように連結することの１
きるリンカーヌクレオチＰよシなる。
本発明のＤＮＡ配列の製造時にこれらの配列は、有利に
、オリゴヌクレオチドをリゲーテイングして配列を形成
する前記技術によ、り ＤＮＡ配列を製造することが望
ましい適当なδ′及び３′オリゴヌクレオチＰ中に包含
され、次いフ、これら配列はリゲートされてフラグメン
トを形成し、このフラグメントはリゲートされてＤＮＡ
配列又は遺伝子を形成する。
、オリゴヌクレオチドをリゲーテイングして配列を形成
する前記技術によ、り ＤＮＡ配列を製造することが望
ましい適当なδ′及び３′オリゴヌクレオチＰ中に包含
され、次いフ、これら配列はリゲートされてフラグメン
トを形成し、このフラグメントはリゲートされてＤＮＡ
配列又は遺伝子を形成する。
しかしながら、二者択一的合成法を使用しうる可能性を
排除しない。例えば、遺伝学的コ−ドの同義性は、制限
部位を遺伝子のヌクレオチド配列中に存在することを許
容し、これは遺伝子合成を促進するために使用ｆきる。
排除しない。例えば、遺伝学的コ−ドの同義性は、制限
部位を遺伝子のヌクレオチド配列中に存在することを許
容し、これは遺伝子合成を促進するために使用ｆきる。
従って、本発明のもう１つの態様によれば、プロモータ
配列及びヌクレオチド配列又は１式のポリペブチｒの１
部に関してコードするヌクレオチド配列よりなるベクタ
ーが得られ、このベクターは、１式のポリペプチドの残
余に関してコードするヌクレオチドフラグメントがこの
ベクター内に挿入フき、この際に本発明の複製可能なプ
ラスミド表現ベヒクルを形成するように存在する。
配列及びヌクレオチド配列又は１式のポリペブチｒの１
部に関してコードするヌクレオチド配列よりなるベクタ
ーが得られ、このベクターは、１式のポリペプチドの残
余に関してコードするヌクレオチドフラグメントがこの
ベクター内に挿入フき、この際に本発明の複製可能なプ
ラスミド表現ベヒクルを形成するように存在する。
従って、前記遺伝子フラグメントの挿入のための部位ｆ
のベクターのヌクレオチド配列は、制限部位になシ得、
制限エンドヌクレアーゼは、前記遺伝子フラグメントの
その中への挿入のために好適な部位でベクター切断する
ために使用できる。従って、例えば第１図に記載のヌク
レオチド配列はアミノ酸４４〜４６に関するコドを有す
る。従って、最初の４３個のアミノ酸内〒ＩＦＮ−α２
ポリペプチドＫｍえる作用が望ましい場合には、遺伝子
の５′末端ｆの制限部位に渡る遺伝子のセクション及び
Ｂｓｔ Ｅ ＩＩ ／Ｅｃａ Ｉ制限部位のみが製造さ
れることが必要フある。遺伝子又はフラグメントのこの
セクションをここでＣ１ａ −Ｂｓｔ Ｅフラグメント
と記載する。従って、複製可能なプラスミド表現ベヒク
ルは、直接、適当なＣ１ａ −Ｂｓｔ Ｅ ７ラグメン
トを、適当なゾ［／Ｅｃａ１部位と適当な部位での遺伝
子の３′末端との間のＩＦＮα２遺伝子配列を有するベ
クター中に挿入することによシ製造される。このＣ１ａ
−Ｂｓｔε７ラグメントは、例えば所望の制限部位を
有するＤＮＡ配列の製造によシ製造１き、次いでこの配
列は、適当な制限エンドヌクレアーゼフの消化によシ分
断されるが、変性された末端フラグメントを用いても製
造）き、ＢｓｔＥＩＩ／Ｅｃａ ｌに関する１本鎖結合
性末端が既に存在する。
のベクターのヌクレオチド配列は、制限部位になシ得、
制限エンドヌクレアーゼは、前記遺伝子フラグメントの
その中への挿入のために好適な部位でベクター切断する
ために使用できる。従って、例えば第１図に記載のヌク
レオチド配列はアミノ酸４４〜４６に関するコドを有す
る。従って、最初の４３個のアミノ酸内〒ＩＦＮ−α２
ポリペプチドＫｍえる作用が望ましい場合には、遺伝子
の５′末端ｆの制限部位に渡る遺伝子のセクション及び
Ｂｓｔ Ｅ ＩＩ ／Ｅｃａ Ｉ制限部位のみが製造さ
れることが必要フある。遺伝子又はフラグメントのこの
セクションをここでＣ１ａ −Ｂｓｔ Ｅフラグメント
と記載する。従って、複製可能なプラスミド表現ベヒク
ルは、直接、適当なＣ１ａ −Ｂｓｔ Ｅ ７ラグメン
トを、適当なゾ［／Ｅｃａ１部位と適当な部位での遺伝
子の３′末端との間のＩＦＮα２遺伝子配列を有するベ
クター中に挿入することによシ製造される。このＣ１ａ
−Ｂｓｔε７ラグメントは、例えば所望の制限部位を
有するＤＮＡ配列の製造によシ製造１き、次いでこの配
列は、適当な制限エンドヌクレアーゼフの消化によシ分
断されるが、変性された末端フラグメントを用いても製
造）き、ＢｓｔＥＩＩ／Ｅｃａ ｌに関する１本鎖結合
性末端が既に存在する。
従ってこの方法フの制限部位の使用は、特に、特定の領
域で変性された一連のポリペプチドに関する遺伝子を、
各遺伝子の全合成を必要とせずに複製可能なプラスミド
表現ベヒクル中１製造することを可能とする。更に、制
限部位の任意の組合せに渡るいくつかのベクターが生ぜ
しめられ、このような方法１製造された変性された遺伝
子は、これらの変性をプラスミドベクター間の制限フラ
グメントの転移によるこれら変性の任意の組合せを生せ
しめるために使用することが１きる。例で、変性された
遺伝子合成を促進するためにＩＦＮ−α２遺伝子内に導
入された制限部位を次表に詳述する。
域で変性された一連のポリペプチドに関する遺伝子を、
各遺伝子の全合成を必要とせずに複製可能なプラスミド
表現ベヒクル中１製造することを可能とする。更に、制
限部位の任意の組合せに渡るいくつかのベクターが生ぜ
しめられ、このような方法１製造された変性された遺伝
子は、これらの変性をプラスミドベクター間の制限フラ
グメントの転移によるこれら変性の任意の組合せを生せ
しめるために使用することが１きる。例で、変性された
遺伝子合成を促進するためにＩＦＮ−α２遺伝子内に導
入された制限部位を次表に詳述する。
前記定義の１式のポリペプチドは、公知又は適当な方法
で得られ又は精製されて使用でき、例えば適当な不活性
又は活性の稀釈剤（これは典型的には液体であるが固体
であってもよい）と混合することにより医薬組成物に成
形されうる。
で得られ又は精製されて使用でき、例えば適当な不活性
又は活性の稀釈剤（これは典型的には液体であるが固体
であってもよい）と混合することにより医薬組成物に成
形されうる。
本発明のポリペプチドは、抗ウィルス又は抗癌剤として
又は例えば晴乳動物特にヒトの免疫応答における変性剤
として有効である。
又は例えば晴乳動物特にヒトの免疫応答における変性剤
として有効である。
実施例
次の実施例につき本発明の種々の態様を詳述する。
例１〜３１
エツジ（Ｅｄｇｅ ） 等による基本的方法〔ネーチ
ュ７ （Ｎａｔｕｒｅ ）、１９８１．２９２．７５６
〜７６２及びヌクレイツク・アシｒ・リサーチ（Ｎｅｃ
ｌｅｉｃ Ａｃ１ｄ Ｒｅｓ、）、１９８３，１１
゜６４１９〜６４３５参照〕及び欧州特許機構公開特許
第６２９７１Ａ２号明細書に記載の方法で、オリゴデオ
キシリぜヌクレオチド（オリゴヌクレオチ１″）から、
ＩＦＮ遺伝子を製造した。
ュ７ （Ｎａｔｕｒｅ ）、１９８１．２９２．７５６
〜７６２及びヌクレイツク・アシｒ・リサーチ（Ｎｅｃ
ｌｅｉｃ Ａｃ１ｄ Ｒｅｓ、）、１９８３，１１
゜６４１９〜６４３５参照〕及び欧州特許機構公開特許
第６２９７１Ａ２号明細書に記載の方法で、オリゴデオ
キシリぜヌクレオチド（オリゴヌクレオチ１″）から、
ＩＦＮ遺伝子を製造した。
これらの例は、Ｅ・コリー中に該遺伝子を表現させるた
めの、合成ｆｉプロモータを含有し、プラスミドベクタ
ーｐＳＴＰ １にリゲートされうる、Ｈｕ Ｉ ＦＮ−
α２類縁体の遺伝子の輿法を記載する。
めの、合成ｆｉプロモータを含有し、プラスミドベクタ
ーｐＳＴＰ １にリゲートされうる、Ｈｕ Ｉ ＦＮ−
α２類縁体の遺伝子の輿法を記載する。
１、 オリゴヌクレオチｒ合成
欧州特許機構公開特許第６２９７１Ａ２号明細書に記載
の固相合成法により又は前記特許明細書に記載の試薬及
び溶媒を混成ポリジメチルアクリルアミド珪藻土支持体
と共に用いて、Ｍ。
の固相合成法により又は前記特許明細書に記載の試薬及
び溶媒を混成ポリジメチルアクリルアミド珪藻土支持体
と共に用いて、Ｍ。
Ｊ、ゲイト（Ｇａｉｔ）等によるジャーナル・オブ・ケ
ミカル・ソサエティ、ケミカル・コミュニケーションズ
（Ｊ 、Ｃｈｅｍ、Ｓｏｃ、、Ｃｈｅｍ、Ｃｏｍｍ−ｕ
ｎ、）１９８２．３７〜４０頁に記載の連続フローアセ
ンブリー装置中で、オリザヌクレオチＰを製造した。粗
製オリゴヌクレオチドを、主に、Ｃ、Ｒ、二：ｘ−−ド
ア （Ｎｅｗｔｏｎ ）等によるアナリテイカル・ビオ
ヒエミー（Ａｎａｌ。
ミカル・ソサエティ、ケミカル・コミュニケーションズ
（Ｊ 、Ｃｈｅｍ、Ｓｏｃ、、Ｃｈｅｍ、Ｃｏｍｍ−ｕ
ｎ、）１９８２．３７〜４０頁に記載の連続フローアセ
ンブリー装置中で、オリザヌクレオチＰを製造した。粗
製オリゴヌクレオチドを、主に、Ｃ、Ｒ、二：ｘ−−ド
ア （Ｎｅｗｔｏｎ ）等によるアナリテイカル・ビオ
ヒエミー（Ａｎａｌ。
トグラフイにより精製した。
この例の目的のために、ここで、ＩＴａｑ、２Ｔａｑと
してかつ３〜６８の数字で示されているオリゴヌクレオ
チドの構造は、合成インター７二ロンα２ 配列を描い
ている第１図の図示オリゴヌクレオチＰ配列の上及び下
に示されている水平矢印で示されている。アミノ酸変性
よりなるオリ！ヌクレオチｒに関連させることが望まし
い場合には、相応する非変性オリゴヌクレオチＰに付さ
れたと同じ数を、変性されたオリゴヌクレオチドに付し
、但し、付加的な記号は、変性されたオリゴヌクレオチ
Ｐを区別するために用いられており、その構造は後に同
定される。
してかつ３〜６８の数字で示されているオリゴヌクレオ
チドの構造は、合成インター７二ロンα２ 配列を描い
ている第１図の図示オリゴヌクレオチＰ配列の上及び下
に示されている水平矢印で示されている。アミノ酸変性
よりなるオリ！ヌクレオチｒに関連させることが望まし
い場合には、相応する非変性オリゴヌクレオチＰに付さ
れたと同じ数を、変性されたオリゴヌクレオチドに付し
、但し、付加的な記号は、変性されたオリゴヌクレオチ
Ｐを区別するために用いられており、その構造は後に同
定される。
更に、オリ♂ヌクレオチｒ ｌ Ｔａｑ及び２ Ｔａｑ
は、ここで、欧州特許機構公開特許第６２９７１Ａ２号
明細書の第２図で同定されたオリゴヌクレオチＰ１及び
２とは異なって記されており、ここで、ｌ Ｔａｑ及び
２ Ｔａｑは混乱をさけるために用いられている。従っ
て、オリゴヌクレ矛チＦＩＴａｑ及び２ Ｔａｑは次の
配列を有する：Ｉ Ｔａｑ ５’ＣＧＡＣＧＡＴＧＴ
ＧＴＧＡＴ３’２ Ｔａｑ ３’ ＴＧＣＴＡＣＡ
ＣＡＣＴＡＧＡＣＧＧＣ５’この配列は、更に、望まし
い場合には、ＩＦＮ−α２ の最初の５個のアミノ酸の
任意のものとは異なるアミノ酸に関してコーＰするよう
に又は所望によりこのような任意のアミノ酸を排除する
ように変性されてよい。
は、ここで、欧州特許機構公開特許第６２９７１Ａ２号
明細書の第２図で同定されたオリゴヌクレオチＰ１及び
２とは異なって記されており、ここで、ｌ Ｔａｑ及び
２ Ｔａｑは混乱をさけるために用いられている。従っ
て、オリゴヌクレ矛チＦＩＴａｑ及び２ Ｔａｑは次の
配列を有する：Ｉ Ｔａｑ ５’ＣＧＡＣＧＡＴＧＴ
ＧＴＧＡＴ３’２ Ｔａｑ ３’ ＴＧＣＴＡＣＡ
ＣＡＣＴＡＧＡＣＧＧＣ５’この配列は、更に、望まし
い場合には、ＩＦＮ−α２ の最初の５個のアミノ酸の
任意のものとは異なるアミノ酸に関してコーＰするよう
に又は所望によりこのような任意のアミノ酸を排除する
ように変性されてよい。
オリゾヌクレオチＰを会合させて主として第１表に記載
のような小さいＤＮＡサックラダメントＡ−Ｍにした： 第１表 これらのオリゴヌクレオチｒを、エツジ（Ｅｄｇｅ ）
等によるヌクレイツク・アンｒ・リサーチ（Ｎｕｃｌｅ
ｉｃ Ａｃ１ｄｓ Ｒｅｓ 、 ） １９８３．１１．
６４１９．〜６４３５頁及び欧州特許機構公開特許第６
２９７１Ａ２号明細書に記載の方法で又は小サブフラグ
メントＢの製法に詳述されているような次の変形により
会合させて、小さいＤＮＡサブ７ラグメントＡ−Ｍにし
た：オリゴヌクレオチドａ 、 ７ 、 ａ及び９（各
々４００ｐｍｏ１．）（第１図）を、別々に前記欧州特
許機構公開特許明細書に記載のようにポリヌクレオチＰ
キナーゼ及び〔γ−３２ｐ ） ＡＴＰ を用いてホ
スホリル化し、次いで、比１：０．９：０．８：０．９
で混合し、エタノール沈殿させた。
のような小さいＤＮＡサックラダメントＡ−Ｍにした： 第１表 これらのオリゴヌクレオチｒを、エツジ（Ｅｄｇｅ ）
等によるヌクレイツク・アンｒ・リサーチ（Ｎｕｃｌｅ
ｉｃ Ａｃ１ｄｓ Ｒｅｓ 、 ） １９８３．１１．
６４１９．〜６４３５頁及び欧州特許機構公開特許第６
２９７１Ａ２号明細書に記載の方法で又は小サブフラグ
メントＢの製法に詳述されているような次の変形により
会合させて、小さいＤＮＡサブ７ラグメントＡ−Ｍにし
た：オリゴヌクレオチドａ 、 ７ 、 ａ及び９（各
々４００ｐｍｏ１．）（第１図）を、別々に前記欧州特
許機構公開特許明細書に記載のようにポリヌクレオチＰ
キナーゼ及び〔γ−３２ｐ ） ＡＴＰ を用いてホ
スホリル化し、次いで、比１：０．９：０．８：０．９
で混合し、エタノール沈殿させた。
沈殿物を水（５０μＬ）中に溶かし、この溶液を１００
℃で２分間加熱して残留キナーゼ活性を崩壊させた。オ
リｔヌクレオチ）’１０（４００ｐｍｏｌ 、 ）を添
加し、混合物をブタノールで抽出し、次いで凍結乾燥さ
せた。残りをアニーリングし、リゲートさせて、前記欧
州特許機構公開特許明細書に記載のように７ラグメント
Ｂを生じさせた。
℃で２分間加熱して残留キナーゼ活性を崩壊させた。オ
リｔヌクレオチ）’１０（４００ｐｍｏｌ 、 ）を添
加し、混合物をブタノールで抽出し、次いで凍結乾燥さ
せた。残りをアニーリングし、リゲートさせて、前記欧
州特許機構公開特許明細書に記載のように７ラグメント
Ｂを生じさせた。
同様に、オリ＝ｒヌクレオ−Ｆ−）’ ｌ Ｔａｑ、
２ Ｔａｑ、未 ３．４及び５から、床ホスホリル化のままのオ。
２ Ｔａｑ、未 ３．４及び５から、床ホスホリル化のままのオ。
す♂ヌクレオチド ｌ Ｔａｑを用いて、以後に八−Ｔ
ａｑと記載される７ラグメントを生じることにより、小
さいサブ７ラグメントＡを製造した。
ａｑと記載される７ラグメントを生じることにより、小
さいサブ７ラグメントＡを製造した。
にする
同様に７ラグメントＡ−Ｔａｑ−Ｍを、フラグメントＢ
〜Ｌ０５７−ヒｒロキシ末端のＴ４．ｔ？リヌクレオチ
Ｐキナーゼ及びＡＴＰ （［γ−３２ｐ〕ＡＴＰＯ，１
５％を含有）を用いるホスホリル化の後にリゲートする
ことにより第２表に示した群の配列（１〜ｍＭ）を形成
させた。
〜Ｌ０５７−ヒｒロキシ末端のＴ４．ｔ？リヌクレオチ
Ｐキナーゼ及びＡＴＰ （［γ−３２ｐ〕ＡＴＰＯ，１
５％を含有）を用いるホスホリル化の後にリゲートする
ことにより第２表に示した群の配列（１〜ｍＭ）を形成
させた。
第２表
配列■、■又はＩ［［Ｍを１０チポリアクリルアミｒ％
平板中でのゲル電気泳動により精製し、Ｉ＋ｎ＋Ｉ１１
＋Ｍ又はＩ＋Ｉ［＋Ｉ［ＩＭをリゲートして適当なＨｕ
ｌ ＦＮ−α２ 類縁体の遺伝子を生せしめた。沈殿
の後に生成混合物を先に記載のようにＴ４ ポリヌク
レオチドキナーゼを用いてホスホリル化した。この例の
先に記載の方法及びエツジ（Ｅｄｇｅ ）等によるネー
ーｙ−ニア （Ｎａｔｕｒｅ ）１９８１．２９２．７
５６〜７６２頁及びヌクレイツク・アンス・リサーチ（
ＮｕｃｌｅｉｃＡｃｉｄｓ Ｒｅｓ、）１９８３．１１
．６４１９〜６４３５頁及び欧州壽許機構公開特許第６
２９７１Ａ２号明細書に記載の基本的方法たより表に記
載のオリザヌクレオチＰのリゲーションにより、次のＨ
ｕｌＦＮ−α２ 類縁体を製造した。前記のように、以
下Ｖｃ ｌ Ｔａｑ、 ２ Ｔａｑ及び３〜６８の数字
で示されているオリゴヌクレオチＰの構造は、第１図の
オリザヌクレオチド配列の上及び下の水平の矢印で示さ
れている。ここで、アミノ酸配列に関連するｒ−インタ
ーフェロンに関しては、ストラクチュア・オブ・ザ・ヒ
ュマン・イムーｙ−ＩＦＮ−ゲｙ （５ｔｒｕｃｔｕｒ
ｅ ｏｆ ｔｈｅｈｕｍａｎ ｉｍｍｕｎｅ ＩＦ
Ｎ ｇｅｎｅ ） ＰＷ グレイ（Ｇｒａｙ ）又は
Ｏ，Ｖ、ゲデ／Ｉ／ （Ｇｏｅｄｄｌｅ ）ｆ）：４−
ｆ：ｓ−１（Ｎａｔｕｒｅ ） ２９８．８５９頁（１
９８２）に詳述されている。
平板中でのゲル電気泳動により精製し、Ｉ＋ｎ＋Ｉ１１
＋Ｍ又はＩ＋Ｉ［＋Ｉ［ＩＭをリゲートして適当なＨｕ
ｌ ＦＮ−α２ 類縁体の遺伝子を生せしめた。沈殿
の後に生成混合物を先に記載のようにＴ４ ポリヌク
レオチドキナーゼを用いてホスホリル化した。この例の
先に記載の方法及びエツジ（Ｅｄｇｅ ）等によるネー
ーｙ−ニア （Ｎａｔｕｒｅ ）１９８１．２９２．７
５６〜７６２頁及びヌクレイツク・アンス・リサーチ（
ＮｕｃｌｅｉｃＡｃｉｄｓ Ｒｅｓ、）１９８３．１１
．６４１９〜６４３５頁及び欧州壽許機構公開特許第６
２９７１Ａ２号明細書に記載の基本的方法たより表に記
載のオリザヌクレオチＰのリゲーションにより、次のＨ
ｕｌＦＮ−α２ 類縁体を製造した。前記のように、以
下Ｖｃ ｌ Ｔａｑ、 ２ Ｔａｑ及び３〜６８の数字
で示されているオリゴヌクレオチＰの構造は、第１図の
オリザヌクレオチド配列の上及び下の水平の矢印で示さ
れている。ここで、アミノ酸配列に関連するｒ−インタ
ーフェロンに関しては、ストラクチュア・オブ・ザ・ヒ
ュマン・イムーｙ−ＩＦＮ−ゲｙ （５ｔｒｕｃｔｕｒ
ｅ ｏｆ ｔｈｅｈｕｍａｎ ｉｍｍｕｎｅ ＩＦ
Ｎ ｇｅｎｅ ） ＰＷ グレイ（Ｇｒａｙ ）又は
Ｏ，Ｖ、ゲデ／Ｉ／ （Ｇｏｅｄｄｌｅ ）ｆ）：４−
ｆ：ｓ−１（Ｎａｔｕｒｅ ） ２９８．８５９頁（１
９８２）に詳述されている。
Ｂ 旦りμ［ヱＬ」を１１２畳１１す！しシ一二二ング
第３表に記載のインタ−７エロンーα２類縁体の人工遺
伝子をクローン化して、Ｅ・コリーに１２のトリプトフ
ァン（ｔｒｐ ）オペロンのプロモーターを基礎とする
プロモーターを包含するプラスミＰベクターｐＳＴＰｌ
