JPS61249397A - マウスインタ−フエロンの精製法 - Google Patents
マウスインタ−フエロンの精製法Info
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- JPS61249397A JPS61249397A JP60091011A JP9101185A JPS61249397A JP S61249397 A JPS61249397 A JP S61249397A JP 60091011 A JP60091011 A JP 60091011A JP 9101185 A JP9101185 A JP 9101185A JP S61249397 A JPS61249397 A JP S61249397A
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- JP
- Japan
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- mouse interferon
- interferon
- mouse
- purified
- purification
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- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
［産業上の利用分野］
本発明はマウスインターフェロンの精製法に関する。
［従来の技術］
インターフェロンは、抗ウィルス作用、抗癌作用をはじ
めとする多目的作用を持つタンパク質であり、近年、医
薬品としての開発は急速に進んでいる。しかし、インタ
ーフェロンの生体内での挙動や薬効およびその物性につ
いてはまだ不明な点が多く解明されるべき問題は多い。
めとする多目的作用を持つタンパク質であり、近年、医
薬品としての開発は急速に進んでいる。しかし、インタ
ーフェロンの生体内での挙動や薬効およびその物性につ
いてはまだ不明な点が多く解明されるべき問題は多い。
このような問題を動物を用いて非臨床的に評価する場合
、インターフェロンの種特異性のためにヒトのインター
フェロンは用いることができず、その動物のインターフ
ェロンが必要となる。ざらにこのような動物を用いたモ
デル実験の場合でも、正常な評価を下すためには、大量
にしかも全く不純物を含まないまでに精製されたその動
物種のインターフェロンを用いることが必要である。非
臨床実験に使われる動物にはマウス、ラット、ウサギ、
イヌ、サルなどが挙げられるが、なかでもマウスは最も
広く一般的に用いられ、インターフェロン研究の分野で
も例外ではない°。それゆえ、インターフェロンを医薬
品として開発するためには、マウス−マウスインターフ
ェロンの同種系の動物実験による正当な評価が重要であ
り、それに用いる高品位のマウスインターフェロンが必
要とされている。
、インターフェロンの種特異性のためにヒトのインター
フェロンは用いることができず、その動物のインターフ
ェロンが必要となる。ざらにこのような動物を用いたモ
デル実験の場合でも、正常な評価を下すためには、大量
にしかも全く不純物を含まないまでに精製されたその動
物種のインターフェロンを用いることが必要である。非
臨床実験に使われる動物にはマウス、ラット、ウサギ、
イヌ、サルなどが挙げられるが、なかでもマウスは最も
広く一般的に用いられ、インターフェロン研究の分野で
も例外ではない°。それゆえ、インターフェロンを医薬
品として開発するためには、マウス−マウスインターフ
ェロンの同種系の動物実験による正当な評価が重要であ
