JPS6114572A - クロマトグラフイ−による糖化アルブミンの分離方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は、クロマトグラフィーを用すて、少なくともア
ルブミンを含む溶液から糖化アルブミン金分離するアル
ブミンの分離方法に関する。

糖尿病のような長期間血糖値が高値を示す疾患では、さ
まざまな生体中の蛋白質が非酵素的に糖化反応を受ける
。血清アルブミンもそれらの蛋白質の一つである。

従来、糖尿病の診断には、血糖、尿糖、インスリン、グ
ルカゴンの測定、経口ブドウ糖負荷試験等がなされてい
るが、生理条件あるいは測定方法により結果が影響され
易いとか、被験者にも負担がかかる等の問題点がある。

それに対して、生体中の糖化蛋白質の濃度は、一時的な
生理条件の影響が少なく、過去数週間〜数ケ月の血中の
平均的糖濃度の指標となるため、近年注目されている。

例えば糖化ヘモグロビンは、過去１〜３ケ月の血糖値の
平均的指標となり、糖尿病患者の重症度と正の相関があ
ることから、糖尿病の新たな診断法、血糖コントロール
の指標としてすでに臨床応用されている。

一方、糖化アルブミンは糖化ヘモグロビンよシも生体中
での寿命が短かいため、よフ短期間の平均的血糖値の指
標になることが期待される。したがって、糖化アルブミ
ンは現行の、または新たに変更した食餌療法が、その患
者に適当か否かを早期に評価するのに有効である等、各
方面でその有用性が示唆されている。（Ｋａｙ　Ｆ、　
Ｍｃｆａｒｌａｎｄ　ｅｔａｌ、　ＤＩＡＢＥＴＥＳ、
、、２８　、１０１１　、１９７９　、Ｃ，ＥａｒｌＧ
ｕｔｈｒｏｗ、　ｅｔ　ａｌ、　Ｐｒｏｃ、Ｎａｔｌ、
　Ａｃａｄ、Ｓｃｉ、ＵＳＡ。

Ｌらム９．４２５８．１９７９） なお、ここで言う糖化アルブミンとは、　ｇｌｕｃｏｓ
ｅと共有結合したアルブミンを言う。

（従来技術） 従来、糖化アルブミンの測定には、カルボキシメチル型
セルロース等を固定相として用しるイオン交換りＯマド
グラフィー（Ｊａｍｅｓ　Ｆ、　Ｄａｙ　ｅｔ　ａｌ。

Ｊ、　Ｂｔｏ、Ｃｈｅｍ、、　２５４　、＆５　、５９
５　、１９７９　）や、チオバルビッール酸法に代表さ
れる発色反応を利用する方法（Ｋａｙ　Ｆ、　Ｍｃｆａ
ｒｌａｎｄ　ｅｔ　ａｌ、　Ｄ　ＩＡＢＥＴＥＳ２８．
１０１１．１９７９）等が用いられている。

（発明が解決しようとする問題点） 前記従来法においては、いずれも前処理として試料よシ
アルプミンを単離する必要があり、操作が複雑で長時間
を要するという問題点がある。

（問題点を解決するための手段） 本発明者らは、前記の問題点を克服すべく鋭意研究の結
果、迅速かつ簡便な操作でアルブミン中の糖化アルブミ
ンを分離する方法を見出し、本発明を完成するに到った
。

すなわち、本発明は、少なくとも主鎖に結合したアルコ
ール性水酸基を有する、硬質の全多孔性粒状架橋共重合
体を固定相とする液体クロマトグラフィーによって、ア
ルブミン中の糖化アルブミンを分離することを特徴とす
るアルブミンの分離方法に関する。

