I»* * Processo fera a preparação de amostras de ADI de cadeia única e sua aplicação para a coloração específica de oremeseo» mas, earaeterlz&áo pelo facto de compreender as operações qm consistem m a) se proporcionarem fragmentos de restrição com extremidade em siguesague çue consistem, cada m&, numa cadeia saliente e mm cadeia retraídai se tratares os fragmentos de restrição com asa- exexmlea-se para digerir asa parte ia. cadeia retraída e formar modeles primários; se tratarem os ©oielos/prisârics com asa ABS-polimerase de maneira que as cadeias únicas digeridas pela exoao-clease se^am ressintetisadas na presença, de um preesrsor de nacledsMo trifosfato mareado para formar fragmentos ressiatetisaiosi se cortares m fragmentos ressintotizados em porções mais cartas de sodo que as regiões marcadas em extremidade opostas de cada fragmento ressintetiaado esteiam em porçõe s de àM separados % se desnaturarem os fragmentos reasiatetizadoe cortadosj se separarem as cadeias marcada® dos fragmentos de ADI dos fragmentos reasintetizados cortados desnaturados, para formareis a amostra de ABI de cadeia áaica; se tratar o ADI -a estudar de cadeia dupla com a mesma endonuclease de restrição usada para produzir os fragmentos de restrição; se tratar © ABI de cadeia dupla com uma exonaclease, depois do tratamento com a endonuclease de restrição; 0 135
depois do tratamento mm & exonaclease se aplicar a amostra ie ABI de cadeia Saiea ao ABI de duas cadeias a utilizar como alvo* 2** ~ Processo para a. preparação de reagentes de coloração específica de «resoaeàaas que proporcionam modelos de maneias indicativas de um ou virias rearranjos genéticos associados com a leucemia mielogántca eránlca CCS!}* oaraoteriaado pelo facto de se isolar o ABI especifico dos cromossomas m vizinhança dos genes BCR # ABL? se amplificarem troços do ABI especifico dos cromossomas* que foi isolaiof se anular a capacidade de hlbridização de e/ou se removerem as sequências repetitiva® partilladas contidas nos troços amplificados do ABI isolado* a fim de formar uisa eolecçã© de fragmentos dt ácido nucleíeo, que #e Mferiiízaa predominante-mente com o ABI crcmossdmico pretendido m vizinlsaça de m ou vários rearranjos genéticos suspeitos$ e se marcarem os fragmentos de iciáo niiclefco da ooloççlo para formar uma mistura heterogénea de fragmentos de ácido maelei-ee* 3S* - Processo de acordo mm a reivindicação 2, earaoteriza&o pelo facto de se realizar a citada operação ie amplificação dos referidos troços de ABI isolado por elonação* 4®* - Processo de acordo com a reivindicação 2, earacferizado pelo facto te a mencionada operação de amplificação dos troços do ABI isolado ser efeotoaâa mediante sm reacçfe da cadela de polímeras© (PCI)*
5·* * troces» de acordo mm a reivindicação t, earaeterisad© pelo facto de a citada operação i© remoção das seçnãnoiss repetitivas partilhadas compreender a escolha dos troços amplificados do citado AM isolado* os quais estio sahstanelalmen-te isentos is sequências áe ácido naeleico %m alo complementares do material mmms&mim st© assinalado. S»„ - Processo de acordo com a reivindicação 5* ©araeterisado pelo facto de a referida escollia dos mencionados troços amplificados compreender o as©· da hlhridiza§t© de Southern,. 7#* - Processo de acordo com a reivindicação d* caracterisado pelo facto de a mencionada escolha dos referidos troço® amplificados compreender ciosos de seleeçlo para a presença, de sequências repetitivas por hibridlsação com ΙΦ1 geadmlco* 8»* - frocesBO de acordo com a reivindioaçio Tt caracterizad© pelo facto de os citados ©loaes serem elones do plassfdio* 9S* - Processo de acordo em a reivindicação Bt caracterizado pelo facto â© a citada escolha dos referidos troços amplifi- . caies compreender a seleeção dos referidos'tlones relativa-mente à M%ritizaçl# tos o material crosossáraiee assinalado e se remover os cisnes que não se Mlridiza® dessa maneira* 10®* - Processo de asorâo som a reivindicação. 2* caraeterizado pelo facto de a citada operação de amolação da capacidade de hihrlâis&ção compreender a MhridlzaçSo dos referidos troços marcados do mencionado âBI isolado, com as· sequências de ácido aacleíco não marcadas*