中に入れ〔ウィンダス（Ｗｉｎｄａｓ ）等による、ヌ
クレイツク・アシズ−ＩＪ ？−チ（Ｎｕｃｌｅｌｃ
Ａｃ１ｄｓ Ｒｅ５ｅａｒｃｈ）１０巻（１９８３）、
６６３９頁参照〕。
伝子をクローン化して、Ｅ・コリーに１２のトリプトフ
ァン（ｔｒｐ ）オペロンのプロモーターを基礎とする
プロモーターを包含するプラスミＰベクターｐＳＴＰｌ
中に入れ〔ウィンダス（Ｗｉｎｄａｓ ）等による、ヌ
クレイツク・アシズ−ＩＪ ？−チ（Ｎｕｃｌｅｌｃ
Ａｃ１ｄｓ Ｒｅ５ｅａｒｃｈ）１０巻（１９８３）、
６６３９頁参照〕。
ベクター製造のために、ｐＳＴＰ １ ２００１１ｆｌ
を水１６８ ｐｉ、 １０ ■／ｍｌ ＢＳＡ ２
μｔ 中に溶かしＩＯＸ制限緩衝液〔この制限緩衝液は
トリＸ ＨＣｚ ６ ｍＭ 、β−メルカプトエタノ
ール６ｍＭ 、 ＭｇＣｔ２６ ｍＭ 、制限エンドヌ
クレアーゼＣ１ａｌ にューイングランＰ・ビオラブ：
ＮｅｗＥｎｇｌａｎｄ Ｂｉｏｌａｂ、 ５単位／
ｐＬ ） ｌ ＯｒｌＬｔである）２０μｔ を添加し
、この混合物を、３７℃で直線化されたプラスミｔがス
ーパーコイル及びニック（ｎｉｃｋ）の入った環状のも
のより多くなるまで３時間以上インキュベートした。
を水１６８ ｐｉ、 １０ ■／ｍｌ ＢＳＡ ２
μｔ 中に溶かしＩＯＸ制限緩衝液〔この制限緩衝液は
トリＸ ＨＣｚ ６ ｍＭ 、β−メルカプトエタノ
ール６ｍＭ 、 ＭｇＣｔ２６ ｍＭ 、制限エンドヌ
クレアーゼＣ１ａｌ にューイングランＰ・ビオラブ：
ＮｅｗＥｎｇｌａｎｄ Ｂｉｏｌａｂ、 ５単位／
ｐＬ ） ｌ ＯｒｌＬｔである）２０μｔ を添加し
、この混合物を、３７℃で直線化されたプラスミｔがス
ーパーコイル及びニック（ｎｉｃｋ）の入った環状のも
のより多くなるまで３時間以上インキュベートした。
直線化されたプラスミｒを１．４チ調製アガロースゲル
上で未消化プラマミ１分子から単離した。直線状プラス
ミＰの・々ンＰを１／１０濃度のトリスホウ酸塩電気泳
動緩衝液（トリス塩基１０８ｇ、ホク酸５５ｇ及び０．
５ ＭＥＤＴＡ （ｐＨａ）２０ｍを水で１ｔにしたも
のを１対１００で稀釈）５ｍｌ中に電気溶離させた。啓
離液量を、繰返しブタノール抽出により約５ｏμｔまで
減少させ、水で５００μｔまで稀釈した。この溶離液ラ
フエノール：クロロホルム（１：１）５００μｔで２回
、エーテル飽和水１μｔで２回抽出し、ブタノール抽出
により２０μｍ−１で濃縮した。これに、引続き、水１
６０μｔ、３Ｍ酢酸ナトリウム（ｐＨ５，２） ２０μ
を及びエタノール５００μｔを添加した。この線状プラ
スミ１を、−２０℃で１夜放置沈殿させ、エラペンＰＡ
／ ７−ｒ イクｏ ７ ユージ（Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ
ｍｉｃｒｏｆｕｇｅ ）中で１５分間遠心することによ
りベレット化した。このペレットを水１４０μｔ中に入
れ、ＩＯＸ制限緩衝液２０μｔ を添加し、引続き１ダ
／ｄＢｓＡ ２０μを及び２Ｍ塩化ナトリウム１５μ
ｔ を添加した。二ンＰヌクレアーゼ５ａｔＩ（ヘーリ
ンガー、１０単位／ｆｉｄ）５μｔ を添加し、混合物
を３７℃で、ＰＳＴＰ １の犬Ｃ１ａ １− Ｓａｔ
Ｉ ７ラグメントが優勢になるま７ラグメントは、１．
４チ調製アガから前記のようにして調製した。このＣａ
ｔ Ｔ −Ｓａｚ ｌベクターフラグメントを水ｌｄ中
に入れ、ＤＮＡ 濃度を測定し、４７μｍ１／ｍｌに
調節した。リゲーションのために、ベクターＤＮＡ（０
，７μｇ）の１４．９μｔ を人工インターフェロン遺
伝子７ラグメント（水中）に添加し、このＤＮＡ 混
合物を真空中で乾燥させた。このＤＮＡ を２ｘリガ
ーゼ緩衝ｉ（１３２ｍＭトリヌＨＣｚ（ｐＨ７，６）１
３．２ｍＭ ＭｇＣｔ２１０ ｍＭ ＤＴＴ １０
ｍＭ及び０．４ｍＭ ＡＴＰ） ５２５ ｔｉｔ、リガ
ーゼ稀釈液（５０ｍＭ ） リｘ ＨＣｔ（ｐＨ７，６
）、ｌＱｍＭ２−メルカプトエタノール５００μＩＩ／
ｍＪＢｓＡ） ７９μｔ１１０ｍＭ ＡＴＰ２６０ ｐ
ｔ、水３３．５ ｔｔＬ 及びＴ４ＤＮＡリガーゼ（Ｂ
ＲＬ、 ２．５ヴアイスユニツト（Ｗｅｉｓｓ Ｕｎｉ
ｔ）／ ｔｔＬ ） ３０ μｔを含有する混合物２６
．５μｔ 中に入れた。リゲーションを５℃で２時間、
次いで１２℃で１夜行なった。
上で未消化プラマミ１分子から単離した。直線状プラス
ミＰの・々ンＰを１／１０濃度のトリスホウ酸塩電気泳
動緩衝液（トリス塩基１０８ｇ、ホク酸５５ｇ及び０．
５ ＭＥＤＴＡ （ｐＨａ）２０ｍを水で１ｔにしたも
のを１対１００で稀釈）５ｍｌ中に電気溶離させた。啓
離液量を、繰返しブタノール抽出により約５ｏμｔまで
減少させ、水で５００μｔまで稀釈した。この溶離液ラ
フエノール：クロロホルム（１：１）５００μｔで２回
、エーテル飽和水１μｔで２回抽出し、ブタノール抽出
により２０μｍ−１で濃縮した。これに、引続き、水１
６０μｔ、３Ｍ酢酸ナトリウム（ｐＨ５，２） ２０μ
を及びエタノール５００μｔを添加した。この線状プラ
スミ１を、−２０℃で１夜放置沈殿させ、エラペンＰＡ
／ ７−ｒ イクｏ ７ ユージ（Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ
ｍｉｃｒｏｆｕｇｅ ）中で１５分間遠心することによ
りベレット化した。このペレットを水１４０μｔ中に入
れ、ＩＯＸ制限緩衝液２０μｔ を添加し、引続き１ダ
／ｄＢｓＡ ２０μを及び２Ｍ塩化ナトリウム１５μ
ｔ を添加した。二ンＰヌクレアーゼ５ａｔＩ（ヘーリ
ンガー、１０単位／ｆｉｄ）５μｔ を添加し、混合物
を３７℃で、ＰＳＴＰ １の犬Ｃ１ａ １− Ｓａｔ
Ｉ ７ラグメントが優勢になるま７ラグメントは、１．
４チ調製アガから前記のようにして調製した。このＣａ
ｔ Ｔ −Ｓａｚ ｌベクターフラグメントを水ｌｄ中
に入れ、ＤＮＡ 濃度を測定し、４７μｍ１／ｍｌに
調節した。リゲーションのために、ベクターＤＮＡ（０
，７μｇ）の１４．９μｔ を人工インターフェロン遺
伝子７ラグメント（水中）に添加し、このＤＮＡ 混
合物を真空中で乾燥させた。このＤＮＡ を２ｘリガ
ーゼ緩衝ｉ（１３２ｍＭトリヌＨＣｚ（ｐＨ７，６）１
３．２ｍＭ ＭｇＣｔ２１０ ｍＭ ＤＴＴ １０
ｍＭ及び０．４ｍＭ ＡＴＰ） ５２５ ｔｉｔ、リガ
ーゼ稀釈液（５０ｍＭ ） リｘ ＨＣｔ（ｐＨ７，６
）、ｌＱｍＭ２−メルカプトエタノール５００μＩＩ／
ｍＪＢｓＡ） ７９μｔ１１０ｍＭ ＡＴＰ２６０ ｐ
ｔ、水３３．５ ｔｔＬ 及びＴ４ＤＮＡリガーゼ（Ｂ
ＲＬ、 ２．５ヴアイスユニツト（Ｗｅｉｓｓ Ｕｎｉ
ｔ）／ ｔｔＬ ） ３０ μｔを含有する混合物２６
．５μｔ 中に入れた。リゲーションを５℃で２時間、
次いで１２℃で１夜行なった。
−１７デル（Ｍａｎｄｅｌ ）及びヒガ（Ｈｉｇａ ）
ＶＣよるジャーナル・オブ・モレキュラー・／々イオ
ロジイ（Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｏ１．Ｂｉｏｌ、
）５３ （１９７５）、１５４頁に記載の標準法の変
法を用い、菌株ＪＡ２２１を形質転換するために、この
ＤＮＡ 混合物１ｏμｔを直接使用した。この変法は
、形質転換緩衝液としての５ｍＭＩＪｘＨＣ４（１）Ｈ
ａ）中００．１ＭＣａＣ２２ノ使用、氷上での細胞の４
５分間インキュベーション、引続（ＤＮＡ 添加、熱
衝撃処理の後の氷上での３０分インキュベーション及び
引続＜ ３．８ ｍｌまで ゛のＬブイヨン（Ｌ
ｂｒｏｔｈ）の添加を包含した。
ＶＣよるジャーナル・オブ・モレキュラー・／々イオ
ロジイ（Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｏ１．Ｂｉｏｌ、
）５３ （１９７５）、１５４頁に記載の標準法の変
法を用い、菌株ＪＡ２２１を形質転換するために、この
ＤＮＡ 混合物１ｏμｔを直接使用した。この変法は
、形質転換緩衝液としての５ｍＭＩＪｘＨＣ４（１）Ｈ
ａ）中００．１ＭＣａＣ２２ノ使用、氷上での細胞の４
５分間インキュベーション、引続（ＤＮＡ 添加、熱
衝撃処理の後の氷上での３０分インキュベーション及び
引続＜ ３．８ ｍｌまで ゛のＬブイヨン（Ｌ
ｂｒｏｔｈ）の添加を包含した。
平板培養前のインキュベーションを、振動せずに室温で
１夜行なった。懸濁液の部分量をアンピシリン５０ ｕ
ｇ／ｒＩＬｌ を有するし平板に重層した。
１夜行なった。懸濁液の部分量をアンピシリン５０ ｕ
ｇ／ｒＩＬｌ を有するし平板に重層した。
形質転換体を次のように、インターフェロン類縁体のク
ローン化人工遺伝子の存在に関してスクリーニングした
： １、Ｌ−フレート上で、インターフェロン類縁体に関す
る遺伝子を評価できないほどに含有しなかった完全なベ
クタープラスミｒｐＳＴＰ１を包含する形質転換体を同
定するために、コロニイにテトラサイクリン１０μｔ７
ｒｔｔｔですじをつけた。
ローン化人工遺伝子の存在に関してスクリーニングした
： １、Ｌ−フレート上で、インターフェロン類縁体に関す
る遺伝子を評価できないほどに含有しなかった完全なベ
クタープラスミｒｐＳＴＰ１を包含する形質転換体を同
定するために、コロニイにテトラサイクリン１０μｔ７
ｒｔｔｔですじをつけた。
２ マニアチス（Ｍａｎｉａｔｉｓ、）等によるモレキ
ュラー・クローニング（Ｍｏ１ｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎ
ｉｎｇ）；ア・ラゼラトリイ・マニュアル（Ａ Ｌａｂ
ｏｒａｔｏｒｙＭａｎｕａｌ、Ｃｏ１ｄ Ｓｐｒｉｎｇ
Ｈａｒｂｏｒ ）に記載の標準法を用いて、テトラサ
イクリン感性形質転換体をコロニイハイプリダイゼーシ
ョン分析により分析した。
ュラー・クローニング（Ｍｏ１ｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎ
ｉｎｇ）；ア・ラゼラトリイ・マニュアル（Ａ Ｌａｂ
ｏｒａｔｏｒｙＭａｎｕａｌ、Ｃｏ１ｄ Ｓｐｒｉｎｇ
Ｈａｒｂｏｒ ）に記載の標準法を用いて、テトラサ
イクリン感性形質転換体をコロニイハイプリダイゼーシ
ョン分析により分析した。
例えｔ！！１１１の人工インターフェロン遺伝子を包含
する組換え体に関するスクリーニングのために、異なる
小サブフラグメント即ち天然インター７二ロンα２ 遺
伝子中に包含される塩基配列を有するもの（下群）と人
工インターフェロン遺伝子例えば例１１の人工インター
フェロン遺伝子に関する配列を有するもの（サブ７ラグ
メントＢＴ２／３）とを用いて、２種の別々のハイブリ
ダイゼーションを実施した。これらサブフラグメントの
２ｐモルを乾燥させ、ニック・トランスレーション緩衝
１（ｎｉｃｋｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ ｂｕｆｆｅｒ；
５０ｍＭ燐酸カリウＡ（ＰＨ７，４）、５ ｍＭ Ｍｇ
Ｃｚ２） ８０ ｔｉｔ、２００μＭ ｄＡＴＰ ３２
μｔ、２００μＭ ｄＧＴＰ ３２μｔ。
する組換え体に関するスクリーニングのために、異なる
小サブフラグメント即ち天然インター７二ロンα２ 遺
伝子中に包含される塩基配列を有するもの（下群）と人
工インターフェロン遺伝子例えば例１１の人工インター
フェロン遺伝子に関する配列を有するもの（サブ７ラグ
メントＢＴ２／３）とを用いて、２種の別々のハイブリ
ダイゼーションを実施した。これらサブフラグメントの
２ｐモルを乾燥させ、ニック・トランスレーション緩衝
１（ｎｉｃｋｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ ｂｕｆｆｅｒ；
５０ｍＭ燐酸カリウＡ（ＰＨ７，４）、５ ｍＭ Ｍｇ
Ｃｚ２） ８０ ｔｉｔ、２００μＭ ｄＡＴＰ ３２
μｔ、２００μＭ ｄＧＴＰ ３２μｔ。
２００ ｔＭ ｄＴＴＰ ３２μｔ、ａ３２Ｐ ｄＣ
ＴＰ（１０ｍｃ Ｉ／ｍｌ、 ３０００ｃ ｉ／ｍ−ｖ
−ル、７ ？ −シ’ｒ ム（Ａｍｅｒｓｈａｍ ）
２５ ｆｉｔ、水５７９ ａｔ 及びＤＮＡポリメラー
ゼ！（１２ユニット／μｔ、ニューイングラｙＦ−ビオ
ラブ（Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ −Ｂｉｏｌａｂ、
）） ２０μＬ Ｌりなる混合物５０１１を中に溶か
した。室温で２時間後に、このラベルされたサブフラグ
メントをセファデックスＧ５ｏＦ クロマトグラフィ
により、ランニング緩新液としての１０ｍＭトリｘＨＣ
Ｌ （ｐ）４８．１ ）、１ ｍＭ ＥＤＴＡを用いて
尋離した。フィルター上でのコロニイの溶菌（Ｌｙｓｉ
ｓ）及びベーキングは、マニアチス等によるモレキュラ
ー・クローニンク：ア・ラーラトリイ・マニュアル、コ
ールド・スプリング・バー・々−）に記載のように実施
した。フィルター上物をデンハルッ溶液〔Ｄｅｎｈａｒ
ｄｔｓ ５ｏｌｕｔｉｏｎ ； ７（コル（Ｆｌｃｏ
ｌｌ）、ノリビニルピロリｒン及びＢＳＡ 各々１゜
１１／Ｌでの水中の５０倍稀−釈〕２０μを中でプシー
・イブリダイズした。 ｐラベルされたサラフラグメン
ト試料を２容量の８０（ｖ／ｖ）％ホｐｙ ム７ ミ）
’、 １０ ｍＭ ＮａＯＨ１１ＮａＯＨ１ｌ、０．
０５（Ｗ／Ｖ）％キシレンシアツール及び０゜０５（Ｗ
／Ｖ）％ブロモフェノールゾルー中ニ稀釈し、氷上での
冷却の前に１００℃で２分間加熱した。試料を、フィル
ター上のプレハイブリダイゼーション溶液に直接添加し
、６５℃で１夜放置してハイブリダイズさせ、オートラ
ジオグラフィの前に空気乾燥させた。例１１のインター
フェロン遺伝子の組換え木を、双方のＦ群及びＢＩ２／
３群サブ７ラグメントへのボジチゾハイゾリダイゼーシ
ョンにより同定した＠３、 インターフェロン類縁遺伝
子の正しいオルガニゼーションヲ、二ンＰヌクレアーゼ
Ｈｐａ Ｔｌを用いる制限分析によりチェックした。例
えば６チポリアクリルアミＰゲル上での分析は、このイ
ンターフェロン遺伝子が、インターフェロンα２ 遺伝
子の型と同じＨｐａ ｕ ７ラグメントの型を生じるこ
とを示した。
ＴＰ（１０ｍｃ Ｉ／ｍｌ、 ３０００ｃ ｉ／ｍ−ｖ
−ル、７ ？ −シ’ｒ ム（Ａｍｅｒｓｈａｍ ）
２５ ｆｉｔ、水５７９ ａｔ 及びＤＮＡポリメラー
ゼ！（１２ユニット／μｔ、ニューイングラｙＦ−ビオ
ラブ（Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ −Ｂｉｏｌａｂ、
）） ２０μＬ Ｌりなる混合物５０１１を中に溶か
した。室温で２時間後に、このラベルされたサブフラグ
メントをセファデックスＧ５ｏＦ クロマトグラフィ
により、ランニング緩新液としての１０ｍＭトリｘＨＣ
Ｌ （ｐ）４８．１ ）、１ ｍＭ ＥＤＴＡを用いて
尋離した。フィルター上でのコロニイの溶菌（Ｌｙｓｉ
ｓ）及びベーキングは、マニアチス等によるモレキュラ
ー・クローニンク：ア・ラーラトリイ・マニュアル、コ
ールド・スプリング・バー・々−）に記載のように実施
した。フィルター上物をデンハルッ溶液〔Ｄｅｎｈａｒ
ｄｔｓ ５ｏｌｕｔｉｏｎ ； ７（コル（Ｆｌｃｏ
ｌｌ）、ノリビニルピロリｒン及びＢＳＡ 各々１゜
１１／Ｌでの水中の５０倍稀−釈〕２０μを中でプシー
・イブリダイズした。 ｐラベルされたサラフラグメン
ト試料を２容量の８０（ｖ／ｖ）％ホｐｙ ム７ ミ）
’、 １０ ｍＭ ＮａＯＨ１１ＮａＯＨ１ｌ、０．
０５（Ｗ／Ｖ）％キシレンシアツール及び０゜０５（Ｗ
／Ｖ）％ブロモフェノールゾルー中ニ稀釈し、氷上での
冷却の前に１００℃で２分間加熱した。試料を、フィル
ター上のプレハイブリダイゼーション溶液に直接添加し
、６５℃で１夜放置してハイブリダイズさせ、オートラ
ジオグラフィの前に空気乾燥させた。例１１のインター
フェロン遺伝子の組換え木を、双方のＦ群及びＢＩ２／
３群サブ７ラグメントへのボジチゾハイゾリダイゼーシ
ョンにより同定した＠３、 インターフェロン類縁遺伝
子の正しいオルガニゼーションヲ、二ンＰヌクレアーゼ
Ｈｐａ Ｔｌを用いる制限分析によりチェックした。例
えば６チポリアクリルアミＰゲル上での分析は、このイ
ンターフェロン遺伝子が、インターフェロンα２ 遺伝
子の型と同じＨｐａ ｕ ７ラグメントの型を生じるこ
とを示した。
２ジチゾ／イプリダイゼ一シヨン信号を生じるインター
フェロン組換え体３個を、小規模で、この類縁体の製造
に引続き使用するために重要なインターフェロン類縁体
を表現する最終クローンを選択するために、生長させた
。この小規模生長は次のようにして実施した： 組換え体を、高いトリプトファン濃度（１００ｍ９／ｌ
）及びアンピシリン５０μＥ／／Ｒ１を有するスピツ
ィツエンス培地ＣＳｐｉｚｉｚｅｎｓｍｅｄｉｕｍ ：
１ ／ Ｉ Ｏ稀釈度の（ＮＨ４）２Ｓ０□２０９
／ｌ、に２ＨＰＯ４１０６ｇ／ｌ、 クエン酸ナトリ
ウム１（１／／、、ＫＨｇＰ０４６０１１／Ｌ。
フェロン組換え体３個を、小規模で、この類縁体の製造
に引続き使用するために重要なインターフェロン類縁体
を表現する最終クローンを選択するために、生長させた
。この小規模生長は次のようにして実施した： 組換え体を、高いトリプトファン濃度（１００ｍ９／ｌ
）及びアンピシリン５０μＥ／／Ｒ１を有するスピツ
ィツエンス培地ＣＳｐｉｚｉｚｅｎｓｍｅｄｉｕｍ ：
１ ／ Ｉ Ｏ稀釈度の（ＮＨ４）２Ｓ０□２０９
／ｌ、に２ＨＰＯ４１０６ｇ／ｌ、 クエン酸ナトリ
ウム１（１／／、、ＫＨｇＰ０４６０１１／Ｌ。
ＭｇＳＯ４・７８２０２ 、ｌｉ’ ／ｌ （ｐＨ７，
０）を、カゼイン加水分解物２５１１／ｌ、Ｌ−ロイシ
ン１ｇ／ｌ、チアミン０．２ｊ／１１アンピシリン１６
６５ｇ／を及びダルコース１０（１／ｌを含有する溶液
２／１００量と一緒にした〕１０１Ｒ１中で１夜生長さ
せた〔二ニー・ブルンスクイックＧ２４シ二一キング・
インキュベーター（ＮｅｗＢｒｕｎｓｗｌｃｋ Ｇ２
４Ｓｈａｋｌｎｇ １ｎｃｕｂａｔｏｒ）中、３７℃
で２５Ｏｒ、ｌ）、ｍ、で〕。細胞をベレット化し、２
■／ｌの低トリゾトクアン濃度を補足したスピツイツエ
ンス培地７５ｆｆｌｊ中に再懸濁サセタ。インキュベー
ションｌｄ、３７℃、２５ｏ ｒ 、 ｐ 、 ｍ 、