り、それに用いる高品位のマウスインターフェロンが必
要とされている。
従来、マウスインターフェロンの精製法は、Ｉｗａｋｕ
ｒａら（Ｊ、Ｂｉｏｌ、Ｃｈｅｍ、、２５３．５０７４
（１９７８） ） 、［）ｅ ）ｌａｅｙｅｒ−Ｇｕｉ
ｇｎａｒｄら（Ｎａｔｕｒｅ、２７１．６２２ （１９
７２））他多数報告されているが、その中でもマ、ウス
インターフェロンに対する抗体を用いた方法は１段の精
製により高純度の標品を得ることができる優れた方法で
ある。
ｒａら（Ｊ、Ｂｉｏｌ、Ｃｈｅｍ、、２５３．５０７４
（１９７８） ） 、［）ｅ ）ｌａｅｙｅｒ−Ｇｕｉ
ｇｎａｒｄら（Ｎａｔｕｒｅ、２７１．６２２ （１９
７２））他多数報告されているが、その中でもマ、ウス
インターフェロンに対する抗体を用いた方法は１段の精
製により高純度の標品を得ることができる優れた方法で
ある。
しかし、特異性の高い抗体はその調製法がむずかしく、
大量に得るのが困難であるために、大量精製には適用し
にくい。このため、抗体法にかわる安価で大量に入手可
能な担体によるマウスインターフェロンの高純度かつ大
量精製法の確立が必要とされている。
大量に得るのが困難であるために、大量精製には適用し
にくい。このため、抗体法にかわる安価で大量に入手可
能な担体によるマウスインターフェロンの高純度かつ大
量精製法の確立が必要とされている。
［発明が解決しようとする問題点］
本発明は前記のように非臨床的研究に必要な、高品位の
精製マウスインターフェロンの供給をするために、マウ
スインターフェロンの高純度精製法の確立を目的とする
。
精製マウスインターフェロンの供給をするために、マウ
スインターフェロンの高純度精製法の確立を目的とする
。
［問題を解決するための手段］
本発明はマウスインターフェロン溶液を、シリカ系吸着
剤に接触させる工程、該吸着剤への吸着物を溶出剤にて
溶出させる工程からなるマウスインターフェロンの精製
法である。
剤に接触させる工程、該吸着剤への吸着物を溶出剤にて
溶出させる工程からなるマウスインターフェロンの精製
法である。
ここでいうマウスインターフェロンとはα型、β型およ
びγ型のいずれでもよく、たとえばマウスＣ−２４細胞
、マウスＣ−２４３細胞などのマウス細胞により産生さ
れるマウスインターフェロン、および遺伝子組換え技術
を用いてマウスインターフェロン構造遺伝子を組込んだ
大腸菌、酵母などの微生物や、ハムスター、サルなどの
動物細胞により産生されるマウスインターフェロン等が
挙げられる。
びγ型のいずれでもよく、たとえばマウスＣ−２４細胞
、マウスＣ−２４３細胞などのマウス細胞により産生さ
れるマウスインターフェロン、および遺伝子組換え技術
を用いてマウスインターフェロン構造遺伝子を組込んだ
大腸菌、酵母などの微生物や、ハムスター、サルなどの
動物細胞により産生されるマウスインターフェロン等が
挙げられる。
本発明で使用する吸着剤は、シリカを含む吸着剤であれ
ばいずれも用いうるが、たとえば“コントロール ボア
グラス” （Ｅｌｅｃｔｒｏｎｕｃｌｅｏｎｉｃｓ社
製）、“マイクロビーズシリカ” （富士デビソン社製
）などがある。
ばいずれも用いうるが、たとえば“コントロール ボア
グラス” （Ｅｌｅｃｔｒｏｎｕｃｌｅｏｎｉｃｓ社
製）、“マイクロビーズシリカ” （富士デビソン社製
）などがある。
精製初段に用いられるシリカ系吸着剤によるマウスイン
ターフェロンの精製操作は次のように行なう。すなわち
、まずマウスインターフェロンを含む溶液をシリカ系吸
着剤に接触吸着させる。吸着はバッチ法、カラム法、ど
ちらでも可能であるが、カラム法の方が吸着効率が高い
。マウスインターフェロンは、Ｅ））−１６〜９で吸着
