JPS6113148A - 連続型核酸断片電気泳動装置 - Google Patents
連続型核酸断片電気泳動装置Info
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- JPS6113148A JPS6113148A JP59132876A JP13287684A JPS6113148A JP S6113148 A JPS6113148 A JP S6113148A JP 59132876 A JP59132876 A JP 59132876A JP 13287684 A JP13287684 A JP 13287684A JP S6113148 A JPS6113148 A JP S6113148A
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- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N27/00—Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means
- G01N27/26—Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means by investigating electrochemical variables; by using electrolysis or electrophoresis
- G01N27/416—Systems
- G01N27/447—Systems using electrophoresis
- G01N27/44704—Details; Accessories
- G01N27/44743—Introducing samples
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〔発明の利用分野〕
本発明は、核酸の塩基配列決定装置に係り、特に連続し
て高精度で高速に核酸の塩基配列の決定を行なうことが
できる、核酸断片の連続的電気泳勤倹出システムに関す
る。
て高精度で高速に核酸の塩基配列の決定を行なうことが
できる、核酸断片の連続的電気泳勤倹出システムに関す
る。
従来、核酸の塩基配列決定は、例えばマキサム・キルｔ
＜ −ｌ；法（Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｇｙｍｏｌ
ｏｇｙ ６５． ｐｐ。
＜ −ｌ；法（Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｇｙｍｏｌ
ｏｇｙ ６５． ｐｐ。
４９５−７０１）により行なわれてきた。この方法では
、まず放射性同位体で標識された核酸を化学的に断片化
した後、電気泳動法にて、長さの異なる核酸断片をカラ
ス板で挾まれたゲル支持体中で分子量順に整列させる。
、まず放射性同位体で標識された核酸を化学的に断片化
した後、電気泳動法にて、長さの異なる核酸断片をカラ
ス板で挾まれたゲル支持体中で分子量順に整列させる。
そして、ゲル支持体をカラス板よりはがし、このオート
ラジオグラムを撮ることで放射性核酸断片を含む泳動帯
の検出を行ない、核酸の塩基配列を決定する。ここてぃ
従来技術による核酸断片の塩基配列決定法について、図
面に基づいて説明する。第４図は従来の核酸断片の電気
泳動装置の構造を示す斜視図である。図に示すごとく、
２枚のカラス板３に挾まれた核酸断片の泳動分離用ゲル
２、その泳動分離用ゲル２の両端を浸す電極液槽１、お
よび直流電源１０て構成される。そして、放射性同位体
（例えば３２Ｐ）で標識された核酸断片試料を、泳動分
離用ケル２の負極側スロット５に供給し、ゲル長あたり
５０Ｖ／ｃｍ程度の電圧Ｅｖで泳動させると、同一分子
量を持つ核酸断片は、それぞれ泳動帯４を形成しつつ負
極より正極に向い、分子量の対数にほぼ反比例した移動
度で泳動する。この核酸断片の泳動帯４の泳動パターン
から、核酸塩基の分子量順の配列を決定する。
ラジオグラムを撮ることで放射性核酸断片を含む泳動帯
の検出を行ない、核酸の塩基配列を決定する。ここてぃ
従来技術による核酸断片の塩基配列決定法について、図
面に基づいて説明する。第４図は従来の核酸断片の電気
泳動装置の構造を示す斜視図である。図に示すごとく、
２枚のカラス板３に挾まれた核酸断片の泳動分離用ゲル
２、その泳動分離用ゲル２の両端を浸す電極液槽１、お
よび直流電源１０て構成される。そして、放射性同位体