で５．５時間行なった。細胞を４℃でベレット化し、溶
菌緩衝液（１５チサツカロース、５０ｍＭ トリｘＨＣ
ｚＳ ｐＨ５及び５０ｍＭ ＥＤＴＡ ） ２ ｄ中に
入れ、−２０’Ｃで１夜凍結させた−次いでとの細胞を
氷解させ、リソシー ム（Ｉｙｓｏｓｙｍｅ を溶菌緩
衝１１ａ４当り５０＃）４０ ｔｔＬ を添加し、引
続き２．５％５Ｏ３２０μｔｔ添加した。氷上で３０分
間のインキュベーションの後に、ＤＮＡアーゼ溶液（０
，１５Ｍ）リスＨＣ１ｐＨ７，５，０，２８ＭＭｇＣ４
２，４０ｍＭＣａＣｔ２中７７）ＤＮＡ７−ゼ６６ ｔ
ｔｌｉ／ｒｄ） ２００ ａｔを添加し、溶菌液（Ｌｙ
ｓａｔｅ ）を氷上で３０分間インキエペートした。次
いでとの溶菌液をヒート・システムＷ−３７５ノ二ケー
タ・セット（Ｈｅａｔ Ｓｙｓｔｅｍｓ ｗ−３７
５５ｏｎｉｃａｔｏｒＳｅｔ）のカップ・チップ（ｃｕ
ｐ ｔｉｐ ）を全力で用いて９０秒間超音波処理（５
ｏｎｉｓａｔｅ ）した。この溶菌溶液をツル・々ル５
Ｓ３４０−ター（５ｏｒｖａｌｌ ５Ｓ３４ ｒｏｔ
ｏｒ）中、１５０００ｒ 、 ｐ 、ｍ、で４℃で２０
分間遠心することＫより澄明にした。上澄みをデカンテ
ートし、インターフェロン類縁体の生化学的及び生物学
的評価のために小量分に分けた。
０）を、カゼイン加水分解物２５１１／ｌ、Ｌ−ロイシ
ン１ｇ／ｌ、チアミン０．２ｊ／１１アンピシリン１６
６５ｇ／を及びダルコース１０（１／ｌを含有する溶液
２／１００量と一緒にした〕１０１Ｒ１中で１夜生長さ
せた〔二ニー・ブルンスクイックＧ２４シ二一キング・
インキュベーター（ＮｅｗＢｒｕｎｓｗｌｃｋ Ｇ２
４Ｓｈａｋｌｎｇ １ｎｃｕｂａｔｏｒ）中、３７℃
で２５Ｏｒ、ｌ）、ｍ、で〕。細胞をベレット化し、２
■／ｌの低トリゾトクアン濃度を補足したスピツイツエ
ンス培地７５ｆｆｌｊ中に再懸濁サセタ。インキュベー
ションｌｄ、３７℃、２５ｏ ｒ 、 ｐ 、 ｍ 、
で５．５時間行なった。細胞を４℃でベレット化し、溶
菌緩衝液（１５チサツカロース、５０ｍＭ トリｘＨＣ
ｚＳ ｐＨ５及び５０ｍＭ ＥＤＴＡ ） ２ ｄ中に
入れ、−２０’Ｃで１夜凍結させた−次いでとの細胞を
氷解させ、リソシー ム（Ｉｙｓｏｓｙｍｅ を溶菌緩
衝１１ａ４当り５０＃）４０ ｔｔＬ を添加し、引
続き２．５％５Ｏ３２０μｔｔ添加した。氷上で３０分
間のインキュベーションの後に、ＤＮＡアーゼ溶液（０
，１５Ｍ）リスＨＣ１ｐＨ７，５，０，２８ＭＭｇＣ４
２，４０ｍＭＣａＣｔ２中７７）ＤＮＡ７−ゼ６６ ｔ
ｔｌｉ／ｒｄ） ２００ ａｔを添加し、溶菌液（Ｌｙ
ｓａｔｅ ）を氷上で３０分間インキエペートした。次
いでとの溶菌液をヒート・システムＷ−３７５ノ二ケー
タ・セット（Ｈｅａｔ Ｓｙｓｔｅｍｓ ｗ−３７
５５ｏｎｉｃａｔｏｒＳｅｔ）のカップ・チップ（ｃｕ
ｐ ｔｉｐ ）を全力で用いて９０秒間超音波処理（５
ｏｎｉｓａｔｅ ）した。この溶菌溶液をツル・々ル５
Ｓ３４０−ター（５ｏｒｖａｌｌ ５Ｓ３４ ｒｏｔ
ｏｒ）中、１５０００ｒ 、 ｐ 、ｍ、で４℃で２０
分間遠心することＫより澄明にした。上澄みをデカンテ
ートし、インターフェロン類縁体の生化学的及び生物学
的評価のために小量分に分けた。
ＩＦＮα２−関連蛋白質を発現するＥ・コリーＪＡ２２
１の組換え菌株を、貯蔵物から回収し、アンピシリン（
５０μ、９ ／ａｌ？ ’）、を補充したＬ寒天プレー
ト上にすし状接種し、３７℃で１７時間インキュベート
した。細胞のループをこのプレートから、スピツイツエ
ン培地１７５ｍ／を有する２ ５０ ｒＲ１エーレンマ
イヤーフラスコ４個中に移し、このフラスコを回転イン
キュベーター上、３７℃で３０Ｏｒ、ｐ、ｍ、でｌ夜振
動させた。６Ｘ３７．５ｍＡ！＋７）分量＋１７） ソ
Ａ／ ｄ Ａ／ ＲＣ５Ｂ（Ｓｏｒｖａ Ｉ ＲＣ５Ｂ
）遠心機の５Ｓ３４Ｃ’−１−中、室温で１００００
ｒ、ｐ、ｍ、での６分間の遠心により、細菌細胞を収獲
し、予め加温されたスベツイツエン培地２３ｙ＋／中に
再懸濁させた。
１の組換え菌株を、貯蔵物から回収し、アンピシリン（
５０μ、９ ／ａｌ？ ’）、を補充したＬ寒天プレー
ト上にすし状接種し、３７℃で１７時間インキュベート
した。細胞のループをこのプレートから、スピツイツエ
ン培地１７５ｍ／を有する２ ５０ ｒＲ１エーレンマ
イヤーフラスコ４個中に移し、このフラスコを回転イン
キュベーター上、３７℃で３０Ｏｒ、ｐ、ｍ、でｌ夜振
動させた。６Ｘ３７．５ｍＡ！＋７）分量＋１７） ソ
Ａ／ ｄ Ａ／ ＲＣ５Ｂ（Ｓｏｒｖａ Ｉ ＲＣ５Ｂ
）遠心機の５Ｓ３４Ｃ’−１−中、室温で１００００
ｒ、ｐ、ｍ、での６分間の遠心により、細菌細胞を収獲
し、予め加温されたスベツイツエン培地２３ｙ＋／中に
再懸濁させた。
次いで、この再懸濁された細胞を２ｔエーレンマイヤー
フラスコ中のスベツイツエン培地２の６ Ｘ ７５０
ｍ１分量に添加し、回転インキュベーター上、３７℃、
２５Ｏｒ、ｐ、ｍ、で５，５時間振動させた。この時点
の終りに、ソルノ々ルＲＣ３Ｂ 遠心機Ｆ） Ｈ６００
０Ａ ｏ −ター中、！’Ｃ１５０００ｒ、ｐ、ｍ、で
の２０分間の遠心により、細菌細胞を収獲し、溶菌緩衝
液（５０ｍＭＥＤＴＡＳ５０ｍＭ トＩＪ ：ｘ −Ｈ
ＣｔｐＨ８，Ｏ中の１５（ｗ／ｖ）％サッカｏ −ス）
４０ ｒｎｌの全量中に再懸濁させた。生成４０Ｔｎ
ｌ細胞溶液を溶菌の前に一２０℃で貯蔵した。
フラスコ中のスベツイツエン培地２の６ Ｘ ７５０
ｍ１分量に添加し、回転インキュベーター上、３７℃、
２５Ｏｒ、ｐ、ｍ、で５，５時間振動させた。この時点
の終りに、ソルノ々ルＲＣ３Ｂ 遠心機Ｆ） Ｈ６００
０Ａ ｏ −ター中、！’Ｃ１５０００ｒ、ｐ、ｍ、で
の２０分間の遠心により、細菌細胞を収獲し、溶菌緩衝
液（５０ｍＭＥＤＴＡＳ５０ｍＭ トＩＪ ：ｘ −Ｈ
ＣｔｐＨ８，Ｏ中の１５（ｗ／ｖ）％サッカｏ −ス）
４０ ｒｎｌの全量中に再懸濁させた。生成４０Ｔｎ
ｌ細胞溶液を溶菌の前に一２０℃で貯蔵した。
培地
スベツイツエン培地１は、蒸溜水１を当り（ＮＨ４）２
ＳＯ４２，Ｏ、！ｉｌ 、 ＫＨ２ＰＯ４１０，６９、
クエン酸すｌＪ７ム１．（１、ＫＨ２ＰＯ４６０ｇ、Ｍ
ｇ５ｏ４・７ Ｈ２００，２、！ｉ’、カセイｙ加水分
解物０．５ ｇ、Ｌ−ロイシン２０ｒｎ９、’Ｆ−７ミ
７４ ｍ９、Ｌ −） ＩＪシト７アン１００■、アン
ピシリン３３■、グルコース２ｇを含有した。
ＳＯ４２，Ｏ、！ｉｌ 、 ＫＨ２ＰＯ４１０，６９、
クエン酸すｌＪ７ム１．（１、ＫＨ２ＰＯ４６０ｇ、Ｍ
ｇ５ｏ４・７ Ｈ２００，２、！ｉ’、カセイｙ加水分
解物０．５ ｇ、Ｌ−ロイシン２０ｒｎ９、’Ｆ−７ミ
７４ ｍ９、Ｌ −） ＩＪシト７アン１００■、アン
ピシリン３３■、グルコース２ｇを含有した。
スベツイツエン培地２は、トリプトファン２η／ｌを含
有し、アンピシリンを含有しない点を除き同じであった
。
有し、アンピシリンを含有しない点を除き同じであった
。
し培地は、蒸溜水１を当り、／々クトトリプトｙ （Ｂ
ａｃｔｏ ｔｒｙｐｔｏｎ ） １０ ｇ、／々タクト
イースト−ｆｆ−１ス５ｇ、ＮａＣｌ２ 、！ｉ’、グ
、ｎ、−コ−ｘ１ｇ及び必要な場合には・々クト寒天１
５ｇを含有した。
ａｃｔｏ ｔｒｙｐｔｏｎ ） １０ ｇ、／々タクト
イースト−ｆｆ−１ス５ｇ、ＮａＣｌ２ 、！ｉ’、グ
、ｎ、−コ−ｘ１ｇ及び必要な場合には・々クト寒天１
５ｇを含有した。
２、Ｅ・コリーＤＳ４１０中でのインターフエ先の８に
記載のＥ・コリーＪＡ２２１の組換え菌株からのプラス
ミＰ製造を、Ｅ・コリーＤＳ４１０の形質転換のために
使用し、ＩＦＮ−α２蛋白質類縁体を表現する形質転換
体をアンピシリン（５０μｔ／ｍ／）の補充されたＬ寒
天プレート上にすじ状接種し、３７℃で１７時間インキ
ュベートした。
記載のＥ・コリーＪＡ２２１の組換え菌株からのプラス
ミＰ製造を、Ｅ・コリーＤＳ４１０の形質転換のために
使用し、ＩＦＮ−α２蛋白質類縁体を表現する形質転換
体をアンピシリン（５０μｔ／ｍ／）の補充されたＬ寒
天プレート上にすじ状接種し、３７℃で１７時間インキ
ュベートした。
細胞のループをこのプレートから、アンピシリン（５０
μ９／Ｌｌ）の補充されたし一ブイヨン７５ｔｎｌを有
ｆ ル２５０ ｒｎｌエーレンマイヤ−フラスコ２個中
に移し、これらのフラスコを回転インキュベーター上、
３７℃、３００ｒ、ｐ、ｍ、で１夜振動させた。分量牛
Ｘ ３７．５Ｎ−（を室温でツル・々ルＲＣ５Ｂ遠心機
の５Ｓ３４０−ター中、１００ｏｏｒ、ｐ、ｍ、で６分
間遠心することにより細菌細胞を収獲し、予め加温され
たスベツィツエン培地２ ３ｄ中に再懸濁させた。この
再懸濁された細胞を予め加温されたスベツィツェン培地
２６３−中にプールし、生じる懸濁液３．７５１ｄを２
５０ｍｊｚ−レｙ−ｖイヤーフラスコ中のスベツイツエ
ン培地２各２ ｘ ７５ ｍ１分量中に接種し、これを
引続き回転インキュベーター上、３７℃、３００ｒ 、
ｐ、ｍ、で７時間振動した。この時間の終りに、細菌細
胞を収獲し、Ｃ１の記載と同様に処理した。
μ９／Ｌｌ）の補充されたし一ブイヨン７５ｔｎｌを有
ｆ ル２５０ ｒｎｌエーレンマイヤ−フラスコ２個中
に移し、これらのフラスコを回転インキュベーター上、
３７℃、３００ｒ、ｐ、ｍ、で１夜振動させた。分量牛
Ｘ ３７．５Ｎ−（を室温でツル・々ルＲＣ５Ｂ遠心機
の５Ｓ３４０−ター中、１００ｏｏｒ、ｐ、ｍ、で６分
間遠心することにより細菌細胞を収獲し、予め加温され
たスベツィツエン培地２ ３ｄ中に再懸濁させた。この
再懸濁された細胞を予め加温されたスベツィツェン培地
２６３−中にプールし、生じる懸濁液３．７５１ｄを２
５０ｍｊｚ−レｙ−ｖイヤーフラスコ中のスベツイツエ
ン培地２各２ ｘ ７５ ｍ１分量中に接種し、これを
引続き回転インキュベーター上、３７℃、３００ｒ 、
ｐ、ｍ、で７時間振動した。この時間の終りに、細菌細
胞を収獲し、Ｃ１の記載と同様に処理した。
凍結細胞懸濁液４ Ｑ ｍｌを４ ’Ｃで氷解し、溶菌
緩衝液（５０１ｎ９／ｍＪ）中のリソチームの溶液８０
０μｔ を添加し、直ちに、蒸溜水中のＬＤＳ （２、
５ｗ／ｖチ）４００μｔを添加した。氷上での３０分間
のインキュベーションの後に、ＤＮＡアーセ溶ｉ （Ｄ
ＮＡ７−−１’約５ ｔｔｆｉ を２８０ ｍＭＭｇ
Ｃｔ２及び４ｍＭＣａＣｔを含有する１ ５０ ｍＭト
リス＋ｃｚ （ｐＨ７，５）中に溶かした）４ｍ／を添
加し、氷上でのインキュベーションを更に３０分間続け
た。生じる粘稠性物質を全力操作のために１５０ ＷＭ
ＳＥ超音波デイスインテグレータ・＊ ｙ ト（Ｕｌｔ
ｒａｓｏｎｉｃ ｄｉｓｉｎｔｅｇｒａｔｏｒ ５ｅｔ
）からの３ Ｘ ３０ Ｓ Ａルスでの超音波崩壊を実
施し、次いで、４℃で、ツル・々ルＲＣ５Ｂ遠心機の５
８３４０−ター中１５００Ｏｒ、ｐ、ｍ、で１５分間遠
心した。この遠心からの上澄みを次いで更にぺ７り？７
（ＢｅＣｋｍａｎｎ）Ｌ５−５０８超遠心機の５０．２
７ｉｏ−４−中、４ ’Ｃ１４００００ｒ、ｐ、ｍ、で
１１時間遠心した。この遠心からの上澄みは、インター
フェロン類縁蛋白質を含有し、これを必要に応じ更に精
製した。
緩衝液（５０１ｎ９／ｍＪ）中のリソチームの溶液８０
０μｔ を添加し、直ちに、蒸溜水中のＬＤＳ （２、
５ｗ／ｖチ）４００μｔを添加した。氷上での３０分間
のインキュベーションの後に、ＤＮＡアーセ溶ｉ （Ｄ
ＮＡ７−−１’約５ ｔｔｆｉ を２８０ ｍＭＭｇ
Ｃｔ２及び４ｍＭＣａＣｔを含有する１ ５０ ｍＭト
リス＋ｃｚ （ｐＨ７，５）中に溶かした）４ｍ／を添
加し、氷上でのインキュベーションを更に３０分間続け
た。生じる粘稠性物質を全力操作のために１５０ ＷＭ
ＳＥ超音波デイスインテグレータ・＊ ｙ ト（Ｕｌｔ
ｒａｓｏｎｉｃ ｄｉｓｉｎｔｅｇｒａｔｏｒ ５ｅｔ
）からの３ Ｘ ３０ Ｓ Ａルスでの超音波崩壊を実
施し、次いで、４℃で、ツル・々ルＲＣ５Ｂ遠心機の５
８３４０−ター中１５００Ｏｒ、ｐ、ｍ、で１５分間遠
心した。この遠心からの上澄みを次いで更にぺ７り？７
（ＢｅＣｋｍａｎｎ）Ｌ５−５０８超遠心機の５０．２
７ｉｏ−４−中、４ ’Ｃ１４００００ｒ、ｐ、ｍ、で
１１時間遠心した。この遠心からの上澄みは、インター
フェロン類縁蛋白質を含有し、これを必要に応じ更に精
製した。
Ｅ５ 精製
鼾
別に記載のないかぎりすべての操作は、４℃で行なった
。
。
インターフェロン類縁体を含有する澄明な上澄み（４０
）ｒｕｔを前記方法で製造した。
）ｒｕｔを前記方法で製造した。
トリクロル酢酸（５０ｖ／ｖ ％、２ｍ１）を、攪拌下
に流加して最終濃度２．５俤とした（二者択一的に、飽
和硫酸アンモニワム溶液（８０ｒｎｌ）を攪拌下に１５
分間にわたり流加して、５０チの最終濃度にした）。３
０分間の攪拌及び３０分間の放置の後に、沈殿した蛋白
質を、ＭＳＥ高速１８遠心機中、１００００ｒ、ｐ、ｍ
、で３０分間の遠心により集めた。
に流加して最終濃度２．５俤とした（二者択一的に、飽
和硫酸アンモニワム溶液（８０ｒｎｌ）を攪拌下に１５
分間にわたり流加して、５０チの最終濃度にした）。３
０分間の攪拌及び３０分間の放置の後に、沈殿した蛋白
質を、ＭＳＥ高速１８遠心機中、１００００ｒ、ｐ、ｍ
、で３０分間の遠心により集めた。
上澄みを捨て、ベレットをイストラル・ホモゲナイヂー
（ＹＳｔｒａｌ ｈｏｍｏｇｅｎｉｓｅｒ ）を用いて
０．１ ＭＫ２８ＰＯ４（ｐＨ５） ２０ｒｒＬｔ中に
抽出した。
（ＹＳｔｒａｌ ｈｏｍｏｇｅｎｉｓｅｒ ）を用いて
０．１ ＭＫ２８ＰＯ４（ｐＨ５） ２０ｒｒＬｔ中に
抽出した。
この乳状懸濁液を攪拌下に、ラジオメーターＰＨメータ
２６ （Ｒａｄｉｏｍｅｔｅｒ ＰＨｍｅｔｅｒ ２６
’）を用いて、２ Ｍ ＮａＯＨの流加によりｐＨ６
に調節した。抽出物を３４０００ｒ、ｐ、ｍ、で、ベッ
クマンＬ５−５０８超遠心機中の５０．２Ｔｉローター
中で３０分間超遠心し、上澄み（２１ｍｌ ）を、直チ
に０．１Ｍに２ＨＰｏ４（ｐＨ８）中テ平衡化された＋
７ Ａ／ トｏゲル（Ｕｌｔｒｏｇｅｌ ） ＡＣＡ
５４のカラム（５Ｘ Ｑ Ｑ ｃｍ ）に７℃で施与し
た。このカラムを、４０ｄ／ｈの速度の同じ緩衝液及び
ディ７７ｏ−セル（Ｄｉａｆｌｏｃｅｌｌ ）ノ７ラク
ションを用い、アミ：Ｉ ｙ （Ａｍ１ｃｏｎ ） Ｙ
Ｍ １０膜を用いて溶離させた。保留物をミレツクス（
ｍ１ｌｌｅｘ ） Ｇ Ｖ Ｏ，２２μｍ フィルター
ユニットを通して濾過し、無菌濾過物（１９ＷＬｌ）を
複数の部分量に分け、−２０℃で貯蔵し、新しい１分量
を各検定のために用い、約１２１１１／を集め。
２６ （Ｒａｄｉｏｍｅｔｅｒ ＰＨｍｅｔｅｒ ２６
’）を用いて、２ Ｍ ＮａＯＨの流加によりｐＨ６
に調節した。抽出物を３４０００ｒ、ｐ、ｍ、で、ベッ
クマンＬ５−５０８超遠心機中の５０．２Ｔｉローター
中で３０分間超遠心し、上澄み（２１ｍｌ ）を、直チ
に０．１Ｍに２ＨＰｏ４（ｐＨ８）中テ平衡化された＋
７ Ａ／ トｏゲル（Ｕｌｔｒｏｇｅｌ ） ＡＣＡ
５４のカラム（５Ｘ Ｑ Ｑ ｃｍ ）に７℃で施与し
た。このカラムを、４０ｄ／ｈの速度の同じ緩衝液及び
ディ７７ｏ−セル（Ｄｉａｆｌｏｃｅｌｌ ）ノ７ラク
ションを用い、アミ：Ｉ ｙ （Ａｍ１ｃｏｎ ） Ｙ
Ｍ １０膜を用いて溶離させた。保留物をミレツクス（
ｍ１ｌｌｅｘ ） Ｇ Ｖ Ｏ，２２μｍ フィルター
ユニットを通して濾過し、無菌濾過物（１９ＷＬｌ）を
複数の部分量に分け、−２０℃で貯蔵し、新しい１分量
を各検定のために用い、約１２１１１／を集め。
た。インターフェロン類縁体を含有し、全細菌蛋白質の
８０チを排除することが知られているクラクション（９
５〜１２５）をプールしく４００ｍ１ ）、アミコン中
で約２０ｄまで濃縮した。
８０チを排除することが知られているクラクション（９
５〜１２５）をプールしく４００ｍ１ ）、アミコン中
で約２０ｄまで濃縮した。
抗ワイルス及びＮＫ２−ＩＲＭＡ検定で精製を監視し、
各関連類縁体に関する抗ワイルス及びＮに２−ＩＲＭＡ
力価を次の第４表に示す。ＮＫ２−ＩＨＭＡ検定欄にお
ける「−」は、この関連類縁体がＮＫ２− ＩＲＭＡ検
定で不活性であったことを示している。
各関連類縁体に関する抗ワイルス及びＮに２−ＩＲＭＡ
力価を次の第４表に示す。ＮＫ２−ＩＨＭＡ検定欄にお
ける「−」は、この関連類縁体がＮＫ２− ＩＲＭＡ検
定で不活性であったことを示している。
このインターフェロン類縁蛋白質に、なおビオプロフィ
リング試料中の全蛋白質の約０．１５１１ｉのみに相当
し、それ自体は、ポリアクリルアミドゲル電気泳動後の
着色により直接は識別できない。この類縁蛋白質は、ミ
ニセル形成菌株Ｅ・コ１ｊ−０５４１０をＤに記載のよ
うな表現プラスミドで形質転換することにより特徴付け
られた。！ラスミド遺伝子は、これら遺伝子によりエン
コードされた蛋白質を選択的に放射能ラベルされること
を許容するミニセル中で選択的に表現される。従って、
ミニセルに Ｓ−メチオニンでラベルされ、インターフ
ェロン類縁体に、還元条件下でＳＤＳ：ｔンの存在での
ポリアクリルアミドゲル電気泳動により特性付けられ。
リング試料中の全蛋白質の約０．１５１１ｉのみに相当
し、それ自体は、ポリアクリルアミドゲル電気泳動後の
着色により直接は識別できない。この類縁蛋白質は、ミ
ニセル形成菌株Ｅ・コ１ｊ−０５４１０をＤに記載のよ
うな表現プラスミドで形質転換することにより特徴付け
られた。！ラスミド遺伝子は、これら遺伝子によりエン
コードされた蛋白質を選択的に放射能ラベルされること
を許容するミニセル中で選択的に表現される。従って、
ミニセルに Ｓ−メチオニンでラベルされ、インターフ
ェロン類縁体に、還元条件下でＳＤＳ：ｔンの存在での
ポリアクリルアミドゲル電気泳動により特性付けられ。
フルオログラフィで表示された。
インターフェロン類縁体を含有する澄明な上澄み（３３
ｍｇ）を前記方法で襄遺し、約１０ｍＪ／ｈの流速で、
製造業者により推奨された燐酸塩緩衝食塩水（ｐｓｓ）
中で室温で平衡化されたＮに２−セファロースモノクロ
ナール抗体免疫吸着支持体〔セルチック社Ｃｅ１ｌ−ｔ
ｅｃｈ Ｌｔｄ、 Ｓｌｏｕｇｈ、 ＵＫ ） （７）
カラム（尿量２００μｌ）に施与した。全試料を装荷
