JPS61257195A - アリ−ルグリシジルエ−テル及び３−置換１−アルキルアミノ−２−プロパノ−ルの製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は、式 ％式％（１） の立体特異的な形の医薬的に活性な化合物又はその酸付
加塩のような医薬的に許容される塩、及び／又は式 の立体特異的な形の化合物（ここでＲ，は、場合により
ヘテロ環系に含まれるフェニル又はナフチル基を包含す
る置換又は非置換アリール基であり、又は炭素原子の他
に窒素、硫黄及び酸素から選ばれた一以上の原子を含む
ヘテロ芳香族５又は６員環であり、但しこの環は置換さ
れていてもよく、Ｒ，は２〜６個の炭素原子のアルキル
基であり、但しこのアルキル基は置換されていてもよい
）を作る方法において、式 ％式％（［） の化合物を少くとも８０重量％がＳ立体配置を持つ化合
物（■）へと立体選択的にエポキシ化する能力を持つ微
生物の作用に化合物（Ｉ［［）を付すこと、化合物（Ｉ
Ｉ）を少くとも部分的に分離すること、及び／又は化合
物（ＩＩ）を置換又は非置換Ｃ２〜Ｃｈアルキルアミン
基と反応させること及び化合物（Ｉ）を少くとも部分的
に分離すること及び／又は化合物（Ｉ）をその医薬的に
許容される塩へと転化することを含む方法に関する。

〔従来の技術〕

多くの生物活性化合物が立体異性体の混合物として存在
することが一般に知られている。しばしばこれら混合物
は、そのままで農業及び医薬用途に用いられる。その大
きな理由は、分離コストが活性増加の潜在的利点をなお
越えることである。

通常、必要とされる生物活性は一つの立体異性体にあり
、混合物の能力は良くても半分に低減される。しかし、
−又は二辺上の立体異性体が、望む治療効果を持たずし
かし毒性を含む他の望ましくない生理的作用を持ちうる
不純物と見られるところの混合物を投与することの意味
に、近年の薬学者はだんだん気付くようになっている。

生物活性と単一の立体異性体との関係を例示するために
、いくつかの例が挙げられる。

医薬分野において、β−アドレナリン遮断剤の多くは、
活性が一つの立体異性体にあるけれど、混合物として売
られている。一つの例として、ラベタロールとして知ら
れる薬は、四つの異性体の混合物からの二つの異性体の
ベアに帰されることが判っている一緒にされたα−アド
レナリ遮断及びβ−アドレナリン遮断作用を持つ。Ｎ、
トダらは、Ｊ、　Ｐｈａｒｍａｃｏｌ、　Ｒｘｐ、　Ｔ
ｈｅｒ、　２０７　　（１９７８）３１１で、（＝）−
メトプロロールがイソプロテレノール（β−アドレルセ
プター刺激物）に対するラビット房室及び気管筋肉の応
答を低下させるにおいて（＋）−メトプロロールより２
７０〜３８０倍強いことを報告した。

単一の立体異性体β−遮断剤への現在の経路は一般に、
化学的分割又は立体異性活性前駆体からのかなり長たら
しい化学的合成を含み、これはたとえば米国特許第４．
４０８，０６３号明細書及びジャーナル　オブ　オーガ
ニック　ケミトスリー（Ｊ、Ｏｒｇ。

Ｃｈｅｓ＋）４１　　（１９７６）３１２１にり、　Ｍ
、ワインストック（Ｗｅｉｎｓｔｏｋ）らにより記載さ
れている。

従って、メトプロロールの基エナンチオマー（光学活性
異性体）を同様に作るこれら記載されたプロセスは、産
業的適用において経済的に有利でない。従って、本発明
の目的は、経済的に魅力ある方法で工業的規模で実施し
うるそのような立体異性体の製造のための効果的方法を
提供することである。

気／固又は二液相バイオリアクターにおいて短鎖アルケ
ン（Ｃ３〜Ｃ４）をその対応するエポキシアルカンに立
体特異的に転化する微生物の能力が、Ｊ、ｌ−ランペス
（Ｔｒａａｐｅｓ　）ら（バイオテクノロジーについて
の第三回ヨーロッパ会ｉ！１（３ｒｄＥｕｒｏｐｅａｎ
　Ｃｏｎｇｒｅｓｓ　ｏｎ　Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇ
ｙ）　％ミュンヘン、９月１０〜１４日、１９８４年）
により示されている。エポキシアルカンの微生物的製造
の別の例は、米国特許第４．１０６．９８６号明細書に
開示され、それは直鎖１−アルケン（Ｃ＋〜Ｃ２゜）の
１．２−エポキシアルカンへの転化を記載する。

ヨーロッパ特許出願第００９９６０９号明細書には、プ
ロペン及び１−オクテンをそれらの対応するエポキシア
ルカンへ転化する例が示されている。

しかし、置換アルケンたとえばエーテル化合物（ＩＩＩ
）の転化は、直鎖又はあるときは分枝のアルケンにのみ
適用できるこれら公知法からは決して推論されない。

〔発明の内容〕

幅広い研究及び実験の結果、本発明者は驚ろくべきこと
に、化合物（ＩＩＩ）から出発してとくに化合物（、Ｉ
　）の基エナンチオマー及び化合物（ＩＩ）の基エナン
チオマーを作る改善された合成法であって、化合物（Ｉ
ＩＩ）のエポキシ化の活性を持つバクテリアを用いて、
少くとも８０重量％の旦立体配置を示す化合物（ｎ）を
作り、その後化合物（ｎ）を少くとも部分的に分離し、
及び／又は該化合物（ＩＩ）をアルキルアミンと反応さ
せて化合物（１）を作る合成法を見い出した。

より詳しくは本発明は、式（１）の立体特異的な形の医
薬的に活性な化合物又はその酸付加塩のような医薬的に
許容される塩、及び／又は式（１１）の立体特異的な形
の化合物（ここでＲ３，は、場合によりヘテロ環系に含
まれるフェニル又はナフチル基を包含する置換又は非置
換アリール基であり、又は炭素原子の他に窒素、硫黄及
び酸素から選ばれた一以上の原子を含むヘテロ芳香族５
又は６員環であり、但しこの環は置換されていてもよく
、Ｒ２は２〜６個の炭素原子のアルキル基であり、但し
このアルキル基は置換されていてもよい）を作る方法に
おいて、式（Ｉ［［）の化合物を少くとも８０重景％が
盈立体配置を持つ化合物（ｎ）へと立体選択的にエポキ
シ化する能力を持つ微生物の作用に化合物（ＩＩＩ）を
付すこと、化合物（ＩＩ）を少くとも部分的に分離する
こと、及び／又は化合物（Ｉ［）を置換又は非置換０２
〜Ｃ，アルキルアミン基と反応させること及び化合物（
１）を少くとも部分的に分離すること及び／又は化合物
ＣＩ＞をその医薬的に許容される塩へと転化することを
含む方法に関する。好ましくは、アルキルアミンはイソ
プロピルアミン又は、第三ブチルアミンである。

より好ましくはＲ９は、２−トリル、３−トリル、２．
３−ジメチルフェニル、２−クロル−５−メチルフェニ
ル、２−アリルフェニル、２−アリルオキシフェニル、
２−シクロプロピルフェニル、２−シクロへキシルフェ
ニル、２−シクロペンチルフェニル、２〜シアノフエニ
ル、２−メトキシフェニル、２−メチルチオフェニル、
２−（テトラヒドロフラン−２−イル）−メトキシフェ
ニル、４−アセトアミドフェニル、４−カルバゾリル、
４−カルバモイルメチルフェニル、４−［２−（メチル
ホルミルアミノ）−エチル］フェニル、２−アセチル−
４−ブチルアミドフェニル、１−ナフチル、フェニル、
４−　（３−シクロへキシルウレイド）−フェニル、５
．６−ジヒドロ−１−ナフチル、５．８−ジヒドロ−１
−ナフチル、５．６，７．８−テトラヒドロ−５−オキ
ソ−１−ナフチル、５．８−エタノ−５，６，７，８−
テトラヒドロ−１−ナフチル、２．３−ジヒドロ−ＬＨ
−インデン−４−イル、１Ｈ−インデン−４−イル、１
Ｈ−インデン−７−イル、１Ｈ−インドール−４−イル
、５−メチル−８−クマリニル、８−チオクロマニル、
４−モルホリノ−１゜２．５−チアジオゾール−３−イ
ル、５．６．７゜８−テトラヒドロ−シス−６，７−ジ
ヒドロキシ−１−ナフチル、４−（２−メトキシエチル
）−フェニル、４−　（２−メトキシエトキシ）−フェ
ニル、（２−アセチル）−ベンゾフラン−７−イル、２
．５−ジクロルフェニル、２−（２−プロペニルオキシ
）−フェニル、３．４−ジヒドロカルボスチリル−５−
イル、２−アセチル−４−（３，３−ジエチルウレイド
）−フェニル、４−［２−（シクロプロピルメトキシ）
−エチルコ　−フェニル、２−メチル−１Ｈ−インドー
ル−４−イル、（４−アセトキシ−２，３，５−）ジメ
チル）−フェニル、２−フェノキシ−フェニル、２−チ
アゾリルオキシ、２．２．５．７．８−ペンタメチルク
ロマン−６−イル、２−（Ｎ−β−ヒドロキシエチルカ
ルバモイルメトキシ）−フェール又は２−（Ｎ−メチル
−カルバモイルメトキシ）−フェニル基である。

