JPS61134399A - モノクローナル抗体及びその製造方法 - Google Patents
モノクローナル抗体及びその製造方法Info
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- JPS61134399A JPS61134399A JP59254186A JP25418684A JPS61134399A JP S61134399 A JPS61134399 A JP S61134399A JP 59254186 A JP59254186 A JP 59254186A JP 25418684 A JP25418684 A JP 25418684A JP S61134399 A JPS61134399 A JP S61134399A
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- human protein
- monoclonal antibody
- protein
- calcium ions
- hybridoma
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- Peptides Or Proteins (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
ａ、産業上の利用分野
本発明はヒト・プロテインＣに対してカルシウハイオン
（Ｃａ ” ” ）の非存在下では認識せず、カルシウ
ムイオン（Ｃａ ” ” ）存在下でｉ！！ｌｌするモ
ノクローナル抗体、それを産生ずるハイプリドーマ、そ
の抗体の製造方法及びヒト・プロテインＣの分離方法に
関する。
（Ｃａ ” ” ）の非存在下では認識せず、カルシウ
ムイオン（Ｃａ ” ” ）存在下でｉ！！ｌｌするモ
ノクローナル抗体、それを産生ずるハイプリドーマ、そ
の抗体の製造方法及びヒト・プロテインＣの分離方法に
関する。
ｂ、従来技術
プロティンＣはビタミンに依存血漿蛋白質すなわちγ−
カルボキシグルタミン酸含有蛋白の一つであり血管内皮
細胞表層のトロンボモジュリン存在下トロンビンにより
活性されて［ＥＳＩＯｎ、 Ｃ。
カルボキシグルタミン酸含有蛋白の一つであり血管内皮
細胞表層のトロンボモジュリン存在下トロンビンにより
活性されて［ＥＳＩＯｎ、 Ｃ。
Ｔ ＆ Ｏｗｅｎ 、 Ｗ、 Ｇ ： Ｐｒｏｃ
、 Ｎａｔｌ、 Ａｃａｄ、 ｓｃｉ’、 ＬＪＳ
Ａ、 ７８： ２２４９−２２５１ （１９８１）参
照］活性化プロチーｒンＣ（ＡＰＣ）となる。活性化プ
ロティンＣはセリンプロテアーゼの一種であり、血液凝
固系の補酵素である第■因子（ＦＶ、ＦＶａ）と第■因
子（Ｆ■、 ＦＶＩａ ）を分解し、強い抗凝固作用［
３ｕｚｕｋｉ、に、 ｅｔ、 ａｌ、 ： Ｊ、 Ｂ
ｉｏｌ。
、 Ｎａｔｌ、 Ａｃａｄ、 ｓｃｉ’、 ＬＪＳ
Ａ、 ７８： ２２４９−２２５１ （１９８１）参
照］活性化プロチーｒンＣ（ＡＰＣ）となる。活性化プ
ロティンＣはセリンプロテアーゼの一種であり、血液凝
固系の補酵素である第■因子（ＦＶ、ＦＶａ）と第■因
子（Ｆ■、 ＦＶＩａ ）を分解し、強い抗凝固作用［
３ｕｚｕｋｉ、に、 ｅｔ、 ａｌ、 ： Ｊ、 Ｂ
ｉｏｌ。
Ｃｈｅｓ、１５８： １９１４−１９２０（１９８３
） 、 Ｖｅｈａｒ、 Ｑ。
） 、 Ｖｅｈａｒ、 Ｑ。
Ａ、 ＆ Ｄａｖｉｅ、 Ｅ、 Ｗ、 ： Ｂｉｏ
ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、ユＬ：４０１−４０９ ＜ １９
８０）参照］を示すと共に血管壁からプラスミノーゲン
・アクチベータを放出させ、線溶系を促進さ辻る［Ｃｏ
ｍｐ、Ｐ、 Ｃ，＆ ε５ＩＯｎ。
ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、ユＬ：４０１−４０９ ＜ １９
８０）参照］を示すと共に血管壁からプラスミノーゲン
・アクチベータを放出させ、線溶系を促進さ辻る［Ｃｏ
ｍｐ、Ｐ、 Ｃ，＆ ε５ＩＯｎ。
Ｃ，Ｔ ： Ｊ 、 Ｃｌ１ｎ、 Ｉ ｎｖｅｓｔ、
６６ ： １２２１−１２２８（１９８１）参照］こ
とが知られている。
６６ ： １２２１−１２２８（１９８１）参照］こ
とが知られている。
さらにプロティンＣ欠損症は重度の血栓症を呈すること
も報告されており、［ＧｒｉＨｉｎ、Ｊ、Ｈ。
も報告されており、［ＧｒｉＨｉｎ、Ｊ、Ｈ。
ｅｔ ａｔ ： Ｊ 、 Ｃｌ１ｎ 、ｌ ｎｖｅｓ
ｔ、、 ６８． １３７０−１３７３（１９８０） 、
Ｂｅｒｔｉｎａ、 Ｒ、Ｍ、 ｅｔ ａｔ ： Ｔ
ｈｒｏｉｂ。
ｔ、、 ６８． １３７０−１３７３（１９８０） 、
Ｂｅｒｔｉｎａ、 Ｒ、Ｍ、 ｅｔ ａｔ ： Ｔ
ｈｒｏｉｂ。
Ｈａｅｉｏｓｔａｓ、、 ４８１〜５ （１９８２）
］プロティンＣは血液凝固線溶系の重要な制御因子であ
ることが明らかにされている。
］プロティンＣは血液凝固線溶系の重要な制御因子であ
ることが明らかにされている。
したがってプロティンＣの作用機構を明らかにすること
、また、プロティンＣの血中における抗原量、活性屋を
測定し、その動向を把握することができれば、それは基
礎医学、臨床医学のａｍにおいて非常に重要な意味を持
つと考えられる。
、また、プロティンＣの血中における抗原量、活性屋を
測定し、その動向を把握することができれば、それは基
礎医学、臨床医学のａｍにおいて非常に重要な意味を持
つと考えられる。
一方モツクローナル抗体は単一の抗原決定基にたいして
特異的であり、かつ同一の特異性を有する抗体を安定的
