JPS6123608A - 金属含有ポリアルデヒド微小球 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ［発明の背祭］ 無機金属のコロイド性粒子、例えば銀、金及びコバルト
のコロイド性粒子の合成については多数の文献に記載さ
れてきた。これ等の金属コロイドの表面はタンパク質を
強固に吸着する。このタンパク質−金属粒子は、細胞標
識、細胞分離及び診断といった多くの生物学的用途を有
している（カリスト１他［Ｃａｒｉｓ　Ｍ、］　、ネイ
チャー　［Ｎａｔｕｒｅ］２７０：５３４（１９７４）
　　；ポイントン、　Ｃ，Ｈ，他［Ｐｏｙｎｔｏｎ］、
ランセｙ　Ｉ〜［Ｌａｎｃｅｔ］　１：５２４（１９８
３年３月　５日）。

金属を含有する重合体微小球（マイクロスフェア、ｍ１
ｃｒｏｓｐｈｅｒｅ）の合成は幾つかの特許に開示され
ている。例えば１９７９年６月５日発行のイエン（Ｙｅ
ｎ）他による米国特許Ｎｏ、４，１５７，３２３号の第
２列。

３７〜５６行及び第６列、２２〜３８行、１９８１年５
月１２日発行のレンボウム（Ｒｅｍｂａｕｍ）他による
米国特許Ｎ０１４□２６７、２３５号の第２列、４２〜
４６行、第３列、３２〜３４行及び第３列５１行〜第４
列１０行、１９８３年１１月１日発行のレンボウムの米
国特許Ｎｏ、　４．４１３．０７０号の第３列６５行〜
第４列１行及び第６列１２〜４１行、並びに１９８２年
６月３０日に出願され、１９８３年１月２０日に発行さ
れたイエ−、ダ・リサーチ・アンド・デイヴエロプメン
ト社（Ｙｅｄａ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ　ａｎｄ　Ｄｅｖｅ
ｌｏｐｍｅｎｔＣｏ、　、　１．ｔｄ、　）の西独特許
出願Ｎｏ、　Ｐ３２２４４８４．３号等である。これ等
の金属含有微小球は重合化プロセスの間に金属を取り込
んで得られたものである。そのＪ：うにして生成された
鉄粒子を含有する重合体微小球は当初磁場を使用した細
胞分離に使用されていた。種々の金属を含有するポリア
ミノ微小球、例えば金属含有ポリビニルビリジンコボリ
マー微小球の合成は、１９８０年４月８日発行のレンボ
ウム他による米国特許Ｎｏ、４，１９７，２２０号の第
３列、３〜２０行、４１〜５０行及び第５列３１行、第
６列１０行に開示されている。

種々のタイプのポリアルデヒド微小球及びその合成は公
知である。例えばレンボウム他の米国特許Ｎｏ、４，２
６７．２３５号によるポリグルタルアルデヒド微小球、
西独特許出願ＮＯ，Ｐ３２２４４８４．３　　（塩基触
媒、酸化還元開始あるいは放射開始による）及びレンボ
ウムの米国特許Ｎｏ、　４．４１３．０７０　（放射開
始）のポリアクロレイン微小球、及び１９８３年２月２
５日にイエーグ・リサーチ・アンド・デイク“エロプメ
ント社により出願され１９８３年９月　７日に発行され
た欧州特許出願Ｎｏ、８３１０１８８３．３のアガロー
スカプセル化ポリアルデヒド微小球ビーズ等である。更
にポリアク０レイン微小球及びアガロース−ポリアクロ
レイン微小球ビーズは幾つかの文献、即ちマーゲル（Ｈ
ａｒｇｅｌ）、ビートラ−（Ｂｅｉｔｌｅｒ）及びオフ
ァリム（Ｏｆｆａｒｉｍ）　、イムノロジカル　コミュ
ン（Ｉｍｓ＋ｕｎｏｌｏｏｉｃａｌ　Ｃｏｍｍｕｎ、）
　１０（７）：５６７−５７５（１９８１）　：マーゲ
ル、インド・エンジ・プロト・レス・デブ（Ｉｎｄ、Ｅ
ｎｏ、Ｐｒｏｄ、Ｒｅｓ、Ｄｅｖ、）　２１：３４３−
３４８（１９８２）　；　マーゲル、ピートラ−及びオ
ファリム、ジエイ・セル・サイエンス（Ｊ、Ｃｅ１ｌ　
５ｃｉｅｎｃｅ）５６：１５７−１１５（１９８２）　
；　ｖ　−カス（Ｈａｒｃｕｓ）、オファリム及びマー
ゲル、バイオマット・メト・デブ、アート・オーダ（Ｂ
ｉｏｍａｔ、。

Ｈｅｄ、　Ｄｅｖ、　、＾ｒｔ、ｏｒｏ、）　１０（３
）：１５７−１１１（１９８２）　；　マーゲル、ＦＥ
ＢＳレターズ（ＦＥＢＳ　Ｌｅｔｒｅｒｓ）１４５（２
）：３４１−３４４（１９８２）及びマーゲル及びオフ
１リム、アナリット・バイオケム（Ａｎａｌｙｔ、Ｂｙ
ｏｃｈｅＩｌｌ、）　１２８：３４２−３５０　（１９
８３）に開示されている。

上記の特許及び特許出願の中で、米国特許Ｎｏ、４，４
１３，０７０号の第３列６２〜６４行及び第８列２１〜
３２行及び欧州特許出願Ｎｏ、８３１０１８８３．３号
第１２頁実施例２２はまた、種々の微小球を塩あるいは
他の金属含有化合物のキレート化に使用することを開示
している。マーゲル、ＦＥＢＳレターズ匣（２）：３４
１−３４４（１９８２）　　：マーゲル及びヒーシュ（
ｌｌｉｒｓｈ）　、バイオマット、メト・デブ、アート
・オーダ９（２）：１０９−１２５（１９８１）及びマ
ーゲル、ジエイ・メト・ケム（Ｊ、Ｈｅｄ、Ｃｈｅｍ、
）　２４（１０）：１２６３−１２６６（１９８１）も
参照。

しかしながらこれまで元素状金属を含有し、アミノリガ
ンドによる微小球の有用な誘導化に使用できるアルデヒ
ド基を含有する重合体微小球は開示されていなかった。

それ故、本発明の目的は、そのような金属含有ポリアル
デヒド微小球を提供することである。また本発明のもう
１つの目的は、そのような微小球の調製方法を提供する
ことである。さらにそれ等の微小球の種々の用途への使
用方法も本発明の範囲である。

［発明の要旨コ 本発明による金属含有ポリアルデヒド微小球は遷移金属
が元素形状で結合したポリアルデヒド微小球により成る
。該ポリアルデヒド微小球はアガロース中にカプセル化
されていてもよく、該ポリアルデヒドは好ましくはポリ
アクロレインあるいはポリグルタルアルデヒドである。