11®, <* processo â-e acordo com a reivindicação 10, caracteri- sade pé Io facto to a referida operação % anulação ta citada capacidade do hihrltlpiçSa· compreender m aiiçle ie ácido nm~ leíco de bloqueio não mareado & amostra do ácido nucleie© mar» ©Mo antes e/ou durante a Mbrldizaçã© com.© material cromes- ' s&ic© assinalado como pretendido* 12®, ~ Processo ia acordo com a reivindicação 11, caracteri-zado pelo facto de o MBS de bloqueie aio marcado ser genésico* 13®* #* Processo de acordo com a reiTiaiicaflo 12* caracteri-saà© pelo facto de o âeldo mel&ím de bloqueio ser uma írae~ ção ie assa copia eleraâs* 14®* * Processo de acordo mm. a reivindicação 11, earacieri-zado pilo facto· ie MBS de bloqueio não marcado ser proveniente de ama seieeçle de donos contendo as sequências de cápla saals elevada ie um genoma e/oa cisnes adicionais, eeafexste for necessário para se obter m contraste vantajoso* XS«# * Processe ie acerto com a reivindicação 2, caracierizade pelo facto de a referida operação de anulação da citada ©idade de Mbridiaação iae sequências repetitivas partilhadas compreender a auto-reassociação da amostra de dLevaêâ complexidade* 16®* * Processo ie acorde cem a reivindicação 2, caraeterizaâ© pele facto de a ¢1¾¾ operação de remoção das sequências repetitivas partilhadas compreender a aplicação de cremategra-fia ea Mdroxí apat 1 te * 138 138
'J0*~ 17s* - Processo de acordo mm a reivindicação 2, caracteríaadc pelo facto de a referida operação de remoção das sequências repetitivas partilhadas compreender a remoção dos troços ampli|-fioados de AM isolado, com sequências de ácido nuoleieo de cadeia daiea imobilizada, que slo complementares das referidas sequências repetitivas partilhadas* 18®* «* Processo para a preparação de reagentes de maaohameatc específico -de cromossomas que compreende® ama mistura heterogénea de fragmentos de ácido aucleíco marcados» caraeterisado pelo facto de os fragmentos de ácido nucleíco mareados serem complementares de sítios do material crosossámico assinalado, na proximidade de um m vários rearrau^oe genéticos suspeitos associados com leucemia mielogênica crónica (OH) e serem sah| tancialmente isentos de sequências de ácido nucleíco que têm a capacidade de Mbridlzaçio com os sítios da matetiãl eromos-sdmico não assinalado* 1$&* - Processo de acordo com a reivindicação 18t earacterissa*' do pelo facto d© os citados fragmentas de ácido auclefeo mar*· eados terem uma ãnica cadeia* 20®* - Processo de acordo com a reivindicação· 16, caracteriza·· do pelo facto de os funcionados frementes de ácido saeleíee serem mareados ©o® reagentes detestáveis radíoaotivamente en~ sintaticamente Imanorreactívamente, por meio de flaoreromos e/ou de afinidade* 216* ~ processo de acordo- com a reivindicação 20, caracteriza** do pelo facto de os citados fragmentos sereia bioiinilados, mo» difieados com' I-aeetoxi-f-2-acetÍlaminofluoreno# modificados com isoti©cianato de flaoresceína, modificados com um ligando-
âe sercdrio/ilf, ôulí©nados, digozigenena&os os conterem df~ meros £-f* 22a, - processo pam a preparação dum reagente de manehamento específico âe cromossomas de acordo com a reivindicação 18, earaeterizado pelo facto âe ser especifico para a foste BGH~ -ABI» característioa âe. GKL* 23 s, - Processe para a preparação dum reagente âe Bano&ameiito especifico âe .cromossomas, compreendendo ama mistura heterogénea âe fragmentos âe ácido mielefco âe cadeia ániea marcados, caracterizaâo peio facto âe os referidos fragmentos de ácido ímclélco marcados serem complementares em relação & sítios do material cromossdmico assinalado e ser sabstancialmeate isento de seçulaeias de âoM© naeleíco tendo capacidade de Mbiâiíza* ção cos os sítios do material cromossdmico não assinalado* 24e, «· Processo para a preparação dum reagente de manehameato específico dos cromossomas, âe acordo- com a reivindicação 24» caracterizaâo pelo facto de ©s referidos fragmentos âe ácido naeleíeo âe cadeia dniea serem marcados com reagentes raâioac-tivos» enziaâtioos, imono-reactivos e/oa detestáveis por afinidade* 25 a* - Processo para a preparação dam reagente' de manchamento especifico dos eromossoBas, de acordo com a reivindicação- 24* caracterizaâo pelo facto âe os citados fragmentos seroa moâifif caãcs com i-acetcxi-I-2-aeet ilamino-fluoreno, com ligando de merotóo/flP* aulfoaaâo-âigoxigenenados ou conterem dímoros 3HÊ* 2ds* - Svooess© 'paca a preparação dam reagente de manchamento
