JPS61216700A - 乳頭腫ウイルスに対するプローブ及び乳頭腫ウイルス感染の検出法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は乳頭腫ウィルス（ｐａｐｉｌｌｏｍａｖｉｒｕ
ａ　）のＤＮＡ及びより特定的にはこの乳頭腫ウィルス
の診断方法基ζ係るものである。

１乳頭腫クイルス”という用語は、皮膚又は粘膜の比較
的良性のＣイルス郵−ぼ（ｗａｒｔｓ）　から、上皮内
腫瘍、又は種々の形態の皮膚ガンに悪化し易い過形成（
ｈｙｐｅｒｐｌａａｉａａ　）　　までの幾つかの形態
のウィルス　　の原因であると共通して考えられ　　　
　　　　　：゛ている多数のウィルスを含むものであ、
る。乳頭腫ウィルス感染の中１ζは、特に、これ以降時
々＠Ｅｖ”　と表現されるいぼ状表皮異形成（ｅｐｉｄ
ｅｒｍｏｄｙｓｐｌａｓｉａｓ　ｖｅｒｒｕｃｉｆｏｒ
ｍｉｇ）があることにも注意しなければならない。

乳頭腫ウィルスの屋の幾つかはすで俗ζ報告されている
。本発明の特許出願ｄこ於いて、幾つかの新規の型及び
亜型の乳頭腫ウィルスを、その感染患者憂と於いて多大
の割合で早発皮膚ガンを進行させる傾向のあるウィルス
性のいぼ又は播種性斑紋（ｄｉｓａｅｍｉｎａｔｅｌ　
　ｍａ／ｃｕｌａｒ）病巣から単離したことが報告され
るであろう。

最近の研究により免疫因子の重要性及びヒト乳頭腫ウィ
ルス（ＨＰＶ）の主要な役割が明らかにのある放射線に
関する文献中ζζ以前に記載されている役割が追加され
る。

本発明は新たに単離された多数の乳頭腫ウィルスの相対
的な挙動に関する観察に基づいてなされたものであり、
その主要なｒツムの性質は以下で定義されよう。

少数のＢＹ例Ｉζ関する研究によって、６つの型のＨＰ
Ｖの性質がそれらのｒツムの分子り四−二ｙグ化よって
ずで゛に明らか馨こされている（クレムストルア・デー
（Ｋｒｅｍａｄｏｔｆ、　Ｄ、　）等、１９８２年、ジ
ャーナ／Ｉ／＋１ヴイｔｗｏジー（Ｊ、ｖｉｒｏｌ）、
　４３巻、４３６−４４７頁及びクレムストルア・デー
等、１９８３年、ジャーナル・ヴイーロジー、４８つて
、上記のＨＰＶは３つのグループ暑ζ分類された。ＩＩ
Ｉのグループには、成る種のＥＶ患者及び一般住民に於
いて見られる扁平なウィルス性いぼと関連のあるＨＰＶ
３ａ及び１０が含まれる。ＨＨＰＶａａに関連するＤＮ
Ａ配列は一人のＥＶ患者のガンで発見された。第２のグ
ループにはＨＰＶ者ジｉｉはＥｖ患者の間だけに検出さ
れ、彼らの文献中に記述されている（以下憂ζ示す羽１
ズ献ｌ−５，８，９，１３，１４，１６，１８−２０＞
１４の型のＨＰＶの中で、４つのものは、珍しい病気で
あるｌ８ｖＩζ特筈ζ関係のあるものであることが判明
したことに注目すべきであゐ。

多数の新規の型及び亜型の乳辿腫りィルスを単離し本発
明を完成せしめた研究によってイン・ヴイトロに於ける
より高度筈ζ洗練された診断技術味ユ 題となっている病巣が悪化していく可能性がある一般的
に言って、乳頭腫ウィルスは、互いに非常に異ってはい
るが、それでも７０００〜ｓｏｏ。

のケタの塩基対の大きさを有していることに注意しなけ
ればならない。加えて、それらのｒツムには前述１ζも
かかわらず成る程度の相同性があり得１非ストリンジｚ
ｙト／　（ｎｏｎ−ｓｔｒｉｖｌｇｅｎｔ）又と呼ばれ
る条件下で行なわれるハイブリダイゼーションアッセイ
Ｉ（よって決定される。

乳頭腫ウィルスは幾つかの型の乳頭腫ウィルスに区別さ
れ得、それらはストリフト又はストリンジェントの条件
下で測定された相同性の割合によって区別され得る。こ
の条件下で、５０％より小プい相同性の割合を示すもの
は別の型に属する。

この点に関して、ストリフト又はストリンジェントな条
件下で別の灘のウィルス間の相同性の割合は０まで低下
し得るということ番ご注意しなければ４し と考えられ、それらはこの同屋内の別の亜型を形成する
。

非ストリクト又は非ストリンジェントな条件下のハイブ
リダイゼーションアッセイは、バイルマン・シー−ニー
　（Ｈｅｉｌｍａｎ、Ｃ，Ａ　）　　等、１９８０年、
ジャーナル・グイロロジー３６巻、３９５−４０７頁及
びクロイナン（ＣＲＯＩＳ８ＡＮＴ）等、１９８２年、
シー、アール。アカド・サイエンス（Ｃ０Ｒ＊Ａｃａｄ
Ｊｃ、パリ、２９４巻Ｊ−８１−５８６頁（ヘテロ二重
鎖分子）に轟θ；記載されている以下の条件下で単離さ
れた２種のウィルスから取り出されたＤＮＡを相互こと
接触させるものである。

ストリフト又はストリンジェントな条件下のハイ、ゾ、
すメイゼーシ目ンアツセイは、クレムスドルル・ヴイロ
四ジー、４８巻、３４Ｇ−３５１頁、及びデービス・ア
ール、／ヴリエー（Ｄａｖｉａ、Ｒ，Ｗ）４１３−４２
Ｒ頁（ヘテロ二重鎖分子）に身参手記載されている条件
下で単離された２種のウィルスから取り出されたＤＮＡ
を相互に接触させるものである。

るが、これら相同的な配列は別の屋に属する乳頭腫ウィ
ルスの間では６０％又はそれ以下に低下し得ることを言
及しておく。非ストリクト又は非ストリンジェントの条
件下で相互にハイデリツＰを形成する別の鑞の乳頭腫ウ
ィルスからの配列が同一あるいは類似である程度は同じ
屋の乳頭腫ウィルスの場合より必らず明らかに低いもの
である。

う 本発明ｉあ研究によって、屋ａの盤の乳頭腫ライる程度
の特異性を示す感染形態又はその変形としばしば関連の
あることの２つが明らかになった。

従って本発明は、単離された種夕の新規の乳頭腫ウィル
スから単離され得るＤＮＡ及びこれらのＤＮＡから全部
又は部分的に構成され得る！Ｗ、７デに関するだけでは
なく、成る乳頭腫ウィルスが発見され３患者の危険の度
合及び様々のカテ♂リーの感染の診断ｉζ最も有効に１
い得る乳頭腫ウィルスの臘の混合物多部−４′（カクテ
ルノにも関するものである。場合化よっては以前にすで
番ζ単離り感染に於いては、その進行悪化Ｇこよってよ
り深刻な病気に転換するかどうかという危険の度合をよ
り良く経過予想することバできるよう与感染壱−染の場
合にはそれが皮膚ガンに進行するかどうかという危険の
度合いをより正確Ｅζ評価することができる手段を本発
明は提供することを目的とするものである。

