JPS61173798A - B−細胞新生物の検出法 - Google Patents
B−細胞新生物の検出法Info
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- JPS61173798A JPS61173798A JP60221111A JP22111185A JPS61173798A JP S61173798 A JPS61173798 A JP S61173798A JP 60221111 A JP60221111 A JP 60221111A JP 22111185 A JP22111185 A JP 22111185A JP S61173798 A JPS61173798 A JP S61173798A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
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Description
【発明の詳細な説明】
発明の背景
本発明は、デ・デパートメント・オプ・ヘルス、エデュ
ケーション・アンド・ウェル7エア(tMDepart
ment of Health 、 Educatio
n and Welfare)からの助成金または奨学
金の下での研究の進行中に行なわれた。
ケーション・アンド・ウェル7エア(tMDepart
ment of Health 、 Educatio
n and Welfare)からの助成金または奨学
金の下での研究の進行中に行なわれた。
癌の有利な予知は悪性細胞の初期の検出に依存する。B
−細胞新生物、例えばリンパ球性白血病、濾胞性リンパ
腫、その他は染色体転座を有する異常型細胞から発達す
る。新生物B−細胞の核学的分析は、それらが特定新生
物に特有の染色体転座をもつことを示している〔エリク
ソン(grikson)等、プロシーデインダス・オデ
・ナショナル・アSci、 USA ) 80 ; 4
822〜4826 (1983)、およびProc、
Nat′IAcad、 8ci、 USA 81 :
4144〜1448(1984)参照〕。例えば、染色
体14と18の間の転座はヒト濾胞性リンパ腫の特徴で
ある〔クロース(Croce )等、Proc、 Na
t’IAcad、 Sci、 U3A30 : 692
2〜6926(1983)およびユ= (Yuni )
等、N、 Engl。
−細胞新生物、例えばリンパ球性白血病、濾胞性リンパ
腫、その他は染色体転座を有する異常型細胞から発達す
る。新生物B−細胞の核学的分析は、それらが特定新生
物に特有の染色体転座をもつことを示している〔エリク
ソン(grikson)等、プロシーデインダス・オデ
・ナショナル・アSci、 USA ) 80 ; 4
822〜4826 (1983)、およびProc、
Nat′IAcad、 8ci、 USA 81 :
4144〜1448(1984)参照〕。例えば、染色
体14と18の間の転座はヒト濾胞性リンパ腫の特徴で
ある〔クロース(Croce )等、Proc、 Na
t’IAcad、 Sci、 U3A30 : 692
2〜6926(1983)およびユ= (Yuni )
等、N、 Engl。
J、 Mo2.3’07 : 1231〜1236 (
1982)参照〕。
1982)参照〕。
しかし、リンパ球の核学的分析は、これらB−細胞新生
物の染色体再配列を検出するために多数の個人をスクリ
ーニングする能率的技術ではない。
物の染色体再配列を検出するために多数の個人をスクリ
ーニングする能率的技術ではない。
従って、疑われたB−細胞新生物の診断のための簡便な
試験法に対する要望がある。
試験法に対する要望がある。
発明の要約
本発明の一つの目的はB−細胞新生物における染色体転
座を検出し、同定する試験を提供することにある。
座を検出し、同定する試験を提供することにある。
本発明のもう一つの目的は転座により生じた雑種染色体
の存在を検出できるDNAプローブを提供することにあ
る。
の存在を検出できるDNAプローブを提供することにあ
る。
本発明によれば、標識したDNA 7’ 0−デを制限
B−細胞DNA K雑種形成させ(前記DNAプローブ
は悪性B−細胞の雑種染色体の制限部位と前記染色体の
切断点との間にあるDNAの領域に雑種形成し、前記制
限部位は前記領域に独特である)、前記DNA!ロー少
が雑種形成する制限−包体DNA断片ア゛パメ゛−ンを
同定し、そして試験パターンと制限された正常染色体D
NAのパターンとの間の差異番検出することからなるB
−細胞新生物の診断法が提供される゛。
B−細胞DNA K雑種形成させ(前記DNAプローブ
は悪性B−細胞の雑種染色体の制限部位と前記染色体の
切断点との間にあるDNAの領域に雑種形成し、前記制
限部位は前記領域に独特である)、前記DNA!ロー少
が雑種形成する制限−包体DNA断片ア゛パメ゛−ンを
同定し、そして試験パターンと制限された正常染色体D
NAのパターンとの間の差異番検出することからなるB
−細胞新生物の診断法が提供される゛。
本発明で使用するDNAプローブは、B−細胞の悪性変
換に含まれる転座染色体上に位置する遺伝子の場所を明
らかKするものである。本発明は、病気の初期段階忙あ
る患者の濾胞性リンパ腫、分散B−細胞リンパ腫、その
他のようなり一細胞新生物の検出と同定を可能にする。
換に含まれる転座染色体上に位置する遺伝子の場所を明
らかKするものである。本発明は、病気の初期段階忙あ
る患者の濾胞性リンパ腫、分散B−細胞リンパ腫、その
他のようなり一細胞新生物の検出と同定を可能にする。
本発明は正確な診断のために明白な症状が現われる必要
がない。
がない。
発明の詳細な記述
本発明における使用が全回されたDNA 7’ロープは
、染色体転座をもつ試験管内に保たれたB−細胞系のD
NAから、あるいはB−細胞新生物をもつ患者から直接
得られた新鮮試料から誘導できる。
、染色体転座をもつ試験管内に保たれたB−細胞系のD
NAから、あるいはB−細胞新生物をもつ患者から直接
得られた新鮮試料から誘導できる。
完全なrツムライブラリーがこれら細胞系のDNAから
調製できる。rツムライブラリーを構成するための公知
の技術のいずれも使用できる。このような手順はデノム
DNAを制限酵素で部分消化し、DNA断片(長さ15
から25 kl) )を精製し、これら断片をラムダ−
ファージベクターのDNAで結合し、そして試験管内で
パッケージすることを包含するが、これに制限されない
。
調製できる。rツムライブラリーを構成するための公知
の技術のいずれも使用できる。このような手順はデノム
DNAを制限酵素で部分消化し、DNA断片(長さ15
から25 kl) )を精製し、これら断片をラムダ−
ファージベクターのDNAで結合し、そして試験管内で
パッケージすることを包含するが、これに制限されない
。
DNAの目的断片は、独立した組換え7アージを、B−
細胞系に、あるいは新しい腫瘍細胞に存在する雑種染色