específico dam cromossoma» oaraeterisado pelo facto de compreender as operaçêes que consistes em m isolar ADI específico do eromossosaf se amplificarem troços de ADI específico do cromossoma* isolado» utilizando a reacçlo âe cadeia da polímeras© (PCR); se anular a eapaciâaâe de Mbridizaçao âe e/oa se remover as sequências repetitivas partilhadas contidas nos troços amplificados do áPI isolado a fia de se formar uma colec-çSo de fragmentos, de ácido nucleíeo, que se Mhridlza® predo-minantesente com o âDI croaossáaico sinalizado j e se marcarem os fragmentos de acido· naclefe© da coleeção -para formar «ma mistura heterogénea de fragmentes de ácido «ueleíco ► 27&* - Processo pura a preparação âe amostras âe ácido auclei-co que mancham âe maneira segura e digna âe confiança os citados materiais cromossámieos sinalizados* earacterízado pelo faeto de os referidos materiais cromossémicos sinalizados estarem na víainhança de u® ou sais rearraa^os genéticos suspeitos que são associados ou com a leucemia miologánica crónica ((SSL·) m com a leucemia liapocífiea crónica (AX&3* 23a,. . Processo·· âe acordo com a reivindicação 27, caracteriza-âo pelo facto de um ou aais rearra»3os genéticos suspeitos servirem para o diagnóstico de CML* -29% - Processo· para a preparação de amostras de ácido sueleí-co, de acordo ooa a reivindicação 27, earaeferizado pelo facto de compreenderem sequências de ácido nucleíeo que são subatan-çialmente homólogas das sequências de ácido aaoleíco em regi-ães eroaossámieas que flanqueiam e/ou s© prolongam parcial ou totalmente através âe pontos de raptara associados com doenças citogenieamente semelhantes mas geneticamente diferentes*,
303# ** processo para a preparação da amostras de ácido neelaf» eo de alta complexidade qoe mancham de asneira digna de confiança m citados materiais cromossémieos sinalizados, carao-terisado pelo facto de os mencionados materiais cromossámieee sinalizados estarem na vizinhança de m m sais searraajoe genéticos suspeitos* qp» são associados., oa com a leucemia' mie-loglnica crénica (011») cu com a leucemia linfocítiea crénica (AX&) # 31®· - Processo de acordo coa a reivindicação 30* earacterlza-do pelo facto de um ou. maia rearranjos genéticos suspeitos estares associados coa a GIB* 32-=* - Processo de acordo, com a reivindicação 31, caraeteriza-do pelo facto de os referidos rearranjos genéticos sereis es«* colhidos do grupo cjtie consiste em transloeaçõee* inversões* anulações, inserções e amplificações* 33â· - Processo de acordo com a reivindicação 32* caraeterisa-do pelo facto de as referidas amostras de ácido nucleíco de alta complexidade produzirem uma mancha cu^o aspecto ê percep-tívelmente modificado çuando ocorre a fusão earaeterístiea BCR-ABL da OML e/oa da álL* 34®· * Processo te acordo cem a reivindicação 33* caracterisa· do pelo facto de terem uma complexidade compreendida no intervalo entre cerca de 50 quilobase (&b) e cerca ie~l megabase cm* i . 35δ·* - Processo de acordo· com a reivindicação 34, oaraeteriza-do pelo facto de a complexidade estar compreendida no interva-
lo entre cerca de 50 kb ô cerca de 750 kb» 36§# ** Processe de acordo com a reivindicação 35» eamoterlza-do peio facto de a complexidade estar compreendida ao intervalo entre cerca de 200 kb e cerca de 400 kb* 37s* - Processo para a preparação de amostras de ácido nuelef» eo, de elevada complexidadet de acordo com a reivindicação 31* caraeterizado pelo facto de serem substaneialmeate isentas de sequências repetitivas partilhadas produzidas por um processo que emprega uma reacção de cadeia de pomimerase (BGH) ♦ 38a* — Processo de acordo com a reivindicação 37* caracterlsa-do pelo facto dé, durante o referido processo de (PCR}# sequências complementares das citadas sequências repetitivas partilhadas que têm as extremidades prolongadas não complementares * ou são terminadas em nucleétidos qae aio permitem o prolongamento por uma pomimerase, serem Mbridizadas, com as referidas sequências repetitivas partilhadas a fim de inibirem a amplificação das mencionadas sequências* 39*3, * Processo para a preparação de amostras de ácido nucleí-co de elevada complexidade para análise cítogáaica por hibrl-dização «la situ», caraeterizado pelo facto de se propagarem as sequências de ácido nuoleíco numa. linha de células híbridas* 403» - processo para a preparação· de amostras de ácido nucleí-eo de elevada complexidade, de acordo com a reivindicação 39, caraeterizado pelo facto de a mencionada linha de células híbridas ser uma linha de células híbridas de seres humanos/asi* 143