に産生できるという利点から抗原蛋白質の機能および構
造の解析、あるいは免疫測定（ＥＩＡ、ＲＩＡ）に近時
一般的に広く利用されるようになって来た。特に抗原蛋
白質の機能解析、分子解析には抗原蛋白の機能に関与す
る部位、または特殊な構造部位を認識する抗体を見出す
ことが有力な手段となり得る。
特異的であり、かつ同一の特異性を有する抗体を安定的
に産生できるという利点から抗原蛋白質の機能および構
造の解析、あるいは免疫測定（ＥＩＡ、ＲＩＡ）に近時
一般的に広く利用されるようになって来た。特に抗原蛋
白質の機能解析、分子解析には抗原蛋白の機能に関与す
る部位、または特殊な構造部位を認識する抗体を見出す
ことが有力な手段となり得る。
ヒト・プロテインＣの構造は、分子量約４１０００のＨ
鎖と分子量約２１０００のし一鎖がＳ−８架橋で結合さ
れており、Ｈ鎖にセリンプロテアーゼ活性部位を有し、
また、し−鎖アミノ末端には、９個のカルシウムイオン
結合性アミノ酸、すなわち、γ−カルボキシグルタミン
酸（Ｇｌａ）残基を含むＧｌａｌミドメイン在すること
が知られている。
鎖と分子量約２１０００のし一鎖がＳ−８架橋で結合さ
れており、Ｈ鎖にセリンプロテアーゼ活性部位を有し、
また、し−鎖アミノ末端には、９個のカルシウムイオン
結合性アミノ酸、すなわち、γ−カルボキシグルタミン
酸（Ｇｌａ）残基を含むＧｌａｌミドメイン在すること
が知られている。
（３１ａドメインを有する血液凝固因子は、プロティン
Ｃを含め、第■因子（ブＯトロンビン）、第■因子、第
■因子、第Ｘ因子いずれもカルシウムイオン（Ｃａ＋＋
）存在下でＱｌａに依存した立体的構造変化を生じるこ
とが知られており、この機構は、血液凝固系発現の上で
重要な役割を果していることが知られている。
Ｃを含め、第■因子（ブＯトロンビン）、第■因子、第
■因子、第Ｘ因子いずれもカルシウムイオン（Ｃａ＋＋
）存在下でＱｌａに依存した立体的構造変化を生じるこ
とが知られており、この機構は、血液凝固系発現の上で
重要な役割を果していることが知られている。
従来、ヒト・プロテインＣのモノクロナール抗体は鈴木
らにより作成されたことが報告されており［鈴木宏治
他：“血液と脈管”、 １５： １７１−１７４ （
１９７４）参照］、この抗体はヒト・プロテインＣの抗
原量の測定、活性の測定に利用されているが、カルシウ
ムイオン（Ｃａ ” ” ）存在下で構造変化を受けた
ヒト・プロテインＣを認識するモノクロナール抗体につ
いての報告はまだなされていない。
らにより作成されたことが報告されており［鈴木宏治
他：“血液と脈管”、 １５： １７１−１７４ （
１９７４）参照］、この抗体はヒト・プロテインＣの抗
原量の測定、活性の測定に利用されているが、カルシウ
ムイオン（Ｃａ ” ” ）存在下で構造変化を受けた
ヒト・プロテインＣを認識するモノクロナール抗体につ
いての報告はまだなされていない。
そこで本発明者らは、プロティンＣがカルシウムイオン
（Ｃａ ” ” ）存在下で立体的構造変化を受けるこ
とに着目し、カルシウムイオン（Ｃａ ” ” ）の存
在下で構造変化を受けたプロティンＣを特異的にａＳａ
するモノクローナル抗体について研究を進めた結果本発
明に到達した。
（Ｃａ ” ” ）存在下で立体的構造変化を受けるこ
とに着目し、カルシウムイオン（Ｃａ ” ” ）の存
在下で構造変化を受けたプロティンＣを特異的にａＳａ
するモノクローナル抗体について研究を進めた結果本発
明に到達した。
Ｃ０発明の１Ｌ１ｉ
すなわち、本発明は、カルシウムイオン（Ｃａ ” ”
’）の非存在下ではヒト・プロテインＣに対して認識
せず且つカルシウムイオン（Ｃａ＋＋）の存在下ではヒ
ト・プロテインＣに対して特異的に認識するヒト・プロ
テインＣに対するモノクローナル抗体である。
’）の非存在下ではヒト・プロテインＣに対して認識
せず且つカルシウムイオン（Ｃａ＋＋）の存在下ではヒ
ト・プロテインＣに対して特異的に認識するヒト・プロ
テインＣに対するモノクローナル抗体である。
また他の本発明は、前記ヒト・プロテインＣに対するモ
ノクローナル抗体を産生ずるハイプリドーマであり、そ
のハイプリドーマの産生ずる産生物から前記ヒト・プロ
テインＣに対するモノクローナル抗体の製造方法である
。
ノクローナル抗体を産生ずるハイプリドーマであり、そ
のハイプリドーマの産生ずる産生物から前記ヒト・プロ
テインＣに対するモノクローナル抗体の製造方法である
。
ざらに他の本発明は、カルシウムイオン（Ｃａ＋１）の
非存在下では、ヒト・プロテインＣに対して認識せず且
つカルシウムイオン（Ｃａ ” ” ）の存在下ではヒ
ト・プロテインＣに対して特異的に認識するヒト・プロ
テインＣに対するモノクローナル抗体を不溶性担体と結
合させた吸着体に、ヒト・プロテインＣ含有混合物を、
カルシウムイオン（Ｃａ ” ” ）の存在下に接触せ
しめて、該吸着体にヒト・プロテインＣを結合せしめる
ことを特徴とするヒト・プロテインＣ含有混合物からの
ヒト・プロテインＣの分離法である。
非存在下では、ヒト・プロテインＣに対して認識せず且
つカルシウムイオン（Ｃａ ” ” ）の存在下ではヒ
ト・プロテインＣに対して特異的に認識するヒト・プロ
テインＣに対するモノクローナル抗体を不溶性担体と結
合させた吸着体に、ヒト・プロテインＣ含有混合物を、
カルシウムイオン（Ｃａ ” ” ）の存在下に接触せ
しめて、該吸着体にヒト・プロテインＣを結合せしめる
ことを特徴とするヒト・プロテインＣ含有混合物からの
ヒト・プロテインＣの分離法である。
本発明のモノクローナル抗体を産生するハイプリドーマ
細胞はケーラーとミルシュタインの方法［Ｋｏｈｌｅｒ