好ましくは、本発明の方法は、Ｒ５が４−（２−メトキ
シエチル）−フェニル、２−アリルオキシフェニル、４
−カルバモイルメチルフェニル、１−ナフチル、−フェ
ニルである化合物（■）、より好ましくはＲ１が４−（
２−メトキシエチル）−フェニルである化合物から出発
して実施される。

好ましい実施態様において、本方法は、少くとも９０重
量％の−５−立体配置が形成される適当な微生物を選択
するやり方で実施される。

適当な微生物はいう言葉は、たとえばロードコツカス（
Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ　）　、マイコバクテリウム（
Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ　）　、ノカルディア（Ｎ
ｏｃａｒｄｉａ）及びシュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍ
ｏｎａｓ　）属に属するバクテリアを意味する。微生物
は、場合によりポリマーゲルによって固定化される。４
−（２−メトキシエチル）−フェニルアリルエーテルの
エポキシ化のための微生物として、下記の株が挙げられ
る： ノカルディア　コラリナ（Ｎｏｃａｒｄｉａ　ｃｏｒａ
ｌｌｉｎａ）種（たとえばＡＴＣＣ寄託番号３１３３８
で寄託される種）、 ロードコツカスｓｐ、　（Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ　ｓ
ｐ、　）種（たとえばＮＣＩＢ寄託番号１１２７７で寄
託される種）、 マイコバクテリウム　ロードクロウス （Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｎ＋　ｒｈｏｄｏｃｈｒｏ
ｕｓ　）種（たとえばＮＣＩＢ寄託番号９７０３で寄託
される種）、コードコツカス　エクイ　（Ｒｈｏｄｏｃ
ｏｃｃｕｓ　ｅｑｕｉ）種（たとえばＮＣＩＢ寄託番号
１２０３５で寄託される種）、 シュードモナス　アエルギノサ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａ
ｓａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）種（たとえばＮＣＩＢ寄託番
号１２０３６で寄託される種）、 シュードモナス　オレオボラシス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎ
ａｓｏｌｅｏｖｏｒａｎｓ）種（たとえばＡＴＣＣ寄託
番号２９３４７で寄託される種）、 シュードモナス　プチダ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ｐ
ｕｔｉｄａ）種（たとえばＮＣＩＢ寄託番号９５７１で
寄託される種）、及び シュードモナス　アエルギノサ種（たとえばＮＣＩＢ寄
託番号８７０４で寄託される種）。

フェニルアリルエーテルのエポキシ化のための微生物と
しては、マイコバクテリウム　ＷＭＩ（たとえばＮＧＩ
Ｂ寄託番号１１６２６で寄託される種）の培養物が挙げ
られる。

４−アリルオキシフェニルアセトアミドのエポキシ化の
ための微生物としては、シュードモナスオレオボランス
（たとえばＡＴＣＣ寄託番号２９３４７で寄託される種
）の培養物が挙げられる。

本発明方法の好ましい実施態様の実施において、４−（
２−メトキシエチル）−フェニルアリルエーテルを、少
くとも９０重量％が盈立体配置を持つ４−（２−メトキ
シエチル）−フェニルグリシジルエーテルへと転化する
能力を特徴生物が上述の微生物から選択され、０．５〜
１０日間培養されねばならず、その後、バクテリア細胞
は培養液から集められねばならず、細胞は液状栄養培養
基に懸濁され、そして４−（２−メトキシエチル）−フ
ェニルアリルエーテルが細胞の作用に付される。

エポキシ化活性を示す本発明で用いられる微生物は、約
０．５〜ｌＯ日間培養されねばならず、その後に細胞は
液状栄養培養基好ましくは最少液状栄養培養基に懸濁さ
れ、そして化合物（ＩＩＩ）が細胞の作用に付される。

約０．５〜１０日間の上述の培養の後に細胞は、最少液
状栄養培養基に細胞を懸濁する前に培養培地から単離さ
れてもよい。化合物（ＩＩＩ）の立体選択的エポキシ化
のために用いられる微生物を育てるために、同化しうる
炭素源（たとえばグルコース、ラクトース、テトラデカ
ン（Ｃ１４）のような炭化水素など）、窒素源（たとえ
ば硫酸アンモニウム、硝酸アンモニウム、塩化アンモニ
ウムなど）を有機栄養源のための剤（たとえば酵母エキ
ス、麦芽エキス、ペプトン、小麦エキスなど）及び無機
栄養源（たとえばリン酸塩、マグネシウム、カリウム、
亜鉛、鉄及び他の金属の微量）と共に含む通常の培養培
地が用いられる。任意的に、誘導物！（たとえばジェト
キシメタン）が培養培地に加えられる。０〜４５℃の温
度及び３，５〜９ｐＨが、微生物の成長の間維持される
。好ましくは微生物は、２０〜３７℃の温度でかつ５〜
８ｐＨで成長される。

微生物の成長の間に要求される好気性条件は、よく確立
された方法のいずれにとってでも提供されることができ
、但し酸素の供給が微生物の代謝要求を満すのに十分で
なければならない。このことは、気体酸素を好ましくは
空気の形で供給することにより最も便宜に達成される。

化合物（ＩＩＩ）の化合物（ＩＩ）への転化の間、微生
物は上述の通常の培養培地を用いて成長段階にあっても
よい。

微生物は、共基質を補われてもよい。

好ましくは化合物（Ｉ［［）の化合物（ＩＩ）への転化
の間に、微生物は最少培養培地を用いて実質上非成長段
階に保たれうる。最少培養培地として、必要なときは同
化しうる炭素源（たとえばグルコース、ラクトース、テ
トラデカン（Ｃ１４）のような炭化水素など）、必要な
ときは窒素源（たとえば硫酸アンモニウム、硝酸アンモ
ニウム、塩化アンモニウムなど）を、必要なときは有機
栄養源のための剤（たとえば酵母エキス、麦芽エキス、
ペプトン、肉エキスなど）及び必要なときは無機栄養源
（たとえばリン酸塩、マグネシウム、カリウム、亜鉛、
鉄及び他の金属の微量）と共に含む通常の培養培地を用
いることができる。微生物は、たとえば同化しうる炭素
源除外下または窒素源除外下で非成長段階に保たれうる
。０〜４５℃の温度及び３．５〜９のｐｉがこの段階の
間維持される。

好ましくは、微生物は２０〜３７℃の温度、５〜８のｐ
Ｈに保たれる。この段階の間に必要な好気性条件は、上
述の方法により提供されることができるが、但し酸素の
供給は、微生物の代謝要求を満し、しかしまた化合物（
ＩＩ［）を化合物（Ｉｆ）へと転化させるのに十分でな
ければならない。上述のように微生物により作られた化
合物（ＩＩ）は、回収され、そして良く確立された方法
のいずれかに従って精製されることができる。

本発明に従って作られた　（−）−Ｒ＋　−０−Ｃ１ｈ
−Ｃｌ−ＣＨｚイソプロピルアミン又は第三ブチルアミ
ンとの化学反応により各々（＋）−Ｒ＋−０−Ｃ１１□
−ＣＨｏＩＩ−Ｃ１ｈ−Ｎｉｌ−Ｒｚ　。

（−）−Ｒ＋−０−ＣＴｏ−ＣＨＯＨ−ＣＨｚ−ＮＨ−
Ｒｚ　、又はこれらの混合物に転化されることができる
。完全な（Ｓ）立体配置を持つアリールグリシジルエー
テルから完全な（Ｓ）立体配置を持つβアドレナリン　
レセプター遮断剤を形成する反応の例が、西独国特許出
願第２４５３３２４号明細書に記載される。

化合物（−）−Ｒ＋−０−ＣＨｚ−ＣＨＯＨ−ＣＩｌ□
−Ｎｌｌ−Ｒｚが主である混合物は、医薬製品において
特に有利に使用できる。好ましくは少くとも８０重量％
、より好ましくは少くとも９０重量％が−５−立体配置
であるこれら化合物は、医薬製品において用いられうる
。