mais roedores. 41®* * Processo para a preparação fie amestras de ácido aticlef-c© de elevada complexidade, earaeterízadc pelo facto de alguns elementos das amostras serem mareados de medo a constituírem centrámeros e/eu telómeros d# om oa maia eromossomaa de a© ge~ noma* 42-* * Processo para & preparação de aBoetrss de- ácido aaeleí-co de elevada complexidade de acordo som a reivindicação 41* caracterisado pelo facto de os elementos assinalados nos cen-trdmeros serem seçulneias de satélites-alfa# 43â* - Processo 'para a preparação de amostras de elevada complexidade para análise citogenétioa, por hlbriâlzação %i si-ta·* caraeterizad© pelo facto de o material eromossémico assinalado· das citadas· amostras ser .proveniente de células de fetos qus foram separados do sangue materno# 44®* ·* Processo para a preparação fie amostras de elevada complexidade, de acordo com a reivindicação 43» earaeieriz&âo pelo facto de m mencionadas células de feto© serem separadas do sangue materno por utilização de anticorpos maoelomíe específicos para as citadas células de fetos. 45®* - Processo para a preparação- fie amostras fie áLevafia mm* plexidade âe âeorfio com a reivindicação 4* caraeterizado pelo facto fie as referidas células fie fetos serem leacfieltoe e ei-totrofoflastos* 46®* - Processo para a preparação de amostras de ácido nuclcí- 144
«e de elevada complexidade, earacterisado .pele- facto de serem subatancialmenie isentas de sequências repetitivas partilha* das produzidas por um processo que incorpora ama reacção de cadeia de pcliíserase (TOS)* 47 a* * Sroeeeso para a preparação de amostras de ácido nncleí-co de elevada complexidade» âe acordo com a reivindicação 46» caractenizade peio facto âe as sequências que slo complementares das citadas sequências repetitivas partilhadas e que tdm extremidades prolongadas aio complementares* ou que terminais em nucleâtidos que nao permitem o prolongamento por uma polimerase» serem hihridisaâas durante o mencionado processo de 1?CE* com as referidas sequências repetitivas partilhadas a fim- de inibirem a amplificação· das mencionadas sequências* 48** * Processo para a coloração âe material oromassâmico slnaf-lissaic baseado em. amostras de ácido· naeleíco que empregam uma sequência de ácido naoleieo, caraoterisado pelo· facto de o citado· material eromossâmico sinalizado estar na proximidade de um o« mais roarrmios genéticos suspeitos que servem para o diagnâstico da leucemia nuologânica erdnica (CS3X>)« 49*# - processo de acordo com a reivindicação 48, earaetoriaa- . do pelo facto de o rearraa^o genético ser escolhido do grupo que compreende traaslocaçSes* anulações, inversões, amplificações 0 inserções* 50a* - Processo de acordo· com a reivindicação 49* caracteriza-do pelo facto de as mencionadas amostras de ácido nucleico serem homdlogas com as sequências âe' iScido nucleíco na vizinhança das .regiões de interrupção da translocaçlo. das regiões oro-
CÈffi* mossámicae 9q34 e 22qll associadas soí 51¾* - Processo de acordo com a reivindicação 50# caracteriaa*» do polo facto do as referidas amostras de ácido nucleíco produzirem um aspecto do maaeliameiito que ê perceptívelmenie modificado quando ocorre a fusão lOt-âB^ característica da €1X»* 52ô* - Processo de acordo com a reivindicação 50# caracterisa-do pelo facto de os sinais provenientes das referidas amostras de ácido nucieíco quando hibridizadas com as citadas sequências do doido nuclefeo* originarem aspectos de manchas caracteristicos, indicados nas- figuras 11B e llf* .¾ MeTAfÀS>l /MTEKFASt MRMAL AfJORMAU HORML AUORMAU
FIG.11B MtfltfASÊ 01 jJOKHAí. AWORMAt· WOTfrlAí. AAJOAHflC
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yFIG. 11B JMTE^Aie M UORUAL A^iOR^t