本発明で固定相として用いられる硬質の全多孔性粒状架
橋共重合体（以下、単にゲルと表わす）は、少なくとも
主鎖に結合したアルコール性水酸基を有することが好ま
しい。主鎖に直接結合したアルコール性水酸基とは、例
えば酢酸ビニルや炭酸ビニレンの重合体をケン化して得
られる水酸基のことである。水酸基の量はゲル乾燥重量
当Ｉ）５　　　”〜９　ｍｅｑ　／　９の範囲にあるの
がよい。ここで、水酸基の量は、例えば水酸基全無水酢
酸と反応させて、消費した無水酢酸の量またはゲルの重
量変化を測定することで求めることができる。

また水酸基の他にアミノ基、ジエチルアミノ基、あるい
はトリスアミノ基等の１〜５級アミノ基よシなる弱塩基
性アニオン交換基や、カルボキシル基で代表される弱酸
性のカチオン交換基が含まれている方が好ましい場合も
ある。以上の官能基の他には、本発明のゲルの骨格に含
まれる官能基は特に限定されない。例えばエステル基、
インシアヌレート環するいはシアヌレート環等も含まれ
ていてよい。本発明を実施する上で好ましい、または支
障のないこれらの官能基は、ゲル全体に分布しても、ま
たボア形成部分つまシポア表面のみに分布してもよい。

本発明で固定相として用いる硬質の全多孔性粒状架橋共
重合体（ゲル）は、機械的強度が大で。

しかも内部までボアが分布した構造を有するゲルのこと
である。このようなゲルは、前述したセファデックスの
ような軟質のゲルと異なシ、乾燥状態でも膨潤時のボア
構造を実質的に維持するため、乾燥状態での比表面積が
犬である。本発明のゲルは、通常乾燥ゲル重量当Ｆ）２
ｄ／ｆ以上、好ましくは５〜１０００ゴ／ｌの比表面積
を有する。一方、軟質ゲルの乾燥時の比表面積１ピ／Ｖ
以下の小さｂ値を示す。比表面積が本発明の範囲にある
ゲルは、機械的強度が大きいので、クロマトグラフィー
用の担体として用いたときに、溶離溶媒を高流速で通液
することができ、迅速な分離・分析が可能となる。ゲル
中のボアの大きさは、少なくともアルブミンが浸透でき
る程度の大きさであればよい。ボアの大きさは、デキス
トラン、ポリエチレングリコール等の分子量既知の標準
サンプルヲ用いてゲルパーミェーションクロマトグラフ
ィーに行なめ、得られた検量線から公知の方法で推定す
ることができる。

本発明のゲルの粒径は、通常は１〜２０００μｍの範囲
にあるのがよい。高速液体クロマトグラフィー（以下、
ＨＬＣと表わす）用充填剤として用いる場合は、平均粒
径が５〜１５μｍの範囲にあるのが好ましい。大量サン
プルの分離を目的とする場合は、よシ大きい粒径でよい
。

本発明で言う糖化アルプミ／とは、グルコースと共有結
合したアルブミンを表わす。またグルコースの主な結合
部位に関しては、例えば５２５番目のりジン残基のアミ
ノ基という報告があるが、これに限定されない。

次に本発明で用いられるゲルの一例を紹介する。

例えば、カルボン酸ビニルエステル単量体、インシアヌ
レート環を有する架橋性単量体、単量体を溶解するが水
に溶解しにくい有機溶媒および重合開始剤を少なくとも
含んでなる混合物を懸濁重合して得られる共重合体のエ
ステル基金水酸基に変換せしめた粒状架橋共重合体よシ
なるゲルは、本発明において好適に用いることができる
。

ここで、カルボン酸ビニルエステル単量体とは、重合可
能なカルボン酸ビニルエステル基’＋　−ツ以上有する
化合物のことで、例えば酢酸ビニル、プロピオン酸ビニ
ル、酪酸ビ三ル、吉草酸ビニルおよびピバリン酸ビニル
などの中から選ばれ、単独または２種以上の組合せで用
いられる。なかでも重合やエステル交換またはケン化の
容易性および入手の容易さから、酢酸ビニルやプロピオ
ン酸ビニルが特に好ましい。またインシアヌレート環を
有する架橋性単量体とは、例えば下記の構造式で表わさ
れるものである。