好ましい遷移金属は金、銀、白金、パラジウム、テクネ
チウム、鉄、ニッケル及びコバルトである。金属は放射
性同位体でもよく、磁性を有していてもよい。本発明の
金属含有ポリアルデヒドは微小球はそれに結合する少な
くとも１つの第１アミン基を持つ化合物を付加的に有し
ていてもよい。該化合物は薬剤、抗体、抗原、酵素ある
いは他のタンパク質であり得る。好ましい具体例におい
ては、該化合物は抗体である。　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　１１つの具体例において遷
移金属は、ポリアルデヒド微小球を適切な条件下で充分
な時間、適当量の該金属の塩あるいは酸と接触させ、微
小球のアルデヒド基により遷移金属の塩または酸をより
低価の状態に還元し、微小球に結合させる方法により一
ホモポリアルデヒド（ｈｏｍｏｇｅｎｅｏｕｓ　ｐｏｌ
ｙａｌｄｅｈｙｄｅ）微小球に結合させ得る。ポリアル
デヒド微小球はアガロース中にカプセル化されていても
よく、好ましくはポリアクロレインあるいはポリグルタ
ルアルデヒドより成るホモ微小球である。好ましい遷移
金属は金、銀、白金、パラジウム及びそれ等の放射性同
位体である。堤状で好ましい具体例においては遷移金属
の塩あるいは酸の□□□は微小球の乾燥重量の約１〜６
倍である。本方法での至適条件としてｐＨ値は約２〜１
０．温度は約７０℃以下である。反応に充分な時間は、
金属化合物及び使用する反応温度に依存しており、短く
て１時間、長い場合は３ケ月である。金及び銀のように
、金属が元素状態まで還元される場合もある。他の場合
で元素状態まで還元を行なうか、あるいはより短い時間
で還元を終了させるために、微小球に結合した塩あるい
は酸を効果的な還元条件下で適当間の適当な還元剤に接
触させる。還元剤は例えば微小球の乾燥重量の約２倍回
の水素化ホウ素ナトリウムである。水素化ホウ素ナトリ
ウムを使用する場合の効果的な還元条件は温度が０〜２
５℃、例えば４℃であり、適当な時間は約１〜３時間で
ある。

他の具体例においては、ポリアルデヒド微小球を少なく
とも１つの第１アミン基を有する化合物と該化合物と微
小球が結合し得るような適当な条件下で接触させ、該化
合物を適当量の適当な遷移金属の塩あるいは酸と該化合
物が該塩あるいは酸と錯体を形成し得るような適当な条
件下で接触ざゼ、元素状金属に対応する塩あるいは酸を
効果的な還元条件下で充分な量の効果的な還元剤、例え
ば水素化ホウ素ナトリウムと充分な時間接触させて還元
することにより、元素状遷移金属をポリアルデヒドに結
合する。前記化合物は微小球に結合し得、遷移金属の塩
あるいは酸と錯体を形成し得るものである。

本方法に使用するポリアルデヒド微小球はまたアガロー
ス中にカプセル化されてもよく、また好ましくはポリア
クロレインあるいはポリグルタルアルデヒドより成る。

好ましい遷移金属は金、銀、白金、パラジウム、テクネ
チウム、鉄、ニッケル及びコバルトであり、放射性同位
体であってもよくあるいは磁性を有していてもよい。微
小球と結合し得、遷移金属の塩あるいは酸と錯体を形成
し得る現状での好ましい化合物はデフエロキサミン、ヘ
キザンジアミン、ポリアクレイン及びＮ。

Ｎ−ジエヂルエチレンジアミンであり、微小球の乾燥重
量の約１０〜１５０％の燵が適当である。

本方法で使用する塩あるいは酸の適当量は微小球の乾燥
重量の約４０〜１５０％の爪である。化合物が微小球に
結合するための適切な条件としては、ｐＨ値が約３．０
〜１１．０及び温度が約７０℃以下、例えば６０℃であ
る。化合物が塩あるいは酸と結合し得るための適切な条
件として温度は室温から約４０℃までである。本方法に
おける効果的な還元剤は水素化ホウ素ナトリウムであり
、微小球の乾燥重量の２倍重崖が充分な量である。水素
化ホウ素ナトリウムを本方法で使用した場合の効果的な
還元条件としては温度が約０〜１０℃、例えば４℃であ
り充分な時間は少なくとも約１時間である。

このようにして本発明の方法により金属含有ポリアルデ
ヒド微小球が得られ、それ等は磁性を有していてもよく
放射活性標識されていてもよい。

微小球は少なくとも１つの第１アミン基を有する化合物
をｆ４加的に結合していてもよく、該化合物は例えば薬
剤、抗体、抗原、酵素あるいは他のタンパク質である。

本発明の１つの具体例は、付加的に例えば抗体のような
表面に結合した化合物を右する金属含有ポリアルデヒド
微小球に細胞を接触させることがら成る細胞の標識方法
であり、該化合物は例えば抗体のような適切な条件下に
細胞に結合し得るものである。

他の具体例の１つは、適当な条件下において所望タイプ
の細胞と結合し得る化合物、例えば抗体を結合した本発
明の有磁性微小球と細胞を接触させ、有磁性微小球に結
合した細胞を回収することから成る、１つのタイプの細
胞を他のタイプの細胞から分離する方法である。

他の具体例の１つは、生物学的液体中で疾病に関連する
因子の存在を検知する方法であって、適切な条件下で前
記因子と反応し得る抗体を結゛合した本発明の微小球と
前記液体を接触させ、反応の生起を検知することから成
るものである。

更に他の具体例は、遷移金属により触媒され得る化学反
応を触媒する方法であって、有効触媒量の金属を含有す
る本発明のポリアルデヒド微小球の存在下に反応を行な
うことがら成るものである。

まＩＣもう１つの他の具体例は、種々の支持物を金属含
有微小球でコーティングする方法であって、適当な溶媒
中の微小球の懸濁液を調製し、該懸濁液で支持物をコー
ティングし、溶媒を蒸発させることから成るものである
。

［発明の詳細な説明］ 本発明により、元素状の遷移金属が結合したポリアルデ
ヒド微小球より成る金属含有ポリアルデヒド微小球が得
られる。１つの具体例においては該微小球はアガロース
中にカプセル化されている。

このタイプのアガロースカプセル化ビーズは約４０〜１
２００μの直径を有しており、血液血清のような鋭敏な
生物学系に適合し得る。

本発明に適したポリアルデヒドは数多く種々あるが、粉
末あるいは微小球形状として調製し得、好ましくは約０
．０１〜１００μの直径を有する微小球として調製し得
るポリアルデヒドは全て包含する。特に好ましいものは
約０．０４〜５．０μの直径を有する微小球である。好
ましくはポリアルデヒドはポリアクロレイン、ポリメタ
アクロレイン、ポリクロトンアルデヒドあるいはポリグ
ルタルアルデヒドである。ポリアクロレイン及びポリグ
ルタルアルデヒドが特に好ましい。当業者に公知のポモ
ポリマー・及びコポリマー、例えばコモノマーとしてア
クリレート、アクリルアミド、ビニルピリジン及びそれ
等の誘導体とのものが本発明の使用に適している。しか
しながらポリアルデヒドはホモポリマーであることが好
ましい。

本発明の微小球に元素状で結合する、ここでの好ましい
遷移金属は金、銀、白金、パラジウム、テクネチウム、
鉄、ニッケル及びコバルトである。

該金属は放剣活性同位体であってもよく、磁性を有して
いてもよい。

本発明の１つの具体例において、金属含有ポリアルデヒ
ド微小球はその表面に結合する少なくとも１つの第１ア
ミン基を持つ化合物を付加的に右している。

微小球の使用目的に依り、該化合物は薬剤、抗体、抗原
、酵素あるいは他のタンパク質であって心良い。特に血
清及びモノクローナル抗体を含めた抗体の場合、本発明
の微小球に結合すると細胞。、ヨ。、１ツ。才力□い７
．１．。１１医学的用途に有用な試薬が得られる。この
ような微小球はまた磁性を有していてもよい。生物学的
応用において鋭敏な生化学系の存在下では高酸化状態の
金属よりもより不活性な元素状金属の存在が有利である
。

本発明の金属含有微小球の調製には２つの一般的方法が
ある。所望遷移金属の塩あるいは酸を予じめ調製したポ
リアルデヒド微小球に結合し、金属部分を金属の元素状
態に還元することは、その両方の方法に含まれる。これ
は金属化合物の存在下で重合化を行ない、そこで金属化
合物を猶小球中に取り込んで生成される従来技術の金属
含有微小球の製造方法との差異である。本発明の方法に
より、過度に複債ｌな手順なしに、また重合化反応混合
物に対する望ましくない副反応の可能性を伴なうことな
く、多くの種々の金属を微小球に結合することができる
。