以下の表視を簡潔番こする為に一般の方法に従っで、乳
頭腫ウィルスの全ｒツムを＠ＨＰＶ−ＤＮＡ”という略
語で示すことにする。

腫ウィルスを含むＨＰＶ−ＤＮＡの物理的制限地　　　
　　　　　「２−同様に簡略化の為、すでに公知の幾つ
かの乳頭図が記載されている添付図を参照する。

れている。この起点からの距離はｒツムの全長に対する
パーセントで表わされる。地図の１単位はｒツム長の１
％を表わす。

本発明はまず第１に最も特別には、７０００〜５ｏｏｏ
塩基対の範囲の大きさをもつ全てのＤＮＡから選ばれた
各ＨＰＶ−ＤＮＡに関するものであＪ翠翌ツ リ、図中１と表わされる制限地図によって特徴づけられ
るものであり、それはより特定的にはＨＰＶ−２４％Ｈ
ＰＶ−１０ｂ、ＨＰＶ−１４ａ、ＨＰＶ−１４ｔ）、Ｈ
ＰＶ−１５、ＨＰＶ−１７ａ。

ＨＰＶ−１７ｂ、ＨＰＶ−１９、ＩＩＰＶ−２０，ＨＰ
Ｖ−２１、ＨＰＶ−２２、ＨＰＶ−２３、ＨＰＶ−２４
，１ｌＰＶ−２８、ＨＰＶ−２９、ＨＰＶ−３１及びＨ
ＰＶ−３２、ＨＰＶ−ＩＰ４及びＨＰＶ−ＩＰ４で示さ
れる乳頭腫ウィルスから得られた１１ＰＶ−ＤＮＡに関
するものである。

こＣｉζ列挙したものと同じ臘に属すると考えられ得る
ＨＰＶ−ＤＮＡに対しても本発明の効果が同じよ引ζ及
ぶことは言うまでもないことである。

新たに特徴づけられたウィルスのＨＰＶ−ＤＮＡ薯こ対
応する物理的地図は図中の黒丸で示されてい本発明は上
Ａｐｅ−ＤＮＡの全部又は一部を含む組換えＤＮＡ、そ
して特にそれぞれＥｌ、Ｅ６−１７、Ｌｌ及びＬ２の遺
伝子に対応するフラグメントを含む組換えＤＮＡ又は前
記ＨＩｊＶ−ＤＮムれ得る一ｆａ−デ及びｌ＊７’ロー
プを用いるイン・ヴイト党診断方法Ｃζ係るものである
。

クイ〃スＤＮＡ調製物は６人の目−ロツバのＥＶ患者及
び２人の南アメリカのＥｖ患者の良性病巣を削りとった
ものから選択的に抽出された（ラッチ−、ｘｂ　、　ｚ
　−（Ｌｕｔｚｎｅｒ、Ｍ−Ａ−）　’Ｆ、１９８３年
、ランセ（Ｌａｎｃｅｔ）　ｉｉ　４２２−４２４頁）
。ＨＰＶ−ＤＮＡは平衡塩化セシウム密度勾配遠心法及
び／又はエチジウムデキミｒ存在下のシェーク党−ス勾
配沈降法により、クレムドル７等の前記の文献、及びオ
ーツ・ジー（Ｏｒｔｈ、Ｇ・）頁に以前記載された操作
方法に従って精製された。

このＤＮＡｐ製物は制限エンドヌクレアーゼで処理され
、この消化生成物をアガロースｆＡＩ電気泳動によって
分離した（クレムストルア等の前記文献参照）。更に、
患者の１人のいぼ状突起ＨＰＶ−２（バイルマン・シー
・ニー等、１９８０年、ジャーナル、ゲイロロジー、３
６巻、３９５−４０７頁、及びオーツ・ジー等、１９８
０年、細胞増殖に関するコールド・スプリング・ハーバ
−会議７巻、２５９−２８２頁参照）から、以前に特徴
づけられた臘とは異なる１１の株が同定され、それによ
って該ＤＮＡ類の制限酵素切断の主要なモデルが提供さ
れた。新規なＨＰｖの型ｔζは番号が付与され、１つの
型に属する亜属には番号の後にそれらの同定年代順に従
って文字が付与さの新規な１１種のＨＰＶのｒツムをエ
シェリヒア・コリ、／（Ｅｉａｃｈｅｖｉｃｈｉａｒ　
ｃｏｌＪ）　Ｋ　１２．０６００株内でクローン化した
（前記のクレムストルア等のＤＮＡの２つのフラグメン
トは例外として、ＤＮＡは単位長（ｕｎｉｔａｒｙ　ｌ
ｅｎｇｔｈ）の分子形態で挿入来のＨｌｎｄ　ＩＩＩＢ
フッグメント（前記のクレムストルア等、１９８２年）
を組込んだ組換えシラスミドに挿入した。より特異的に
は、ＨＰＶ１７ｋ）びＨＰＶのＤＮＡをただ１ケ所で切
断する酵素（Ｓａｃ　Ｉ）　　で切断した後、単位長の
ＤＮＡ分子形態で挿入された。ＨＰＶ−１４ＪｌのＤＮ
Ａは、Ｈｌｎｄ　Ｉ　Ｉ　Ｉによる該ウィルスＤＮＡの
不完全消化後に単位長のＤＮＡ分子形態で！ツスミドｐ
ＢＲ３２２に挿入された。このＨｌｎｄ　Ｉ　Ｉ　Ｉは
Ｈ１’Ｖ−１’：’；Ｉ）？”）□占６．１　％及び３
．．５゜長さを持つ２つのフラグメントを生成するもの
である７　ＨＰＶ−２４のＢａｍＨＩ　Ａ及び８７ラグ
メ／ト（それぞれダノム長の８３．１％及び１６．９％
に損害する大きさを持つ）を別々にシラスミド、ＢＲ３
２２に挿入した。

単離したクローン及びそれに対応するＨＰＶ源を以下−
の表１に挙げる。

組換えプラスミドを同定するために、プラスミドにウィ
ルス配列を挿入するために用いられｔ：、ニーＤＮＡ類
の消化生成物の電気泳動移動度を比較した。単離された
断片の数奢よびサイズから、各々の場合に全辱・クイル
スゲツムが組込まれたことが示された。非りローンＨＰ
Ｖ−ＤＮＡ類或いは！ラスミド配列から切除された弁≠
−〇ＨＰ　Ｖ−ＤＮＡ類をアガロースｆ／Ｉ／電気泳動
で分析したところ（データは示さず）、ＤＮＡサイズの
不均一性が認められた。ＨＰＶ１４ｂ、１９゜２０およ
び２１からのＤＮＡ類は、ＨＰＶ３ａ、５．８（ＯＲＴ
Ｈ）（１９８０）の論文〕。

クローン化りイルスｒツムの１４個の制限酵素柱 に対する感し纂分析し、物理的地図が確立された（第１
図〜第１０図）。成るＨＰＶ−ＤＮＡ類の制限地図を以
下に述べる理由により幾つかの図に繰り返し図示した。