式Ｒ，−０−Ｃ１１□−ＣＩＩＯＲ−ＣＨ２−Ｎｌｌ−
１ｈの化合物としては、βアドレナリン　レセプター遮
断特性をもつ化合物、たとえばＴｏｌａｍｏｌｏｌ、　
Ｔｏｌｉｐｒｏｌｏｌ、ロー３２゜Ｂｕｐｒａｎｏｌｏ
ｌ＋　Ａｌｐｒｅｎｏｌｏｌ、　０ｘｐｒｅｎｏｌｏｌ
、　ＰｒｏｃｉｎｏｌｏｌＥｘａｐｒｏｌｏｌ＋　Ｐｅ
ｎｂｕｔｏｌｏｌ、　Ｂｕｎｉｔｒｏｌｏｌ、　Ｍｏｐ
ｒｏｌｏｌ１６Ｔｒｉｐｒｅｎｏｌｏ１．　Ｂｕｆｅ、
ｔｏｌｏｌ、　Ｐｒａｃｔｏｌｏｌ、　Ｃａｒａｚｏｌ
ｏｌ＋Ａｔｅｎｏｌｏｌ、　Ａｃｅｂｕｔｏｌｏｌ、　
Ｐｒｏｐｒａｎｏｌｏｌ、　Ｐａｍａｔｏｌｏｌ。

Ｔａ１ｉｎｏｌｏ１．　Ｉｄｒｏｐｒａｎｏｌｏｌ、　
Ｄｒｏｐｒａｎｏｌｏｌ、Ｂｕｎｏｌｏｌ。

Ｋ　　４４２３＋　　ＵＳＶＣ６５２４，Ｉｎｄｅｎｏ
ｌｏｌ＋　　Ｐｉｎｄｏｌｏｌ、Ｂｕｃｕｓ＋ｏｌｏｌ
＋Ｓ　２３９５＋　Ｔｉｍｏｌｏｌ、　Ｎａｄｏｌｏｌ
、　Ｍｅｔｏｐｒｏｌｏｌ、ＩＩ　８７１０７＋Ｃ１ａ
ｒａｎｏｌｏｌｔ　Ｐａｒｇｏｌｏｌ、　Ｃａｒｔｅｏ
ｌｏｌ、　　Ｃｅ１ｉｐｒｏｌｏｌ。

Ｂｅｔａｘｏｌｏｌ＋　Ｍｅｐｉｎｄｏｌｏｌ、　Ｍｅ
ｔｉｐｒａｎｏｌｏｌ、ＰＨＱＡ　３３＋Ｔａｚｏｌｏ
ｌ及びＣｒｏｍｉｐｒａｎｏｌ又はこれらの医薬的に許
容される塩たとえば酸付加塩が挙げられる。医薬的に許
容される塩の例は、メトプロロールとＬ−酒石酸から作
られるメトプロロール酒石酸塩、及び１−イソプロピル
アミノ−３−フェノキシ−２−プロパツールと塩化水素
から作られる１−イソプロピルアミノ−３−フェノキシ
−２−プロツマノール塩酸塩である。好ましくは、これ
らβ−アドレナリンレセプター遮断化合物は、本発明に
従って作られ、少くとも８０％、より好ましくは少くと
も９０％旦立体配置で形成される。

本明細書で述べる光学純度は、エナンチオマー過剰パー
セントＳ−Ｒ／Ｓ＋Ｒとして表される。

本発明を、添付図面を引用しながら実施例に関して更に
説明するが、これは本発明の範囲を実施例に限定するも
のではない。

実施例■ ロードコツカス　エクイ　ＮＣｌＢ１２０３５による（
＋）−４−（２−メトキシエチル）−フェニルグリシジ
ルエーテルへの４−（２−メトキシエチル）−フェニル
アリルエーテルの転化酵母エキス（０，０２％）を含む
、ＡＳＭ鉱物塩培養基（１００ｍｊり中のテトラデカン
（１ｍｊｌりで３０℃で成長されたロードコツカス　エ
クイＮＣｌＢ１２０３５の７２時間培養物からの生物体
量の約半分を、ＡＳＭ　（５０ｍ１）酵母エキス（０，
０２％へ）、テトラデカン（０，１５ｍｊり、オクタ７
　（１ｍｊり　、Ｔｗｅｅｎ　　８０　（０，０５ｍ１
）及び４−（２−メトキシエチル）−フェニルアリルエ
ーテル（０，０５ｍｊりを含むコニカルフラスコ（２５
０ｍｌ容量）に移した。内容物を３０℃で旋回振とう機
上でインキュベートし、Ｖａｒｉａｎ３７００　　（カ
ラム：ＷＨＦｌｏｏ−１２０上の３％ＯＶＩ、５０　ａ
ｍ　Ｘ　２　龍内径、１０℃／分で１００゛’Ｃ−２０
０℃、３０ｃｃ／分でのＮ、）でのガスクロマトグラフ
ィによる分析の前にメチレンクロライド中にサンプルを
抽出した。ＡＳＭは、ＮＨ２Ｏ１（０，５３５ｇ／　ｌ
＞　、ＫＨｚＰＯ４，（０，５３１ｇ／ｌ）、ＮａｚＨ
ＰＯｔ（０，８６６ｇ　／　ｌ　）　、ＫｚＳＯ４（０
，１７４ｇ／　Ｉｌ　）、ＭｇＳＯ４・７１１ｚＯ（０
，０３７ｇ　／　１）、ＣａＣｊ？　ｔ　・２ＨｔＯ（
０，００７３５ｇ　／　１　）　、７ｔｈ微量元素（１
，Ｏｍ　ｌ　／　１　）、及びＦｅＳＯ４・７ＨｚＯ（
１，０ｍｌの０．１Ｍ溶液）を含む。

ＴＫ３は、ＺｎＳＯ４・７）１ｚＯ（０，２８８８／　
ｌ　）　、Ｍｎ５Ｏａ　４４ＨｚＯ（０，２２４ｇ　／
　１　）　、Ｈ＋ＢＯｉ（０，０６１８ｇ　／　１２　
）、ＣｕＳＯ４−５ＨｚＯ（０，１２４８ｇ　／　ｌ　
）　、ＮａｚＭｏ０４・２１（ｔ。

（０，０４８４ｇ　／　ｌ　）　、ＣｏＣ１ｚ　・６１
１ｔＯ（０，０４７６ｇ八〇、Ｋへ（０，０８３ｇ／　
ｌ）　、Ｉ　Ｍ　ＨｚＳＯｔ（１ｍ　ｌ　Ｉｌ”）をｐ
Ｈ７，０で含む。

生成物（＋）−４−（２−メ“トキシエチル）−フェニ
ルグリシジルエーテルは、４８時間インキュベーション
後に現われ、９６時間まで増加した。

このときエポキシドのレベルは、残る４−（２−メトキ
シエチル）−フェニルアリルエーテルの約１５％であっ
た。

十分な量の（＋）−４−（２−メトキシエチル）−フェ
ニルグリシジルエーテルを蓄積するために、１０１０Ｘ
５０及び５Ｘ５００ｍｌインキュベーション（上述の条
件）からの培養物プロスを、メチレンクロライド（３５
０ｍ１）で抽出した。抽出物をＮａ、ＳＯ４で乾燥し、
溶媒を気化し、ヘキサン／エーテル勾配を用いてシリカ
ゲル上でエポキシドを精製して（エポキシドは３０％エ
ーテルで溶離された）　、ｌ　α１０ｚＳ＝＋８．１１
°　（ｃ　＝０．９５、エタノール）を持つ（＋）−４
−（２−メトキシエチル）−フェニルグリシジルエーテ
ル（３５３■）が得られた。

（＋）−４−（２−メトキシエチル）−フェニルグリシ
ジルエーテルの光学純度は、ユーロピウムシフト剤Ｅｕ
（ｈｆｃ）＋の存在下でｐａｒを用いて調べられた（第
１図）。シフト剤を添加すると、化学的に合成された（
±）　−４−（２−メトキシエチル）−フェニルグリシ
ジルにおける双子プロトン（（ａ）及び（ｂ）と示され
る）の各々からのシグナルの包絡線（第１図の）は下手
にシフトし、各々は同じ強度のシグナルの二つの包絡線
にスプリットされた（第１図ｂ　、　（ａ）　＋（ｂ）
）。しかし、同じ条件下で、微生物的に作られ（＋）−
４−（２−メトキシエチル）−フェニルグリシジルエー
テルにおける双子プロトンの各々から、シグナルの僅か
一つの包絡線が検出された（第１図Ｃ、（ａ）　＋　（
ｂ））。すなわち、微生物的エポキシ化により得られた
（＋）−４−（２−メトキシエチル）−フェニルグリシ
ジルエーテルの光学純度は、ｐｍｒ測定の実験誤差内で
１００％であると測定された。

