JPS6112701A - 水溶性架橋グリコサミノグリカン及びその製造法 - Google Patents
水溶性架橋グリコサミノグリカン及びその製造法Info
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- JPS6112701A JPS6112701A JP13288584A JP13288584A JPS6112701A JP S6112701 A JPS6112701 A JP S6112701A JP 13288584 A JP13288584 A JP 13288584A JP 13288584 A JP13288584 A JP 13288584A JP S6112701 A JPS6112701 A JP S6112701A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
［産業上の利用分野］
本発明は、架橋グリコサミノグリカン及びその製造法に
関し、更に詳しくは、グリコサミノグリカン（以下ｒＧ
ＡＧＪという）又はその塩を多官能性エポキシ化合物で
架橋させて成る架橋ＧＡＧ及びその塩並びにその製造法
に関するものである。
関し、更に詳しくは、グリコサミノグリカン（以下ｒＧ
ＡＧＪという）又はその塩を多官能性エポキシ化合物で
架橋させて成る架橋ＧＡＧ及びその塩並びにその製造法
に関するものである。
［従来技術及びその問題点］
ＧＡＧとして現在までに知られているものに、非硫酸化
ＧＡＧとしてヒアルロン酸及びコンドロイチン（以下ｒ
ＣｈＪという）があり、硫酸化ＧＡＧとしてコンドロイ
チン硫酸（以下ｒｃｈＳＪという）、ヘパリン（以下ｒ
ＨｅｐＪという）、ヘパラン硫酸（以下ｒＨ３，，＋と
いう）、ケラタン硫酸（以下ｒＫＳＪという）及びケラ
タンポリ硫酸（以下ｒＫＰｓＪという）があり、ｃｈｓ
の中にはＣｈＳ−Ａ、ＣｈＳ−Ｂ、ＣｈＳ−Ｃ，ＣｈＳ
−Ｄ、ＣｈＳ−Ｅ、ＣｈＳ−Ｆ及びＣｈＳ−Ｈ等がある
。これらのＧＡＧが各組織及び細胞の発生、成長、老化
や病的状態に関与し、各々重要な働きをしていることが
解明されてきている。一般的には、ＧＡＧの機能として
、 ■細胞外液の水や電解質のコントロール０石灰化 ■線維化 ■創傷治癒争肉芽形成 ■感染抵抗作用 ■潤滑 ■血液凝固阻止・脂血清澄作用 ■透明度の維持 等が知られている。
ＧＡＧとしてヒアルロン酸及びコンドロイチン（以下ｒ
ＣｈＪという）があり、硫酸化ＧＡＧとしてコンドロイ
チン硫酸（以下ｒｃｈＳＪという）、ヘパリン（以下ｒ
ＨｅｐＪという）、ヘパラン硫酸（以下ｒＨ３，，＋と
いう）、ケラタン硫酸（以下ｒＫＳＪという）及びケラ
タンポリ硫酸（以下ｒＫＰｓＪという）があり、ｃｈｓ
の中にはＣｈＳ−Ａ、ＣｈＳ−Ｂ、ＣｈＳ−Ｃ，ＣｈＳ
−Ｄ、ＣｈＳ−Ｅ、ＣｈＳ−Ｆ及びＣｈＳ−Ｈ等がある
。これらのＧＡＧが各組織及び細胞の発生、成長、老化
や病的状態に関与し、各々重要な働きをしていることが
解明されてきている。一般的には、ＧＡＧの機能として
、 ■細胞外液の水や電解質のコントロール０石灰化 ■線維化 ■創傷治癒争肉芽形成 ■感染抵抗作用 ■潤滑 ■血液凝固阻止・脂血清澄作用 ■透明度の維持 等が知られている。
以上のよう９ＧＡＧの有する機能を発現させる目的で外
から生体内にＧＡＧを投与する試みｉｔ成されているが
、時として、その効果が弱かったり、効果を発現しない
とか、不都合な場所で発現するということがある。それ
は、外から投与するＧＡＧが生体内に存在している時よ
りも精製段階で低分子量になったり、本来の蛋白複合体
を形成しないことにより、水に非常に溶は易く、また、
酵素的分解を受は易く、局所に滞留することができずに
機能を発現する前に消失したり、不都合な場所への拡散
が起こるためと思われる。
から生体内にＧＡＧを投与する試みｉｔ成されているが
、時として、その効果が弱かったり、効果を発現しない
とか、不都合な場所で発現するということがある。それ
は、外から投与するＧＡＧが生体内に存在している時よ
りも精製段階で低分子量になったり、本来の蛋白複合体
を形成しないことにより、水に非常に溶は易く、また、
酵素的分解を受は易く、局所に滞留することができずに
機能を発現する前に消失したり、不都合な場所への拡散
が起こるためと思われる。
このような不都合を解決する目的からＧＡＧにアミノ酸
・ペプチド・蛋白等を結合させたり、脂溶性基を結合さ
せる等の試みが成されてきたが、抗原性の問題や全く別
の性質を示すようになる等の点でいまだ実用化されてい
ない。
・ペプチド・蛋白等を結合させたり、脂溶性基を結合さ
せる等の試みが成されてきたが、抗原性の問題や全く別
の性質を示すようになる等の点でいまだ実用化されてい
ない。
一方、従来よりデキストランやアガロースを架橋剤を用
いて架橋する試みは行なわれているが（特開昭４７−１
３２１号）、ＧＡＧを架橋した事例はない。
いて架橋する試みは行なわれているが（特開昭４７−１
３２１号）、ＧＡＧを架橋した事例はない。
そこで、本発明者らは、酵素的分解に対して抵抗性を有
する架橋ＧＡＧを得ることを目的として鋭意研究を重ね
た結果、ＧＡＧ又はその塩を多官能性エポキシ化合物で
架橋することにより１本発明の目的を達成できることを
見出し、本発明を完成するに至った。
する架橋ＧＡＧを得ることを目的として鋭意研究を重ね
た結果、ＧＡＧ又はその塩を多官能性エポキシ化合物で
架橋することにより１本発明の目的を達成できることを
見出し、本発明を完成するに至った。
［発明の構成］
即ち、本発明の架橋ＧＡＧ及びその塩は、ＧＡＧ（但し
、ヒアルロン酸を除く）又はその塩を多官能性エポキシ
化合物で架橋させて成る架橋ＧＡＧであって、架橋度が
