JPS61108381A - 新規凝集性酵母 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 産業上の利用分野 この発明は、優れた凝集性を有する新規酵母に関するも
のである。

近年、石油代替エネルギーとして、石油化学によらずに
得られる発酵アルコールが注目されている。これはさと
うきびやこれから採った糖蜜、さつまいも、じゃがいも
、とうもろこしなどのセルロース質またはでん粉質を原
料とし、これらを微生物の働きによって発酵させること
により製造される。

一般にアルコール発酵では、アルコールの生産性は発酵
槽内の菌体濃度に比例する。そこで発酵槽内の菌体濃度
を高める手段として、優れた凝集性を有する酵母を用い
ることが考えられる。すなわち、酵母が優れた凝集性を
有していると、酵母の沈降速度が速くなり、そのため固
液分離が迅速かつ容易になし得る。そして例えば回分発
酵においては、発酵液を単に静置するだけで菌体を沈降
堆積させることができ、発酵法と菌体の分離を容易に行
なって菌体を再使用に供することができる。また連続発
酵においては、小径の流動部とこれの上に連設された菌
体沈降用の大径の沈降部とこれに内装された菌体沈降部
材とを主体とした基型発酵槽を用いることにより、培地
の供給量が増大しても菌体を沈降させてその流出を防止
することができる。このように凝集性を有する酵母を用
いると、凝集性を有しない酵母を用いた場合に比べて多
くの利点があり、そのため新規・凝集性酵母が要望せら
れている。

従来技術およびその問題点 従来から、上記の要望にこたえるべく、凝集性酵母を取
得する試みがなされて来たが、従来の酵母は自然界から
得られた野生株であって、たとえば土壌を探査し特定の
土壌から分離したものであった。

しかしこのように自然界から所望の菌株を見つけ出して
分離する作業は、はなはだ煩わしい３のであり、また所
望の菌株を採取できる確実性の乏しいものであった。

この発明は上記のような実情からなされたものであって
、優れた凝集性を有しかつ実験室で得ることのできる新
規凝集性酵母を提供することを目的とする。

問題点を解決するための手段 この発明の第１のものは新規酵母すなわち優れた凝集性
を有する酵母サツカロマイセス（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙ
ｃｅｓ）　（Ｆ　ＲＶ　　　−３）　Ｓ　１Ｍ１７　　
Ｍ２ （機工研菌寄第７８００号）（以下、これを「この発明
による酵母」と記す）であり、また第２の発明は第１発
明による酵母を用いることを特徴とするアルコール発酵
法である。

この明細書において、酵母の凝集性の程度（ＤｅｌＪｒ
ｅｅｏｆ　ｆｌＯｃｃｕｌａｔｉｏｎ）は、以下に示す
ギリランド・テスト（Ｇｉｌｌｉｌａｎｄ　　ｔｅｓｔ
）（Ｅｕｒｏｐｅａｎ　Ｊｏｕｒｎａｌ　　ｏｆ　Ａｔ
）ｌ）Ｉｉｅｄ　ＭｉＣｒＯｂｉＯｌｏｏＶａｎｄ　　
Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏ１ｏｏＶ第７巻、第２２７−２３４
頁、１９７９年）により求められたＤＦ値で表示される
。すなわち供試菌株をＹＰＧ培地（注１）で３０℃で１
６時間振盪培養した後、菌体の沈降速度、沈降菌体の容
量および硬さを肉眼観察により対照菌株と比較し、表１
に示すＤＦ（ｉｉｏから５の６段階で凝集の程度を表示
する。

（以下余白） 表　　１ この発明による酵母は下記の菌学的性質を有する。すな
わちこの酵母は、 ・ＤＦ値５なる凝集性を有し、液体培養では著しい沈降
性を示す。

・廃糖蜜（たとえば１５％の全糖分を含む廃糖蜜）を発
酵し、７〜９ｖｏ１％のエタノールを生成する。

・寒天平板上で多少硬い集落を形成する。

・胞子形成能を有する。

この発明による酵母の培地としては、炭素源、窒素源、
無機イオン、さらに必要ならば有機微量栄養素を含有す
る通常の培地が使用できる。

炭素源としてはグルコース、ガラクトース、フラクトー
ス、シュークロース、スターチ加水分解物、果汁、セル
ロース分解物などの炭水化物がよく用いられる。特に好
適な培地は、酵母エキス１Ｑ１ポリペプトン２Ｑ、グル
コース２ｇ、蒸留水１００層よりなる培地であり、この
培地のｐＨは無調整で５．５である。