体の切断点付近く位置する遺伝子配列に特異的なプルー
プでスクリーニングすることにより得ることができる。
細胞系に、あるいは新しい腫瘍細胞に存在する雑種染色
体の切断点付近く位置する遺伝子配列に特異的なプルー
プでスクリーニングすることにより得ることができる。
例えば、染色体14上の免疫グロブリンH鎖遺伝子は切
断点付近にある。
断点付近にある。
染色体22上の免疫グロブリンラムダ−鎖遺伝子は切断
点近くにあり、カッパー鎖免疫グロブリン遺伝子は染色
体2の切断点の近くKある。c−myc癌遺伝子は染色
体8の切断点の近くKある。
点近くにあり、カッパー鎖免疫グロブリン遺伝子は染色
体2の切断点の近くKある。c−myc癌遺伝子は染色
体8の切断点の近くKある。
切断点という用語はここで用いているように結合領域と
して引用しているが、これはまたDNA主鎖をなすヌク
レオチド間の共有結合が切れて異なる染色体から誘導さ
れたヌクレオチドと共に再形成する場所を指す。このよ
5Kして生じた染色体は1つ以上の染色体から誘導され
たDNAからなる雑種染色体である。染色体14および
18t−含む転座は大多数のリンパ腫に観察されている
。染色体8と2.8と14.8と22、および11と1
4を含むB−細胞新生物に生する他の転座も知られてい
る。
して引用しているが、これはまたDNA主鎖をなすヌク
レオチド間の共有結合が切れて異なる染色体から誘導さ
れたヌクレオチドと共に再形成する場所を指す。このよ
5Kして生じた染色体は1つ以上の染色体から誘導され
たDNAからなる雑種染色体である。染色体14および
18t−含む転座は大多数のリンパ腫に観察されている
。染色体8と2.8と14.8と22、および11と1
4を含むB−細胞新生物に生する他の転座も知られてい
る。
転座をもつB−細胞は二つの雑種染色体:植字的分析に
よるとその相同染色体よりも長いと思われる雑種染色体
、および植字的分析によりその相同染色体より短いと思
われる雑種染色体を有する。
よるとその相同染色体よりも長いと思われる雑種染色体
、および植字的分析によりその相同染色体より短いと思
われる雑種染色体を有する。
ここで用いた雑種染色体という用語は1つ以上の染色体
から生じたDNAからなるど゛の染色体に対しても包括
的である。
から生じたDNAからなるど゛の染色体に対しても包括
的である。
雑種染色体の切断点にまたがる染色体領域から誘導され
たDNAは胚系DNAとは異なる制限地図を有し、従っ
て制限地図分析によって同定できる。
たDNAは胚系DNAとは異なる制限地図を有し、従っ
て制限地図分析によって同定できる。
例えば、切断点Klたかる正常染色体14から誘導され
たDNAクローンは制限酵素または酵素群で切ると特徴
的な制限地図を有する。切断点Kまたがり、従って染色
体14から、および他の染色倣例えば染色体18からの
DNA配列を含む雑種染色体14から誘導体されたDN
Aクローンは同じ制限酵素または酵素群で切ると異なる
制限地図をもつが、それはこのDNAクローンのヌクレ
オチド配列が正常染色体14から誘導されたクローンの
ヌクレオチド配列と異なるからである。制限地図は、D
NAセグメントを制限酵素または幾つかの制限酵素群で
切るとき生ずる特別な寸法のDNA断片のパターンを表
わす。特定のDNA配列を識別し、切断する制限酵素は
この分野で公知であり、微生物から精製されるEaoR
I、Hind l 、および8au3aといった酵素を
包含するが、これらに限定されない。
たDNAクローンは制限酵素または酵素群で切ると特徴
的な制限地図を有する。切断点Kまたがり、従って染色
体14から、および他の染色倣例えば染色体18からの
DNA配列を含む雑種染色体14から誘導体されたDN
Aクローンは同じ制限酵素または酵素群で切ると異なる
制限地図をもつが、それはこのDNAクローンのヌクレ
オチド配列が正常染色体14から誘導されたクローンの
ヌクレオチド配列と異なるからである。制限地図は、D
NAセグメントを制限酵素または幾つかの制限酵素群で
切るとき生ずる特別な寸法のDNA断片のパターンを表
わす。特定のDNA配列を識別し、切断する制限酵素は
この分野で公知であり、微生物から精製されるEaoR
I、Hind l 、および8au3aといった酵素を
包含するが、これらに限定されない。
切断点にまたがるDNAはサブクローンとして発生させ
ることができ、そして切断点の一方の側だけに雑種形成
するDNAデローデを選択するよう処理できる。即ち、
それを精製し、望む制限酵素で切ってDNA断片をつく
り、次にこのものをグラスミドベクターの中にクローン
を発生させ、微生物中で増殖させる。サブクローンから
単離されたDNAは唯一つのヒト染色体、例えば染色体
14を含む雑種細胞(例えば、葺歯動物×ヒト細胞)か
ら誘導されたDNA K雑種形成させることができ、そ
してまた異なるヒト染色体、例えば染色体18を含む雑
種細胞に雑種形成させることができる。
ることができ、そして切断点の一方の側だけに雑種形成
するDNAデローデを選択するよう処理できる。即ち、
それを精製し、望む制限酵素で切ってDNA断片をつく
り、次にこのものをグラスミドベクターの中にクローン
を発生させ、微生物中で増殖させる。サブクローンから
単離されたDNAは唯一つのヒト染色体、例えば染色体
14を含む雑種細胞(例えば、葺歯動物×ヒト細胞)か
ら誘導されたDNA K雑種形成させることができ、そ
してまた異なるヒト染色体、例えば染色体18を含む雑
種細胞に雑種形成させることができる。
ヒト染色体18を含む細胞からのDNAに雑種形成する
が、ヒト染色体14を含む細胞からのDNA K対して
は雑種形成しないサブクローンを選ぶことができる。別
法として、染色体14に対して雑種形成するが18に対
しては形成しないサブクローンも選ばれる。切断点の唯
一の側に染色体DNAに対して相同のDNAを含むサブ
クローンが本発明における使用に企図されたDNA f
ロープである。明らかなように5本発明は切断点のいず
れの側にあるDNA K対しても雑種形成するDNAプ
ローデの使用を企図するものである。DNA fロープ
の寸法は約20個のヌクレオチドからおよそ数百または
数予測のヌクレオチドまで変化しうる。
が、ヒト染色体14を含む細胞からのDNA K対して
は雑種形成しないサブクローンを選ぶことができる。別
法として、染色体14に対して雑種形成するが18に対
しては形成しないサブクローンも選ばれる。切断点の唯
一の側に染色体DNAに対して相同のDNAを含むサブ
クローンが本発明における使用に企図されたDNA f
ロープである。明らかなように5本発明は切断点のいず
れの側にあるDNA K対しても雑種形成するDNAプ
ローデの使用を企図するものである。DNA fロープ
の寸法は約20個のヌクレオチドからおよそ数百または
数予測のヌクレオチドまで変化しうる。
本発明への使用に企図された細胞系は染色体転座をもつ
悪性B−細胞から誘導される。このような細胞系は慢性