（例えば３２Ｐ）で標識された核酸断片試料を、泳動分
離用ケル２の負極側スロット５に供給し、ゲル長あたり
５０Ｖ／ｃｍ程度の電圧Ｅｖで泳動させると、同一分子
量を持つ核酸断片は、それぞれ泳動帯４を形成しつつ負
極より正極に向い、分子量の対数にほぼ反比例した移動
度で泳動する。この核酸断片の泳動帯４の泳動パターン
から、核酸塩基の分子量順の配列を決定する。
マキサム・ギルバード法の場合、上記第４図の核酸断片
を供給するスロット５に供給される核酸断片は、使用す
る制限酵素の制約から平均１０００−塩基の鎖長を有す
る。そして、１回の電気泳動で解析可能な核酸断片の塩
基数は４００〜５００個で、これより鎖長の長い残りの
核酸断片は充分に泳動されず、第４図に示す泳動分離用
ゲル２のスロット５近傍に残留する。この場合、長時間
電気泳動を継続すれば、ゲル２の負極端より流動させる
こともてきるが、核酸断片の泳動帯の分離が不充分とな
り現実的でない。
を供給するスロット５に供給される核酸断片は、使用す
る制限酵素の制約から平均１０００−塩基の鎖長を有す
る。そして、１回の電気泳動で解析可能な核酸断片の塩
基数は４００〜５００個で、これより鎖長の長い残りの
核酸断片は充分に泳動されず、第４図に示す泳動分離用
ゲル２のスロット５近傍に残留する。この場合、長時間
電気泳動を継続すれば、ゲル２の負極端より流動させる
こともてきるが、核酸断片の泳動帯の分離が不充分とな
り現実的でない。
また、クイチオキン法（Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｇ
ｙｍｏｌｏｇｙ６５、 ｐｐ、２９９−４９４ ）によ
る、核酸塩基配列決定時に調製される泳動用核酸断片は
、７０００塩基以上の成分と数百塩基以下の成分との混
合物なので、この場合も、７０００塩基以上の成分はほ
とんど泳動されずに泳動分離用ゲル２のスロット５の近
傍に残留する。それ故、マキサム・ギルバード法および
クイチオキン法いずれの方法においても、何通りもの核
酸試料を連続して供給し、核酸塩基の配列を解析するこ
とは困難であった。
ｙｍｏｌｏｇｙ６５、 ｐｐ、２９９−４９４ ）によ
る、核酸塩基配列決定時に調製される泳動用核酸断片は
、７０００塩基以上の成分と数百塩基以下の成分との混
合物なので、この場合も、７０００塩基以上の成分はほ
とんど泳動されずに泳動分離用ゲル２のスロット５の近
傍に残留する。それ故、マキサム・ギルバード法および
クイチオキン法いずれの方法においても、何通りもの核
酸試料を連続して供給し、核酸塩基の配列を解析するこ
とは困難であった。
本発明の目的は、上述した従来技術の問題点を解消し、
より高速に核酸塩基の配列を決定するために、泳動分離
対象以外の高分子量成分である核酸断片を前もって分離
除去し、かつ泳動分離用ゲルの成分を恒常的に保つこと
によって、同一の泳動分離用ゲルで、大量の核酸断片を
連続的に解析処理することができる電気泳動装置を提供
することにある。
より高速に核酸塩基の配列を決定するために、泳動分離
対象以外の高分子量成分である核酸断片を前もって分離
除去し、かつ泳動分離用ゲルの成分を恒常的に保つこと
によって、同一の泳動分離用ゲルで、大量の核酸断片を
連続的に解析処理することができる電気泳動装置を提供
することにある。
本発明は、」二連した目的を達成するために、核酸断片
を、泳動分離用ゲルを用いた電気泳動槽で、分子量順に
分離して核酸塩基配列を決定する装置において、電気泳
動槽に核酸断片を供給する核酸断片試料供給部に、核酸
断片試料中の、電気泳動解析対象外とする高分子量成分
を分離除去するための、所定の大きさの分子透過性を有
する分子ふるい膜を設けることを骨子とするものである
。
を、泳動分離用ゲルを用いた電気泳動槽で、分子量順に
分離して核酸塩基配列を決定する装置において、電気泳
動槽に核酸断片を供給する核酸断片試料供給部に、核酸
断片試料中の、電気泳動解析対象外とする高分子量成分
を分離除去するための、所定の大きさの分子透過性を有
する分子ふるい膜を設けることを骨子とするものである
。
そして本発明に使用する分子ふるい膜は、一般に用いら
れている半透膜（透析膜、限外沢過膜等）ま！こは溶液
に対するゲル量の少ない低濃度ゲルであってもよく、要
は特定の大きさの高分子量成分を分離除去できるもので
あればよい。
れている半透膜（透析膜、限外沢過膜等）ま！こは溶液
に対するゲル量の少ない低濃度ゲルであってもよく、要
は特定の大きさの高分子量成分を分離除去できるもので