？ ｓ （ただし、Ｒ１＋Ｒ１およびＲ１はそれぞれ独立に＝　
ＣＨを示も） とシわけ、Ｒ□、ＲｔおよびＲ３がすべて−ＣＭ、　−
ＣＨ＝ＣＨ，であるトリアリルインシアヌレートは、酢
酸ビニルとの共重合性がよく、かつエステル交換または
ケン化に対しても安定性が大きいので、架橋性単量体と
して好ましい。

全単量体中のインシアヌレート項ヲ有する架橋性単量体
の割合は特に限定されないが、例えばＨＬＣ用ゲルのよ
うな機械的強度が特に大きいゲルを作る場合は、次式の
範囲にあるのがよい。

０．２≦３　ｂ　／　（ａ　−１−３ｂ　）≦０．４こ
こで ａ：カルボン酸ビニルエステル基のモル数り：インシア
ヌレート項を有する架橋性単量体のモル数 前記単量体以外の単量体をゲルの物性ＫＦＩとんど影響
しない程度に併用し共重合させることは、本発明のゲル
を得るうえで何ら支障ない。

これらの単量体′（ｉｌ−懸濁重合させる際に、生成共
重合体をポーラスな構造にするために、単量体を溶解す
るが、水に溶解しにくい有機溶媒を単量体と共存させる
のがよい。有機溶媒は単量体１００重量部に対して通常
２０〜２５０重量部の範囲で用いられるが、小粒径で機
械的強度の特に大きいゲルが用いられるＨＬＣ用のゲル
を作る場合はやや少ない方がよく、例えば２０〜１００
重量部の範囲で周込られる。ただし、全有機溶媒中の５
重量％以上、好ましくは５〜５０重量％はカルボン酸ビ
ニルエステル重合体を溶解しにくい有機溶媒であるのが
よい。このような有機溶媒の具体例としては、ヘプタン
、オクタン、デカン、ウンデカン、ドデカン、トリデカ
ン等の炭素数７〜１５の鎖状炭化水素化合物、プロピル
ブチルエーテル、シフチルエーテル、ジー２−エチルヘ
キシルエーテル、ジデシルエーテル、ジドデシルエーテ
ル等炭素数７〜２５のエーテル化合物があげられる。

また、このような有機溶媒と組合せて用いられる他の有
機溶媒としては、前記有機溶媒以外で、かつ水に溶解し
にくいものであれば特に限定されないが、トルエン、キ
シレン、酢酸エチル、酢酸ブチル、酢酸ヘキシル、メチ
ルイソブチルケトン等の比較的酢酸ビニル重合体を溶解
し易い有機溶媒が好ましい。またポリ酢酸ビニルやポリ
スチレン等の線状重合体を前記有機溶媒と併用して用い
てもよい。

重合に際して用いられる開始剤は、２．２’−アゾビス
インブチロニトリル、過酸化ベンゾイル等の通常の懸濁
重合に用すられる一般的なラジカル重合開始剤でよい。

懸濁重合は一般によく知られている方法で行うことがで
きる。

次に重合によって得られた共重合体のエステル交換また
はケン化反応を行う。反応は水やアルコールを溶媒とし
て、酸またはアルカリを用いて行なわれるが、好ましく
は共重合体中のエステル基のモル分率で０．２以上、さ
らに好ましくは０．４゛〜０．８を水酸基に変換せしめ
るのがよ−。反応のコントロールは、酸やアルカリの量
や濃度あるｂは反応温度や時間等と反応率の関係を事前
に把握しておき、その中から条件を選択することによっ
て行うことができる。反応率の測定は、例えば特開’に
３５７−１０８６６２号公報に示された方法で行うこと
ができる。

