JPS61183297A - プロリンエンドペプチダ−ゼインヒビタ−活性を有する新規ペプチド化合物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は、プロリンエンドペプチダーゼＣＥＣ。

３　、’　４　、２１　、２６　Ｐｒｏｌｙｌ　ｅｎｄ
ｏｐｅｐｔｉｄａｓｅ）に対して酵素阻害活性を示す新
規な化合物に関し、さらにその化学合成法、ならびにそ
れを有効成分として合有するプロリンエンドペプチダー
ゼ活性阻害剤及び薬剤、特に抗健忘症剤としての利用に
関するものである。

（従来技術） プロリンエンドペプチダーゼは、神経伝達物質とされて
いるサブスタンスＰ％Ｔ　、ＲＨ（甲状腺刺激ホルモン
）及びノイロテンシンや、記憶と関係があると考えられ
ているパップレシンζこ作用し、これらを不活性化する
ことが知られている。−万、長崎大学薬学部の鶴、芳本
両氏は、プロリンエンドペプチダーゼ活性を阻害する化
合物が、ラットのスコポラミンｌこよる実験的健忘症を
予防することを見い出し、プロリンエンドペプチダーゼ
活性阻讐物負の、抗健忘症剤への応用の可能性を示唆し
て℃する。

（発明カイ解決しようとする技術課題）本発明名らは、
上記の知見に基づき、抗健忘症活性が強く、かつ毒性の
光分低い新規な化合物を見出すべく研究した結果、下記
一般式（１）で衣わさｔｔ、ル抗プロリンエンドペプチ
ダーゼ活性を有するペプチド誘導体か、スコポラミンに
より引き起される実験的逆行性健忘症に著しく優れた作
用を有することを見い出し、本発明を構成した。

（発明の構成） 本発明のペプチド誘導体は、一般式（Ｉ）：（式中、Ａ
はメチル基又はベンジルオキシ基を表わし、 Ｒは一つの式Ｉ中では同じ意味を有することを条件にイ
ソプロピル基又はイソブチル基Ｙ＆わし、ｎは２又は３
の数を表わす。） で表わされる。

本発明の式（１１の化合物は、ペプチド様化合物で、従
来よく知られているピラセタム肪導体系の抗健忘症剤と
は太きく異っており、またペプチド性化合物であるため
、生体に対する嵜性も極めて低いものである。

式（１）の化合物のうち、抗プロリンエンドペプチダー
ゼγ＾件の大きい点で好ましい化合物は次のものである
。なお、以下これらをカッコ内の番号で呼ぶことかある
。

ＨＯ Ｃ８ＵＡＭ　　１０００） ＨＯ （ＳＵＡＭ　１１００１ ）Ｃ８ＵＡ　　１１００２ ）Ｃ８ＵＡ　　１１００３ ）（ｓＵＡ　　１００４） 本発明の一般式（１）の化合物は次のよう番こして合成
することが出来る。なお、以下の説明において各略号は
次のいみを衣す。

Ｚ：ベンジルオキシカルボニル基 Ａｃ　ニアセチル基 Ｂｏｃ　：　ｔ−ブトキシカルボニル基Ｖ（Ｌ４　：バ
リン残基 Ｌｅｕ　：ロイシン残基 Ｐｒｏ　ニブロリン残基 ＯＭｅ　：メチルエステル基 ＷＳＣＩ：Ｎ−エチル−ＮＺ　、　＃／−ジメチルアミ
ノプロピルカルポジイミド ＴＥＡニトリエチルアミン ＴＦＡニトリフルオロ酢酸 本発明の合成法（こまり、式（１）の化合物を製造する
番こは、次の一般式（■）： （式中、Ａ、Ｒ及びｎは前記式１で示された意味を表し
、Ｒ′はメチル基、又はエステル基な六丁。）で表され
るエステルを第三ブチルアルコールをこ懸濁し、水素化
ホウ素す）　ＩＪウムを加え、不活性気体中で還流下メ
タノールを滴下することｌこより、次の一般式曲）： で表わされるアルコール４こ変換し、次いで該アルコー
ルをジメチルスルホキシド中、三酸化イオウ−ピリジン
錯体で酸化１′ろことζこまり前ｄ［４一般式（１）で
表される化合物を得ることか出来ろ。