53&* «* Processo de acordo coa a reivindicação 51,- caracterlza-do pelo· facto de a proximidade das e/ou de outras· ear&cteris* iicas de sinais do citado aspecto* da nasefea indicarem se está presente ou não a referida fusão BCR-ASL* 54ô* - Processo de acordo eo® a reivindicação 53» earacterisa-do pelo facto de a parte da amostra da região BCR ser marca-1 da/viaualisada de um asneira e a parte da amostra âa região ABI* ser marcada/visualizada de isodo que quando está presente a fusão BOR-âBL, a proximidade doe dois mencionados meio® de _ marcação/visualisação se tornar relativamerte estreita numa
sequência cromossámioa de interfase e/oa setafetse* 55a* * Processo de aççrd© ecm a reivindicação 52, ©aracterlza-d® peio facto d© as citada© amostras d© ácido nuoXeiec terem orna complexidade compreenâMa m internai© entre cerca de 50 qailobases (¾¾) e seroa del zasgabase (Mis)* 56a. - Processo de acordo com a reivindicação 55* earaeteriza-do peio facto âe a complexidade estar compreendida no intervalo entre cerca de 50 kb © cerca de 750 leb. 57δ» - Processo de acordo com a reivindicação 56, caracterisa-do pelo facto de a complexidade estar compreendida no intervalo entre cerca de 200 kb e cerca de 400 kb* 58®*. Processo -para a coloração de material eromossémie© ei* nalisado baseado em amostras de ácido micleíco %m empregam sequências de ácido n&oleíco, caracterisaáo pelo facto de o citado material cromossoialco sinalizado estar na proximidade âe um cu mais re&rranjos genéticos suspeites associados ou com leucemia mielogásiea crénica (GS!) ©/ou com leucemia linfoeí-tica aguda (AlL)* 59®* - Processo de acordo com a reivindicação $8Ψ caracteriza-âo pele facto de as mencionadas amostras ãe ácido nucleíeo produzirem modelos de manchas que permitem distinguir entre um rearranjo genético .associado com a leucemia mielogánica crdni-ca (0131) e o arranjo associado com leucemia linfocítica aguda CâLl)* 60®, - Processo de eoloraçto do'material crosossásico baseado 148
m amostras fie âciâo nasleíco %w mpmgm seqvêmim âe ácido nuclefco, caraeterlsado pelo facto de o referido material oro-mossémico sinalizado ser focado por oêlalas de fetos fue foram separadas do sangue materno# &X%* «* Processo para distinguir rearranjos genéticos associados com leucemia míelogéníea crêaica (cm) e leucemia linfo-eítíca aguda (ÀX£), caractorissado pelo facto âe compreender •as operações qm consistem em a) se hibridlzar as amostras #e acordo com a reivindicação 27, com material mmemêmim sinalizado na vizinhança de «m rearraryo genético- Suspeito; h) se observar e/oa se medir a proximidade e/oa outras earac-terísticas dos sinais provenientes das -mencionadas amostras; © o) se determinar, a partir àas citadas observações e/ou medições obtidas na operação b)t se ocorreu ou não um rear·* ranjo genético* 62»# * Processo para âetectar rearranjos genéticos associados com cm de acordo com a reivindicação 35, caracterizado pelo facto de as amostras da operação a) seres -amostras de ácido nueleíco de alta complexidade que mancham os materiais cromos* sésicos sinalizados na vizinhança de -m oa sais rearraajos genéticos suspeitos çae eão diagnéstico para Of-ffi, 639* - Processo de acordo com a reivindicação 61, caraoteriza* do pelo facto de a leucemia ser GI1» e o rearranjo genético a ser detestado produzir ama fusão BOE-âBIí*·
64®* * Processo dç do pelo facto de o ou em interface* acordo com a relviadicaçao 63* camsterlza-maierial eroBôsaéraioô estar ou m aetafase 65®* - Processo de acordo com a reivindicação 64* caracteriza-d© pelo facto de o material estar em metafase. 66§* - Processo de acordo com a reivindicação 64* caraôterizâ-do pelo facto de o material cromoss&ico· estar es interfase* 67®* * Processo de acordo com a reivindicação 62, caracterisa-do pelo facto de os aspectos das manchas assim produzidos serem usados para distinguir células normais e células malignas* com a finalidade de se efeetuar um progadstic© o/ou se determinar a eficácia da terapia* 68s. - Processo de acordo com a reivindicação 67, earaeteriza* do pelo facto de os regimes para a mencionada terapia seres escolhidos do grupo formado por quimioterapia, radiação, cirurgia e transplante* 69a* - Processo de acordo cosa a reivindicação 62, caracterlza-do pelo facto de os modelos de manchas assim produzidas serem dteis para o controlo do estado de um paciente cu;Jq material cromossomico ê ensaiado na l&se de células apds célula* 703* *. processo para distinguir entre GIíl e AI&, earaeteriza-do pelo facto de se lascar aos modelos das manchas produzidas de acordo com o processo da reivindicação 61* 71a* - Processo de acordo com a reivindicação 69, earaeteriza-
