JPS61246146A - エイコサペンタエノイルグリセライド含有脂質低下剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は新規なエイコサペンタエノイルグリセライド、
更に詳細には、次の一般式（Ｉ）ルＣ−０−Ｒ。

ＨＣ−０−Ｒ，（Ｉ） 鴇Ｃ−０−Ｒ。

（式中、Ｒ，−鳥及びＲ８の少なくとも２つはエイコサ
ペンタエノイル基を示し、残余は水素原子を示す） で表わされるエイコサペンタエノイルグリセライドに関
する。

〔従来の技術およびその問題点〕

従来、次式（旧 で表わされるエイコサペンタエン酸（以下ｒＥＰＡ」と
称する）が人体における血漿コレステロールを低下させ
る作用を有し、血栓症の予防もしくは治療に使用できる
ことが知られている。

また、ＥＰＡはサバ、イワシ、タラ等の水産物油脂中に
グリセライドとして含有されているが、このグリセライ
ドは１個のＥＰＡと２個の他の脂肪酸とからなるトリグ
リセライドである。従って、天然の斯かるトリグリセラ
イドを、ＥＰＡの有効量において投与すると、他の脂肪
酸のために多量のカロリーを与える結果となり、栄養過
多を惹起するという問題があった。

従って、斯かる欠点を克服するものとして、近年、２個
のＥＰＡと１個の他の脂肪酸とからなるトリグリセライ
ドが提案された（特開昭５９−１９０９４８号）。

しかし、これも依然として１個の脂肪酸が存在し、上記
問題点は完全には解決されていない。

〔問題点を解決するだめの手段〕

斯かる実状において、本発明者は上記問題点を解決せん
と鋭意研究を行った結果、ＥＰＡのジグリセライド及び
トリグリセライドが経口投与において、吸収性がよく、
優れた脂質低下作用及び血小板凝集抑制作用を示すこと
を見出し、本発明を完成した。

すなわち、本発明は上記一般式（１）で表わされるエイ
コサペンタエノイルグリセライド（以下［ＥＰＡＧ　Ｊ
と称する）を提供するものである。

本発明のＥＰＡ−Ｇとしては次のものが挙げられる。ト
リエイコサペンタエノイルグリセライド〔ＥＰＡ−ＴＧ
：） １．２−ジ（エイコサペンタエノイル）グリセライド［
１，２−ＥＰＡ−ＤＣ］ １．３−ジ（エイコサペンタエノイル）グリセライド（
１、３−ＥＰＡ−ＤＧ　’１ 本発明のＥＰＡＧは例えば、次の反応式に従ってＥＰＡ
（ｎ）をハロゲン化してＥＰＡ−ハロゲニド（Ｉ）とな
し、これにグリセリンを反応させることにより製造され
る。

（Ｒはエイコサペンタエノイル基を、Ｘはハロゲン原子
を示し２、Ｒ，、Ｒ，、Ｒ３は前記の意味を有する）原
料のＥＰＡは、例えば特開昭５８−８０３７号に記載の
方法によって得られたＥＰＡ−エチルエステルをエタノ
ール中苛性カリで分解することにより高純度のものとし
て得ることができる。

ＥＰＡのハロゲン化は、自体公知の方法によって行うこ
とができる。例えばノ・ロゲン化剤としてオキザリルク
ロライドを使用し、６５〜９０℃の温度で４時間反応を
行えばＥＰＡ−クロライドが得られる。

ＥＰＡ−ハロゲニド（１１とグリセリンとの反応は、ク
ロロホルム等の溶媒中、キノリン、ピリジン等の塩基の
存在下、数時間加熱還流することによって行われる。Ｅ
ＰＡ−ハロゲニドはグリセリンの３倍モル以上を使用す
る。