前記（９）の方法によれば、２２かも３３（ＩＩの間め
切断部位が局在化していた。ＨＰＶ１４ａおよび１４１
）の　　　　　　　　　地図−ＤＮＡの２個のＢａｍＨ
Ｉ　　切断部位のひとつがＨＰＶ−１４１）のＤＮＡの
唯一のＲａｍＨＩ切断部位と並んでいるときには１５個
が共通していることが判明した。同様に、唯一のＢａｍ
ＨＩ切断−菊４４−一これらの地図と、ＥＶに関連する
ｊＨＰＶ類（Ｉ（ＰＶ　　３ａ、５，８，９，１（ｌよ
び１２　）（８、９、１６、１８および２Ｇ）、皮膚イ
ホに関連するＨＰＶ類（ＨＰＶＩ、２．４およ関連する
ＨＰＶ−１４ａに対する地図中軸÷を除□いては明らか
な相似性はみられなかった。この後者の単離ＨＰＶとＨ
ＰＶ−１４１との相違点は、１個の追加ＢａｍＨＩ部位
と１個の追加Ｈ１ｎｄ■部位である。２種のウィルスに
おいて部位Ａｖａ１、ＢａｍＨＩ、ＢｇＩＩ、ＥｃＯＲ
Ｉ、Ｈｉｎｄ■および）（ｉｎｄ［の位置は同様であっ
た。交差ハイゾリダイゼーション実験により、これら２
種のウィルスが実際に密接に関連していることが確認さ
れた。

（矢印で示した）幾つかの部位が所在していな分裂を生
起しない＃章は次の通りであった。ＨＰＶ１４ａおよび
２３のＤＮＡに対してはｐｖｕＩ。

８ａｌｌおよび８　ｍ　ａ　Ｉ　；　ＨＰ　Ｖ　−１４
ｂのＤＮＡに対してはＰｖｕｌ、８ａｃｌ、Ｂａ１ｌお
よび８ａｃ！　”、ＨＰＶＩ５，１７ａおよび１７ｂの
ＤＮＡに対してはＢｇｌｌ、ＰｖｕＩ、８ａｌＩ。

８ａｃ！、ＨＰＶ−１９のＤＮＡに対してはＢｇｌＩ、
５ａｃｌ、８ａｌＩおよび８ａｃ！；ＩＩＰＶ−２０の
ＤＮＡ１ζ対してはＩｃｏＲＩ、ＰｖｕＩ。

８ａｃ！および８ａｃ！”、ＨＰＶ−２１のＤＮＡに対
しては５ａｃＩおよび８ｍａｌ’、ＨＰＶ−２２のＤＮ
Ａに対してはＢａｍＨＩ、Ｂｇｌｆ、Ｐｖｕｒ、ｐｖｕ
ｎおよび８ａｌｌ；ＨＰＶ−２４の既に特徴付けられた
ｇｖのＨＰＶ−ＤＮＡ類（ＨＰＶ６ｂ、ｌ１ｍ、１３お
よび１６）と新たに特徴付けられたＨＰＶ−ＤＮＡ類と
の間、並びに新たに特徴付けられたＨＰＶ−ＤＮＡ類の
ＤＮＡ類間の配列相同の有無を研究した。ろ紙上への付
着、および飽和液相中でのＤＮＡ−〇Ｎムノ１イゾリダ
イゼーションとそれに続（８１ヌクレメアー沈降により
分離させた。標＊（４００ｏｃｐｍ）ＨＰＶ−ＤＮＡＱ
を、前記したように（８ｅ９）牛胸腺ＤＮム（２０μｇ
）あるいは非標識ＨＰＶ−ＤＮＡ（ｏ、ｚｏ、ａｇ）の
存在下でＮａＣＪｏ、４８Ｍ　　／ＫＤＴＡＪ：ｍＭ（
ｊ）Ｈ６，８）中、６８℃でインキュベートした。ＨＰ
Ｖ−ＤＮＡゾローデの一ル活性は５．３に１Ｇ’から２
　Ｎ　１０８ｃ　ｐｍ／／Ｉｇの間で変化した。ハイブ
リダイゼーションの程度を、８１ヌクレアーゼに抵抗す
る両分を目安にして調べた。数は、グローブの自然復元
（４〜１５％）について校正し相同ハイブリダイゼーシ
ョン（７５〜９５％）ζζついて１００％ｉζ正規化し
た値を表わす。ＮＤは１測定せず”の略号である。

上記条件下に諺けるＨＰＶ−ＤＮＡ類間の交差ハイブリ
ダイゼーションの相対量を、標識ＨＰＶ−ＤＮＡ鉛非標
識ＨＰＶ−ＤＮＡとのハイブリダイゼーションの５とし
て表示する・ 以下余白 ＨＰＶＩ、２，４，６ｂ、７および１ｈのゲノムと　Ｐ
標識の新たにクローン化されたＥＶのＨＰＶ−ＤＮＡ項
と（７）ｆｉｆｆ４或＃ＮはＩＴ（７）非＊ｍＨＰＶ−
ＤＮＡ類とＨＰＶＩ３，１６および１８４（特異なプロ
ーグとの間の交差ハイブリダイゼーション１４ｂ、１５
，１７８，１７１）、１９．２Ｇ、２１，２２゜２３お
よび２４のＤＮＡ類とＩ（ＰＶＩｍおよび１１ａのＤＮ
Ａ類との間に交差ハイブリダイゼーションは殆んど認め
られなかった（表２）。新たにクローン化されたＨＰＶ
類のＤＮＡ類では、強力な交差ハイブリダイゼーション
を示したＨＰＶ１７Ｆおよび１７ｂ、ＨＰＶ１４ａおよ
び１４ｂを除いて、相互間かつｇｖに関連する他のＨＰ
Ｖ（ＨＰＶ３ａ、５，８，９．１０および１２）のゲノ
ムとの間での交差ハイプリダイぜ−ションは殆んど或い
は全くみられなかったし、認められたｌζせＰＶ−１４
１と１４ｂ）及びタイプ１７（ＨＰＶ−１７ａと１７ｂ
）とζこ分類されることが確認された。

いて分類された。これらのグループ（ＡからＨ）を表３
４ζ示す。この表には、これらＨＰＶ類（単独で或いは
組合せて）のキャリヤの中で診断された疾患およびその
発癌性が示されている。

（以下余白２ ＩＰＶ５，８，１２，１４，１９．２Ｑ、２１゜２２お
よび２３のＤＮＡ類では、これらの間の交差ハイブリダ
イゼーション（グループ相同）のレグループの１部を形
成する。

同様に、相互間で約２０％の交差ハイブリダイゼーショ
ンを示しかつＨＰＶ−９のＤＮＡと約６％の交差ハイブ
リダイゼーションを示す）ＩＰＶ９　。

１５および１７のＤＮＡ類は等しく、前記した（９）Ｅ
ＶｑＨＰＶ類のグループに属する。タイプ１３と３１の
ＩＰＶ類は一つの同じグループに属するものと考えられ
つる。また最後に、他のＩＰＶ類のｒツムと殆んど相同
性を示さないタイｆ１，２　。