本発明の、ポリアルデヒド微小球に遷移金属を結合する
１つの方法は、適当な条件下で充分な時間、適当量の適
当な遷移金属の塩あるいは酸とポリアルデヒド微小球を
接触させ、微小球のアルデヒド基により該塩あるいは酸
をより低価の状態に還元し、微小球に結合させることか
ら成る。

本発明の本具体例あるいは他の具体例に使用するのに適
した微小球は、アガロース中にカプセル化されたポリア
ルデヒド微小球であって、例えば下記に開示されている
ようなものである。即ち、マーカス、オファリム及びマ
ーゲル、バイオマット、メト・デブ、アート・オーグ旦
（３）　＋１５７−１１１（１９８２）　；マーゲル、
ＦＥＢＳレターズユ旦（２）：３４１−３４４（１９８
２）　　；マーゲル及びオファリム、アナリティカル・
バイオケム（＾ｎａｌｙｔｉｃａｌ　Ｂｉｏｃｈｅｍ、
）１２８：３４２−３５０（１９８３）及び１９８３年
２月２５日出願、１９８３年　９月　７日発行のイエー
ダ・リサーチ・アンド・デイグエロ・プメント社の欧州
特許出願Ｎｏ、　８３１０１８８３．３号に開示のもの
である。

本発明の本具体例及び他の具体例に使用するのに適した
ポリアルデヒドは数多く種々あるが、微小球形状に調製
し得るもの、好ましくは約０．０１〜１００μの直径を
有するように調製し得るものを全て包含する。特に好ま
しいものは約０．０４〜５．０μの直径を有する微小球
である。

ポリアルデヒドは好ましくはポリアクロレイン、ポリメ
タアクロレイン、ポリクロトンアルデヒドあるいはポリ
グルタルアルデヒドである。ポリアクロレイン及びポリ
グルタルアルデヒドが特に好ましい。

本発明に使用するのに適したポリアクロレイン及びポリ
アクロレイン型微小球は下記に開示の方法により得られ
る。即ち、マーゲル、ビートラー及びオファリム、イム
ツル・コミュニケーションズ（ＩｍＩｌｌｕｎｏｌ　Ｃ
ｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ）１０（７）：５６７−５
７５（１９８１）：マーゲル、ビートラ−及びオファリ
ム、ジエイ・セル・サイ（Ｊ、Ｃｅ１ｌ　Ｓｃｉ、）　
５６：１５７−１１５（１９８２）　：マーグル、イン
ド・エンジ・ケム・プロト・レス・テア　２１　：３４
３−３４８（１９８２）　；　１９８２年６月３０日出
願、１９８３年　１月２０日発行のイエーダ・リザーチ
・アンド・デイウ″エロプメン１〜社の西独特許用！ｊ
ＲＮｏ、　Ｐ３２２４４８４．３号及び１９８１年３月
３０日出願、１９８３年１１月　１日発行のレンボウム
の米国特許Ｎｏ、４，４１３，０７０号に開示された方
法である。

ポモポリマー微小球及びコポリマー微小球共に本発明に
使用するのに適している。コポリマーポリアクロレイン
微小球及びその調、製は、西独特許出願公告ｐ３２２４
４８４．３号及び米国特許Ｎｏ、４，４１３，０７０号
に開示されており両者とも前記に引用した。しかしなが
ら、ここでの好ましいものはホモポリマー微小球である
。　　　　　　　　　　　　　　　　　　　１本発明に
使用するのに適したポリグルタルアルデヒド微小球は１
９７９年３月１９日出願、１９８１年５月１２日発行の
レンボウム及びマーゲルの米国特許Ｎｏ４，２６７．２
３５号の方法により得られる。

本方法により使用する好ましい遷移金属は金、銀、白金
及びパラジウムである。金属は放射性同位体であっても
よい。これ等の金属の適当な塩あるいは酸でうまく、還
元されるものとしては、例えばＮａＡｕＣｕ　　あるい
はＨＡｕＣｕ４、特にＮＨ３を伴なうＡｑＮＯ３、Ｈ２
ＰｔＣ！２６及びＰｄＣρ２である。

金属含有ポリアルデヒド微小球の合成において、遷移金
属の塩あるいは酸の適当量は、微小球にどれだけの金属
を結合することを所望するかということに依存するが、
それはさらにその微小球の用途に依存する。例えば、微
小球にわずかな放射活性標識を与えたい場合は、相対的
に少量の放射性同位体を使用し得る。微小球により強く
放射活性標識をするとぎ、あるいは着色するとき、ある
いは特に電子密度を所望するときは相対的に多量の適当
な金属原料を使用することができる。いずれにしても、
本方法は金属原料の広範な濃度範囲に渡って行なうこと
ができる。ただ金属原料と反応するアルデビト基の各微
小球に含まれる数に限りがあるということにのみ制限さ
れるだけである。

ここでの好ましい具体例において、遷移金属の塩あるい
は酸の適当量は微小球の乾燥重量の約１〜６倍である。

１１１１様に、金属含有微小球の調製において広範囲な
反応条件が使用できる。例えばｐＨ値は本発明のいくつ
かの好ましい具体例において、約２〜１００間で選択さ
れ、反応温度は約７０℃以下である。金属原料とポリア
ルデヒド微小球の反応のための充分な時間は、塩あるい
は酸に特異的に依存するが短くて１時間、長くて３ケ月
である。反応温度を高くすると一般に反応時間を短縮し
得る。

反応の進行は、ポリアルデヒド微小球の存在下で金属の
塩あるいは酸が還元されることを示す変色を観察するこ
とにより質的に監視できる場合が多い。観察される変色
が含有される金属に特異的に依存するであろうことは、
通常の当業者が理解できることであろう。例えば、銀、
パラジウム及び白金は黒色の微小球を生成し、金は紫色
の微小球を生成する。

例えば銀及び金化合物のように、上記の方法によって金
属が元素状態まで還元され得る場合もある。その他の場
合において還元を完遂するため、即ち元素状態まで還元
するため、あるいはより短詩間で還元を完遂するために
、微小球に結合した部分的に還元された金属塩あるいは
酸を、効果的な還元条件下で適当量の適切な還元剤に接
触させ得る。適当な還元剤は、例えば水素化ホウ素ナト
リウム（ＮａＢＨ４）のような水素化ホウ素剤である。

水素化ホウ素剤の至適伍は還元所望金属の聞及び酸化状
態に依存する。ここでの好ましい具体例においては水素
化ホウ素ナトリウムの至適■は、微小球の乾燥重量の約
２倍である。水素化ホウ素還元の至適条件は、温度が０
〜２５℃、例えば４℃であり、適当な時間は約１〜３時
間である。

本発明のもう１つの方法においては、ポリアルデヒド微
小球を少なくとも１つの第１アミン基を有する化合物の
適当式と該化合物と微小球が結合し得るＪ：うな適当な
条件下で接触させ、該化合物を適当な遷移金属の塩ある
いは酸の適当はと該化合物が該塩あるいは酸と錯体を形
成し得るような適当な条件下で接触させ、元素状金属に
対応する塩あ。い、よ酸、効果的な、元条件、１充分４
．）Ｉ効果的な還元剤と充分な時間接触させて還元する
ことにより、元素状遷移金属をポリアルデヒドに結合す
る。前記化合物は微小球に結合し得、遷移金属の塩ある
いは酸と錯体を形成し得るものである。