あればよい。
さらに本発明の分子ふるい膜は、例えば、ディスク型分
子ふるい膜を、所定の中心角度で複数個に分割し、それ
を所定の中心角度だけ回転させながら新しい分子ふるい
膜に交換し、連続的に使用可能とする分子ふるい膜、ま
たは、特に形状を限定するものではないが、３角形、４
角形あるいは長方形等のカートリッジ型分子ふるい膜と
して、それ、を交換可能な構造とするものである。
子ふるい膜を、所定の中心角度で複数個に分割し、それ
を所定の中心角度だけ回転させながら新しい分子ふるい
膜に交換し、連続的に使用可能とする分子ふるい膜、ま
たは、特に形状を限定するものではないが、３角形、４
角形あるいは長方形等のカートリッジ型分子ふるい膜と
して、それ、を交換可能な構造とするものである。
そして、さらに本発明は、核酸断片試料供給部と電気泳
動槽との間に、電気伝導性溶液槽を設け、また電気泳動
槽の下部には尿素補給槽を設けて、泳動分離用ゲルの成
分を恒常的に保つこと（ζよって、同一の泳動分離用の
ゲルで、長時間連続して核酸断片の泳動解析が行なえる
構造とする連続型核酸断片電気泳動装置である。
動槽との間に、電気伝導性溶液槽を設け、また電気泳動
槽の下部には尿素補給槽を設けて、泳動分離用ゲルの成
分を恒常的に保つこと（ζよって、同一の泳動分離用の
ゲルで、長時間連続して核酸断片の泳動解析が行なえる
構造とする連続型核酸断片電気泳動装置である。
以下に本発明の一実施例を図面によって説明する。図に
おいて、同一符号を付したものは同一性能を有する部分
である。
おいて、同一符号を付したものは同一性能を有する部分
である。
（実施例１）
第１図は本発明の一例であるティスフ型の分子ふるい膜
を使用した核酸断片の電気泳動装置の概略構造を示す説
明図で、第２図は、本発明の第１図の電気泳動装置に用
いた、ディスク型分子ふるい膜の構造を示す斜視図であ
る。図から明らかなごとく、核酸の塩基配列を決定しよ
うとする核酸断片７を電気泳動装置に供給する。このと
き、泳動分離用ゲル２の上部に分子ふるい膜２０および
電気伝導性溶液槽２１て構成される電気泳動槽２２を設
ける。そして、電気泳動槽２２に直流電源１０により電
圧を印加すると、核酸断片７は電気泳動槽２２の上から
下へ移動し始める。このとき、核酸断片７の高分子量成
分のものは、分子ふるい膜２０を通過できずにこの上に
残留し、核酸断片７の低分子量成分のみ電気泳動槽２２
を通過して、核酸塩基配列決定用の泳動分離用ゲル２に
到達する。この核酸塩基配列決定の対象とする低分子量
成分の核酸断片は、従来の方法によって泳動帯４を形成
するので、との泳動帯４の泳動パターンを解析すること
によって、核酸断片７の塩基配列を決定することができ
る。ここで用いた分子ふるい膜２０を、第２図に示すよ
うなディスク型分子ふるい膜３０の構造とし、このディ
スク型分子ふるい膜３０を適当な中心角度で分割する。
を使用した核酸断片の電気泳動装置の概略構造を示す説
明図で、第２図は、本発明の第１図の電気泳動装置に用
いた、ディスク型分子ふるい膜の構造を示す斜視図であ
る。図から明らかなごとく、核酸の塩基配列を決定しよ
うとする核酸断片７を電気泳動装置に供給する。このと
き、泳動分離用ゲル２の上部に分子ふるい膜２０および
電気伝導性溶液槽２１て構成される電気泳動槽２２を設
ける。そして、電気泳動槽２２に直流電源１０により電
圧を印加すると、核酸断片７は電気泳動槽２２の上から
下へ移動し始める。このとき、核酸断片７の高分子量成
分のものは、分子ふるい膜２０を通過できずにこの上に
残留し、核酸断片７の低分子量成分のみ電気泳動槽２２
を通過して、核酸塩基配列決定用の泳動分離用ゲル２に
到達する。この核酸塩基配列決定の対象とする低分子量
成分の核酸断片は、従来の方法によって泳動帯４を形成
するので、との泳動帯４の泳動パターンを解析すること
によって、核酸断片７の塩基配列を決定することができ
る。ここで用いた分子ふるい膜２０を、第２図に示すよ
うなディスク型分子ふるい膜３０の構造とし、このディ
スク型分子ふるい膜３０を適当な中心角度で分割する。
第２図のディスク型分子ふるい膜の例では、中心角度を
３０°おきに分割して分子ふるい膜２０を構成している
ので、１枚のディスク型分子ふるい膜３０について、１
２個の分子ふるい膜２０ａ 〜２０ｇ、 ２０ａ’ 〜
２０ｇ’を形成させることカテきる。なお、この分割さ
れた狭い扇形状の分子ふるい膜２０ａ 〜２０ｇ 、
２０ａ’ 〜２０ｇ’は、泳動分離用ゲル２が充填され
ている電気泳動槽の上面を充分に覆う大きさでなければ