培養は温度２５〜４０℃好ましくは３０〜３７℃で、ｐ
Ｈ３，Ｏ〜７．０好ましくはｐＨ３゜５〜６．０で行な
われる。

つぎに、この発明による酵母の製造法について説明する
。

この発明による酵母は、ＤＦ値３の凝集性を有する酵母
サツカロ？イセス（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ　）Ｆ
ＲＶ　　　−３（機工研菌寄第７７８９号）Ｍ１７Ｍ２ を胞子形成処理し、得られた胞子を培養することにより
製造される。

胞子形成処理は常法に従ってなされる。通常は凝集性を
有しない酵母をＹＰＧ寒天培地（注２）で培養した後、
胞子形成寒天培地（注３）に塗抹する方法がとられる。

また単独胞子由来の細胞を得るには、酵母細胞壁溶解用
の溶菌酵素を用いて子のうを溶解した後、マイクロマニ
プユレータを用いて胞子を分離する方法、または同じく
溶菌酵素で子のうを溶解した後、超音波処理により胞子
を分散させ、胞子を栄養寒天培地で培養する方法がとら
れる。

上記酵母ＦＲＭ１□ＶＭ２　３は、凝集性を有する酵母
サツカロマイセス・セルビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙ
ｃｅｓ　ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）　ＲＭ　−１７（機工
研菌寄第７７７０号）（以下、単にＲＭ−１７と記す）
と、凝集性を有しない酵母サツカロマイセス・セルビシ
エ（ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ
）　ＶＭ　−２（機工研菌寄第７７８８号）　（以下、
単にＶＭ−２と記す）とをプロトプラスト融合処理し、
融合菌体を培養することにより製造される。

プロトプラスト融合は常法によって行なわれる。通常は
細胞数１０７〜１０８個／１１１の濃度の各菌体懸濁液
を調製し、これら懸濁液を好ましくは等量混合した後、
酵母細胞壁溶解酵素を含むプロトプラスト調製液で混合
物を処理するか、または各菌体懸濁液を同調製液で処理
した後これらを混合する。

ＲＭ−１７は、財団法人発酵研究所の保存菌であるＤＦ
（ｉｉｏの酵母サツカロマイセス・セルビシエ（Ｓａｃ
ｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ　ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）　Ｉ　
Ｆ　Ｏ−０２２４（以下、単にＩＦＯ−０２２４と記す
）を胞子形成処理し、得られ°た胞子を変異処理し、変
異胞子を培養することにより製造され、またＶＭ−２は
凝集性を有しない酵母サツカロマイセスφセルビシエ（
Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ　ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）
ＥＹ−１（機工研菌寄第７７９３号）をやはり胞子形成
処理し、得られた胞子を変異処理し、変異胞子を培養す
ることにより製造される。

胞子形成処理は上述したようになされる。

変異処理は、胞子形成処理により得られた胞子または子
のうに公知の突然変異処理、たとえば紫外線、Ｘ線、γ
線を照射する物理的方法、エチルメタンスルホネート、
Ｎ−メチル−Ｎ′−ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニジン、
４−ニドＯキノリンーＮ−オキサイドなどの変異誘起剤
を接触した後に選択培地に生育する化学的方法のいずれ
によっても行なわれるが、エチルメタンスルホネートを
用いる方法が特に好ましい。

上記一連の製造過程において、培地および培養条件は、
前述した酵母自体の培地および培養条件と同じである。

ＩＦＯ−０２２４はＤＦ（ｉｉｏであって全く凝集性を
示さず、また下記表２に示すごとき諸性質（発酵性およ
び資化性の有無、生理的性質）を有する。

表　　２ 表２中、ラフィノースの発酵性は、結合部が切断されて
生じる構成単糖フラクトース、グルコースおよびガラク
トースのうちいくつの糖を発酵できるかにより表示され
る。すなわち、発酵性１／３とはフラクトースのみを発
酵する場合を、発酵性２／３とはフラクトースおよびグ
ルコースを発酵する場合を、および発酵性３／３とはす
べての構成単糖を発酵する場合をそれぞれ意味する。