リンパ球白血病、濾胞性リンパ腫、分散B−細胞リンパ
腫、および他の白血病またはリンパ腫を包含するが、こ
れらの限定はされない。
悪性B−細胞から誘導される。このような細胞系は慢性
リンパ球白血病、濾胞性リンパ腫、分散B−細胞リンパ
腫、および他の白血病またはリンパ腫を包含するが、こ
れらの限定はされない。
このような細胞は当業者にとって周知の標準技術を用い
ることにより培養できる。
ることにより培養できる。
上記は本発明に係るDNAプローデを得る代表的手順で
ある。この分野で公知の他の手順も使用できる。
ある。この分野で公知の他の手順も使用できる。
B−細胞の如何なる給源も本発明に係る診断試験に使用
するのに適している。例えば、診断試験は、B−m胞腫
瘍の存在に対してスクリーニングされている個人から得
た末梢血液試料を使用できる。DNAは当業者にとって
よく知られた標準技術を用いてリンパ球から精製される
。リンパ球DNAの幾つかの部分をそれぞれ制限酵素ま
たは酵素群と共にインキエイーションする。制限酵素は
、染色体のDNAをこの制限酵素で切るとき、プローブ
が染色体の切断点と選ばれた制限酵素が切るDNA配列
との間にあるDNAの領域に雑種形成するように選ばれ
る。このDNA領域はこのようKしてこの制限酵素に対
して独特の部位を含む。プローブはまた制限部位を越え
てDNA配列に雑種形成しうる。
するのに適している。例えば、診断試験は、B−m胞腫
瘍の存在に対してスクリーニングされている個人から得
た末梢血液試料を使用できる。DNAは当業者にとって
よく知られた標準技術を用いてリンパ球から精製される
。リンパ球DNAの幾つかの部分をそれぞれ制限酵素ま
たは酵素群と共にインキエイーションする。制限酵素は
、染色体のDNAをこの制限酵素で切るとき、プローブ
が染色体の切断点と選ばれた制限酵素が切るDNA配列
との間にあるDNAの領域に雑種形成するように選ばれ
る。このDNA領域はこのようKしてこの制限酵素に対
して独特の部位を含む。プローブはまた制限部位を越え
てDNA配列に雑種形成しうる。
適当な制限酵素の選択は当業者のよくするところである
。
。
制限DNA試料はアガロースデル電気泳動により分離で
き、サデーン(8outhern ) (エリクソン7
585(1983)]により本質的に記述されている通
り、ニトロセルロースフィルターに吸い取らせることが
できる。制限されたDNA断片を分離しそれらを更に処
理するための適当な基質に移す他の手順も用いることが
できる。
き、サデーン(8outhern ) (エリクソン7
585(1983)]により本質的に記述されている通
り、ニトロセルロースフィルターに吸い取らせることが
できる。制限されたDNA断片を分離しそれらを更に処
理するための適当な基質に移す他の手順も用いることが
できる。
ニトロセルロースフィルター上または他の適当な基質上
の分離されたDNA区域は、腫瘍から誘導されたB−細
胞系における転座染色体の切断点近くのDNA領域と相
同である標識DNA プローブに雑種形成される。この
雑種形成反応は当業者にとって公知の標準条件下で実施
できる。その後、分離されたDNA区域を雑種形成が起
きたかどうかを決定するように調べる。腫瘍性であるリ
ンパ球試料からのDNAは対照DNAとは異なった雑種
形成パターンを示すが、それは雑種形成パターンが寸法
に変化を起こすか、あるいは再配列した雑種染色体から
誘導された断片によるプローブの雑種形成を表わす追加
の雑種形成パターンが現われるからである。
の分離されたDNA区域は、腫瘍から誘導されたB−細
胞系における転座染色体の切断点近くのDNA領域と相
同である標識DNA プローブに雑種形成される。この
雑種形成反応は当業者にとって公知の標準条件下で実施
できる。その後、分離されたDNA区域を雑種形成が起
きたかどうかを決定するように調べる。腫瘍性であるリ
ンパ球試料からのDNAは対照DNAとは異なった雑種
形成パターンを示すが、それは雑種形成パターンが寸法
に変化を起こすか、あるいは再配列した雑種染色体から
誘導された断片によるプローブの雑種形成を表わす追加
の雑種形成パターンが現われるからである。
関連領域における多形を探索したが、見出されたことが
ない。従って、個々の正常細胞の正常なりNAパターン
を本発明の試験に対する標準化された対照として使用で
゛きる。必要ならば、試験されている個人からの正常細
胞(例えば、T−細胞またはB−細胞でない他の細胞)
からのDNAを、もしこのような追跡試験を遂行するな
ら追跡試験に用いることができる。
ない。従って、個々の正常細胞の正常なりNAパターン
を本発明の試験に対する標準化された対照として使用で
゛きる。必要ならば、試験されている個人からの正常細
胞(例えば、T−細胞またはB−細胞でない他の細胞)
からのDNAを、もしこのような追跡試験を遂行するな
ら追跡試験に用いることができる。
本発明の試験に対する一つの典聾的手順において、DN
Aプローブは、例えば放射性リンで標識できそして固体
基質に移されたデルからのDNAをそれで雑種形成する
。基質を洗浄し、乾燥し、そして試験の結果を目に見え
るようにするために%X−線フイルムに乾燥基質をさら
すととくより雑種形成を検出する。腫瘍をもたない制限
リンパ球DNλ試料に相当するデルのレーンは雑種形成
の特徴的パターンを示し、そして試験DNAを比較する
対照レーンとして役立つ。DNAプローブを標識し雑種
形成を検出するための他の手段は当業者にとって公知で
あり、これらもまた使用できる。
Aプローブは、例えば放射性リンで標識できそして固体
基質に移されたデルからのDNAをそれで雑種形成する
。基質を洗浄し、乾燥し、そして試験の結果を目に見え
るようにするために%X−線フイルムに乾燥基質をさら
すととくより雑種形成を検出する。腫瘍をもたない制限
リンパ球DNλ試料に相当するデルのレーンは雑種形成
の特徴的パターンを示し、そして試験DNAを比較する
対照レーンとして役立つ。DNAプローブを標識し雑種
形成を検出するための他の手段は当業者にとって公知で
あり、これらもまた使用できる。
本発明の一つの具体例においては、試験細胞DNAを、
異なる転座を有する細胞系から誘導されるDNAプロー
ブ混合物に雑種形成する。もし最初のスクリーニングが
明確な結果を与えたならば、別僅のDNAプローブを用
いるそれ以上のスクリーニングを行なうことができる。
異なる転座を有する細胞系から誘導されるDNAプロー
ブ混合物に雑種形成する。もし最初のスクリーニングが
明確な結果を与えたならば、別僅のDNAプローブを用
いるそれ以上のスクリーニングを行なうことができる。
下記の例は説明の目的のためであって、本発明の範囲を
制限しよ5とする意図はない。
制限しよ5とする意図はない。
例 1
末梢血液および骨髄塗抹の形態学的検査に基づき、急性
リンパ母細胞白血病型L2(pAB分類)を有すると診
断された15才の少年から末梢血液を採った。診断の根