実施例■ （＋）−４−（２−メトキシエチル）−フェニルグリシ
ジルエーテルの（−）−メトプロロールへの転化 イソプロピルアミン（１，８４ｍ１）を含む乾燥エタノ
ール（６，２ｍ　ｌ　）中の（＋）−４−（２−メトキ
シエチル）−フェニルグリシジルエーテル（２９０■、
実施例Ｉ参照）の溶液を還流下で３時間加熱し、その後
溶媒を気化により除去した。

得た油状物をメチレンクロライド（１０ｍｊりに溶解し
、０．２Ｎ　　ＨＣｌ（１０ｍｆ）中に抽出し、これは
次にメチレンクロライド（２Ｘ　１０ｍＩｔ）で洗われ
た。酸性層を２Ｎ　　ＮａＯＨ（３ｍｊりで塩基性にし
、生成物をメチレンクロライド（１０ｍｌ）中に抽出し
た。メチレンクロライド抽出物をＮａ、ＳＯ，上で乾燥
し、溶媒を気化して、粘着性の固体を得た。生成物をヘ
キサンから再結晶して、ｌ　Ｃｌ　ｔｏ”＝　　５．４
６°　（ｃ＝１．０１．エタノール）及び融点４２−４
５℃を示す（−）−メトプロロール（２６０１１１ｒ）
を得た。化学的に作られた（±）−メトプロロール（融
点４９−５１’Ｃ）は、予想通り光学的に不活性であっ
た。（−）−メトプロロール（第２．３図）及び（±）
−メトプロロール（図示せず）のｐｍｒ及びマススペク
トルは、要求される構造と一致し、メトプロロール酒石
酸塩の市販サンプルから抽出された（±）−メトプロロ
ール（融点４８．５−５０．５℃）のｐＩｌｒスペクト
ルから区別できなかった。

（−）−メトプロロールの光学的純度は、逆相ＨＰＬＣ
カラム（Ｌｉｃｈｒｏｓｏｒｂ　　ＲＰ　８　（１０＃
　ｍ）２５ｃｍＸ％″外径、４．９鰭内径、移動相：２
．５ｍ１１分での０．１　Ｍリン酸ナトリウム緩衝液中
の４０％アセトニトリル、ＵＶ検出）上でのその旦−ロ
イシルジアステレオマーアミド誘導体の分離により決定
された。誘導体化は、Ｊ、バーマンソン（）ｌｅｒｍａ
ｎｓｓｏｎ）とＣ，Ｊ、フォノ　バール（Ｖａｎ　Ｂａ
ｈｒ）により、Ｊ、　Ｃｈｒｏｍ、　　２２７．１１３
（１９８２）に記載されるように、メトプロロールを第
三ブトキシカルボニル−８−ロイシンの（ＢＯＣ−３−
ロイシン）対称無水物と反応させ、次にトリフルオル酢
酸によりＢＯＣ基を除去することにより達成された。（
±）−メトプロロールから誘導されたサンプルの分析は
、ラセミ体について予期されるように、同じ強さの二つ
のピークを結果した。

（−）−メトプロロールから誘導されたサンプルは、９
７．９：２．３の強度比（９５，４％の光学純度に相当
）を持つ二つのピークを与えた。

実施例■ シュードモナス　アエルギノサＮ　ＣＩ　Ｂ　１２０３
６による（＋）−４−（２−メトキシエチル）−フェニ
ルグリシジルエーテルへの４−（２−メトキシエチル）
−フェニルアリルエーテルの転化及び引続（（−）−メ
トプロロールへのその転化シュードモナス　アエルギノ
サＮ　ＣＩ　Ｂ　１２０３Ｇの懸濁物は、細胞（０，７
５％乳酸ナトリウム及び０．０５％ジェトキシメタンを
含むＡＳＭ鉱物塩培養基中で３０℃で２４時間成長され
た）をＡＳＭ中に、元の培養基体積の十分の１に等しい
体積まで再懸濁することによりｉＪｌ製した。

細胞懸濁物（１１００ｍｊりを４−（２−メトキシエチ
ル）−フェニルアリルエーテル（３，３ｇ）と共に３０
℃、２２０　ｒｐｏ＋でインキエベートした。

２４時間後に、反応混合物をメチレンクロライド（５０
０ｍｊりで抽出し、抽出物をＮａｚＳＯ４で乾燥し、そ
して溶媒を気化して油状物（２，６７ｇ）を得た。シリ
ガゲル上での精製（実施例Ｉと同様）は、１αＩｎ”＝
＋８．２１°　（Ｃ＝０．９４３、エタノール）を持つ
（＋）−４−（２−メトキシエチル）−フェニルグリシ
ジルエーテル（９３０ｎｔ）を与えた。

ユーロピウム　シフト剤ｌｌ！ｕ（ｈｆｃ）ｓの存在下
でｐＩＩＩｒにより測定される（実施例Ｉと同様に）光
学純度は、ｐｍｒ測定の実験誤差内で１００％であると
決定された。

（＋）−４−（２−メトキシエチル）−フェニルグリシ
ジルエーテル（６９４■）が、１αｌ　Ｄ２４−−５．
４９°　（ｃ＝１．０２９）エタノール）、融点４４−
４６℃を持つ（−）−メトプロロール（５７９■）を作
るために用いられた（実施例■と同様の方法）。光学純
度は、９８％であると測定された（実施例■の方法）。

母液は再結晶されて、９６％の光学純度を持つ（−）−
メトプロロール（１１３■）を与えた。

実施例■ シェードモナス　アエルギノサＮＣＩ　Ｂ　８７０４に
よる（＋）−４−（２−メトキシエチル）−フェニルグ
リシジルエーテルへの４−（２−メトキシエチル）−フ
ェニルアリルエーテルの転化及ヒ引続＜（−）−メトプ
ロロールへのその転化シェードモナス　アエルギノサＮ
ＣＩ　Ｂ　８７０４の細胞懸濁物（２００ｍｌ）（実施
例■に記載のように調製）を、４−（２−メトキシエチ
ル）−フェニルアリルエーテル（２ｇ）と共に３０℃で
２４時間インキュベートし、その後懸濁物を抽出及び精
製しく実施例■と同様に）、（＋）−４−（２−メトキ
シエチル）−フェニルグリシジルエーテル（９１■）を
得た。ユーロピウム　シフト剤Ｅｕ　（ｈｆｃ）　３の
存在下でｐｍｒにより測定（実施例夏と同様）されたエ
ポキシドの光学純度は、ｐａｒ測定の誤差内で１００％
であると測定された。

（＋）−４−（２−メトキシエチル）−フェニルグリシ
ジルエーテル（７６■）が、Ｓ−ロイシルジアステレオ
マー誘導体のＨＰＬＣにより測定して（実施例■と同様
）９８．８％の光学純度を持つ、融点４２−４５℃、１
αＬｔＳ−−４，９３゜（ｃ−０，９４４、エタノール
）の（−）−メトプロロール（５５■）を作るために用
いられた（実施例■と同様の方法）、母液の気化は、９
５．２％光学純度の（−）−メトプロロール（１７■）
を与えた。

実施例■ シュードモナス　プチダ　ＮＣＩＢ９５７１による（＋
）−４−（２−メトキシエチル）−フェニ・ルグリシジ
ルエーテルへの４−（２−メトキシエチル）−フェニル
アリルエーテルの転化及び引！＜（）−メトプロロール
へのその転化シュードモナス　プチダ　ＮＣＩＢ９５７
１の細胞懸濁物（２００ｍＮ）（実施例■のように調製
）を、４−（２−メトキシエチル）−フェニルアリルエ
ーテル（１ｇ）と共に３０℃で２４時間インキュベート
し、その後メチレンクロライドに抽出し、精製して（実
施例■と同様に）、１αＬ”＝＋６．４２°　（ｃ＝０
．８８、エタノール）を持つ（＋）−４−（２−メトキ
シエチル）−フェニルグリシジルエーテル（３２４■）
を得た。ユーロピウム　シフト剤ｆ！ｕ（ｈｆｃ）３の
存在下でｐＩＩｌｒにより測定（実施例Ｉと同様）した
光学純度は、ｐｍｒ測定の実験誤差内で１００％であっ
た。

（＋）−４−（２−メトキシエチル）−フェニルグリシ
ジルエーテル（２１４ｍｇ）をイソプロピルアミンと縮
合させて（実施例■と同様）、融点４４−４６℃、Ｉα
ｌｏ””’　　５．００”　　（ｃ＝ｔ、ｏｉ、エタノ
ール）の（−）−メトプロロール（１４６′■）を得た
。光学純度（実施例■と同様の方法）は、９８％である
と測定された。母液の気化は、９７．５％光学密度の（
−）−メトプロロール（９Ｎ）を与えた。