なお、サッカＯ？イセス（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ
）属に属する酵母は下記のような菌学的性質を有するこ
とが知られている（　Ｊ、　ＬＯｄｄｅｒ著［Ｔｈｅ’
　Ｙｅａｓｔｓ、　Ａ　Ｔａｘｏｎｏｍｉｃ　５ｔｕｄ
ｙ　Ｊ第２版、Ｎ０ｒｔｈ−Ｈｏｌｌａｎｄ　Ｐｕｂｌ
ｉｓｈｉｎｇ社発行、１９７０年）。

すなわち、この属に属する酵母は、 ・多極出芽によって増殖する。

・子のう胞子を形成する。

・硝酸塩を資化しない。

・真菌糸を欠くかまたはわずかじか形成しない。

・成熟子のうは容易に開裂しない。

・胞子の形状は球形ないし卵形である。

・グルコースをよく発酵する。

・麦芽汁培地に皮膜を形成しない。

発明の効果 この発明は以上のとおり構成されているので、凝集性（
ＤＦ値−３）を有する酵母から優れた凝集性（ＤＦ値＝
５）を有する新規酵母を得ることができる。したがって
従来のように自然界から所望の菌株を見つけ出して土壌
から分離するといった煩わしい作業が必要でない上に、
所望の凝集性酵母を確実に製造することができる。

そしてこうして得られた凝集性１ｔＨＥｔを用いてアル
コール発酵を行なうことにより、冒頭で説明したように
回分発酵においても連続発酵においてもアルコール発酵
槽内の菌体濃度を高く維持して、エタノールの生産性を
大幅に向上することができる。

実　　施　　例 つぎにこの発明の実施例を示し、上記効果を実証する。

Ｉ　製造例 （ａ）　　ＲＭ−１７のＩ製 凝集性を有しない酵母サツカロマイセス・セルビシｘ　
（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ　ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ
）　　Ｉ　Ｆ　０−０２２４をＹ−ＰＧ寒天培地（注２
）で３０℃で２４時間培養し、ついで胞子形成寒天培地
（注３）に塗抹し、３０℃で３〜５日間培養を行なった
。こうして胞子を形成させた。

ついで胞子数が１０７個／ｗになるように、子のうを無
菌水１Ｎに懸濁させ、集菌後リン酸緩衝液（注４）で洗
浄した。ついで子のうを溶菌酵素溶液（注５）２ＩＩＩ
ｌ中で３０℃で１時間振盪して、子のうを溶解させた。

ついで集菌後、遊離した胞子を無菌水１ｗで洗浄してリ
ン酸緩衝液３ｍに懸濁させた。

この懸濁液に変異誘起剤としてエチルメタンスルホネー
トをｏ、ｉｍ添加し、懸濁液を３０℃で２時間振盪した
。こうして胞子を変異処理した。ついで集菌後、変異胞
子をリン酸緩衝液０．２７ｍに懸濁させ、懸濁液に５％
チオ硫酸ナトリウム水溶液３ｍを添加して、懸濁液を３
０℃で１０分間振盪した。こうして変異誘起剤を中和　
　　　　　′した。

集菌後、変異胞子をリン酸緩衝液１ｍで２回洗浄して同
緩衝液５１１Ｉｌに懸濁させ、懸濁液を水冷下に３分間
超音波処理することにより変異胞子を懸濁液中に分散さ
せた。ついで集菌後、懸濁液を無菌水で１１度１／１０
５〜１／１０’に希釈し、希釈懸濁液０．１ｗをＹＰＧ
寒天培地（注２）に塗抹して３０℃で４８時間培養し、
単独胞子由来の集落を得た。

こうして得られた集落のプレートをマスタープレートと
してレプリカ法により変異株の検出を行なった。すなわ
ち、殺菌したベルベット布地を用いて、前記マスタープ
レートの集落を最小培地（注６）にレプリカし、同培地
で３０℃で４日間培養し、最小培地で増殖できない菌株
を栄養要求性変異株としてマスタープレートから釣菌し
た。

その結果マスタープレートの菌株２５株のうち凝集性に
優れた株サツカロマイセス・セルピシエ（５ａｃｃｈａ
ｒｏｉｙｃｅｓ　ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）　　ＲＭ　−
１７（機工研菌奇第７７７０号）を得た。この株はアデ
ニンおよびヒスチジン要求性の菌株であった。