'MasS*" do pelo facto te o paciente estar m remissão e os modelos de manchas produzidas serem um prendneio de uma repetição·· âa OiL* 72«# - Srooeseo para determinar a base molecular de uma doença genética* caraeterizado pelo facto âe compreender a hibri»* dizaçãa de amostras de ácido nucieíeo de elevada complexidade que mancham materiais cromossêaicos assinlades* sendo os mencionados materiais eromossámicos assinalados provenientes de seres humanos* escolhidos do tól dos cromossomas 1 até 22# x e y# e estarem m vizinhança fie um on maia potenciais rearraa-ios genéticos* ?3ô* - Processo para o manchamento de material cromossáiaico assinalado na vizinhança âe n® rearra&jo genetico suspeito associado com a leucemia mielogánies erimiea (CMIt) com amos» tras do ácido nucleie© de elevada complexidade de acordo cem a reivindicação 31* caracterizado pelo facto de as sequências de ácido nucleleo das amostras antes fia hibridização com o material cromossámico assinalado* sereia partidas em fragmentos com desde cerca de 200 bases até cerca de Z 0Q0 bases* 74â* * Processo de acordo com a reivindicação 73* caraeteriza-do pelo facto de o tamanho doe fragmentos ser igual a cerca _ de 1 kb.. 75 a« - Processo âe acordo com a reivindicação 74, caractsrlza-âo pelo facto de o tamanho dos fragmentos estar compreendido entre cerca âe BOõ base© e cerca de 1 000 bases e a hibridaza-ção ser realizada a uma temperatura compreendida no intervalo entre cerca âe 30¾ e cerca de 45 20, e as subsequentes opera-çães de lavagem sereia efteetn&â&s a .ama temperatura compreendida no intervalo entre cerca ée 40¾ e cerca de 50SC*
76®* ~ Processo de do pelo facto de a ra compreendida ao 40δ0« acordo com a reivindicação 75, earaoterisa-hibridizaçlo ser realis&da a uma temperatn~ intervalo entre cerca de 35s0 e cerca de 7?s» * Processo de acordo com a reivindicação ?ôt caracterisa-do peio facto de a bibrldisação ser efestaaâa a ama teaperatu-ra igual a cerca de 37â8* e as subsequentes operações de lava*· gem serem realizadas a ama temperatura igual a cerca de 45°C# 78»« - Processo de acordo com a reivindicação 73, ©araeteriza-* do pelo facto de os fragmentos serem m&reaáos/visa&lizados pá* ra deteeçSo apôs a bibridisação por seio de citometria de passagem* 79»# ** Processo de acordo com e reivindicação 73» caraeterisa-do pelo facto de os fragmentos serem marcados/vlsoalizados paira deteeção por microscopia* 80»« - Processo- de acordo- com a reivindicação 79* caracteriza-do pelo facto de a microscopia ser microscopia com imagem obtida por processamento por computador* 81»* - Processo para o· manebamonfo de material cromossômico assinalado eom amostras de âciâo nucleíco de elevada complexidade de acordo com a reivindicação 31» para produzir modelos de manebameato indicativos de rearranâos genéticos associados com asb, earacterisado peio facto de se Iilbridizarem seqaãn» cias de ácido nuolefco repetitivas de grau de cópia elevada não marcadas ou âM genámico como material cromossdsico assinalado antes da ou durante a M&ridizaçSe com a- amostra de icif
do nucleíco de elevaâa complexidade* J 82¾% - Processo para s ma&clmmento ée material eromcssémico assinalado* cora asastes do ácido nuolefeo de elevada complexidade d© acordo csis a reivindicação 31» para produzir ©ode** los de manchas indicativos-de rearranjos genéticos associados com CfiU»* earacterizaáo pelo facto áe compreender as operações que consistem em se obter uma mistura heterogénea- de fragmenr-tos de ácido auolefco marcados em que proporções substanciais dos fragmentos do ácido natlefe® marcados na mistura heterogénea possuem sequências de base substancialmente complementares do· material croraossémioô assinalado o qual fica na proximidade áe ura resrranio genético suspeito· associado com €$Q*t se fazer reagir m mistura heterogénea com o âPI cromoss&ico mareado por Mhridisaolo «in alta*1; e se observar e/ou se medir a