＆ ＭｉｌＳｔｅｉｎ、Ｎａｔｕｒｅ ： ２５
６４９５−４９７ （１９７５） ］として知られた方
法によって得られる。すなわち、ヒト・プロテインＣで
マウスを免疫した後このマウスの肺臓細胞をマウス・ミ
エローマ細胞と融合させ、得られたハイプリドーマ細胞
はマイクロタイタープレートに固定されたヒト・プロテ
インＣと反応する抗体に対し、系統的に検査し、選択さ
れる。この際に、カルシウムイオン（Ｃａ”＋）存在下
に、おける検査と、カルシウムイオン非存在下における
検査を同時に行い前者においてのみ陽性を示すハイプリ
ドーマを選別することにより、目的とする抗体を合成し
分泌するハイプリドーマを単離することができる。
細胞はケーラーとミルシュタインの方法［Ｋｏｈｌｅｒ
＆ ＭｉｌＳｔｅｉｎ、Ｎａｔｕｒｅ ： ２５
６４９５−４９７ （１９７５） ］として知られた方
法によって得られる。すなわち、ヒト・プロテインＣで
マウスを免疫した後このマウスの肺臓細胞をマウス・ミ
エローマ細胞と融合させ、得られたハイプリドーマ細胞
はマイクロタイタープレートに固定されたヒト・プロテ
インＣと反応する抗体に対し、系統的に検査し、選択さ
れる。この際に、カルシウムイオン（Ｃａ”＋）存在下
に、おける検査と、カルシウムイオン非存在下における
検査を同時に行い前者においてのみ陽性を示すハイプリ
ドーマを選別することにより、目的とする抗体を合成し
分泌するハイプリドーマを単離することができる。
本発明のモノクローナル抗体はかかる新規なハイプリト
ーマ１ＩＩＫ！が産生ずる産生物から得られ、カルシウ
ムイオン（Ｃａ ” ” ）の存在下におけるヒト・プ
ロテインＣ分子上の特定の抗原決定基に対して単一特異
的に作用する。
ーマ１ＩＩＫ！が産生ずる産生物から得られ、カルシウ
ムイオン（Ｃａ ” ” ）の存在下におけるヒト・プ
ロテインＣ分子上の特定の抗原決定基に対して単一特異
的に作用する。
本発明のモノクローナル抗体はその特性からヒト・プロ
テインＣの精製に利用する場合非常に有利である。すな
わち、不溶性担体に本発明におけるモノクローナル抗体
を固定化し、カルシウムイオン（Ｃｔｌ ” ” ）が
存在する溶液中で血漿（カルシウムイオン存在下で凝固
しないように調製したもの）または、他のヒト・プロテ
インＣを含む原料、あるいはそれらの粗抽出物、粗精製
物および溶液からヒト・プロテインＣを吸着・分離しカ
ルシウムイオン（Ｃａ ” ” ）存在下で洗浄後、溶
液をカルシウムイオンを含まないもの（例えばＥＤＴＡ
が存在する溶液）に置き換えて、ヒト・プロテインＣを
溶出することができる。この方法によれば、従来の不溶
化抗体による抗原蛋白質の精製のように、過激な条件下
（例えば、０．２Ｍグリシン塩酸あるいは８Ｍ尿素のよ
うな）に蛋白質をさらすことなく、穏和な条件下で精製
を行うことができる。
テインＣの精製に利用する場合非常に有利である。すな
わち、不溶性担体に本発明におけるモノクローナル抗体
を固定化し、カルシウムイオン（Ｃｔｌ ” ” ）が
存在する溶液中で血漿（カルシウムイオン存在下で凝固
しないように調製したもの）または、他のヒト・プロテ
インＣを含む原料、あるいはそれらの粗抽出物、粗精製
物および溶液からヒト・プロテインＣを吸着・分離しカ
ルシウムイオン（Ｃａ ” ” ）存在下で洗浄後、溶
液をカルシウムイオンを含まないもの（例えばＥＤＴＡ
が存在する溶液）に置き換えて、ヒト・プロテインＣを
溶出することができる。この方法によれば、従来の不溶
化抗体による抗原蛋白質の精製のように、過激な条件下
（例えば、０．２Ｍグリシン塩酸あるいは８Ｍ尿素のよ
うな）に蛋白質をさらすことなく、穏和な条件下で精製
を行うことができる。
また、ヒト・プロテインＣその他のγ−カルボキシグル
タミン酸含有蛋白質にはＧｌａを含まず、Ｇｌａに依存
する構造変化を受けない異常分子が存在することが知ら
れているが、本発明におけるモノクローナル抗体を用い
ることにより、この異常分子の測定が可能になると考え
られる。すなわち、カルシウムイオン（Ｃａ ” ”
’）が存在の有無に拘らず、ヒト・プロテインＣを認識
する抗体を用いて免疫学的手段（例えばＥＩＡ、ＲＩＡ
）により血漿その他の試料中のヒト・プロテインＣ抗原
舅を測定し、更に本発明によるモノクローナル抗体を用
いて、血漿、その他の試料中のヒト・プロテインＣをカ
ルシウムイオン存在下で免疫学的手法（ＥＩＡ、ＲＩＡ
）により測定すれば、その測定値の差から、異常ヒト・
プロテインＣの量を把握することができる。
タミン酸含有蛋白質にはＧｌａを含まず、Ｇｌａに依存
する構造変化を受けない異常分子が存在することが知ら
れているが、本発明におけるモノクローナル抗体を用い
ることにより、この異常分子の測定が可能になると考え
られる。すなわち、カルシウムイオン（Ｃａ ” ”
’）が存在の有無に拘らず、ヒト・プロテインＣを認識
する抗体を用いて免疫学的手段（例えばＥＩＡ、ＲＩＡ
）により血漿その他の試料中のヒト・プロテインＣ抗原
舅を測定し、更に本発明によるモノクローナル抗体を用
いて、血漿、その他の試料中のヒト・プロテインＣをカ
ルシウムイオン存在下で免疫学的手法（ＥＩＡ、ＲＩＡ
）により測定すれば、その測定値の差から、異常ヒト・
プロテインＣの量を把握することができる。
次に本発明におけるモノクローナル抗体を特性する具体
的方法について詳細に説明する。
的方法について詳細に説明する。
Ａ、−の暑離・精製；
抗原に用いるヒ１−・プロティンＣは鈴木らの方法［３
ｕｚｕｋｉ、に、 ｅｔ ａｔ 、 Ｊ 、 ［３ｉｏ
ｌ、Ｑｈｅｍ、ユ阻：１９１４−１９２０ （１９８３