拠となるデータを表IK:l)約する。
リンパ母細胞白血病型L2(pAB分類)を有すると診
断された15才の少年から末梢血液を採った。診断の根
拠となるデータを表IK:l)約する。
表1
過ヨウ素酸シック 00
ペルオキシダーゼ 00
アルカリ性ホスフアターゼ 10 0
−ナフチルーアセテートー二大門→ぜ 12
0表面マーカー 多価免疫グロブリン 20 SRBC20 Fcレセプター イ、 c3bレセプター 50 B33.1 81 95J
−58089 0KT−3100 0KT−イ、0 0KT−610 oxT−820 0KT−11110 L5−1 60
72細胞内マーカー 核’I”cLT 92’ 90細
胞質免疫グロビン 00 Ii8BNA 0 01
再発時の患者からの未分離末梢血液細胞(9月、198
3)。
−ナフチルーアセテートー二大門→ぜ 12
0表面マーカー 多価免疫グロブリン 20 SRBC20 Fcレセプター イ、 c3bレセプター 50 B33.1 81 95J
−58089 0KT−3100 0KT−イ、0 0KT−610 oxT−820 0KT−11110 L5−1 60
72細胞内マーカー 核’I”cLT 92’ 90細
胞質免疫グロビン 00 Ii8BNA 0 01
再発時の患者からの未分離末梢血液細胞(9月、198
3)。
2 同じ血液標品から確定した細胞系
3 陽性細胞の百分率
血液を6.4Mクエン酸ナトリウムと9/IK混合し、
リンホゾv 7′″(Lymphoprep ) (比
重1.070、メイガード社(l(a7ggara a
nd Co、 )、オスロー、ノルウェイ〕上忙重層し
、赤血球および顆粒球を除去するため遠心した。界面か
ら集められた細胞を洗浄し、15%の胎児子牛血清を含
むRPM116イ、培地に1x10’/dで接種し、5
%COR中67℃でインキエイーションした。コノ細胞
は浮遊培養中で無限に発育する能力を保持した。
リンホゾv 7′″(Lymphoprep ) (比
重1.070、メイガード社(l(a7ggara a
nd Co、 )、オスロー、ノルウェイ〕上忙重層し
、赤血球および顆粒球を除去するため遠心した。界面か
ら集められた細胞を洗浄し、15%の胎児子牛血清を含
むRPM116イ、培地に1x10’/dで接種し、5
%COR中67℃でインキエイーションした。コノ細胞
は浮遊培養中で無限に発育する能力を保持した。
少年の再発中に採った血液試料から誘導された細胞系を
細胞系380と称する。
細胞系380と称する。
表1に示したように1この380細胞は膜固定免疫グロ
ブリンを表出しない。しかし、1様抗原(B 33.1
)指向、また普通の急性リンパ球白血病抗原(J5)
であるCALLA指向の抗体との強い陽性反応が観察さ
れた。これら細胞は!−細胞マーカーに%異的な抗体と
反応しなかった(表1)。
ブリンを表出しない。しかし、1様抗原(B 33.1
)指向、また普通の急性リンパ球白血病抗原(J5)
であるCALLA指向の抗体との強い陽性反応が観察さ
れた。これら細胞は!−細胞マーカーに%異的な抗体と
反応しなかった(表1)。
ニブシュタイン パール(gpstein Barr
)ウィルス核抗原(gBNA )の表出は380細胞に
おいて検出されなかった。その上、これら細胞は免疫螢
光法により測定されるように、細胞質免疫グロブリンの
表出には陰性であるが、Td′rF/c対しては陽性で
あった。
)ウィルス核抗原(gBNA )の表出は380細胞に
おいて検出されなかった。その上、これら細胞は免疫螢
光法により測定されるように、細胞質免疫グロブリンの
表出には陰性であるが、Td′rF/c対しては陽性で
あった。
380細胞の植字的分析は二つの相互細胞質転座の存在
を示した。
を示した。
・β80細胞は二つの異常染色体1・4(14q+入一
つは再配列した染色体8 (8q−)そして一つは異常
染色体18(18q−)をもつ。14q+染色体の一つ
は染色体8の長い腕の末端が染色体14の帯q32上の
ヘビーチェインの場所に転座した結果であるが、他の1
4q+染色体はヒト染色体18のqtarよりq21大
きいセグメントがヘビーチェインの場所に転座すること
から生じた。
つは再配列した染色体8 (8q−)そして一つは異常
染色体18(18q−)をもつ。14q+染色体の一つ
は染色体8の長い腕の末端が染色体14の帯q32上の
ヘビーチェインの場所に転座した結果であるが、他の1
4q+染色体はヒト染色体18のqtarよりq21大
きいセグメントがヘビーチェインの場所に転座すること
から生じた。
染色体形態学における他の異常性は植字で検出されなか
った。
った。
例 2
例1と同様に%B−細胞屋、t(11;14)(q13
;q32)、染色体転座、の慢性リンパ球白血病(CL
L )をもつ65オ男子から誘導されCLL 271と
呼ぶヒト白血病細胞を得、それらのDNAを抽出した。
;q32)、染色体転座、の慢性リンパ球白血病(CL
L )をもつ65オ男子から誘導されCLL 271と
呼ぶヒト白血病細胞を得、それらのDNAを抽出した。
これら細胞はまたマウス骨髄細胞腫の細胞で雑種形成さ
せ、転座した染色体を含む雑sを得たr−xリクソン等
、Proc、 Nat’l Acad。
せ、転座した染色体を含む雑sを得たr−xリクソン等
、Proc、 Nat’l Acad。
8ci、 U3A31 : 4144〜4148(19
84)]。
84)]。
例 3
例1の380細胞のDNAから完全rツムライブラリー
を調製した。デノムDNAを制限酵素8au 3Aで部
分消化し、長さ14から23 kl)のDNA断片をシ
ョ糖勾配遠心により精製した。次に、断片を951m
HIで切ったラムダ−7アージベクター腸8L3* l
:ツジモト等、サイエンス(5cience )224
:1イ、3(1984)]のDNAで結合した。大腸菌
中試験管内でパッケージした後、420.000独立組
換えファージをJB (H鎖結合領域) DNA断片に
%異的なグループ(・pH,l )でスクリーニングし
た(第1図、H,Hln(l l s R−BQORI
; 8.8Bm、 31 ) a九つの組換えクロー
ンを得、それらの制限地図分析は二つの14q+染色体
から誘導された配列を表わす群への分類を許した。各群
の制限地図および代表的重なりクローンを第1図に示す
。
を調製した。デノムDNAを制限酵素8au 3Aで部
分消化し、長さ14から23 kl)のDNA断片をシ
ョ糖勾配遠心により精製した。次に、断片を951m
HIで切ったラムダ−7アージベクター腸8L3* l
:ツジモト等、サイエンス(5cience )224
:1イ、3(1984)]のDNAで結合した。大腸菌
中試験管内でパッケージした後、420.000独立組
換えファージをJB (H鎖結合領域) DNA断片に
%異的なグループ(・pH,l )でスクリーニングし
た(第1図、H,Hln(l l s R−BQORI
; 8.8Bm、 31 ) a九つの組換えクロー
ンを得、それらの制限地図分析は二つの14q+染色体