ならない。そして、第１図に図示するようにディスク型
分子ふるい膜３０の中心に、シャフト３１て連結したモ
ータ３２によって、たとえば３００間隔に所定時間毎に
回転させて、ディスク型分子ふるい膜３０を分割して形
成した分子ふるい膜２０ａ〜２０ｇ、２０ａ′〜２０ｇ
′を順次回転して使用していく。また、第１図に図示し
たごとく、２箇所に泳動分離用ゲル２によって構成され
る電気泳動槽２２を配置すれば、同時に２種類の核酸断
片７の泳動解析が可能となり、全体として解析時間は≠
に短縮される。本実施例において、第２図に示すディス
ク型分子ふるい膜３０を用いた場合は、まず最初の電気
泳動させる核酸断片について、たとえば分子ふるい膜２
０ａと２０２’を同時に使用して核酸の塩基配列を決定
する。そして、次に泳動解析する新たな核酸断片を供給
する前に、ディスク型分子ふるい膜３０を、３００だけ
回転させれば新しい分子ふるい膜２０ｂと２０ｂ′を、
泳動分離用ゲル２の上部に一致させることができ、引続
き核酸断片の泳動解析を行なうことができる。このよう
にして、本実施例では、６回連続して核酸の塩基配列が
決定できることになる。
３０°おきに分割して分子ふるい膜２０を構成している
ので、１枚のディスク型分子ふるい膜３０について、１
２個の分子ふるい膜２０ａ 〜２０ｇ、 ２０ａ’ 〜
２０ｇ’を形成させることカテきる。なお、この分割さ
れた狭い扇形状の分子ふるい膜２０ａ 〜２０ｇ 、
２０ａ’ 〜２０ｇ’は、泳動分離用ゲル２が充填され
ている電気泳動槽の上面を充分に覆う大きさでなければ
ならない。そして、第１図に図示するようにディスク型
分子ふるい膜３０の中心に、シャフト３１て連結したモ
ータ３２によって、たとえば３００間隔に所定時間毎に
回転させて、ディスク型分子ふるい膜３０を分割して形
成した分子ふるい膜２０ａ〜２０ｇ、２０ａ′〜２０ｇ
′を順次回転して使用していく。また、第１図に図示し
たごとく、２箇所に泳動分離用ゲル２によって構成され
る電気泳動槽２２を配置すれば、同時に２種類の核酸断
片７の泳動解析が可能となり、全体として解析時間は≠
に短縮される。本実施例において、第２図に示すディス
ク型分子ふるい膜３０を用いた場合は、まず最初の電気
泳動させる核酸断片について、たとえば分子ふるい膜２
０ａと２０２’を同時に使用して核酸の塩基配列を決定
する。そして、次に泳動解析する新たな核酸断片を供給
する前に、ディスク型分子ふるい膜３０を、３００だけ
回転させれば新しい分子ふるい膜２０ｂと２０ｂ′を、
泳動分離用ゲル２の上部に一致させることができ、引続
き核酸断片の泳動解析を行なうことができる。このよう
にして、本実施例では、６回連続して核酸の塩基配列が
決定できることになる。
ところで、このような条件下で核酸断片の電気泳動を継
続すると、泳動分離用ゲル２中に含まれている尿素が、
わずかづつではあるが正極側より負極側に向って泳動さ
れるので、泳動分離用ゲル２の正極端部より徐々に尿素
濃度が低下していく。
続すると、泳動分離用ゲル２中に含まれている尿素が、
わずかづつではあるが正極側より負極側に向って泳動さ
れるので、泳動分離用ゲル２の正極端部より徐々に尿素
濃度が低下していく。
その結果、ゲル内で充分な核酸断片の変性条件か−保て
なくなり、泳動帯４の泳動状態に異常が生ずるので、泳
動解析結果が不正確となる。そこで本発明では、第１図
に示すように泳動分離用ゲル２と正極側電極液槽１との
間に、泳動分離用ゲル２内の溶液成分と同一組成の溶液
を含む槽である尿素補給槽２３を設け、電気泳動時には
常に尿素を補給して泳動分離用ゲル２の槽内の尿素濃度
を一定に保つことができる。
なくなり、泳動帯４の泳動状態に異常が生ずるので、泳
動解析結果が不正確となる。そこで本発明では、第１図
に示すように泳動分離用ゲル２と正極側電極液槽１との
間に、泳動分離用ゲル２内の溶液成分と同一組成の溶液
を含む槽である尿素補給槽２３を設け、電気泳動時には
常に尿素を補給して泳動分離用ゲル２の槽内の尿素濃度
を一定に保つことができる。
このように、本発明によれば核酸断片の高分子量成分の
排除と、泳動分離用ゲル内の核酸断片変性条件とを常に
一定に保つことて、泳動分離用ゲルの劣化を防ぎ、ゲル
の再使用を可能としたものであって、多種類の核酸断片
を連続して処理することができるので、従来の泳動解析
方法と比較して、その解析速度を一段と向上させること
ができる。
排除と、泳動分離用ゲル内の核酸断片変性条件とを常に
一定に保つことて、泳動分離用ゲルの劣化を防ぎ、ゲル