させた後に、カラムをＰ８Ｓ（２ｘ１ｍ、ｌＸ４０ゴ）
で洗浄し、インターフェロン類縁体をＯ，１Ｍクエｙ酸
−０，３ＭＮａＣ１（ｐＨ２）で溶離させた。この類縁
体を含有する７ラクシヨン（４００μりを０．２５Ｍ混
合燐酸塩緩衝液（ｐＨ７，５） （０，２５Ｍ ＮａＨ
２ＰＯ４−０，２５Ｍ Ｎａ２ＨＰＯ４１：５）４５０
μノの添加によりｐＨ６に調節した。この溶液を、牛胎
児血清１０９６．グルタミン２ｍＭ、ピルビン酸ナトリ
ウム２ｒｒＬＭ、ビタミン１９６．ゲンタマイシン５０
μｇ７ｔｔｔｔ及び２−メルカプトエタノール５ＸＩＯ
Ｍを含有するＲＰＭｌ−１６４０培地で５倍及び２０倍
に稀釈してバイオプロフィ−リングできる試料を生じさ
せた。この試料を複数の小量分に分け、−２０℃で貯蔵
し、新しい１小童分を各検定のために用いた。
ｍｇ）を前記方法で襄遺し、約１０ｍＪ／ｈの流速で、
製造業者により推奨された燐酸塩緩衝食塩水（ｐｓｓ）
中で室温で平衡化されたＮに２−セファロースモノクロ
ナール抗体免疫吸着支持体〔セルチック社Ｃｅ１ｌ−ｔ
ｅｃｈ Ｌｔｄ、 Ｓｌｏｕｇｈ、 ＵＫ ） （７）
カラム（尿量２００μｌ）に施与した。全試料を装荷
させた後に、カラムをＰ８Ｓ（２ｘ１ｍ、ｌＸ４０ゴ）
で洗浄し、インターフェロン類縁体をＯ，１Ｍクエｙ酸
−０，３ＭＮａＣ１（ｐＨ２）で溶離させた。この類縁
体を含有する７ラクシヨン（４００μりを０．２５Ｍ混
合燐酸塩緩衝液（ｐＨ７，５） （０，２５Ｍ ＮａＨ
２ＰＯ４−０，２５Ｍ Ｎａ２ＨＰＯ４１：５）４５０
μノの添加によりｐＨ６に調節した。この溶液を、牛胎
児血清１０９６．グルタミン２ｍＭ、ピルビン酸ナトリ
ウム２ｒｒＬＭ、ビタミン１９６．ゲンタマイシン５０
μｇ７ｔｔｔｔ及び２−メルカプトエタノール５ＸＩＯ
Ｍを含有するＲＰＭｌ−１６４０培地で５倍及び２０倍
に稀釈してバイオプロフィ−リングできる試料を生じさ
せた。この試料を複数の小量分に分け、−２０℃で貯蔵
し、新しい１小童分を各検定のために用いた。
抗ウィルス及びＮＫ２−ｌＲＭＡ検定で精製を監視し、
最終生成物を、ＳＯＳの存在下。
最終生成物を、ＳＯＳの存在下。
還元条件下でのポリアクリルアミトゲ／Ｉ／１ｊ／Ｌ気
泳動により特性付けた。
泳動により特性付けた。
ｂ）ＹＯＫ−セファロース上
前記の方法のように、インターフェロン類縁体を含有す
る澄明な上澄み（３３ｍ）を製造し、約ＩＱｍＪ／ｈの
流速で、室温で製造業者により推奨された燐酸塩緩衝食
塩水（ＰＢＳ）中で平衡化されたＹＯＫ−セファロース
モノクロナール抗体免疫吸着剤サポート（セルチック社
英国スラウ在）のカラム（尿量２００μりに施与した。
る澄明な上澄み（３３ｍ）を製造し、約ＩＱｍＪ／ｈの
流速で、室温で製造業者により推奨された燐酸塩緩衝食
塩水（ＰＢＳ）中で平衡化されたＹＯＫ−セファロース
モノクロナール抗体免疫吸着剤サポート（セルチック社
英国スラウ在）のカラム（尿量２００μりに施与した。
すべての試料が装荷された後に、このカラムをＰｕ５（
２ＸＩＩＩＬｌ、ＬＸ４０ｍ）で洗浄し、インターフェ
ロン類縁体を、Ｏ，１Ｍクエン酸−０，３ＭＮａ（Ｊ
（ｐＨ２）で溶離させた。類縁体を含有するフラクショ
ン（４００μｌ）を、０．２５Ｍ混合燐酸塩緩衝Ｒ（ｐ
Ｈ７，５） （０，２５ＭＮａＨ２ＰＯ４−０，２５Ｍ
Ｎａ２ＨＰＯ４１： ５ ）＋５０Ａｌの添加により。
２ＸＩＩＩＬｌ、ＬＸ４０ｍ）で洗浄し、インターフェ
ロン類縁体を、Ｏ，１Ｍクエン酸−０，３ＭＮａ（Ｊ
（ｐＨ２）で溶離させた。類縁体を含有するフラクショ
ン（４００μｌ）を、０．２５Ｍ混合燐酸塩緩衝Ｒ（ｐ
Ｈ７，５） （０，２５ＭＮａＨ２ＰＯ４−０，２５Ｍ
Ｎａ２ＨＰＯ４１： ５ ）＋５０Ａｌの添加により。
ｐＨ６に調節した。この溶液を牛胎児血清１０％、グル
タミン２ｒｎＭ、ピルビン酸ナトリウム２ｍＭ、ビタミ
ン１＊、ゲンタマイシン５０μｐ／１ｎｌ及び２−メル
カグトエタノール５ｘ１０−５Ｍを含有するＲＰＭＩ−
１６４０培地で５倍及び２０倍に稀釈してビオプロフィ
−リング用の試料を生じさせた。これら試料を複数の小
量分に分け、−２０’Ｃで貯蔵し、新しい１小量分を各
検定のために使用した。
タミン２ｒｎＭ、ピルビン酸ナトリウム２ｍＭ、ビタミ
ン１＊、ゲンタマイシン５０μｐ／１ｎｌ及び２−メル
カグトエタノール５ｘ１０−５Ｍを含有するＲＰＭＩ−
１６４０培地で５倍及び２０倍に稀釈してビオプロフィ
−リング用の試料を生じさせた。これら試料を複数の小
量分に分け、−２０’Ｃで貯蔵し、新しい１小量分を各
検定のために使用した。
精製を抗ウィルス及びＮＫ２−ＩＲＭＡ検定により監視
し、最終生成物を、ＳＯＳの存在下、還元条件下でのＩ
リアクリルアミドゲル電気泳動により特性付けた。
し、最終生成物を、ＳＯＳの存在下、還元条件下でのＩ
リアクリルアミドゲル電気泳動により特性付けた。
各関連類縁体に関する抗ウィルス及びＮに２−ＩＲＭＡ
力価を次の第５表に示す。ＮＫ２−ＩＨＭＡの欄の「−
」ニ交叉反応性がないことを示している。
力価を次の第５表に示す。ＮＫ２−ＩＨＭＡの欄の「−
」ニ交叉反応性がないことを示している。
例２７〜３ｏの類縁体に関する抗ウィルス及びＮＫ２−
ＩＲＭＡ力価はクローン選択段階で測定した。
ＩＲＭＡ力価はクローン選択段階で測定した。
例３２
コノ例、 （Ｌ ｅｕ １６，２１，５９，１１１，１
４８ ） １ ｆ： ｐ４− α２ の製造を説明して
いる。この蛋白質に関する遺伝子を以後便宜上Ｉ−１と
記す。第１図中のオリゴヌクレオチド７．８，９，１０
．２＋、２５゜４５．４６．６０及び６１をオリゴヌク
レオチド７−１２．８−１２．９−１３．１Ｏ−Ｉ３゜
２４−■冬、２５−Ｉ牛、＋５−Ｉ５，４６−Ｉ５゜６
０−１６及び６１−１６ （第６表）に代えて。
４８ ） １ ｆ： ｐ４− α２ の製造を説明して
いる。この蛋白質に関する遺伝子を以後便宜上Ｉ−１と
記す。第１図中のオリゴヌクレオチド７．８，９，１０
．２＋、２５゜４５．４６．６０及び６１をオリゴヌク
レオチド７−１２．８−１２．９−１３．１Ｏ−Ｉ３゜
２４−■冬、２５−Ｉ牛、＋５−Ｉ５，４６−Ｉ５゜６
０−１６及び６１−１６ （第６表）に代えて。
例１〜３１に記載の方法を繰り返した。
７ラグメントＡ−ＭｒＸ、、前記方法によるオリゴヌク
レオチド混合物のりゲーティングにより製造した。この
例で、７ラグメント８−１２／３゜Ｅ４牛、ｌ−ｌ５．
Ｊ−Ｉ５．Ｌ−Ｉ６及びＭ−Ｉ６は１例１〜３１の７ラ
グメントＢ、Ｅ、ｌ。
レオチド混合物のりゲーティングにより製造した。この
例で、７ラグメント８−１２／３゜Ｅ４牛、ｌ−ｌ５．
Ｊ−Ｉ５．Ｌ−Ｉ６及びＭ−Ｉ６は１例１〜３１の７ラ
グメントＢ、Ｅ、ｌ。
Ｊ、Ｌ及びＭの代りである。
配列Ｉ、■及びｌ［Ｍは、７ラグメント８−Ｌの５′−
ヒドロキシ末端のホスホリル化の後に第７表に記載の７
ラグメントから構成はねた。
ヒドロキシ末端のホスホリル化の後に第７表に記載の７
ラグメントから構成はねた。
遺伝子Ｉ−１を、配列Ｉ（Ｉ−１）、ＩＩ（Ｉ−１）及
びＩ［Ｍ（Ｉ−１）のりゲーティングにより製造し、Ｔ
４ポリヌクレオチドキナーゼでホスホリル化した。
びＩ［Ｍ（Ｉ−１）のりゲーティングにより製造し、Ｔ
４ポリヌクレオチドキナーゼでホスホリル化した。
遺伝子１−１を例１〜３１のＢの記載のようにクローン
化し、Ｃ１の記載のようにＥ・コリー ＪＡ２２１中に
発現させ、Ｄの記載のように細菌の溶菌によりインター
フェロン類縁体を抽出し、前記例のＥに記載のような沈
殿及び寸法排除クロマトグラフィにエリ精製した。
化し、Ｃ１の記載のようにＥ・コリー ＪＡ２２１中に
発現させ、Ｄの記載のように細菌の溶菌によりインター
フェロン類縁体を抽出し、前記例のＥに記載のような沈
殿及び寸法排除クロマトグラフィにエリ精製した。
このｎ製ζ、抗ウィルス及びＮに２−ＩＨＭＡ検定によ
り監視し、最終生成物を、還元条件下でＳＤＳの存在で
のポリアクリルアミドゲル電気泳動で特性付けた。（Ｌ
ｅｕ１６，２１．５？、ＩＮ、１４８ ）ＩＦＮ−α２
に関する力価及び回収率を次にまと例３３ 新しいオリゴヌクレオチド配列としてオリゴヌクレオチ
ド５，６及び７０代りに各々５−Ａｌ１．６−Ａｌ１及
び７−Ａｌ１を用いて１例１〜３１に記載の方法を繰り
返した。
り監視し、最終生成物を、還元条件下でＳＤＳの存在で
のポリアクリルアミドゲル電気泳動で特性付けた。（Ｌ
ｅｕ１６，２１．５？、ＩＮ、１４８ ）ＩＦＮ−α２
に関する力価及び回収率を次にまと例３３ 新しいオリゴヌクレオチド配列としてオリゴヌクレオチ
ド５，６及び７０代りに各々５−Ａｌ１．６−Ａｌ１及
び７−Ａｌ１を用いて１例１〜３１に記載の方法を繰り
返した。
５−Ａｌ１．６−Ａｌ１及び７−Ａｌ１の配列に次のと
おりである： オリゴヌクレオチド 配列（５’−３’）５−Ａ
ｌｌ ＡＧＣＣＴＧＧＣＴＧＣＡＧＣＴ６−Ａｌ
ｌ ＧＣＡＧＣＡＧＣＡＧＣＴＧＣＡＧ７−Ａｌ
ｌ ＧＣＴＧＣＴＧＣＧＡＴＧＣＴＧ７ラグメン
トＡ−Ｔａｑ ＮＤｒｚ、適当なオリゴヌクレオチド混
合物をリゲーテイングすることにより製造した。この例
で、７ラグメントＡ−ＡｌｌをＡ −Ｔａｑ （７）代
りＩＣ，Ｂ−Ａｌｌを８の代りに用いた。Ａ−ＡＩＬＨ
オリゴヌクＶオチ）’１−Ｔａｑ、２−Ｔａｑ、３．４
及び５−Ａｌ１より成り、Ｂ−Ａｌｌｉ、オリゴヌクレ
オチド６−Ａｌ１，７−Ａｌ１，８．９及び１０より成
る。７ラグメ／トＡ−Ａｌｌ、８−Ａｌ１゜Ｃ及びＯの
リゲーションで１例１〜３１中の配列Ｉと均等なりＮＡ
配列が生じ、８ｓｔＥＩ［／Ｅｃａ Ｉ制限部位を有す
る。ポリアクリルアミドゲルからのＡ−０７ラグメント
の単離に引続き。
おりである： オリゴヌクレオチド 配列（５’−３’）５−Ａ
ｌｌ ＡＧＣＣＴＧＧＣＴＧＣＡＧＣＴ６−Ａｌ
ｌ ＧＣＡＧＣＡＧＣＡＧＣＴＧＣＡＧ７−Ａｌ
ｌ ＧＣＴＧＣＴＧＣＧＡＴＧＣＴＧ７ラグメン
トＡ−Ｔａｑ ＮＤｒｚ、適当なオリゴヌクレオチド混
合物をリゲーテイングすることにより製造した。この例
で、７ラグメントＡ−ＡｌｌをＡ −Ｔａｑ （７）代
りＩＣ，Ｂ−Ａｌｌを８の代りに用いた。Ａ−ＡＩＬＨ
オリゴヌクＶオチ）’１−Ｔａｑ、２−Ｔａｑ、３．４
及び５−Ａｌ１より成り、Ｂ−Ａｌｌｉ、オリゴヌクレ
オチド６−Ａｌ１，７−Ａｌ１，８．９及び１０より成
る。７ラグメ／トＡ−Ａｌｌ、８−Ａｌ１゜Ｃ及びＯの
リゲーションで１例１〜３１中の配列Ｉと均等なりＮＡ
配列が生じ、８ｓｔＥＩ［／Ｅｃａ Ｉ制限部位を有す
る。ポリアクリルアミドゲルからのＡ−０７ラグメント
の単離に引続き。
これをエタノール沈殿させ、水（３７，７５μＡり中に
再懸濁させた。牛血清アルブミン（５μｌ中５μｙ）、
Ｂｓｔ Ｅ ＩＩ （ｌμｇ中３単３単位緩衝液（０
，６Ｍ ト’） スＨＣＩ ｐＨ７、４、０，６Ｍ Ｍ
ｇＣｌ２及び０．６ Ｍメルカプトエタノール）（５μ
ｌ）及び２ＭＮａＣ１（１，２５ｐｉ ）を添加し、混
合物を３７℃ｆ１６時間インキュベートした。制限消化
を３ＭＮａｃＡ！ （ｐＨ５，６）（２０μｌ ）及び
水（１３０／Ｉｌ）の添加により停止させ、ＤＮＡをエ
タノールで沈殿させ１次いで、１０％ポリアクリルアミ
ド非変性ゲル中で分別させた。最も緩徐に移動するバン
ドをこのゲルから溶離させ。
再懸濁させた。牛血清アルブミン（５μｌ中５μｙ）、
Ｂｓｔ Ｅ ＩＩ （ｌμｇ中３単３単位緩衝液（０
，６Ｍ ト’） スＨＣＩ ｐＨ７、４、０，６Ｍ Ｍ
ｇＣｌ２及び０．６ Ｍメルカプトエタノール）（５μ
ｌ）及び２ＭＮａＣ１（１，２５ｐｉ ）を添加し、混
合物を３７℃ｆ１６時間インキュベートした。制限消化
を３ＭＮａｃＡ！ （ｐＨ５，６）（２０μｌ ）及び
水（１３０／Ｉｌ）の添加により停止させ、ＤＮＡをエ
タノールで沈殿させ１次いで、１０％ポリアクリルアミ
ド非変性ゲル中で分別させた。最も緩徐に移動するバン
ドをこのゲルから溶離させ。
エタノール沈殿させ、５′−ホスホリル化すると、Ｃ１
ａ−Ｂｓｔ Ｅフラグメントが生じた。
ａ−Ｂｓｔ Ｅフラグメントが生じた。
（Ａｌａ”〜１５〕ＩＦＮ−α２遺伝子’Ｑりｏ−ユン
グするためのベクターに、ベクターｐｌＦｓ１２ｏ５の
小Ｅ３ＳｔＥｆｌ−５ａ１エインｌ−７ｘｏ：ｙ遺伝子
７ラグメントにリゲートされているプラスミドｐＳＴＰ
ｌ （例１〜３１参照）の大Ｃｌａ ｌ−５ａｌｊ、ｙ
ラグメントより成っていた〔エツジ（Ｅｄｇｅ ）等に
よるヌクフィック・アシズ・リサ−ｆ （Ｎｕｃｌｅｉ
ｃ Ａｃ１ｄｓ Ｒｅ５ｅａｒｃｈ ） １１巻（１９
８３）、６４１９頁参照〕、、フラグメントな例１〜３
１に関すると同様に単離し、アガロースゲルからの再単
離に先立って前記のように共にリゲートさせた。ＤＮＡ
濃度を１０μｐ／ｄに調節し、合成（Ａｌａ”〜”）Ｉ
ＦＮ−α２遺伝子７ラグメントの試料と混合した。混合
物を乾燥させ、１０×リガーゼ緩衝液６５μＪ、１ｍＰ
／＋Ｊ８ＳＡ６５μノ、水５１０μ！及びＴ４ＯＮＡリ
ガーゼ（ペーリンガー１．８単位／μ１）１０μノを含
有する混合物３０μ！中に入れた。仝℃で１時間かつ１
２℃で１夜インキユベ一シヨンヲ行すつた。６５℃に１
５分間加熱することによりリゲーションを停止させた。
グするためのベクターに、ベクターｐｌＦｓ１２ｏ５の
小Ｅ３ＳｔＥｆｌ−５ａ１エインｌ−７ｘｏ：ｙ遺伝子
７ラグメントにリゲートされているプラスミドｐＳＴＰ
ｌ （例１〜３１参照）の大Ｃｌａ ｌ−５ａｌｊ、ｙ
ラグメントより成っていた〔エツジ（Ｅｄｇｅ ）等に
よるヌクフィック・アシズ・リサ−ｆ （Ｎｕｃｌｅｉ
ｃ Ａｃ１ｄｓ Ｒｅ５ｅａｒｃｈ ） １１巻（１９
８３）、６４１９頁参照〕、、フラグメントな例１〜３
１に関すると同様に単離し、アガロースゲルからの再単
離に先立って前記のように共にリゲートさせた。ＤＮＡ
濃度を１０μｐ／ｄに調節し、合成（Ａｌａ”〜”）Ｉ
ＦＮ−α２遺伝子７ラグメントの試料と混合した。混合
物を乾燥させ、１０×リガーゼ緩衝液６５μＪ、１ｍＰ
／＋Ｊ８ＳＡ６５μノ、水５１０μ！及びＴ４ＯＮＡリ
ガーゼ（ペーリンガー１．８単位／μ１）１０μノを含
有する混合物３０μ！中に入れた。仝℃で１時間かつ１
２℃で１夜インキユベ一シヨンヲ行すつた。６５℃に１
５分間加熱することによりリゲーションを停止させた。
このリグ−ジョン混合物６μノを、ハナハン（Ｈａｎａ
ｈａｎ ）による方法〔ジャーナル・オプ・モレキュ２
−ル・パイオロジ（（Ｊｏｕｒ、 ｏｆＭ、 Ｂｉｏｌ
、） １６６ （１９８３）５５７頁〕で、菌株ＭＭ２
９４の形質転換に直接使用した。コロニイ交雑による（
Ａｌａ１０〜１５〕ＩＦＮ−α２遺伝子組換え体に関す
るスクリーニングに、例１〜３１に記載の小サブ７ラグ
メントに関する切込み変換された試料を用いて例１〜３
１の記載と同様でめった。
ｈａｎ ）による方法〔ジャーナル・オプ・モレキュ２
−ル・パイオロジ（（Ｊｏｕｒ、 ｏｆＭ、 Ｂｉｏｌ
、） １６６ （１９８３）５５７頁〕で、菌株ＭＭ２
９４の形質転換に直接使用した。コロニイ交雑による（
Ａｌａ１０〜１５〕ＩＦＮ−α２遺伝子組換え体に関す
るスクリーニングに、例１〜３１に記載の小サブ７ラグ
メントに関する切込み変換された試料を用いて例１〜３
１の記載と同様でめった。
更に、オリゴヌクレオチド試料な用いて、コロニイハイ
プリダイゼーション分析を実施した。
プリダイゼーション分析を実施した。
（Ａｌａ”〜１５）ＩＦＮ−α２遺伝子組換え体に関す
るスクリーニングのために、１６塩基の長いオリゴヌク
レオチド６−Ａｌ１を用いた。オリゴヌクレオチドの５
×１０”’ＯＤユニットヲ真”ｌ中テ乾ｆｉ サセ、”
ｐＡＴＰ （ｌ Ｏｍ Ｃｉ／ｒｌＬｌ。
るスクリーニングのために、１６塩基の長いオリゴヌク
レオチド６−Ａｌ１を用いた。オリゴヌクレオチドの５
×１０”’ＯＤユニットヲ真”ｌ中テ乾ｆｉ サセ、”
ｐＡＴＰ （ｌ Ｏｍ Ｃｉ／ｒｌＬｌ。
５００ Ｃ１／ｍｍｏｌ、二ｘ −−（ｙｙう７ ト−
ニエクレア）２５μｌ、１０１０Ｘキナーゼ緩衝液（０
，５Ｍ）リスｐＨ９，１０篤ＭＥＤＴＡ ） ５０ｔｔ
ｌ。
ニエクレア）２５μｌ、１０１０Ｘキナーゼ緩衝液（０
，５Ｍ）リスｐＨ９，１０篤ＭＥＤＴＡ ） ５０ｔｔ
ｌ。
１ｒｒＬＭスペルミジｙ ５０ ｓｌ、０．２ ＭＤＴ
Ｔ ５０ａｔ、１００ ｍＭ ＭｇＣｊ！２５０ μｌ
、Ｔ ４ポリヌクレオチドキナーゼ（２単位／μ）、二
ニー・イングランド・ビオラブ）５μノ及び水２７０μ
ｌを含有する混合物２０μｊ中に入れる。このラベルさ
れたオリゴヌクレオチドをハイブリダイゼーションのた
めに６ｘＳＳＣ１０ｍＪ中に稀釈した。
Ｔ ５０ａｔ、１００ ｍＭ ＭｇＣｊ！２５０ μｌ
、Ｔ ４ポリヌクレオチドキナーゼ（２単位／μ）、二
ニー・イングランド・ビオラブ）５μノ及び水２７０μ
ｌを含有する混合物２０μｊ中に入れる。このラベルさ
れたオリゴヌクレオチドをハイブリダイゼーションのた
めに６ｘＳＳＣ１０ｍＪ中に稀釈した。
使用ハイブリダイゼーション温度は１式４（Ｇ／Ｃ）＋
２（Ａ／Ｔ）’Ｃで導ひいた（ここでＧ／Ｃ及びＡ／Ｔ
ｉ−ｊ、それぞれオリゴヌクレオチド中のグアニン／シ
トシン及びアデニン／チミンヌクレオチドの数を示す）
。従って、試料６−Ａ１１ （、Ｇ／Ｃ＝１１．Ａ／Ｔ
＝５ ）に対してこの式から５４℃が得られ、このハイ
ブリダイゼーションに、実際に５６℃で少なくとも１時
間実施され、引続き濾過物をオートラジオグラフィのた
めに全党乾燥させた。（Ａｌ８”〜１５）ＩＦＮ−α２
組換え体をボジテプハイプリダイゼーション信号で同定
シタ、 （：Ａｌａ１０〜１５〕：ＦＮ−α２類縁体
遺伝子の完全性を例１〜３１に関する同様なＨｐａ ｆ
ｌ制限分析によりチェックした。インターフェロンの生
化学的及び生物学的評価のだめの組換え体の溶菌は例１
〜３１に記載と同様に行なった。
２（Ａ／Ｔ）’Ｃで導ひいた（ここでＧ／Ｃ及びＡ／Ｔ
ｉ−ｊ、それぞれオリゴヌクレオチド中のグアニン／シ
トシン及びアデニン／チミンヌクレオチドの数を示す）
。従って、試料６−Ａ１１ （、Ｇ／Ｃ＝１１．Ａ／Ｔ
＝５ ）に対してこの式から５４℃が得られ、このハイ
ブリダイゼーションに、実際に５６℃で少なくとも１時
間実施され、引続き濾過物をオートラジオグラフィのた