ＧＡＧの繰り返しニ糖１モル当り ０．００５以上であ
ることを特徴とするものである。
、ヒアルロン酸を除く）又はその塩を多官能性エポキシ
化合物で架橋させて成る架橋ＧＡＧであって、架橋度が
ＧＡＧの繰り返しニ糖１モル当り ０．００５以上であ
ることを特徴とするものである。
本発明に用いるＧＡＧとしては、ｃｈ、ｃｈｓ（Ａ、Ｂ
、Ｃ，Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｈ）、Ｈｅｐ、ＨＳ、ＫＳ、ＫＰＳ
などが挙げられる。但し、ヒアルロン酸については、特
願昭５９−８８４４０号として既に出願している。本発
明に用いるＧＡＧは市販品で充分である。
、Ｃ，Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｈ）、Ｈｅｐ、ＨＳ、ＫＳ、ＫＰＳ
などが挙げられる。但し、ヒアルロン酸については、特
願昭５９−８８４４０号として既に出願している。本発
明に用いるＧＡＧは市販品で充分である。
本発明に用いるＧＡＧは、それが塩形成可能である場合
には、対応する塩を用いてもよい。これらの塩としては
、ナトリウム塩、カリウム塩などのアルカリ金属塩及び
カルシウム塩、マグネシウム塩などのアルカリ土類金属
塩等が挙げられる。
には、対応する塩を用いてもよい。これらの塩としては
、ナトリウム塩、カリウム塩などのアルカリ金属塩及び
カルシウム塩、マグネシウム塩などのアルカリ土類金属
塩等が挙げられる。
本発明において、多官能性エポキシ化合物とは、エポキ
シ基を少なくとも１個有する化合物であって、その他に
、エポキシ基を含めて、ＧＡＧを架橋するに適した官能
基を１個以上有する化合物をいう。
シ基を少なくとも１個有する化合物であって、その他に
、エポキシ基を含めて、ＧＡＧを架橋するに適した官能
基を１個以上有する化合物をいう。
かかる化合物としては、例えば、ハロメチルオキシラン
化合物及びビスエポキシ化合物などが挙げられる。ハロ
メチルオキシラン化合物としては、エピクロルヒドリン
、エピブロムヒドリン、β−メチルエピクロルヒドリン
及びβ−メチルエピブロムヒドリンなどが挙げられる。
化合物及びビスエポキシ化合物などが挙げられる。ハロ
メチルオキシラン化合物としては、エピクロルヒドリン
、エピブロムヒドリン、β−メチルエピクロルヒドリン
及びβ−メチルエピブロムヒドリンなどが挙げられる。
ビスエポキシ化合物としては、１．２−ビス（２，３−
エポキシプロポキシ）エタン、１．４−ビス（２，３−
エポキシプロポキシ）ブタン、１．６−ビス（２，３−
エポキシプロポキシ）ヘキサン及びビスフェノールＡ又
はビスフェノールＦのジグリシジルエーテルなどが挙げ
られる。
エポキシプロポキシ）エタン、１．４−ビス（２，３−
エポキシプロポキシ）ブタン、１．６−ビス（２，３−
エポキシプロポキシ）ヘキサン及びビスフェノールＡ又
はビスフェノールＦのジグリシジルエーテルなどが挙げ
られる。
本発明の架橋ＧＡＧは、架橋ヒアルロン酸に関する特願
昭５ｓ−ａｅ４ａｏ号記載の方法に従っても製造するこ
とができるが、反応をより効率的に行なうには、次のよ
うな方法に従うことが好ましい。
昭５ｓ−ａｅ４ａｏ号記載の方法に従っても製造するこ
とができるが、反応をより効率的に行なうには、次のよ
うな方法に従うことが好ましい。
即ち、ＧＡＧ又はその塩のアルカリ溶液に水溶性有機溶
媒を加えて、得られる水アメ状沈殿物を分取し、該沈殿
物に多官能性エポキシ化合物を加えて、５０℃以下で反
応させると非常に効率的に反応を行なうことができる。
媒を加えて、得られる水アメ状沈殿物を分取し、該沈殿
物に多官能性エポキシ化合物を加えて、５０℃以下で反
応させると非常に効率的に反応を行なうことができる。
アルカリとしては、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム
、水酸化リチウム、水酸化カルシウム、炭酸ナトリウム
、炭酸カリウムなどのアルカリ金属及びアルカリ土類金
属の水酸化物及び炭酸塩等が挙げられ、そのアルカリ溶
液のｐＨは、８〜１４であることが好ましく、１２〜１
４であることが更に好ましい。水溶性有機溶媒としては
、メタノール、エタノール、イソプロパツール、アセト
ン、ジオキサンなどが挙げられ、これらは、単独で又は
混合物として用いられる。これらの水溶性有機溶媒を加
えることにより水アメ状沈殿物が生じる。これを分取す
るには、例えば、デカンテーションにより上清を除去す
ればよい。反応温度は、通常１０〜５０℃で、最も好ま
しいのは２０〜４０℃である。温度が高い程、短時間で
反応を終了させる必要がある。一般的には、４０℃近辺
では２時間程度が、２０℃近辺では２４〜４８時間が好
ましい。
、水酸化リチウム、水酸化カルシウム、炭酸ナトリウム
、炭酸カリウムなどのアルカリ金属及びアルカリ土類金
属の水酸化物及び炭酸塩等が挙げられ、そのアルカリ溶
液のｐＨは、８〜１４であることが好ましく、１２〜１
４であることが更に好ましい。水溶性有機溶媒としては
、メタノール、エタノール、イソプロパツール、アセト
ン、ジオキサンなどが挙げられ、これらは、単独で又は
混合物として用いられる。これらの水溶性有機溶媒を加
えることにより水アメ状沈殿物が生じる。これを分取す
るには、例えば、デカンテーションにより上清を除去す
ればよい。反応温度は、通常１０〜５０℃で、最も好ま
しいのは２０〜４０℃である。温度が高い程、短時間で
反応を終了させる必要がある。一般的には、４０℃近辺
では２時間程度が、２０℃近辺では２４〜４８時間が好
ましい。
本反応において、ＧＡＧ又はその塩と多官能性エポキシ