から誘導された配列を表わす群への分類を許した。各群
の制限地図および代表的重なりクローンを第1図に示す
。
例 4
例3の方法と同様にして、例2のCLI、 271新鮮
白血球細胞のDNAから完全rツムライブラリーを調製
した。試験管内でパッケージ後% 375,000独立
組換え7アージをpcu 0.9 CD、9 kb E
coRI断片を含むC(一定)領域の免疫グロビンr鎖
に相同のグループ〕およびpHjプローデでスクリーニ
ングした。10個のクローンを選び制限地図分析を行な
ったところ関連のない染色体14からおよび14q+雑
種染色体から誘導された連続を表わす二つのグループへ
の分類が可能となった。制限地図および各グループの代
表的重なり組換えクローンを2B図C図に示す(H、H
lnd I ; R,gc。
白血球細胞のDNAから完全rツムライブラリーを調製
した。試験管内でパッケージ後% 375,000独立
組換え7アージをpcu 0.9 CD、9 kb E
coRI断片を含むC(一定)領域の免疫グロビンr鎖
に相同のグループ〕およびpHjプローデでスクリーニ
ングした。10個のクローンを選び制限地図分析を行な
ったところ関連のない染色体14からおよび14q+雑
種染色体から誘導された連続を表わす二つのグループへ
の分類が可能となった。制限地図および各グループの代
表的重なり組換えクローンを2B図C図に示す(H、H
lnd I ; R,gc。
RI ; B、 BaI!1. II )。第2B図に
示した組換えクローンはpCu 0.9またはpH:J
グループで雑種形成したより短かいBan HI断片
を含み、関連のない染色体14上に生産的に配列された
U遺伝子を表わす。図の30に説明された他のグループ
は14q+染色体上の除外されたμ相互遺伝質を表わす
。第2図に示したよ5に、二つのグループ、JH断片の
5′の制限地図は相互に%また胚系DNAのそれとも完
全に異なる。
示した組換えクローンはpCu 0.9またはpH:J
グループで雑種形成したより短かいBan HI断片
を含み、関連のない染色体14上に生産的に配列された
U遺伝子を表わす。図の30に説明された他のグループ
は14q+染色体上の除外されたμ相互遺伝質を表わす
。第2図に示したよ5に、二つのグループ、JH断片の
5′の制限地図は相互に%また胚系DNAのそれとも完
全に異なる。
例 5
380細胞系から誘導された組換えクローンの二つのグ
ループのうちどちらが染色体8および14 DNA断片
(p380j−2RRおよびp580j−988)の間
の切断点を含むかを確定するために1繰返し配列を含ま
ないクローンを発生させた両JH断片の5′(第2図)
を大腸菌宿主中pBR322誘導体を用いてサブクロー
ンをつくった。次にこれらサデクp−ンをヒト細胞から
誘導されたDNAおよびヒト染色体8または14いずれ
かを含む薔歯動物×ヒト雑株細胞からのHlnd l消
化DNAのサウデーン雑種形成1fcfロープとして使
用した。DNA試料を0.7チアガロースデルで分画し
た。すず−ン・プロット・フィルターを50チホルムア
ミドおよび4 X 8SC中37℃において32pで標
識したP380j−98810−デで雑種形成させ、最
後KO02×88Cで65℃において洗浄した。
ループのうちどちらが染色体8および14 DNA断片
(p380j−2RRおよびp580j−988)の間
の切断点を含むかを確定するために1繰返し配列を含ま
ないクローンを発生させた両JH断片の5′(第2図)
を大腸菌宿主中pBR322誘導体を用いてサブクロー
ンをつくった。次にこれらサデクp−ンをヒト細胞から
誘導されたDNAおよびヒト染色体8または14いずれ
かを含む薔歯動物×ヒト雑株細胞からのHlnd l消
化DNAのサウデーン雑種形成1fcfロープとして使
用した。DNA試料を0.7チアガロースデルで分画し
た。すず−ン・プロット・フィルターを50チホルムア
ミドおよび4 X 8SC中37℃において32pで標
識したP380j−98810−デで雑種形成させ、最
後KO02×88Cで65℃において洗浄した。
この雑種形成の結果を第3図に示す:レーン1、CHO
(チャイニーズノ1ムスター卵巣細胞〕からのDNA
;レーン2,706B6−イ、01 17(ヒト染色体
8のみ含むCHOXヒト雑種細胞)からのDNA ;レ
ーン3.280AG8Ce4(ヒト染色体8を含むがヒ
ト染色体14を含まないマウスx′ヒト雑種)からのD
NA クローン4.545Tヒト細胞系からのDNA
、この図に示したように、プローブp380j−9ss
はヒトDNAで、そしてヒト染色体8のみを含み他のヒ
ト染色体を含まないCHOXヒト雑種のDNAで雑種形
成した。同じプローブはヒト染色体14だけを含む誓書
動物Xヒト雑種で雑種形成しなかった。それ故に、p
380 j −9ss DNAセグメントを含む組換え
屋の部類は14q十染色体上の染色体8と14との間に
結合領域をもつ(第1図)。
(チャイニーズノ1ムスター卵巣細胞〕からのDNA
;レーン2,706B6−イ、01 17(ヒト染色体
8のみ含むCHOXヒト雑種細胞)からのDNA ;レ
ーン3.280AG8Ce4(ヒト染色体8を含むがヒ
ト染色体14を含まないマウスx′ヒト雑種)からのD
NA クローン4.545Tヒト細胞系からのDNA
、この図に示したように、プローブp380j−9ss
はヒトDNAで、そしてヒト染色体8のみを含み他のヒ
ト染色体を含まないCHOXヒト雑種のDNAで雑種形
成した。同じプローブはヒト染色体14だけを含む誓書
動物Xヒト雑種で雑種形成しなかった。それ故に、p
380 j −9ss DNAセグメントを含む組換え
屋の部類は14q十染色体上の染色体8と14との間に
結合領域をもつ(第1図)。
対照としてp380j−98Bfロープは白血病380
細胞系を得た同じ患者から誘導されるT−細胞系(54
5T)のDNAにおける、そしてまた檻々な他のヒト細
胞から誘導されるDNAにおける単−胚系雑種形成断片
だけを検出することが確立された。しかしこのプローブ
は680白血病細胞系DNAにおける胚系および再配列
したDNA断片を検出し、8と14との間の転座が患者
の白血病の展開中に身体の出来事として起ったことを示
す。
細胞系を得た同じ患者から誘導されるT−細胞系(54
5T)のDNAにおける、そしてまた檻々な他のヒト細
胞から誘導されるDNAにおける単−胚系雑種形成断片
だけを検出することが確立された。しかしこのプローブ
は680白血病細胞系DNAにおける胚系および再配列
したDNA断片を検出し、8と14との間の転座が患者
の白血病の展開中に身体の出来事として起ったことを示
す。
p380j−988プローデは染色体14からのDNA
で雑種形成しなかったので、またJH断片に特異的なp
Hjプローデは、クローンラムダ−380j〜9の大抵
のs Hlnd 1部位の左のDNA断片で雑種形成
しなかったので(第1図)、t(8:14)転座に含ま
れる染色体14の切断点は第1C図に示したように大抵