実施例■ シュードモナス　オレオボランス　ＡＴＣＣ２９３４７
による（＋）−４−（２−メトキシエチル）−フェニル
グリシジルエーテルへの４−（２−メトキシエチル）−
フェニルアリルエーテルの転化及び引！＜　　（−）−
メトプロロールへのその転化 シュードモナス　オレオボランス　ＡＴＣＣ２９３４７
の細胞懸濁物（２００ｍｊり　　（実施例■と同様に調
製）を、４−（２−メトキシエチル）−フェニルアリル
エーテル（２ｇ）と共に３０℃で５時間インキュベート
した。メチレンクロライドへの抽出及びシリカゲル上で
の精製（実施例■と同様）は、１ｆｆ１ｏｔＳ＝＋８．
０２°　（ｃ−１，１６、エタノール）の（＋）−４−
（２−メトキシエチル）−フェニルグリシジルエーテル
（２８９■）を与えた。ユーロピウムシフト剤Ｅｕ（ｈ
ｆｃ）＋の存在下でｐａｒにより測定した（実施例■と
同様）光学純度は、ｐＩｌｌｒ測定の実験誤差内で１０
０％であると決定された。

（＋）−４−（２−メトキシエチル）−フェニルグリシ
ジルエーテル（１７１■）は、イソプロピルアミンと反
応させられ（実施例■と同じ方法）、融点４４−４５℃
、１αＩ　ｏ”＝　　５．２７°　（Ｃ＝０．９６７、
エタノール）を持つ（−）−メトプロロール（１５４■
）を与えた。光学純度は、Ｓ−ロンシルジアステレオマ
ー誘導体のＨＰＬＣに基づき９８．４％であると測定さ
れた。母液の気化は、９２．２％光学純度の（−）−メ
トプロロール（６■）を与えた。

実施例■ （＋）−４−（２−メトキシエチル）−フェニルグリシ
ジルエーテルへの４−（２−メトキシエチル）−フェニ
ルアリルエーテルの微生物的転化Ｔｗｅｅｎ　　８０　
　（０，０５ｍ１）、テトラデカン（０，０５ｍ１）及
び４−（２−メトキシエチル）−フェニルアリルエーテ
ル（０，０５ｍｊりを含む鉱物塩培養基（５０ｍｊりを
、ノカルディア　コラリナＡＴＣＣ３１３３８、ロード
コツカスｓｐ。

ＮＣｌＢ１１２７７又はマイコバクテリウム　コードク
ロウスＮＣＩＢ９７０３（すべて０．５％テトラデカン
で７２時間予め成長させた）と共にインキュベートした
。サンプルを２４時間及び９６時間に採り、メチレンク
ロライドに抽出し、ガスクロマトグラフ（Ｇ　Ｃ）で分
析した。

各場合において、４−（２−メトキシエチル）−フェニ
ルグリシジルエーテルに対応するピークが、下記の転化
率で検出された：マイコバクテリウム　ロードクロウス
、２４時間後２％；ロードコツカスｓｐ、　、９６時間
後１％；ノカルディアコラリナ、９６時間後に５％。ノ
カルディア　コラリナを用いたスケールアップ実験（５
ｔ）　Ｏｍｊ培養、上述の条件）の内容物をメチレンク
ロライドに抽出し、シリカゲル上での精製及びｐ酊分析
を行ったとき、構造の一層の確認が得られた。４−（２
−メトキシエチル）−フェニルグリシジルエーテルのｐ
ｍｒユーロピウムシフトスペクトルは１００％の純度を
示唆し、ロードコツカス　エクイから得られた（＋）−
４−（２−メトキシエチル）−フェニルグリシジルエー
テルのユーロピウム　ｐｍｒスペクトルと同じであった
。

実施例■ マイコバクテリウム　ＮＣｌＢ１１６２６による（＋）
−フェニルグリシジルエーテルへのフェニルアリルエー
テルの転化及び続くそれの（−）−イソプロピルアミノ
−３−フェノキシ−２−プロパツールの転化 連続培養条件：培養体積２，１１．培養基；八Ｍ２（（
ＮＦＩ４）！Ｓ０４　（１，４５ｇ　／　ｌ　）　、Ｈ
３ＰＯ４（１，０ｇ　／　ｆｆ１Ｍｇ５Ｏａ　・７ｇｇ
Ｏ（０，０９９ｇ　／　ｊ！　）、ＣａＣｊ！　ｔ　・
２ＨｔＯ（０，０１５ｇ　／　ｌ　）　、Ｔｌｈ微量元
素溶液（２ｍｌ／ｊり０、Ｉ　Ｍ　Ｆｅ５０＊　　・７
ＨｔＯ（１ｍ／　Ｉｌ　）を含む）。炭素源；エチレン
２５ｍ１１分、空気３００ｍｊ！／分、攪拌速度：２８
Ｏｒｐｍ、温度２８℃、ｐＨ６，８、希釈速度０．０２
　ｈ〜’　（μｍａｘ　＝約０．０３ｈ−１）。これら
の条件は、約３．２　ｇ　／　ｌ乾燥重量の生物体量５
　　を維持する。細胞は、使用前に一般に濃縮される（
遠心分離により。次に使用ずみ培養基に再懸濁される）
。

フェニルグリシジルエーテルはＧＣにより分析されたく
温度プログラムが１０℃／分で５′０−１００℃である
ことを除いて先の実施例と同じカラム及び条件）。

フェニルグリシジルエーテルを作るために、２９）２５
７！バツチニ相系を用いた。転化は、７５０ｍ２細胞懸
濁物（６，９ｇ／ｆｆ乾燥重量）、及び２．５％Ｖ　／
　Ｖフェニルアリルエーテルを含む１５００ｍｌのイソ
オクタンを含む醗酵器中で行われた。

）　　エポキシドは１９３ｇモル／ｈ／ｇ乾燥重量（０
，３ｇ／ｈ／ｇ乾燥重量）の速度で作られ１、　１０時
間後にシリカゲル上のクロマトグラフィにより分離され
、次に蒸留により精製されて（＋）−フェニルグリシジ
ルエーテル（７５０■）ヲ与えた。

微生物的に作られた（＋）　−フェニルグリシジルエー
テルのｐａｉｒスペクトル及びマススペクトルは、要求
される構造と一致し、フェニルアリルエーテルとｍ−ク
ロル過安息香酸の反応により化学的に作られた（±）−
フェニルグリシジルエーテルのそれと同一であった。（
＋）−フェニルグリシジルエーテルはｌ　ｃｒ’ｌ　Ｄ
”＝’＋　１１．３８°　（Ｃ−１，０９、エタノール
）の比旋光を与えた。

光学純度は、実施例Ｉと同様にユーロピウムシフト剤ε
ｕ（ｈｆｃ）ｓの存在下でｐａｉｒ’を用いて調べられ
た。シフト剤を加えると、化学的に合成された（±）−
フェニルグリシジルエーテル中の双子プロトンの各々か
らのシグナルの包絡線が下手にシフトし、各々が等しい
強度のシグナルの二つの包絡線にスプリットされた。一
方、微生物的に作られた（＋）−フェニルグリシジルエ
ーテル中の双子プロトンからのシグナルの包絡線は、６
．７：１の比でスプリットされた。この結果は、分子の
８７％が一つのエナンチオマー形であることを示し、こ
れは７４％の光学純度を表わす。微生物及び化学の源か
らのエポキシドの混合物の分析は、（＋）−フェニルグ
リシジルエーテルの９０％が一つのエナンチオマー形（
８０％の光学純度に相当）にあったことを確認するシグ
ナル比を与えた。

（＋）−フェニルグリシジルエーテルの光学純度の別の
確認は、その（−）−１−イソプロピルアミノ−３−フ
ェノキシ−２−プロパツールへの転化の後に確立された
。（＋）−フェニルグリシジルエーテル（３００■）が
イソプロピルアミンと反応され（実施例■と同様）、１
α１　、ｚＳ．、−６，５１”　　（ｃ＝０．９８４、
エタノール）、融点４２−４４℃の（−）、＋　１−イ
ソプロピルアミノ−３−フェノキシ−２−プロパツール
（１２５■）を与えた。（±）−１−イソプロピルアミ
ノ−３＝フェノキシ−２−プロパツールが、（±）−フ
ェニルグリシジルエーテルから同様に合成された。