めに全党乾燥させた。（Ａｌ８”〜１５）ＩＦＮ−α２
組換え体をボジテプハイプリダイゼーション信号で同定
シタ、 （：Ａｌａ１０〜１５〕：ＦＮ−α２類縁体
遺伝子の完全性を例１〜３１に関する同様なＨｐａ ｆ
ｌ制限分析によりチェックした。インターフェロンの生
化学的及び生物学的評価のだめの組換え体の溶菌は例１
〜３１に記載と同様に行なった。
（Ａｌａ”〜１５〕ＩＦＮ−α２遺伝子を含有するベク
ターを１例１〜３１のＤ３に記載と同様にｆ＝−ｒリ−
ＤＳ４１０中に発現させ、（Ａｌａ”〜１５〕ＩＦＮ−
α２をＮＫ２−セファロース上での抗体親和性クロマト
グラフィで精製した。この精製を抗ウィルス及びＮＫ２
−ＩＲＭＡ検定で監視し。
ターを１例１〜３１のＤ３に記載と同様にｆ＝−ｒリ−
ＤＳ４１０中に発現させ、（Ａｌａ”〜１５〕ＩＦＮ−
α２をＮＫ２−セファロース上での抗体親和性クロマト
グラフィで精製した。この精製を抗ウィルス及びＮＫ２
−ＩＲＭＡ検定で監視し。
最終生成物を還元条件下にＳＯ９の存在下にポリアクリ
ルアミドゲル電気泳動で特性付けた。
ルアミドゲル電気泳動で特性付けた。
（Ａｌａ”〜１５）ＩＦＩ’Ｊ−α２に関する力価及び
回収率を次表にまとめる： 例３４ オリゴヌクレオチド１７及び１８をオリゴヌクレオチド
１７−８ｓｔ Ｅ及び１８−８ｓｔ Ｅで代オリゴヌク
／オチド 配 列 （５’−３’）１７−８ｓｔ
Ｅ ＴＴＣＣＣＧＣＡＧＧＡＡＧＡＧＴＴＣＧ１
８−Ｂｓｔ Ｅ ＧＴＴＡＣＣＧＡＡＣＴＣＴＴＣ
Ｃ従って７ラグメン）Ｄを、オリゴヌクレオチドｌ ６
、１７−ＢｓｔＥ及び１８−ＢｓｔＥから製造した７
ラグメントＤ−８ｓｔＥで代えた。Ａ−ｔａｑ 、 Ｂ
、 Ｃ−に１１及びＤ −ｓｓｔ Ｅのリゲーション
に引続き、■４ポリヌクレオチドキナーゼ及びＡＴＰを
用いる５′末肩のホスホリル化及びゲル電気泳動による
生成物の単離を行なって。
回収率を次表にまとめる： 例３４ オリゴヌクレオチド１７及び１８をオリゴヌクレオチド
１７−８ｓｔ Ｅ及び１８−８ｓｔ Ｅで代オリゴヌク
／オチド 配 列 （５’−３’）１７−８ｓｔ
Ｅ ＴＴＣＣＣＧＣＡＧＧＡＡＧＡＧＴＴＣＧ１
８−Ｂｓｔ Ｅ ＧＴＴＡＣＣＧＡＡＣＴＣＴＴＣ
Ｃ従って７ラグメン）Ｄを、オリゴヌクレオチドｌ ６
、１７−ＢｓｔＥ及び１８−ＢｓｔＥから製造した７
ラグメントＤ−８ｓｔＥで代えた。Ａ−ｔａｑ 、 Ｂ
、 Ｃ−に１１及びＤ −ｓｓｔ Ｅのリゲーション
に引続き、■４ポリヌクレオチドキナーゼ及びＡＴＰを
用いる５′末肩のホスホリル化及びゲル電気泳動による
生成物の単離を行なって。
Ｃ１ａ −Ｂｓｔ Ｅ ７ラグメントが得られた。
この変性された７ラグメント０の使用に。
８ｓｔ Ｅ ｎ／εＣａ ｌに関する１本鎖結合鴻の存
在を保証する。
在を保証する。
例３５
例２１の類縁体を製造するために、次に記載のオリゴヌ
クレオチド牛及び５を、制限酵素部位が導入されたがイ
ンタ−７二ロン類縁体の蛋白質配列が保留された二者択
一的配列で代えた点を除き１例１〜３１に記載の方法を
繰り返した。
クレオチド牛及び５を、制限酵素部位が導入されたがイ
ンタ−７二ロン類縁体の蛋白質配列が保留された二者択
一的配列で代えた点を除き１例１〜３１に記載の方法を
繰り返した。
前記例の類縁体を次の検定法で抗ウィルス及び抗増殖活
性に関して試験した： 脳髄性心筋症フィルスで攻撃されたヒト羊膜細胞系統Ｗ
ＩＳＨを用いて色素吸収法による細胞変性作用阻害検定
により抗ウイルス価を測定した。この検定に、ＮＩＨヒ
ト白血球ＩＦＮ標準Ｇ−０２３−９０１−５２７を用い
て測定Ｌ？、：。
性に関して試験した： 脳髄性心筋症フィルスで攻撃されたヒト羊膜細胞系統Ｗ
ＩＳＨを用いて色素吸収法による細胞変性作用阻害検定
により抗ウイルス価を測定した。この検定に、ＮＩＨヒ
ト白血球ＩＦＮ標準Ｇ−０２３−９０１−５２７を用い
て測定Ｌ？、：。
各検定で内標準を用いた。
ｆ ｆｙ ７’イ（Ｄａｕｄｉ ）細胞系統を、２０ｍ
ＭＨＥＰＥＳ及びｌＯ＊ＦＣ５ｆ補充ｇれたＲＰＭｌ
−１６４０培地中で生長させた。完全培地１００μｌ中
にダクディ細胞５×１０ を有する培養液をＩＦＮＯ〜
１０ＯＯＵを有する培地１００μぎと共に３７℃で７２
時間インキュベートした。
ＭＨＥＰＥＳ及びｌＯ＊ＦＣ５ｆ補充ｇれたＲＰＭｌ
−１６４０培地中で生長させた。完全培地１００μｌ中
にダクディ細胞５×１０ を有する培養液をＩＦＮＯ〜
１０ＯＯＵを有する培地１００μぎと共に３７℃で７２
時間インキュベートした。
各試料稀釈のために４檎のレプリケートを用いた。〔３
日〕チミジン（５０μ！中１μＣｉ ： ５Ｃｉ／ｍモ
ｌｖ）を添加し、培養液を更に２４時間インキュベート
した。培養液を引続き、自動細胞ノ１−ベスターを用い
て処理した。結果を、培地対照と比較した試料の〔Ｈ〕
−チミジン吸収の阻害率として表現した。
日〕チミジン（５０μ！中１μＣｉ ： ５Ｃｉ／ｍモ
ｌｖ）を添加し、培養液を更に２４時間インキュベート
した。培養液を引続き、自動細胞ノ１−ベスターを用い
て処理した。結果を、培地対照と比較した試料の〔Ｈ〕
−チミジン吸収の阻害率として表現した。
試験類縁体に、すべて、抗ウイルス価性を有することが
判明し１例２，４，５，１１，１６゜１８及び２６０類
縁体に、特に、天然のヒトＩＦＮ−α２に関する文献中
で報告された３のＡ Ｖ／Ａ Ｐよりも実質的に良好な
抗ウイルス対抗増殖活性比（ＡＶ／ＡＰ）を有すること
が判明した。
判明し１例２，４，５，１１，１６゜１８及び２６０類
縁体に、特に、天然のヒトＩＦＮ−α２に関する文献中
で報告された３のＡ Ｖ／Ａ Ｐよりも実質的に良好な
抗ウイルス対抗増殖活性比（ＡＶ／ＡＰ）を有すること
が判明した。
第１図に、Ｈｕ−ＩＦＮ−α２遺伝子のヌクレオチド配
列及び相応するアミノ酸配列を示す図であり、第２図に
プラスミドｐＳＴＰｌの構造を示す図である。 ；１頁の続き ■Ｉｎｔ、ＣＩ、４ 識別記号 庁内整
理番号優先権主張 ［相］１９８坪６月２５日［相］
米国（Ｕ Ｓ）［株］７４８５５８発 明 者 マイ
ケル・デレク・エ イギリス国チェシャーツジ
イ ６ ・コングルトン・チューダー・ウニ 手続補正書（方式） ％式％ １、事件の表示 昭和６１年特許願第１８２６４号２
、発明の名称 ３、補正をする者 事件との関係 特許出願人 名 称 インペリアル・ケミカル・インダストリーズ・
ビーエルシー４、代理人 住 所 〒１００東京都千代田区丸の内３丁目３番１号
昭和６１年３月２５日 （発送日） ６、補正の対象
列及び相応するアミノ酸配列を示す図であり、第２図に
プラスミドｐＳＴＰｌの構造を示す図である。 ；１頁の続き ■Ｉｎｔ、ＣＩ、４ 識別記号 庁内整
理番号優先権主張 ［相］１９８坪６月２５日［相］
米国（Ｕ Ｓ）［株］７４８５５８発 明 者 マイ
ケル・デレク・エ イギリス国チェシャーツジ
イ ６ ・コングルトン・チューダー・ウニ 手続補正書（方式） ％式％ １、事件の表示 昭和６１年特許願第１８２６４号２
、発明の名称 ３、補正をする者 事件との関係 特許出願人 名 称 インペリアル・ケミカル・インダストリーズ・
ビーエルシー４、代理人 住 所 〒１００東京都千代田区丸の内３丁目３番１号
昭和６１年３月２５日 （発送日） ６、補正の対象
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、 I 式： 【アミノ酸配列があります】 〔式中Ｘ＾１、Ｘ＾２、Ｘ＾３、Ｘ＾４、Ｘ＾５、Ｘ＾
６、Ｘ＾７、Ｘ＾８、Ｘ＾９、Ｘ＾１＾０、Ｘ＾１＾１
、、Ｘ＾１＾５＾５、Ｘ＾１＾５＾６、Ｘ＾１＾５＾７
、Ｘ＾１＾５＾８、Ｘ＾１＾５＾９、Ｘ＾１＾６＾０、
Ｘ＾１＾６＾１、Ｘ＾１＾６＾２、Ｘ＾１＾６＾３、Ｘ
＾１＾６＾４及びＸ＾１＾６＾５は各々、天然のα＿−
アミノ酸を表わし、Ｘ＾１＾２はＡｒｇ又はＡｌａを表
わし、Ｘ＾１＾３はＡｒｇ又はＡｌａを表わし、Ｘ＾１
＾４はＴｈｒ又はＡｌａを表わし、Ｘ＾１＾５はＬｅｕ
又はＡｌａを表わし、Ｘ＾１＾６はＭｅｔ、Ｌｅｕ又は
Ｉｌｅを表わし、Ｘ＾２＾１はＭｅｔ又はＬｅｕを表わ
し、Ｘ＾２＾２はＳｅｒ、Ａｒｇ又はＧｌｙを表わし、
Ｘ＾２＾３はＡｒｇ又はＬｙｓを表わし、Ｘ＾２＾６は
Ｌｅｕ又はＰｒｏを表わし、Ｘ＾２＾７はＳｅｒ又はＰ
ｈｅを表わし、Ｘ＾２＾８はＳｅｒ又はＡｌａを表わし
、Ｘ＾２＾９はＳｅｒ又はＣｙｓを表わし、Ｘ＾３＾０
はＩｌｅ又はＬｅｕを表わし、Ｘ＾３＾１はＭｅｔ又は
Ｌｙｓを表わし、Ｘ＾３＾２はＡｌａ、Ａｓｎ、Ａｓｐ
又はＧｌｕを表わし、Ｘ＾３＾４はＨｉｓ又はＰｒｏを
表わし、Ｘ＾３＾７はＧｌｙ又はＡｌａを表わし、Ｘ＾
３＾８はＰｈｅ又はＬｅｕを表わし、Ｘ＾４＾３＾ａは
単結合又はＡｓｐを表わし、Ｘ＾４＾４はＧｌｙ又はＡ
ｌａを表わし、Ｘ＾５＾０はＡｌａ又はＴｈｒを表わし
、Ｘ＾５＾１はＧｌｕ、Ｐｒｏ又はＧｌｕを表わし、Ｘ
＾５＾２はＡｌａ又はＴｈｒを表わし、Ｘ＾５＾４はＳ
ｅｒ又はＰｒｏを表わし、Ｘ＾５＾９はＬｅｕ又はＭｅ
ｔを表わし、Ｘ＾６＾１はＧｌｕ又はＡｌａを表わし、
Ｘ＾６＾３はＩ１ｅ又はＴｈｒを表わし、Ｘ＾６＾４は
Ｐｈｅ又はＡｌａを表わし、Ｘ＾６＾７はＰｈｅ又はＡ
ｌａを表わし、Ｘ＾６＾８はＴｈｒ又はＳｅｒを表わし
、Ｘ＾７＾０はＬｙｓ又はＧｌｕを表わし、Ｘ＾７＾７
はＡｓｐ又はＧｌｕを表わし、Ｘ＾７＾８はＧｌｕ又は
Ｇｌｎを表わし、Ｘ＾７＾９はＡｓｐ、Ｔｈｒ又はＳｅ
ｒを表わし、Ｘ＾８＾２はＡｓｐ又はＧｌｕを表わし、
Ｘ＾８＾５はＣｙｓ、Ｔｈｒ又はＳｅｒを表わし、Ｘ＾
９＾４はＡｓｐ又はＡｓｎを表わし、Ｘ＾９＾８はＣｙ
ｓ又はＬｅｕを表わし、Ｘ＾９＾９はＶａｌ又はＴｈｒ
を表わし、Ｘ＾１＾０＾０はＭｅｔ、Ｉｌｕ又はＡｓｎ
を表わし、Ｘ＾１＾０＾１はＧｌｎ、Ｔｈｒ又はＰｈｅ
を表わし、Ｘ＾１＾０＾２はＧｌｕ、Ｇｌｙ、Ｓｅｒ又
はＡｌａを表わし、Ｘ＾１＾０＾３はＧｌｕ、Ｖａｌ又
はＬｙｓを表わし、Ｘ＾１＾０＾４はＡｒｇ、Ｇｌｙ、
Ｔｈｒ、Ｌｅｕ又はＡｌａを表わし、Ｘ＾１＾０＾５は
Ｖａｌ、Ａｓｐ、Ｍｅｔ又はＴｈｒを表わし、Ｘ＾１＾
０＾６はＧｌｙ、Ｔｈｒ、Ｇｌｕ、Ｌｅｕ又はＡｓｎを
表わし、Ｘ＾１＾０＾７はＧｌｕ、Ａｓｎ又はＴｙｒを
表わし、Ｘ＾１＾０＾８はＴｈｒ又はＶａｌを表わし、
Ｘ＾１＾０＾９はＰｒｏ又はＧｌｎを表わし、Ｘ＾１＾
１＾０はＬｅｕ又はＡｒｇを表わし、Ｘ＾１＾１＾１は
Ｍｅｔ、Ｌｙｓ又はＬｅｕを表わすか又は−Ｘ＾１＾０
＾１−Ｘ＾１＾０＾２−Ｘ＾１＾０＾３−Ｘ＾１＾０＾
４−Ｘ＾１＾０＾５−Ｘ＾１＾０＾６−Ｘ＾１＾０＾７
−Ｘ＾１＾０＾８−Ｘ＾１＾０＾９−Ｘ＾１＾１＾０−
Ｘ＾１＾１＾１−はＭｅｔ、Ｌｙｓ又はＬｅｕを表わし
、−Ｘ＾１＾１＾２はＡｓｎ、Ｌｙｓ又はＡｌａを表わ
し、Ｘ＾１＾１＾３はＡｌａ、Ｇｌｕ又はＩｌｅを表わ
し、Ｘ＾１＾１＾４はＡｓｐ又はＨｉｓを表わし、Ｘ＾
１＾１＾３はＡｌａ、Ｇｌｕ又はＩｌｅを表わし、Ｘ＾
１＾１＾４はＡｓｐ又はＨｉｓを表わし、Ｘ＾１＾１＾
５はＳｅｒ又はＰｈｅを表わし、Ｘ＾１＾２＾０はＬｙ
ｓ又はＡｒｇを表わし、Ｘ＾１＾２＾４はＡｒｇ又はＧ
ｌｎを表わし、Ｘ＾１＾３＾１はＴｈｒ又はＬｙｓを表
わし、Ｘ＾１＾３＾７はＰｒｏ又はＡｌａを表わし、Ｘ
＾１＾３＾８はＣｙｓ又はＳｅｒを表わし、Ｘ＾１＾４
＾８はＭｅｔ又はＬｅｕを表わし、Ｘ＾１＾５＾１はＬ
ｅｕ又はＰｈｅを表わし、Ｘ＾１＾５＾３はＬｅｕ又は
Ｐｈｅを表わし、これらのアミノ酸は、ＩＦＮ−α＿２
、ＩＦＮ−α＿１及びＩＦＮ−α＿ I の相応する位置
のアミノ酸とは異なる１個のアミノ酸がα＿２位置１２
〜１６、２１、２８、２９、３０、３２、３７、４４、
６１、６４、６７、９８〜１１５、１３７、１３８及び
１４８から選択した少なくとも１個所に存在するように
選択されており、かつ／又はα＿２位置１０１〜１１０
から選択された少なくとも１個所から１個のアミノ酸が
欠落しているように選択されているか 又はこれらアミノ酸は、ＩＦＮ−α＿１の相応する位置
のアミノ酸と同じ１個のアミノ酸がα＿２位置２７、３
１、５９、１５１、１６０及び１６３から選択した少な
くとも１個所に存在するように選択されていて、位置１
〜１１、２７、３１、４３ａ、５９、１００、１０２〜
１０４、１０６、１１２、１１３、１５１及び１５６〜
１６５以外のα＿２位置の所のアミノ酸は、ＩＦＮ−α
＿２の相応する位置に存在するアミノ酸と同じである〕
のポリペプチド又はそのＮ＿１＿〜＿１＿１及び／又は
Ｃ＿１＿〜＿１＿１切端類縁体及び所望によりＣ＿１＿
〜＿１＿１切端されていてよいＩＦＮ−α＿２のＮ＿３
＿〜＿１＿１切端類縁体（但し、ＩＦＮ−α＿２のＮ＿
３−切端類縁体はＣ＿７〜＿１＿１も切端されている）
。 ２、Ｘ＾１はＣｙｓを表わし、Ｘ＾２はＡｓｐ又はＴｒ
ｐを表わし、Ｘ＾３はＬｅｕ又はＣｙｓを表わし、Ｘ＾
４はＰｒｏ又はＧｌｎを表わし、Ｘ＾５はＧｌｕ、Ｇｌ
ｎ又はＡｓｐを表わし、Ｘ＾６はＴｈｒ又はＰｒｏを表
わし、Ｘ＾７はＨｉｓ又はＴｙｒを表わし、Ｘ＾８はＳ
ｅｒを表わし、Ｘ＾９はＬｅｕを表わし、Ｘ＾１＾０は
Ａｓｐ、Ｇｌｙ又はＡｌａを表わし、Ｘ＾１＾１はＡｓ
ｎ、Ｓｅｒ又はＡｌａを表わし、Ｘ＾１＾５＾５はＴｈ
ｒを表わし、Ｘ＾１＾５＾５はＴｈｒを表わし、Ｘ＾１
＾５＾６はＡｓｎを表わし、Ｘ＾１＾５＾７はＬｅｕを
表わし、Ｘ＾１＾５＾８はＧｌｎを表わし、Ｘ＾１＾５
＾９はＧｌｕ又はＬｙｓを表わし、Ｘ＾１＾６＾０はＡ
ｒｇ、Ｓｅｒ又はＩｌｅを表わし、Ｘ＾１＾６＾１はＬ
ｅｕを表わし、Ｘ＾１＾６＾２はＡｒｇを表わし、Ｘ＾
１＾６＾３はＡｒｇ又はＳｅｒを表わし、Ｘ＾１＾６＾
４はＬｙｓを表わし、Ｘ＾１＾６＾５はＧｌｕ又はＡｓ
ｐを表わす、特許請求の範囲第１項記載のポリペプチド
。 ３、Ｎ＿１＿〜＿３及び／又はＣ＿１＿〜＿１＿０切端
されている、特許請求の範囲第１項記載のポリペプチド
。 ４、II式： ▲数式、化学式、表等があります▼ 〔式中Ｘ＾５＾ａはＧｌｕ又はＧｌｎを表わし、Ｘ＾１
＾０＾ａはＡｓｐ又はＧｌｙを表わし、Ｘ＾１＾１＾ａ
はＡｓｎ又はＳｅｒを表わし、Ｘ＾２＾７＾ａはＰｈｅ
又はＳｅｒを表わし、Ｘ＾３＾１＾ａはＬｙｓ又はＭｅ
ｔを表わし、Ｘ＾４＾３＾ａはＡｓｐ又は単結合を表わ
し、Ｘ＾５＾９＾ａはＭｅｔ又はＬｅｕを表わし、Ｘ＾
１＾０＾０＾ａはＭｅｔ又はＩｌｅを表わし、Ｘ＾１＾
０＾２＾ａはＧｌｕ又はＧｌｙを表わし、Ｘ＾１＾０＾
３＾ａはＧｌｕ又はＶａｌを表わし、Ｘ＾１＾０＾４＾
ａはＡｒｇ又はＧｌｙを表わし、Ｘ＾１＾０＾６＾ａは
Ｇｌｙ又はＴｈｒを表わし、Ｘ＾１＾１＾２＾ａはＡｓ
ｎ又はＬｙｓを表わし、Ｘ＾１＾１＾３＾ａはＡｌａ又
はＧｌｕを表わし、Ｘ＾１＾５＾１＾ａはＬｅｕ又はＰ
ｈｅを表わし、Ｘ＾１＾６＾０＾ａはＡｒｇ又はＳｅｒ
を表わし、Ｘ＾１＾６＾３＾ａはＡｒｇ又はＳｅｒを表
わし、但し、これらのアミノ酸は、Ｘ＾２＾７＾ａ、Ｘ
＾３＾１＾ａ、Ｘ＾５＾９＾ａ、Ｘ＾１＾５＾１＾ａ、
Ｘ＾１＾６＾０＾ａ及びＸ＾１＾６＾３＾ａの少くとも
１個がＩＦＮ−α＿１の相応する位置にあると同じアミ
ノ酸を表わすように選択されている〕で示される、特許
請求の範囲第１項記載のポリペプチド。 ５、II式中のＸ＾４＾３＾ａはＡｓｐを表わし、Ｘ＾１
＾０＾０＾ａはＩｌｅを表わし、Ｘ＾１＾０＾２＾ａは
Ｇｌｙを表わし、Ｘ＾１＾０＾３＾ａはＶａｌを表わし
、Ｘ＾１＾０＾４＾ａはＧｌｙを表わし、Ｘ＾１＾０＾
６＾ａはＴｈｒを表わし、Ｘ＾１＾１＾２＾ａはＬｙｓ
を表わし、Ｘ＾１＾１＾３＾ａはＧｌｕを表ゎし、Ｘ＾
５＾ａ、Ｘ＾１＾０＾ａ、Ｘ＾１＾１＾ａ、Ｘ＾１＾５
＾１＾ａ及びＸ＾１＾６＾３＾ａの少なくとも１個はＩ
ＦＮ−α＿２の相応する位置のアミノ酸とは異なる１個
のアミノ酸を表わす、特許請求の範囲第４項記載のポリ
ペプチド。 ６、式中のＸ＾１はＣｙｓを表わし、Ｘ＾２はＡｓｐ又
はＴｒｐを表わし、Ｘ＾３はＬｅｕ又はＣｙｓを表わし
、Ｘ＾４はＰｒｏ又はＧｌｕを表わし、Ｘ＾５はＧｌｎ
又はＡｓｐを表わし、Ｘ＾６はＴｈｒ又はＰｒｏを表わ
し、Ｘ＾７はＨｉｓ又はＴｈｒを表わし、Ｘ＾８はＳｅ
ｒを表わし、Ｘ＾９はＬｅｕを表わし、Ｘ＾１＾０はＧ
ｌｙ又はＡｌａを表わし、Ｘ＾１＾１はＳｅｒ又はＡｌ
ａを表わし、Ｘ＾１＾６はＬｅｕ又はＭｅｔを表わし、
Ｘ＾２＾２はＡｒｇを表わし、Ｘ＾２＾３はＬｙｓを表
わし、Ｘ＾２＾６はＬｅｕを表わし、Ｘ＾２＾７はＰｈ
ｅを表わし、Ｘ＾３＾１はＬｙｓを表わし、Ｘ＾３＾４
はＨｉｓを表わし、Ｘ＾３＾８はＰｈｅを表わし、Ｘ＾
４＾３＾ａは単結合を表わし、Ｘ＾５＾０はＡｌａを表
わし、Ｘ＾５＾１はＧｌｕを表わし、Ｘ＾５＾２はＴｈ
ｒを表わし、Ｘ＾５＾４はＰｒｏを表わし、Ｘ＾６＾３
はＩｌｅを表わし、Ｘ＾６＾８はＳｅｒを表わし、Ｘ＾
７＾０はＬｙｓを表わし、Ｘ＾７＾７はＡｓｐを表わし
、Ｘ＾７＾８はＧｌｕを表わし、Ｘ＾７＾９はＴｈｒを
表わし、Ｘ＾８＾２はＡｓｐを表わし、Ｘ＾８＾５はＴ
ｙｒを表わし、Ｘ＾９＾４はＡｓｐを表わし、Ｘ＾１＾
０＾５はＶａｌ、Ａｓｐ又はＴｈｒを表わし、Ｘ＾１＾
０＾６はＴｈｒ、Ｌｅｕ又はＡｓｎを表わし、Ｘ＾１＾
２＾０はＡｒｇを表わし、Ｘ＾１＾２＾４はＧｌｎを表
わし、Ｘ＾１＾３＾１はＬｙｓを表わし、Ｘ＾１＾５＾
１はＰｈｅを表わし、Ｘ＾１＾５＾３はＬｅｕを表わし
、Ｘ＾１＾５＾６はＡｓｎを表わし、Ｘ＾１＾５＾７は
Ｌｅｕを表わし、Ｘ＾１＾５＾８はＧｌｎを表わし、Ｘ
＾１＾５＾９はＧｌｕを表わし、Ｘ＾１＾６＾０はＳｅ
ｒを表わし、Ｘ＾１＾６＾１はＬｅｕを表わし、Ｘ＾１
＾６＾２はＡｒｇを表わし、Ｘ＾１＾６＾３はＳｅｒを
表わし、Ｘ＾１＾６＾４はＬｙｓを表わし、Ｘ＾１＾６
＾５はＧｌｕを表わす、特許請求の範囲第１項記載のポ
リペプチド。 ７、式： 【アミノ酸配列があります】 〔式中Ｘ＾２はＡｓｐ又はＴｒｐを表わし、Ｘ＾３はＬ
ｅｕ又はＣｙｓを表わし、Ｘ＾４はＰｒｏ又はＧｌｎを
表わし、Ｘ＾５はＧｌｎ又はＡｓｐを表わし、Ｘ＾６は
Ｔｈｒ又はＰｒｏを表わし、Ｘ＾７はＨｉｓ又はＴｙｒ
を表わし、Ｘ＾１＾０＾ＣはＧｌｙ又はＡｌａを表わし
、Ｘ＾３＾７はＧｌｙ又はＡｌａを表わし、Ｘ＾４＾４
はＧｌｙ又はＡｌａを表わし、Ｘ＾５＾９はＭｅｔ又は
Ｌｅｕを表わし、Ｘ＾９＾８＾ＣはＣｙｓ又はＬｅｕを