４．２４＄５よび３２のＩＰＶ類は、相互にかつ従来の
グループとは異なる他のグループの第１のメンバーを形
成するものとして考えられる。

本発明はまた特に、上記した）ＩＰＶ−ＤＮＡ類から由
来されるＤＮｈｍ特に遺伝子Ｅ６−Ｅ７．Ｅｌ、Ｌ２．
Ｌｌ右よびそれらの遺伝子間領域爾するＤＮＡ断片に関
する。原点として採った部位に対するこれら各種断片の
相対位置右よび長さを表４に示す（＃！１図〜第９図）
。

ＨＰＶ−１のｒツム上の遺伝子の位置は、このｒツムの
ヌクレオチド配列から推論された〔オー。

ダノス（０，ＤＡＮＯ８）、エム、カチン力（Ｍ。

ＫＡＴＩＮＫＡ）およびエム、ヤニデ（Ｍ、ｆＹＡＮＩ
Ｖ）のパテント〕。ハイブリダイゼーションの偏性条件
（Ｔｍ−２９℃）あるいは余りＨＰＶ−３，５，８，９
，１０！、１２，１４゜１５．１７および２４のｒツム
の物理的地図１シユワルツ（Ｋ、５Ｃ）ＩＷＡＲＺ）ら
、エンホジ工−（ＥＭＢＯＪ。）１９８３，２．２３４
１−２３４８）。保存された制限酵素部位を並列させＲ
習４ｉｒ１ＨＰ　Ｖ　１０　ｂ　、　２８および２９の
物理的地図４ＨＰＶ３ａおよびｔＯａの物理的地図表４
に示した配位の値は、＠１図−＠９図に示メントの５′
およびａ′Ａ！ｏ位貨を示す。

遺伝子間偵竣（調節の要素を含む）および隣接のイブリ
ダイゼーション条件下で形成された、或いは同じグルー
プに属する多くのＨＰＶタイプの２７４間で（偏性ハイ
ブリダイゼーション条件下で）形成されたヘテロ二重鎖
分子の電子顕微鏡分析により検出されつる配列相同性を
示さない。遺伝子Ｅｌ（ウィルスＤＮＡの複製に主に関
係する）および遺伝子Ｌｌ（ウィルス粒子の主要抗原決
定基コーディング）は、別のグループｌζ属するＨＰｖ
タイプの２７４間で（非偏性ハイゾリダイゼーション条
件下で）形成された、或いは同じグループに属するＨＰ
Ｖ類のゲノム間でに＃ｌ性条件下で）形成されたヘテロ
二重鎖の分析により検出されつる配列相同性を示す。

いは非偏性条件下での分子ハイプリダイ゛ゼーション実
験により最大数のＨＰＶタイプを検出することが理論的
に可能である。遺伝子開領域および遺伝子Ｅ６およびＥ
７を含む組換えプラスミドから作成されたゾローゾは、
成るＨＰＶタイプあるいは関連するＨＰＶタイプを特異
的番こ検出することができる。

Ｌ２領域（ウィルスカプシドのマイナーな成分に対する
コーディング）は、各種ＨＰＶタイプの中で種々のヌク
レオチド配列保存度を示す。

（以下余白） ライｋＸＨＰＶ−ｘｐ、およびＨＰＶ−ＩＰ４を単離す
る条件およびこれらのウィルスからＨＰＶ−ＤＮＡ類を
得る条件を以下により詳しく記載する。

新しいタイプのＨＰＶは、ａｐｖタイプ１６に特異な放
射性プローブを用いる非優性条件下でのハイブリダイゼ
ーションにより子宮頚管ガンから抽出されたＤＮＡ中に
存在していることかみとめられた０個性ハイブリダイゼ
ーション条件下でハイブリダイゼーションを実施したと
きには交差ハイブリダイゼーションは検出されなかった
。このＨＰＶ−ＤＮＡの多数の制限酵素に対する感度の
研究から、＃素Ｂｇｌ　ｌがウィルスＤＮＡを１度切断
していることか知見された。腫瘍から抽出されたＤＮＡ
′Ｉｋ：エンドヌクレアーゼＢｇｌｌ［により消化させ
た後、５ｃｂ４パビロマウイルスのゲノムのサイズ）の
ＤＮＡ分子を含有する両分をショ糖勾配での遠心により
精製した。８ｋｂ分子を銅−奢畳命ソ、　Ｂａｎ　Ｈ１
部位でバクテリオファージλＬ４γ。１のＤＮＡに挿入
されたプラスミドＰＬ１５．５ＤＮＡを包膜し宿主細菌
〔大腸＠　（Ｒａｃｈｅｈｉｃｈｉａ旦免り−）ｍ株り
人１０１〕を感染後、組換えファージに相当する溶菌領
域（プラーク）を感染細菌培養物のレプリカを放射性Ｈ
ＰＶ−１６からのＤＮＡを用いて非偏性条件下でハイブ
リダイゼーションすることにより検出した。ウィルス配
列の全体を含む幾つかの組換えバクテリオファージを単
離した。挿入酵素ｍｇｌｌによりファージ１）ＮＡ名切
断すると、非偏性条件下でＨＰＶ−１６プＱ−プとハイ
ブリダイズする１ｌｋｂフラグメントか得られる。原腫
瘍のＤＮＡおよび組換えツアージのＤＮＡｔ＃酵素Ｂｇ
酵素１上工■ｓｔｌの混合物で切断すると、総分子量が
パビロマウイルスのゲノムのサイズに等しい同一の５個
のフラグメントか得られる。新しいＨｐＶのＤＮＡを組
換えバクテリオファージのＤＮＡから切除し、電気溶離
（５ｌｅｃｔｒｏｅｌｕｔｉｏｎ　）により精製し、プ
ラスミドＰ　Ｌ　１５．５で再りローン化シた。ウィル
スＤＮＡの制限地図が、２１個の切断部位を位置決めし
うる（第９図）１８種の制限酵素に対するこのＤＮＡの
感度に基いて確立された。こうして確立された地図は今
までに同定されたＨＰＶ類のゲノムの地図とは異なって
いる。新しいＨＰｖのＤＮＡと今までに同定されたＨｐ
Ｖ類σ：）　Ｄ　Ｎ　Ａとの配列相同性を、偏性条件下
で行なわれたレプリカの分子１、イブリダイゼーション
実験で分析した。検知された相同性は常に５％未溝であ
った。Ｈｐ’Ｖ−１６のゲノムで相同性が最大であった
。子宮頚管ガンからの特性づけられた新しいウィルスは
新しいり’（１（ＱＨＰＶであり、これを仮ｔｔｃｗｐ
ｖ−ｒｐ、と呼称するｄ ＨＰＶ−４Ｆ、のＤＮＡとＨＰＶ−１のＤＮＡとの間で
各種条件下１形成されたヘテロ二重鎖分子を電子顕微鏡
で分析すると、これら２種のゲノムた０ １１！１６−ＩＩ：〕　　　　　　　６２　　　　　　
　　フ１．５１１ｉ１　　　　　　　　７１　　　　　
　９５１２　　　　　　　　９５．５　　　　　１Ｌ５
Ｌ２　　　　　　　　１１　　　　　　３０．ＳＬ　１
　　　　　　　　３１．５　　　　　５２遺伝子間領域
　　　　　５２　　　　　　　　６３．５種ｍＨＰＶ−
ＸＰ、のＤＮＡから作成した放射性プローブを使用すれ
ば、これらウィルスの病原力が測定できる。ＨＰｖ−Ｘ
Ｐ、のＤＮＡは、調べた外性器のポウェノイド丘疹（Ｂ
＠ｗａｎｏｉｄ　ｐａｐｕｌａ　）１４例中１例に、侵
入性子宮頚ガン５１例中２例に、子宮頚部の上皮的新生
物（ｎ６ｏｐｌａａｉｅ　）　２８有する性器向性タイ
プ（ｇｅｎｉｔｏ　−ｔｒｏｐｉｃ　ｔｙｐｅ　）のＨ
ＰＩである。性器新生物、特に子宮頚管ガンの進行の危
険性を示すＨＰｖ類のタイプを診断あるいはスクリーニ
ングするための分子プローブを作成することな目的とす
るＨｐｖ−ＤＮＡ混合物中に組み入れることが必要であ
る。