の再使用を可能としたものであって、多種類の核酸断片
を連続して処理することができるので、従来の泳動解析
方法と比較して、その解析速度を一段と向上させること
ができる。
（実施例２）
つぎに、本発明の他の一実施例を図面に基づいて説明す
る。第３図は本実施例における電気泳動装置を上方から
見た平面図である。この場合に用いる分子ふるい膜２０
は、カートリラン型の長方形の分子ふるい膜で、その周
囲が磁性体で作られた分子ふるい膜容器５５の中にセッ
トされていて、この分子ふるい膜容器５５は泳動分離用
ゲル２が充填されている電気泳動槽の上面を充分に覆う
形で配置されている。そして、分子ふるい膜容器５５に
隣接して磁性体容器に入った新しい交換用の分子ふるい
膜２０’が用意され、電磁ソレノイド５０側に吸着し固
定されている。つぎに、新たな核酸断片の電気泳動を始
める前に、スイッチ５３によって、電磁ソレノイド５１
に交流電源５２の電圧を供給し、分子ふるい膜２０およ
び新しい交換用の分子ふるい膜２０’の入った磁性体容
器を、電磁ソレノイド５１側に吸着し移動させると、使
用済みの分子ふるい膜２０は、泳動分離用ゲル２の電気
泳動槽」二面から外され、新しい分子ふるい膜２０′の
入った磁性体容器が、ゲル２の電気泳動槽の上面を充分
に覆う形になり、引続き泳動解析を行なうことができる
。
る。第３図は本実施例における電気泳動装置を上方から
見た平面図である。この場合に用いる分子ふるい膜２０
は、カートリラン型の長方形の分子ふるい膜で、その周
囲が磁性体で作られた分子ふるい膜容器５５の中にセッ
トされていて、この分子ふるい膜容器５５は泳動分離用
ゲル２が充填されている電気泳動槽の上面を充分に覆う
形で配置されている。そして、分子ふるい膜容器５５に
隣接して磁性体容器に入った新しい交換用の分子ふるい
膜２０’が用意され、電磁ソレノイド５０側に吸着し固
定されている。つぎに、新たな核酸断片の電気泳動を始
める前に、スイッチ５３によって、電磁ソレノイド５１
に交流電源５２の電圧を供給し、分子ふるい膜２０およ
び新しい交換用の分子ふるい膜２０’の入った磁性体容
器を、電磁ソレノイド５１側に吸着し移動させると、使
用済みの分子ふるい膜２０は、泳動分離用ゲル２の電気
泳動槽」二面から外され、新しい分子ふるい膜２０′の
入った磁性体容器が、ゲル２の電気泳動槽の上面を充分
に覆う形になり、引続き泳動解析を行なうことができる
。
つぎに、新しい分子ふるい膜２０″を用意しておいて、
今度は電磁ソレノイド５０に通電して、電磁ソレノイド
５０側に吸着し移動させると、使用済の分子ふるい膜は
外されて、新しい分子ふるい膜２ｏ“が、泳動分離用ゲ
ル２の電気泳動槽に部に配置される。以上の操作を繰返
し行なえば、多種類の核酸断片を連続的に高速で解析す
ることができる。
今度は電磁ソレノイド５０に通電して、電磁ソレノイド
５０側に吸着し移動させると、使用済の分子ふるい膜は
外されて、新しい分子ふるい膜２ｏ“が、泳動分離用ゲ
ル２の電気泳動槽に部に配置される。以上の操作を繰返
し行なえば、多種類の核酸断片を連続的に高速で解析す
ることができる。
次に本発明の電気泳動装置を構成する部品ならびに材料
について説明を付加する。
について説明を付加する。
まず、本発明において使用する分子ふるい膜２゜は、電
気泳動解析する試料である核酸断片の低分子量成分のみ
を透過させることが目的であるがら、たとえば核酸塩基
数５００以」二、分子量で２０万以上を透過させる孔径
のもので、ある分子は透過させるがある分子は透過さぜ
ないという、通常使用されている半透膜であればよく、
その材質としては、例えば酢酸セルロース、ポリアクリ
ルニトリル、ポリスルホン、芳香族ナイロン、高分子電
解質複合体、ポリフッ化ヒニリデン、キュプロファン膜
等をあげることができ、また合成ゼオライト（モレキュ
ランーブス）、シリカゲル、アルミナゲル等であっても
よい。また、溶液に対するゲル（コロイド溶液が７エリ
ー状に固化したもの）の量が少ない低濃度のアガロース
ゲル、あるいはアクリルアミドゲルによっても同等の効
果が得られることはいうまでもない。
気泳動解析する試料である核酸断片の低分子量成分のみ
を透過させることが目的であるがら、たとえば核酸塩基
数５００以」二、分子量で２０万以上を透過させる孔径
のもので、ある分子は透過させるがある分子は透過さぜ
ないという、通常使用されている半透膜であればよく、
その材質としては、例えば酢酸セルロース、ポリアクリ
ルニトリル、ポリスルホン、芳香族ナイロン、高分子電