される。
ターフェロンの精製操作は次のように行なう。すなわち
、まずマウスインターフェロンを含む溶液をシリカ系吸
着剤に接触吸着させる。吸着はバッチ法、カラム法、ど
ちらでも可能であるが、カラム法の方が吸着効率が高い
。マウスインターフェロンは、Ｅ））−１６〜９で吸着
される。
溶離は溶出剤のｐＨ値、イオン強度、疎水度によって決
定される。たとえば酸性領域（ｐＨ２〜５）でマウスイ
ンターフェロンは溶離する。また高イオン強度下では広
いｐＨ領域（ｐＨ２〜９）での溶離が可能となる。この
イオン強度はリン酸、酢酸、クエン酸、ホウ酸等の緩衝
塩の濃度を上げたり塩化ナトリウム、塩化カリウムのよ
うな中性塩の添加（０，２〜１．０Ｍ＞により増加させ
ることができる。ざらに溶出剤中にエチレングリコール
、プロピレングリコール等の疎水的相互作用を弱める溶
剤を含む場合、あるいは“トリトンＸ−１００”、コー
ル酸ナトリウム等の界面活性剤を含む（０，１〜１％）
場合には、その溶出力はざらに強くなる。
定される。たとえば酸性領域（ｐＨ２〜５）でマウスイ
ンターフェロンは溶離する。また高イオン強度下では広
いｐＨ領域（ｐＨ２〜９）での溶離が可能となる。この
イオン強度はリン酸、酢酸、クエン酸、ホウ酸等の緩衝
塩の濃度を上げたり塩化ナトリウム、塩化カリウムのよ
うな中性塩の添加（０，２〜１．０Ｍ＞により増加させ
ることができる。ざらに溶出剤中にエチレングリコール
、プロピレングリコール等の疎水的相互作用を弱める溶
剤を含む場合、あるいは“トリトンＸ−１００”、コー
ル酸ナトリウム等の界面活性剤を含む（０，１〜１％）
場合には、その溶出力はざらに強くなる。
溶出剤の組成や濃度、液量は特に限定されるものではな
く、それぞれ材料とした粗マウスインターフェロン中に
含まれる夾雑タンパク質を除去するのに有効なｐＨを保
持するのに必要な濃度、吸着されたマウスインターフェ
ロンを実用的に回収するのに必要な量が用いられる。
く、それぞれ材料とした粗マウスインターフェロン中に
含まれる夾雑タンパク質を除去するのに有効なｐＨを保
持するのに必要な濃度、吸着されたマウスインターフェ
ロンを実用的に回収するのに必要な量が用いられる。
その中でも夾雑タンパク質をほとんど溶出させることな
くマウスインターフェロンだけを選択的に溶離させるこ
とにより高純度のマウスインターフェロンを得ることが
できるものとして、ｐＨ４〜６、好ましくはＤＨ４，５
〜５．５の酸性緩衝液でタンパク質中の疎水的相互作用
を弱めるエチレングリコール、プロピレングリコール等
の有機溶媒を０〜１５％（Ｖ／Ｖ）含む溶液が特に好ま
しく用いられる。緩衝液としては酢酸緩衝液、クエン酸
緩衝液等が用いられる。このような溶出剤は、マウスイ
ンターフェロンに対して安定かつ温和な条件であり、し
かも２段目のクロマトグラフィーにそのまま直接適用で
きるものである。
くマウスインターフェロンだけを選択的に溶離させるこ
とにより高純度のマウスインターフェロンを得ることが
できるものとして、ｐＨ４〜６、好ましくはＤＨ４，５
〜５．５の酸性緩衝液でタンパク質中の疎水的相互作用
を弱めるエチレングリコール、プロピレングリコール等
の有機溶媒を０〜１５％（Ｖ／Ｖ）含む溶液が特に好ま
しく用いられる。緩衝液としては酢酸緩衝液、クエン酸
緩衝液等が用いられる。このような溶出剤は、マウスイ
ンターフェロンに対して安定かつ温和な条件であり、し
かも２段目のクロマトグラフィーにそのまま直接適用で
きるものである。
ざらに本発明者らは上記クロマトグラフィーで得られる
精製マウスインターフェロン溶出液中にわずかに残存し
た夾雑タンパク質を効果的に除去するために、二段目の