化合物とのモル比を変えることにより、得られる架橋Ｇ
ＡＧ又は′その塩の架橋度を調節することができる。
化合物とのモル比を変えることにより、得られる架橋Ｇ
ＡＧ又は′その塩の架橋度を調節することができる。
本発明で目的とする架橋度がＧＡＧの繰り返し二糖１モ
ル当り０．００５以上である架橋ＧＡＧを得るには、Ｇ
ＡＧの繰り返し二糖１モルに対し、多官能性エポキシ化
合物０．１モル以上用いればよい。分子量５万前後のＧ
ＡＧにおいては、ＧＡＧの繰り返し二糖１モルに対する
多官能性エポキシ化合物の使用モル数を０．１〜０．５
モルにすれば、水溶性で曳糸性を有する架橋ＧＡＧ（以
下ｒｓ−架橋ＧＡＧＪという）を得ることができ、該使
用モル数を０．５モル以上にすれば、水不溶性でゲル状
の架橋ＧＡＧ （以下ｒｉｓ−架橋ＧＡＧＪ という）
を得ることができる。
ル当り０．００５以上である架橋ＧＡＧを得るには、Ｇ
ＡＧの繰り返し二糖１モルに対し、多官能性エポキシ化
合物０．１モル以上用いればよい。分子量５万前後のＧ
ＡＧにおいては、ＧＡＧの繰り返し二糖１モルに対する
多官能性エポキシ化合物の使用モル数を０．１〜０．５
モルにすれば、水溶性で曳糸性を有する架橋ＧＡＧ（以
下ｒｓ−架橋ＧＡＧＪという）を得ることができ、該使
用モル数を０．５モル以上にすれば、水不溶性でゲル状
の架橋ＧＡＧ （以下ｒｉｓ−架橋ＧＡＧＪ という）
を得ることができる。
ＧＡＧを含む水アメ状沈殿物を分取して行なう本発明の
架橋ＧＡＧの製造法は、架橋剤として用いる多官能性エ
ポキシ化合物が効率よく反応に用いられるので、用いる
架橋剤が非常に少量でよいという利点を有する。木製造
法は、特願昭５９−８８４４０号記載の架橋ヒアルロン
酸を製造するにも、適用することができる。
架橋ＧＡＧの製造法は、架橋剤として用いる多官能性エ
ポキシ化合物が効率よく反応に用いられるので、用いる
架橋剤が非常に少量でよいという利点を有する。木製造
法は、特願昭５９−８８４４０号記載の架橋ヒアルロン
酸を製造するにも、適用することができる。
［発明の効果］
本発明の架橋ＧＡＧ及びその塩は、グリコシダーゼに対
して抵抗性を示すと共に、ＧＡＧの有する種々の特性も
維持しておいり、幅広い用途を有する。
して抵抗性を示すと共に、ＧＡＧの有する種々の特性も
維持しておいり、幅広い用途を有する。
Ｓ−架橋ＧＡＧは、優れた徐放効果を有しており、徐放
性薬剤の製造に有用である。
性薬剤の製造に有用である。
ｉｓ−架橋ＧＡＧは、コラーゲン及びアンチトロンビン
■（以下ｒＡＴＩＩＩＪという）に親和性を示し、これ
らの７フイニテイークロマトグラフイー用の担体として
有用である。
■（以下ｒＡＴＩＩＩＪという）に親和性を示し、これ
らの７フイニテイークロマトグラフイー用の担体として
有用である。
［発明の実施例］
以下、実施例により本発明を更に詳細に説明するが、こ
れらの実施例は、本発明の範囲を何ら制限するものでは
ない。
れらの実施例は、本発明の範囲を何ら制限するものでは
ない。
実施例１
（１）ｓ −、ＧＡＧ ＣｈＳ−Ｃ（７）ＣｈＳ−Ｃナ
トリウム塩（分子量５３０００） ３．１ｇを０．７５
Ｎ水酸化ナトリウム水溶液に１２．５％になるように溶
かし、攪拌下、エタノールｌ容量を加え、生じたアメ状
沈殿物を分取した。このアメ状沈殿物にエピクロルヒド
リン０．１８＋ＪＬを加えて充分に練り合わせ、２０℃
で２４時間放置した。反応液に水 ３０ｍＭを加えて溶
解し、酢酸でｐ）Ｉ ８．０として、エタノール沈殿を
行なった。再度、水に溶かし、−エタノール沈殿を行な
い減圧乾燥した。
トリウム塩（分子量５３０００） ３．１ｇを０．７５
Ｎ水酸化ナトリウム水溶液に１２．５％になるように溶
かし、攪拌下、エタノールｌ容量を加え、生じたアメ状
沈殿物を分取した。このアメ状沈殿物にエピクロルヒド
リン０．１８＋ＪＬを加えて充分に練り合わせ、２０℃
で２４時間放置した。反応液に水 ３０ｍＭを加えて溶
解し、酢酸でｐ）Ｉ ８．０として、エタノール沈殿を
行なった。再度、水に溶かし、−エタノール沈殿を行な
い減圧乾燥した。
収 量 ２．
９ｇ 。
９ｇ 。
Ｎａ： ９．２５％
（１）で合成されたＳ−架橋ＧＡＧ（ＣｈＳ−Ｃナトリ
ウム塩）と合成に使用したｃｈｓ−Ｃナトリウム塩につ
いてガラスピーズＣＰ Ｇ ３０００（ＥＬＩＪＴＲＱ
ＮＵＣＬＥＯＮＩＣ９，ＩＮＣ，社）のカラム（ｅｘ
８５０ｍｍ）を用いて、ゲルクロマトグラフィーを行な
った。展開溶媒は１．５Ｍ塩化ナトリウム水溶液を水酸
化ナトリウムでｐＨ８，５に調整して使用し、０．５２
ｍｌずつ溶出画分に分け、カルバゾール−硫酸法でウ
ロン酸を定量した。結果を図１に示す。
ウム塩）と合成に使用したｃｈｓ−Ｃナトリウム塩につ
いてガラスピーズＣＰ Ｇ ３０００（ＥＬＩＪＴＲＱ
ＮＵＣＬＥＯＮＩＣ９，ＩＮＣ，社）のカラム（ｅｘ
８５０ｍｍ）を用いて、ゲルクロマトグラフィーを行な
った。展開溶媒は１．５Ｍ塩化ナトリウム水溶液を水酸
化ナトリウムでｐＨ８，５に調整して使用し、０．５２
ｍｌずつ溶出画分に分け、カルバゾール−硫酸法でウ
ロン酸を定量した。結果を図１に示す。
図１において、Ｏ印及び・印はそれぞれＳ−架橋ＧＡＧ
（ｃｈＳ−Ｃ）及びｃｈｓ−ｃの各フラクションのカ
ルバゾール硫酸法における吸光度を表わし、■。はゲル
粒子外部容積を表わす。図１から、本発明のＳ−架橋Ｇ
ＡＧは原料ＧＡＧに比し、非常に高分子になっているこ
とがわかる。
（ｃｈＳ−Ｃ）及びｃｈｓ−ｃの各フラクションのカ
ルバゾール硫酸法における吸光度を表わし、■。はゲル
粒子外部容積を表わす。図１から、本発明のＳ−架橋Ｇ
ＡＧは原料ＧＡＧに比し、非常に高分子になっているこ
とがわかる。
（３）Ｓ−ＧＡＧ ＣｈＳ−Ｃの