アガロース中にカプセル化されたポリアルデヒド微小球
もまた本方法の使用に適している。そのようなアガロー
スカプセル化微小球は例えばマーゲル、アナル・バイオ
ケム（Ａｎａｌ、Ｂｉｏｃｈｅｍ）１２８：３４２−３
５０（１９８３）及び欧州特許出願公開Ｎｏ、　８３１
０１８８３．３に開示されている。適したポリアルデヒ
ドは前述したような、即ち微小球形状に調製し得るもの
、好ま１くは約０．０１〜１００μの直径を有するよう
に調製し得るものである。特に好ましいものは約０．０
４〜５．０μの直径を有する微小球である。ポリアルデ
ヒドは至適にはポリアクロレイン、ポリアクロレイン、
ポリクロトンアルデヒドあるいはポリグルタルアルデヒ
ドであり、例えば前記に引用したマーゲルあるいはレン
ボウムあるいは両者の文献、特許及び出願公開に開示　
　４されたものである。ここではポリアクロレイン及び
ポリグルタルアルデヒドが好ましいポリアルデヒドであ
る。ポリアルデヒド微小球はホモポリマー、コポリマー
井水方法での使用に適しているが、ホモポリマー微小球
がより好ましい。

好ましい遷移金属は金、銀、白金、パラジウム、テクネ
チウム、鉄、ニッケル及びコバルトである。

金属は放射性同位体でもよく、磁性を有、していてもに
い。

本方法に使用するのに適した化合物はポリアルデヒド微
小球に結合し得、遷移元素の塩あるいは酸ど錯体を形成
し得るものである。好ましくは少なくとも１つの第１ア
ミン基を有する化合物で、例えばデフエロキサミン（あ
るいはデスフェラル［ｄｅｓｆｅｒａ　Ｉ　］　、その
メシル塩）であり、あるいはヘキサンジアミンあるいは
Ｎ、Ｎ−ジエチルエチレンジアミンのようなジアミン、
あるいはポリエチレンイミンのようなポリアミンであっ
てもよい。

使用化合物の吊は微小球への結合所望金属量及び使用化
合物に特異的に依存して広範囲に変化し得る。現状での
好ましい具体例においてキレート化化合物の量は微小球
の乾燥重量の約１０〜１５０％であり、前述のように所
望誘導化程度に依存する。塩あるいは酸の至適量は微小
球に結合したキレート化化合物の量に依存する。ここで
の好ましい具体例においてその量は微小球の乾燥用ｌの
約４０〜１５０％である。該化合物が微小球に結合し得
る至適条件は比較的柔軟性がある。ここでの好ましい具
体例において至適ｐＨ値は約３．０〜１１．０であり、
反応温度は約７０℃以下である。

ある具体例においては湿度は約５０〜７０℃であり、例
えば６０℃で反応は一般に１２時間以内で完了する。

化合物と塩あるいは酸との錯体化は、微小球に結合した
化合物を適当（６）の適当な遷移金属の塩あるいは酸と
該化合物が塩あるいは酸と錯体化し得る適当な条件下で
接触させることによって行なう。

前記したように、ここでの好ましい具体例において塩あ
るいは酸の至適量は微小球の乾燥重量の約４０〜１５０
％である。化合物が塩あるいは酸に結合し得る至適条件
は微小球に結合した化合物及び錯体化すべき金属化合物
に依存して変化する。

好ましい条件は、温度が室温から約６０℃までであり、
例えば４０℃である。このようにして微小球に結合した
化合物と錯体化した塩あるいは酸を次に、効果的な還元
条件下で充分な時間、充分な量の効果的な還元剤と接触
させ、対応する元素状□、−ｃｍ、−６゜□□□、□、
い、　　１例えばＮａＢＨ４のような水素化ホウ素剤が
好ましい。ＮａＢＨ４の充分舟は還元所望金属の量と酸
化状態に依存する。ここでの好ましい具体例においては
ＮａＢ１−１４の母は微小球の乾燥重量の約２倍である
□。好ましい具体例における効果的な還元条件は、温度
が０〜２５℃、例えば４℃であり、反応完了のための充
分な時間は少なくとも約１時間である。

これ等の方法により、本発明の金属含有ポリアルデヒド
微小球が調製される。該微小球は放射活性あるいは磁性
を有していてもよく、また少なくとも１つの第１アミン
基を有する化合物を結合していてもＪ：い。例えば薬剤
、抗体、抗原、酵素あるいは他のタンパク質等のアミノ
化合物への結合は、金属含有微小球を７０℃までの温度
で約１２時間まで該化合物と接触させることにより容易
に達成できる。まＩＣ該化合物が温度の上昇に敏感な場
合は、例えば４℃のような低温中で約２時間で容易に行
なうことができる。また、第１アミン基を含む化合物は
同一の反応条件でポリアルデヒド微小球に結合し得るが
、但し遷移金属を微小球に結合する前にである。微小球
が金属塩あるいは酸と錯体化し冑る化合物を介して金属
と結合している場合、薬剤、抗体、抗原等は微小球に結
合する少なくとも１つの第１アミン基を有する第２の化
合物となり得ることを理解しておかねばならない。

本発明の金属含有微小球は種々の用途に有用である。本
発明の１つの具体例は細胞を標識する方法であって、適
当な条件下で細胞に結合し得る化合物を結合して有する
金属含有ポリアルデヒド微小球に細胞を接触させること
から成る。例えばマウスの牌細胞は、本方法を使用して
ヤギ抗マウス抗体を結合した０、１μの平均直径を有す
る金含有ポリアク日レイン微小球により標識し得る。該
牌柵胞は４℃で１時間該微小球と振盪することによって
標識される。本方法により標識された牌細胞は顕微鏡で
観察した場合暗赤色を示す。

またもう１つの具体例は１つのタイプの細胞を他のタイ
プの細胞と分離する方法である。該方法は、至適条件下
で所望タイプの細胞と結合し得る化合物を結合して有す
る本発明の有磁性金属含有ポリアルデヒド微小球と細胞
を接触させ、有磁性微小球に結合した細胞を回収するこ
とから成る。

好ましくは化合物は抗体である。本方法によりヤギ抗ウ
サギＩＱＧを結合した鉄含有ポリアクロレイン微小球を
使用してヒト赤血球細胞を七面鳥赤血球細胞から分離し
得る。本方法によると、まず七面鳥赤血球細胞とヒト赤
血球細胞との混合物をウサギ抗ヒト赤血球細胞抗体で処
即し、ヤギ抗つザギ誘導化微小球と共に振盪する。次に
混合物を磁場で分離する。本方法により有磁性微小球に
結合した細胞が分離され、分離された細胞の９５％以上
がヒト赤血球細胞であることが確認された。

さらにもう１つの本発明の具体例は、生物学的液体中に
おいて疾病に関連する因子の存在を検知するだめの診断
法である。本方法は、適当な条件下で前記因子と反応し
得る抗体を付加的に結合した本発明の金属含有微小球を
前記液体と接触させ反応の生起を検知することから成る
。本方法により、例えばウサギ抗ヒト絨毛膜ゴナドトロ
ピン抗体を結合した金含有微小球を使用して尿中のヒト
絨毛膜ゴナドトロピン（ＨＣＧ）を検知できる。

微小球結合抗体とＨＣＧとの尿中での凝集反応は懸濁液
の変色を生起し、その変色は分光光度的に測定し得、該
因子、即ちＨＣＧの存在と相関させ４りる。

さらに本発明の微小球の付加的な用途として、遷移金属
により触媒され得る化学反応を触媒する方法がある。本
方法に依れば、適当な元素形状の遷移金属を結合したポ
リアルデヒド微小球の有効触媒吊り存在下に該化学反応
を行なう。本方法によると、白金含有微小球の存在下に
室温、大気圧下において水素ガスによる二重結合の水素
化を行ない得る。