（ｂ）　　ＶＭ−２の調製 工業技術院微生物工業技術研究所応用技術部生物化学工
学研究室から分譲を受けた凝集性を有しない酵母サツカ
ロマイセス・セルビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ
　ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）　Ｅ　Ｙ　−１（機工研菌寄
第７７９３号）をＲＭ−１７の調製と同じ操作で変異処
理し、レプリカ法によりイソロイシンおよびバリン要求
性の栄養要求性変異株として酵母サツカロマイセス・セ
ルビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ　ｃｅｒｅｖｉ
ｓｉａｅ）　Ｖ　Ｍ　−２（機工研菌奇第７７８８号）
を得た。

（Ｃ）　　ＲＭ−１７とＶＭ−２のプロトプラスト融合 ＲＭ−１７をＹＰＤ培地１０１！！ｌで３０℃で１６時
間振盪培養し、集菌後無菌水１７１１／で洗浄した。つ
いでこれをプロトプラスト“ｍ製液（注７）約２１１１
に懸濁させ、懸濁液を３０℃で１時間振盪し、集菌後等
張液（注８）１２／で２回洗浄を行なった。

ＶＭ−２についても上記と同じ操作で処理を行なった。

ついでこうして得られたＲＭ−１７の処理菌体とＶＭ−
２の処理国体とを同量（ｉｌ［ｌ胞数１０Ｂ個／ｗずつ
）とって混合し、集菌後混合物を等張渡０．１ｗに懸濁
させ、懸濁液にポリエチレングリコール水溶液（注９）
２層を添加した。この懸濁液を３０’Ｃで１５分間静置
してプロトプラスト融合を完結した。ついで集菌後、菌
体を等張渡１ｗに懸濁し、懸濁液を２０℃で１５分間静
置した。ついで懸濁液を等張渡で濃度１／１０〜１／１
０２に希釈し、希釈懸濁液を最小培地（注６）に塗抹し
、重層用培地（注１０）を重層した。この状態で３０℃
で４日間培養を行ない、ある程度のｉ柔性（ＤＦ値＝３
）を有する融合株を分離し、この株を酵母サツカロマイ
セス（ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ　）　Ｆ　ＲＶ　　
　−３Ｍ１７　　Ｍ２ （機工研菌奇第７７８９号）とした。

なお、プロトプラスト融合に用いた両親株（ＲＭ−１７
とＶＭ−２）は上記最小培地に生育できなかった。

（ｄ）　　　（ＦＲＶ　　　−３）８１の調製Ｍ１７　
　Ｍ２ プロトプラスト融合酵母である上記ＦＲＭ１□ＶＭ２−
３をＹＰＧ寒天培地（注２）ｔ’３０℃で２４時間培養
し、ついで胞子形成寒天培地（注３）に塗抹し、３０℃
で３〜５日間培養を行なった。こうして胞子を形成させ
た。

ついで胞子数が１０７個／ｗになるように、子のうを無
菌水１ｍに懸濁させ、集国後すン酸！ＩＩ液（注４）で
洗浄した。ついで子のうを溶菌酵素溶液（注５）２ｗ中
で３０℃で１時間振盪して、子のうを溶解させた。

ついで集菌後、遊離した胞子を無菌水１ｗで洗浄してリ
ン酸緩衝液５ｄに懸濁させ、懸濁液を水冷下に３分間超
音波処理することにより変異胞子を懸濁液中に分散させ
た。ついで集菌後、懸濁液を無菌水で濃度１／１０５〜
１／１０’に希釈し、希釈懸濁液０．１ｍｌをＹＰＧ寒
天培地（注２）に塗抹して３０℃で４８時間培養し、単
独胞子由来の集落を得た。

こうして得られた菌株２０株のうち優れた凝集性を有す
るもの１２株を得（頻度６０％）、これら・１２株のう
ちの１株を酵母サツカロマイセス（Ｓａｃｃｈａｒｏｍ
ｙｃｅｓ）　（Ｆ　ＲＭ　１７Ｖ　Ｍ２−３　）３１（
機工研菌寄”第７８００号）とした。

■　凝集性およびアルコール発酵能の測定ＩＦＯ−０２
２４、ＲＭ−１７、ＥＹ−１、ＶＭ−２、ＦＲＭ１７■
Ｍ２−３およびこれを上記の如く胞子成形処理して得た
処理酵母について、それぞれ凝集性の程度を示すＤＦ値
およびアルコール発酵能を測定した。