の5’ Sat x部位と第二のBind 1部位との
間にあった。
で雑種形成しなかったので、またJH断片に特異的なp
Hjプローデは、クローンラムダ−380j〜9の大抵
のs Hlnd 1部位の左のDNA断片で雑種形成
しなかったので(第1図)、t(8:14)転座に含ま
れる染色体14の切断点は第1C図に示したように大抵
の5’ Sat x部位と第二のBind 1部位との
間にあった。
P380j−2RRfロープ(第1B図〕をヒト染色体
14および18を含むそれぞれマウスXヒトおよびCH
OXヒト雑種細胞から単離されたDNAに雑種形成させ
た。このプローブはヒトDNAと、そしてヒト染色体1
8を含む雑種から誘導されたDNAと雑種形成するが、
しかしヒト染色体14を含む雑種からのDNAとは形成
しなかった。
14および18を含むそれぞれマウスXヒトおよびCH
OXヒト雑種細胞から単離されたDNAに雑種形成させ
た。このプローブはヒトDNAと、そしてヒト染色体1
8を含む雑種から誘導されたDNAと雑種形成するが、
しかしヒト染色体14を含む雑種からのDNAとは形成
しなかった。
このように、クローン380j2および380j3は染
色体14と18との間に結合領域を含む。
色体14と18との間に結合領域を含む。
例 6
第2c図に示した新しい白血病細胞CLL 271から
誘導された組換えクローンがt(11;14)切断点を
含むかどうかを試験するために、ラムダ−Ra9および
ラムダ−Ra5クローン発生DNA内の染色体11から
誘導された単一コピーDNA配列を単離した。第2D図
に描かれたSaI I −Sat I断片およびSma
I −gco RI断片をグラスミドベクターpUC
19(6)およびpYT 13 (7)と呼ぶpBR3
22の誘導体にサブクローン発生させ。大腸菌で複製し
た。これらサブクローンはそれぞれpRc88sおよび
PRO8SmRと呼んだ(第3D図)。
誘導された組換えクローンがt(11;14)切断点を
含むかどうかを試験するために、ラムダ−Ra9および
ラムダ−Ra5クローン発生DNA内の染色体11から
誘導された単一コピーDNA配列を単離した。第2D図
に描かれたSaI I −Sat I断片およびSma
I −gco RI断片をグラスミドベクターpUC
19(6)およびpYT 13 (7)と呼ぶpBR3
22の誘導体にサブクローン発生させ。大腸菌で複製し
た。これらサブクローンはそれぞれpRc88sおよび
PRO8SmRと呼んだ(第3D図)。
これら二つのプローブをヒト染色体14またはヒト染色
体11いずれかを保有する薔歯動物細胞とヒト細胞との
間の身体細胞雑種からのDNAのサデーンプロットとの
雑種形成に用いた。この手順の結果を第4図に示す。
体11いずれかを保有する薔歯動物細胞とヒト細胞との
間の身体細胞雑種からのDNAのサデーンプロットとの
雑種形成に用いた。この手順の結果を第4図に示す。
(AJK対するDNA 5マイクログラムおよび(Bと
Ic)K対する10マイクログラムの試料をデル上に載
せる。J工細胞はヒト染色体11のみ含むヒトチャイニ
ーズハムスター卵巣雌株であり、H11細胞はヒト染色
体11およびXqのみ含むヒト×マウス雑種であり、
P3HR−1細胞はパーキット(Burkitt )リ
ンパ腫から誘導される。雑種M44(C12S5)はP
3HR−1バーキツトリンパ腫からのヒト染色体14c
1+のみ含むヒト×マウス細胞系であり、NP3細胞は
マウス骨髄細胞腫細胞系から誘導される。
Ic)K対する10マイクログラムの試料をデル上に載
せる。J工細胞はヒト染色体11のみ含むヒトチャイニ
ーズハムスター卵巣雌株であり、H11細胞はヒト染色
体11およびXqのみ含むヒト×マウス雑種であり、
P3HR−1細胞はパーキット(Burkitt )リ
ンパ腫から誘導される。雑種M44(C12S5)はP
3HR−1バーキツトリンパ腫からのヒト染色体14c
1+のみ含むヒト×マウス細胞系であり、NP3細胞は
マウス骨髄細胞腫細胞系から誘導される。
DNA試料をBaa RIで消化し、サデーン・デロッ
ト−フイkll−をfl:I−プpRc88s (レ−
7AとB〕で、またpRc88MR(レーンC)で雑種
形成させた。フィルターの最終的洗浄を(AJK対して
は2 X SScで65℃において行ない、(靭および
(C) K対しては0.2 X Secで65℃で行な
った。Jl、Hll、およびCLL 271細胞のDN
Aは二つのプローブと雑種をつくる同じ寸法の断片(約
6 kb)を示したが、一方マウスおよびチャイニーズ
ハムスターDNAはこれらプローブと雑種形成しなかっ
た。 pRc38sプローゾはヒト染色体14を含む雑
檻細胞からのDNAと雑種形成しなかった(第5A図、
レーン4)。このようにして、組換えクローンラムダ−
Ra8およびラムダ−Ra5はC’LL 271細胞の
14q+染色体上の染色体11と14との間に結合部位
を含む。
ト−フイkll−をfl:I−プpRc88s (レ−
7AとB〕で、またpRc88MR(レーンC)で雑種
形成させた。フィルターの最終的洗浄を(AJK対して
は2 X SScで65℃において行ない、(靭および
(C) K対しては0.2 X Secで65℃で行な
った。Jl、Hll、およびCLL 271細胞のDN
Aは二つのプローブと雑種をつくる同じ寸法の断片(約
6 kb)を示したが、一方マウスおよびチャイニーズ
ハムスターDNAはこれらプローブと雑種形成しなかっ
た。 pRc38sプローゾはヒト染色体14を含む雑
檻細胞からのDNAと雑種形成しなかった(第5A図、
レーン4)。このようにして、組換えクローンラムダ−
Ra8およびラムダ−Ra5はC’LL 271細胞の
14q+染色体上の染色体11と14との間に結合部位
を含む。
CLL 271 DNAのgco RI消化物が染色体
11 DNAと雑種形成する単一制限断片を示したので
〔このものは、t(8;14)転座をもっP3HR−1
バーキツトリンパ腫細胞で観察されたそれと同じもので
ある(第4A図、レーン5]〕、14q+上の切断点は
ラムダ−Ra8およびラムダ−Ra5クローンの3′か
ら大抵の5’ Eco RI部位の領域に生じたと推論
できる(第3図)。
11 DNAと雑種形成する単一制限断片を示したので
〔このものは、t(8;14)転座をもっP3HR−1
バーキツトリンパ腫細胞で観察されたそれと同じもので
ある(第4A図、レーン5]〕、14q+上の切断点は
ラムダ−Ra8およびラムダ−Ra5クローンの3′か
ら大抵の5’ Eco RI部位の領域に生じたと推論
できる(第3図)。
例 7
染色体14および(または)18を含むマウスXヒトお
よびチャイニーズハムスター×ヒト雑種細胞のDNAを
P380j−2RRプローデで雑種形成させた(第1図
)。DNA試料をBan H11で消化し、0.7 %
アガロースデル上で分画した。すゾーン・プロット・フ
ィルターを32pで標識したp380j−2RRで雑種