本発明の微小球にさらに別な用途として、金属含有ポリ
アルデヒド微小球により支持物をコーチ１゛ングづる方
法がある。本方法によれば、微小球の懸濁液は適当な溶
媒中に調製する。支持物を該懸濁液でコーティングし、
溶媒を蒸発させる。本方法により、遊離微小球の代りに
使用し得る様々の厚さのフィルムを調製し得る。

本発明を以下の実施例により説明する。記載した実施例
は本発明の理解の助とするためのものであり、前記の特
許請求の範囲に記載の本発明を何等制限するためのもの
ではなく、また制限すると解されるべきものでもない。

　　　　′実施例 ■ 後記の実施例において使用した種々のポリアクロレイン
及びポリアクロレイン型微小球は、Ｓ、マーゲル、イン
ド・エンジ・ケム・プロト・レス・テア２１：３４３−
３４８（１９８２）　：　Ｓ、マーゲル、Ｕ、ビートラ
−及びＨ，オファリム、イムツル・コミュン１０（７）
：５６７−５７５（１９８１）及びＡ、レンボウムの１
９８３年１１月月１に発行された米国特許Ｎｏ、４，４
１３，０７０号に記載の方法によって得られる。ここで
使用する“′アルカリ″、“放射′″及び゛酸化還元゛
′という用語は微小球の調製に使用した重合化方法を示
すものである。

ポリグルタルアルデヒド微小球は、Ａ、レンボウム及び
Ｓ、マーゲルの１９８１年５月１２日発行の米国特許Ｎ
ｏ、４．２６７．２３５号に記載の方法により得られる
。

アガロースカプセル化ポリアルデヒド微小球は、［、マ
ーカス、Ｈ，オファリム及びＳ、マーゲル、バイオマッ
ドメト・デブ、アート・オーダ１０（３）：１５７−１
１１（１９８２）　　；、Ｓ、マーゲル、ＦＥＢＳレタ
ーズ１４５　（２）：３４１−３４４及びＳ、ｖ−ゲル
及びＨ，オファリム、アナル・バイオケムＵ虹３４２−
３５０（１９８３）に記載の方法により得られる。

その他の材料は市販のものを購入した。

ＮａＡｕＣｕ４　、ＨＡｕＣｕ４及びハイドロキノン（
フルカ［ＦＩｕｋａ　］　ＡＧ１プツシ、１．　［Ｂｕ
ｃｈｓ　］ＳＧ）。ＡｇＮＯ３、ＣＯＣｌ２、Ｎｉｃ々
２、ＮａＢＨ４、Ｆｅ２　（ＳＯ４）３、プラチナブラ
ック及びヘキサンジアミン（アルドリッチ［へ１ｄｒｉ
ｃｈｌ、ミルウォーキー、ライスコンシン）、）−１２
Ｐｔｌ１６及びＰｄＣｕ、、（メルク［Ｈｅｒｃｋｌ、
ダルムシュタット、西独）、デフェロキサミン（チバ・
ガイギー［Ｃ１ｂａ−Ｇｅｉ（ＩＶコファーマシューテ
ィカル、バーゼル、スイス）、ポリエチレンイミン（ポ
リ勺イエンス［ＰＯ１ｙＳＣｉｅｎＣｅＳ］　、ワーリ
ントン、ペンシルバニア）、Ｎ、Ｎ−ジエチルエヂレン
ジアミン及びボビンセラムアルブミン（シグマ［Ｓｉｇ
ｍａ］、セントルイス、ミズーリ）、ヤギＩ　ＧＧ、ヤ
ギ抗マウスＩＯＧ、ヤギ抗ウサギＩｇＧ、抗Ｔｈｙｉ、
２、ヒト絨毛膜ゴナドトロピン及びウサギ抗ヒト絨毛膜
ゴナドトロピン（マイルス・イエダ［Ｈｉｌｅｓ　ｙｅ
ｄａ］　、レーボー、イスラエル）、エタノール及びポ
リ塩化ビニル（メルクロム［Ｆｒｕｔａｒｏｍ］　、ハ
イファ、イスラエル）、セファロース４Ｂ（ファーマシ
ア［Ｐｈａｒｍａｃｉａ］ファイン・ケミカル、ウプサ
ラ、スエーデン）。分光光度測定はユビコン［Ｌｌｖｉ
ｋｏｎ］　　８１０１コントロンスペクトロフオトメー
ター［Ｋｏｎｔｒｏｎ　５ｐｅｃｔｒｏｐｈ。

ｔｏｍｅｔｅｒ　］　、スイス、により測定した。

ト 特に指定しない限り、懸濁液及び溶液は全て水性である
。

金属コーティング微小球の調製 実施例１ 平均直径１μの単一分散″アルカリパポリアクロレイン
微小球（水２ｄ中５０μｇ）を５０■ＮａＡｕ（１４（
あるいはＨＡｕ（ｄ２４）を含有するｐＨ７，０の溶液
１００ａｌｌに加えた。混合液を室温で２週間振盪した
。この間に強く紫色に着色した。得られたコーティング
微小球を５００ｇ、１０分間の遠心分離で４回洗浄した
。その復水あるいはＰＢＳ中に再分散さ°ｌた。コーテ
ィング過程中に微小球のアルデヒド含有間は２．９　ｍ
ｍｏｌ／び微小球から２．１　ｍｍｏｌ／　ｇ微小球に
減少した。

１ｑられた微小球の金含有ハｌは９％（重量）であった
。

実施例２ 実施例１で記載したように調製した金コーティング微小
球を、１１００ＩＲのｘ　ａ　Ａ　Ｕ　ｃｓｉ　４（あ
るいは１−ＩＡｕ（１４）を含有１−ル１）ｔ−１１，
２（７）水溶液２００ｍに加えた。混合液をさらに２週
間室温で振盪した。強く紫色に着色した微小球を５００
０１１０分間の遠心分離で４回洗浄した。得られた金］
−ティング微小球のアルデヒド含有量はざらに１．４Ｉ
ＩＩＩＩ１０１／ｇ微小球に減少した。得られた微小球
の金含有量は１９％（重量）であった。ざらに金化合物
を添加すると（水５００ｄ中５００ｍ９、反応時間２週
間）、ごくわずかのアルデヒドを含有づ−る金コーティ
ング微小球が得られた。

支癒豆ユ ゛アルカリ″ポリアクロレイン微小球（直径１μ）に代
えて下記のポリアルデヒド微小球を使用して実施例１及
び２を反復した。直径０．１μ及び５μの゛アルカリ′
″ポリアクロレイン微小球（架橋及び非架橋）、平均直
径０．１μの゛放射″ポリアクロレイン微小球。平均直
径０．４μのポリグルタルアルデヒド微小球及び心的範
囲が４０〜２００μ及び８００〜１２００μのアガロー
ス−ポリアクロレイン微小球ビーズ。ポリアクロレイン
及びポリグルタルアルデヒド微小球は遠心分離で４回洗
浄した。アガロース−ポリアクロレイン微小球ビーズは
デカンテーションを反復することによって洗浄した。こ
れ等の微小球のアルデヒド含有量は実施例１及び２に示
したような割合で減少した。

実施例４ ６０℃、２４時間で実施例１を繰返した。同様のアルデ
ヒド含有量の微小球が得られた。

実施例５ １）Ｈ２，４で実施例１を繰返した。同様のアルデヒド
含有間の微小球が得られた。

実施例６ 水に代えて水性エタノール（１０％）溶液を使用して実
施例１を繰返した。同様のアルデヒド含有間の微小球が
得られた。

実施例７ ポリアクロレイン微小球に代えてポリアクロレイン粉末
を使用して実施例１，２及び４を繰返した。同様のアル
デヒド含有間が得られた。

支急五１ 平均直径０．１μを有する゛放射″ポリアクロレイン微
小球ｉｏｏＲｇ及び５μρのハイドロキノンを含有する
水性溶液５−に水２ｔｄ中の０．５ｇのＡｑＮＯ３を加
えた。水性アン七ニア溶液をｐＨ１０に達するまで徐々
に加えた。溶液を１時間振盪した。その後、銀コーテイ
ング微小球を２０００Ｇ、１０分間の遠心分離で３回洗
浄した。