このようにして得たゲルは、必要により分級してアルブ
ミンの分離のためのクロマトグラフィー用固定相と・し
て用いることができる。

カルボン酸ビニルエステル単量体およびインシアヌレー
ト３ｊｌ′！！ｌ−有する架橋性単量体を用すてグルを
つくる場合、ゲルが本発明の目的に使い得る物性を有す
るためＫは、重合時に共存させる有機溶媒の種類や量比
、あるいはケン化ま友はエステル交換反応のコントロー
ルが重要であり、これらの条件が前記範囲にある場合に
、アルブミンを糖化アルブミンと非糖化アルブミンに特
に良好に分離できるゲルが得られる。

また、このゲルに１〜３級のアミン基やカルボキシル基
を導入したゲルも本発明の目的に用めることができる。

カルボン酸ビニルエステル単量体とイソシアヌレート項
ヲ有する架橋性単量体を用いて、全く骨格の異なるゲル
、例えばシリカゲルやスチレン共重合体よりなるゲルの
ボア表面へのクラフトまたはコーティングを行なう場合
、または全く他の単量体を用いて本発明の目的に使い得
るゲルをつくる場合は、必ずしも前記有機溶媒やケン化
条件の制約を受けない。

アルブミンの分離は、通常はカラムに充填したゲルヘア
ルブミンを含む溶液および液体よシなる移動相を通液す
る、込わゆる液体クロマトグラフィーによシ行なわれる
が、薄層クロマトグラフィーを用いて行なってもよい。

ここで、カラムはクロマトグラフィーを行うために通常
用いられるものでよく材質、形状、寸法等は、目的やク
ロマトグラフィーの他の条件に応じて任意に選択するこ
とができる。

移動層は、例えば水もしくはｐＨ緩衝剤および／または
無機塩を含む水溶液などのタンパク質の分１１１ｔＫ用
いられる通常のクロマトグラフィー用移動相でよい。必
要によジメタツール、エタノール、エチレングリコール
等の有機溶媒を含む液を用いてもよい。

前記のカルボン酸ビニルエステル単量体とイソシアヌレ
ート環を有する架橋性単量体を主たる原料単量体として
得られるゲルを固定相上して用いる場合は、塩化ナトリ
ウム、塩化カリウム、硫酸ナトリウム、硫酸アンモニウ
ム、クエン酸ナトリウム等の無機塩や、リン酸、酢酸、
乳酸、酒石酸あるいはクエン酸等の弱酸とその塩ま次は
塩の組み合わせよりなるｐＨ緩衝基剤の中から１種また
は２種以上を溶解した溶液を用いるのがよい。中でもア
ンチカオトロピックイオンを含む水溶液は移動相として
好ましい。

ここで言うアンチカオトロピックイオンとは、ｓｏ、２
−のような多価のイオン、Ｆ−のようにイオン半径の小
さいもので水の規則構造を安定化し、結果として水溶液
中の蛋白質の疎水結合を強めるようなイオン、言す換え
ると塩析効果の強いイオンを表わす。アンチカオトロピ
ックイオンをその作用の強さの順に列挙すると以下のよ
うになる。