精製ステップに導入すべくクロマトグラフィーを検討し
た。各種クロマトグラフィーを鋭意研究の結果１、陽イ
オン交換体を用いたクロマトグラフィーが本要求に適う
ことを見出した。
精製マウスインターフェロン溶出液中にわずかに残存し
た夾雑タンパク質を効果的に除去するために、二段目の
精製ステップに導入すべくクロマトグラフィーを検討し
た。各種クロマトグラフィーを鋭意研究の結果１、陽イ
オン交換体を用いたクロマトグラフィーが本要求に適う
ことを見出した。
ここでいう陽イオン交換体としては、例えばカルボキシ
メチル基、スルホ基、スルホエチル基、スルホプロピル
基、ホスホ基等を官能基として有する架橋デキストラン
、アガロース、セルロース等が含まれる。このような陽
イオン交換体としては、ＣＭ−３ｅｐｈａｄｅｘＣ−２
５，５ｐ−ｓｅｐｈａｄｅｘＣ−５０（Ｐｈａｒｍａｃ
ｉａ社製）、ＣＭ−Ｂ ｉ ｏ−Ｇｅ ｌ Ａ （Ｂ
ｉｏ−ｒａｄ社製）、０Ｍ５２、Ｐ １１ （Ｗｈａｔ
ｍａｎ社製）なトノ商品名テ市販されている。
メチル基、スルホ基、スルホエチル基、スルホプロピル
基、ホスホ基等を官能基として有する架橋デキストラン
、アガロース、セルロース等が含まれる。このような陽
イオン交換体としては、ＣＭ−３ｅｐｈａｄｅｘＣ−２
５，５ｐ−ｓｅｐｈａｄｅｘＣ−５０（Ｐｈａｒｍａｃ
ｉａ社製）、ＣＭ−Ｂ ｉ ｏ−Ｇｅ ｌ Ａ （Ｂ
ｉｏ−ｒａｄ社製）、０Ｍ５２、Ｐ １１ （Ｗｈａｔ
ｍａｎ社製）なトノ商品名テ市販されている。
陽イオン交換体によるマウスインターフェロンの精製操
作は次のように行う。シリカ系吸着剤から溶出されたマ
ウスインターフェロン溶液を好ましくはｐＨ２〜９の条
件下で吸着させる。吸着はバッチ法、カラム法どちらで
も可能であるが、カラム法の方が吸着効率が高い。
作は次のように行う。シリカ系吸着剤から溶出されたマ
ウスインターフェロン溶液を好ましくはｐＨ２〜９の条
件下で吸着させる。吸着はバッチ法、カラム法どちらで
も可能であるが、カラム法の方が吸着効率が高い。
溶離は、リン酸、酢酸、クエン酸、トリスアミノメタン
等の酸性緩衝液で行い、ｐＨ５以上が好ましく、また高
イオン強度下では、ざらに溶離は容易となる。イオン強
度はリン酸、酢酸、クエン酸等の緩衝塩の濃度を上げた
り、塩化ナトリウム、塩化カリウムのような中性塩の添
加（０，２〜１゜０Ｍ＞により増加させることができる
。溶出剤の組成、液量は特に限定されるものではなく、
最適な溶離条件は存在する夾雑タンパク質、およびマウ
スインターフェロンの量、カラムの寸法などに応じて適
宜決定される。
等の酸性緩衝液で行い、ｐＨ５以上が好ましく、また高
イオン強度下では、ざらに溶離は容易となる。イオン強
度はリン酸、酢酸、クエン酸等の緩衝塩の濃度を上げた
り、塩化ナトリウム、塩化カリウムのような中性塩の添
加（０，２〜１゜０Ｍ＞により増加させることができる
。溶出剤の組成、液量は特に限定されるものではなく、
最適な溶離条件は存在する夾雑タンパク質、およびマウ
スインターフェロンの量、カラムの寸法などに応じて適
宜決定される。
このようにしてマウスインターフェロンをシリカ系吸着
剤に吸着溶離させ、ざらにこの溶出液を陽イオン交換体
に吸着溶離させることにより、粗マウスインターフェロ
ン中に混在していた夾雑タンパク質を除去して、選択的
にマウスインターフェロンを精製分離することができる
。
剤に吸着溶離させ、ざらにこの溶出液を陽イオン交換体
に吸着溶離させることにより、粗マウスインターフェロ
ン中に混在していた夾雑タンパク質を除去して、選択的
にマウスインターフェロンを精製分離することができる
。
［発明の効果］
マウスインターフェロンはマウスを用いたインターフェ