） ］によりヒト・血漿から単離・精製される。
ｕｚｕｋｉ、に、 ｅｔ ａｔ 、 Ｊ 、 ［３ｉｏ
ｌ、Ｑｈｅｍ、ユ阻：１９１４−１９２０ （１９８３
） ］によりヒト・血漿から単離・精製される。
Ｂ、ヒト・プロテインＣによるマ スの ；ｆｉ３ａ
ｌｂ／Ｃマウスを用いることができるが他の系（Ｓｔｒ
ａｉｎ ）のマウスを使用してもよい。その際、免疫計
画、及びヒト・プロテインＣの濃度は十分な量の抗原刺
戟を受けた、リンパ球が形成されろうよ選ばれるべきで
ある。例えばマウスに５０μグのヒト・プロテインＣを
２週ｒａｍ隔で腹腔に３回免疫の債、ざらに３０μ９を
静脈に投与する。
ｌｂ／Ｃマウスを用いることができるが他の系（Ｓｔｒ
ａｉｎ ）のマウスを使用してもよい。その際、免疫計
画、及びヒト・プロテインＣの濃度は十分な量の抗原刺
戟を受けた、リンパ球が形成されろうよ選ばれるべきで
ある。例えばマウスに５０μグのヒト・プロテインＣを
２週ｒａｍ隔で腹腔に３回免疫の債、ざらに３０μ９を
静脈に投与する。
最終免疫の数日後に融合の為に肺臓細胞をとり出す。
立−」１１墓」ＬＬ
上記の如く免疫したマウスの肺臓を無菌的に取り出し、
そこから単細胞懸濁液を調製する。それらの牌１ｌＩＩ
Ｉ胞を適当なラインからのマウス骨髄腫［１ｒ１１と適
当な融合促進剤の使用により、１１１ｇ１融合させる。
そこから単細胞懸濁液を調製する。それらの牌１ｌＩＩ
Ｉ胞を適当なラインからのマウス骨髄腫［１ｒ１１と適
当な融合促進剤の使用により、１１１ｇ１融合させる。
肺臓ｌｌ１１１対、骨髄腫細胞の好ましい比率は約２０
：１〜約２＝１の範囲である。約１０８個の肺臓細胞に
ついて０．５〜１．５ｍの融合媒体の使用が適当である
。
：１〜約２＝１の範囲である。約１０８個の肺臓細胞に
ついて０．５〜１．５ｍの融合媒体の使用が適当である
。
細胞融合に用いるマウス骨髄腫細胞は、良く知られてい
るが、本発明では、Ｐ３−Ｘ６３−Ａａ ８−ＬＪｌｌ
ｌ［１１（Ｐ３−ＬＪｌ ） ［Ｙｅｌｔｏｎ、Ｄ、
Ｅ ｅｔａｌ、 Ｃｕｒｒｅｎｔ、 １−ｏｐｉｃ
ｓ ｉｎ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏａｙ ａｎｄＩｔ
ｇｉｕｎｏｌｏｏｙ、 ８１ １（１９７８）参照］を
用いた。
るが、本発明では、Ｐ３−Ｘ６３−Ａａ ８−ＬＪｌｌ
ｌ［１１（Ｐ３−ＬＪｌ ） ［Ｙｅｌｔｏｎ、Ｄ、
Ｅ ｅｔａｌ、 Ｃｕｒｒｅｎｔ、 １−ｏｐｉｃ
ｓ ｉｎ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏａｙ ａｎｄＩｔ
ｇｉｕｎｏｌｏｏｙ、 ８１ １（１９７８）参照］を
用いた。
好ましい融合０？進剤としては、例えば、平均分子ｆｉ
１０００〜４００Ｇのポリエチレングリコールを有利に
使用できるが、この分野で知られている他の融合促進剤
を使用することもできる。本発明においては、平均分子
５４１５４０のポリエチレングリコールを用いた。
１０００〜４００Ｇのポリエチレングリコールを有利に
使用できるが、この分野で知られている他の融合促進剤
を使用することもできる。本発明においては、平均分子
５４１５４０のポリエチレングリコールを用いた。
、 Ａした細 の 択；
別の容器内（例えばマイクロタイタープレート）で未融
合の牌＊ｍｌ１ｌ、未融合のマウス骨髄腫細胞および融
合したハイプリドーマ細胞の混合物を未融合のマウス骨
髄腫細胞を支持しない選択培地で希釈し、未融合の細胞
を死滅させるのに十分な時開（約１週間）培養する。培
地は、薬物抵抗性（例えば８−アザグアニン抵抗性）で
未融合のマウス骨ｍｍａ胞を支持しないもの、（例えば
ＨＡ下培地）が使用される。この選択培地中では、未融
合の骨髄腫細胞は死滅する。この未融合の肺臓細胞は非
腫瘍性細胞なので、ある一定期間接（１週間後）死滅す
る。これらに対して融合した細胞は、骨ａ腫のＭＭｍｆ
）腫瘍性と、親牌綱胞の性質を合わせ持つため、選択培
地中で生存できる。
合の牌＊ｍｌ１ｌ、未融合のマウス骨髄腫細胞および融
合したハイプリドーマ細胞の混合物を未融合のマウス骨
髄腫細胞を支持しない選択培地で希釈し、未融合の細胞
を死滅させるのに十分な時開（約１週間）培養する。培
地は、薬物抵抗性（例えば８−アザグアニン抵抗性）で
未融合のマウス骨ｍｍａ胞を支持しないもの、（例えば
ＨＡ下培地）が使用される。この選択培地中では、未融
合の骨髄腫細胞は死滅する。この未融合の肺臓細胞は非
腫瘍性細胞なので、ある一定期間接（１週間後）死滅す
る。これらに対して融合した細胞は、骨ａ腫のＭＭｍｆ
）腫瘍性と、親牌綱胞の性質を合わせ持つため、選択培
地中で生存できる。
Ｅ、各容器中のヒト・プロテインＣの 。
かくして、ハイプリドーマ細胞が検出された後、その培
養上清を採取し、ヒト・プロテインＣに対する抗体につ
いて酵素免疫定量法（Ｅ ｎＺＶｌｅ Ｌ １ｎｋｅｄ
Ｅ ｍｗｕｎｏｓｏｂｅｎｔ Ａｓ５ａｙ）によりス
クリーニングする。この際、培養上清、酵素標識抗体溶
液および洗浄液に一定濃度のＣａＣｌ２を加えた条件下
の測定と、ＣａＣｌ２を加えない条件下の測定の両方を
行い、前者に対してのみ陽性を示すハイプリドーマを選
択することにより、カルシウムイオン存在下では、ヒト
・プロテインＣｅ認１せず、カルシウムイオン存在下で
、ヒト・プロテインＣを認識する抗体を産生、分泌する
ハイプリドーマを選別することができる。
養上清を採取し、ヒト・プロテインＣに対する抗体につ
いて酵素免疫定量法（Ｅ ｎＺＶｌｅ Ｌ １ｎｋｅｄ
Ｅ ｍｗｕｎｏｓｏｂｅｎｔ Ａｓ５ａｙ）によりス
クリーニングする。この際、培養上清、酵素標識抗体溶