ＤＦ値は前述した方法で求めた。

またアルコール発酵能は下記の方法で求めた。

すなわち沖縄産の廃糖蜜３４０にＩ／／に硫酸アンモニ
ウム３．４ｇ／　ｌとピロ亜硫酸カリウム０．２０／ｌ
とを混合溶解した後、硫酸でｐＨを４、５に調整し、混
合液を３０００回転／分で１０分間遠心分離機にかけた
。こうして得られた上澄液を７０ｗずつとり、８液にそ
れぞれ菌株の前培養液を７ＩＩＩｌ加え、これらを３０
℃で間欠撹拌（３０秒間撹拌と１０分間静置の反復）し
てＲＭ−１７の回分培養を行ない、２４時間後および４
８時間後の各培養液についてそれぞれエタノール生成門
をガスクロマトグラフィーにより測定した。

測定結果は下記表３のとおりである。

（以下余白） 表３ 表３から明らかなように、ある程度の凝集性＜ＤＦ値＝
３）を有する融合酵母ＦＲＭ１７■、２−３を胞子形成
処理することにより、優れた凝集性（ＤＦ値＝５）を有
する酵母（ＦＲＭ１７Ｖ　　　−３）８１を得ることが
できる。

■　使用例（アルコール連続発酵） （ＦＲＶ　　　−３＞８１を用いてつきのＭ１７　　Ｍ
２ 操作によりアルコール連続発酵を行ない、そのアルコー
ル発酵能を調べた。

発酵装置として、第１図に示すアルコール発酵装置を用
いた。これは実容積７００ｄのガラス製流動層型発酵槽
（１）を主体とし、温度制御およびｐＨ制御できるよう
に構成されている。

そして発酵原料はポンプ（２）によって同種（１）の底
部に供給され、反応液はポンプ（３）で同種の頂部から
底部に戻され、槽頂の菌体沈降部（４）から流出するよ
うになっている。

５００−坂ロフラスコにおいてＹＰＧ培地（注１＞１０
０−を−整し、これを温度１２１℃で１０分間殺菌した
後、ＹＰＧ寒天斜面培地（注２）に保存した（ＦＲＶ　
　　−３）８Ｍ１７　　Ｍ２ １株を１白菌耳植菌し、３０℃で１夜培養した。

こうして活性な（ＦＲＶ　　　−３）ＳｌのＭ１７　　
Ｍ２ 前培養液を得た。

フィリピン産廃糖蜜培地（注目）７００ｄが入っている
発酵槽（１）に上記前培養液１００ｄを入れ、発酵温度
３０℃で８時間回分培養を行なった。ついで上記廃糖蜜
培地を発酵槽゛（１）に流量３５ｄ／時（希釈率＝０．
０５時−１）で連続的に供給し、培地の供給量を徐々に
増加でいって連続発酵を行なった。

その結果、培地供給量を１７５ＩＩｄ／時（希釈率−０
，２５時−１）に増加しても、本酵母の優れた凝集°性
により、槽内に直径１〜４ｎ＋ｍのフロックが形成され
て、槽内の菌体濃度（注１２ンは４７ａ／ｌという高い
値に維持された。また産生アルコールは６１ｇ／／とい
う高い濃度で得られ、アルコール生産性（注１３）は第
２図に示すように１６ｏ／／・時という高い値に達した
。