ロンの非臨床試験およびタンパク質化学的なインターフ
ェロン研究のために必要とされていながら、その簡便に
してかつ大量調製可能な高純度精製法が未だ報告されて
いない。
ロンの非臨床試験およびタンパク質化学的なインターフ
ェロン研究のために必要とされていながら、その簡便に
してかつ大量調製可能な高純度精製法が未だ報告されて
いない。
本発明は簡便にしてかつ大量処理を可能とし、しかも高
純度のマウスインターフェロンを得る精製法である。水
沫で得られるマウスインターフェロンは精製前に比べ、
比活性で数十倍に、しかもドデシル硫酸ナトリウム存在
下のポリアクリルアミド電気泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）
による検定では純度９９％まで精製され、非臨床試験に
用いるのに充分な精製標品である。初段に用いられるシ
リカ系吸着剤は硬質で化学的にも安定で取り扱いが楽な
ため、特に精製初段で大量の粗原液を処理するのに適し
ている。ざらに２段目の精製ステップとなる陽イオン交
換体を用いたクロマトグラフィーはマウスインターフェ
ロンに特異性が高く、これにより一部残存していた夾雑
タンパク質を除去することができる。このように本発明
により特異性と分離能の高い二種類のアフィニティーク
ロマトグラフィーを何ら特殊操作を加えることなく直結
し、簡便にして高純度の精製マウスインターフェロンを
大量に得ることが可能になった。
純度のマウスインターフェロンを得る精製法である。水
沫で得られるマウスインターフェロンは精製前に比べ、
比活性で数十倍に、しかもドデシル硫酸ナトリウム存在
下のポリアクリルアミド電気泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）
による検定では純度９９％まで精製され、非臨床試験に
用いるのに充分な精製標品である。初段に用いられるシ
リカ系吸着剤は硬質で化学的にも安定で取り扱いが楽な
ため、特に精製初段で大量の粗原液を処理するのに適し
ている。ざらに２段目の精製ステップとなる陽イオン交
換体を用いたクロマトグラフィーはマウスインターフェ
ロンに特異性が高く、これにより一部残存していた夾雑
タンパク質を除去することができる。このように本発明
により特異性と分離能の高い二種類のアフィニティーク
ロマトグラフィーを何ら特殊操作を加えることなく直結
し、簡便にして高純度の精製マウスインターフェロンを
大量に得ることが可能になった。
次に実施例を挙げて本発明をざらに具体的に説明する。
実施例中のマウスインターフェロン活性は、マウスＬＹ
細胞と水泡性口内炎ウィルス（ＶＳｖ）を細胞変性効果
（ＣＰＥ）阻止法により測定し１、標準マウスインター
フェロンにより国際単位（ＩＵ）に換算した。
細胞と水泡性口内炎ウィルス（ＶＳｖ）を細胞変性効果
（ＣＰＥ）阻止法により測定し１、標準マウスインター
フェロンにより国際単位（ＩＵ）に換算した。
実施例１
マウスインターフェロン−β構造遺伝子を組込んだ大腸
菌（微工研奇第７６６２号）を培養後、菌体を破砕し遠
心上清として粗マウスインターフェロンーβ溶液を得た
。この粗マウスインターフェロン溶液には１．６Ｘ１０
７ ＩＵ／ｍ＋（７）マウスインターフェロン活性を含
み、１９ｍｇ／ｍ＋のタンパク質が含まれていた。この
溶液２５００ｍ１を、“コントロール ボア クラス゛
’３００ｍｌ （４４φＸ、２００ｍｍ）に４℃、流速
１５０ｍ１／ｈｒで流した。つづいてこのカラムを５０
％エチレングリコールを含む２０ｍＭリン酸緩衝液（１
１７，０）３３００ｍｌで洗浄した後、０゜５Ｍ塩化ナ
トリウムと１０％エチレングリコールを含む５０ｍＭ酢