陰イオン：　５ｏ４ｔ−＞　Ｆ−＞　ＣＨ，ＣＯＯ−＞
　ＣＬ”’陽イオン：　（ＣＨｓ　）４Ｎ”　＞１＋〉
Ｒｂ”ただし、陽イオンの場合には陰イオンはどはつき
りした差はなく、現象によってはこの順序が逆転するこ
ともある。（堀尾武−２山下仁平（１９８１）二″蛋白
質・酵素の基礎実験法”、南江堂、Ｐ２２）アンチカオ
トロピックイオンの持つこのような性質は、同一イオン
種であっても蛋白質種ととに異なる。Ｆ、Ｈｏｆｍｅｉ
ｓｔｅｒは１８８８年、卵白７／ｌ／ブミンの塩析に要
する種々のイオンの効果を調べ、陰イオンおよび陽イオ
ンについて、はぼ次のような順序があることを明らかＫ
した。同じ陽イオンを有する塩については、クエン酸塩
〉酒石酸塩〉ＳＯ４２−＞　ＣＨｓＣＯｔ−＞　Ｃ１−
’＞　Ｎ０ｓ−＞　ＣｔＯｓ　−＞　Ｉ　−＞　５ＣＮ
−であシ、陰イオンの共通な塩で比べると、陽イオンは
陰イオンの場合はど明瞭ではないが、Ｌｉ＋’）Ｎａ＋
：＞　Ｋ＋：＞　Ｆへ＋＞　Ｍｇ”十の順である。（今
堀和友。

山川凡夫（１９８４）：″ｆ生化学辞典”東京化学同人
、　ｐ　１１９７） 本発明で行なうクロマトグラフィーにおいて、アンチカ
オトロピックイオンの中でも、クエン酸、酒石酸、硫酸
の各基の少なくとも一つ’ｉｉｏ、０１〜１、ＯＮ、好
ましくは０．０１〜０．７Ｍの範囲で含む水溶液は、移
動相として特に好ましい。

緩衝用基剤や塩の種類または濃度が前記範囲にあること
によシ、糖化アルブミンと非糖化７ルブミンの分離ある
いはそれらと他の成分との分離を、よシ短時間に、かつ
良好に行なうことが可能になる。クロマトグラフィーを
行なう間、移動相は通常は組成全変化させることなく一
定組成であるが、必要によシ段階的または連続的に変え
てもよい。

本発明で行なうクロマトグラフィーによって、アルブミ
ンが少なくとも糖化アルブミンと非糖化アルブミンに分
離される理由は必ずしも明らかではないが、ある移動相
とゲルを用いた場合に、糖化アルブミンと非糖化アルブ
ミンのゲルへの親和性が異なったためと推定される。

（発明の効果） 前述したように従来の糖化アルブミンの測定方法、例え
ばイオン交換クロマトグラフィー法および糖の発色反応
全利用する方法は、前操作として、血清等の試料からア
ルブミンのみを単離する必要があシ、その後の操作も煩
雑で非常に長時間を要する。また最近、アガロースにボ
ロン酸を固定したゲルを用いたアフィニティークロマト
グラフィーが開発され、比較的短時間で分離が可能とな
ったが、溶離操作が複雑な上、多くの成分の中からアル
ブミンのみを検出するために特殊な試薬全必要とする。

これに対し、本発明の液体クロマトグラフィーによる糖
化アルブミンと非糖化アルブミンの分離においては、硬
質の全多孔質ゲルを固定相として用いるため、移動相を
高流速で通液でき、短時間の分離分析が可能である。し
かも、移動相を途中で変えるこ、となく一定組成のまま
でも溶出可能なため、簡便に、かつ迅速に繰り返し分析
を行なうことができ、操作の自動化本容易である。本発
明で用いられるゲルは、生体成分の不可逆的吸着がない
ため生体成分をそのまま分析でき、またクロマトグラム
の再現性も非常に良好で、得られるデータの信頼性も高
い。さらに糖化アルブミン、非糖化アルブミ／の他の成
分との分離も良好なため、糖化アルブミンの割合は、ク
ロマトグラムのピーク面積よシ簡単に算出できる。

以上述べたように、本発明の方法は、迅速性、簡便性お
よび再現性等あらゆる点において、従来法よフはるかに
優れている。本発明を血清中のアルブミンの分析に用い
れば、糖尿病の診断または治療の評価をよフ簡便に迅速
に、かつ正確に行なうことかできることが期待される。