新しいタイプのＨＰｖが、光線（紫外線）角化症の生検
、前ガン皮膚病巣から抽出されたＤＮＡ中に、ＨＰＶタ
イプ５，８および１４に特異な放射性プローブを含む混
合物を用いる個性条件下での分子ハイブリダイゼーショ
ンにより証明された。

しｂ にＨＰＶ−３２と呼称≠呑）に特異なプローブを用いて
行った場合には交差ハイブリダイゼーションべたところ
、酵素Ｅｃｏ　ＲＩがウィルスＤＮＡを１度切断してい
ることか知見された。エンドヌクレアーゼＩ！１ｃｏＲ
Ｉにより生検から抽出されたＤＮＡを消化させた後、ａ
ｈｂ（バビロマウィルスのグツ五のサイズ）のＤＮＡ分
子を含む両分をショ糖勾配による遠心で精製した。８ｋ
ｔ）分子なＲ：ｃｏＦ１１部位でバクテリオファージλ
ｇｔ、ｗａＢ、λＢのＤＮＡに挿入した１組換えＤＮＡ
を包膜し、宿主細菌〔大腸ｌｌ（ｇｓｃｈｅｒ　１ｃｈ
ｉａ　ｃｏｌｉ　）　＊菌株り人１Ｇ１〕の感染後１組
換え７アージに相当する溶菌プラークを、非偏性条件下
でＥＦＴ−８および１４からのＤＮＡ類の放射性混合物
により感染細菌性培養物のレプリカ（複製物）をハイブ
リダイゼーションすることにより検出した。ウィルス配
列の全体を含む幾つかの組換えバクテリオファージを単
離した０挿入簿素ＴＬｃｏＲＸによりファージＤＮＡを
切断すると、非偏性条件下でＨＰ’Ｖ−５，８および１
４に特異なプローブとハイブリダイズする８ｋｌ）フラ
グメントか得られる。原病巣のＤＮＡおよび組換えファ
ージのＤＮＡを酵素Ｅｃｏ　Ｆ（ｒおよびｐｓｔ、Ｉの
混合物で切断すると、総分子量がパビロマウィルスのゲ
ノムのサイズに等しい同一の６個の７ラグメントが得ら
れる。新しいＨＰＶのＤＮＡを組換えバクテリオファー
ジのＤＮＡから切除し、電気溶離で精製し、プラスミド
ｐ　ｓＰ　ａｓ（之 をこのＤＮＡの１５種の制限酵素に対する感度がｔＪ′
−″ １１１保寺喀た。これにより２３個の切断部位の位置決
めが可能となった（第１０図）。こうして確立された地
図は、今までに同定された１ｉＰＶ類のゲノムの地図と
異なっていた。新しいＨＰｖのＤＮＡと今までに同定さ
れたＨｌ）Ｖ類のＤＮＡとの配列相同を１個性条件下で
行ったレプリカに対する分子ハイブリダイゼーション笑
験により調べた。いぼ状表皮異形成病巣中で既に同定さ
れた成るタイプのａｐｖ類ＣＨｐｖ−ｓ、ｓ、ｘｚ、ｓ
４゜１９．２Ｇ、ｇｌおよび２５）のＤＮＡと新しいＨ
ｐＶのＤＮＡとの間の相同性は５０％未満であ　　・つ
たが、他のタイプのＨＰＶ類との相同性は認められなか
った。こうして光線内皮症からの特性づけられた新しい
ウィルスは新しいタイプの８１）Ｖであり、これを仮に
ＨＰＶ−ＸＰ４と呼称する。

精製ＨＰＶ−４Ｐ４のＤＮＡから作成された放射性プロ
ーブを使用すると、調べたいぼ状表皮異形成患者１７例
中４２％に、分析した光線内皮症のＸＰ４は腫瘍形成能
を育する皮膚向性タイプのＨＰＶである。皮膚のガンあ
るいは前ガン病巣の進行の危険を示すＨＰＶタイプを診
断もしくはスクリーニングするための分子プローブを作
成することを目的としているＨＰＶ−ＤＮＡ類混合物に
はこれを組み入れなければならない。

本発明は更に、ｑ＃に各ｍ１ｉＰＶ−ＤＮＡ＠の混合物
（あるいはこれらＨＰＶ−ＤＮＡ類もしくはそれらから
の配列を含有するプローブ）に関し、これら混合物は、
多分感染の進行可能性を予知するために各種形態のバピ
ロマウィルス感染を診断するべ（組合せて使用されうる
０本発明の好ましい混合物を！！５に例示する。

表　　　５ いは状表皮異形成の識別診 断 ５　９．１！ｉ＊、１７ａ”、１７ｂ”６２４＊ この表には、混合物を使用して特に診断可能存疾患の性
質も示した。ｔｓ１図〜第９図の制限地図の分類は表６
の“構成”欄−示した分類（グループ分け）と一致して
いることは注目すべきことである。このために、添附図
面の幾つかの図面に幾つかのプローブか数回水されてい
るのである。

これら各混合物は１本発明の新しいプローブの少なくと
も１つを包含するものとして定義づけられ５る。換言す
れば１本発明の診断用組成物は次のものを含むものとし
て定義づけられ５る。

＋１）少なくともＨｐＶ−２６のＤＮＡ。

（２１ＨＰＶ１０ｂ、２ｇおよび／又は２９のＤＮＡの
少な（とも１種。

＋３１ＨＰＶ１７および／又は２４のＤＮＡの少な（と
も１種。

（４）ＨＰＶ１４，１５．１？、１９．２Ｇ、２１，２
２お！び／Ｘｌ’！２１）ＤＮＡの少す（トも１ａｌ。

（５）ＨＰ’／１５お！び／又）！１７のＤＮ１７）少
なくとも１種。

（６）ｉｉＰＶ−２４のＤＮＡ。

（７）ＨＰＶ−１，４および３２のＤＮＡ。

（８１８ＰＶ−３４）Ｄ　Ｎ　Ａ。

（９）ＨＰＶ−３２１１Ｆ）、ＤＮＡ。

９種のグループのＤＮＡは全ゆる状況下で互いに異なる
ように選択されると理解されたい。

各種形態のいぼあるいは他の皮膚もしくは粘膜病巣から
多（ＱＨＰｖ類か単離されうるが１表に示した各タイプ
の疾患の診断に１種あるいは２種以上のＢＰＶ−ＤＮＡ
類を含有する混合物を使用することが好ましい。なぜな
ら他のＨＰ’Ｖ−ＤＮＡ類は同タイプの疾患に同様に介
在（１ｎｔａｒｖａｎｓ　）　Ｌうると考えられていた
からである。感染の性質およびその進行可能性の診断は
、使用するプローブの数か増すにつれてより有効となる
であろう。加えて、各種プローブ混合物を用いて行うハ
イブリダイゼーションアッセイにより、罹患疾患の諏別
（鑑別）診断を同等にかなりの確率で行ないうる。