このようにして得られる反応生成物は、ＥＰＡ−ＴＧ、
１．２−ＥＰｈ−ＤＧ及び１．３−ＥＰＡ−ＤＣの混合
物であるが、これは後述の実施例に示す如く、シリカゲ
ルカラムクロマトグラフィーによりＥＰＡ−ＴＧとＥＰ
Ａ−ＤＧ　（１，２一体と１，３一体の混合物）とに分
けて収得することができる。そしてこれらの比は約１＝
１である。

ＥＰＡ−ＴＧ及びＥＰＡ−ＤＧの物性は第１表のとおり
である。

第１表 〔作用〕 次にＥＰＡ−ＴＧ及びＥＰＡ−ＤＧの生物学的活性を示
す。

実験１　急性毒性（マウス） （１）実験方法 体重２５〜３０ｙ−の４週令の雌雄のＳＩＣ：ＩＣＲ系
マウスを１群１０匹として、ＥＰＡ−ＴＧ又はＥＰＡ−
ＤＧを経口（ｐＯ）または腹腔内投与（ｉｐｌＬ、投与
後７日間観察し、その間の急性中毒症状および致死効果
の有無を調べた。

（２）　　実験成績 経口投与：雌、雄ともにＥＰＡ−ＴＧ又はＥＰＡ−ＤＣ
２５Ｐ／ｋｌ？ｐ　Ｏ後７日間内に死亡したものは１例
も無く、急性中毒症状についても投与１日後に下痢が見
られたが投与３日〜４日後に正常に復し、それ以外の変
化は見られなかった。

腹腔内投与：雌、雄ともにＥＰＡ−ＴＧ　１０５４／ｋ
ｇｉｐ後７日間内に死亡したものは１例も無く、著明な
急性中毒症状を発現したものも無かった。

（３）結論 ＥＰＡ−ＴＧ及びＥＰＡ−ＤＧのマウスにおける致死量
は雌、雄共に経口投与（ｐＯ）の場合、２５　）／に！
９以上であり、腹腔内投与（ｉｐ）の場合、ＩＯＰ／に
９以上である。

実験２　血清中脂質低下作用（ラット）（１）実験方法 体重２００１前後の雄のＳＤ系ラットを１群７匹とし、
ＥＰＡ−ＴＧｏ、５Ｐ／ｋ１９又はＥＰＡ−ＤＣｏ、７
５ｙ−／ｋｌ？、サフラワー油ｓ、ｏＰ／ｋｇ、対照と
して精製水５．０５’／に９をそれぞれ３０日間、連日
経口投与（’Ｉ）　ＯＩ　したのち、採血し血清中の脂
質濃度を測定した。

血清中の脂質濃度は次の測定用試薬を使用し、自動分析
装置（日立７０５）により測定した。

総コレステロール：コレステロール７０５「ニツスイ」
（日水製薬） リン脂質ニリン脂質−７０５「ニツスイ」（日水製薬） トリグリセライド：トリグリセライド−７０５「ニツス
イ」（日水製薬） 遊離脂肪酸、ＮＥＦＡ−Ｃセット「ニツスイ」（日水製
薬） （２）　　実験成績 第１表に示した様に、ＥＰＡ−ＴＧｏ、５５’／に９及
びＥＰＡ−ＤＣＯ，７５１ｉｔ−／ｋｇのｐＯｏにより
血清中の総コレステロール、リン脂質濃度は有意に低下
した。一方すフラワー油５．０５１−／にρでは総コレ
ステロール、リン脂質濃度に著明な変化は見られなかっ
た。血清中トリグリセライド濃度はＥＰＡ−ＴＧ及びＥ
ＰＡ−ＤＧｉ、サフラワー油投与群とも変化なく、血清
中遊離脂肪酸濃度はＥＰＡ−ＴＧ及びＥＰＡ−ＤＣ群、
サフラワー油群とも対照群に比し減少傾向がみられた。