酸緩衝液（ｐＨ５，０＞で溶出した。マウスインターフ
ェロン−βは活性回収率８０％で比活性は１０倍に上昇
し、純度８０％まで精製された。
菌（微工研奇第７６６２号）を培養後、菌体を破砕し遠
心上清として粗マウスインターフェロンーβ溶液を得た
。この粗マウスインターフェロン溶液には１．６Ｘ１０
７ ＩＵ／ｍ＋（７）マウスインターフェロン活性を含
み、１９ｍｇ／ｍ＋のタンパク質が含まれていた。この
溶液２５００ｍ１を、“コントロール ボア クラス゛
’３００ｍｌ （４４φＸ、２００ｍｍ）に４℃、流速
１５０ｍ１／ｈｒで流した。つづいてこのカラムを５０
％エチレングリコールを含む２０ｍＭリン酸緩衝液（１
１７，０）３３００ｍｌで洗浄した後、０゜５Ｍ塩化ナ
トリウムと１０％エチレングリコールを含む５０ｍＭ酢
酸緩衝液（ｐＨ５，０＞で溶出した。マウスインターフ
ェロン−βは活性回収率８０％で比活性は１０倍に上昇
し、純度８０％まで精製された。
つぎに、マウスインターフェロン−β活性を含む上記溶
出液１８ｍ１を、０．１Ｎ ＮａＯＨでｐＨ６に調整
し、ホスホセルロース“Ｐｌｌ”（Ｗｈａｔｍａｎ社製
＞２ｍ１（１０φＸ２５ｍｍ）に４℃、流速２ｍｌ／ｈ
ｒで流した。つづいてこのカラムを０．１Ｍリン酸緩衝
液（ｐＨ５＞１０ｍ１で洗浄した債、０．５Ｍ塩化ナト
リウムを含む２０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ５）でマウス
インターフェロンーβを溶出した。マウスインターフェ
ロン−βは活性回収率９０％で純度は９９％まで又 精製された。この結果、精製原液に対するマウイへ ンターフエロンーβの比活性は約３８倍に上昇し、純度
９９％の精製標品が得られた。
出液１８ｍ１を、０．１Ｎ ＮａＯＨでｐＨ６に調整
し、ホスホセルロース“Ｐｌｌ”（Ｗｈａｔｍａｎ社製
＞２ｍ１（１０φＸ２５ｍｍ）に４℃、流速２ｍｌ／ｈ
ｒで流した。つづいてこのカラムを０．１Ｍリン酸緩衝
液（ｐＨ５＞１０ｍ１で洗浄した債、０．５Ｍ塩化ナト
リウムを含む２０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ５）でマウス
インターフェロンーβを溶出した。マウスインターフェ
ロン−βは活性回収率９０％で純度は９９％まで又 精製された。この結果、精製原液に対するマウイへ ンターフエロンーβの比活性は約３８倍に上昇し、純度
９９％の精製標品が得られた。
実施例２
マウスインターフェロン−β構造遺伝子を組込んだ大腸
菌（微工研奇第７６６２号）を培養後、菌体を破砕し遠
心上清として粗マウスインターフェロンーβ溶液を得た
。この粗マウスインターフェロン溶液には１．６Ｘ１０
７ ＩＵ／ｍｌのマウスインターフェロン活性を含み、
１９ｒｒ１ｇ／ｍ ｌのタンパク質が含まれていた。こ
の溶液２５００ｍ１を、“コントロール ボア グラス
”３００ｍ１ （４４φＸ２００ｍｍ＞に４°Ｃ１流速
１５０ｍ１／ｈｒで流した。つづいてこのカラムを５０
％エチレングリコールを含む２０ｍＭリン酸緩衝液（ｐ
Ｈ７，０）３３００ｍｌで洗浄した後、０゜５Ｍ塩化ナ
トリウムと１０％エチレングリコールを含む５０ｍＭ酢
酸緩衝液（ｐＨ５，０＞で溶出した。マウスインターフ
ェロン−βは活性回収率８０％で比活性は１０倍に上昇
し、純度８０％まで精製された。
菌（微工研奇第７６６２号）を培養後、菌体を破砕し遠
心上清として粗マウスインターフェロンーβ溶液を得た
。この粗マウスインターフェロン溶液には１．６Ｘ１０
７ ＩＵ／ｍｌのマウスインターフェロン活性を含み、
１９ｒｒ１ｇ／ｍ ｌのタンパク質が含まれていた。こ