表５には１本発明者らの研究所で単離されたＨＰＶ−Ｄ
ＮＡ類から形成されたプローブのみを記載した。勿論前
記した理由で、別の研究所の研究過程で得られた同じタ
イプの感染症を患っている患者において何度も検出され
ている他のＨｐｖ−ＤＮＡ類を添加することにより各ａ
ｌ混合物を有利表皮異形酸中にみられる他のＨＰＶ−Ｄ
ＮＡ類を添とそのリスクの高い感染症とを区別し５る０
例えするリスクか高いことか示唆される。

同様に、混合物５により検出されたｍｖの症例では混合
物６を用いて検出されたこれら症例に比べて腫瘍形成の
リスクは高い。混合物４は、混合物５を用いて検出され
る症例に比べてより高いリスクを有するｍｖ症例を識別
できるであろう。

進行の予後経過を測定する目的で、異なる形の乳５［１
１ウイルス感染の全般的診断に組み合わせて使用するこ
とかできる。

本拠明に一致する好ましい混合物は前記表５に特定され
ている。本表はまた表の左側に記載した混合物の使用に
よって格別に診断し得る疾患の性質も示している。本表
に特定したその他のＨｐＶ−の危険性の検知に使用でき
る格別な代表的プローブと考えられることを指摘し【お
（。

従って本発明は格別に、前記表において混合物番号とし
て示した１〜１ｏの番号をつけて示した１０のグループ
を少な（とも含む診断用キットにも係る。

これまでは特に、クローン化ＨＰＶ−ＤＮＡ全体のプロ
ーブとしての使用について考慮してきた・しかしそれら
はこれらの異なるＤＮＡのクローン化フラグメント、特
に遺伝子８１あるいはＬｌ及び遺伝子Ｅｉ６−１７によ
って置き換ることもできる。

れるハイブリダイゼーションを含む。

操作は例えば下記のように行なわれるが、記載する診断
方法は当然、本発明のプローブ及びプローブの混合物の
使用条件を制限するものではないと解されるものである
。

中、病変部から採取して得た細胞中、あるいはカルノイ
（Ｃａｒ！Ｌｏｙ）混合液（エタノール、りｃｘａホル
ム、酢酸、　６：””３　：　１　）により固定されパ
ラフィン中に含まれるバイオプシ一部分中のＨＰ’Ｖの
存在を□明らかたし、ＨＰＶのタイプを同定することで
ある。試験は、原理は公知の方法による試料からのＤＮ
Ａの予抽出を必要とし、ＨＰＶ−ＤＮＡ混合物から調製
した放射活性プローブ（＊　２　ｐあるいは　Ｓで標識
されている）を使用した制限あるいは弱制限条件下での
分子ハイブリダイゼーションによるこのＤＮＡの分析を
含む。一般には、各試験はいくつかのプローブ混合物を
必要とする。

い（つかのハイブリダイゼーション方法が使用し得る１
例えばスポットハイブリダイゼーションＸ＞７９シ 積させ、各；ｉ；≦を通常の条件下でプ・−プ混合物と
ハイブリダイゼーションさせ、ハイブリダイゼーション
させたｇを放射線写真フィルム上に接触露光させること
により放射活性ハイブリッドの検知を行うことから成る
。またレプリカに対するハイブリダイゼーション法を使
用することもできる。本方法は、制限酵素でのＤＮＡ逃
現により得られたＤＮＡフラグメントのアガロースゲル
電気泳動による分離、アルカリ変性後の＃フラグメント
の雪にトロセルロースアルいはシーンスクリーンプラス
）上への移送、及び通常の条件下での異なるプローブ混
合物とのそれらのハイブリダイゼーションから成る。放
射活性ハイブリッドの形成はやはり。

―蜂−一。

放射活性写真フィルム上への 接触露光によって検知する。

中にインサートされたウィルスＤＮＡの転写により調製
されたＲＮＡＫより 哨≠→構成される。放射活性プローブを使用すると格別
な好感度という利′点が得られるが１例えば７８ν ビオチン化され飴＋４、それ自体標識された抗体あるい
は酵素的、螢光的あるいはその他の標識を有する抗体に
より認識可能な抗体によ？？認識され得るような非放射
活性プローブの使用を除外するものではない。

プローブの選択は標本の性質に依る。例えばＲＶを有し
ている可能性がある患者の場合、混合物”　＊　２　＃
　”　ｌ　４　＊　Ｉｓ　ｅ　６及び１が使用される。

混合物１及び２はＢＶ及び皮膚イボの異なる診断を可能
とする。プローブ３はｍｖＫｇｌ連するＨＰＶ０３つの
グループのそれぞれの最もよ（検知されるものを含んで
おり、プローブ７はｍＶのガンに関連するａｐｖのＤＮ
Ａを含んでおり、大多数の］１ｉｉｖの場合の診断を可
靜にするものであり、ｑ＃に従って本発明はさらに、上
記したプローブのい（つかを含むセットあるいは中ツト
にも係り、特に 一上記した１９０ＨＰｖ−ＤＮＡのタイプあるいシエサ
ブタイプのそれぞれの代表的なものの弐工≠れ５が、あ
るいは プリダイゼーションによる幻しム上組での診断試験を目
的とするものである。

言うまでもな（今まで記載したことから、本発明は特異
的に想定されるその実施態様あるいは適用に限定される
ものではな（、それどころか全ての変形例を包含するも
のであり、特定番号を付され図面中に制限地図を示した
ＨＰＶ−ＤＮＡの特許請求の範囲における記載は、Ｉ！
！＃許請求の範囲が前記した定義に従って同じタイプに
分類されるこの）ｆＰＶ−ＤＮＡＫ共通なＨＰＶ−ＤＮ
Ａを全て包含することを示すものであり、特に同じサブ
タイプに属するＨＰＶ−ＤＮＡにおいてはなおさらそう
で−ある。

さらに図面に示した）ＩＰＶ−３２から得られたＤＮＡ
に関して、それが以下の酵素、ＡｖａＩ　、　Ｂａ１ｌ
　。

Ｂａｍ１ｌｉＸ　、　Ｃｌａｍ　、　ＫｃｏＲ１、Ｈ１
ｎｄ工Ｘ　Ｘ　＠　Ｎｄ＠　工ｅ　Ｎｒｕ　Ｘ　＊　Ｐ
ｖｈＩ　ｐＰｖｕＩＸ　、　８ａｃＸ、　８ａｌＩ　、
　Ｒｍａｌ　、　ＴｔｈＸＸＩあるいはＸｍａｌのいず
れによっても開裂されないことが特に指摘される。

また、下記の組換えＤＮＡは１９８４年１１月３０日に
下記の番号でＣ，Ｎ、Ｃ，Ｍ　（ナショナルコレクショ
ン・オプ・カルチエア・オプ・マイクロオーガニズム・
オブ・インステイテエート・）（スツール、パリ）に寄
託されていることも特記しておく。