（１）で合成されたＳ−架橋ＧＡＧ（ＣｈＳ−Ｃ）と原
料ｃｈｓ−ｃの１％生理食塩水溶液について、透析膜Ｖ
ｉＳｋｉｎｇ ｔｕｂｅ（Ｖｉｓｋｉｎｇ Ｃｏｍｐａ
ｎｙ製１８／３２）ト１％パラニトロフェノール生理食
塩水溶液（以下ｒＰＮＰ溶液」という）を用いて薬物に
対する徐放効果を検討した。
料ｃｈｓ−ｃの１％生理食塩水溶液について、透析膜Ｖ
ｉＳｋｉｎｇ ｔｕｂｅ（Ｖｉｓｋｉｎｇ Ｃｏｍｐａ
ｎｙ製１８／３２）ト１％パラニトロフェノール生理食
塩水溶液（以下ｒＰＮＰ溶液」という）を用いて薬物に
対する徐放効果を検討した。
透析膜に、それぞれ、（生理食塩水５ｒｓｌ ＋ Ｐ
ＮＰ溶液１＋ＪＬ ）、（１％Ｓ−架橋ＧＡＧ（ＣｈＳ
−Ｃ）溶液５Ｗ文十ＰＮＰ溶液１ｍ又）、（１％ｃｈｓ
−Ｃ溶液５ｍＪＬ ＋ Ｐ Ｎ Ｐ溶液１ｍ立）を入れ
、空気を除いて密封し、透析外液（２００＋ｗ文の生理
食塩水）に透析されてくるＰＮＰの回収率を３１５ｎ＋
ｗにおける吸光度の測定により算出した。
ＮＰ溶液１＋ＪＬ ）、（１％Ｓ−架橋ＧＡＧ（ＣｈＳ
−Ｃ）溶液５Ｗ文十ＰＮＰ溶液１ｍ又）、（１％ｃｈｓ
−Ｃ溶液５ｍＪＬ ＋ Ｐ Ｎ Ｐ溶液１ｍ立）を入れ
、空気を除いて密封し、透析外液（２００＋ｗ文の生理
食塩水）に透析されてくるＰＮＰの回収率を３１５ｎ＋
ｗにおける吸光度の測定により算出した。
結果を図２に示す。図２において、Φ印、Ｏ印及び［株
］印は、それぞれ、生理食塩水、ｃｈｓ−ｃ及びＳ−架
橋ｃｈｓ−ｃのＰＮＰの透析に与える影響を表わす。
］印は、それぞれ、生理食塩水、ｃｈｓ−ｃ及びＳ−架
橋ｃｈｓ−ｃのＰＮＰの透析に与える影響を表わす。
この結果から、本発明のＳ−架橋ＧＡＧが薬物の徐故に
効果的であることがわかる。
効果的であることがわかる。
ｃｈｓ−Ｃナトリウム塩（分子量５３０００ ’）を原
料として実施例１（Ｉ）に準じて次に示す２種のＳ −
架橋ｃｈｓ−ｃを合成した。
料として実施例１（Ｉ）に準じて次に示す２種のＳ −
架橋ｃｈｓ−ｃを合成した。
（Ａ）
ＣＢ）
実施例１（１）並びにこれら２種のＳ−架橋ｃｈＳ−Ｃ
及び合成に使用したｃｈｓ−Ｃナトリウム塩をそれぞれ
０．４Ｍ ）リス塩酸緩衝液（ｐＨａ、ｏ）に１％の濃
度に溶解し、粘度を測定（２０℃、すり速度１．０ｓｅ
ｃ’ ） したとこる次のとおりであった。実施例１（
１）ｃｒ＋ｓ−架橋ｃｈｓ−ｃをＳ−架橋ｃｈｓ−Ｃ（
Ｃ）として表わす。
及び合成に使用したｃｈｓ−Ｃナトリウム塩をそれぞれ
０．４Ｍ ）リス塩酸緩衝液（ｐＨａ、ｏ）に１％の濃
度に溶解し、粘度を測定（２０℃、すり速度１．０ｓｅ
ｃ’ ） したとこる次のとおりであった。実施例１（
１）ｃｒ＋ｓ−架橋ｃｈｓ−ｃをＳ−架橋ｃｈｓ−Ｃ（
Ｃ）として表わす。
Ｓ−架橋Ｃｈ Ｓ −Ｃ（Ａ） ３１００セ７チボア
ーズＳ−架橋ｃ ｈ Ｓ −Ｃ（Ｂ） １４５００セ
ンチポアーズＳ−架橋Ｃｈ Ｓ −Ｃ（Ｇ） ４４０
００センチボアーズｃｈｓ−ｃすＩ・リウム塩 １５０
０センチポアーズこれらの溶液に０．０５重量％になる
ようにコンドロイチナーゼＡＢＣを加え、３７℃で反応
させ、５．１Ｏ１２０，３０，８０，１２０分後に粘度
を測定し、反応前の粘度に対する割合を算出した。
ーズＳ−架橋ｃ ｈ Ｓ −Ｃ（Ｂ） １４５００セ
ンチポアーズＳ−架橋Ｃｈ Ｓ −Ｃ（Ｇ） ４４０
００センチボアーズｃｈｓ−ｃすＩ・リウム塩 １５０
０センチポアーズこれらの溶液に０．０５重量％になる
ようにコンドロイチナーゼＡＢＣを加え、３７℃で反応
させ、５．１Ｏ１２０，３０，８０，１２０分後に粘度
を測定し、反応前の粘度に対する割合を算出した。
結果を図３に示す。図３において０印、Δ印、０印及び
φ印は、それぞれ、Ｓ−架橋ｃｈｓ−ｃ（Ａ＞ 、 （
Ｂ） 、 （Ｃ：）及びＣｈＳ−Ｃナトリウム塩の０．
４Ｍ ｌ・リス塩５（ｐＨ８，０）溶液の各反応時間に
おける反応前の粘度に対する割合を表わす。
φ印は、それぞれ、Ｓ−架橋ｃｈｓ−ｃ（Ａ＞ 、 （
Ｂ） 、 （Ｃ：）及びＣｈＳ−Ｃナトリウム塩の０．
４Ｍ ｌ・リス塩５（ｐＨ８，０）溶液の各反応時間に
おける反応前の粘度に対する割合を表わす。
図３から、本発明のｓ−架橋ｃｈｓ−ｃは、Ｃｈｓ−ｃ
に比し、コンドロイチナーゼＡＢＣに対する抵抗性が高
く、その程度は、架橋度が高い程顕著であることがわか
る。同様に他のＳ−架橋ＧＡＧもグリコシダーゼに対し
て抵抗性を有することは容易に類推される。
に比し、コンドロイチナーゼＡＢＣに対する抵抗性が高
く、その程度は、架橋度が高い程顕著であることがわか
る。同様に他のＳ−架橋ＧＡＧもグリコシダーゼに対し
て抵抗性を有することは容易に類推される。
実施例２ ｓ −ＧＡＧ ＣｈＳ−Ｃ’ｃｈｓ−ｃ
ナトリウム塩（分子量５４０００）ｊ、２５ｇを０．７
５Ｎ水酸化ナトリウム水溶液に１２．５％になるように
溶かし撹拌下、エタノールｌ容量を加え。
ナトリウム塩（分子量５４０００）ｊ、２５ｇを０．７
５Ｎ水酸化ナトリウム水溶液に１２．５％になるように
溶かし撹拌下、エタノールｌ容量を加え。
生じたアメ状沈殿物を分取した。このアメ状沈殿物にエ
ピクロルヒドリン０．５９ｍＪＬを加えて充分に練り合
わせ、２０°Ｃで２４時間放置した。反応液に水１５＋
＋ｆＬを加えて溶解し、酢酸でｐＨ［１，０として、エ
タノール沈殿を行なった。再度、水に溶かし、エタノー
ル沈殿を行ない減圧乾燥した。
ピクロルヒドリン０．５９ｍＪＬを加えて充分に練り合
わせ、２０°Ｃで２４時間放置した。反応液に水１５＋
＋ｆＬを加えて溶解し、酢酸でｐＨ［１，０として、エ
タノール沈殿を行なった。再度、水に溶かし、エタノー
ル沈殿を行ない減圧乾燥した。
収 量 １
．２ｇＮａ： ９．２１＄ 実施例３ ｓ −ＧＡＧ Ｈｅ ｔ７）Ｈｅｐ