の溶液２５００ｍ１を、“コントロール ボア グラス
”３００ｍ１ （４４φＸ２００ｍｍ＞に４°Ｃ１流速
１５０ｍ１／ｈｒで流した。つづいてこのカラムを５０
％エチレングリコールを含む２０ｍＭリン酸緩衝液（ｐ
Ｈ７，０）３３００ｍｌで洗浄した後、０゜５Ｍ塩化ナ
トリウムと１０％エチレングリコールを含む５０ｍＭ酢
酸緩衝液（ｐＨ５，０＞で溶出した。マウスインターフ
ェロン−βは活性回収率８０％で比活性は１０倍に上昇
し、純度８０％まで精製された。
つぎに、マウスインターフェロン−β活性を含む上記溶
出液１８ｍ１を、０．１Ｎ ＮａＯＨでｐＨ６に調整
し、カルボキシメチルセルロース” ＣＭ ５２ ”
（Ｗｈａｔｍａｎ ｌｌ製）２ｍｌ（１０φ×２５ｍｍ
）Ｌ：４℃、流速２ｍｌ／ｈｒで流した。
出液１８ｍ１を、０．１Ｎ ＮａＯＨでｐＨ６に調整
し、カルボキシメチルセルロース” ＣＭ ５２ ”
（Ｗｈａｔｍａｎ ｌｌ製）２ｍｌ（１０φ×２５ｍｍ
）Ｌ：４℃、流速２ｍｌ／ｈｒで流した。
つづいて、０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７＞１０ｍ１で
マウスインターフェロン−βを溶出した。
マウスインターフェロン−βを溶出した。
マウスインターフェロン−βは活性回収率７０％で純度
は９５％まで精製された。この結果、精製原液に対する
マウスンターフェロンーβの比活性へ は約１４倍に上昇し、純度９５％の精製標品が得られた
。
は９５％まで精製された。この結果、精製原液に対する
マウスンターフェロンーβの比活性へ は約１４倍に上昇し、純度９５％の精製標品が得られた
。
Claims (2)
- （１）マウスインターフエロン溶液を、シリカ系吸着剤
に接触させる工程、該吸着剤への吸着物を溶出剤んいて
溶出させる工程、この溶出液を陽イオン交換体に接触さ
せる工程、該交換体への吸着物を溶出剤にて溶出させる
工程からなるマウスインターフエロンの精製法。 - （２）シリカ系吸着剤への吸着物を溶出させる溶出剤が
ｐＨ４〜６の緩衝液である特許請求の範囲第（１）項記
載の精製法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP60091011A JPS61249397A (ja) | 1985-04-30 | 1985-04-30 | マウスインタ−フエロンの精製法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP60091011A JPS61249397A (ja) | 1985-04-30 | 1985-04-30 | マウスインタ−フエロンの精製法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS61249397A true JPS61249397A (ja) | 1986-11-06 |
Family
ID=14014591
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP60091011A Pending JPS61249397A (ja) | 1985-04-30 | 1985-04-30 | マウスインタ−フエロンの精製法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS61249397A (ja) |
-
1985
- 1985-04-30 JP JP60091011A patent/JPS61249397A/ja active Pending
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