表わし、Ｘ＾９＾９＾ＣはＶａｌ又はＴｈｒを表わし、
Ｘ＾１＾０＾０＾ＣはＩｌｅ、Ｍｅｔ又はＡｓｎを表わ
し、Ｘ＾１＾０＾１＾ＣはＧｌｎ又はＴｙｒを表わし、
Ｘ＾１＾０＾２＾ＣはＧｌｙ、Ａｌａ又はＳｅｒを表わ
し、Ｘ＾１＾０＾３ＣはＶａｌを表わし、Ｘ＾１＾０＾
４＾ＣはＧｌｙ、Ａｌａ又はＴｈｒを表わし、Ｘ＾１＾
０＾５＾ＣはＶａｌ又はＡｓｐを表わし、Ｘ＾１＾０＾
６＾ＣはＴｈｒ又はＬｅｕを表わし、Ｘ＾１＾０＾７＾
ＣはＧｌｕ又はＡｓｎを表わし、Ｘ＾１＾０＾８はＴｈ
ｒ又はＶａｌを表わし、Ｘ＾１＾０＾９はｐｒｏ又はＧ
ｌｎを表わし、Ｘ＾１＾１＾０はＬｅｕ又はＡｒｇを表
わし、Ｘ＾１＾１＾１＾ＣはＭｅｔ又はＬｙｓを表わし
、Ｘ＾１＾１＾２＾ＣはＬｙｓ又はＡｌａを表わし、Ｘ
＾１＾１＾３＾ＣはＧｌｕ又はＩｌｅを表わし、Ｘ＾１
＾１＾４はＡｓｐ又はＨｉｓを表わす〕のポリペプチド
、及び２９又は１３８位のＣｙｓがＳｅｒで代えられて
いて、そのアミノ酸が２〜７、１０、３７、４４、５９
及び９９〜１１４位の少なくとも１個所内に、ＩＦＮ−
α＿２の相応する位置のアミノ酸とは異なる１個のアミ
ノ酸が存在する、相応するポリペプチドである、特許請
求の範囲第１項記載のポリペプチド。 ８、式中の−Ｘ＾９＾８−Ｘ＾９＾９−Ｘ＾１＾０＾０
−Ｘ＾１＾０＾１−Ｘ＾１＾０＾２−Ｘ＾１＾０＾３−
Ｘ＾１＾０＾４−Ｘ＾１＾０＾５−Ｘ＾１＾０＾６−Ｘ
＾１＾０＾７−Ｘ＾１＾０＾８−Ｘ＾１＾０＾９−Ｘ＾
１＾１＾０−Ｘ＾１＾１＾１−Ｘ＾１＾１＾２−Ｘ＾１
＾１＾３−Ｘ＾１＾１＾４−は、−Ｌｅｕ−Ｔｈｒ−Ａ
ｓｎ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｖａｌ−Ｔｈｒ−Ａｓｐ−Ｌｅ
ｕ−Ａｓｎ−Ｖａｌ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ａｌａ
−Ｉｌｅ−Ｈｉｓ−である、特許請求の範囲第１項記載
のポリペプチド。 ９、Ｘ＾１＾０、Ｘ＾３＾７、Ｘ＾４＾４、Ｘ＾１＾０
＾２及びＸ＾１＾０＾４の少なくとも１個はアラニンを
表わす、特許請求の範囲第１項記載のポリペプチド。 １０、Ｘ＾５＾９はロイシンを表わす、特許請求の範囲
第１項記載のポリペプチド。 １１、次の群： ＩＦＮ−α＿２（４〜１５５）、 エンド−ＡＳＰ＾４＾３ａ−〔Ｌｅｕ＾１＾５＾１・Ａ
ｒｇ＾１＾６＾０＾、＾１＾６＾３〕ＩＦＮ−α＿２、 〔ガンマ（９８〜１１４）＾９＾８＾〜＾１＾１＾４〕
ＩＦＮ−α＿２、〔Ｍｅｔ＾１＾０＾０、ガンマ（１０
１〜１１４）＾１＾０＾１〜＾１＾１＾４〕ＩＦＮ−α
＿２、 〔ガンマ（２〜７）、ガンマ（９８〜１１４）〕ＩＦＮ
−α＿２、 〔Ｌｅｕ＾５＾９〕ＩＦＮ−α＿２、 〔α＾１＾０＾、＾３＾７＾、＾４＾４＾、＾１＾０＾
２＾、＾１＾０＾４〕ＩＦＮ−α＿２、〔Ｓｅｒ＾２＾
９＾、＾１＾３＾８〕ＩＦＮ−α＿２より選択された、
特許請求の範囲第１項記載のポリペプチド。 １２、 I 式： 【アミノ酸配列があります】 〔式中Ｘ＾１、Ｘ＾２、Ｘ＾３、Ｘ＾４、Ｘ＾５、Ｘ＾
６、Ｘ＾７、Ｘ＾８、Ｘ＾９、Ｘ＾１＾０、Ｘ＾１＾１
、Ｘ＾１＾５＾５、Ｘ＾１＾５＾６、Ｘ＾１＾５＾７、
Ｘ＾１＾５＾９、Ｘ＾１＾６＾０、Ｘ＾１＾６＾１、Ｘ
＾１＾６＾２、Ｘ＾１＾６＾３、Ｘ＾１＾６＾４及びＸ
＾１＾６＾５は各々、天然のα−アミノ酸を表わし、Ｘ
＾１＾２はＡｒｇ又はＡｌａを表わし、Ｘ＾１＾３はＡ
ｒｇ又はＡｌａを表わし、Ｘ＾１＾４はＴｈｒ又はＡｌ
ａを表わし、Ｘ＾１＾５はＬｅｕ又はＡｌａを表わし、
Ｘ＾１＾６はＭｅｔ、Ｌｅｕ又はＩｌｅを表わし、Ｘ＾
２＾１はＭｅｔ又はＬｅｕを表わし、Ｘ＾２＾２はＳｅ
ｒ、Ａｒｇ又はＧｌｙを表わし、Ｘ＾２＾３はＡｒｇ又
はＬｙｓを表わし、Ｘ＾２＾６はＬｅｕ又はＰｒｏを表
わし、Ｘ＾２＾７はＳｅｒ又はＰｈｅを表わし、Ｘ＾２
＾８はＳｅｒ又はＡｌａを表わし、Ｘ＾２＾９はＳｅｒ
又はＣｙｓを表わし、Ｘ＾３＾０はＩｌｅ又はＬｅｕを
表わし、Ｘ＾３＾１はＭｅｔ又はＬｙｓを表わし、Ｘ＾
３＾２はＡｌａ、Ａｓｎ、Ａｓｐ又はＧｌｕを表わし、
Ｘ＾３＾４はＨｉｓ又はＰｒｏを表わし、Ｘ＾３＾７は
Ｇｌｙ又はＡｌａを表わし、Ｘ＾３＾８はＰｈｅ又はＬ
ｅｕを表わし、Ｘ＾４＾３ａは単結合又はＡｓｐを表わ
し、Ｘ＾４＾４はＧｌｙ又はＡｌａを表わし、Ｘ＾５＾
０はＡｌａ又はＴｈｒを表わし、Ｘ＾５＾１はＧｌｕ、
Ｐｒｏ又はＧｌｕを表わし、Ｘ＾５＾２はＡｌａ又はＴ
ｈｒを表わし、Ｘ＾５＾４はＳｅｒ又はＰｒｏを表わし
、Ｘ＾５＾９はＬｅｕ又はＭｅｔを表わし、Ｘ＾６＾１
はＧｌｕ又はＡｌａを表わし、Ｘ＾６＾３はＩｌｅ又は
Ｔｈｒを表わし、Ｘ＾６＾４はＰｈｅ又はＡｌａを表わ
し、Ｘ＾６＾７はＰｈｅ又はＡｌａを表わし、Ｘ＾６＾
８はＴｈｒ又はＳｅｒを表わし、Ｘ＾７＾０はＬｙｓ又
はＧｌｕを表わし、Ｘ＾７＾７はＡｓｐ又はＧｌｕを表
わし、Ｘ＾７＾８はＧｌｕ又はＧｌｎを表わし、Ｘ＾７
＾９はＡｓｐ、Ｔｈｒ又はＳｅｒを表わし、Ｘ＾８＾２
はＡｓｐ又はＧｌｕを表わし、Ｘ＾８＾５はＣｙｓ、Ｔ
ｈｒ又はＳｅｒを表わし、Ｘ＾９＾４はＡｓｐ又はＡｓ
ｎを表わし、Ｘ＾９＾８はＣｙｓ又はＬｅｕを表わし、
Ｘ＾９＾９はＶａｌ又はＴｈｒを表わし、Ｘ＾１＾０＾
０はＭｅｔ、Ｉｌｅ又はＡｓｎを表わし、 Ｘ＾１＾０＾１はＧｌｎ、Ｔｈｒ又はＰｈｅを表わし、
Ｘ＾１＾０＾２はＧｌｕ、Ｇｌｙ、Ｓｅｒ又はＡｌａを
表わし、Ｘ＾１＾０＾３はＧｌｕ、Ｖａｌ又はＬｙｓを
表わし、Ｘ＾１＾０＾４はＡｒｇ、Ｇｌｙ、Ｔｈｒ、Ｌ
ｅｕ又はＡｌａを表わし、Ｘ＾１＾０＾５はＶａｌ、Ａ
ｓｐ、Ｍｅｔ又はＴｈｒを表わし、Ｘ＾１＾０＾６はＧ
ｌｙ、Ｔｈｒ、Ｇｌｕ、Ｌｅｕ又はＡｓｎを表わし、Ｘ
＾１＾０＾７はＧｌｕ、Ａｓｎ又はＴｙｒを表わし、Ｘ
＾１＾０＾８はＴｈｒ又はＶａｌを表わし、Ｘ＾１＾０
＾９はＰｒｏ又はＧｌｎを表わし、Ｘ＾１＾１＾０はＬ
ｅｕ又はＡｒｇを表わし、Ｘ＾１＾１＾１はＭｅｔ、Ｌ
ｙｓ又はＬｅｕを表わすか又は−Ｘ＾１＾０＾１−Ｘ＾
１＾０＾２−Ｘ＾１＾０＾３−Ｘ＾１＾０＾４−Ｘ＾１
＾０＾５−Ｘ＾１＾０＾６−Ｘ＾１＾０＾７−Ｘ＾１＾
０＾８−Ｘ＾１＾０＾９−Ｘ＾１＾１＾０−Ｘ＾１＾１
＾１−はＭｅｔ、Ｌｙｓ又はＬｅｕを表わし、−Ｘ＾１
＾１＾２はＡｓｎ、Ｌｙｓ又はＡｌａを表わし、Ｘ＾１
＾１＾３はＡｌａ、Ｇｌｕ又はＩｌｅを表わし、Ｘ＾１
＾１＾４はＡｓｐ又はＨｉｓを表わし、Ｘ＾１＾１＾３
はＡｌａ、Ｇｌｕ又はＩｌｅを表わし、Ｘ＾１＾１＾４
はＡｓｐ又はＨｉｓを表わし、Ｘ＾１＾１＾５はＳｅｒ
又はＰｈｅを表わし、Ｘ＾１＾２＾０はＬｙｓ又はＡｒ
ｇを表わし、Ｘ＾１＾２＾４はＡｒｇ又はＧｌｎを表わ
し、Ｘ＾１＾３＾１はＴｈｒ又はＬｙｓを表わし、Ｘ＾
１＾３＾７はＰｒｏ又はＡｌａを表わし、Ｘ＾１＾３＾
８はＣｙｓ又はＳｅｒを表わし、Ｘ＾１＾４＾８はＭｅ
ｔ又はＬｅｕを表わし、Ｘ＾１＾５＾１はＬｅｕ又はＰ
ｈｅを表わし、Ｘ＾１＾５＾３はＬｅｕ又はＰｈｅを表
わし、これらのアミノ酸は、ＩＦＮ−α＿２、ＩＦＮ−
α＿１及びＩＦＮ−αＩの相応する位置のアミノ酸とは
異なる１個のアミノ酸がα＿２位置１２〜１６、２１、
２８、２９、３０、３２、３７、４４、６１、６４、６
７、９８〜１１５、１３７、１３８及び１４８から選択
した少なくとも１個所に存在するように選択されており
、かつ／又はα＿２位置１０１〜１１０から選択された
少なくとも１個所から１個のアミノ酸が欠落しているよ
うに選択されているか 又はこれらアミノ酸は、ＩＦＮ−α＿１の相応する位置
のアミノ酸と同じ１個のアミノ酸がα＿２位置２７、３
１、５９、１５１、１６０及び１６３から選択した少な
くとも１個所に存在するように選択されていて位置１〜
１１、２７、３１、４３ａ、５９、１００、１０２〜１
０４、１０６、１１２、１１３、１５１及び１５６〜１
６５以外のα＿２位置の所のアミノ酸は、ＩＦＮ−α＿
２の相応する位置に存在するアミノ酸と同じである〕の
ポリペプチド又はその Ｎ＿１＿〜＿１＿１及び／又はＣ＿１＿〜＿１＿１切端
類練体及び所望によりＣ＿１＿〜＿１、切端されていて
よいＩＦＮ−α＿２のＮ＿３＿〜＿１＿４切端類縁体（
但し、ＩＦＮ−α＿２のＮ＿３−切端類縁体はＣ＿７＿
〜＿１＿１も切端されている）を製造するため、前記ポ
リペプチドに関してコードする遺伝学的物質よりなる複
製可能なプラスミド表現ベヒクルで形質転換されている
微生物を培養して前記ポリペプチドを発現させ、この際
に発現された前記ポリペプチドを回収することを特徴と
する、ポリペプチドの製法。 １３、 I 式： 【アミノ酸配列があります】 〔式中Ｘ＾１、Ｘ＾２、Ｘ＾３、Ｘ＾４、Ｘ＾５、Ｘ＾
６、Ｘ＾７、Ｘ＾８、Ｘ＾９、Ｘ＾１＾０、Ｘ＾１＾１
、Ｘ＾１＾５＾５＾、Ｘ＾１＾５＾６、Ｘ＾１＾５＾７
、Ｘ＾１＾５＾９、Ｘ＾１＾６＾０、Ｘ＾１＾６＾１、
Ｘ＾１＾６＾２、Ｘ＾１＾６＾３、Ｘ＾１＾６＾４及び
Ｘ＾１＾６＾５は各々、天然のα−アミノ酸を表わし、
Ｘ＾１＾２はＡｒｇ又はＡｌａを表わし、Ｘ＾１＾３は
Ａｒｇ又はＡｌａを表わし、Ｘ＾１＾４はＴｈｒ又はＡ
ｌａを表わし、Ｘ＾１＾５はＬｅｕ又はＡｌａを表わし
、Ｘ＾１＾６はＭｅｔ、Ｌｅｕ又はＩｌｅを表わし、Ｘ
＾２＾１はＭｅｔ又はＬｅｕを表わし、Ｘ＾２＾２はＳ
ｅｒ、Ａｒｇ又はＧｌｙを表わし、Ｘ＾２＾３はＡｒｇ
又はＬｙｓを表わし、Ｘ＾２＾６はＬｅｕ又はＰｒｏを
表わし、Ｘ＾２＾７はＳｅｒ又はＰｈｅを表わし、Ｘ＾
２＾８はＳｅｒ又はＡｌａを表わし、Ｘ＾２＾９はＳｅ
ｒ又はＣｙｓを表わし、Ｘ＾３＾０はＩｌｅ又はＬｅｕ
を表わし、Ｘ＾３＾１はＭｅｔ又はＬｙｓを表わし、Ｘ
＾３＾２はＡｌａ、Ａｓｎ、Ａｓｐ又はＧｌｕを表わし
、Ｘ＾３＾４はＨｉｓ又はＰｒｏを表わし、Ｘ＾３＾７
はＧｌｙ又はＡｌａを表わし、Ｘ＾３＾８はＰｈｅ又は
Ｌｅｕを表わし、Ｘ＾４＾３＾ａは単結合又はＡｓｐを
表わし、Ｘ＾４＾４はＧｌｙ又はＡｌａを表わし、Ｘ＾
５＾０はＡｌａ又はＴｈｒを表わし、Ｘ＾５＾１はＧｌ
ｕ、Ｐｒｏ又はＧｌｕを表わし、Ｘ＾５＾２はＡｌａ又
はＴｈｒを表わし、Ｘ＾５＾４はＳｅｒ又はＰｒｏを表
わし、Ｘ＾５＾９はＬｅｕ又はＭｅｔを表わし、Ｘ＾６
＾１はＧｌｕ又はＡｌａを表わし、Ｘ＾６＾３はＩｌｅ
又はＴｈｒを表わし、Ｘ＾６＾４はＰｈｅ又はＡｌａを
表わし、Ｘ＾６＾７はＰｈｅ又はＡｌａを表わし、Ｘ＾
６＾８はＴｈｒ又はＳｅｒを表わし、Ｘ＾７＾０はＬｙ
ｓ又はＧｌｕを表わし、Ｘ＾７＾７はＡｓｐ又はＧｌｕ
を表わし、Ｘ＾７＾８はＧｌｕ又はＧｌｎを表わし、Ｘ
＾７＾９はＡｓｐ、Ｔｈｒ又はＳｅｒを表わし、Ｘ＾８
＾２はＡｓｐ又はＧｌｕを表わし、Ｘ＾８＾５はＣｙｓ
、Ｔｈｒ又はＳｅｒを表わし、Ｘ＾９＾４はＡｓｐ又は
Ａｓｎを表わし、Ｘ＾９＾８はＣｙｓ又はＬｅｕを表わ
し、Ｘ＾９＾９はＶａｌ又はＴｈｒを表わし、Ｘ＾１＾
０＾０はＭｅｔ、Ｉｌｅ又はＡｓｎを表わし、 Ｘ＾１＾０＾１はＧｌｎ、Ｔｈｒ又はＰｈｅを表わし、
Ｘ＾１＾０＾２はＧｌｕ、Ｇｌｙ、Ｓｅｒ又はＡｌａを
表わし、Ｘ＾１＾０＾３はＧｌｕ、Ｖａｌ又はＬｙｓを
表わし、Ｘ＾１＾０＾４はＡｒｇ、Ｇｌｙ、Ｔｈｒ、Ｌ
ｅｕ又はＡｌａを表わし、Ｘ＾１＾０＾５はＶａｌ、Ａ
ｓｐ、Ｍｅｔ又はＴｈｒを表わし、Ｘ＾１＾０＾６はＧ
ｌｙ、Ｔｈｒ、Ｇｌｕ、Ｌｅｕ又はＡｓｎを表わし、Ｘ
＾１＾０＾７はＧｌｕ、Ａｓｎ又はＴｙｒを表わし、Ｘ
＾１＾０＾８はＴｈｒ又はＶａｌを表わし、Ｘ＾１＾０
＾９はＰｒｏ又はＧｌｎを表わし、Ｘ＾１＾１＾０はＬ
ｅｕ又はＡｒｇを表わし、Ｘ＾１＾１＾１はＭｅｔ、Ｌ
ｙｓ又はＬｅｕを表わすか又は−Ｘ＾１＾０＾１−Ｘ＾
１＾０＾２−Ｘ＾１＾０＾３−Ｘ＾１＾０＾４−Ｘ＾１
＾０＾５−Ｘ＾１＾０＾６−−Ｘ＾１＾０＾７−Ｘ＾１
＾０＾８−Ｘ＾１＾０＾９−Ｘ＾１＾１＾０−Ｘ＾１＾
１＾１−はＭｅｔ、Ｌｙｓ又はＬｅｕを表わし、−Ｘ＾
１＾１＾２はＡｓｎ、Ｌｙｓ又はＡｌａを表わし、Ｘ＾
１＾１＾３はＡｌａ、Ｇｌｕ又はＩｌｅを表わし、Ｘ＾
１＾１＾４はＡｓｐ又はＨｉｓを表わし、Ｘ＾１＾１＾
３はＡｌａ、Ｇｌｕ又はＩｌｅを表わし、Ｘ＾１＾１＾
４はＡｓｐ又はＨｉｓを表わし、Ｘ＾１＾１＾５はＳｅ
ｒ又はＰｈｅを表わし、Ｘ＾１＾２＾０はＬｙｓ又はＡ
ｒｇを表わし、Ｘ＾１＾２＾４はＡｒｇ又はＧｌｎを表
わし、Ｘ＾１＾３＾１はＴｈｒ又はＬｙｓを表わし、Ｘ
＾１＾３＾７はＰｒｏ又はＡｌａを表わし、Ｘ＾１＾３
＾８はＣｙｓ又はＳｅｒを表わし、Ｘ＾１＾４＾８はＭ
ｅｔ又はＬｅｕを表わし、Ｘ＾１＾５＾１はＬｅｕ又は
Ｐｈｅを表わし、Ｘ＾１＾５＾３はＬｅｕ又はＰｈｅを
表わし、これらのアミノ酸は、ＩＦＮ−α＿２、ＩＦＮ
−α＿１及びＩＦＮ−αＩの相応する位置のアミノ酸と
は異なる１個のアミノ酸がα＿２の位置１２〜１６、２
１、２８、２９、３０、３２、３７、４４、６１、６４
、６７、９８〜１１５、１３７、１３８及び１４８から
選択した少なくとも１個所に存在するように選択されて
おり、かつ／又はα＿２位１０１〜１１０から選択され
た少なくとも１個所から１個のアミノ酸が欠落している
ように選択されているか 又はこれらアミノ酸は、ＩＦＮ−α＿１の相応する位置
のアミノ酸と同じ１個のアミノ酸がα＿２位置２７、３
１、５９、１５１、１６０及び１６３から選択した少な
くとも１個所に存在するように選択されていて位置１〜
１１、２７、３１、４３ａ、５９、１００、１０２〜１
０４、１０６、１１２、１１３、１５１及び１５６〜１
６５以外のα＿２位置の所のアミノ酸は、ＩＦＮ−α＿
２の相応する位置に存在するアミノ酸と同じである〕の
ポリペプチド又はその Ｎ＿１＿〜＿１＿１及び／又はＣ＿１＿〜＿１＿１切端
類縁体及び所望によりＣ＿１＿〜＿１＿１切端されてい
てよいＩＦＮ−α＿２のＮ＿３＿〜＿１＿１切端類縁体
（但し、ＩＦＮ−α＿２のＮ＿３−切端類縁体はＣ＿７
＿〜＿１＿１も切端されている）を表現することができ
、前記ポリペプチドに関してコードする遺伝学的物質よ
りなる複製可能なプラスミド表現ベヒクルを有する、形
質転換微生物。 １４、 I 式： 【アミノ酸配列があります】 〔式中Ｘ＾１、Ｘ＾２、Ｘ＾３、Ｘ＾４、Ｘ＾５、Ｘ＾
６、Ｘ＾７、Ｘ＾８、Ｘ＾９、Ｘ＾１＾０、Ｘ＾１＾１
、Ｘ＾１＾５＾５、Ｘ＾１＾５＾６、Ｘ＾１＾５＾７、
Ｘ＾１＾５＾８、Ｘ＾１＾５＾９、Ｘ＾１＾６＾０、Ｘ
＾１＾６＾１、Ｘ＾１＾６＾２、Ｘ＾１＾６＾３、Ｘ＾
１＾６＾４及びＸ＾１＾６＾５は各々、天然のα−アミ
ノ酸を表わし、Ｘ＾１＾２はＡｒｇ又はＡｌａを表わし
、Ｘ＾１＾３はＡｒｇ又はＡｌａを表わし、Ｘ＾１＾４
はＴｈｒ又はＡｌａを表わし、Ｘ＾１＾５はＬｅｕ又は
Ａｌａを表わし、Ｘ＾１＾６はＭｅｔ、Ｌｅｕ又はＩｌ
ｅを表わし、Ｘ＾２＾１はＭｅｔ又はＬｅｕを表わし、
Ｘ＾２＾２はＳｅｒ、Ａｒｇ又はＧｌｙを表わし、Ｘ＾
２＾３はＡｒｇ又はＬｙｓを表わし、Ｘ＾２＾６はＬｅ
ｕ又はＰｒｏを表わし、Ｘ＾２＾７はＳｅｒ又はＰｈｅ
を表わし、Ｘ＾２＾８はＳｅｒ又はＡｌａを表わし、Ｘ
＾２＾９はＳｅｒ又はＣｙｓを表わし、Ｘ＾３＾０はＩ
ｌｅ又はＬｅｕを表わし、Ｘ＾３＾１はＭｅｔ又はＬｙ
ｓを表わし、Ｘ＾３＾２はＡｌａ、Ａｓｎ、Ａｓｐ又は
Ｇｌｕを表わし、Ｘ＾３＾４はＨｉｓ又はＰｒｏを表わ
し、Ｘ＾３＾７はＧｌｙ又はＡｌａを表わし、Ｘ＾３＾
８はＰｈｅ又はＬｅｕを表わし、Ｘ＾４＾３＾ａは単結
合又はＡｓｐを表わし、Ｘ＾４＾４はＧｌｙ又はＡｌａ
を表わし、Ｘ＾５＾０はＡｌａ又はＴｈｒを表わし、Ｘ
＾５＾１はＧｌｕ、Ｐｒｏ又はＧｌｕを表わし、Ｘ＾５
＾２はＡｌａ又はＴｈｒを表わし、Ｘ＾５＾４はＳｅｒ
又はＰｒｏを表わし、Ｘ＾５＾９はＬｅｕ又はＭｅｔを
表わし、Ｘ＾６＾１はＧｌｕ又はＡｌａを表わし、Ｘ＾
６＾３はＩｌｅ又はＴｈｒを表わし、Ｘ＾６＾４はＰｈ
ｅ又はＡｌａを表わし、Ｘ＾６＾７はＰｈｅ又はＡｌａ
を表わし、Ｘ＾６＾８はＴｈｒ又はＳｅｒを表わし、Ｘ
＾７＾０はＬｙｓ又はＧｌｕを表わし、Ｘ＾７＾７はＡ
ｓｐ又はＧｌｕを表わし、Ｘ＾７＾８はＧｌｕ又はＧｌ
ｎを表わし、Ｘ＾７＾９はＡｓｐ、Ｔｈｒ又はＳｅｒを
表わし、Ｘ＾８＾２はＡｓｐ又はＧｌｕを表わし、Ｘ＾
８＾５はＣｙｓ、Ｔｈｒ又はＳｅｒを表わし、Ｘ＾９＾
４はＡｓｐ又はＡｓｎを表わし、Ｘ＾９＾８はＣｙｓ又
はＬｅｕを表わし、Ｘ＾９＾９はＶａｌ又はＴｈｒを表
わし、Ｘ＾１＾０＾０はＭｅｔ、Ｉｌｅ又はＡｓｎを表
わし、Ｘ＾１＾０＾１はＧｌｎ、Ｔｈｒ又はＰｈｅを表
わし、Ｘ＾１＾０＾２はＧｌｕ、Ｇｌｙ、Ｓｅｒ又はＡ
ｌａを表わし、Ｘ＾１＾０＾３はＧｌｕ、Ｖａｌ又はＬ
ｙｓを表わし、Ｘ＾１＾０＾４はＡｒｇ、Ｇｌｙ、Ｔｈ
ｒ、Ｌｅｕ又はＡｌａを表わし、Ｘ＾１＾０＾５はＶａ
ｌ、Ａｓｐ、Ｍｅｔ又はＴｈｒを表わし、Ｘ＾１＾０＾
６はＧｌｙ、Ｔｈｒ、Ｇｌｕ、Ｌｅｕ又はＡｓｎを表わ
し、Ｘ＾１＾０＾７はＧｌｕ、Ａｓｎ又はＴｙｒを表わ
し、Ｘ＾１＾０＾８はＴｈｒ又はＶａｌを表わし、Ｘ＾
１＾０＾９はＰｒｏ又はＧｌｎを表わし、Ｘ＾１＾１＾
０はＬｅｕ又はＡｒｇを表わし、Ｘ＾１＾１＾１はＭｅ
ｔ、Ｌｙｓ又はＬｅｕを表わすか又は−Ｘ＾１＾０＾１
−Ｘ＾１＾０＾２−Ｘ＾１＾０＾３−Ｘ＾１＾０＾４−
Ｘ＾１＾０＾５−Ｘ＾１＾０＾６−Ｘ＾１＾０＾７−Ｘ
＾１＾０＾８−Ｘ＾１＾０＾９−Ｘ＾１＾１＾０−Ｘ＾
１＾１＾４−はＭｅｔ、Ｌｙｓ又はＬｅｕを表わし、−
Ｘ＾１＾１＾２はＡｓｎ、Ｌｙｓ又はＡｌａを表わし、
Ｘ＾１＾１＾３はＡｌａ、Ｇｌｕ又はＩｌｅを表わし、
Ｘ＾１＾１＾４はＡｓｐ又はＨｉｓを表わし、Ｘ＾１＾
１＾３はＡｌａ、Ｇｌｕ又はＩｌｅを表わし、Ｘ＾１＾
１＾４はＡｓｐ又はＨｉｓを表わし、Ｘ＾１＾１＾５は
Ｓｅｒ又はＰｈｅを表わし、Ｘ＾１＾２＾０はＬｙｓ又
はＡｒｇを表わし、Ｘ＾１＾２＾４はＡｒｇ又はＧｌｎ
を表わし、Ｘ＾１＾３＾１はＴｈｒ又はＬｙＳを表わし
、Ｘ＾１＾３＾７はＰｒｏ又はＡｌａを表わし、Ｘ＾１
＾３＾８はＣｙｓ又はＳｅｒを表わし、Ｘ＾１＾４＾８
はＭｅｔ又はＬｅｕを表わし、Ｘ＾１＾５＾１はＬｅｕ
又はＰｈｅを表わし、Ｘ＾１＾５＾３はＬｅｕ又はＰｈ
ｅを表わし、これらのアミノ酸は、ＩＦＮ−α＿２、Ｉ
ＦＮ−α＿１及びＩＦＮ−αＩの相応する位置のアミノ
酸とは異なる１個のアミノ酸がα＿２の位置１２〜１６
、２１、２８、２９、３０、３２、３７、４４、６１、