ナトリウム塩（分子量１５０００）０．４ｇを１．３Ｎ
水酸化ナトリウム水溶液１腸文に溶解し、エタノール１
．５ｍＭを加え、生じたアメ状沈殿物を分取した。この
アメ状沈殿物にエピクロルヒドリン０．０２８＋＋ｊＬ
を加えて充分に練り合わせ、２０℃で２４時間反応させ
た。反応物に水５１１文を加えて溶解し、酢酸で中和後
、エタノールを加えて得た白色粉末を減圧乾燥した。
．２ｇＮａ： ９．２１＄ 実施例３ ｓ −ＧＡＧ Ｈｅ ｔ７）Ｈｅｐ
ナトリウム塩（分子量１５０００）０．４ｇを１．３Ｎ
水酸化ナトリウム水溶液１腸文に溶解し、エタノール１
．５ｍＭを加え、生じたアメ状沈殿物を分取した。この
アメ状沈殿物にエピクロルヒドリン０．０２８＋＋ｊＬ
を加えて充分に練り合わせ、２０℃で２４時間反応させ
た。反応物に水５１１文を加えて溶解し、酢酸で中和後
、エタノールを加えて得た白色粉末を減圧乾燥した。
収 量 ０
．３７ｇＮａ： １３．２５％ 実施例４ （１）ｉ ｓ −ＧＡＧ ＣｈＳ−Ｃｃｈｓ−ｃナト
リウム塩（分子量５３０００）８．２５ ｇを０．７５
Ｎ水酸化ナトリウム水溶液５０鵬文に溶かし、エタノー
ル１容量を加え、アメ状沈殿物を得た。このアメ状沈殿
物にエピクロルヒドリン０．４１１１ｊＬを加え、充分
に練り合わせ、２０℃に放置した。３６時間後、水５０
ｍ１を加え、酢酸で中和後、３０００ｒｐｍで遠心した
。白色沈殿物を５０層見の２．０Ｍ塩化ナトリウム水溶
液で２回、更に５０１１文の水で３回洗浄し、エタノー
ルを加えて脱水後、減圧乾燥した。
．３７ｇＮａ： １３．２５％ 実施例４ （１）ｉ ｓ −ＧＡＧ ＣｈＳ−Ｃｃｈｓ−ｃナト
リウム塩（分子量５３０００）８．２５ ｇを０．７５
Ｎ水酸化ナトリウム水溶液５０鵬文に溶かし、エタノー
ル１容量を加え、アメ状沈殿物を得た。このアメ状沈殿
物にエピクロルヒドリン０．４１１１ｊＬを加え、充分
に練り合わせ、２０℃に放置した。３６時間後、水５０
ｍ１を加え、酢酸で中和後、３０００ｒｐｍで遠心した
。白色沈殿物を５０層見の２．０Ｍ塩化ナトリウム水溶
液で２回、更に５０１１文の水で３回洗浄し、エタノー
ルを加えて脱水後、減圧乾燥した。
収 量 ６
．２ｇＮａ： ９．００％ （２）ｉ ｓ −ＧＡＧ （ＣｈＳ−ＡのＣｈＳ−Ａナ
トリウム塩（分子量３００００）５．０ｇを０．４Ｎ水
酸化ナトリウム水溶液に２０％の濃度に溶解した。エタ
ノール２５ｍＭを加えて生じたアメ状沈殿物を分取した
。この沈殿物にエピクロルヒドリン０．７５＋＋＋ＪＬ
を加えて充分に練り合わせ、２０℃で２４時間放置した
。反応物に水５０＋ｓｕを加え酢酸で中和後、 ３００
０ｒｐｍで遠心した。得られた白色沈殿物を５０＋ｏ９
．の２．０Ｍ塩化ナトリウム水溶液で２回、更に５０ｍ
ｌの水で３回洗浄し、エタノールを加えて脱水後、減
圧乾燥した。
．２ｇＮａ： ９．００％ （２）ｉ ｓ −ＧＡＧ （ＣｈＳ−ＡのＣｈＳ−Ａナ
トリウム塩（分子量３００００）５．０ｇを０．４Ｎ水
酸化ナトリウム水溶液に２０％の濃度に溶解した。エタ
ノール２５ｍＭを加えて生じたアメ状沈殿物を分取した
。この沈殿物にエピクロルヒドリン０．７５＋＋＋ＪＬ
を加えて充分に練り合わせ、２０℃で２４時間放置した
。反応物に水５０＋ｓｕを加え酢酸で中和後、 ３００
０ｒｐｍで遠心した。得られた白色沈殿物を５０＋ｏ９
．の２．０Ｍ塩化ナトリウム水溶液で２回、更に５０ｍ
ｌの水で３回洗浄し、エタノールを加えて脱水後、減
圧乾燥した。
収 量 ５
．０ｇＮａ： ９．２２％ （３）ｉｓ−ＧＡＧ Ｈｅの Ｈｅｐナトリウム塩（分子量＋５０００）４．Ｏｇｅ
１．３Ｎ水酸化ナトリウム水溶液 １０＋ＪＬに溶かし
、エタノール１５ｍｊＬを加えてアメ状沈殿物を得た。
．０ｇＮａ： ９．２２％ （３）ｉｓ−ＧＡＧ Ｈｅの Ｈｅｐナトリウム塩（分子量＋５０００）４．Ｏｇｅ
１．３Ｎ水酸化ナトリウム水溶液 １０＋ＪＬに溶かし
、エタノール１５ｍｊＬを加えてアメ状沈殿物を得た。
このアメ状沈殿物にエピクロルヒドリン０．４ｍＭを加
え、充分に練り合わせ、２０℃で２４時間反応させた。
え、充分に練り合わせ、２０℃で２４時間反応させた。
反応物に水５０ｍ文を加え、酢酸で中和後、３０００ｒ
ｐｍ＋で遠心分離した。沈殿物を ５０＋！文の２Ｍ塩
化すトリウム水溶液で２回、更に５０＋Ｊ１の水で３回
洗浄し、エタノールを加えて脱水後、減圧乾燥して白色
粉末を得た。
ｐｍ＋で遠心分離した。沈殿物を ５０＋！文の２Ｍ塩
化すトリウム水溶液で２回、更に５０＋Ｊ１の水で３回
洗浄し、エタノールを加えて脱水後、減圧乾燥して白色
粉末を得た。
収 量 ３
．８７ｇＮａ： １３．２１＄ （４）ｉｓ −ＧＡＧ ＣｈＳ−ＢＣｈＳ−Ｂ（デ
ルマタン硫酸ともいう）ナトリウム塩（分子量１９００
０）０．２２５ｇを０．３８Ｎ水酸化ナトリウム水溶液
５ｍｌに溶解し、エタノール１０＋Ｊｊを加えてアメ状
沈殿物を得た。このアメ状沈殿物にエピクロルヒドリン
０．１８ｍＪ１を加え、充分に練り合わせ、２０℃で２
４時間反応させた。反応物に水１０層文を加え、酢酸で
中和後、 ３０００ｒｐｍで遠心分離した。沈殿物を
１０ｔｓｌの２Ｍ塩化ナトリウム水溶液で２回、更に１
０ｍ１の水で３回洗浄し、エタノールを加えて脱水後、
減圧乾燥して白色粉末を得た。
．８７ｇＮａ： １３．２１＄ （４）ｉｓ −ＧＡＧ ＣｈＳ−ＢＣｈＳ−Ｂ（デ
ルマタン硫酸ともいう）ナトリウム塩（分子量１９００
０）０．２２５ｇを０．３８Ｎ水酸化ナトリウム水溶液
５ｍｌに溶解し、エタノール１０＋Ｊｊを加えてアメ状
沈殿物を得た。このアメ状沈殿物にエピクロルヒドリン
０．１８ｍＪ１を加え、充分に練り合わせ、２０℃で２
４時間反応させた。反応物に水１０層文を加え、酢酸で