液および洗浄液に一定濃度のＣａＣｌ２を加えた条件下
の測定と、ＣａＣｌ２を加えない条件下の測定の両方を
行い、前者に対してのみ陽性を示すハイプリドーマを選
択することにより、カルシウムイオン存在下では、ヒト
・プロテインＣｅ認１せず、カルシウムイオン存在下で
、ヒト・プロテインＣを認識する抗体を産生、分泌する
ハイプリドーマを選別することができる。
目的の抗体を産生ずるハイプリドーマ細胞Ｉ胞を適当な
方法（例えば限界希釈法）でクローン化すると、抗体は
２つの異なった方法で産生される。その第１の方法によ
れば、ハイプリドーマ細胞を一定時間、適当な培地で培
養することにより、その培養上清かうそのバイプリドー
マ細胞の産生ずるモノクローナル抗体を得ることができ
る。第２の方法によれば、ハイプリドーマ細胞は同質遺
伝子、又は半同質遺伝子を持つマウスの腹腔に注射する
ことができる。一定時間後の宿主動物の命液中よおび腹
水中より、そのハイプリドーマ細胞の産生ずるモノクロ
ーナル抗体を得ることができる。
方法（例えば限界希釈法）でクローン化すると、抗体は
２つの異なった方法で産生される。その第１の方法によ
れば、ハイプリドーマ細胞を一定時間、適当な培地で培
養することにより、その培養上清かうそのバイプリドー
マ細胞の産生ずるモノクローナル抗体を得ることができ
る。第２の方法によれば、ハイプリドーマ細胞は同質遺
伝子、又は半同質遺伝子を持つマウスの腹腔に注射する
ことができる。一定時間後の宿主動物の命液中よおび腹
水中より、そのハイプリドーマ細胞の産生ずるモノクロ
ーナル抗体を得ることができる。
本発明におけるモノクローナル抗体は、前記した如く、
カルシウムイオン（Ｃａ ” ” ）の非存在下ではヒ
ト・プロテインＣに対して認識せず、且つカルシウムイ
オン＜Ｃａ＋＋）の存在下ではヒト・プロテインＣに対
して特異的に認識するという性質をイｊしているので、
この性質を利用して、ヒト・プロテインＣを含有してい
る混合物（例えばヒト血漿など）からヒト・プロテイン
Ｃを簡単に分離することができる。
カルシウムイオン（Ｃａ ” ” ）の非存在下ではヒ
ト・プロテインＣに対して認識せず、且つカルシウムイ
オン＜Ｃａ＋＋）の存在下ではヒト・プロテインＣに対
して特異的に認識するという性質をイｊしているので、
この性質を利用して、ヒト・プロテインＣを含有してい
る混合物（例えばヒト血漿など）からヒト・プロテイン
Ｃを簡単に分離することができる。
そのため、先ず前記ヒト・プロテインＣに対するモノク
ローナル抗体を不溶性担体に固定化又は結合させて吸着
体を得る。その際使用される不溶性担体としては、モノ
クローナル抗体を用いた測定試薬又は測定用キットの基
材として一般的使用されるものであればよい。例えば材
質としてセファ０−ス、ポリアクリルアミド、セルロー
ス、デキストラン、またはマレイン酸ポリマー或いはこ
れらの混合物が好ましく用いられる。これら不活性担体
の形態としては、粉末状１粒状、ペレット状、ビーズ状
、フィルム状、繊維状など種々の形態であることができ
る。また一般に血漿、またはその分画成分の測定や分離
に用いられる多数の凹状のくぼみを有するプレート（ウ
ェル）を用いることが有利である。
ローナル抗体を不溶性担体に固定化又は結合させて吸着
体を得る。その際使用される不溶性担体としては、モノ
クローナル抗体を用いた測定試薬又は測定用キットの基
材として一般的使用されるものであればよい。例えば材
質としてセファ０−ス、ポリアクリルアミド、セルロー
ス、デキストラン、またはマレイン酸ポリマー或いはこ
れらの混合物が好ましく用いられる。これら不活性担体
の形態としては、粉末状１粒状、ペレット状、ビーズ状
、フィルム状、繊維状など種々の形態であることができ
る。また一般に血漿、またはその分画成分の測定や分離
に用いられる多数の凹状のくぼみを有するプレート（ウ
ェル）を用いることが有利である。
前記吸着体を用い、これにヒト・プロテインＣ含有混合
物を、カルシウムイオン（Ｃａ ” ” ）の存在下に
接触せしめると、該吸着体に固定化したモノクローナル
抗体とヒト・プロテインＣとが結合して、結果的にヒト
・プロテインＣが該吸着体に結合する。かくすることに
よりヒト・プロテインＣを分離、除去することが可能で
ある。
物を、カルシウムイオン（Ｃａ ” ” ）の存在下に
接触せしめると、該吸着体に固定化したモノクローナル
抗体とヒト・プロテインＣとが結合して、結果的にヒト
・プロテインＣが該吸着体に結合する。かくすることに
よりヒト・プロテインＣを分離、除去することが可能で
ある。
又前記の如くしてヒト・プロテインＣを吸着体に結合さ
せ、出来れば残余の混合物を洗滌して除去し、次いで吸
着体に結合したヒト・プロテインＣをカルシウムイオン
（Ｃａ＋＋）を実質的に含まない液体と接触又は洗滌す
ると、ヒト・プロテインＣは該吸着体から離脱し、これ
を取得することによって、ヒト・プロテインＣを単離す
ることができる。
せ、出来れば残余の混合物を洗滌して除去し、次いで吸
着体に結合したヒト・プロテインＣをカルシウムイオン
（Ｃａ＋＋）を実質的に含まない液体と接触又は洗滌す
ると、ヒト・プロテインＣは該吸着体から離脱し、これ
を取得することによって、ヒト・プロテインＣを単離す
ることができる。
かくして前記本発明の分離法によれば、ヒト・プロテイ
ンＣを３何する混合物からのヒト・プロテインＣの除去
、該混合物からのヒト・プロテインＣの分離及び精製、
該混合物中のヒト・プロテインＣの含有量の測定などが
極めて簡単な操作で達成される。
ンＣを３何する混合物からのヒト・プロテインＣの除去