６４、６７、９８〜１１５、１３７、１３８及び１４８
から選択した少なくとも１個所に存在するように選択さ
れており、かつ／又はα＿２位置１０１〜１１０から選
択された少なくとも１個所から１個のアミノ酸が欠落し
ているように選択されているか 又はこれらアミノ酸は、ＩＮＦ−α＿１の相応する位置
のアミノ酸と同じ１個のアミノ酸がα＿２位置２７、３
１、５９、１５１、１６０及び１６３から選択した少な
くとも１個所に存在するように選択されていて、位置１
〜１１、２７、３１、４３ａ、５９、１００、１０２〜
１０４、１０６、１１２、１１３、１５１及び１５６〜
１６５以外のα＿２位置の所のアミノ酸は、ＩＦＮ−α
＿２の相応する位置に存在するアミノ酸と同じである〕
のポリペプチド又はそのＮ＿１＿〜＿１＿１及び／又は
Ｃ＿１＿〜＿１＿１切端類縁体及び所望によりＣ＿１＿
〜＿１＿１切端されていてよいＩＦＮ−α＿２のＮ＿３
＿〜＿１＿１切端類縁体（但し、ＩＦＮ−α＿２のＮ＾
３−切端類縁体はＣ＿７＿〜＿１＿１も切端されている
）を表現することができ、前記ポリペプチドに関してコ
ードする遺伝学的物質よりなる複製可能なプラスミド表
現ベヒクルよりなる、形質転換微生物を製造するため、
微生物に前記ポリペプチドに関してコードする遺伝学的
物質よりなる複製可能なプラスミド表現ベヒクルを挿入
することにより微生物を形質転換することを特徴とする
、形質転換微生物の製法。 １５、形質転換微生物中の、 I 式： 【アミノ酸配列があります】 〔式中Ｘ＾１、Ｘ＾２、Ｘ＾３、Ｘ＾４、Ｘ＾５、Ｘ＾
６、Ｘ＾７、Ｘ＾８、Ｘ＾９、Ｘ＾１＾０、Ｘ＾１＾１
、Ｘ＾１＾５＾５、Ｘ＾１＾５＾６、Ｘ＾１＾５＾７、
Ｘ＾１＾５＾８、Ｘ＾１＾５＾９、Ｘ＾１＾６＾０、Ｘ
＾１＾６＾１、Ｘ＾１＾６＾２、Ｘ＾１＾６＾３、Ｘ＾
１＾６＾４及びＸ＾１＾６＾５は各々、天然のα−アミ
ノ酸を表わし、Ｘ＾１＾２はＡｒｇ又はＡｌａを表わし
、Ｘ＾１＾３はＡｒｇ又はＡｌａを表わし、Ｘ＾１＾４
はＴｈｒ又はＡｌａを表わし、Ｘ＾１＾５はＬｅｕ又は
Ａｌａを表わし、Ｘ＾１＾６はＭｅｔ、Ｌｅｕ又はＩｌ
ｅを表わし、Ｘ＾２＾１はＭｅｔ又はＬｅｕを表わし、
Ｘ＾２＾２はＳｅｒ、Ａｒｇ又はＧｌｙを表わし、Ｘ＾
２＾３はＡｒｇ又はＬｙｓを表わし、Ｘ＾２＾６はＬｅ
ｕ又はＰｒｏを表わし、Ｘ＾２＾７はＳｅｒ又はＰｈｅ
を表わし、Ｘ＾２＾８はＳｅｒ又はＡｌａを表わし、Ｘ
＾２＾９はＳｅｒ又はＣｙｓを表わし、Ｘ＾３＾０はＩ
ｌｅ又はＬｅｕを表わし、Ｘ＾３＾１はＭｅｔ又はＬｙ
ｓを表わし、Ｘ＾３＾２はＡｌａ、Ａｓｎ、Ａｓｐ又は
Ｇｌｕを表わし、Ｘ＾３＾４はＨｉｓ又はＰｒｏを表わ
し、Ｘ＾３＾７はＧｌｙ又はＡｌａを表わし、Ｘ＾３＾
８はＰｈｅ又はＬｅｕを表わし、Ｘ＾４＾３＾ａは単結
合又はＡｓｐを表わし、Ｘ＾４＾４はＧｌｙ又はＡｌａ
を表わし、Ｘ＾５＾０はＡｌａ又はＴｈｒを表わし、Ｘ
＾５＾１はＧｌｕ、Ｐｒｏ又はＧｌｕを表わし、Ｘ＾５
＾２はＡｌａ又はＴｈｒを表わし、Ｘ＾５＾４はＳｅｒ
又はＰｒｏを表わし、Ｘ＾５＾９はＬｅｕ又はＭｅｔを
表わし、Ｘ＾６＾１はＧｌｕ又はＡｌａを表わし、Ｘ＾
６＾３はＩｌｅ又はＴｈｒを表わし、Ｘ＾６＾４はＰｈ
ｅ又はＡｌａを表わし、Ｘ＾６＾７はＰｈｅ又はＡｌａ
を表わし、Ｘ＾６＾８はＴｈｒ又はＳｅｒを表わし、Ｘ
＾７＾０はＬｙｓ又はＧｌｕを表わし、Ｘ＾７＾７はＡ
ｓｐ又はＧｌｕを表わし、Ｘ＾７＾８はＧｌｕ又はＧｌ
ｎを表わし、Ｘ＾７＾９はＡｓｐ、Ｔｈｒ又はＳｅｒを
表わし、Ｘ＾８＾２はＡｓｐ又はＧｌｕを表わし、Ｘ＾
８＾５はＣｙｓ、Ｔｈｒ又はＳｅｒを表わし、Ｘ＾９＾
４はＡｓｐ又はＡｓｎを表わし、Ｘ＾９＾８はＣｙｓ又
はＬｅｕを表わし、Ｘ＾９＾９はＶａｌ又はＴｈｒを表
わし、Ｘ＾１＾０＾０はＭｅｔ、Ｉｌｅ又はＡｓｎを表
わし、Ｘ＾１＾０＾１はＧｌｎ、Ｔｈｒ又はＰｈｅを表
わし、Ｘ＾１＾０＾２はＧｌｕ、Ｇｌｙ、Ｓｅｒ又はＡ
ｌａを表わし、Ｘ＾１＾０＾３はＧｌｕ、Ｖａｌ又はＬ
ｙｓを表わし、Ｘ＾１＾０＾４はＡｒｇ、Ｇｌｙ、Ｔｈ
ｒ、Ｌｅｕ又はＡｌａを表わし、Ｘ＾１＾０＾５はＶａ
ｌ、Ａｓｐ、Ｍｅｔ又はＴｈｒを表わし、Ｘ＾１＾０＾
６はＧｌｙ、Ｔｈｒ、Ｇｌｕ、Ｌｅｕ又はＡｓｎを表わ
し、Ｘ＾１＾０＾７はＧｌｕ、Ａｓｎ又はＴｙｒを表わ
し、Ｘ＾１＾０＾８はＴｈｒ又はＶａｌを表わし、Ｘ＾
１＾０＾９はＰｒｏ又はＧｌｎを表わし、Ｘ＾１＾１＾
０はＬｅｕ又はＡｒｇを表わし、Ｘ＾１＾１＾１はＭｅ
ｔ、Ｌｙｓ又はＬｅｕを表わすか又は−Ｘ＾１＾０＾１
−Ｘ＾１＾０＾２−Ｘ＾１＾０＾３−Ｘ＾１＾０＾４−
Ｘ＾１＾０＾５−Ｘ＾１＾０＾６−Ｘ＾１＾０＾７−Ｘ
＾１＾０＾８−Ｘ＾１＾０＾９−Ｘ＾１＾１＾０−Ｘ＾
１＾１＾１−はＭｅｔ、Ｌｙｓ又はＬｅｕを表わし、−
Ｘ＾１＾１＾２はＡｓｎ、Ｌｙｓ又はＡｌａを表わし、
Ｘ＾１＾１＾３はＡｌａ、Ｇｌｕ又はＩｌｅを表わし、
Ｘ＾１＾１＾４はＡｓｐ又はＨｉｓを表わし、Ｘ＾１＾
１＾３はＡｌａ、Ｇｌｕ又はＩｌｅを表わし、Ｘ＾１＾
１＾４はＡｓｐ又はＨｉｓを表わし、Ｘ＾１＾１＾５は
Ｓｅｒ又はＰｈｅを表わし、Ｘ＾１＾２＾０はＬｙｓ又
はＡｒｇを表わし、Ｘ＾１＾２＾４はＡｒｇ又はＧｌｎ
を表わし、Ｘ＾１＾３＾１はＴｈｒ又はＬｙｓを表わし
、Ｘ＾１＾３＾７はＰｒｏ又はＡｌａを表わし、Ｘ＾１
＾３＾８はＣｙｓ又はＳｅｒを表わし、Ｘ＾１＾４＾８
はＭｅｔ又はＬｅｕを表わし、Ｘ＾１＾５＾１はＬｅｕ
又はＰｈｅを表わし、Ｘ＾１＾５＾３はＬｅｕ又はＰｈ
ｅを表わし、これらのアミノ酸は、ＩＦＮ−α＿２、Ｉ
ＦＮ−α＿１及びＩＦＮ−αＩの相応する位置のアミノ
酸とは異なる１個のアミノ酸がα＿２の位置１２〜１６
、２１、２８、２９、３０、３２、３７、４４、６１、
６４、６７、９８〜１１５、１３７、１３８及び１４８
から選択した少なくとも１個所に存在するように選択さ
れているか又はα＿２位１０１〜１１０から選択された
少なくとも１個所からユ個のアミノ酸が欠落しているよ
うに選択されているか 又はこれらアミノ酸は、ＩＦＮ−α＿１の相応する位置
のアミノ酸と同じ１個のアミノ酸がα＿２位置２７、３
１、５９、１５１、１６０及び１６３から選択した少な
くとも１個所に存在するように選択されていて位置１〜
１１、２７、３１、４３ａ、５９、１００、１０２〜１
０４、１０６、１１２、１１３、１５１及び１５６〜１
６５以外のα＿２位置の所のアミノ酸は、ＩＦＮ−α＿
２の相応する位置に存在するアミノ酸と同じである〕の
ポリペプチド又はその Ｎ＿１＿〜＿１＿１及び／又はＣ＿１＿〜＿１＿１切端
類縁体及び所望によりＣ＿１＿〜＿１＿１切端されてい
てよいＩＦＮ−α＿２のＮ＿３＿〜＿１＿１切端類縁体
（但し、ＩＦＮ−α＿２のＮ＿３−切端類縁体はＣ＿７
＿〜＿１＿１も切端されている）を表現することのでき
る複製可能なプラスミド表現ベヒクル。 １６、複製可能なプラスミド表現ベヒクルを製造するた
め、 I 式 【アミノ酸配列があります】 〔式中Ｘ＾１、Ｘ＾２、Ｘ＾３、Ｘ＾４、Ｘ＾５、Ｘ＾
６、Ｘ＾７、Ｘ＾８、Ｘ＾９、Ｘ＾１＾０、Ｘ＾１＾１
、Ｘ＾１＾５＾５、Ｘ＾１＾５＾６、Ｘ＾１＾５＾７、
Ｘ＾１＾５＾８、Ｘ＾１＾５＾９、Ｘ＾１＾６＾０、Ｘ
＾１＾６＾１、Ｘ＾１＾６＾２、Ｘ＾１＾６＾３、Ｘ＾
１＾６＾４及びＸ＾１＾６＾５は各々、天然のα−アミ
ノ酸を表わし、Ｘ＾１＾２はＡｒｇ又はＡｌａを表わし
、Ｘ＾１＾３はＡｒｇ又はＡｌａを衣わし、Ｘ＾１＾４
はＴｈｒ又はＡｌａを表わし、Ｘ＾１＾５はＬｅｕ又は
Ａｌａを表わし、Ｘ＾１＾６はＭｅｔ、Ｌｅｕ又はＩｌ
ｅを表わし、Ｘ＾２＾１はＭｅを又はＬｅｕを表わし、
Ｘ＾２＾２はＳｅｒ、Ａｒｇ又はＧｌｙを表わし、Ｘ＾
２＾３はＡｒｇ又はＬｙｓを表わし、Ｘ＾２＾６はＬｅ
ｕ又はＰｒｏを表わし、Ｘ＾２＾７はＳｅｒ又はＰｈｅ
を表わし、Ｘ＾２＾８はＳｅｒ又はＡｌａを表わし、Ｘ
＾２＾９はＳｅｒ又はＣｙｓを表わし、Ｘ＾３＾０はＩ
ｌｅ又はＬｅｕを表わし、Ｘ＾３＾１はＭｅｔ又はＬｙ
ｓを表わし、Ｘ＾３＾２はＡｌａ、Ａｓｎ、Ａｓｐ又は
Ｇｌｕを表わし、Ｘ＾３＾４はＨｉｓ又はＰｒｏを表わ
し、Ｘ＾３＾７はＧｌｙ又はＡｌａを表わし、Ｘ＾３＾
８はＰｈｅ又はＬｅｕを表わし、Ｘ＾４＾３＾ａは単結
合又はＡｓｐを表わし、Ｘ＾４＾４はＧｌｙ又はＡｌａ
を表わし、Ｘ＾５＾０はＡｌａ又はＴｈｒを表わし、Ｘ
＾５＾１はＧｌｕ、Ｐｒｏ又はＧｌｕを表わし、Ｘ＾５
＾２はＡｌａ又はＴｈｒを表わし、Ｘ＾５＾４はＳｅｒ
又はＰｒｏを表わし、Ｘ＾５＾９はＬｅｕ又はＭｅｔを
表わし、Ｘ＾６＾１はＧｌｕ又はＡｌａを表わし、Ｘ＾
６＾３はＩｌｅ又はＴｈｒを表わし、Ｘ＾６＾４はＰｈ
ｅ又はＡｌａを表わし、Ｘ＾６＾７はＰｈｅ又はＡｌａ
を表わし、Ｘ＾６＾８はＴｈｒ又はＳｅｒを表わし、Ｘ
＾７＾０はＬｙｓ又はＧｌｕを表わし、Ｘ＾７＾７はＡ
ｓｐ又はＧｌｕを表わし、Ｘ＾７＾８はＧｌｕ又はＧｌ
ｎを表わし、Ｘ＾７＾９はＡｓｐ、Ｔｈｒ又はＳｅｒを
表わし、Ｘ＾８＾２はＡｓｐ又はＧｌｕを表わし、Ｘ＾
８＾５はＣｙｓ、Ｔｈｒ又はＳｅｒを表わし、Ｘ＾９＾
４はＡｓｐ又はＡｓｎを表わし、Ｘ＾９＾８はＣｙｓ又
はＬｅｕを表わし、Ｘ＾９＾９はＶａｌ又はＴｈｒを表
わし、Ｘ＾１＾０＾０はＭｅｔ、Ｉｌｅ又はＡｓｎを表
わし、Ｘ＾１＾０＾１はＧｌｎ、Ｔｈｒ又はＰｈｅを表
わし、Ｘ＾１＾０＾２はＧｌｕ、Ｇｌｙ、Ｓｅｒ又はＡ
ｌａを表わし、Ｘ＾１＾０＾３はＧｌｕ、Ｖａｌ又はＬ
ｙｓを表わし、Ｘ＾１＾０＾４はＡｒｇ、Ｇｌｙ、Ｔｈ
ｒ、Ｌｅｕ又はＡｌａを表わし、Ｘ＾１＾０＾５はＶａ
ｌ、Ａｓｐ、Ｍｅｔ又はＴｈｒを表わし、Ｘ＾１＾０＾
６はＧｌｙ、Ｔｈｒ、Ｇｌｕ、Ｌｅｕ又はＡｓｎを表わ
し、Ｘ＾１＾０＾７はＧｌｕ、Ａｓｎ又はＴｙｒを表わ
し、Ｘ＾１＾０＾８はＴｈｒ又はＶａｌを表わし、Ｘ＾
１＾０＾９はＰｒｏ又はＧｌｎを表わし、Ｘ＾１＾１＾
０はＬｅｕ又はＡｒｇを表わし、Ｘ＾１＾１＾１はＭｅ
ｔ、Ｌｙｓ又はＬｅｕを表わすか又は−Ｘ＾１＾０＾１
−Ｘ＾１＾０＾２−Ｘ＾１＾０＾３−Ｘ＾１＾０＾４−
Ｘ＾１＾０＾５−Ｘ＾１＾０＾６−Ｘ＾１＾０＾７−Ｘ
＾１＾０＾８−Ｘ＾１＾０＾９−Ｘ＾１＾１＾０−Ｘ＾
１＾１＾１−はＭｅｔ、Ｌｙｓ又はＬｅｕを表わし、−
Ｘ＾１＾１＾２はＡｓｎ、Ｌｙｓ又はＡｌａを表わし、
Ｘ＾１＾１＾３はＡｌａ、Ｇｌｕ又はＩｌｅを表わし、
Ｘ＾１＾１＾４はＡｓｐ又はＨｉｓを表わし、Ｘ＾１＾
１＾３はＡｌａ、Ｇｌｕ又はＩｌｅを表わし、Ｘ＾１＾
１＾４はＡｓｐ又はＨｉｓを表わし、Ｘ＾１＾１＾５は
Ｓｅｒ又はＰｈｅを表わし、Ｘ＾１＾２＾０はＬｙｓ又
はＡｒｇを表わし、Ｘ＾１＾２＾４はＡｒｇ又はＧｌｎ
を表わし、Ｘ＾１＾３＾１はＴｈｒ又はＬｙｓを表わし
、Ｘ＾１＾３＾７はＰｒｏ又はＡｌａを表わし、Ｘ＾１
＾３＾８はＣｙｓ又はＳｅｒを表わし、Ｘ＾１＾４＾８
はＭｅｔ又はＬｅｕを表わし、Ｘ＾１＾５＾１はＬｅｕ
又はＰｈｅを表わし、Ｘ＾１＾５＾３はＬｅｕ又はＰｈ
ｅを表わし、これらのアミノ酸は、ＩＦＮ−α＿２、Ｉ
ＦＮ−α＿１及びＩＦＮ−α I の相応する位置のアミ
ノ酸とは異なる＾１個のアミノ酸がα＿２の位置１２〜
１６、２１、２８、２９、３０、３２、３７、４４、６
１、６４、６７、９８〜１１５、１３７、１３８及び１
４８から選択した少なくとも１個所に存在するように選
択されており、かつ／又はα＿２位置１０１〜１１０か
ら選択された少なくとも１個所から１個のアミノ酸が欠
落しているように選択されているか 又はこれらアミノ酸は、ＩＦＮ−α＿１の相応する位置
のアミノ酸と同じ１個のアミノ酸がα＿２位置２７、３
１、５９、１５１、１６０及び１６３から選択した少な
くとも１個所に存在するように選択されていて位置１〜
１１、２７、３１、４３ａ、５９、１００、１０２〜１
０４、１０６、１１２、１１３、１５１及び１５６〜１
６５以外のα＿２位置の所のアミノ酸は、ＩＦＮ−α＿
２の相応する位置に存在するアミノ酸と同じである〕の
ポリペプチド又はその Ｎ＿１＿〜＿１＿１及び／又はＣ＿１＿〜＿１＿１切端
類縁体及び所望によりＣ＿１＿〜＿１＿１切端されてい
てよいＩＦＮ−α＿２のＮ＿３＿〜＿１＿１切端類縁体
（但し、ＩＦＮ−α＿２のＮ＿３−切端類縁体はＣ＿７
＿〜＿１＿１も切端されている）に関してコードする遺
伝子を、そのために適当な挿入部位でベクター内に挿入
することを特徴とする、複製可能なプラスミド表現ベヒ
クルの製法。 １７、複製可能なプラスミド表現ベヒクルを製造するた
め、 I 式： 【アミノ酸配列があります】 〔式中Ｘ＾１、Ｘ＾２、Ｘ＾３、Ｘ＾４、Ｘ＾５、Ｘ＾
６、Ｘ＾７、Ｘ＾８、Ｘ＾９、Ｘ＾１＾０、Ｘ＾１＾１
、Ｘ＾１＾５＾５、Ｘ＾１＾５＾６、Ｘ＾１＾５＾７、
Ｘ＾１＾５＾８、Ｘ＾１＾５＾９、Ｘ＾１＾６＾０、Ｘ
＾１＾６＾１、Ｘ＾１＾６＾２、Ｘ＾１＾６＾３、Ｘ＾
１＾６＾４及びＸ＾１＾６＾５は各々、天然のα−アミ
ノ酸を表わし、Ｘ＾１＾２はＡｒｇ又はＡｌａを表わし
、Ｘ＾１＾３はＡｒｇ又はＡｌａを表わし、Ｘ＾１＾４
はＴｈｒ又はＡｌａを表わし、Ｘ＾１＾５はＬｅｕ又は
Ａｌａを表わし、Ｘ＾１＾６はＭｅｔ、Ｌｅｕ又はＩｌ
ｅを表わし、Ｘ＾２＾１はＭｅを又はＬｅｕを表わし、
Ｘ＾２＾２はＳｅｒ、Ａｒｇ又はＧｌｙを表わし、Ｘ＾
２＾３はＡｒｇ又はＬｙｓを表わし、Ｘ＾２＾６はＬｅ
ｕ又はＰｒｏを表わし、Ｘ＾２＾７はＳｅｒ又はＰｈｅ
を表わし、Ｘ＾２＾８はＳｅｒ又はＡｌａを表わし、Ｘ
＾２＾９はＳｅｒ又はＣｙｓを表わし、Ｘ＾３＾０はＩ
ｌｅ又はＬｅｕを表わし、Ｘ＾３＾１はＭｅｔ又はＬｙ
ｓを表わし、Ｘ＾３＾２はＡｌａ、Ａｓｎ、Ａｓｐ又は
Ｇｌｕを表わし、Ｘ＾３＾４はＨｉｓ又はＰｒｏを表わ
し、Ｘ＾３＾７はＧｌｙ又はＡｌａを表わし、Ｘ＾３＾
８はＰｈｅ又はＬｅｕを表わし、Ｘ＾４＾３ａは単結合
又はＡｓｐを表わし、Ｘ＾４＾４はＧｌｙ又はＡｌａを
表わし、Ｘ＾５＾０はＡｌａ又はＴｈｒを表わし、Ｘ＾
５＾１はＧｌｕ、Ｐｒｏ又はＧｌｕを表わし、Ｘ＾５＾
２はＡｌａ又はＴｈｒを表わし、Ｘ＾５＾４はＳｅｒ又
はＰｒｏを表わし、Ｘ＾５＾９はＬｅｕ又はＭｅｔを表
わし、Ｘ＾６＾１はＧｌｕ又はＡｌａを表わし、Ｘ＾６
＾３はＩｌｅ又はＴｈｒを表わし、Ｘ＾６＾４はＰｈｅ
又はＡｌａを表わし、Ｘ＾６＾７はＰｈｅ又はＡｌａを
表わし、Ｘ＾６＾８はＴｈｒ又はＳｅｒを表わし、Ｘ＾
７＾０はＬｙｓ又はＧｌｕを表わし、Ｘ＾７＾７はＡｓ
ｐ又はＧｌｕを表わし、Ｘ＾７＾８はＧｌｕ又はＧｌｎ
を表わし、Ｘ＾７＾９はＡｓｐ、Ｔｈｒ又はＳｅｒを表
わし、Ｘ＾８＾２はＡｓｐ又はＧｌｕを表わし、Ｘ＾８
＾５はＣｙｓ、Ｔｈｒ又はＳｅｒを表わし、Ｘ＾９＾４
はＡｓｐ又はＡｓｎを表わし、Ｘ＾９＾８はＣｙｓ又は
Ｌｅｕを表わし、Ｘ＾９＾９はＶａｌ又はＴｈｒを表わ
し、Ｘ＾１＾０＾０はＭｅｔ、Ｉｌｅ又はＡｓｎを表わ
し、Ｘ＾１＾０ＩはＧｌｎ、Ｔｈｒ又はＰｈｅを表わし
、Ｘ＾１＾０＾２はＧｌｕ、Ｇｌｙ、Ｓｅｒ又はＡｌａ
を表わし、Ｘ＾１＾０＾３はＧｌｕ、Ｖａｌ又はＬｙｓ
を表わし、Ｘ＾１＾０＾４はＡｒｇ、Ｇｌｙ、Ｔｈｒ、
Ｌｅｕ又はＡｌａを表わし、Ｘ＾１＾０＾５はＶａｌ、
Ａｓｐ、Ｍｅｔ又はＴｈｒを表わし、Ｘ＾１＾０＾６は
Ｇｌｙ、Ｔｈｒ、Ｇｌｕ、Ｌｅｕ又はＡｓｎを表わし、
Ｘ＾１＾０＾７はＧｌｕ、Ａｓｎ又はＴｙｒを表わし、
Ｘ＾１＾０＾８はＴｈｒ又はＶａｌを表わし、Ｘ＾１＾
０＾９はＰｒｏ又はＧｌｎを表わし、Ｘ＾１＾１＾０は
Ｌｅｕ又はＡｒｇを表わし、Ｘ＾１＾１＾１はＭｅｔ、
Ｌｙｓ又はＬｅｕを表わすか又は−Ｘ＾１＾０＾４−Ｘ
＾１＾０＾２−Ｘ＾１＾０＾３−Ｘ＾１＾０＾４−Ｘ＾
１＾０＾５−Ｘ＾１＾０＾６−Ｘ＾１＾０＾７−Ｘ＾１
＾０＾８−Ｘ＾１＾０＾９−Ｘ＾１＾１＾０−Ｘ＾１＾
１＾１はＭｅｔ、Ｌｙｓ又はＬｅｕを表わし、−Ｘ＾１
＾１＾２はＡｓｎ、Ｌｙｓ又はＡｌａを表わし、Ｘ＾１
＾１＾３はＡｌａ、Ｇｌｕ又はＩｌｅを表わし、Ｘ＾１
＾１＾４はＡｓｐ又はＨｉｓを表わし、Ｘ＾１＾１＾３
はＡｌａ、Ｇｌｕ又はＩｌｅを表わし、Ｘ＾１＾１＾４
はＡｓｐ又はＨｉｓを表わし、Ｘ＾１＾１＾５はＳｅｒ
又はＰｈｅを表わし、Ｘ＾１＾２＾０はＬｙｓ又はＡｒ
ｇを表わし、Ｘ＾１＾２＾４はＡｒｇ又はＧｌｎを表わ
し、Ｘ＾１＾３＾１はＴｈｒ又はＬｙｓを表わし、Ｘ＾
１＾３＾７はＰｒｏ又はＡｌａを表わし、Ｘ＾１＾３＾
８はＣｙｓ又はＳｅｒを表わし、Ｘ＾１＾４＾８はＭｅ
ｔ又はＬｅｕを表わし、Ｘ＾１＾５＾１はＬｅｕ又はＰ
ｈｅを表わし、Ｘ＾１＾５＾３はＬｅｕ又はＰｈｅを表
わし、これらのアミノ酸は、ＩＦＮ−α＿２、ＩＦＮ−
α＿１及びＩＦＮ−α I の相応する位置のアミノ酸と
は異なる＾１個のアミノ酸がα＿２の位置１２〜１６、
２１、２８、２９、３０、３２、３７、４４、６１を６
４、６７、９８〜１１５、１３７、１３８及び１４８か
ら選択した少なくとも１個所に存在するように選択され
ているか又はα＿２位１０１〜１１０から選択された少
なくとも１個所から１個のアミノ酸が欠落しているよう
に選択されているか 又はこれらアミノ酸は、ＩＦＮ−α＿１の相応する位置
のアミノ酸と同じ１個のアミノ酸がα＿２位置２７、３
１、５９、１５１、１６０及び１６３から選択した少な
くとも１個所に存在するように選択されていて位置１〜
１１、２７、３１、４３ａ、５９、１００、１０２〜１
０４、１０６、１１２、１１３、１５１及び１６６〜１
６５以外のα＿２位置の所のアミノ酸は、ＩＦＮ−α＿
２の相応する位置に存在するアミノ酸と同じである〕の
ポリペプチド又はその Ｎ＿１＿〜＿１＿１及び／又はＣ＿１＿〜＿１＿１切端
類縁体及び所望によりＣ＿１＿〜＿１＿１切端されてい
てよいＩＦＮ−α＿２のＮ＿３＿〜＿１＿１切端類縁体
（但し、ＩＦＮ−α＿２のＮ＿３−切端類縁体はＣ＿７
＿〜＿１＿１も切端されている）の部分をコードするヌ
クレオチド配列を、プロモーター配列及び前記ポリペプ
チドのリマインダーに関してコードするヌクレオチド配
列よりなるベクター内に、適当な挿入部位で挿入し、こ
の際に前記ポリペプチドを形質転換微生物中で合成する
ことのできる複製可能なプラスミド表現ベヒクルを得る
ことを特徴とする、複製可能なプラスミド表現ベヒクル
の製法。 ＾１＾８、 I 式： 【アミノ酸配列があります】 〔式中Ｘ＾１、Ｘ＾２、Ｘ＾３、Ｘ＾４、Ｘ＾５、Ｘ＾