中和後、 ３０００ｒｐｍで遠心分離した。沈殿物を
１０ｔｓｌの２Ｍ塩化ナトリウム水溶液で２回、更に１
０ｍ１の水で３回洗浄し、エタノールを加えて脱水後、
減圧乾燥して白色粉末を得た。
収 量 ０
，２ｇＣｈＳ−Ｂの繰り返し 二糖１モル当りの架橋度 ０°２８ＣｈＳ−Ｂ
（デルマタン硫酸ともいう）ナトリ、ラム塩（分子量１
１１０００）０．２２５ｇを０．３１１Ｎ水酸化ナトリ
ウム水溶液５ｔａｌに溶解し、エタノール１ｈＩＬを加
えてアメ状沈殿物を得た。このアメ状沈殿物にエピブロ
ムヒドリン０．２ｒｔｒｌを加え、充分に練り合わせ、
２０℃で２４時間反応させた。反応物に水１ｈｓＬを加
え、酢酸で中和後、３０００ｒｐｍで遠心分離した。沈
殿物を １ｈＪ１の２Ｍ塩化ナトリウム水溶液で２回、
更に１０＋ＪＬの水で３回洗浄し、エタノールを加えて
脱水後、減圧乾燥して白色粉末を得た。
，２ｇＣｈＳ−Ｂの繰り返し 二糖１モル当りの架橋度 ０°２８ＣｈＳ−Ｂ
（デルマタン硫酸ともいう）ナトリ、ラム塩（分子量１
１１０００）０．２２５ｇを０．３１１Ｎ水酸化ナトリ
ウム水溶液５ｔａｌに溶解し、エタノール１ｈＩＬを加
えてアメ状沈殿物を得た。このアメ状沈殿物にエピブロ
ムヒドリン０．２ｒｔｒｌを加え、充分に練り合わせ、
２０℃で２４時間反応させた。反応物に水１ｈｓＬを加
え、酢酸で中和後、３０００ｒｐｍで遠心分離した。沈
殿物を １ｈＪ１の２Ｍ塩化ナトリウム水溶液で２回、
更に１０＋ＪＬの水で３回洗浄し、エタノールを加えて
脱水後、減圧乾燥して白色粉末を得た。
収 量 ０
．２１ｇＫ Ｐ Ｓナトリウム塩（分子量９５００）０
．２７ｇを０．４Ｎ水酸化ナトリウム水溶液５！ＩＡ、
に溶かし、エタノール１０ｍ１を加えてアメ状沈殿物を
得た。このアメ状沈殿物にエピクロルヒドリン０．０４
ｍＭを加え、充分に練り合わせ、２０℃で２４時間反応
させた。反応物に水２０１ｉを加え、酢酸で中和後、３
０００ｒｐｍで遠心分離した。沈殿物を２０ｓ＋１の２
Ｍ塩化ナトリウム水溶液で２回、更に５０＋ｊＬの水で
３回洗浄し、エタノールを加えて脱水後、減圧乾燥して
白色粉末を得た。
．２１ｇＫ Ｐ Ｓナトリウム塩（分子量９５００）０
．２７ｇを０．４Ｎ水酸化ナトリウム水溶液５！ＩＡ、
に溶かし、エタノール１０ｍ１を加えてアメ状沈殿物を
得た。このアメ状沈殿物にエピクロルヒドリン０．０４
ｍＭを加え、充分に練り合わせ、２０℃で２４時間反応
させた。反応物に水２０１ｉを加え、酢酸で中和後、３
０００ｒｐｍで遠心分離した。沈殿物を２０ｓ＋１の２
Ｍ塩化ナトリウム水溶液で２回、更に５０＋ｊＬの水で
３回洗浄し、エタノールを加えて脱水後、減圧乾燥して
白色粉末を得た。
収 量 ０
．２５゜（１）、（２）、（３１（４） テ合成したｉ
ｓ−架橋Ｇ Ａ、 Ｇのアテロコラーゲンに対する親和
性について検討した。アテロコラーゲンは株式会社 高
研より入手し、その１．１ｇを１．８７ｍＭ酢酸に溶か
し、ＧＣ９０のフィルターを通過させて使用した（５Ｂ
／ｍｕ ）。
．２５゜（１）、（２）、（３１（４） テ合成したｉ
ｓ−架橋Ｇ Ａ、 Ｇのアテロコラーゲンに対する親和
性について検討した。アテロコラーゲンは株式会社 高
研より入手し、その１．１ｇを１．８７ｍＭ酢酸に溶か
し、ＧＣ９０のフィルターを通過させて使用した（５Ｂ
／ｍｕ ）。
１５ ｍ又の試験管にｉｓ−架橋ＧＡＧを約５ｍｇ取り
、１．８７ｍＭ酢酸１ｈＪＬに懸濁させた。これにアテ
ロコラーゲン溶液０．５ｍｌを加え、充分に混合（３０
分）した。その後、 ３０００ｒｐｍで遠心分離し、沈
殿物を１．８７ｍＭ酢酸１０ｍＭで３回洗浄した（１．
８７ｍＭ酢酸洗液を集めコラーゲンの定量を行なった）
。結合コラーゲンは２Ｍグアニジン塩酸（ｐＨ７，０）
１０履文を加え、４０分混合した後、 ３０００ｒｐ
ｍで遠心して溶出した。更に、同緩衝液１ｈｌで２回溶
出させ、全グアニジン塩酸液を集めコラーゲンの定量を
行なった。結果を表１に示す。この結果から、ＧＡＧが
架橋されてもＧＡＧの有する性質は失われていないこと
がわかる。
、１．８７ｍＭ酢酸１ｈＪＬに懸濁させた。これにアテ
ロコラーゲン溶液０．５ｍｌを加え、充分に混合（３０
分）した。その後、 ３０００ｒｐｍで遠心分離し、沈
殿物を１．８７ｍＭ酢酸１０ｍＭで３回洗浄した（１．
８７ｍＭ酢酸洗液を集めコラーゲンの定量を行なった）
。結合コラーゲンは２Ｍグアニジン塩酸（ｐＨ７，０）
１０履文を加え、４０分混合した後、 ３０００ｒｐ
ｍで遠心して溶出した。更に、同緩衝液１ｈｌで２回溶
出させ、全グアニジン塩酸液を集めコラーゲンの定量を
行なった。結果を表１に示す。この結果から、ＧＡＧが
架橋されてもＧＡＧの有する性質は失われていないこと
がわかる。
表１
（添加コラーゲン量２．５ｓＩｇ）
（８）ｉｓ−ＧＡＧ ＡＴｍに る（１）、（３）
で合成したｉｓ−架橋ＧＡＧのＡＴｍに対する親和性に
ついて検討した。ＡＴｍはウサギ血漿由来のものを用い
、０．０５Ｍ塩化ナトリウムを含む５０ＩＩＭトリス塩
酸緩衝液（ｐＨ７，４） Ｃ以下「Ａｌ１１衝液」とい
う）に１．８７ｔＨ／ｍ５Ｌ （１）濃度に溶解した。
で合成したｉｓ−架橋ＧＡＧのＡＴｍに対する親和性に
ついて検討した。ＡＴｍはウサギ血漿由来のものを用い
、０．０５Ｍ塩化ナトリウムを含む５０ＩＩＭトリス塩
酸緩衝液（ｐＨ７，４） Ｃ以下「Ａｌ１１衝液」とい
う）に１．８７ｔＨ／ｍ５Ｌ （１）濃度に溶解した。
このＡＴｍ溶液の２８０ｎｍでの光学密度（０，０，）
は１．０であった。他の緩衝液として、０．５Ｍ塩化ナ
トリウムを含む５０１１Ｍトリス塩酸緩衝液ｐＨ７，４
（以下「Ｂ緩衝液」という）及び１．５Ｍ塩化ナトリウ
ムを含む５０ＩＩＩＭトリス塩酸緩衝液ｐＨ７，４（以