、該混合物からのヒト・プロテインＣの分離及び精製、
該混合物中のヒト・プロテインＣの含有量の測定などが
極めて簡単な操作で達成される。
以下実施例を一ヒげ本発明の詳細な説明する。以下実施
例ではプロティンＣをＰＣと略称すること達成される。
例ではプロティンＣをＰＣと略称すること達成される。
以下実施例を上げ本発明の詳細な説明する。以下実施例
ではプロティンＣをＰＣと略称することがある。
ではプロティンＣをＰＣと略称することがある。
実施例１゜
精製したヒト・ＰＣを雌のＢａ１ｂ／Ｃマウス（４周齢
）２匹に対ｌノで１４日間隔で４回免疫した。
）２匹に対ｌノで１４日間隔で４回免疫した。
初回の免疫はＰＢＳに溶解した。５０μグのヒト・ＰＣ
を等量のフロイントの完全アジュバント（Ｃｏｏ＋ｐｌ
ｅｔｅ Ｆｒｅｕｎｄ ’ ｓ ａｄｊｕｖａｎｔ）と
混合し、そのエマルジョンを、ＩＩ！ｉ！内に投与した
（ ０．５ＩＩＩ／ｈｅａｄ） 、２回目、３回目は、
同じ＜５０Ｍｇのヒト・ＰＣをフロイントの不完全アジ
ュバント（Ｆｒｅｕｎｄ ’ ｓ ｉｎｃｏｍｐｌｅｔ
ｅ ｏｄ、１ｕｖａｎｔ ）と混合し、同じく腹腔内に
投与した最終免疫は３０μ９のヒト・ＰＣをＰＢＳ溶液
のまま、マウス尾静脈から通過投与した。最終免疫の３
日後に免疫したマウスの肺臓細胞を細胞融合に用いた。
を等量のフロイントの完全アジュバント（Ｃｏｏ＋ｐｌ
ｅｔｅ Ｆｒｅｕｎｄ ’ ｓ ａｄｊｕｖａｎｔ）と
混合し、そのエマルジョンを、ＩＩ！ｉ！内に投与した
（ ０．５ＩＩＩ／ｈｅａｄ） 、２回目、３回目は、
同じ＜５０Ｍｇのヒト・ＰＣをフロイントの不完全アジ
ュバント（Ｆｒｅｕｎｄ ’ ｓ ｉｎｃｏｍｐｌｅｔ
ｅ ｏｄ、１ｕｖａｎｔ ）と混合し、同じく腹腔内に
投与した最終免疫は３０μ９のヒト・ＰＣをＰＢＳ溶液
のまま、マウス尾静脈から通過投与した。最終免疫の３
日後に免疫したマウスの肺臓細胞を細胞融合に用いた。
免疫したマウスの肺臓細胞と、同系マウスの骨髄腫細胞
（Ｐ３ＬＪ１）を約２：１〜約１５：１の割は、１ ｘ
ｌＯ’ ｃｅｌｌ／ｄの細胞濃度となるように１０％Ｆ
Ｏ８−−ＲＰＭ ｌ−１６４０培地に懸濁し、９６ｗｅ
ＩＩｓマイクロプレート（Ｃｏｓｔｅｒ ）に１ウェル
当り１００μ皇ずつ分注した。
（Ｐ３ＬＪ１）を約２：１〜約１５：１の割は、１ ｘ
ｌＯ’ ｃｅｌｌ／ｄの細胞濃度となるように１０％Ｆ
Ｏ８−−ＲＰＭ ｌ−１６４０培地に懸濁し、９６ｗｅ
ＩＩｓマイクロプレート（Ｃｏｓｔｅｒ ）に１ウェル
当り１００μ皇ずつ分注した。
融合細胞は、ＣＯ２インキユベータ−（５％ＣＯｚ、３
７℃）中で培養し、ヒポキサンチンアミノプテリン；チ
ミジンを含む培地（ＨＡＴ培地）で培養交換を行い、Ｈ
ＡＴ培地中で増殖させて、肺臓細胞と、骨ｌａＮ細胞か
ら成るハイプリドーマのスクリーニングを行った。
７℃）中で培養し、ヒポキサンチンアミノプテリン；チ
ミジンを含む培地（ＨＡＴ培地）で培養交換を行い、Ｈ
ＡＴ培地中で増殖させて、肺臓細胞と、骨ｌａＮ細胞か
ら成るハイプリドーマのスクリーニングを行った。
ハイブリドーマの培養上清中の抗体は抗原ヒト・ＰＣを
コーティングしたマイクロタイタープレートを用いＥＬ
ＩＳＡ法により検出した。第２抗体には、アルカリホス
ファターゼ標識ウサギ抗マウスＮＧ抗体を用い、カルシ
ウムイオン存在下非存在下におりるヒト・ＰＣとの結合
の違いを見るため、一方の培養上清には５１Ｍｃａ Ｃ
１ｚを添加したＴＢＳ （０，０２Ｍ Ｔｒｉｓ ／
ＨＣ！、 ０．１４Ｍ ＮａＣｌ ｐｌ−１７，
４’０．０５％Ｔ ｗｅｅｎ２０． ０，０２％Ｎａ
ＮＳ ）またはＴ Ｂ Ｓ −Ｔｗｅｅｎヲ使用Ｌ／
ｔし。
コーティングしたマイクロタイタープレートを用いＥＬ
ＩＳＡ法により検出した。第２抗体には、アルカリホス
ファターゼ標識ウサギ抗マウスＮＧ抗体を用い、カルシ
ウムイオン存在下非存在下におりるヒト・ＰＣとの結合
の違いを見るため、一方の培養上清には５１Ｍｃａ Ｃ
１ｚを添加したＴＢＳ （０，０２Ｍ Ｔｒｉｓ ／
ＨＣ！、 ０．１４Ｍ ＮａＣｌ ｐｌ−１７，
４’０．０５％Ｔ ｗｅｅｎ２０． ０，０２％Ｎａ
ＮＳ ）またはＴ Ｂ Ｓ −Ｔｗｅｅｎヲ使用Ｌ／
ｔし。
融合細胞をまいた合計５４１のウェルのうち５２３のウ
ェルにコロニーの形成が認められ。このうち抗体産生陽
性ウェルは下記表−１に示すようにカルシウムイオン存
在下で４４．カルウシムイオン非存右下で３２であった
。
ェルにコロニーの形成が認められ。このうち抗体産生陽
性ウェルは下記表−１に示すようにカルシウムイオン存
在下で４４．カルウシムイオン非存右下で３２であった
。
これらの抗体産生陽性ウェルのうち１２のウェルにって
い限界希釈法によるクローニングを２回繰り返して行な
い、１３個のクローンを得た。得られたクローンは９０
％ＦＯ８−１０％ＤＭＳＯ中に懸濁させ液体窒素中に保
存した。
い限界希釈法によるクローニングを２回繰り返して行な
い、１３個のクローンを得た。得られたクローンは９０
％ＦＯ８−１０％ＤＭＳＯ中に懸濁させ液体窒素中に保
存した。
各クローンの産生ずるモノクローナル抗体はクローンを
Ｂｅ１ｂ／Ｃマウス腹腔内で増殖させ、その腹水からプ
０フィンＡ −Ｓ ｅｐｈａｒｏｓｅ ４１３カラム
を用いて精製した。
Ｂｅ１ｂ／Ｃマウス腹腔内で増殖させ、その腹水からプ
０フィンＡ −Ｓ ｅｐｈａｒｏｓｅ ４１３カラム
を用いて精製した。
（以下余白）
表 −１（細胞融合）
（以下余白）
実施例２．（精製したＩｇＧの性質）
マウス腹水から精製した各クローンのＩａＧについてサ
プクスラ、ヒト・ＰＣ活性への影響Ｌ−鎖あるいは：（