ｐＢＲ３２２／ＨＰＶ２ｄ　　　　−−−・・・・−Ａ
Ｎ−３７９ｐＢ１’１３２２／ＨＰＶ１０ｂＡ　　−−
・−−−−−・−・　／ＫＸ−３８０ｐＢＲ３２２／Ｈ
ＰＶ１０ｂＢ　　・−・・−・−／１６Ｘ−３８１ｐＢ
Ｒ３２２／ＨＰＶ１４ａ　　　−・−−−−・−−−−
−ＡＮ−３８２ｐＢＲ３２２／ＨＰＶ１４ｂ　　　・・
・−・・−＝・　／１６Ｎ−３８３ｐＢＲ３２２／ＢＰ
’Ｖ１５　　　・−・−−−−−−−−−１６１−３８
４ｐＢＲ３２２／ＨＰＶ１７ａ　　　−−−−−−−−
−−−−／１６Ｎ−３８５ｐＨＰｖ５　　Ｈ１ｎｌＸＩ
ＸＢ／ＨＰＶ１？ｂ　＝　　ＡＮ−３８６ｐＢＲ３２２
／Ｉ（ＰＶ１９　　　＝・・・’　　／１６Ｎ−３８７
ｐＢＲ３２２／ＨＰＶ２０　　−−−−−−−−−−−
−　　ＡＸ−３８８ｐＢＲ３２２／ＨＰＶ２１　　−−
−−−−−−−−−・　１６Ｘ−３８９ｐＨＰＶ５　　
Ｈ１ｎ４ＨＩＢ／）ｉＰＶ２２　　・−／１６　Ｘ−３
９０ｐＢＲ３２２／ＨＰＶ２３　　　　・−−−−−・
−−−−・　／１６Ｎ−３９１ｐＢＲ３，２２／ＨＰＶ
２４ａ　　　＝−”−＝　　／１６１−３９２ｐＢＲ３
２２／ＨＰＶ２４ｂ　　＝−・　、％ｌ−３９３ｐＢＲ
３２２／ＨｐＶ２８　　　・−−−・−”−・＝−ＡＫ
−３９４ｐＢＲ３２２／）ｉＰＶ２９　　　・−・−・
−・・　Ａｌ−３９５ｐＢＲ３２２／ＥＰ’ｔ／３１　
　　・・・・−＝・・・　Ａ６Ｚ−３９６ｐＦ４Ｐ６４
／ＨＰＶ３２　　　　”・・””　　Ａｌ−３９７ｐＬ
１１ｓｌｓ／ＩＰ２　　　　　　・・・・・・・・・・
・・　Ａｌ−４５０ｐ８Ｐ６５／ＩＰ４　　　　　・・
・・・・・↓・・・・　腐Ｘ−４４９本発明はさらに、
前に言及した異なる乳頭腫ウィルスから得た遺伝子Ｅ６
及びＦｉ７の発現の産物にも特に係る。それ等は有効量
で投与すれば乳頭腫ウィルスに関連する腫瘍の進行に対
する抵抗性を宿主に生起することができるワクチンの活
性主成分として使用することができる。

本発明はまた。哺乳動物の免疫化により得られる血清に
も係る。該血清は患者に有効量で特に非経口的に投与可
能な血清調製物とし得、それは対応する乳頭腫ウィルス
のタイプあるいはサブタイこと、特に適当なプロモータ
のコントロール下にベクターにＥ６及び／又はＥ７配列
を結合すること、乳頭腫ウィルスが問題のプロモーター
を認識し易（、それに関する配列な褐現し易い細胞宿主
の形質転換から成る遺伝子工学の技術によるものは、同
業の通常の能力を有する者に対して強調する必要はない
。

このように本発明は１問題の種類の主成分（＃！。

現生成物あるいは対応抗体）を生理的に許容可能な薬理
学的担体と共に含む、薬理学的使用を目的とする組成物
にも係る。特に問題の種類の組成物が非峰口的に投与さ
れる場合は、担体は注射可能な飽和溶液により構成され
る。

最後に、参照した文献の書結目碌な以下に記した。これ
は読者が本テキストを十分に理解するために有用である
と考えられる範囲において、先行技術水準の記載の要件
を満すものである。この理由から、これらの文献の内容
頃記載の一部と考えられるべきものである。

参考文献 （１１エム・ダーストＣＭ、ｏ’１ｒａｔ）他、ブロク
・ナトル・アカド・スジ（Ｐｒｏｃ、Ｎａｆｌ、Ａｃａ
ｄ、Ｆｌｃｉ　）　。

υ１．Ａ、８０　　：　　３８１２−３８１５゜（２）
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ｍａｎ、Ｃ，Ａ、　）他１９８０、ヴイロル（Ｖｉｒｏ
ｌ、　）３６　：　３９５　：４０７・ （６）ニス・ジャブロンスカ（Ｊａｂｌｏｎａｋａ、Ｌ
　）他。

１９７２、カンサー・レス％　３２：５８３−５８９゜ （７）ニスｅジャプロンスカ他、１９８２．スプリンガ
ーーセ２ン、イムノーパソール（ＲｐｒｉｎｇｓｒＳ＠
ｍｉｎ　−Ｉｍｍｕｎｏ−ｐａ　ｔｈｏｌ　−）　５　
ａ　３３−６２゜（８）デー・クレムスドルフ（Ｋｒｅ
ｍａｄｏｒｆ、Ｄ、　）他。

１９８２、ジエイ・ヴイロル、Ｌユニ４３６−４４７゜ （９）デーｅクレムスドルフ他、１９８３．ジエイ・ヴ
イロル、４Ｂ：３４０−３５１゜ （１９：Ｃ４−！　−−ルツツナ−（Ｌｕｔｚｎａｒ　
、　Ｍ、Ａ、　）他。

１９７８、プル・カンサー（Ｂｕｌｌ、Ｃａｎｃｅｒ　
）。

立上：１６９−１８２゜ ａｒＪエム情ニーのルツツナー他、１９８３，９ンセツ
）（Ｌａｎｃ＠ｔ）ｉｉ：４２２−４２４　。

α２エムーミゴツツイ（Ｍｉｇｏｚｚｉ　、Ｍ　）他、
１９６５％プルｅツク・フランク俸デーム・シフ（Ｂｕ
ｌｌ。

Ｓｏｃ、Ｆｒａｎｃ、Ｉ）ｓｒｍ、８ｙｐｈ、　）　、
　７２　：　？　４７−７４８゜ ａＳジー・オルヌ（ｏｒｔｈ、ｅ、）他、１９８０．：
ｙ−ｓｒド・スフリング・ハーバ＋１１コンブ−セル拳
プロリフアレージョン（Ｃｏ１ｄ　８ｐｒｉｎｇ　Ｈａ
ｒｂｏｒＣｏｎｆ、Ｃｓ１ｌ　Ｐｒｏｌ、１ｆｓｒａｔ
ｉｏｎ　）、７：２５９−２８２゜ ａ４シー・オルス他、１９８１．ジエイ・インペスト・
ダーマトール（Ｊ　、　Ｉｎｖａｓｔ、Ｄｅｒｍａｔｏ
ｌ、　）１互＝９７−１０２゜ （至）ジー・オルス他、１９７！、力ンサー・レス王１
：１０７４−１０８２゜ ａＳアール・ニス・オスドロウ（ｏａｔｒｏｖ＊Ｒ−Ｆ
ｌ、）他。