（−）＝１−イソプロピルアミノ−３−フェノキ′シー
２−プロパツール（第５〜６図）及び（±）−１−イソ
プロピルアミノ−３−フェノキシ−２−プロパツール（
図示せず）のｐｍｒ　及びマススペクトルは、要求され
る構造と一致した。光学純度は、対応するＳ−ロイシル
ジアステレオマー誘導体のＨＰＬＣにより（実施例■と
同様）測定され、８０％であると決定された。

実施例■ シュードモナス　オレオボランス　ＡＴＣＣ２９３４７
による（＋）−４−（２，３−エポキシプロピルオキシ
）−フェニルアセトアミドへの４−アリルオキシ−フェ
ニルアセトアミドの転化及び！＜　　（−）−１−ｐ−
カルバモイルメチルフェノキシ−３−イソプロピルアミ
ノ−２−プロパツール（（−）−アテノロール）へのそ
れの転化シュードモナス　オレオボランス　ＡＴＣＣ２
９３４７の懸濁物は、細胞（０，７５％乳酸ナトリウム
及び０．０５％ジェトキシメタンを含むｐＨ７のｐｓｘ
鉱物塩培養基中で３０℃で２４時間成長されたもの）を
ＰＳＸ中にｐｉ（７，５で、元の培養物体積の１０分の
１に等しい体積まで再懸濁することにより調製した。Ｐ
ＳＸは下記のものを含む：ＫＩＩｚＰＱａ　（８，９２
ｇ　／　ｆ　’）、ＮａｚＨＰＯ４（２，９４ｇ　／　
１　）、（ＮＩＩａ、）ｇｌｌＰ０４．　（１，０ｇ　
／　１　）　、（Ｎｉ（４）ｚｓＯｎ　（０，２ｇ／　
ｌ　）ＫＣｊ！　（０，２ｇ　／　ｊ！！　）　、クエ
ン酸ナトリウム（０，２９４ｇ／　ｆ）　、Ｃａ５Ｏａ
　　・２ＨｚＯ（０，００５ｇ／　１）、ＭｇＳＯ４・
７１１□０　（０，２ｇ／ｌ）　、及びＰＳＩＩ微量元
素溶液（１０ｍｆ／Ｊ）。

ｐｓ微量元素溶液は下記のものを含む：（ＮＨ４）！Ｓ
Ｏ４・Ｆｅｓｏｍ　　・６ＨｔＯ（０，２５ｇ　／　ｌ
　）　、Ｚｎ５Ｏ（１０）７ＨｚＯ（０，０５ｇ／　ｌ
）　、ＭｎＣｊ！ｚ　　・４１１２０　（０，０３ｇ／
　１＞　、ＣＬＩＳＯ４・５ＨｚＯ（０，０１５ｇ／　
ｉ’）　、ＣｏＣ１ｚ・６８ｚＯ（０，０１５ｇ　／　
Ｊ）　、ＨｓＢＯａ　（０，００５ｇ　／　１　）、Ｎ
ａ２ＭｏＯｎ　　・２８ｚＯ（０，００５５ｇ　／　ｊ
り　、Ｋｌ　（０，０１ｇ／ｌ）　、ＨＣｊ！　　（ｐ
）１３まで））。

細胞懸濁物（１１００ｍｊりは、旋回振とう機上の１１
個の２．５Ｅコニカルフラスコ中で３０℃で、水中の１
０％のボールミルされた懸濁物として加えられた４−ア
リルオキシフェニルアセトアミド（３，２ｇ）と共にイ
ンキエベートされた。

７２時間後に、インキュベーション混合物をメチレンク
ロライド（１０００ｍＩｌ）で抽出し、溶媒を乾燥気化
され、その後残渣をア七トンから再結晶して２．２７　
ｇの白色結晶状物質を得た。その組成は、）（ＰＬＣ（
カラム：　Ｌｉｃｈｒｏｓｏｒｂ　　ＲＰ　８（ｌ　Ｏ
μｍ）　２５ｃｍＸ　’Ａ　’外径、４．９鶴内径、移
動相２ｍｍ！／分の水中４０％アセトニトリル、ＵＶ検
出）により測定して、９０％４−アリルオキシ−フェニ
ルアセトアミド及び１０％４−　（２゜３−エポキシプ
ロピルオキシ）−フェニルアセトアミドであった。

約２３０■の４−（２，３−エポキシプロピルオキシ）
−フェニルアセトアミドを含む結晶化した抽出物を乾い
たエタノール（４０ｍｊりに溶解し、次に還流下でイソ
プロピルアミン（２，５ｍｍりと共に５時間加熱し、そ
の後過剰の溶媒を気化した。残渣をメチレンクロライド
（５０ｍｌ１）に溶解し、３　Ｘ　５０ｍｆｆ１の０．
２Ｎ　　）ｉｃｍ！で抽出した。

酸層を一緒にし、メチレンクロライドで洗い、５Ｎ　　
ＮａＯＨで塩基性にした。形成された白色沈澱をメチレ
ンクロライド（３Ｘ　１００ｍｍりに抽出し、抽出物を
Ｎａ２ＳＯ２で乾燥し、溶媒を気化して白色固体を得た
。これをヘキサン／酢酸エチルから再結晶して（−）−
アテノロール（＾ｔｅｎｏｌｏｌ）（７６■）を得た。

１αｌ　Ｄ”−−３，９°　（ｃ＝１、０１　、ＥｔＯ
Ｈ）　、融点１４６°−１４８℃、’ＩＩ　ＮＭＲ（Ｃ
ＨＣｌ　ｓ　）　３６０　ＭＨｚスペクトル：６１．１
　（ｄ。

６＋１．　Ｃ１１３）　、６１．５−２．５ブロード（
ｓ’＋　２８　、川。

０１１）　、６２．８２　（ｍ、　１８．Ｎ１（Ｃ１ｌ
）　、δ２．７５／２．９５　（ｍ。

２Ｈ，ＣＨＪＨ）、δ３．５３　（ｓ、’　２Ｈ，ＧＯ
−ＣＨｔ　）　、６３．９８（＋ａ、　３Ｂ、　　−０
−ＣＬ−ＣＩ−）、６５．３５ブロード（ｓ、　２１１
゜ｕ２）、６６．９　（ｄ、　２１１．　ハラ置換芳香
族）、６７．２（ｄ、　２１１．パラ置換芳香族）。化
学イオン化（Ｎｌｈ）マススペクトルは、分子イオン（
Ｍ＋Ｈ）”　ｍ／ｅ２６７を与え、これは２６６の分子
量を示しており・、予想されたマスと一致する。ｐｅｒ
及びマススペクトルは、化学的に合成された（±）−ア
テノロールのそれと同じであった。

（−）−アテノロールの光学純度は、逆相）ＩＰＬＣカ
ラム（Ｌｉｃｈｒｏｓｏｒｂ　　ＲＰ　８　（１０／Ｊ
ｍ）　２５ｃｍ×騒“外径、４．９ｆｌ内径、移動相１
．５　ｍ　ｌ　／分の２％酢酸（ＮＨ３でｐＨ３，７に
）５０：メタノール５０）上でのそのジベンゾイル−酒
石酸モノエステルジアステレオマー誘導体の分離により
測定された。誘導体化は、何、リング−（Ｌｉｎｄｅｒ
）ら、Ｊ。

Ｃｈｒｏｍ、　３１６、ｐ６０５−６１６　（１９８４
）に記述されるように、（±）−又は（−）−アテノロ
ールを（Ｒ，Ｒ）−０，Ｏ−ジベンゾイル無水酒石酸と
反応させることにより達成された。（±−アテノロール
から誘導されたサンプルの分析はほぼ同じ強度の二つの
ジアステレオマーピークの形成を結果、一方、（−）　
−アテノロールから誘導されたサンプルは、１．５：９
８．５の強度比（９７，０％の光学純度に相当）の二つ
のピークの形成を結果した。

実施例Ｘ シュードモナス　オレオボランス　ＡＴＣＣ２９３４７
による４−（２，３−エポキシプロピルオキシ）−フェ
ニルアセトアミドへの４−アリルオキシ−フェニルアセ
トアミドの転化シュードモナス　オレオボランス　ＡＴ
ＣＣ２９３４７の懸濁物は、細胞（０，７５％グリセロ
ール及び０，０５％ジェトキシメタンを含むｐＨ７のｐ
ｓｘ鉱物塩培養基中で３０℃で２４時間成長されたもの
）をｐＨ７，５のＰＳＸに、元の培養物体積の１０分の
１に等しい体積に再懸濁することにより調製された。