−鎖への結合性を調べた。
プクスラ、ヒト・ＰＣ活性への影響Ｌ−鎖あるいは：（
−鎖への結合性を調べた。
サブクラスは、各クラス特異性の抗マウス抗血清を用い
て、オフタロニー法により決定した。ヒト・ＰＣ活性へ
の影響は、ヒト・ＰＣＢ：ＪｇＧをモル比１：５で加え
て４℃で一夜インキユベーシミンし、トロンビン−トロ
ンボモジュリンコンプレックスによりヒトＰＣを活性化
し、その活性に法合成Ｍ’Ｒの分解活性を測定すること
により測定した。この合成基質としてはＨ〜Ｖａｔ−Ｌ
ｅｕ−Ａｒ（Ｊ ＮＨ−−ＮＯ２・２ＨＣ！ ［ここ
ｒＶＮＧｔＤ形の光学活性のバリン、ＬｅｕはＬ形の光
学活性のＯイシン、ＡｒｇはＬ形の光学活性のアルギン
を示す。Ｋａｂｉ Ｖｉｔｒｕｍ ＡＢ （スウェーデ
ン）社製の３−２２６６を用いた１を使用した。Ｌ−鎖
、Ｈ−鎖への結合性は、ヒト・ＰＣを還元条件で電気泳
動し、ニトロセルロース膜及びＨＲｐＨ１ｌＧｏａｔ
ａｎｔｉ−ｍｉｕｓｅ Ｉ ａ Ｇを用いたイムノプ
ロッティングを行って判定した。
て、オフタロニー法により決定した。ヒト・ＰＣ活性へ
の影響は、ヒト・ＰＣＢ：ＪｇＧをモル比１：５で加え
て４℃で一夜インキユベーシミンし、トロンビン−トロ
ンボモジュリンコンプレックスによりヒトＰＣを活性化
し、その活性に法合成Ｍ’Ｒの分解活性を測定すること
により測定した。この合成基質としてはＨ〜Ｖａｔ−Ｌ
ｅｕ−Ａｒ（Ｊ ＮＨ−−ＮＯ２・２ＨＣ！ ［ここ
ｒＶＮＧｔＤ形の光学活性のバリン、ＬｅｕはＬ形の光
学活性のＯイシン、ＡｒｇはＬ形の光学活性のアルギン
を示す。Ｋａｂｉ Ｖｉｔｒｕｍ ＡＢ （スウェーデ
ン）社製の３−２２６６を用いた１を使用した。Ｌ−鎖
、Ｈ−鎖への結合性は、ヒト・ＰＣを還元条件で電気泳
動し、ニトロセルロース膜及びＨＲｐＨ１ｌＧｏａｔ
ａｎｔｉ−ｍｉｕｓｅ Ｉ ａ Ｇを用いたイムノプ
ロッティングを行って判定した。
各性質について得られた結果を下記表−２に示した。カ
ルシウムイオン依存性抗体はいずれもＬ鎖結合性であり
、ヒト・ＰＣの活性には影響を及ぼさなかった。
ルシウムイオン依存性抗体はいずれもＬ鎖結合性であり
、ヒト・ＰＣの活性には影響を及ぼさなかった。
（以下余白）
表−２１９Ｇの性質
（以下余白）
実施例３６ （カルシウムイオンの影響）ヒト・ＰＣと
精製したＩｏＧとの反応に及ぼすカルシウムイオンの影
響について検討した。
精製したＩｏＧとの反応に及ぼすカルシウムイオンの影
響について検討した。
ヒト・ＰＣをコーティングしたＥＬＩＳＡ法においてカ
ルシウムイオン依存性の抗体７８１２及び１０Ｅ１２を
５ｉ＋１ｙｌＱａＣｆ添加Ｔ Ｂ Ｓ −Ｔｗｅｅｎ
（０，０２Ｍ Ｔｒｉｓ／ＨＣｆ、 ０．１４Ｍ
ＮａＣｊ、 ｐｔ−＋ ７．４０６０５％Ｔ ｗｅ
ｅｎ２０． ０，０２％Ｎａ Ｎ３）またはＴＢ Ｓ
−Ｔｗｅｅｎで希釈してヒト・ＰＣと反応させアルカリ
ホスファターゼ標識ウサギ抗マウスＩ（ＪＧを用いた発
色から結合量を測定すると、５ｇｚＭＣａｃ１ｚを添加
したバッファーで希釈した場合には抗体濃度に依存した
ヒト・ＰＣとの結合を示したが、ＣａＣｆｚを添加しな
いバッファー希釈した場合には、抗体１１１ｆを高くし
ても結合は認められなかった。その結集を下記表−３に
示した。
ルシウムイオン依存性の抗体７８１２及び１０Ｅ１２を
５ｉ＋１ｙｌＱａＣｆ添加Ｔ Ｂ Ｓ −Ｔｗｅｅｎ
（０，０２Ｍ Ｔｒｉｓ／ＨＣｆ、 ０．１４Ｍ
ＮａＣｊ、 ｐｔ−＋ ７．４０６０５％Ｔ ｗｅ
ｅｎ２０． ０，０２％Ｎａ Ｎ３）またはＴＢ Ｓ
−Ｔｗｅｅｎで希釈してヒト・ＰＣと反応させアルカリ
ホスファターゼ標識ウサギ抗マウスＩ（ＪＧを用いた発
色から結合量を測定すると、５ｇｚＭＣａｃ１ｚを添加
したバッファーで希釈した場合には抗体濃度に依存した
ヒト・ＰＣとの結合を示したが、ＣａＣｆｚを添加しな
いバッファー希釈した場合には、抗体１１１ｆを高くし
ても結合は認められなかった。その結集を下記表−３に
示した。
なお、カルシウムイオン比依存性の抗体６Ｂ１０−１及
び１０Ｈ１１を用いて同様にカルシウムイオンの影響に
ついて調べた結果も同表−３に併記して示した。
び１０Ｈ１１を用いて同様にカルシウムイオンの影響に
ついて調べた結果も同表−３に併記して示した。
実施例４．（カルシウムイオン濃度の影響）前記実施例
３におけるカルシウムイオン依存性の抗体７Ｂ１２及・
び１０Ｅ １２を用い、それらの濃度を一定（１μｇ／
ｓＯとし、抗体溶液中のカルシウムイオン濃度を変化さ
せたところ、ヒト・ＰＣとの結合はＣａＣｊｚ濃度が高
まるにつれて増加し、約１ ｓＭの濃度で飽和となっ
た。その結果を下記表−４に示した。またカルシウムイ
オン非依存性の抗体６Ｅ２を用い同様にＣａＣｆｚ濃度
の変化の影響を調べた結果を、下記表−５に示した。表
−５の結果からカルシウムイオン非存在性の抗体では、
カルシウムイオン濃度に影響なく、ヒト・ＰＣとの結合
はほぼ一定の値を示していることがわかる。
３におけるカルシウムイオン依存性の抗体７Ｂ１２及・
び１０Ｅ １２を用い、それらの濃度を一定（１μｇ／
ｓＯとし、抗体溶液中のカルシウムイオン濃度を変化さ
せたところ、ヒト・ＰＣとの結合はＣａＣｊｚ濃度が高
まるにつれて増加し、約１ ｓＭの濃度で飽和となっ
た。その結果を下記表−４に示した。またカルシウムイ
オン非依存性の抗体６Ｅ２を用い同様にＣａＣｆｚ濃度
の変化の影響を調べた結果を、下記表−５に示した。表
−５の結果からカルシウムイオン非存在性の抗体では、
カルシウムイオン濃度に影響なく、ヒト・ＰＣとの結合
はほぼ一定の値を示していることがわかる。
なお、測定は、所定濃度のＣａＣｊｚを含むＴａ２−