微小球は０．０５％（重１／容量）ハイドロキノン含有
の水あるいはＰＢＳに再分散し得る。コーティング過程
の結果、これ等の微小球のアルデヒド含量は９　、３　
ｍｍｏｌ／　ｇ微小球から７．３ｍｍｏｌ／ｑ微小球に
減少した。得られた微小球の銀含有量は４０％（重Φ）
であった。

実施例９ パ放射゛微小球を下記のポリアルデヒド微小球に代えて
実施例８を繰返した。直径１μ及び５μの゛アルカリ″
ポリアクロレイン微小球、平均直径０．４μのポリグル
タルアルデヒド微小球及び直径範囲か４０〜２００μ及
び８００〜１２００μのアガロース−ポリアクロレイン
微小球ビーズ。

微小球は実施例３に記載したように洗浄した。これ等の
銀］−ティングビーズのアルデヒド含有量は実施例８に
記載したような割合で減少した。

実施例１０ 直径１μの単一分散パアルカリ″ポリアクロレイン微小
球（水２ｄ中５０■）を３００ＩｎｇのＨＰｔ（１２６
を含有するｐＨ７，０の水性溶液１００＃ｌｉ！に加え
た。混合液を室温で３ケ月振盪した。この間に強く黒色
に着色した。白金コーティング微小球を実施例１に記載
したように洗浄した。

コーティング過程の結果、微小球のアルデヒド含有量は
２　、９　ｍｍｏｌ／　ｇ、微小球から２．２ｍｍｏｌ
／７微小球に減少した。得られた微小球の白金含有量は
７％（重用）であった。

実ＪＩＩＡＪＬＬＩ ｐｌ−１２，０で実施例１０を繰返した。同様にアルデ
ヒド含有間が減少した。

′ＩＬＩＬ九１λ 実施例１０に記載した実験を４８時間で行なつ１、、：
。次に微小球を５００ｇ、１０分間の遠心分離で３回洗
浄した。その後微小球を水中に再分散さゼた。微小球上
に含有される金属を、微小球懸濁液に１００ｍｇＮａＢ
Ｈ４を加えることにより元素状態まで還元した。Ｎ　ａ
　Ｂ　ｌ−１４を加えることにより元素状態まで還元し
た。ＮａＢ）−１４との反応は４℃で３時間継続した。

その時微小球を実施例１に記載したように洗浄した。こ
れ等のコーティング微小球のアルデヒド含有量は、２．
９ｍｍｏｌ／ｇ微小球から２．３ｍｌ１ｌｏｌ／ｇ微小
球に減少した。

実施例１３ ＨＰｔＣρ６をＰｄ（１２に代えて実施例１０〜１２を
繰返した。得られた黒色のパラジウムコーティング微小
球はそれぞれ実施例１０〜１２のものど同様のアルデヒ
ド含有量を有していた。

実施例１４ 直径１μの“アルカリ″ポリアクロレイン微小球を下記
のポリアルデヒド微小球に代えて実施例１０〜１３を繰
返した。直径０．１μ及び５μの゛アルカリ″ポリアク
ロレイン微小球、平均直径０．１μのパ放射″ポリアク
ロレイン微小球、平均直径０．４μのポリグルタルアル
デヒド微小球及び直径範囲が４０〜２００μ及び８００
〜１２００μのアガロース−ポリアクロレイン微小球ビ
ーズ。微小球は実施例３に記載したように洗浄した。得
られたコーティングビーズのアルデヒド含有ｍは実施例
１０〜１３に記載したような割合で減少した。

実施例１５ 水５Ｉｄ中のｐＨ８，０の１００■゛アルカリ″ポリア
クロレイン微小球（直径３μ）を１１０１ｎデフ１１］
キサミン（鉄キレート化化合物）と共に６０℃で１２時
間振盪した。次に微小球を５００ｑ、１０分間の遠心分
離で３回洗浄し、誘導化微小球を５″′ｅ′７）水ある
ｖｓ　４に　Ｐ　Ｂ　Ｓ中に再懸濁しゞ・　　　　　ｊ
その後混合液に４０１ｔｇの硫酸第二鉄を加え、４℃で
１時間振盪した。得られた黒色の微小球を５００ｇ、１
０分間の遠心分離で３回洗浄し、５〆のＰＢＳあるいは
水に再懸濁した。その後混合液に２００　ｍｇのＮａＢ
Ｈ４を加え、４℃で１時間振盪した。得られた黒色の微
小球を５００ａ、１０分間の遠心分離で３回洗浄し、５
ＩｄのＰＢＳあるいは水に再ｌＩ！濁した。、得られた
微小球は磁石により容易に引ぎ奇せられる。それ等のア
ルデヒド含有Ｍはコーティング過程の結果１／３減少し
た。

実施例１６ １ｏｍｐデフよりキザミン及び４０ＩＲｇ硫酸第二鉄に
代えて１５０ｍ７のそれ等の化合物を使用して実施例１
５を繰返した。得られた微小球はより高い鉄含有量を有
しており、コーティング過程の結果アルデヒド含有量は
１／２減少した。

実施例１１ デフエロギザミン及び硫酸第二鉄をそれぞれＨＣρでｐ
Ｈを７．０にしたヘキサンジアミン及びＰｄＣρ２に代
えて実施例１５を繰返した。得られたパラジウムコーデ
ィング微小球のアルデヒド含有量は実施中に２．９ｍｍ
ｏｌ／ｇ微小球から２．１１１１ＩＩｏｌ／ｇ微小球に
減少した。

実施例１１ ヘキサンジアミンと微小球の結合のための１）Ｈ７，０
をｐＨ３，０あるいはｐｔ−１１１，０に代えて実施例
１１を繰返した。得られたコーティング微小球は実施例
１１に記載したものと同様のアルデヒド含有量を有して
いた。

実施例１９ ＰｄＣ！２２に代えて、他の遷移元素、例えば金（放射
活性及び非放射活性）、テクネチウム（放射活性及び非
放射活性）、白金、ニッケル及びコバルトの化合物を使
用して実施例１１を繰返した。

得られたコーティング微小球のアルデヒド含有量は実施
例１１に記載したような割合で減少した。

実施例２０ ヘキサンジアミンに代えてポリエチレンイミンあるいは
Ｎ、Ｎ−ジエヂルエチレンジアミンを使用して実施例１
１及び１９を繰返した。得られたコーティング微小球は
実施例１１及び１９に記載したものと同様のアルデヒド
含有量を有していた。

割庭叢ｌユ 直径３μの゛アルカリ″ポリアクロレイン微小球に代え
て他のポリアルデヒド微小球、例えば１μ及び０．０５
μの直径を有する″゛アルカリ″ポリアクロレイン微小
球、平均直径０．１μの“酸化還元″ポリアクロレイン
微小球、平均直径０．４μのポリグルタルアルデヒド微
小球及び４０〜２００μ及び８００〜１２００μの直径
範囲のアガロース−ポリアクロレイン微小球ビーズを使
用して実施例１５〜２０を繰返した。微小球は実施例３
に記載したように洗浄した。得られた金属コーティング
微小球のアルデヒド含有量は実施例１５〜２０に記載し
たような割合で減少した。