６、Ｘ＾７、Ｘ＾８、Ｘ＾９、Ｘ＾１＾０、Ｘ＾１＾１
＾０Ｘ＾１＾５＾５、Ｘ＾１＾５＾６、Ｘ＾１＾５＾７
、Ｘ＾１＾５＾８、Ｘ＾１＾５＾９、Ｘ＾１＾６＾０、
Ｘ＾１＾６＾１、Ｘ＾１＾６＾２、Ｘ＾１＾６＾３、Ｘ
＾１＾６＾４及びＸ＾１＾６＾５は各々、天然のα−ア
ミノ酸を表わし、Ｘ＾１＾２はＡｒｇ又はＡｌａを表わ
し、Ｘ＾１＾３はＡｒｇ又はＡｌａを表わし、Ｘ＾１＾
４はＴｈｒ又はＡｌａを表わし、Ｘ＾１＾５はＬｅｕ又
はＡｌａを表わし、Ｘ＾１＾６はＭｅｔ、Ｌｅｕ又はＩ
ｌｅを表わし、Ｘ＾２＾１はＭｅｔ又はＬｅｕを表わし
、Ｘ＾２＾２はＳｅｒ、Ａｒｇ又はＧｌｙを表わし、Ｘ
＾２＾３はＡｒｇ又はＬｙｓを表わし、Ｘ＾２＾６はＬ
ｅｕ又はＰｒｏを表わし、Ｘ＾２＾７はＳｅｒ又はＰｈ
ｅを表わし、Ｘ＾２＾８はＳｅｒ又はＡｌａを表わし、
Ｘ＾２＾９はＳｅｒ又はＣｙｓを表わし、Ｘ＾３＾０は
Ｉｌｅ又はＬｅｕを表わし、Ｘ＾３＾１はＭｅｔ又はＬ
ｙｓを表わし、Ｘ＾３＾２はＡｌａ、Ａｓｎ、Ａｓｐ又
はＧｌｕを表わし、Ｘ＾３＾４はＨｉｓ又はＰｒｏを表
わし、Ｘ＾３＾７はＧｌｙ又はＡｌａを表わし、Ｘ＾３
＾８はＰｈｅ又はＬｅｕを表わし、Ｘ＾４＾３ａは単結
合又はＡｓｐを表わし、Ｘ＾４＾４はＧｌｙ又はＡｌａ
を表わし、Ｘ＾５＾０はＡｌａ又はＴｈｒを表わし、Ｘ
＾５＾１はＧｌｕ、Ｐｒｏ又はＧｌｕを表わし、Ｘ＾５
＾２はＡｌａ又はＴｈｒを表わし、Ｘ＾５＾４はＳｅｒ
又はＰｒｏを表わし、Ｘ＾５＾９はＬｅｕ又はＭｅｔを
表わし、Ｘ＾６＾１はＧｌｕ又はＡｌａを表わし、Ｘ＾
６＾３はＩｌｅ又はＴｈｒを表わし、Ｘ＾６＾４はＰｈ
ｅ又はＡｌａを表わし、Ｘ＾６＾７はＰｈｅ又はＡｌａ
を表わし、Ｘ＾６＾８はＴｈｒ又はＳｅｒを表わし、Ｘ
＾７＾０はＬｙｓ又はＧｌｕを表わし、Ｘ＾７＾７はＡ
ｓｐ又はＧｌｕを表わし、Ｘ＾７＾８はＧｌｕ又はＧｌ
ｎを表わし、Ｘ＾７＾９はＡｓｐ、Ｔｈｒ又はＳｅｒを
表わし、Ｘ＾８＾２はＡｓｐ又はＧｌｕを表わし、Ｘ＾
８＾５はＣｙｓ、Ｔｈｒ又はＳｅｒを表わし、Ｘ＾９＾
４はＡｓｐ又はＡｓｎを表わし、Ｘ＾９＾８はＣｙｓ又
はＬｅｕを表わし、Ｘ＾９＾９はＶａｌ又はＴｈｒを表
わし、Ｘ＾１＾０＾０はＭｅｔ、Ｉｌｅ又はＡｓｎを表
わし、Ｘ＾１＾０＾１はＧｌｎ、Ｔｈｒ又はＰｈｅを表
わし、Ｘ＾１＾０＾２はＧｌｕ、Ｇｌｙ、Ｓｅｒ又はＡ
ｌａを表わし、Ｘ＾１＾０＾３はＧｌｕ、Ｖａｌ又はＬ
ｙｓを表わし、Ｘ＾１＾０＾４はＡｒｇ、Ｇｌｙ、Ｔｈ
ｒ、Ｌｅｕ又はＡｌａを表わし、Ｘ＾１＾０＾５はＶａ
ｌ、Ａｓｐ、Ｍｅｔ又はＴｈｒを表わし、Ｘ＾１＾０＾
６はＧｌｙ、Ｔｈｒ、Ｇｌｕ、Ｌｅｕ又はＡｓｎを表わ
し、Ｘ＾１＾０＾７はＧｌｕ、Ａｓｎ又はＴｙｒを表わ
し、Ｘ＾１＾０＾８はＴｈｒ又はＶａｌを表わし、Ｘ＾
１＾０＾９はＰｒｏ又はＧｌｎを表わし、Ｘ１＾１＾０
はＬｅｕ又はＡｒｇを表わし、Ｘ＾１＾１＾１はＭｅｔ
、Ｌｙｓ又はＬｅｕを表わすか又は−Ｘ＾１＾０＾１−
Ｘ＾１＾０＾２−Ｘ＾１＾０＾３−Ｘ＾１＾０＾４−Ｘ
＾１＾０＾５−Ｘ＾１＾０＾６−Ｘ＾１＾０＾７−Ｘ＾
１＾０＾８−Ｘ＾１＾０＾９−Ｘ＾１＾１＾０−Ｘ＾１
＾１＾１−はＭｅｔ、Ｌｙｓ又はＬｅｕを表わし、−Ｘ
＾１＾１＾２はＡｓｎ、Ｌｙｓ又はＡｌａを表わし、Ｘ
＾１＾１＾３はＡｌａ、Ｇｌｕ又はＩｌｅを表わし、Ｘ
＾１＾１＾４はＡｓｐ又はＨｉｓを表わし、Ｘ＾１＾１
＾３はＡｌａ、Ｇｌｕ又はＩｌｅを表わし、Ｘ＾１＾１
＾４はＡｓｐ又はＨｉｓを表わし、Ｘ＾１＾１＾５はＳ
ｅｒ又はＰｈｅを表わし、Ｘ＾１＾２＾０はＬｙｓ又は
Ａｒｇを表わし、Ｘ＾１＾２＾４はＡｒｇ又はＧｌｎを
表わし、Ｘ＾１＾３＾１はＴｈｒ又はＬｙｓを表わし、
Ｘ＾１＾３＾７はＰｒｏ又はＡｌａを表わし、Ｘ＾１＾
３＾８はＣｙｓ又はＳｅｒを表わし、Ｘ＾１＾４＾８は
Ｍｅｔ又はＬｅｕを表わし、Ｘ＾１＾５＾１はＬｅｕ又
はＰｈｅを表わし、Ｘ＾１＾５＾３はＬｅｕ又はＰｈｅ
を表わし、これらのアミノ酸は、ＩＦＮ−α＿２、ＩＦ
Ｎ−α＿１及びＩＦＮ−α I の相応する位置のアミノ
酸とは異なる＾１個のアミノ酸がα＿２の位置１２〜１
６、２１、２８、２９、３０、３２、３７、４４、６１
、６４、６７、９８〜１１５、１３７、１３８及び１４
８から選択した少なくとも１個所に存在するように選択
されているか又はα＿２位１０１〜１１０から選択され
た少なくとも１個所から１個のアミノ酸が欠落している
ように選択されているか 又はこれらアミノ酸は、ＩＦＮ−α＿１の相応する位置
のアミノ酸と同じ１個のアミノ酸がα＿２位置２７、３
１、５９、１５１、１６０及び１６３から選択した少な
くとも１個所に存在するように選択されていて位置１〜
１１、２７、３１、４３ａ、５９、１００、１０２〜１
０４、１０６、１１２、１１３、１５１及び１５６〜１
６５以外のα＿２位置の所のアミノ酸は、ＩＦＮ−α＿
２の相応する位置に存在するアミノ酸と同じである〕の
ポリペプチド又はその Ｎ＿１＿〜＿１＿１及び／又はＣ＿１＿〜＿１＿１切端
類縁体及び所望によりＣ＿１＿〜＿１＿１切端されてい
てよいＩＦＮ−α＿２のＮ＿３＿〜＿１＿１切端類縁体
（但し、ＩＦＮ−α＿２のＮ＿３−切端類縁体はＣ＿７
＿〜＿１＿１も切端されている）に関してエンコードす
るＤＮＡ配列。 ＾１＾９、プラスミドｐＳＴＰｌのＥｃｏＲ I −Ｓａ
ｌ I セグメントよりなり、 I 式： 【アミノ酸配列があります】 〔式中Ｘ＾１、Ｘ＾２、Ｘ＾３、Ｘ＾４、Ｘ＾５、Ｘ＾
６、Ｘ＾７、Ｘ＾８、Ｘ＾９、Ｘ＾１＾０、Ｘ＾１＾１
、Ｘ＾１＾５＾５、Ｘ＾１＾５＾６、Ｘ＾１＾５＾７、
Ｘ＾１＾５＾８、Ｘ＾１＾５＾９、Ｘ＾１＾６＾０、Ｘ
＾１＾６＾１、Ｘ＾１＾６＾２、Ｘ＾１＾６＾３、Ｘ＾
１＾６＾４及びＸ＾１＾６＾５は各々、天然のα−アミ
ノ酸を表わし、Ｘ＾１＾２はＡｒｇ又はＡｌａを表わし
、Ｘ＾１＾３はＡｒｇ又はＡｌａを表わし、Ｘ＾１＾４
はＴｈｒ又はＡｌａを表わし、Ｘ＾１＾５はＬｅｕ又は
Ａｌａを表わし、Ｘ＾１＾６はＭｅｔ、Ｌｅｕ又はＩｌ
ｅを表わし、Ｘ＾２＾１はＭｅを又はＬｅｕを表わし、
Ｘ＾２＾２はＳｅｒ、Ａｒｇ又はＧｌｙを表わし、Ｘ＾
２＾３はＡｒｇ又はＬｙｓを表わし、Ｘ＾２＾６はＬｅ
ｕ又はＰｒｏを表わし、Ｘ＾２＾７はＳｅｒ又はＰｈｅ
を表わし、Ｘ＾２＾８はＳｅｒ又はＡｌａを表わし、Ｘ
＾２＾９はＳｅｒ又はＣｙｓを表わし、Ｘ＾３＾０はＩ
ｌｅ又はＬｅｕを表わし、Ｘ＾３＾１はＭｅｔ又はＬｙ
ｓを表わし、Ｘ＾３＾２はＡｌａ、Ａｓｎ、Ａｓｐ又は
Ｇｌｕを表わし、Ｘ＾３＾４はＨｉｓ又はＰｒｏを表わ
し、Ｘ＾３＾７はＧｌｙ又はＡｌａを表わし、Ｘ＾３＾
８はＰｈｅ又はＬｅｕを表わし、Ｘ＾４＾３ａは単結合
又はＡｓｐを表わし、Ｘ＾４＾４はＧｌｙ又はＡｌａを
表わし、Ｘ＾５＾０はＡｌａ又はＴｈｒを表わし、Ｘ＾
５＾１はＧｌｕ、Ｐｒｏ又はＧｌｕを表わし、Ｘ＾５＾
２はＡｌａ又はＴｈｒを表わし、Ｘ＾５＾４はＳｅｒ又
はＰｒｏを表わし、Ｘ＾５＾９はＬｅｕ又はＭｅｔを表
わし、Ｘ＾６＾１はＧｌｕ又はＡｌａを表わし、Ｘ＾６
＾３はＩｌｅ又はＴｈｒを表わし、Ｘ＾６＾４はＰｈｅ
又はＡｌａを表わし、Ｘ＾６＾７はＰｈｅ又はＡｌａを
表わし、Ｘ＾６＾８はＴｈｒ又はＳｅｒを表わし、Ｘ＾
７＾０はＬｙｓ又はＧｌｕを表わし、Ｘ＾７＾７はＡｓ
ｐ又はＧｌｕを表わし、Ｘ＾７＾８はＧｌｕ又はＧｌｎ
を表わし、Ｘ＾７＾９はＡｓｐ、Ｔｈｒ又はＳｅｒを表
わし、Ｘ＾８＾２はＡｓｐ又はＧｌｕを表わし、Ｘ＾８
＾５はＣｙｓ、Ｔｈｒ又はＳｅｒを表わし、Ｘ＾９＾４
はＡｓｐ又はＡｓｎを表わし、Ｘ＾９＾８はＣｙｓ又は
Ｌｅｕを表わし、Ｘ＾９＾９はＶａｌ又はＴｈｒを表わ
し、Ｘ＾１＾０＾０はＭｅｔ、Ｉｌｅ又はＡｓｎを表わ
し、Ｘ＾１＾０＾１はＧｌｎ、Ｔｈｒ又はＰｈｅを表わ
し、Ｘ＾１＾０＾２はＧｌｕ、Ｇｌｙ、Ｓｅｒ又はＡｌ
ａを表わし、Ｘ＾１＾０＾３はＧｌｕ、Ｖａｌ又はＬｙ
ｓを表わし、Ｘ＾１＾０＾４はＡｒｇ、Ｇｌｙ、Ｔｈｒ
、Ｌｅｕ又はＡｌａを表わし、Ｘ＾１＾０＾５はｖａｌ
、Ａｓｐ、Ｍｅｔ又はＴｈｒを表わし、Ｘ＾１＾０＾６
はＧｌｙ、Ｔｈｒ、Ｇｌｕ、Ｌｅｕ又はＡｓｎを表わし
、Ｘ＾１＾０＾７はＧｌｕ、Ａｓｎ又はＴｙｒを表わし
、Ｘ＾１＾０＾８はＴｈｒ又はＶａｌを表わし、Ｘ＾１
＾０＾９はＰｒｏ又はＧｌｎを表わし、Ｘ＾１＾１＾０
はＬｅｕ又はＡｒｇを表わし、Ｘ＾１＾１＾１はＭｅｔ
、Ｌｙｓ又はＬｅｕを表わすか又は−Ｘ＾１＾０＾１−
Ｘ＾１＾０＾２−Ｘ＾１＾０＾３−Ｘ＾１＾０＾４−Ｘ
＾１＾０＾５−Ｘ＾１＾０＾６−Ｘ＾１＾０＾７−Ｘ＾
１＾０＾８−Ｘ＾１＾０＾９−Ｘ＾１＾１＾０−Ｘ＾１
＾１＾１−はＭｅｔ、Ｌｙｓ又はＬｅｕを表わし、−Ｘ
＾１＾１＾２はＡｓｎ、Ｌｙｓ又はＡｌａを表わし、Ｘ
＾１＾１＾３はＡｌａ、Ｇｌｕ又はＩｌｅを表わし、Ｘ
＾１＾１＾４はＡｓｐ又はＨｉｓを表わし、Ｘ＾１＾１
＾３はＡｌａ、Ｇｌｕ又はＩｌｅを表わし、Ｘ＾１＾１
＾４はＡｓｐ又はＨｉｓを表わし、Ｘ＾１＾１＾５はＳ
ｅｒ又はＰｈｅを表わし、Ｘ＾１＾２＾０はＬｙｓ又は
Ａｒｇを表わし、Ｘ＾１＾２＾４はＡｒｇ又はＧｌｎを
表わし、Ｘ＾１＾３＾１はＴｈｒ又はＬｙｓを表わし、
Ｘ＾１＾３＾７はＰｒｏ又はＡｌａを表わし、Ｘ＾１＾
３＾８はＣｙｓ又はＳｅｒを表わし、Ｘ＾１＾４＾８は
Ｍｅｔ又はＬｅｕを表わし、Ｘ＾１＾５＾１はＬｅｕ又
はＰｈｅを表わし、Ｘ＾１＾５＾３はＬｅｕ又はＰｈｅ
を表わし、これらのアミノ酸は、ＩＦＮ−α＿２、ＩＦ
Ｎ−α＿１及びＩＦＮ−α I の相応する位置のアミノ
酸とは異なる＾１個のアミノ酸がα＿２の位置１２〜１
６、２１、２８、２９、３０、３２、３７、４４、６１
、６４、６７、９８〜１１５、１３７、１３８及び１４
８から選択した少なくとも１個所に存在するように選択
されており、かつ／又はα＿２位１０１〜１１０から選
択された少なくとも１個所から１個のアミノ酸が欠落し
ているように選択されているか 又はこれらアミノ酸は、ＩＦＮ−α＿１の相応する位置
のアミノ酸と同じ１個のアミノ酸がα＿２位置２７、３
１、５９、１５１、１６０及び１６３から選択した少な
くとも１個所に存在するように選択されていて位置１〜
１１、２７、３１、４３ａ、５９、１００、１０２〜１
０４、１０６、１１２、１１３、１５１及び１５６〜１
６５以外のα＿２位置の所のアミノ酸は、ＩＦＮ−α＿
２の相応する位置に存在するアミノ酸と同じである〕の
ポリペプチド又はその Ｎ＿１＿〜＿１＿１及び／又はＣ＿１＿〜＿１＿１切端
類縁体及び所望によりＣ＿１＿〜＿１＿１切端されてい
てよいＩＦＮ−α＿２のＮ＿３＿〜＿１＿１切端類縁体
（但し、ＩＦＮ−α＿２のＮ＿３−切端類縁体はＣ＿７
＿〜＿１＿１も切端されている）に関してエンコードす
るＤＮＡ配列が前記セグメントのＣｌａ I 及びＳａｌ
I 制限部位の間に存在する、ポータブル表現ユニット
。 ＾２＾０、有効成分として、 I 式： 【アミノ酸配列があります】 〔式中Ｘ＾１、Ｘ＾２、Ｘ＾３、Ｘ＾４、Ｘ＾５、Ｘ＾
６、Ｘ＾７、Ｘ＾８、Ｘ＾９、Ｘ＾１＾０、Ｘ＾１＾１
、Ｘ＾１＾５＾５、Ｘ＾１＾５＾６、Ｘ＾１＾５＾７、
Ｘ＾１＾５＾８、Ｘ＾１＾５＾９、Ｘ＾１＾６＾０、Ｘ
＾１＾６＾１、Ｘ＾１＾６＾２、Ｘ＾１＾６＾３、Ｘ＾
１＾６＾４及びＸ＾１＾６＾５は各々、天然のα−アミ
ノ酸を表わし、Ｘ＾１＾２はＡｒｇ又はＡｌａを表わし
、Ｘ＾１＾３はＡｒｇ又はＡｌａを表わし、Ｘ＾１＾４
はＴｈｒ又はＡｌａを表わし、Ｘ＾１＾５はＬｅｕ又は
Ａｌａを表わし、Ｘ＾１＾６はＭｅｔＮＬｅｕ又はＩｌ
ｅを表わし、Ｘ＾２＾１はＭｅｔ又はＬｅｕを表わし、
Ｘ＾２＾２はＳｅｒ、Ａｒｇ又はＧｌｙを表わし、Ｘ＾
２＾３はＡｒｇ又はＬｙｓを表わし、Ｘ＾２＾６はＬｅ
ｕ又はＰｒｏを表わし、Ｘ＾２＾７はＳｅｒ又はＰｈｅ
を表わし、Ｘ＾２＾８はＳｅｒ又はＡｌａを表わし、Ｘ
＾２＾９はＳｅｒ又はＣｙｓを表わし、Ｘ＾３＾０はＩ
ｌｅ又はＬｅｕを表わし、Ｘ＾３＾１はＭｅｔ又はＬｙ
ｓを表わし、Ｘ＾３＾２はＡｌａ、Ａｓｎ、Ａｓｐ又は
Ｇｌｕを表わし、Ｘ＾３＾４はＨｉｓ又はＰｒｏを表わ
し、Ｘ＾３＾７はＧｌｙ又はＡｌａを表わし、Ｘ＾３＾
８はＰｈｅ又はＬｅｕを表わし、Ｘ＾４＾３＾ａは単結
合又はＡｓｐを表わし、Ｘ＾４＾４はＧｌｙ又はＡｌａ
を表わし、Ｘ＾５＾０はＡｌａ又はＴｈｒを表わし、Ｘ
＾５＾１はＧｌｕ、Ｐｒｏ又はＧｌｕを表わし、Ｘ＾５
＾２はＡｌａ又はＴｈｒを表わし、Ｘ＾５＾４はＳｅｒ
又はＰｒｏを表わし、Ｘ＾５＾９はＬｅｕ又はＭｅｔを
表わし、Ｘ＾６＾１はＧｌｕ又はＡｌａを表わし、Ｘ＾
６＾３はＩｌｅ又はＴｈｒを表わし、Ｘ＾６＾４はＰｈ
ｅ又はＡｌａを表わし、Ｘ＾６＾７はＰｈｅ又はＡｌａ
を表わし、Ｘ＾６＾８はＴｈｒ又はＳｅｒを表わし、Ｘ
＾７＾０はＬｙｓ又はＧｌｕを表わし、Ｘ＾７＾７はＡ
ｓｐ又はＧｌｕを表わし、Ｘ＾７＾８はＧｌｕ又はＧｌ
ｎを表わし、Ｘ＾７＾９はＡｓｐ、Ｔｈｒ又はＳｅｒを
表わし、Ｘ＾８＾２はＡｓｐ又はＧｌｕを表わし、Ｘ＾
８＾５はＣｙｓ、Ｔｈｒ又はＳｅｒを表わし、Ｘ＾９＾
４はＡＳｐ又はＡｓｎを表わし、Ｘ＾９＾８はＣｙｓ又
はＬｅｕを表わし、Ｘ＾９＾９はＶａｌ又はＴｈｒを表
わし、Ｘ＾１＾０＾０はＭｅｔ、Ｉｌｅ又はＡｓｎを表
わし、Ｘ＾１＾０＾１はＧｌｎ、Ｔｈｒ又はＰｈｅを表
わし、Ｘ＾１＾０＾２はＧｌｕ、Ｇｌｙ、Ｓｅｒ又はＡ
ｌａを表わし、Ｘ＾１＾０＾３はＧｌｕ、Ｖａｌ又はＬ
ｙｓを表わし、Ｘ＾１＾０＾４はＡｒｇ、Ｇｌｙ、Ｔｈ
ｒ、Ｌｅｕ又はＡｌａを表わし、Ｘ＾１＾０＾５はＶａ
ｌ、Ａｓｐ、Ｍｅｔ又はＴｈｒを表わし、Ｘ＾１＾０＾
６はＧｌｙ、Ｔｈｒ 、Ｇｌｕ、Ｌｅｕ又はＡｓｎを表
わし、Ｘ＾１＾０＾７はＧｌｕ、Ａｓｎ又はＴｙｒを表
わし、Ｘ＾１＾０＾８はＴｈｒ又はＶａｌを表わし、Ｘ
＾１＾０＾９はＰｒｏ又はＧｌｎを表わし、Ｘ＾１＾１
＾０はＬｅｕ又はＡｒｇを表わし、Ｘ＾１＾１＾１はＭ
ｅｔ、Ｌｙｓ又はＬｅｕを表わすか又は−Ｘ＾１＾０＾
１−Ｘ＾１＾０＾２−Ｘ＾１＾０＾３−Ｘ＾１＾０＾４
−Ｘ＾１＾０＾５−Ｘ＾１＾０＾６−Ｘ＾１＾０＾７−
Ｘ＾１＾０＾８−Ｘ＾１＾０＾９−Ｘ＾１＾１＾０−Ｘ
＾１＾１＾１−はＭｅｔ、Ｌｙｓ又はＬｅｕを表わし、
−Ｘ＾１＾１＾２はＡｓｎ、Ｌｙｓ又はＡｌａを表わし
、Ｘ＾１＾１＾３はＡｌａ、Ｇｌｕ又はＩｌｅを表わし
、Ｘ＾１＾１＾４はＡｓｐ又はＨｉｓを表わし、Ｘ＾１
＾１＾３はＡｌａ、Ｇｌｕ又はＩｌｅを表わし、Ｘ＾１
＾１＾４はＡｓｐ又はＨｉｓを表わし、Ｘ＾１＾１＾５
はＳｅｒ又はＰｈｅを表わし、Ｘ＾１＾２＾０はＬｙｓ
又はＡｒｇを表わし、Ｘ＾１＾２＾４はＡｒｇ又はＧｌ
ｎを表わし、Ｘ＾１＾３＾１はＴｈｒ又はＬｙｓを表わ
し、Ｘ＾１＾３＾７はＰｒｏ又はＡｌａを表わし、Ｘ＾
１＾３＾８はＣｙｓ又はＳｅｒを表わし、Ｘ＾１＾４＾
８はＭｅｔ又はＬｅｕを表わし、Ｘ＾１＾５＾１はＬｅ
ｕ又はＰｈｅを表わし、Ｘ＾１＾５＾３はＬｅｕ又はＰ
ｈｅを表わし、これらのアミノ酸は、ＩＦＮ−α＿２、
ＩＦＮ−α、及びＩＦＮ−α I の相応する位置のアミ
ノ酸とは異なる＾１個のアミノ酸がα＿２の位置１２〜
１６、２１、２８、２９、３０、３２、３７、４４、６
１、６４、６７、９８〜１１５、１３７、１３８及び１
４８から選択した少なくとも１個所に存在するように選
択されているか又はα＿２位１０１〜１１０から選択さ
れた少なくとも１個所から１個のアミノ酸が欠落してい
るように選択されているか 又はこれらアミノ酸は、ＩＦＮ−α＿１の相応する位置
のアミノ酸と同じ１個のアミノ酸がα＿２位置２７、３
１、５９、１５１、１６０及び１６３から選択した少な
くとも１個所に存在するように選択されていて位置１〜
１１、２７、３１、４３ａ、５９、１００、１０２〜Ｉ
０４、１０６、１１２、１１３、１５１及び１５６〜１
６５以外のα＿２位置の所のアミノ酸は、ＩＦＮ−α＿
２の相応する位置に存在するアミノ酸と同じである〕の
ポリペプチド又はその Ｎ＿１＿〜＿１＿１及び／又はＣ＿１＿〜＿１＿１切端
類縁体及び所望によりＣ＿１＿〜＿１＿１切端されてい
てよいＩＦＮ−α＿２のＮ＿３＿〜＿１＿１切端類縁体
（但し、ＩＦＮ−α＿２のＮ＿３−切端類縁体はＣ＾７
〜＾１＾１も切端されている）の少なくとも１種を薬剤
学的に認容性の担体又は佐薬と組合せて含有することを
特徴とする抗ウイルス剤。
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| GB8502605 | 1985-02-01 | ||
| GB858502605A GB8502605D0 (en) | 1985-02-01 | 1985-02-01 | Polypeptides |
| US748558 | 1985-06-25 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS61275300A true JPS61275300A (ja) | 1986-12-05 |
Family
ID=10573797
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP61018264A Pending JPS61275300A (ja) | 1985-02-01 | 1986-01-31 | ポリペプチド、その製法、形質転換微生物、その製法、複製可能なプラスミド表現ベヒクル、その製法、ｄｎａ配列、ポ−タブル表現ユニツト、ポリペプチド含有抗ウイルス剤 |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS61275300A (ja) |
| GB (1) | GB8502605D0 (ja) |
-
1985
- 1985-02-01 GB GB858502605A patent/GB8502605D0/en active Pending
-
1986
- 1986-01-31 JP JP61018264A patent/JPS61275300A/ja active Pending
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| GB8502605D0 (en) | 1985-03-06 |
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