１ｆｃ、一般式（Ｉｌｌで表される出発物負け、常法ｌ
こよりアば）木端をＢＯＣＭ等の保護基で保護した相当
するアミノ酸又はペプチドと、カルボキシ木端をエステ
ル基等で保護した相当するアミノ酸又はペプチドとを適
宜反応させて得ることが出来る。

以下、実施例および参考例ζこより本発明をさらに詳し
く説明１′−る。

診　考　例　　式（Ｉｔ）で衣される出発物質の合成（
１１Ａｃ−Ｖａｌ−Ｖａ４−Ｐｒｏ−０Ｍｇの合成（Ｌ
）　　Ｂｏｃ−Ｖａｌ−Ｖａｌｊ−ＯＭｅＢｏｃ−Ｖａ
ｌｌ−ＯＨ（１当量）、Ｖａｌ−ＯＭ　ｅ　−１１Ｃｌ
（１当量）及びＴＥＡ（１当量）を乾燥地化メチレンに
溶解し、水冷下ｉこＷＳＣＩ（１当りを加える。室温で
１６時間撹拌したのち、反応数ｗｘｙ塩酸、水、飽Ａ［
」重１水及び飽和食塩水で抗い、無水硫酸マグネシウム
で乾燥する。溶媒な減圧留去して目的化合′吻の結晶を
得ろ。

ｂ）　Ａ　ｃ−Ｖａｌ−Ｖａｌｌ−ＯＭｅＢｏｃ−Ｖａ
ｌ−Ｖａｌ−ＯＭｇ（１当量）を塩化メチレンｌこ溶解
し、水冷下、ＴＦＡ　（１０当ｉ）を加え、室温で５時
間撹拌１−る。反応液を減圧濃縮したのち、無水エーテ
ルを加え、析出する結晶をＰ集して、乾燥塩化メチレン
ｌこ懸濁させ、無水酢酸を加えろ。室温で１６時間撹拌
したのち、反応液を減圧濃縮して得られた残渣を酢酸エ
チルに溶解させ、水、飽和重信−水及び飽オ０食塩水で
洗う。無水硫酸マダイ、シウムで乾燥し、溶媒を減圧留
去して目的化合物を得る。

ｃ）　Ａ　ｃ−Ｖ（Ｌ７−Ｖａｌｌ−０１１Ａｃ−Ｖａ
ｌ−Ｖｒｔ１３−ＯＭｇ　（１当量）をメタノールに溶
解し、１７’ｌｌ’水酸化ナトリウム（２当量）を加え
、室温で２時間撹拌する。反応液な減圧濃縮しく８） たのも、ｌＮ塩酸を加えて酸性とし、酢酸エチルで抽出
する。抽出液を飽４０食塩水で抗い、無水硫酸マグネシ
ウムで乾燥したのち、俗ｔｓケ減圧苗去し、目的化−８
′物の結晶な得る。

ｄ）　Ａｃ−Ｖａｌ−Ｖａｌ３−Ｐｒｏ−ＯＭｅＡ　ｃ
−Ｖａｌｊ−Ｖａｌ３０Ｈ（１当菫）、Ｐｒｏ−ＯＭｇ
−ＨＣＩＩ　（１当量）、ＴＥＡ＜１当量）を乾燥塩化
メチレンに溶解し、氷冷下にＷＳＣＩＣ１当量）を加え
ろ。室温で１６時間撹拌したのち、反応ｇをｌＮ塩酸、
水、飽本１重曽水及び飽第１食塩水で洗い、無水硫酸マ
グネシウムで乾燥する。溶媒を誠ｆｆ、笛去し目的化合
物を得る。