細胞懸濁物（１０ｍｌ、１２．６ｇ／Ｉ！乾燥重量））
　　を、旋回インキュベーター上で２５０ｍＡ！のスト
・　　フパー付コニカルフラスコ中で、９０■／　ｍ　
ｊｔのボールミルされ音波処理された４−アリルオキシ
−フェニルアセトアミドの懸濁物（これも５０■／ｍｌ
のＴｗｅｅｎ　８０を含む）のＱ、　５　ｍ　Ｉｔと共
に３０℃でインキユベートした。サンプル（１ｍｌ）を
メチレンクロライド（２ｍｌ）中に抽出し、溶媒を気化
し、残渣をＨＰＬＣ（実施例■での４−（２，３−エポ
キシプロピルオキシ）−フェニルアセトアミドの分析と
同じ条件）による分析の前にジメチルホルムアミドに再
溶解した。インキュベーション混合物中の４−　（２，
３−エポキシプロピルオキシ）−フェニルアセトアミド
の濃度は、３時間後及び２４時間後に各々０．９　ｇ　
／　ｌ及び１゜３　ｇ／Ｉ！に達した。

実施例ＸＩ シェードモナス　アエルギノサ　ＭＣｌ８１２０３６、
シェードモナス　アエルギノサ　ＮＣＩ　Ｂ　８７０４
及びシュードモナス　プチダ　ＮＣＩＢ９５７１による
４−（２，３−エポキシプロピルオキシ）−フェニルア
セトアミドへの４−アリルオキシ−フェニルアセトアミ
ドの転化 シュードモナス　アエルギノサ　ＮＣｌ３１２０３６、
シュードモナス　アエルギノサ　ＮＣＩ　Ｂ　８７０４
及びシュードモナス　プチダ　ＮＣＩＢ９５７１の細胞
懸濁物は、細胞（０，７５％酢蔽ナトリウム及び０．０
５％ジェトキシメタンを含むｐｆｌ？のＰＳに鉱物塩培
養基中で３０℃で２４時間成長されたもの）をｐｆ１７
．５のｐｓｘに、元の培養物体積の１０分の１に等しい
体積に再懸濁することにより調製された。

細胞懸濁物（１０ｍＮ）を、旋回インキュベーションの
ストッパー付２５０ｍｊ！コニカルフラスコ中で３０℃
で、１０％のボールミルされた４−７リルオキシーフエ
ニルアセトアミド水性懸濁物（これも５％Ｔｗｅｅｎを
含む）の０．５　ｍ　ｊｔと共にインキユベートした。

２４時間後に、インキュベーション混合物をメチレンク
ロライド中に抽出し、下記の濃度で４−　（２，３−エ
ポキシプロピルオキシ）−フェニルアセトアミドを含む
ことが判ったニジエートモナス　アエルギノサ　ＮＣｒ
Ｂ　１２０３６．０．０７ｇ／ｊ！ニジエートモナス　
アエルギノサＮＣＩＢ８７０４．０．０８ｇ／ｌシュー
ドモナス　プチダ　ＮＣｒＢ９５７１，０．１９ｇ／ｊ
！（上述の実施例と同じ＜　ＨＰＬＣにて分析）。

実施例ｘｎ シェードモナス　オレオボランス　ＡＴＣＣ２９３４７
による４−（２−メトキシエチル）−フェニルグリシジ
ルエーテルへの４−（２−メトキシエチル）−フェニル
アリルエーテルの転化シェードモナス　オレｉボランス
　ＡＴＣＣ２９３４７の懸濁物は、細胞（０，７５％グ
リセロール及び０．０５％ジェトキシメタンを含むｐＨ
７のｐｓｘ鉱物塩培養中で定常相まで３０℃で成長させ
た）を、元の培養基体積の十分の−に等しい体積までＦ
ＳＸ（ｐＨ７，５）に再懸濁することにより調製された
。

細胞懸濁物（２５０ｍｌ１コニカルフラスコに入れられ
た１０ｍ！、乾燥重量１２．６ｇ／ｊ！りを４−（２−
メトキシエチル）−フェニルアリルエーテル（２５０μ
ｌ）及びグルコース（５０■）と共に３７℃で旋回振と
う機上でインキュベートした。４−（２−メトキシエチ
ル）−フェニルグリシジルエーテルの形成は、メチレン
クロライドへの抽出後にガスクロマトグラフによりモニ
ターされた（条件は上述の実施例と同じ）。インキュベ
ーション混合物中の４−（２−メトキシエチル）−フェ
ニルグリシジルエーテルのレベルは、６時間後に７．３
０ｇ／βであった。

【図面の簡単な説明】

第１図は、ユーピウムシフト剤の存在下での（＋）及び
（±）−４−（２−メトキシエチル）−フェニルグリシ
ジルエーテルの部分的ｐａｉｒスペクトルを示す。 第１図ミニシフト剤なしの（±）又は（＋）−４−（２
−メｉ・キシエチル）−フェニルグリシジルエーテル、 第１図ｂ　：　Ｅｕ（ｈｆｃ）ｓありの（±）−４−（
２−メトキシエチル）−フェニルグリシジルエーテル；
Ｅｕ（ｈｆｃ）ｓ／　（±”）−４−（２−メトキシエ
チル）−フェニルグリシジルエーテルの比＝０．１０、
第１図ｃ　：　Ｅｕ（ｈｆｃ）＊ありの（＋）−４−（
２−メトキシエチル）−フェニルグリシジルエーテル；
Ｅｕ（ｈｆｃ）ｓ／　（±）−４−（２−メトキシエチ
ル）−フェニルグリシジルエーテルの比＝０．１２゜第
２図は、（−）−メトプロロールのｐａｒスペクトルを
示す。 第３図は、（−）−メトプロロールのＣ，Ｉ　、　（Ｃ
１１４）により測定されたマススペクトルを示す。 第４図は、二相系＜２．２５１スケール）　　（７５０
ｍｌｌ細胞（６，９８／ｌ乾燥重′！！ｋ）＋２．５％
フェニルアリルエーテルを含む１５００ｍｌイソオクタ
ン）中でのマイコバクテリウムＷＭＩによるフェニルグ
リシジルエーテルのバッチ製造を示す。 第５図は、（−）　−イソプロピルアミノ−３−フェノ
キシ−２−プロパツールのｐ■ｒスペクトルを示す。 第６図は、（−）　−イソプロピルアミノ−３−フェノ
キシ−２−プロパツールのＣ，１，（Ｃ１１４）スペク
トルを示す。 ■出　願　人　　シェル　インターナシ　　オランダ国
ヨナーレ　リサーチ　　　ツクス　１６２マーチヤツピ
ー　ベス ローテン　フェンノー トチャツプ ２５０１　　ア　エヌ　テン　ハーグ　ペーオーボカー
レル　ファン　ビーラントラーン　３０手続補正書（方
式） 特許庁長官　　宇　賀　道　部　　殿　　　　　！ゝ１
、事件の表示　　　昭和６１年特許願第２９８３９号３
、補正をする者 事件との関係　　出願人 名　称　　　ギスト　ブロ力デス　ナームローゼ（氏　
名）　　　フェンノートチャツプ外１名 ４、代理人

Claims (29)