割１乳２２−ヱ互スユ互之亙匁亙塗 実施例１に記載したようにして調製した金コーｊイング
゛アルカリ″ポリアクロレイン微小球（２，！ＭＰＢＳ
中５０　ｍｇ　）を１０■のボピンセラムアルブミン（
ＢＳＡ）あるいはヤギＩｇＧと共に室温で１２時間振盪
した。結合しなかったタンパク質を５００ｇ、１０分間
の遠心分離を４回行なって除去した。これ等のコーティ
ング微小球のＢＳＡ及びＡ７ギＩＱＧに対する結合能力
は、ローリ−（Ｌｏｗｒｙ）他、ジェイ・パイオル・ケ
ム（Ｊ、Ｂｉｏｌ、ｃｈｅｉ＋）　１９３：２６５−２
７５（１９５１）の方法により測定し、それぞれ１０１
１１ｆｆ／ｐ微小球及び２８μｇ／９微小球であった。

’ｌｉｔ！［２３’ 金コーティング′アルカリ″ポリアクロレイン微小球に
代えて、金コーティング″゛酸化還元″ポリアクロレイ
ン微小球を使用して実施例２２を繰返した。コーティン
グ微小球のタンパク質に対する結合能力は２５■ＢＳＡ
／ｙ微小球及び６０ＩｔｇヤギＩＱＧ／ｇ微小球であっ
た。

実施例２４ 金コーティング微小球に代えて白金コーティング微小球
を使用して実施例２２及び２３を繰返した。白金コーテ
ィング微小球のタンパク質に対する結合能力は、実施例
２２及び２３で得られたものと同等のものであった。

実施例２５　マウス牌細胞の標識化 平均直径０．１μの金含有゛アルカリ″ポリアクロレイ
ン微小球をヤギ抗マウスＩｑＧ（ＧαＭＩ　ｑＧ）と共
に４℃で２時間振盪したく総容量０．１ｄＰＢＳ中、０
．５塔微小球、３０μ９ＧαＭ　Ｉ　ｑＧ）。結合しな
かったタンパク質は、微小球懸濁液をセファ０−ス４Ｂ
カラムを通すことにＪ：って分離した。次に非結合アル
デヒド基を１％（重＠／容ｌｉｔ＞ＢＳＡにより４℃で
３時間消滅させた。ＧαＭＩＱＧ誘導化微小球を１０６
正常マウス稗細胞を含有するＰＢＳ溶液に加え、混合液
を４℃で１時間振盪した。次に５０００゜１０分間の遠
心分離を３回行なって非反応誘導化微小球から細胞を分
離した。細胞をＰＢＳ中に再懸濁し、蛍光顕微鏡下で観
察した。標識細胞は暗赤色を有していた。蛍光抗−丁ｈ
ｙ１．２抗体による測定により非標識細胞の約９５％が
Ｔ細胞であることが判明した。ｆ！識細胞の走査電子顕
微鏡写真が微小球上の金コーティングなしに得られた。

平均直径２μの鉄コーティングポリアクロレイン微小球
を精製ヤギ抗ウサギＩｑＧ（ＧαＲＩｇＧ）と共に４℃
で２時間振盪した（総容量ｏ、ｉ５ｄのＰＢＳ中、１■
微小球、０．１■ＧαＲ１ｑＧ）。その後非結合抗体を
、微小球懸濁液をセファロース４Ｂカラムを通すことに
より除去した。

２８０　ｎｍの吸光度を分光光度的に測定して分離を監
視した。微小球−抗体複合体の非結合アルデヒド基を２
％（重量／容量）ボビンセラムアルブミン溶液により４
℃で数時間消滅させた。

１０　ヒトＲＢＣ及び１０６七面鳥ＲＢＣを含有する混
合物をウザギ抗ヒトＲＢＧと共に４℃で５０分間振盪し
た（０．１ａｌｌ！ＰＢＳ中、１０６ヒトＲＢＣと０．
８μびウサギ抗ヒトＲＢＣ抗体）。

次に細胞を分離し、５００ｇ、１０分間４回遠心分離し
て洗浄した。次にヤギ抗つ勺ギ誘導化微小球を細胞混合
物に加え、４℃で１時間振盪した。

さらに５００ｇ、１０分間の遠心分離を３回行なって非
反応誘導化微小球から細胞を分離し、ＰＢＳ溶液中に再
懸濁した。次に細胞混合物のＰＢＳ溶液を入れた試験管
の外壁に小さい磁石を接触させた。１５分後、管壁に引
き寄せられなかった細胞を単離した。引き寄せられた細
胞をＰＢＳ中に再懸濁し、磁力分離を２回繰返した。光
学顕微鏡による観察により、引き寄せられた細胞の９５
％以上がヒトＲＢＣであることが確認された。

実施例２７　診断　用途 金属コーティングポリアルデヒド微小球に結合した抗体
を使用して適合する抗体の検知を行なった。本技術は結
合抗体と適合抗原との免疫反応による凝集に基づくもの
であり、該凝集により着色の減少が起る。

ウザギ抗ヒト絨毛膜ゴナドトロピン（Ｒα＋−＋　ＣＧ
）を複合した直径４００人の金含有゛アルカリ″　　　
□、ポリアクロレイン微小球をＰＢＳで希釈′し、吸光
ｃｍ 度がＡ　　　　＝２．０となるようにした。この複ｃＡ
Ｏ酬 合体の吸光スペクトルは少なくとも４時間のインキュベ
ート期間中有意には変化しない。バッファライズした１
ｄの複合体を０．１５ｄの尿中ＨＣＧ標準溶液に加える
。試料を混合し、２時間の室温でのインキュベートの後
０．１ｄの試料につい１０呵 て吸光度△　　　の減少を測定した。有効な測定！５４
＋１５Ｉ７＋川 範囲は６０〜２０００　（Ｕ／！２ｌ−（ＣＧである。

実施例２８　触媒作用 １００ｄエタノール中の６００ＩＩｔｇの直径０．１μ
の白金コー°ｊイングパアルカリ″ポリアクロレイン微
小球（２５％（重量／容量）白金含有）の水素化を室温
、大気圧下で行なった。１００ｄのＨ２が微小球に吸収
され、６００■のコーティング微小球中に４．５μｗ＋
ｏｌの二重結合が存在したことを示している。１５０Ｉ
ｒ１ｇプラチナブラックの存在下で４５０ｍｇの直径の
０．１μの非コーテイング“アルカリ″ポリアクロレイ
ン微小球の水素化を行なうと、同等の二重結合含有（６
）であった。しかしながら、プラチナブラックの存在な
しには水素化は達成できなかった。

実ＩＭ　２９　コーチイン 金含有ポリアクロレイン微小球（直径１μ、架橋、２０
％（重量）金含有）懸濁液を蒸発乾固した。強固で柔軟
な金含有微小球のフィルムが形成された。

