JPS61271461A - 再使用可能な免疫吸着体 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 この発明は免疫学的分析方法に用いる再使用可能な免疫
吸着体に関するものである。

〔従来の技術〕

再使用可能な免疫吸着体を用いる免疫学的分析方法とし
ては、再使用可能な免疫吸着体を用いる抗体イムノグロ
ブリンの酵素免疫測定方法がある（特開昭１５７−１０
０３４９　）。これは、Ｓ−Ｓ結合またはＳＨ基を有す
る不溶性担体およびＳＨ基またはＳ−８結合を付与した
抗イムノグロブリン抗体を使用して、Ｓ−８結合とＳＨ
基の交換反応を利用し不溶性担体を再使用する方法であ
る。

この方法は、不溶性担体にＳＨ基またはＳ−８結合を直
接導入しており、ＳＨ基またはＳ−８結合の数を多くす
ると反応感度をあげることができる。

〔発明が解決しようとする問題点〕

しかし、この方法は不溶性担体に感作するＳＨ基または
Ｓ−８結合の数を多くすると又応感度をあげることがで
きるが、今度は立体障害が起き、かえって反応感度に悪
い影響を与えることになり、使用に際して限界があった
。

〔問題点を解決するための手段〕

本発明はこのような立体障害を防止するために、。

ＳＨ基またはＳ−８結合を間接的に導入した不溶性担体
を使用する。すなわち、本発明では一端を不溶性担体に
固定化し他端にＳＨ基またはＳ−８結合を有する高分子
化合物を使用した再使用可能な免疫吸着体を提供する。

この免疫吸着体は一般に 不溶性担体＋ｘ工〜ｘｎ−８−８（又は’ｆｌ　））ｐ
で表される。Ｘ工〜・ｘｏは高分子化合物であり、又は
例えば同−又は異なる炭化水素、アミノ酸、あるいはブ
ドウ糖、蔗糖などの糖類であることができ、高分子化合
物としては、ポリアルキル化合物、ポリビニル化合物、
ポリフェニル化合物、ポリペプチド、どリサツカライド
などが好ましい。ｎおよびｐは隣合った化合物の末端Ｓ
が互いにくっつかない程度の距離を保たせるに足る正の
整数を表す。高分子化合物の分子量は５００〜１０，０
０　ｏ　。

好ましくは４００〜２，０００である。分子量が小さす
ぎると立体障害が起きやすく、また分子量が大きすぎる
と取扱いに不便であるので上記範囲で使用することが好
ましい。

本発明では、このように抗体を直接担体に固定化ぜずに
、−Ｘ１〜ｘｎ−で表される高分子化合物を介して担体
に固定化するので立体障害が起き難く、従って測定感度
を高めることができる。

また、本発明はホスト−ゲスト結合を利用した再使用可
能な免疫吸着体を提供する。

ホストとしては、金属を選択的に取り込むことができる
化合物、例えばパリノマイシンのようなりラウンエーテ
ルを固定化した不溶性担体を用意する。ゲストとして金
属イオン、例えばに＋を用い、これに被検物質に特異性
を示す抗体を固定化１したものを用意する。ホスト−ゲ
スト結合により得られた不溶性担体−ホスト−ゲスト−
抗体を免疫吸着体として使用する。ホスト−ゲスト結合
の化合物を利用すると、ＳＨ基またはＳ−８結合を直接
付与した不溶性担体と比べて、立体障害を防止すること
ができる。

このホスト−ゲスト結合を利用した免疫吸着体を再使用
するためには、クラウンエーテル若しくはキレート剤を
加えて競合反応させ、ゲスト抗体、、。

を分離するだけでよい。

以下、本発明を実施例につき説明する。

〔実施例〕

本発明の免疫吸着体を用いＳ−８結合を利用して抗体を
担体に感作させる方法を説明する。

不溶性担体−ｘ、〜Ｘｎ−８Ｈ（前記式中ｐ＝１　。

Ｘ０〜ｘｎは鎖状飽和炭化水素である）で表される免疫
吸着体にＳＨ−抗体（又は５−８−抗体）と酸化剤を加
え 不溶性担体−Ｘ０〜ｘｎ−８−８−抗体を得る。すなわ
ち、不溶性担体をＯで表すと、次式が得られる。