１９８２、プａりｅナトル・アカド・スジ、Ｕ、８．Ａ
、。

７９：１６３４−１６３８゜ 鰭テール・ニス・オスドロウ他、１９８１．アン・アカ
ド・ダーマトール（Ａｎｎ、Ａｃａｄ、Ｄｅｒｍａｔｏ
ｌ　）、８：３９１１−４０４゜ αのエッチ・ツイスタ−（ｐｒｉａｔ、＠ｒｅａ−）他
、１９８３゜カンサー・レス、４３：１４３６−１４４
１゜α饅エッチ・ツイスタ−他、１９８４．ジェイ・グ
イロル、４７：３６３−３６６゜ （至）エッチ・ツイスタ−他、１９８１．インド１１ク
エイ・カンサー（Ｉｎｔ、Ｊ　、Ｃａｎｃｅｒ　）　、
２７　：　６４５÷６５０゜ Ｈエル−ｘ−＊リエーダ（Ｒｕａｄａ、Ｌ、Ａ、　）他
、１９７６、メト・カット・アイｅエルφニーＣＭ１１
（１゜Ｃｕｔ−１，Ｌ−Ａ−）、　２　：　１１３−１
３６゜（２）エム拳すュイター（Ｍ、Ｒｕ１ｔｅｒ）他
、ジエイ・インベスト・ダーツトール、４７：２４７−
２５２゜ （至）ジエイ・ジー・シュトクリフェ（８ｕｔｃｌｉｆ
ｆｅ。

Ｊ、Ｇ、　）、１９７８．ニュークレイツク・アンズ・
レス（Ｎｕｃｌｓｉｃ　Ａｃ１ｄｓ　Ｒａｓ　）　、上
：２７２１−２７２８゜ （財）ティー−ツモリ（Ｔｓｕｍｏｒｉ　、Ｔ−）他、
１９８３゜ジエイ・ジエン・グイロル（Ｊ　、Ｇｅｎ、
Ｖｉｒｏｌ、　）　。

６４：９６γ−９６９゜　　　　　　　　　　園。

【図面の簡単な説明】

Claims (9)

【特許請求の範囲】
1. （１）ＨＰＶ−２ｄ、ＨＰＶ−１０ｂ、ＨＰＶ−１４ａ
   、ＨＰＶ−１４ｂ、ＨＰＶ−Ｉ５、ＨＰＶ−１７ａ、Ｈ
   ＰＶ−１７ｂ、ＨＰＶ−１９、ＨＰＶ−２０、ＨＰＶ−
   ２１、ＨＰＶ−２２、ＨＰＶ−２３、ＨＰＶ−２４、Ｈ
   ＰＶ−２８、ＨＰＶ−２９、ＨＰＶ−３１、ＨＰＶ−３
   ２、ＨＰＶ−ＩＰ２、及びＨＰＶ−ＩＰ４ と指称される乳頭腫ウィルスに由来する ＨＰＶ−ＤＮＡから選択された、約７０００−約８００
   ０の塩基対を有するＨＰＶ−ＤＮＡあるいはＨＰＶ−Ｄ
   ＮＡのフラグメント。
2. （２）遺伝子Ｅ１、Ｅ６＝Ｅ７、Ｌ１又はＬ２に対応す
   るかあるいは前記ＨＰＶ−ＤＮＡの遺伝子間領域に相当
   するフラグメントに対応することを特徴とする特許請求
   の範囲第１項に記載のＤＮＡフラグメント。
3. （３）特許請求の範囲第１項に記載のＨＰＶ−ＤＮＡあ
   るいは特許請求の範囲第２項に記載のフラグメントを含
   有する組換えＤＮＡ。
4. （４）ＨＰＶ−ＤＮＡの検知用プローブとして使用され
   る特許請求の範囲第１項に記載のＤＮＡ、フラグメント
   あるいは組換えＤＮＡ。
5. （５）特許請求の範囲第１項に一致するＨＰＶ−ＤＮＡ
   のそれぞれ異なるいくつかを含むことを特徴とする、乳
   頭腫ウィルスをそれを含む生物学的環境中で検知するの
   に使用し得る組成物。
6. （６）［１］少なくともＨＰＶ−２ｄのＤＮＡ［２］少
   なくともＨＰＶ−１０ｂ、２８及び／又は２９のＤＮＡ
   の１つ ［３］少なくともＨＰＶ−１７及び／又は ２４のＤＮＡの１つ ［４］少なくともＨＰＶＩ４、１５、１７、１９、２０
   、２１、２２及び／又は２３のＤＮＡの１つ ［５］少なくともＨＰＶ１５及び／又は１７のＤＮＡの
   １つ ［６］ＨＰＶ−２４のＤＮＡ ［７］ＨＰＶ１４及び／又は３２のＤＮＡ ［８］ＨＰＶ−３１のＤＮＡ ［９］ＨＰＶ−３２のＤＮＡ をそれぞれ含む９つのプローブのグループ であり、９つのグループのＤＮＡは各グループがそれを
   含むＤＮＡ中の唯一のＤＮＡまで減少させられるような
   範囲でそれぞれ各個に異なる環境下にあるように選択さ
   れると解されることを特徴とする、いくつかのプローブ
   あるいは異なるプローブの混合物を含むキット。
7. （７）［１］少なくともＨＰＶ−２ｄのＤＮＡ［２］少
   なくともＨＰＶ１０ｂ、２８及び／又は２９のＤＮＡの
   一つ ［３］少なくともＨＰＶ１７及び／又は２４のＤＮＡの
   １つ ［４］少なくともＨＰＶ１４、１５、１７、１９、２０
   、２１．２２、２３及び／又はＩＰ４のＤＮＡの１つ ［５］少なくともＨＰＶ１５及び／又は１７のＤＮＡの
   １つ ［６］ＨＰＶ−２４のＤＮＡ ［７］ＨＰＶ１４、３２及び／又はＩＰ４のＤＮＡの１
   つ［８］ＨＰＶ−３１のＤＮＡ ［９］ＨＰＶ−３２のＤＮＡ ［１０］少なくともＨＰＶ１６、１８及び／又はＩＰ２
   のＤＮＡの１つ をそれぞれ含む１０のプローブのグループ であり、１０のグループのＤＮＡは各グループがそれを
   含むＤＮＡの唯一のＤＮＡまで減少させられるような範
   囲でそれぞれ各個に異なる環境下にあるように選択され
   ると解されることを特徴とする、いくつかのプローブあ
   るいは異なるプローブの混合物を含むキット。
8. （８）生物学的試料中に含まれる一つ又は複数の乳頭腫
   ウィルスの検知及び同定方法であって、一つ以上のＨＰ
   Ｖ−ＤＮＡ、ＨＰＶ−ＤＮＡのフラグメントあるいは組
   換えＤＮＡあるいは更に前記生物学的試料から予め得た
   ＨＰＶ−ＤＮＡと優先的にハイブリダイゼーションを起
   す組成物とのハイブリダイゼーションテストを行うこと
   を含む前記方法。
9. （９）特許請求の範囲第１項に特定した乳頭腫ウィルス
   の１つと同じタイプに属することを特徴とする、生物学
   的に純粋な精製乳頭腫ウィルス。