一？施例３０　コーチイン 金含有ポリアクロレイン微小球（実施例２０のもの）及
びポリ塩化ビニルの塩化メチレン溶液（それぞれ２５重
量％）をガラス表面に拡げた。

溶媒を蒸発させて乾固し、ＰＶＣ−金微小球被股を得た
。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 （１）元素形状の遷移金属が結合したポリアルデヒド微
   小球より成る金属含有ポリアルデヒド微小球。 （２）アガロース中にカプセル化された特許請求の範囲
   第１項に記載の金属含有ポリアルデヒド微小球 （３）ポリアルデヒドがポリアクロレインあるいはポリ
   グルタルアルデヒドである特許請求の範囲第１項に記載
   の金属含有ポリアルデヒド微小球。 （４）遷移金属が金、銀、白金、パラジウム、テクネチ
   ウム、鉄、ニッケルあるいはコバルトである特許請求の
   範囲第１項に記載の金属含有ポリアルデヒド微小球。 （５）遷移金属が放射性同位体である特許請求の範囲第
   １項に記載の金属含有ポリアルデヒド微小球。 （６）金属が磁性を有している特許請求の範囲第１項に
   記載の金属含有ポリアルデヒド微小球。 （７）表面に結合する少なくとも１つの第１アミン基を
   持つ化合物を付加的に有する特許請求の範囲第１項に記
   載の金属含有ポリアルデヒド微小球。 （８）化合物が薬剤、抗体、抗原、酵素あるいは他のタ
   ンパク質である特許請求の範囲第７項に記載の金属含有
   ポリアルデヒド微小球。 （９）化合物が抗体である特許請求の範囲第８項に記載
   の金属含有ポリアルデヒド微小球。 （１０）遷移金属をポリアルデヒド微小球に結合する方
   法であって、ポリアルデヒド微小球を至適条件下で充分
   な時間、適当量の適合する該金属の塩あるいは酸と接触
   させ、微小球のアルデヒド基により遷移金属の塩または
   酸をより低価の状態に還元し、微小球に結合させること
   から成る前記方法。 （１１）より低価の状態が元素状態である特許請求の範
   囲第１０項に記載の方法。 （１２）さらに、効果的な還元条件下で微小球に結合し
   た塩あるいは酸を適当量の適切な還元剤に接触させる過
   程を含む特許請求の範囲第１０項に記載の方法。 （１３）ポリアルデヒド微小球がアガロース中にカプセ
   ル化されている特許請求の範囲第１０項に記載の方法。 （１４）ポリアルデヒドがポリアクロレインあるいはポ
   リグルタルアルデヒドである特許請求の範囲第１０項に
   記載の方法。 （１５）遷移金属が金、銀、白金あるいはパラジウムで
   ある特許請求の範囲第１０項に記載の方法。 （１６）遷移金属が放射性同位体である特許請求の範囲
   第１０項に記載の方法。 （１１）遷移金属の塩あるいは酸の適当量が微小球の乾
   燥重量の約１〜６倍である特許請求の範囲第１０項に記
   載の方法。 （１８）至適条件はｐＨ値が約２〜１０であり、温度が
   約７０℃以下であり、充分な時間が約１時間〜３ケ月で
   ある特許請求の範囲第１０項に記載の方法。 （１９）適当な還元剤が水素化ホウ素ナトリウムである
   特許請求の範囲第１２項に記載の方法。 （２０）水素化ホウ素ナトリウムの至適量が微小球の乾
   燥重量の約２倍である特許請求の範囲第１９項に記載の
   方法。 （２１）至適条件は温度が約０〜２５℃であり適当な時
   間が約１〜３時間である特許請求の範囲第１９項に記載
   の方法。 （２２）元素形状の遷移金属をポリアルデヒド微小球に
   結合する方法であつて、ポリアルデヒド微小球を少なく
   とも１つの第１アミン基を有する化合物の適当量と該化
   合物と微小球が結合し得るような適当な条件下で接触さ
   せ、該化合物を適当な遷移金属の塩あるいは酸の適当量
   と該化合物が該塩あるいは酸と錯体を形成し得るような
   適当な条件下で接触させ、元素状金属に対応する塩ある
   いは酸を効果的な還元条件下で充分な量の効果的な還元
   剤と充分な時間接触させて還元することから成り、前記
   化合物は微小球に結合し得、遷移金属の塩あるいは酸と
   錯体を形成し得るものである、前記方法。 （２３）ポリアルデヒド微小球がアガロース中にカプセ
   ル化されている特許請求の範囲第２２項に記載の方法。 （２４）ポリアルデヒドがポリアクロレインあるいはポ
   リグルタルアルデヒドである特許請求の範囲第２２項に
   記載の方法。 （２５）遷移金属が金、銀、白金、パラジウム、テクネ
   チウム、鉄、ニッケルあるいはコバルトである特許請求
   の範囲第２２項に記載の方法。 （２６）遷移金属が放射性同位体である特許請求の範囲
   第２２項に記載の方法。 （２７）遷移金属が磁性を有している特許請求の範囲第
   ２２項に記載の方法。 （２８）遷移金属の塩あるいは酸と錯体を形成し得る化
   合物がデフェロキサミン、ヘキサンジアミン、ポリエチ
   レンイミンあるいはＮ，Ｎ−ジエチルエチレンジアミン
   である特許請求の範囲第２２項に記載の方法。 （２９）化合物の至適量が微小球の乾燥重量の約１０〜
   １５０％である特許請求の範囲第２２項に記載の方法。 （３０）塩あるいは酸の至適量が微小球の乾燥重量の約
   ４０〜１５０％である特許請求の範囲第２２項に記載の
   方法。 （３１）化合物を微小球に結合させ得る至適条件がｐＨ
   値が約３．０〜１１．０及び温度が約７０℃以下である
   特許請求の範囲第２２項に記載の方法。 （３２）化合物が塩あるいは酸と錯体を形成し得る至適
   条件は、温度が室温から約６０℃以下である特許請求の
   範囲第２２項に記載の方法。 （３３）効果的な還元剤が水素化ホウ素ナトリウムであ
   り、充分量が微小球の乾燥重量の約２倍重量であり、効
   果的な還元条件が湿度が約０〜２５℃で充分な時間が少
   なくとも約１時間である特許請求の範囲第２２項に記載
   の方法。 （３４）特許請求の範囲第１０項に従って調製された金
   属含有ポリアルデヒド微小球。 （３５）表面に結合する少なくとも１つの第１アミン基
   を持つ化合物を付加的に有する特許請求の範囲第３４項
   の金属含有ポリアルデヒド微小球。 （３６）化合物が薬剤、抗体、抗原、酵素あるいは他の
   タンパク質である特許請求の範囲第３５項の金属含有ポ
   リアルデヒド微小球。 （３７）特許請求の範囲第１６項に従って調製された放
   射活性標識ポリアルデヒド微小球。 （３８）特許請求の範囲第２２項に従って調製された金
   属含有ポリアルデヒド微小球。 （３９）表面に結合する少なくとも１つの第１アミン基
   を持つ第２の化合物を付加的に有する特許請求の範囲第
   ３８項の金属含有ポリアルデヒド微小球。 （４０）第２の化合物が薬剤、抗体、抗原、酵素あるい
   は他のタンパク質である特許請求の範囲第３９項の金属
   含有ポリアルデヒド微小球。 （４１）特許請求の範囲第２６項に従つて調製された放
   射活性標識ポリアルデヒド微小球。 （４２）特許請求の範囲第２７項に従つて調製された有
   磁性ポリアルデヒド微小球。 （４３）特許請求の範囲第７項に記載の微小球に細胞を
   接触させることから成る細胞の標識方法であつて、微小
   球に結合する化合物は適当な条件下で細胞に結合し得る
   ものである前記方法。 （４４）化合物が抗体である特許請求の範囲第４３項に
   記載の方法。 （４５）適当な条件下において所望タイプの細胞と結合
   し得る化合物を結合して有する特許請求の範囲第６項に
   記載の有磁性微小球と細胞を接触させ、磁性微小球に結
   合した細胞を回収することから成る、１つのタイプの細
   胞を他のタイプの細胞から分離する方法。 （４６）化合物が抗体である特許請求の範囲第４５項に
   記載の方法。 （４７）生物学的液体中で疾病に関連する因子の存在を
   検知する方法であって、特許請求の範囲第８項に記載の
   微小球と前記液体を接触させ、微小球に結合した化合物
   は適切な条件下で前記因子と反応し得るものであり、そ
   の後反応の生起を検知することから成る前記方法。 （４８）遷移金属により触媒され得る化学反応を触媒す
   る方法であって、有効触媒量の金属を含有する特許請求
   の範囲第１項に記載のポリアルデヒド微小球の存在下に
   反応を行なうことから成る前記方法。 （４９）支持物を特許請求の範囲第１項の金属含有微小
   球でコーティングする方法であつて、適当な溶媒中の微
   小球の懸濁液を調製し、該懸濁液で支持物をコーティン
   グし、溶媒を蒸発させることから成る前記方法。