形成させ、前記のように洗浄した。p380j−2RR
fロープはヒトDNAとそしてヒト染色体18を含む雑
種から誘導されたDNAと雑種形成したが、ヒト染色体
14を含む雑種からのDNAとは雑種形成しなかった。
よびチャイニーズハムスター×ヒト雑種細胞のDNAを
P380j−2RRプローデで雑種形成させた(第1図
)。DNA試料をBan H11で消化し、0.7 %
アガロースデル上で分画した。すゾーン・プロット・フ
ィルターを32pで標識したp380j−2RRで雑種
形成させ、前記のように洗浄した。p380j−2RR
fロープはヒトDNAとそしてヒト染色体18を含む雑
種から誘導されたDNAと雑種形成したが、ヒト染色体
14を含む雑種からのDNAとは雑種形成しなかった。
これらデータはクローン380j2および380j3が
染色体14と18との間に結合領域を含むことを示す。
染色体14と18との間に結合領域を含むことを示す。
例 8
p380j−2RR染色体18特異性プローブを各種起
源のヒト細胞からのまた680細胞からのDNAで雑種
形成させた。ヒ) DNAを8st、1で切り、0.7
1アガロースデル上に流した。サデーン・プロット・フ
ィルターを前述したようK”Pで標識したp380j−
2RRで雑種形成させ、洗浄した。この手順の結果を第
5図に示す:レーン1、gBv変換したヒトリンパ母M
i肥様の細胞からのDNA ;レーン2、ヒトT−細胞
リンパ腫からのDNA ;レーン3、CI、L 271
[t (11; 14 )染色体転座をもつ〕の細胞
からのDNA ;レーン4、t(8;14)転座をもつ
バーキットリンパ腫細胞系(DAUDI )からのDN
A ;レーン5.545T−細胞系からのDNA ;レ
ーン6.380白血病細胞系からのDNA pおよびレ
ーン7、LN128細胞(t(14;18)染色体転座
をもつヒト濾胞性リンパ腫〕からのDNA 。
源のヒト細胞からのまた680細胞からのDNAで雑種
形成させた。ヒ) DNAを8st、1で切り、0.7
1アガロースデル上に流した。サデーン・プロット・フ
ィルターを前述したようK”Pで標識したp380j−
2RRで雑種形成させ、洗浄した。この手順の結果を第
5図に示す:レーン1、gBv変換したヒトリンパ母M
i肥様の細胞からのDNA ;レーン2、ヒトT−細胞
リンパ腫からのDNA ;レーン3、CI、L 271
[t (11; 14 )染色体転座をもつ〕の細胞
からのDNA ;レーン4、t(8;14)転座をもつ
バーキットリンパ腫細胞系(DAUDI )からのDN
A ;レーン5.545T−細胞系からのDNA ;レ
ーン6.380白血病細胞系からのDNA pおよびレ
ーン7、LN128細胞(t(14;18)染色体転座
をもつヒト濾胞性リンパ腫〕からのDNA 。
第5図に示したように、380およびLN128新生物
B細胞からのDNA (追加の雑種形成断片をもった)
を除き試験した全ヒ) DNAは胚系配列を表わす単一
雑種形成断片を示した。545T−細胞系からのDNA
(レーン5)Kおける単一杯系帯も検出された。それ
故に、第5図、レーン6で観察されたt (14,;
1 B )転座およびDNA再配列はこの白血病の進展
中に身体的出来事として起こった。
B細胞からのDNA (追加の雑種形成断片をもった)
を除き試験した全ヒ) DNAは胚系配列を表わす単一
雑種形成断片を示した。545T−細胞系からのDNA
(レーン5)Kおける単一杯系帯も検出された。それ
故に、第5図、レーン6で観察されたt (14,;
1 B )転座およびDNA再配列はこの白血病の進展
中に身体的出来事として起こった。
例 9
標準法により濾胞性リンパ腫(LN 128 )をもつ
と診断された35才男子の腫瘍細胞から誘導されたDN
Aは、I)380j−2RRDNAfロープ(第5図、
レーン7)で雑種形成させたとき胚系および再配列した
DNA断片の両方を示した。対照レーン(レーン1〕と
比較して雑種形成の追加帯は濾胞性リンパ腫の存在を示
す。この患者の染色体の植字的分析は相互t(14;1
8)(q32;q21)転座を示した。
と診断された35才男子の腫瘍細胞から誘導されたDN
Aは、I)380j−2RRDNAfロープ(第5図、
レーン7)で雑種形成させたとき胚系および再配列した
DNA断片の両方を示した。対照レーン(レーン1〕と
比較して雑種形成の追加帯は濾胞性リンパ腫の存在を示
す。この患者の染色体の植字的分析は相互t(14;1
8)(q32;q21)転座を示した。
例10
雑種染色体から誘導された再配列断片を検出するため、
染色体11に対して特異的なプローブpRc88mRを
種々な給源から単離されたDNAに雑種形成させた。種
々な給源からの細胞DNA (5μg)ヲH1nd l
またはBcIIで消化し、アガロースデル電気泳動によ
り分画した。そのサデーン・プロット・フィルターをp
R08smR7’ロープで雑種形成させ、最後に0.2
X Sacで65℃において洗浄した。
染色体11に対して特異的なプローブpRc88mRを
種々な給源から単離されたDNAに雑種形成させた。種
々な給源からの細胞DNA (5μg)ヲH1nd l
またはBcIIで消化し、アガロースデル電気泳動によ
り分画した。そのサデーン・プロット・フィルターをp
R08smR7’ロープで雑種形成させ、最後に0.2
X Sacで65℃において洗浄した。
DNA給源には次のものが含まれる: Mo1t; 4
(ヒトT−細胞系) DNA再配列 607 (ヒトリ
ンパ母細胞様細胞系DNA )、Co1o 320 D
M (1: )類癌腫) DNA%PAF (eV イ
、転換ヒト繊維母細胞) DNA、 H8B2 (ヒト
’r−細胞系) DNA%CLL271(ヒトB−細胞
白血病) DNA再配列 87(ヒトB−細胞リンパ腫
)DNA。
(ヒトT−細胞系) DNA再配列 607 (ヒトリ
ンパ母細胞様細胞系DNA )、Co1o 320 D
M (1: )類癌腫) DNA%PAF (eV イ
、転換ヒト繊維母細胞) DNA、 H8B2 (ヒト
’r−細胞系) DNA%CLL271(ヒトB−細胞
白血病) DNA再配列 87(ヒトB−細胞リンパ腫
)DNA。
CLL 271 DNAを除き、試験したすべてのヒト
DNA試料は二つのHlrid l断片への雑種形成を
示し、CLL 271 DNAは更に一つの再配列した
断片を示した。およそ2.5 kt+のHind l断
片の一つは正常な染色体11配列に相当する。このこと
は14q+上の染色体切断がラムダRc8 DNAの2
.1kl113’から大抵の5’ EcoRI部位の領
域内で起こることを示す(第2D図)。
DNA試料は二つのHlrid l断片への雑種形成を
示し、CLL 271 DNAは更に一つの再配列した
断片を示した。およそ2.5 kt+のHind l断
片の一つは正常な染色体11配列に相当する。このこと
は14q+上の染色体切断がラムダRc8 DNAの2
.1kl113’から大抵の5’ EcoRI部位の領