■　比較例 酵母として（ＦＲＭ１７ＶＭ２−３）Ｓｌの代わりにＥ
Ｙ−１を用い、その他の事項を上記使用例と同じにして
、上記操作を繰返した。

その結果、培地供給量が７０ｄ／時（希釈率−０，１時
−１）を超えると、アルコール生産性（注１３）は第２
図に示すように４ｇ／／・時から急激に低下した。

Ｖ　培地および試薬 培地および試薬はそれぞれつきのとおりである。

（注１）　　♀ＰＧ培地 酵母エキス　　　　１０ｏ／／ ポリペプトン　　　２０Ｑ／／ グルコース　　　　２０ｇ／／ （注２）　　　ＹＰＧ寒天培地 酵母エキス　　　　１０ｇ／ｌ ポリペプトン　　　２（１／／ グルコース　　　　２０ＣＩ／Ｉ 寒天　　　　　　　２０ｇ／／ （注３）　　胞子形成培地 酢酸ナトリウム　　　５にＪ／１ 寒天　　　　　　　２０（：ｌ／／ （注４）　　リン酸緩衝液 ０．１Ｍリン酸緩衝液 ｐＨ−７，５ （注５）　　溶菌酵素溶液 ０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７，５）にザイモリアーゼ
２０Ｔ（生化学工業社製）を０゜０５％溶かした溶液２
ｗと、２−メルカプトエタノール１．４μｌとの混合液 （注６）　　最小培地 Ｄｉｆｃｏ−Ｙｅａｓｔ　Ｎｉｔｒｏｇｅｎ　Ｂａ５ｅ
　ＷｌｏＡｍｉｎｏ　ａｃｉｄ（ｏｉ　ｆｃｏ社製）　
　　６．７０／／グルコース　　　　　　　　２０Ｑ／
／寒天　　　　　　　　　　　２０Ｇ　／　／（注７）
　　プロトプラストｗ４製液 １．５Ｍ塩化カリウム、ｏ、ａ７Ｉ２／と、２／１５Ｍ
リン酸緩衝液（ｐＨ７，５＞　　１．０ＩＩｌｌと、２
−メルカプトエタノール１．４μｌと、サイモリアーゼ
２０丁（生化学工業社製）を０．１Ｍリン緩衝液（１）
８７．５）に０．２５％溶かした溶液０．２層との混合
液（注８）　　等張渡 ０、６Ｍ塩化カリウム水溶液 （注９）　　ポリエチレングリコール水溶液塩化カルシ
ウム　　　　　５．６ａ　／　１ポリエチレングリコー
ル （ＰＥＧ−６０００）　　　　　　３００Ｑ／／（注１
０）　　　重層用培地 グルコース　　　　　　　　２０Ｑ／１ｏ＋ｒｃｏ−ｙ
ｅａｓｔ　Ｎｔｔｒｏａｅｎ　Ｂａ５ｅ　ＷｌｏＡｍｉ
ｎｏ　ａｃｉｄ（Ｄｉｆｃｏ社製）　　　６．７ａ／／
Ｄｉｒｃｏ−Ｂａｃｔ　Ａｇａｒ（Ｄｉｆｃｏ社！＄１
）３０Ｑ／１ （注目）　　　フィリピン産廃糖蜜培地フィリピン産廃
糖蜜　　　２８０ｏ／／硫酸アンモニウム　　　　２．
８ｇ＃ ピロ亜硫酸カリウム／　　　、０．５ｇ／／消泡剤　　
　　　　　　　０．２ａ／／とよりなる混合液を硫酸で
Ｉ）Ｈ４，５に調整したもの （注１２）　　　菌体濃度 発酵槽内の培養液を一定量とり、遠 心分離機で菌体を集め、洗浄後、これ を温度８００℃で燃焼し、焼失した重 量を菌体量として算出したもの （注１３）　　　アルコール生産性 培養液１１当り１時間に生産されるア ルコールの重量（ａ）

【図面の簡単な説明】

第１図は連続発酵の７０−シート、第２図は希釈率とア
ルコール生産性の関係を示すグラフである。 以　　上 特許出願人　　　日立造船　株式会社 外４名 第１図 第−図 ４１！（ｈ″１） 手続補正書 昭和６０年２月　７日 １、事件の表示　　昭和５９年特許願２３０９０１号２
、発明の名称 新規凝集性酵母およびアルコール発酵法３、補正をする
者 事件との関係　　　特許出願人 住　所　　　　大阪市西区江戸堀１丁目６番１４号名　
称　　　　（５１１）日立造船株式会社外１名 ４、代理人 住　所　　大阪市南区鰻谷西之町５７番地の６外４名 ５、補正命令の日付 ６、補正により増加する発明の数 ７、補正の対象　　　明Ｉｌｌの発明の詳細な説明の項
８、補正の内容 （１）　　明細１４頁５行「３の」を「もの」に訂正す
る。 （２）　　明細！２４頁表３全体を別紙のとおりに訂正
する。 以上

Claims (3)

【特許請求の範囲】
1. （１）優れた凝集性を有する酵母サッカロマイセス（Ｓ
   ａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）（ＦＲ＿Ｍ＿１＿７Ｖ＿Ｍ
   ＿２−３）Ｓ１（微工研菌寄第７８００号）。
2. （２）凝集性がＤＦ値で表わして５である特許請求の範
   囲第１項記載の酵母。
3. （３）優れた凝集性を有する酵母サッカロマイセス（Ｓ
   ａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）（ＦＲ＿Ｍ＿１＿７Ｖ＿Ｍ
   ＿２−３）Ｓ１（微工研菌寄第７８００号）を用いるこ
   とを特徴とするアルコール発酵法。