（実施例） 以下に本発明の実施例を示すが、本発明の範囲は、これ
らの実施例のみに限定されるものではない。

実施例１ （糖化アルブミンの調製法） Ｍｉｌｅｓ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、　Ｉｎｃ製人
血清アルブミン（フラクションＶ）をＤｕｌｂｅｃｃｏ
のリン酸緩衝液に溶解し４チ溶液とした。これに２０　
ｍＭの濃度となるようグルコースを加え、孔径０．２２
μのフィルターで濾過滅菌した。これをエチレンオキサ
イドガスで滅菌した容器に入れ、３７Ｃ，５％ＣＯｔの
雰囲気中に４日間ふ置した。

（分離分取方法） アルブミンの分離は、以下に示すような条件の液体クロ
マトグラフィで行なった。なお、カラム（Ａｓａｈｉｐ
ａｋ　Ｇ５−５２０　、Ｇ５−５２０Ｐ　、Ｇ５−５２
０Ｈ）は、本特許請求の範囲第１項記載のビニルアルコ
ールを基本単位とする硬質の全多孔性粒状架橋共重合体
を固定相とした高速液体クロマトグラフィー用充填カラ
ムである。

カラム：旭化成工業（株）商品名 Ａｓａｈｉｐａｋ　Ｇ　Ｓ　−５２０Ｐ　　内径２０雪
窟長さ５０ｃｒｎＸ２本 溶離液：　３０　ｍＭリン酸ナナトリウム＋１５０ｍＭ
硫酸ナトリウム　ｐＨ７，０） ポンプ二日本分光工業（株）商品名 、　ＴＷＩＮＯＬＥ　（流量＝３．０ゴｉ＝＞検出器二
日本分光工業（株）商品名 ＵＶＩＤＥＣ（波長；　２８０　ｎｍ　）温　　度：　
３０Ｃ （結果） ふ直前（グルコース添加前）詮よび４日間ふ直後のアル
ブミンのクロマトグラムを、それぞれ第１図および第２
図に示した。糖化反応により新たにピークＩ、Ｉ［が出
現したことがわかる。

糖化反応後のアルブミンに関しては、第２図に示すＩ〜
■の分画に分取した。

（ピークの同定） 分取した■〜■の各分画ｆ　Ａｍｌｃｏｎ社製のｃｅｎ
ｔｒｉｃｏｎ　−３ｏを用いて、約１５０倍に濃縮した
。

それぞれの分画について、チオバルビッール酸法により
アルブミン圧結合したグルコースの量を測定した。

一−チオバルビッール酸法〜 試料０．１−を１ゴに希釈し、これに氷冷４０チドリク
ロロ酢酸（１−）を加え、３０００　ｒｐｍで１５分間
遠沈後、上清を除去した。残沈に蒸留水（１，Ｏｍｇ）
、１Ｍシュウ酸（０，５ｍ　）を加え、１００Ｃで５時
間加水分解した。室温冷却後、蒸留水で当初の量に補正
し、水冷４０　％　）　ＩＪジクロロ酸（１ｔｎｔ）’
に加え除蛋白後、上清２．０−を採取した。次いで、こ
の上清に０．０５Ｍチオバルビッール酸（０，５ｗｌｔ
）を加え、４０Ｃで４０分間反応後、４４５ｎｍにて吸
光度を測定した。

（結果） 分画Ｉ、ｎ、ＩＩＩ、■の単位濃度当りの吸光度は、そ
れぞれ０，５３　、　Ｄ、６５　、０，３５　、０．３
２０Ｄであった。分取した各分画の隣シのピークとの重
なシ合いがかなり大きいことを考慮すれば、分画工。

■と分画■、■の吸光度の差は有意であシ、糖化反応に
よって新たに生じたビークエ、■が糖化アルブミンに相
当することは疑う余地がない。

なお、ビーク■、ビーク■については、それぞれメルカ
プトアルブミン、ノンメルカプトアルブミンであること
がわかっている。（詳細は特願昭５７−１７７５０５号
に示されている。）実施例２ （糖化アルブミンの調製法） 人血清アルブミンの１チ溶液に２．５ｍＭの濃度となる
ようグルコースを加え、実施例１と同一条件でぶ置した
。