proximidade e/οα outras caracte» ristlcas âe sisais dos citados modelos de manchas» para de· terminar se ocorreu ou não um rearran^o genético* 83¾% - Processo para © manehament© de material cromossémico assinalado» na vizinhança âe m rearrango genético suspeito associado com GMB» úom amostras de ácido nucieíeo âe ©levada complexidade de acordo com a reivindicação 31» saraeterizado pelo facto de as amostras alo· eerem directaaonte mareadas © a detecção das amostras ligadas ao material cro&oesémieo assinalado se realizar por meios diferentes de. marcação ilrecta* 84®* - Processo para o manchamenf© de material cromcssomico assinalado de acordo com a reivindicação 83» earacterisado pelo facto de os meios âe deteoçlo das amostras ligadas ao material crooossémioo assinalado compreenderem o uso de anticorpos duplos anti-jiBf/AM s/m ie anticorpos diméricos anti-
85 * Froeesso para distinguir entre rearranjos genéticos sus peites que ocorrem na proximidade relativamente apertada dum genoma* caraeterisado peio facto de compreender a MhrMiza-ção win situ" cos amostras de ácido nusleíeo de elevada com» plexidade» as quais compreende® sequências que são substancial -mente homologas das sequências de ácMo nuelefco «a vizinhança dos mencionados rearranjos genéticos suspeitos* -J 86ô* - Processo de acordo mm a reivindicação 85* earaeteriza* do pelo facto de os citados rearranjos suspeitos serem asso* ciados mm CML e/oa ΙΙΓ£* 873* - Processo para dstectar um sindroma genético contíguo, caracterizaâo pelo facto de compreender a hihriáização "ia si* tu* de amostras de ácido auelefe# de elevada complexidade, as quais compreendem sequências oubâtaneialmente homálogas das sequências de ácido aucleíco caracteríeticas de m ou mais componentes da citada sindroma genética contígua· j 88®* * Processo de acordo com a reivindicação 87, earaoterisa* do pelo facto d© a referida sindroma genética contígua ser a sindroma de Sown# 89§# * Processo para a pesquisa de m ou mais rearranjos genéticos numa região eroaoesánlea de um genoma indicado pela análise convencional de bandas como contendo ama anormalidade, caraeterizad© pelo facto de compreender m hihridtsaelo "ia ei* tu" com o citado genoma de um reagente de manhhamento específico âe cromossomas, preparado pelas operaçães que consistes
©a a) se isolar AM específico tos cromossomas* proveniente âa citada regilo eromossêsica; b) se amplificar troços d© referido âM específico dee-eso** mossomas, isolado^ e o) se anular a. capacidade de Mbridissção das sequências e/ou se remover as sequlneias repetitivas partilhadas contidas nos tragos amplificadas do &BS isolado» para formar uma coleeqlo ie fragmentos de ácido nucleíco, que se MbriâiBom predominantemente » eom a região oromossd·-mim assinaladas © se marear a colecgão de fragmentos de ácido nuclefeo para formar uma mistura heterogénea de fragmentos de ácido ηααΧοίβα mareados* 90»« * Processo para o isaaelsamento de material cromossáaíco "baseado em mostras de ácido maoleíco que empregam sequências d© ácido nucleíoo» oaracterisaâo pelo facto d© o material oro-» soes&iiea sor constituído .por as ou sais cromossomas m meta» fas© e/ou em interfaae, ou uma ou várias regides dos referidos Qswtmwnm ® por células de fetos separados do saague isater-no* 91», « Processo para o mancfcameato de material cromossásico assinalado* cosa amostras de áeído nacloíco de elevada coiaple-xidade* caracterizado pelo facto de as sequências de ácido mu-cl©íco das amostras* antes da Mbridisaeão com o material oro-iBosséaico assinalado* serem cortadas em fragmentos mm desde cerca de 200 bases até cerca de 2 000 bases* 92** Processo de acordo com a reivindicação'91, caraeieriza*-