以下余白 実験３　高脂血動物における血清中脂質低下作用（ラッ
ト） （１）実験方法 ウィスター系の雄性ラットを１群１０匹とし、被検薬投
与開始の２週間前より下に示す高コレステロール食を摂
取させておきながら、被検薬を８週間、連日経口投与（
ｐｏ）したのち採血し、血清中の総コレステロール濃度
および遊離コレステロール濃度を実験２と同様の方法で
測定した。

高コレステロール食の処方 ミルクカゼイン　　　　　　１８．０（創ショ糖　　　
　　　　　　６１．０ セルロース　　　　　　　　　４．０ 硬化植物油　　　　　　　　１０．０ ミネラル類　　　　　　　　　４．０ ビタミン類　　　　　　　　　λ０ コレステロール　　　　　　　０．５ コール酸ソーダ　　　　　　０．５ （２）実験成績 第２表に示し九様にＥＰＡ−ＴＧ６〜／に９又。

はＥＰＡ−ＤＧＩＯ〜／ゆのｐＯにより高コレステロー
ル食摂取による血清中総コレステロール、遊離コレステ
ロール濃度の上昇は著明に抑制された。また正常食群に
おける血清中遊離コレステロール濃度もＥＰＡ−ＴＧ６
０ｒｎｇ／ｋｌ？又はＥＰＡ−ＤＧ９０Ｉｎｇ／に９ｏ
ｐ　Ｃ１により低下した。

以十余自 実験４　血小板凝集抑制作用（ウサギ）ｔｌ）　　実験
方法 体重２．０　ｋｇ前後の健康な雄の家兎を１群４匹とし
、コレステロール０．５チを添加した飼料（オリエンタ
ルｆｉＲｃ−４１により飼育した。

ＥＰＡ−ＴＧは２００１ｎ９／に９、ＥＰＡ−ＤＧ３０
０■／ｋｌ？を４週間、連日経口投与（ｐｏ＋した。４
週間経過後耳静脈より採血し、血小板凝集能しよう（Ｐ
ＲＰｌｉ作製し、理化電機製［アブリボメーターＪ　（
ＡＵＴＯＲＡＭ−２１型）を用い、コラーゲンＬ２５μ
Ｖ−による血小板凝集能を測定した。

（２）　　実験成績 第３表および第３図のとと（ＫＰＡ−ＴＧ又はＥＰＡ−
ＤＧ投与群では無処置群に比し、血小板凝集能は著明に
抑制された。

以下余白 第　　３　　表 ＊：　　ｐ＜ｏ、ｏｓで有意差を示す。

実験５　喘息発作の予防効果 ｔｌ）　　実験方法 ３０才から５５才の季節性の認められない男性喘息患者
８例中５例にＥＰＡ−ＴＧＯ１９？／日を、残りの３例
にＥＰＡ−ＤＧｔ、ｓＰ／日をソフトカプセルの形で連
日経口投与し、喘息発作の発現に対する影響を調べた。

（２）実験成績 ＥＰＡ−ＴＧの場合には、投与した患者５例中１例はＥ
ＰＡ−ＴＧ投与開始の４チ月前よりプレドニ７５　’１
１９を毎日内服していたが、ＥＰＡ−ＴＯ投与開始後１
ケ月で喘息発作の発現回数が減少し始め、３チ月後には
プレドニンから離脱することが出来た。別な１例はＥＰ
Ａ−ＴＧ投与開始３ケ月近くなって発作回数の減少が著
明となった。残りの３例はＥＰＡ−ＴＧＳケ月間連続投
与後も喘息発作発現に対し変化がみられず投与を中止し
た。