（分離分析方法） 任意のふ置時間で採取し危試料について、以下に示すよ
うな液体クロマトグラフィーによって、糖化アルブミン
の分離を行なった。

カラム：旭化成工業（株）商品名 Ａｓａｈｉｐａｋ　Ｇ　Ｓ　−５２０内径７．５１１Ｉ
Ｉ長さ５０ＪＸ４本 溶離液；　３０　ｍＭリン酸ナナトリウム＋１５０　ｍ
Ｍ硫酸ナトリウム（ｐＨ７，０） ポンプ二日本分光工業（株）商品名 ＴＷＩＮＣＬＥ（流量：１．Ｏｄ／關）検出器：日本分
光工業（株）商品名 ＵＶＩＤＥＣ（波長：　２８０　ｎｍ　）温　　度：　
３０Ｃ （結果） 第６図に示すように５時間経過とともにビークａの割合
は直線的に増加した。

また各ふ置時間で採取した試料について、実施例１で示
シたチオバルビッール酸法によシ、アルブミンに結合し
たグルコースの量（実際には４４３ｎｍにおける吸光度
）を測定した。その結果、吸光度は時間経過とともにビ
ークａの面積比に相関して増加した。この結果もまた、
ピークａが糖化アルブミンに相当することを示唆してい
る。

なお、第６図を見るとわかるように、糖化アルブミ／と
非糖化アルブミンは約８０分で良好に分離できた。（特
願昭５７−１７７５０５号に示したように、ビークｂ、
ピークＣは、それぞれメルカプトアルブミン、ノンメル
カプトアルブミンである。） 実施例３ 実施例１と全く同一条件で２日間糖化反応を行なったア
ルブミンを、以下に示すような条件の液体クロマトグラ
フィーで分離した。

カラム：旭化成工業（株）商品名 Ａｓａｈｉｐａｋ　Ｇ　Ｓ　−５２０Ｈ内径７，５１１
長さ２５ｃｒｒＩ 溶離液：　５０　ｍＭリン酸ナナトリウム＋４７０　ｍ
Ｍクエン酸ナトリウム（ｐＨ６，９） ポンプ二日本分光工業（株）商品名 ＴＷＩＮＣＬＥ　（流量：　１．Ｏｔｉ／ｍ　）検出器
二日本分光工業（株）商品名 ＵＶＩＤＥＣ（波長：　２８０　ｎｍ　）温　度＝３０
Ｃ （結果） 第４図に示すように、アンチカオトロピックイオンの中
でも作用の強いクエン酸塩を溶離液に加えることによっ
て、短いカラムで、さらに短時間のうちに分離すること
が可能となった。

【図面の簡単な説明】

第１図は実施例１によって人血清アルブミン（４チ溶液
）全分離し友結果を示すクロマトグラム、第２図は同一
アルブミン全４日間の糖化反応の後に同様な方法で分離
した結果を示すクロマトグラム、第３図は実施例２によ
って糖化アルブミンを分離した結果を示すグラフ（図中
の数字は糖化アルブミンのピークの面積百分率を示す）
、第４図は実施例５によって糖化アルブミンを分離した
結果を示すグラフである。 第３図 □　ｎλ叩ｌム１ 第４図 □時Ｍ（分）

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. （１）少なくとも主鎖に結合したアルコール性水酸基を
   有する、硬質の全多孔性粒状架橋共重合体を固定相とす
   る液体クロマトグラフィーによつて、アルブミン中の糖
   化アルブミンを分離することを特徴とするアルブミンの
   分離方法。
2. （２）移動相の少なくとも一部がアンチカオトロピック
   イオンを含む水溶液である特許請求の範囲第１項記載の
   アルブミンの分離方法。