tamanho dos fragmentos eer igual a cerca de do pelo facto âe o 1 kb. 93a* -> Processo de acordo com a reivindicação 92* earaeteriza-do pelo tacto de o tamanho dos fragmentos estar compreendido entre cerca de SOO bases e cerca d® 1 000 bases e a hihridi-sação ser realizada a «ma temperatura compreendida no intervalo entre cerca de 3qsg e cerca de 45SC, e as subsequentes operações de lavagem serem efectaadas a ama temperatura compreendida no intervalo entre cerca âe 40aC e cerca de SGQ0* 9P* - Processo d© acordo eoat a reivindicação· 93* earacteriza-do peio facto de a hibridizaçâo ser realizada a uma temperatura compreendida no intervalo entre cerca de 35δΟ e cerca de 40ÔC* 95&« <* Kcoceseo d© acordo ooia a relvinâioáçlo 94* car&eteriza-do pelo facto de a Mbrldização ser efôctuaáa a uma temperatura igual a cerca de 372Cf e as subsequentes operações âe lavagem serem realizadas a uma temperatura igual a cerca de 452C* 9Sa* - Processo de acordo com a reivindicação 91, caracterização polo facto âe os fragmentos parcados apis a hihridizaç&o serem deteeiados por citoraetria de passagem* 97ê* » Processo de acordo com a reivindicação 91* caracteriza-do pelo faeto de a referida detecção ser realizada por microscópio* 98β* - Processo de acordo com a reivindicação 97, earacteriza- •
do peio facto á© a citada microscopia utilisar a formação da imagem controlada por computador» 99©» ~ Processo de acordo com a reivindicação 96* caraeterlza-do pele facto de se empregar a dispersão da las# 100S* - Processo para o manenasento de material croxnossdmico assinalado de eélulas de fetos mm amostras de ácido naolofco de elevada complexidade* caraeterizaáo pelo facto de as refe» ridas células dos fetos seres separados do sangue materno# 101« ♦ ** Processo de acordo com a reivindicação 100* earacte-risa&o pelo facto de m mencionadas células de fetos serem separadas do sangue materno mediante a utilização de anticorpos específicos para as citadas células de fetos* lOgâ. * Processo de acordo· com a reivindicação 101*. easoote-» rizaáo pelo facto de m referidas células de fetos serem leucócitos e oit oirofofolas tos.* 103«* - Processo para o· jnanohame&to 4$ material eromosséaico assinalado com amostras de ácido nuclaíco de elevada complexidade* earaeterizad© pelo· facto de as amostras não serem di~ rectaificnto marcadas e a dctoeçSo das amostras ligadas ao material crosossÉBieo assinalado ser realizada por meios diferentes de marcação directa* 104^* - Processe para o maackamenio de material oromossémleo assinalado, de acordo com a rsivindieaçi© 103* oaracterloade pelo facto ne os meios do detenção das amostras ligadas ao ma-
teria! cromossémico assinalado compreendem e aso de anticorpos duplos mtMW/mM ®/m anticorpos diméricos eatitimidi*. nn~ 105a» - Processo para deteetar anormalidades citogendticas em cromossomas, caraeteriaa&o pelo facto de comoreender as opera-çSes que consistem em a) se hibridizar amostras de ácido nuelefeo raarcado/vlsuali-zável, de elevada complexidade, assinaladas, com duas ou maia xvgSSee eroaiossdmicas de sm geaoma suspeitas de conterem «ma normalidade eiiogeaética, para produzir um modelo de duas ou mais bandas de manchas; b) se comparar o modelo das bandas produzidas na operação (a) com um modelo obtido por hibrlâizaçã© das referidas amostras com material eromossdmico normal da mesma eepê-cie qm o suspeito de conter a anormalidade j e c) se detectarem quaisquer diferenças entre 0 modelo de bandagem produzida aa operação (a) com o modelo normal* 1052-* *» Processo de acordo com a reivindicação 105# oaracte-rizado pelo facto de os cromossomas estarem em metafase* lG7ê* - Processo de acordo com a reivindicação 105* caracte-rizaâo pelo facto de os cromossomas estarem es i&terfase* 1083* — Processo de acordo com a reivindicação 10?* earaete** rizado pelo facto de 0 modelo de bandas compreender doas regiões manchadas e a anormalidade oitogenétiea de que se eu·» peita ser um rearraajo genético associado cos leucemia sucio-
* gêntca crónica (c&L) 109'8· - Prooees© de acorde com a reiiriadicaçl© 105» caracter i--sado paio fasto do a detecção ser efootuada com meios automatizados* 110®. «* Processo de acordo som a reivindicação 109», eoractori-aado selo fasto âe a detecção ser roaiigada por sieroscopla auxiliada por computador* J llis* istoáo $a»a a realisaclo- dos ensaios de acordo com foal<per das reivlndicaçãos. anteriores# contendo amostras de ácido nucleico de elevada complexidade de acordo· mm a reivindicação 31* 1122* - istojo para a realização dos ensaios de detecção de anormalidades cromossámioas prê-satal compreendendo amostras de ácido- nucleíc© de elevada complexidade de acordo com a reivindicação 43* j Lisboa» 18 âe Julho d® 1990 0 âgeste Oficial d® Propriedade Industrial
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