下「Ｃ緩衝液」という）を用いた。
は１．０であった。他の緩衝液として、０．５Ｍ塩化ナ
トリウムを含む５０１１Ｍトリス塩酸緩衝液ｐＨ７，４
（以下「Ｂ緩衝液」という）及び１．５Ｍ塩化ナトリウ
ムを含む５０ＩＩＩＭトリス塩酸緩衝液ｐＨ７，４（以
下「Ｃ緩衝液」という）を用いた。
ｉｓ−架橋ＧＡＧをＡ緩衝液に懸濁させ、その０．９ｍ
ＪＩＬをカラムに充填し、ＡＴｍ溶液を流した。
ＪＩＬをカラムに充填し、ＡＴｍ溶液を流した。
溶出液の０Ｄ２８０がｉ、ｏになった時点でＡＴｍ溶液
を停止し、Ａ＃衝液で充分に溶出洗浄した。続いてＢ緩
衝液、Ｃ緩衝液の順に段階的に溶出し、溶出液のＯＤ讃
を測定した。ｉｓ−架橋ＧＡＧ（Ｈｅｐ）の結果を図４
にす。図において、各溶出画分は２．３＋９．である、
これから、このｉｓ−架橋ＧＡＧＩ■ｇ当り０．８８厘
ｇのＡＴｍが吸着されたことがわかる。また、ｉｓ−架
橋ＧＡＧ（ＣｈＳ−Ｃ）には、ＡＴｍは吸着されなかっ
た。
を停止し、Ａ＃衝液で充分に溶出洗浄した。続いてＢ緩
衝液、Ｃ緩衝液の順に段階的に溶出し、溶出液のＯＤ讃
を測定した。ｉｓ−架橋ＧＡＧ（Ｈｅｐ）の結果を図４
にす。図において、各溶出画分は２．３＋９．である、
これから、このｉｓ−架橋ＧＡＧＩ■ｇ当り０．８８厘
ｇのＡＴｍが吸着されたことがわかる。また、ｉｓ−架
橋ＧＡＧ（ＣｈＳ−Ｃ）には、ＡＴｍは吸着されなかっ
た。
このように、架橋を行なってもＧＡＧの有する本来の性
質は全く失われていなかった。
質は全く失われていなかった。
実施例５ ＧＡＧ
ｃｈｓ−ｃナトリウム塩（分子量５３０００） １．２
５ ｇをＯ，？５Ｎ水酸化ナトリウム水溶液に溶解し、
エタノールを等容量加えた。上清を廃棄し生じたアメ状
沈殿物に１４０−標識化合物である［２ １４Ｃ］エピ
クロルヒドリン（アマジャム・ジャパン社から入手）を
加え、充分に練り合わせ、２０℃で放置した。４８時間
後、反応液に水２０＋ＪＬを加えて溶解し、酢酸でｐ）
１８．０とした後、３倍量のエタノールで沈殿させた。
５ ｇをＯ，？５Ｎ水酸化ナトリウム水溶液に溶解し、
エタノールを等容量加えた。上清を廃棄し生じたアメ状
沈殿物に１４０−標識化合物である［２ １４Ｃ］エピ
クロルヒドリン（アマジャム・ジャパン社から入手）を
加え、充分に練り合わせ、２０℃で放置した。４８時間
後、反応液に水２０＋ＪＬを加えて溶解し、酢酸でｐ）
１８．０とした後、３倍量のエタノールで沈殿させた。
次いで、水２０ｔｓｌに沈殿物を溶解し、３倍量のエタ
ノールを加えて白色粉末を得た。エタノールで洗浄後、
減圧乾燥した。水不溶性のｉｓ−架橋ＧＡＧは、反応液
に水２０層文を加えて遠心し、ｏ、５ｇ４化ナトリウム
水溶液、水で充分に洗浄した後、エタノールを加えて脱
水し、乾燥した。上記調製試料５曹ｇに１．ＯＮ水酸化
ナトリウム水溶液０．５■旦を加え、６０℃で１時間加
温し、粘度を低下せしめ、これに１．ＯＮ塩酸０．５ｍ
ｌヲ加えて中和した。この溶液について、液体シンチレ
ーションカウンターで放射活性を測定し、架橋度を算出
した。結果を表２−２に示す。
ノールを加えて白色粉末を得た。エタノールで洗浄後、
減圧乾燥した。水不溶性のｉｓ−架橋ＧＡＧは、反応液
に水２０層文を加えて遠心し、ｏ、５ｇ４化ナトリウム
水溶液、水で充分に洗浄した後、エタノールを加えて脱
水し、乾燥した。上記調製試料５曹ｇに１．ＯＮ水酸化
ナトリウム水溶液０．５■旦を加え、６０℃で１時間加
温し、粘度を低下せしめ、これに１．ＯＮ塩酸０．５ｍ
ｌヲ加えて中和した。この溶液について、液体シンチレ
ーションカウンターで放射活性を測定し、架橋度を算出
した。結果を表２−２に示す。
表２−２から、Ｓ−架橋ＧＡＧにおいては、架橋度と粘
度とが比例関係にあることがわかる。
度とが比例関係にあることがわかる。
表２−１
原料１．２５ｇ（２，５Ｉｌ＃ｌ） 、 水酸化ナト
リウム０．刑１総量７．５ｍ）ＥｔＯＨ１０１見、 反
応 ２０℃、４８時間表２−２ ［２１４ｃ］エピクロルヒドリンの比活性 ４．３ルＣ
ｉ／■０１試料２．５．はｃＩＮＳの繰り返し二糖換算
で５ｇａｏ１
リウム０．刑１総量７．５ｍ）ＥｔＯＨ１０１見、 反
応 ２０℃、４８時間表２−２ ［２１４ｃ］エピクロルヒドリンの比活性 ４．３ルＣ
ｉ／■０１試料２．５．はｃＩＮＳの繰り返し二糖換算
で５ｇａｏ１
図１は、Ｓ−架橋ＧＡＧ （ＣｈＳ−Ｃ）とｃｈＳ−Ｃ
とのゲルクロマトグラムを示す図である。 図２は、Ｓ−架橋ｃｈｓ−ｃ及びｃｈｓ−ｃのＰＮＰの
透析に与える影響を示す図である。図３は、Ｓ−架橋ｃ
ｈｓ−ｃ及びｃｈｓ−ｃのコンドロイチナーゼに対する
抵抗性を示す図である。図４は、ｉｓ−架橋ＧＡＧのＡ
Ｔｍに対する親和性についての検討結果を示す図である
。 手続補正書 昭和６０年１月１０日 特許庁長官 志 賀 学 殿 １、本件の表示 昭和５９年特許願第１３２８８５号 ２、発明の名称 架橋ゲルコサミノグリカン及びその製造法３、補正をす
る者 事件との関係 特許出願人 名称 生化学工業株式会社 ５、補正命令の日付 自発 ６、補正の対象 明細書の発明の詳細な説明の欄を「・
・・ｍ持しており、」と補正する。 （２）ｔＴＪｉ細書第ｔｏ頁下が＃？９〜８行目、同第
１３頁５〜６行目及び１５〜１６行目並びｔこ同第１５
頁丁がら９〜８行目の「１％生理食塩水溶液における粘
度」をｒｌｏ％生理食生理水溶液における粘度Ｊ、！−
Ｍ正する。 （３）明細書第１３頁下がら４〜３行目の「１％」をｒ
’ｌＯ％」と補正する。
とのゲルクロマトグラムを示す図である。 図２は、Ｓ−架橋ｃｈｓ−ｃ及びｃｈｓ−ｃのＰＮＰの
透析に与える影響を示す図である。図３は、Ｓ−架橋ｃ
ｈｓ−ｃ及びｃｈｓ−ｃのコンドロイチナーゼに対する