【特許請求の範囲】
1. （１）式 Ｒ＿１−Ｏ−ＣＨ＿２−ＣＯＯＨ−ＣＨ＿２−ＮＨ−Ｒ
   ＿２（ I ）の立体特異的な形の医薬的に活性な化合物
   又はその酸付加塩その他の医薬的に許容される塩、及び
   ／又は式 ▲数式、化学式、表等があります▼（II） の立体特異的な形の化合物（ここでＲ＿１は、場合によ
   りヘテロ環系に含まれるフェニル又はナフチル基を包含
   する置換又は非置換アリール基であり、又は炭素原子の
   他に窒素、硫黄及び酸素から選ばれた一以上の原子を含
   むヘテロ芳香族５又は６員環であり、但しこの環は置換
   されていてもよく、Ｒ＿２は２〜６個の炭素原子のアル
   キル基であり、但しこのアルキル基は置換されていても
   よい）を作る方法において、式 Ｒ＿１−Ｏ−ＣＨ＿２−ＣＨ＝ＣＨ＿２（III）の化合
   物を少くとも８０重量％が￥Ｓ￥立体配置を持つ化合物
   （II）へと立体選択的にエポキシ化する能力を持つ微生
   物の作用に化合物（III）を付すこと、化合物（II）を
   少くとも部分的に分離すること、及び／又は化合物（I
   I）を置換又は非置換Ｃ＿２〜Ｃ＿６アルキルアミン基
   と反応させること及び化合物（ I ）を少くとも部分的
   に分離すること及び／又は化合物（ I ）をその医薬的
   に許容される塩へと転化することを含む方法。
2. （２）イソプロピルアミン又は第三ブチルアミンが用い
   られる特許請求の範囲第１項記載の方法。
3. （３）Ｒ＿１が２−トリル、３−トリル、２，３−ジメ
   チルフェニル、２−クロル−５−メチルフェニル、２−
   アリルフェニル、２−アリルオキシフェニル、２−シク
   ロプロピルフェニル、２−シクロヘキシルフェニル、２
   −シクロペンチルフェニル、２−シアノフェニル、２−
   メトキシフェニル、２−メチルチオフェニル、２−（テ
   トラヒドロフラン−２−イル）−メトキシフェニル、４
   −アセトアミドフェニル、４−カルバゾリル、４−カル
   バモイルメチルフェニル、４−［２−（メチルホルミル
   アミノ）−エチル］フェニル、２−アセチル−４−ブチ
   ルアミドフェニル、１−ナフチル、フェニル、４−（３
   −シクロヘキシルウレイド）−フェニル、５，６−ジヒ
   ドロ−１−ナフチル、５，８−ジヒドロ−１−ナフチル
   、５，６，７，８−テトラヒドロ−５−オキソ−１−ナ
   フチル、５，８−エタノ−５，６，７，８−テトラヒド
   ロ−１−ナフチル、２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インデン
   −４−イル、１Ｈ−インデン−４−イル、１Ｈ−インデ
   ン−７−イル、１Ｈ−インドール−４−イル、５−メチ
   ル−８−クマリニル、８−チオクロマニル、４−モルホ
   リノ−１，２，５−チアジオゾール−３−イル、５，６
   ，７，８−テトラヒドロ−シス−６，７−ジヒドロキシ
   −１−ナフチル、４−（２−メトキシエチル）−フェニ
   ル、４−（２−メトキシエトキシ）−フェニル、（２−
   アセチル）−ベンゾフラン−７−イル、２，５−ジクロ
   ルフェニル、２−（２−プロペニルオキシ）−フェニル
   、３，４−ジヒドロカルボスチリル−５−イル、２−ア
   セチル−４−（３，３−ジエチルウレイド）−フェニル
   、４−［２−（シクロプロピルメトキシ）−エチル］−
   フェニル、２−メチル−１Ｈ−インドール−４−イル、
   （４−アセトキシ−２，３，５−トリメチル）−フェニ
   ル、２−フェノキシ−フェニル、２−チアゾリルオキシ
   、２，２，５，７，８−ペンタメチルクロマン−６−イ
   ル、２−（Ｎ−β−ヒドロキシエチルカルバモイルメト
   キシ）−フェニル又は２−（Ｎ−メチル−カルバモイル
   メトキシ）−フェニル基である特許請求の範囲第１項又
   は第２項記載の方法。
4. （４）Ｒ＿１が４−（２−メトキシエチル）−フェニル
   、２−アリルオキシフェニル、４−カルバモイルメチル
   フェニル、１−ナフチル又はフェニル基である特許請求
   の範囲第１〜３項のいずれか一項に記載の方法。
5. （５）Ｒ＿１が４−（２−メトキシエチル）−フェニル
   基である特許請求の範囲第１〜４項のいずれか一項に記
   載の方法。
6. （６）Ｒ＿１が４−カルバモイルメチルフェニル基であ
   る特許請求の範囲第１〜４項のいずれか一項に記載の方
   法。
7. （７）Ｒ＿１がフェニル基である特許請求の範囲第１〜
   ４項のいずれか一項に記載の方法。
8. （８）微生物が、化合物（III）を少くとも９０重量％
   がＳ立体配置を持つ化合物（II）へと転化することがで
   きる特許請求の範囲第１〜７項のいずれか一項に記載の
   方法。
9. （９）微生物がロードコッカス（Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕ
   ｓ）属、マイコバクテリウム（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉ
   ｕｍ）属、ノカルディア（Ｎｏｃａｒｄｉａ）属又はシ
   ュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）属に属するバ
   クテリアである特許請求の範囲第１〜８項のいずれか一
   項に記載の方法。
10. （１０）バクテリアがロードコッカス属である特許請求
    の範囲第９項記載の方法。
11. （１１）バクテリアがマイコバクテリウム属である特許
    請求の範囲第９項記載の方法。
12. （１２）バクテリアがノカルディア属である特許請求の
    範囲第９項記載の方法。
13. （１３）バクテリアがシュードモナス属である特許請求
    の範囲第９項記載の方法。
14. （１４）バクテリアがポリマーゲルにより固定化されて
    いる特許請求の範囲第１項〜第１３項のいずれか一項に
    記載の方法。
15. （１５）Ｒ＿１が４−（２−メトキシエチル）−フェニ
    ル基であり、Ｒ＿２がイソプロピル基であり、微生物が
    ノカルディアコラリナ（Ｎｏｃａｒｄｉａ　ｃｏｒａｌ
    ｌｉｎａ）好ましくはノカルディアコラリナＡＴＣＣ３
    １３３８である特許請求の範囲第１項記載の方法。
16. （１６）Ｒ＿１が４−（２−メトキシエチル）−フェニ
    ル基であり、Ｒ＿２がイソプロピル基であり、微生物が
    ロードコッカスｓｐ．、好ましくはロードコッカスｓｐ
    ．ＮＣＩＢ１１２７７である特許請求の範囲第１項記載
    の方法。
17. （１７）Ｒ＿１が４−（２−メトキシエチル）−フェニ
    ル基であり、Ｒ＿２がイソプロピル基であり、微生物が
    マイコバクテリウムロードクロウス （Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ　ｒｈｏｄｏｃｈｒｏｕ
    ｓ）、好ましくはマイコバクテリウムロードクロウスＮ
    ＣＩＢ９７０３である特許請求の範囲第１項記載の方法
    。
18. （１８）Ｒ＿１が４−（２−メトキシエチル）−フェニ
    ル基であり、Ｒ＿２がイソプロピル基であり、微生物が
    ロードコッカスエクイ（Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ　ｅｑ
    ｕｉ）、好ましロードコッカスエクイＮＣＩＢ１２０３
    ５である特許請求の範囲第１項記載の方法。
19. （１９）Ｒ＿１が４−（２−メトキシエチル）−フェニ
    ル基であり、Ｒ＿２がイソプロピル基であり、微生物が
    シュードモナスアエルギノサ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ
    　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）、好ましくはシュードモナス
    アエルギノサＮＣＩＢ１２０３６である特許請求の範囲
    第１項記載の方法。
20. （２０）Ｒ＿１が４−（２−メトキシエチル）−フェニ
    ル基であり、Ｒ＿２がイソプロピル基であり、微生物が
    シュードモナスオレオボランス （Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ｏｌｅｏｖｏｒａｎｓ）、
    好ましくはシュードモナス　オレオボランスＡＴＣＣ２
    ９３４７である特許請求の範囲第１項記載の方法。
21. （２１）Ｒ＿１が４−（２−メトキシエチル）−フェニ
    ル基であり、Ｒ＿２がイソプロピル基であり、微生物が
    シュードモナスプチダ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ｐｕ
    ｔｉｄａ）、好ましくはシュードモナスプチダＮＣＩＢ
    ９５７１である特許請求の範囲第１項記載の方法。
22. （２２）Ｒ＿１が４−（２−メトキシエチル）−フェニ
    ル基であり、Ｒ＿２がイソプロピル基であり、微生物が
    シュードモナスアエルギノサ、好ましくはシュードモナ
    スアエルギノサＮＣＩＢ８７０４である特許請求の範囲
    第１項記載の方法。
23. （２３）Ｒ＿１がフェニル基であり、Ｒ＿２がイソプロ
    ピル基であり、微生物がマイコバクテリウムＷＭ１、好
    ましくはマイコバクテリウムＷＭ１ＮＣＩＢ１１６２６
    である特許請求の範囲第１項記載の方法。
24. （２４）Ｒ＿１が４−カルバモイルメチルフェニル基で
    あり、Ｒ＿２がイソプロピル基であり、微生物がシュー
    ドモナスオレオボランス、好ましくはシュードモナスオ
    レオボランスＡＴＣＣ２９３４７である特許請求の範囲
    第１項記載の方法。
25. （２５）作られた化合物（II）をイソプロピルアミン又
    は第三ブチルアミンと反応させて化合物（ I ）を作る
    特許請求の範囲第１〜７項記載の方法。
26. （２６）上記特許請求の範囲のいずれかに従う方法によ
    り作られた化合物（ I ）及び／又は化合物（II）。
27. （２７）少くとも８０重量％が￥Ｓ￥立体配置を持つ特
    許請求の範囲第２６項記載の化合物。
28. （２８）少くとも９０重量％が￥Ｓ￥立体配置を持つ特
    許請求の範囲第２６項又は第２７項記載の化合物。
29. （２９）特許請求の範囲第２６項〜第２８項のいずれか
    一つに記載の少くとも一つの化合物を含む医薬。