解質複合体、ポリフッ化ヒニリデン、キュプロファン膜
等をあげることができ、また合成ゼオライト（モレキュ
ランーブス）、シリカゲル、アルミナゲル等であっても
よい。また、溶液に対するゲル（コロイド溶液が７エリ
ー状に固化したもの）の量が少ない低濃度のアガロース
ゲル、あるいはアクリルアミドゲルによっても同等の効
果が得られることはいうまでもない。
次に、本発明に使用する電気泳動分離用ゲル２として、
たとえば、溶液に対してゲル量の多い高濃度の尿素を含
むアクリルアミドゲルが適当である（文献：蛋白質・核
酸・酵素、 ２３．３． ｐｐ １８２−１９６）。
たとえば、溶液に対してゲル量の多い高濃度の尿素を含
むアクリルアミドゲルが適当である（文献：蛋白質・核
酸・酵素、 ２３．３． ｐｐ １８２−１９６）。
また、電気伝導性溶液槽２１の溶液成分は、核酸断片の
変性条件を保つため電気泳動分離用ゲル２内の溶液成分
と同じものでなければならない。さらに、電極液槽１内
溶液の成分は、泳動分離用ゲル２内の溶液成分のうち尿
素を除外したものである。
変性条件を保つため電気泳動分離用ゲル２内の溶液成分
と同じものでなければならない。さらに、電極液槽１内
溶液の成分は、泳動分離用ゲル２内の溶液成分のうち尿
素を除外したものである。
なお、本発明の一実施例である第１図に示す電気泳動装
置のディスク型分子ふるい膜３０を回転させるモータ３
２は、任意の角度でディスク型分子ふるい膜３０を回転
させることが必要であるから、入力パルスの数に対応し
て回転角度が精度よく得られるステラピンクモータが適
当である。
置のディスク型分子ふるい膜３０を回転させるモータ３
２は、任意の角度でディスク型分子ふるい膜３０を回転
させることが必要であるから、入力パルスの数に対応し
て回転角度が精度よく得られるステラピンクモータが適
当である。
以上詳細に説明したごとく、本発明によれば、電気泳動
解析対象外である核酸断片の高分子量成分を容易に排除
することができ、また常に尿素を補給して泳動分離用ゲ
ル内での核酸断片の変性条件を常に一定条件に保つこと
ができるので、多種類の核酸断片試料を、一定時間毎に
何度も供給して、泳動解析することが可能で、同一の泳
動分離用ゲルで大量のデオキシリポ核酸（ＤＮＡ）断片
の解析処理ができ、核酸塩基配列決定の自動化、高速処
理装置の実現が可能である。そして具体的には。
解析対象外である核酸断片の高分子量成分を容易に排除
することができ、また常に尿素を補給して泳動分離用ゲ
ル内での核酸断片の変性条件を常に一定条件に保つこと
ができるので、多種類の核酸断片試料を、一定時間毎に
何度も供給して、泳動解析することが可能で、同一の泳
動分離用ゲルで大量のデオキシリポ核酸（ＤＮＡ）断片
の解析処理ができ、核酸塩基配列決定の自動化、高速処
理装置の実現が可能である。そして具体的には。
（１）従来、１試料の核酸断片泳動解析ごとに行なわれ
ていた泳動分離用ゲルの調製が不要となり、１回の解析
当り約３時間の時間短縮が可能となる。
ていた泳動分離用ゲルの調製が不要となり、１回の解析
当り約３時間の時間短縮が可能となる。
（２） また従来法では、泳動分離用ゲル内で残留し
ていた高分子量成分の核酸断片が、本発明によると容易
に除去可能となるので、自動運転による大量の核酸塩基
配列の決定ができる。など、実用−」二の効果は極めて
大きい。
ていた高分子量成分の核酸断片が、本発明によると容易
に除去可能となるので、自動運転による大量の核酸塩基
配列の決定ができる。など、実用−」二の効果は極めて
大きい。
第１図は本発明の一例であるディスク型分子ふるい膜を
使用した電気泳動装置の概略構造を示す説明図、第２図
はディスク型分子ふるい膜の構造を示す斜視図、第３図
は本発明の他の一実施例であるカートリラン型分子ふる
い膜を用いた電気泳動装置の平面図、第４図は従来の電
気泳動装置の概略構造を示す斜視図である。 １・・・電極液槽 ２・・・泳動分離用ケル３・
・カラス板 ４・・核酸断片の泳動帯５・・核酸
断片を供給するスロット ７・・・核酸断片 １０・・・直流電源２０・・
分子ふるい膜 ２０ａ 〜２０ｇ 、 ２０ａ’ 〜２０ｇ’−分子ふ
るい膜２０’、？Ｏ“・・・新しい分子ふるい膜２１・
・・電気伝導性溶液槽２２・・・電気泳動槽２３・・・
尿素補給槽 ３０・・・ディスク型分子ふるい膜 ３１・・・シャフト ３２・・・モータ５０．
５］・・・電磁ソレノイド ５２・・・交流電源 ５３・・スイッチ
使用した電気泳動装置の概略構造を示す説明図、第２図