また、不溶性担体−Ｘ□〜Ｉｎ−３−Ｓ　（ｐ＝１　。

Ｘ工〜ｘｎは前記と同じ）に５Ｔ（−抗体を加えて、Ｓ
−８結合とＳＨ基の交換反応を利用して不溶性担体−Ｘ
工〜孔−５−ｓ−抗体 を得る。すなわち ０−Ｘ、　〜Ｘｎ−３−８　＋Ｓ　’Ｅｌ−＜　→Ｏ−
Ｘ、　〜Ｘ、−８−３−Ｃ第１図は、不溶性担体子Ｘ工
〜Ｘｎ−Ｓ　Ｈ）、で代表される再使用可能な免疫吸着
体を利用した酵素分析法を示すものであり、（Ａ）は競
合法、（Ｂ）はサンドインチ法を示す。

競合法は、上述のようにして抗体を免疫吸着体に感作さ
せて得られた不溶性担体子ｘ１−ｊｘｎ−８−８−抗体
）、を洗浄し、これに被検物質とこの物質に酵素標識し
た標識試薬を加える。抗原抗体反応の結果生じる遊離し
た物質をＢ−Ｆ分離して除去した後、標識試薬中の標識
酵素と反応する発色試薬を加えて反応させた後、その反
応液を比色測定して標識酵素の酵素活性を求めて被検物
質を定量する。

サンドインチ法は、競合法と同様に不溶性担体子ｘ工〜
ｘｎ−ｓ　−ｓ−抗体）、を洗浄し、これに被検物質を
加える。抗原抗体反応の結果生じる遊離した物質をＢ−
Ｆ分離して除去した後、被検物質と抗原抗体反応を起す
物質を酵素で標識した標識試薬を作用させて抗原抗体反
応を行なわせ、再びＢ−Ｆ分離する。次いで標識試薬中
の酵素標識と反応する発色試薬を加えて反応させた後、
その反応液を比色測定して上記と同様に被検物質を定量
する。

この場合、交換反応を用いる末端がＳ−８である免疫吸
着体よりも、酸化剤を用いる末端がＳＨである免疫吸着
体を使用する方が、秀れた結果が得られる。

抗体を分離して免疫吸着体を再使用可能なものにするに
は、このようにして得られたＳ−８結合を切断する。こ
のためには例えば、 不溶性担体−Ｘ□〜Ｘｎ−Ｓ　−Ｓ−抗体に還元剤、例
えばジオスレイトールを加えてＳ−８結合を切断し、次
いで不溶性担体−Ｘ工〜Ｘｎ−Ｓ　ＨとＳＨ−抗体とを
分離する。すなわち ０−ｘ０〜ｘｎ−８−８べ＋ジオスレイトール→○−Ｘ
、　〜Ｘｎ−８Ｈ＋ＳＨべ 〔発明の効果〕 この発明の免疫吸着体は、Ｓｔ（基またはＳ−８結合を
間接的に導入した不溶性担体を使用したので、立体障害
を防止することができると共に、担体を再使用すること
ができる。従って免疫洞定の精度をあげると共に経済性
を高めることができる。

【図面の簡単な説明】

第１図は本発明実施例による酵素分析法を示す図であり
、Ａ、は競合法、Ｂはサンドイツチ法を示す。 第１図 （Ａ） ■ 室 玉 ＞ｙ、ｒ−ｒｎ−ｓ−ｓ　（）−ｘ＋−ｘｓ−ｓ−ｓ　
４−＠　十ｌｉｔ　ｆ！　Ｒ’ＩＮ　呻ｒｔ　色Ｊｌ　
ｉ手続補正書 昭和６０年　７月１１　日 １、＄件の表示 昭和６０年　特許　項第１１３０５７号Ｚ発明の名称 再使用可能な免疫吸着体 ３、補正をする者 事件との関係　特許出願人 （０３７）　　オリンパス光学工業株式会社電　話　（
５８１）　２２４１　番（代表）５゜ ６、補？）対象　　明細器の「発明の詳細な説明」の欄
１、明細器第８頁第６行のｒ５ｏｏＪをｒ４ｏｏＪに訂
正する。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. １、化合物の一端を不溶性担体に固定化し他端にＳＨ基
   またはＳ−Ｓ結合を有する高分子化合物を使用した再使
   用可能な免疫吸着体。