またＥＰＡ−ＤＧの場合には、３例の患者中２例はＥＰ
Ａ−ＴＧ投与開始１ケ月後より喘息発作の発現回数が減
少し、３チ月後にはほとんど発作が発現しなくなった。

残りの１例は３チ月投与後も発作発現の減少傾向が見ら
れなかったので、投与を中止した。

これによりＥＰＡ−ＴＧ及びＥＰＡ−ＤＧは喘息発作発
現に対し著明な予防効果を有することが判明した。

実験６　実験的腎炎に対する予防効果（ラット）（１）
実験方法 ６週令の雄ドンリュウ系ラットを１群１０匹とし、グラ
ソック（Ｇｌａｓａｏｃｋ　）らの方法〔ジャーナル・
オフ・エクスベリメンタル・メデイシｙ　（Ｊ、　ＦＸ
ｐ、　Ｍｅｄ、）　　１２７．５５５　　（１９６８）
）によりハイマン（Ｈｅｙｍａｎｎ　）腎炎を作製し、
この腎炎発現に対する′ＥＰＡ−ＴＧ及びＥＰＡ−ＤＧ
の予防効果を調べた。

ドンリュウ系ラットの尿細管の水不溶性画分２’Ｊｍ９
７個体を０．５　Ｗｔｌの７０イ／ドの完全アジュバン
トとともにラットの両側後肢の足岨皮下に注射して感作
し、感作翌日よりＥＰＡ−ＴＧ又はＥＰＡ−ＤＧｌ　０
０ダ／ＩＫ９を６週間連日経口投与し、尿たん自排出量
の変動を調べた。対照群には精製水０．１ｍ／／Ｊを被
検薬と同様に投与した。

尿たん自責は米松らの方法〔日薬理誌虹。

２９５　　（１９８３））　　により測定した。

（２）実験成績 第４表に示した様にＥＰＡ−ＴＧ及びＥＰＡ−ＤＧ１０
０ｒｎ９／）Ｃ９投与により感作６週後および８週後の
尿たん自排出量は有意に抑制された。

これによりＥＰＡ−ＴＧ及びＥＰＡ−ＤＧは自己免疫複
合体腎炎の進行に対し予防効果を有することが判明した
。

以下余白 実験７　実験的糖尿病に対する効果（ラット）＋１）　
　実倹方法 体重２０ｏｚ程度の雄のドンリュウ系ラットを１群５匹
とし、糖尿病発症グループにはｐＨ４，５のクエン酸緩
衝液に溶解したストレプトシトシン３０ｒｎ９．／１ｗ
を静注した。被検薬はストレプトシトシン静注の２４時
間前、１時間前および５時間後にそれぞれ経口投与した
。ストレプトシトシン静注の２４時間後に静脈血を採取
し、酵素法によるグルコース測定用試ｆｉＶ−ＧＬＵ−
Ｃセット「ニツスイ」（日永製薬）を用い、自動分析装
！（日立７０６型）により測定した。

（２）実験成績 第５表に示した様に、ＥＰＡ−ＴＧ又はＥＰＡ−ＤＧｔ
ＯＯｍ９／に９経口投与によりストレプトシトシン糖尿
病は著明に抑制された。

これによりＥＰＡ−ＴＧ及びＥＰＡ−ＤＧはストレプト
シトシン糖尿病発症の予防ならびに進行抑制効果を有す
ことが判明した。

第５表 ＊：　Ｂ群との間の有意差を示す（Ｐ（０，０５１血糖
値は平均値上Ｓ、Ｅ。

実験８　アジュバント関節炎に対する効果（ラット　） （１）実験方法 ドンリュウ系の雌の７週令のラットを１週間飼育したの
ち実験に使用した。フロイントの完全アジュパン）０．
０６ｒｌＬｔをラットの尾皮内に注射してアジュバント
関節炎を惹起した。被検薬はアジュバント注射の前日よ
り１日１回２１日間経口投与した。関節炎症状の評価は
アジュバント注射２および３週間後に四肢および両耳介
について関節炎スコアーにより実施した。

（２）実験成績 第６表に示した様にＥＰＡ−ＴＧ又はＥＰＡ−ＤＧ１０
０〜／ｋｌ？経口投与によりアジュバント注射２週後お
よび３週後の関節炎スコアーは著明に抑制された。これ
によりＥＰＡ−ＴＧ及びＥＰＡ−ＤＧはアジュバント関
節炎の進行発症に対し予防効果を有すことが判明した。