はディスク型分子ふるい膜の構造を示す斜視図、第３図
は本発明の他の一実施例であるカートリラン型分子ふる
い膜を用いた電気泳動装置の平面図、第４図は従来の電
気泳動装置の概略構造を示す斜視図である。 １・・・電極液槽 ２・・・泳動分離用ケル３・
・カラス板 ４・・核酸断片の泳動帯５・・核酸
断片を供給するスロット ７・・・核酸断片 １０・・・直流電源２０・・
分子ふるい膜 ２０ａ 〜２０ｇ 、 ２０ａ’ 〜２０ｇ’−分子ふ
るい膜２０’、？Ｏ“・・・新しい分子ふるい膜２１・
・・電気伝導性溶液槽２２・・・電気泳動槽２３・・・
尿素補給槽 ３０・・・ディスク型分子ふるい膜 ３１・・・シャフト ３２・・・モータ５０．
５］・・・電磁ソレノイド ５２・・・交流電源 ５３・・スイッチ
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、核酸断片を、泳動分離用ゲルを用いた電気泳動槽で
、分子量順に分離して核酸塩基配列を決定する装置にお
いて、上記電気泳動槽に核酸断片を供給する核酸断片試
料供給部に、核酸断片試料中の、電気泳動解析対象外で
ある高分子量成分を分離除去するために、所定の大きさ
の分子透過性を有する分子ふるい膜を設けることを特徴
とする連続型核酸断片電気泳動装置。 ２、核酸断片試料供給部に設ける分子ふるい膜が半透膜
であることを特徴とする特許請求の範囲第１項記載の連
続型核酸断片電気泳動装置。 ３、核酸断片試料供給部に設ける分子ふるい膜が低濃度
ゲルであることを特徴とする特許請求の範囲第１項記載
の連続型核酸断片電気泳動装置。 ４、核酸断片試料供給部に、ディスク型分子ふるい膜を
、所定の中心角度で２個以上に分割して形成した分子ふ
るい膜を持つ電気泳動槽を、１槽または複数槽有し、か
つ上記ディスク型分子ふるい膜の中心部には回転機構を
設けて、上記ディスク型分子ふるい膜を分割した所定の
中心角度だけ、所定の時間毎に回転させて、分子ふるい
膜を交換可能な構造とすることを特徴とする特許請求の
範囲第１項ないし第３項いずれか１項記載の連続型核酸
断片電気泳動装置。 ５、核酸断片試料供給部に、所定形状のケースにセット
したカートリッジ型分子ふるい膜を持つ電気泳動槽を、
１槽または複数槽有し、かつ上記カートリッジ型分子ふ
るい膜の占めるスペースだけ移動させる移動機構を設け
、所定時間毎に、上記カートリッジ型分子ふるい膜を移
動させて、カートリッジ型フイルタを交換可能な構造と
することを特徴とする特許請求の範囲第１項ないし第３
項いずれか１項記載の連続型核酸断片電気泳動装置。 ６、核酸断片試料供給部と電気泳動層との間に、電気伝
導性溶液槽を設けることを特徴とする特許請求の範囲第
１項ないし第５項いずれか１項記載の連続型核酸断片電
気泳動装置。 ７、電気泳動槽に尿素補給槽を設けることを特徴とする
特許請求の範囲第１項ないし第６項いずれか１項記載の
連続型核酸断片電気泳動装置。
Priority Applications (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP59132876A JPS6113148A (ja) | 1984-06-29 | 1984-06-29 | 連続型核酸断片電気泳動装置 |
| US06/750,778 US4624769A (en) | 1984-06-29 | 1985-07-01 | Electrophoresis apparatus for nucleic acid fragments |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP59132876A JPS6113148A (ja) | 1984-06-29 | 1984-06-29 | 連続型核酸断片電気泳動装置 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6113148A true JPS6113148A (ja) | 1986-01-21 |
Family
ID=15091619
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP59132876A Pending JPS6113148A (ja) | 1984-06-29 | 1984-06-29 | 連続型核酸断片電気泳動装置 |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4624769A (ja) |