抵抗性を示す図である。図４は、ｉｓ−架橋ＧＡＧのＡ
Ｔｍに対する親和性についての検討結果を示す図である
。 手続補正書 昭和６０年１月１０日 特許庁長官 志 賀 学 殿 １、本件の表示 昭和５９年特許願第１３２８８５号 ２、発明の名称 架橋ゲルコサミノグリカン及びその製造法３、補正をす
る者 事件との関係 特許出願人 名称 生化学工業株式会社 ５、補正命令の日付 自発 ６、補正の対象 明細書の発明の詳細な説明の欄を「・
・・ｍ持しており、」と補正する。 （２）ｔＴＪｉ細書第ｔｏ頁下が＃？９〜８行目、同第
１３頁５〜６行目及び１５〜１６行目並びｔこ同第１５
頁丁がら９〜８行目の「１％生理食塩水溶液における粘
度」をｒｌｏ％生理食生理水溶液における粘度Ｊ、！−
Ｍ正する。 （３）明細書第１３頁下がら４〜３行目の「１％」をｒ
’ｌＯ％」と補正する。
Claims (3)
- （１）グリコサミノグリカン（但し、ヒアルロン酸を除
く）又はその塩を多官能性エポキシ化合物で架橋させて
成る架橋グリコサミノグリカンであって、架橋度がグリ
コサミノグリカンの繰り返し二糖１モル当り０．００５
以上であることを特徴とする架橋グリコサミノグリカン
及びその塩。 - （２）架橋度がグリコサミノグリカンの繰り返し二糖１
モル当り０．１６５以上であり、かつ、水不溶性である
特許請求の範囲第１項記載の架橋グリコサミノグリカン
及びその塩。 - （３）グリコサミノグリカン又はその塩のアルカリ溶液
に水溶性有機溶媒を加えて、得られる水アメ状沈殿物を
分取し、該沈殿物に多官能性エポキシ化合物を加えて、
５０℃以下で反応させることを特徴とする架橋グリコサ
ミノグリカン又はその塩の製造法。
Priority Applications (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP59132885A JPH0649723B2 (ja) | 1984-06-29 | 1984-06-29 | 水溶性架橋グリコサミノグリカン及びその製造法 |
| US06/748,729 US4863907A (en) | 1984-06-29 | 1985-06-25 | Crosslinked glycosaminoglycans and their use |
| DE8585304616T DE3578961D1 (de) | 1984-06-29 | 1985-06-27 | Vernetzte glykosaminoglykane und ihre verwendung. |
| EP85304616A EP0167363B1 (en) | 1984-06-29 | 1985-06-27 | Crosslinked glycosaminoglycans and their use |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP59132885A JPH0649723B2 (ja) | 1984-06-29 | 1984-06-29 | 水溶性架橋グリコサミノグリカン及びその製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6112701A true JPS6112701A (ja) | 1986-01-21 |
| JPH0649723B2 JPH0649723B2 (ja) | 1994-06-29 |
Family
ID=15091828
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP59132885A Expired - Lifetime JPH0649723B2 (ja) | 1984-06-29 | 1984-06-29 | 水溶性架橋グリコサミノグリカン及びその製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0649723B2 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH0361569U (ja) * | 1989-10-20 | 1991-06-17 |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5436388A (en) * | 1977-08-26 | 1979-03-17 | Sumitomo Electric Ind Ltd | Porous polysaccharide and its preparation |
-
1984
- 1984-06-29 JP JP59132885A patent/JPH0649723B2/ja not_active Expired - Lifetime
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5436388A (en) * | 1977-08-26 | 1979-03-17 | Sumitomo Electric Ind Ltd | Porous polysaccharide and its preparation |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH0361569U (ja) * | 1989-10-20 | 1991-06-17 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0649723B2 (ja) | 1994-06-29 |
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