ＴＷ６１ｉ１ｎで１μ９／ｄＩＩＪＧ溶液を調製し、１
００μ文を、ヒト・ＰＣをコーティングしたｗｅｌｌに
加えて行った。インキュベーション後のｗｅｌｌの洗浄
にも各濃度のＣａＣｆｚを含むＴ Ｂ Ｓ −Ｔｗｅｅ
ｎを用いた。
ＴＷ６１ｉ１ｎで１μ９／ｄＩＩＪＧ溶液を調製し、１
００μ文を、ヒト・ＰＣをコーティングしたｗｅｌｌに
加えて行った。インキュベーション後のｗｅｌｌの洗浄
にも各濃度のＣａＣｆｚを含むＴ Ｂ Ｓ −Ｔｗｅｅ
ｎを用いた。
表−４
（カルシウムイオン濃度の影響）
（以下余白）
表−５
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、カルシウムイオン（Ｃａ＾＋＾＋）の非存在下では
ヒト・プロテインＣに対して認識せず且つカルシウムイ
オン（Ｃａ＾＋＾＋）の存在下ではヒト・プロテインＣ
に対して特異的に認識するヒト・プロテインＣに対する
モノクローナル抗体。 ２、カルシウムイオン（Ｃａ＾＋＾＋）の非存在下では
ヒト・プロテインＣに対して認識せず且つカルシウムイ
オン（Ｃａ＾＋＾＋）の存在下ではヒト・プロテインＣ
に対して特異的に認識するヒト・プロテインＣに対する
モノクローナル抗体を産生するハイブリドーマ。 ３、カルシウムイオン（Ｃａ＾＋＾＋）の非存在下では
ヒト・プロテインＣに対して認識せず且つカルシウムイ
オン（Ｃａ＾＋＾＋）の存在下ではヒト・プロテインＣ
に対して特異的に認識するヒト・プロテインＣに対する
モノクローナル抗体を産生するハイブリドーマの産生物
から前記モノクローナル抗体を分離することを特徴とす
るモノクローナル抗体の製造方法。 ４、カルシウムイオン（Ｃａ＾＋＾＋）の非存在下では
、ヒト・プロテインＣに対して認識せず且つカルシウム
イオン（Ｃａ＾＋＾＋）の存在下ではヒト・プロテイン
Ｃに対して特異的に認識するヒト・プロテインＣに対す
るモノクローナル抗体を不溶性担体と結合させた吸着体
に、ヒト・プロテインＣ含有混合物を、カルウシムイオ
ン（Ｃａ＾＋＾＋）存在下に接触せしめて、該吸着体に
ヒト・プロテインＣを結合せしめることを特徴とするヒ
ト・プロテインＣ含有混合物からのヒト・プロテインＣ
の分離方法。
Priority Applications (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP59254186A JPS61134399A (ja) | 1984-12-03 | 1984-12-03 | モノクローナル抗体及びその製造方法 |
| US06/804,255 US4902614A (en) | 1984-12-03 | 1985-12-03 | Monoclonal antibody to human protein C |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP59254186A JPS61134399A (ja) | 1984-12-03 | 1984-12-03 | モノクローナル抗体及びその製造方法 |
Related Child Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP1288684A Division JPH0636741B2 (ja) | 1989-11-08 | 1989-11-08 | ヒト・プロテインｃの分離方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS61134399A true JPS61134399A (ja) | 1986-06-21 |
| JPH031959B2 JPH031959B2 (ja) | 1991-01-11 |
Family
ID=17261426
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP59254186A Granted JPS61134399A (ja) | 1984-12-03 | 1984-12-03 | モノクローナル抗体及びその製造方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS61134399A (ja) |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS60120825A (ja) * | 1983-10-18 | 1985-06-28 | Fujisawa Pharmaceut Co Ltd | 抗プロテインｃモノクロ−ナル抗体およびそれを産生するハイブリド−マ |
-
1984
- 1984-12-03 JP JP59254186A patent/JPS61134399A/ja active Granted
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS60120825A (ja) * | 1983-10-18 | 1985-06-28 | Fujisawa Pharmaceut Co Ltd | 抗プロテインｃモノクロ−ナル抗体およびそれを産生するハイブリド−マ |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH031959B2 (ja) | 1991-01-11 |
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| EXPY | Cancellation because of completion of term |