| JP (1) | JPS6113148A (ja) |
Families Citing this family (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS6242057A (ja) * | 1985-08-19 | 1987-02-24 | Fuji Photo Film Co Ltd | 核酸の塩基配列決定のための信号処理方法 |
| SU1693514A1 (ru) * | 1987-11-27 | 1991-11-23 | Институт молекулярной биологии и биохимии АН КазССР | Способ электрофоретического анализа нуклеиновых кислот и устройство дл его осуществлени |
| JP3340544B2 (ja) * | 1993-12-24 | 2002-11-05 | 株式会社日立製作所 | 分別採取装置及び分別採取方法 |
| US5560811A (en) * | 1995-03-21 | 1996-10-01 | Seurat Analytical Systems Incorporated | Capillary electrophoresis apparatus and method |
| US6146511A (en) * | 1998-01-30 | 2000-11-14 | The Perkin-Elmer Corporation | Electrophoretic nucleic acid purification method |
| KR100805449B1 (ko) * | 2006-08-18 | 2008-02-20 | 배정훈 | 비석분말을 분자체로 이용하여 아가로스겔에서 dna를정제하는 방법 |
| US20090032446A1 (en) * | 2007-08-01 | 2009-02-05 | Triwatech, L.L.C. | Mobile station and methods for diagnosing and modeling site specific effluent treatment facility requirements |
| CN107144622A (zh) | 2011-06-16 | 2017-09-08 | 不列颠哥伦比亚癌症分社 | 核酸的自动化尺寸选择 |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3720593A (en) * | 1972-01-17 | 1973-03-13 | Beckman Instruments Inc | Method for high resolution zone electrophoresis |
| US3844925A (en) * | 1973-07-02 | 1974-10-29 | Center For Blood Res | Molecular fractionation |
| US3932265A (en) * | 1974-03-28 | 1976-01-13 | Hoefer Scientific Instruments | Vertical gel slab electrophoresis apparatus |
| EP0101859B1 (de) * | 1982-07-23 | 1987-10-14 | Matthias Hediger | Einrichtung für präparative Gelelektrophorese, insbesondere zur Gemischtrennung an einer einen Gradienten enthaltenden Polyacrylamid-Gelsäure |
-
1984
- 1984-06-29 JP JP59132876A patent/JPS6113148A/ja active Pending
-
1985
- 1985-07-01 US US06/750,778 patent/US4624769A/en not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| US4624769A (en) | 1986-11-25 |
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