第　　６　　表 〔発明の効果〕 以上の実験から明らかな如く、本発明のエイコサペンタ
ノイルグリセライド（Ｉ）は、極めて毒性が低く、優れ
た血清中脂質低下作用、血小板凝集抑制作用を有し、高
脂血清に由来する種々の疾病の治療及び予防に有効であ
る。

〔実施例〕

次に実施例を挙げて説明する。

実施例Ｉ ＥＰＡ−エチルエステル４０　Ｐ　（０，１２１モル）
及び１０　％ＫＯＨエタノールＩ：ＫＯＨとして８．１
５％（０，１４５モル）〕を仕込み、Ｎ、ガス導入下（
１５０ｒＲ１／分）、７５〜７６．５℃で１時間還流し
た。反応物を室温まで冷却し、１０１　Ｈ（Ｊ水にてｐ
Ｈ２とし、無機塩が析出するので水５Ｑｍを加燥し、溶
媒を減圧下４０℃で留去し、油状のＥＰＡセ３５．９　
）　（収率９８．１　％　＋を得た。

実施例２ ＥＰＡ　３５．Ｉ　Ｐ　（０，１１６モル）にオキザリ
ルクロライド２９．５　？　（０，２３２モル）をＮ、
ガス導入下室温で滴下した。次いで６５〜７５℃で４時
間反応させ、反応後過剰のオキザリルクロライドをエバ
ポレータ〒で留去した。残留物を減圧下蒸留し、１４４
℃／１騙Ｈｌｉ’〜１８７℃／　２　ｍ　ＨＬ？の留分
をｚめＥＰＡ−クロライ）”　１８．７８　？　（収率
５０．４％＋を得た。

実施例３ グリセリン１．８１　％　（０，０１９７モル）、キノ
リン１０．８　Ｐ　（０，０８４モル）及びクロロホル
ム８０．１１を仕込み、これにＥＰＡ−クロライド１８
．０ＳＬ（０，０５６モル）を徐々に滴下した。これを
７２〜８０℃で３．５時間還流した。反応液を冷却後、
石油エーテル５４０ｄ中に注加し、０．５Ｎ−硫酸水溶
液３ＱＱｍＪを攪拌下加えて１０分間攪拌し、３０分間
静置した。分液し、その上層に５％炭酸カリウム水溶液
３００ｒｎｌを加え、分液した。上層に水３０ＯＮを加
え分液し、更に上層に飽和食塩水１００ｍ／を加えて分
液し、その上層を採取した。

これを無水硫酸マグネシウムで乾燥後エバポレーターで
石油エーテルを留去し、油状物１５．１５５’を得た。

シリカゲル５００ｙ−を特級ベンゼンを用いてガラスカ
ラムに充填し、これに上記油状物１０？を特級ベンゼン
１００１ｄに溶かしたものを注加した。

次いで同ベンゼン８Ａを用いて溶出し、３０ＯＮずつの
分画を採取した。この分画について、ＴＬＣ（キーセル
ゲル６０Ｆ□１．展開溶媒：ベンゼン、確認：Ｉ２ペイ
パー）により溶出物を確認し、同−溶水物を集め、減圧
下溶媒を留去し、次の物質を得た。

【図面の簡単な説明】

第１図はＥＰＡ−ＴＧの赤外線吸収スペクトル、第２図
はＥＰＡ−ＤＧの赤外線吸収スペクトル、第３図はＥＰ
Ａ−ＴＧ及びＥＰＡ−、ＤＧの血小板凝集抑制作用を示
す図である。 以上

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、次の一般式（ I ） ▲数式、化学式、表等があります▼（ I ） （式中、Ｒ＿１、Ｒ＿２及びＲ＿３の少なくとも２つは
   エイコサペンタエノイル基を示し、残余は水素原子を示
   す） で表わされるエイコサペンタエノールグリセライド。