域内で起こることを示す(第2D図)。
Bcl 工消化はLN 87細胞DNAおよびCLL2
71細胞DNA K再配列断片を示した。この結果はL
L87における切断点がCLL 271細胞に観察され
た切断点に近いことを示す。CLL 271 、慢性リ
ンパ球性白血病、およびLN 87、分散大細胞リンパ
腫〔両者ともt(11;14)転座をもつ〕の場合の切
断点の一貫した場所は、この染色体転座を示す種々なり
一細胞悪性度において推定的に ′bcl−1(B
−細胞リンパ腫/白血病−1)と呼ばれる同じ遺伝子の
関与を示している。
71細胞DNA K再配列断片を示した。この結果はL
L87における切断点がCLL 271細胞に観察され
た切断点に近いことを示す。CLL 271 、慢性リ
ンパ球性白血病、およびLN 87、分散大細胞リンパ
腫〔両者ともt(11;14)転座をもつ〕の場合の切
断点の一貫した場所は、この染色体転座を示す種々なり
一細胞悪性度において推定的に ′bcl−1(B
−細胞リンパ腫/白血病−1)と呼ばれる同じ遺伝子の
関与を示している。
第1図は制限地図および代表的重なりクローンを示し、
第2図は制限地図および代表的重なり組換えクローンを
示し、第5図はレーン1から4に示したDNAを用いる
雑樵形成の結果を説明するものであり、第4図は新しい
白血病細胞から誘導された組換えクローンの切断点試験
の結果を示し、第5図はp380j−2RR染色体18
%異性プローブを各@ DNAで雌株形成させる手順の
結果を示す。
第2図は制限地図および代表的重なり組換えクローンを
示し、第5図はレーン1から4に示したDNAを用いる
雑樵形成の結果を説明するものであり、第4図は新しい
白血病細胞から誘導された組換えクローンの切断点試験
の結果を示し、第5図はp380j−2RR染色体18
%異性プローブを各@ DNAで雌株形成させる手順の
結果を示す。
Claims (9)
- (1)B−細胞新生物の診断法において、 イ、標識したDNAプローブを制限B−細胞DNAに雑
種形成し、前記DNAプローブは悪性B−細胞の雑種染
色体の制限部位とこの染色体の切断点との間にあるDN
Aの領域に雑種形成し、制限部位は前記領域に独特であ
り、 ロ、DNAプローブが雑種形成する制限染色体DNA断
片のパターンを同定し、 ハ、試験パターンと制限正常染色体DNAに対するパタ
ーンとの間の差異を検出することを特徴とする、上記方
法。 - (2)悪性細胞を検出するためのDNAプローブを構築
する方法において、 イ、悪性B−細胞由来のDNAのゲノムライブラリーを
作成し、 ロ、この悪性B−細胞の雑種染色体の切断点にまたがる
染色体DNAの領域と相同のDNAを含むクローンを選
び、そして ハ、前記切断点の唯一つの側上の染色体DNAと相同の
DNAを含むDNA断片をサブクローンさせることを特
徴とする、上記方法。 - (3)リンパ球DNAをDNAプローブにより同定され
た染色体転座の存在について試験する、B−細胞新生物
の検出用検定法において、 イ、個人からリンパ球を取り出し、それから染色体DN
Aを抽出し、 ロ、リンパ球DNAを制限し、 ハ、制限DNAを、染色体の制限部位と雑種染色体の切
断点との間にある染色体のDNAの領域、(前記制限部
位は前記領域に独特である)に雑種形成する標識DNA
プローブと接触させ ニ、DNAプローブが雑種形成する制限染色体DNA断
片のパターンを同定し、そして ホ、試験パターンと制限された正常染色体DNAに対す
るパターンとの間の差異を検出する工程を包含する、上
記検定法。 - (4)プローブはヒト染色体8から誘導する、特許請求
の範囲第3項記載の検定法。 - (5)プローブはヒト染色体18から誘導する、特許請
求の範囲第3項記載の検定法。 - (6)プローブはヒト染色体11から誘導する、特許請
求の範囲第5項記載の検定法。 - (7)プローブはヒト染色体14から誘導する、特許請
求の範囲第3項記載の検定法。 - (8)悪性B−細胞系は濾胞性リンパ腫患者から誘導す
る、特許請求の範囲第2項記載の方法。 - (9)悪性細胞系を慢性リンパ球性白血病、または分散
B−細胞リンパ腫から誘導する特許請求の範囲第2項記
載の方法。
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US671580 | 1984-11-15 | ||
US06/671,580 US4701409A (en) | 1984-11-15 | 1984-11-15 | Detection of B-cell neoplasms |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPS61173798A true JPS61173798A (ja) | 1986-08-05 |
Family
ID=24695095
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP60221111A Pending JPS61173798A (ja) | 1984-11-15 | 1985-10-03 | B−細胞新生物の検出法 |
Country Status (7)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US4701409A (ja) |
EP (1) | EP0189628B1 (ja) |
JP (1) | JPS61173798A (ja) |
AT (1) | ATE64624T1 (ja) |
AU (1) | AU577245B2 (ja) |
CA (1) | CA1267098A (ja) |
DE (1) | DE3583290D1 (ja) |
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Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
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US5079147A (en) * | 1989-03-13 | 1992-01-07 | The Wistar Institute Of Anatomy And Biology | Diagnostic probes and methods for using same to detect breast cancer |
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US5149628A (en) * | 1989-11-15 | 1992-09-22 | Temple University | Methods for detecting bcl-3 gene in human leukemias |
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