実施例Ｌ　　（ＳＵＡＭ　１００４の合成）ａ）　　Ａ
ｃ−Ｗａｉｌ−Ｖａｌ−Ｐｒｏ−ｏ１参考例で得たＡｃ
−Ｖａｌ−Ｖａｌｊ−Ｐｒｏ−ＯＭｇ（５７０ｔｎｙ、
　１．５４ミリモル）と水素化ホウ素すトリウム（１５
０ｍ９．３．８６ミリモル）を第三ブチルアルコール（
１２ｄ）ｔこ懸濁させ、窒素気流下ｌこ加熱撹拌し、次
いで還流下無水メタノール（２−）を滴下した。滴下終
了後、１時間還流撹拌したのち室温にもどし、水冷下に
水（１，ｏｉ）を加えた。

メタノールと第三ブチルアルコールを減圧留去した後、
酢酸エチルで３回抽出し、飽４［」食ｊ盆水で洗浄して
、無水価酸マグネシウムで乾燥した。酢酸エチルを減圧
留去して得られた粗結晶をシリカゲルの中圧カラムクロ
マトグラフィー（浴媒糸クロロホルム）で精製し、目的
化合物（４８０１％ｌ。

Ｃ＋＋５Ａ）を得た。

ｂ）ＳＵＡＭ　１００４ Ａｃ−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｐｒｏ−ｏｌ（４４０ｒＲ９、
１，３ミリモル）とトリエチルアミン（０，７２ｍｌ　
、　５．２ミリモル）を無水ジメチルスルホキシド（５
，５ｍ／）奢こ浴かし、撹拌下に三酸化イオウ−ピリジ
ン錯体（８２０ＩＴＱ　、　５．２ミリモル）のジメチ
ルスルホキシド（５−）溶液を加えた。室温で１０分撹
拌後、氷水（２０ｍＺ）ζこ注ぎ、酢酸エチルで３回抽
出し、１０Ｘクエン酸水溶液、水、飽和重曹水及び飽和
食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。酢
酸エチルを減圧留去して得られた油状粗生放物をシリカ
ゲルの中圧カラムクロマトグラフィー（溶媒系クロロホ
ルム）で精製シ、ＳＵＡＭ１００４（３３０１１１９，
７５％）’に得た。

同様にしてＳＵＡＭ　　１．０　（１０（Ａｃ−Ｌｅｕ
−Ｌｅｕ−Ｐｒ　ｏ−Ｃｌ１Ｏ）　　も得られる。

得られた化合物の物性は後記衣１１こ示す。

実　施　例　ｚ　　（ＳＵＡＭ　１ｏｏｌの合成ンａ）
　Ｚ−Ｖａｌｊ−Ｖａｌ−Ｐｒｏ−ｏｌＺ−Ｖａｌｊ−
Ｖａｌｊ−Ｐｒｏ−ＯＭｇ　　（１，３ｊ、〆　、　２
．８　ミ　リモル）と水素化ホウ素ナトリウム（２６７
〜。

７．１ミリモル）を第三ブチルアルコール（１２ｓｆ）
ｌこ懸濁させ、窒素気流下ｌこ加熱攪拌し、次いで還流
下無水メタノール（１，１ｍＪ）’！ａ？滴下した。滴
下終了後１時間還流撹拌したのち￥温１こもどし、水冷
下ｔこ水（１０ｍｌ）を加えた。メタノールと第三ブチ
ルアルコールを減圧留去した後、酢酸エチルで３回抽出
し、飽オ１食塩水で洗浄して無水硫酸マグネシウムで乾
燥した。酢酸エチルを減圧留去して得られた粗生成物を
シリカゲルの中圧カラムクロマトグラフィー（溶媒系ク
ロロホルム）で精製し、目的化合物（１，０ｙ、８２Ｘ
）を得た。

ｂ）ＳＵＡＭ　１００１ Ｚ−Ｖａｌｌ−１１ａｌ−Ｐｒｏ−ｏｌ（１，Ｏｇ、２
．３ミリモル）とトリエチルアミン（ｌｄ、７．０ミリ
モル）を無水ジメチルスルホキシド（７ｍ１．）に溶か
し、撹拌下に三酸化イオウ−ピリジン錯体（１，１ｐ。

７．０ミリモル）のジメチルスルホキシド（７ｍ）溶液
を加えた。室温で１０分間撹拌後氷水（３０ｒｎｔ）に
注ぎ、酢酸エチルで３回抽出し、１０９６クエン酸水溶
液、水、飽和重曽水及び飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸
マグネシウムで乾燥した。酢酸エチルを減圧留去して得
られた粗生成物をシリカゲルの中圧カラムクロマトグラ
フィー（溶媒系クロロホルム）で精製し、ＳＵＡＭ　　
１０１００１（８００，８０先）を得た。

同様ｆこしてＳＵＡＭ　　Ｉ　Ｏ０２（Ｚ−Ｌｅｓｂ−
Ｌｅｒｂ−Ｐｒｏ−ＣＨＯ）及び、ＳＵＡＭ　　ｌ　０
０３　（Ｚ　−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｖａｌ４−Ｐｒｏ−Ｃ
ＩＩＯ）Ｙ得た。

得られた化合物の物性は後記衣１ζこ示す。

実施例２ 抗プロリンエンドペプチダーゼ活性のａｌｌ定抗プロリ
ンエンドペプチダーゼ活性の測定は、芳本（Ｔ、　Ｙｏ
ｓｈｉｍｏｔｏおよびり、　Ｔｓｕｒｒｔ、、　Ａｇｒ
。

Ｂｉｏｌ、　Ｃｈｅｍ、４２．２４１７．１９７８）等
の方法で行った。即ち、０．００２５Ａｆ　　Ｚ−グリ
シル−プロリン−β−ナフチルアミド０．２５　ｍｌ、
　０．１Ａｆリン酸緩衝Ｗ　（ｐＨ７，０）　０．９９
−および本発明の抗７’ロリンエンドペプチダーゼ化合
物の溶液α０１−を含む混合液を試験管中で３７℃、３
分間加温した後、プロリンエンドペプチダーゼ溶９（０
，２単位／ｍ）を０．１７！加え、３５℃で１０分間反
応させた。その後、１Ｍ酢酸緩衝液（ｐＨ４，０）中の
トリ　トン−Ｘ−１００ＣＴｒｉｔｏｎＸ−１００）溶
液２．０−を界面活性剤の最終濃度が１０％となるよう
に加え、室温に１５分間放置したのち、４１０ｎｍｊこ
おける吸光度（ａｌを測定した。

同時（コ抗プロリンエンドペプチダーゼ化合物の溶液の
代りに緩衝液のみを用いた盲検の吸光度（ｂ）を測定し
、プロリンエンドペプチダーゼ阻害率を、次式： ％式％ １こより計算し、５０丸阻害に必要な蓋ｒ−ＩＣ，ｏ〕
を求めた。試験結果７表２に示す。

衣　　２ 実施例ａ ラットを用いたスコポラミンｌこよる実験的健忘症の予
防効果の測定（腹腔内投与） 本発明の抗プロリンエンドペプチダーゼ化合物ｌこつい
て、スコポラミンによる長期記憶固定阻害を防止する効
果を検討した。即ち、本発明の化合物を２０ｍ９／権、
２ｍ９／榴、０．２〜／勿および０・０２〜／ｋｇ含有
ｊる生理食塩水を夫々ウィスター（Ｗｉｓｔｅｒ　）　
　系雄性ラット（１００〜１２０ｇ）の腹腔に１回投与
し、投与１時間後に電気ショックによる受動的回避学習
を行ない、直後ｌこスコポラミンＢＪｎ９／ｋｇ’に腹
腔内投与した。

効果の判定は、２４時間後及び４８時間後の受動的回避
テストで、供試化合物を投与しないでスコポラミン及び
生理食塩水を腹腔内投与した対照動物群と、供試化合物
の投与及びスコポラミンの投与を共ｌこ行った動物群の
各々につき、健忘症ラット、非健忘症ラットの数を対比
する事にまり行なった。試験結果を表３４こ示す。

（ｌ））

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 一般式 I ： ▲数式、化学式、表等があります▼（ I ） （式中、Ａはメチル基又はベンジルオキシ基を表わし、 Ｒは一つの式 I 中では同じ意味を有することを条件に
   イソプロピル基又はイソブチル基を表わし、ｎは２又は
   ３の数を表わす。） で表わされる化合物。