JPS61108376A - 凝集性と発酵能を備えた酵母の製造法 - Google Patents
凝集性と発酵能を備えた酵母の製造法Info
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- JPS61108376A JPS61108376A JP59230895A JP23089584A JPS61108376A JP S61108376 A JPS61108376 A JP S61108376A JP 59230895 A JP59230895 A JP 59230895A JP 23089584 A JP23089584 A JP 23089584A JP S61108376 A JPS61108376 A JP S61108376A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
産業上の利用分野
この発明は、優れた凝集性と優れたエタノール発酵能と
を兼ね備えた酵母の製造法に関するものである。
を兼ね備えた酵母の製造法に関するものである。
近年、石油代替エネルギーとして、石油化学によらずに
得られる発酵アルコールが注目されている。これはさと
うきびやこれから採った糖蜜、さつまいも、じゃがいも
、とうもろこしなどのセルロース質またはでん粉質を原
料とし、これらを微生物の働きによって発酵させること
により製造される。
得られる発酵アルコールが注目されている。これはさと
うきびやこれから採った糖蜜、さつまいも、じゃがいも
、とうもろこしなどのセルロース質またはでん粉質を原
料とし、これらを微生物の働きによって発酵させること
により製造される。
一般にアルコール発酵では、アルコールの生産性は発酵
槽内の菌体濃度に比例する。そこで発酵槽内の菌体濃度
を高める手段として、優れた凝集性を有する酵母を用い
ることが考えられる。すなわち、酵母が優れた凝集性を
有していると、酵母の沈降速度が速くなり、そのため固
液分離が迅速かつ容易になし得る。そして例えば回分発
酵においては、発酵液を単に静置する戸はモ菌体を沈降
堆積させることができ、発酵液と菌体の分離を容易に行
なって菌体を再使用に供することができる。また連続発
酵においては、小径の流動部とこれの上に連設された菌
体沈降用の大径の沈降部とこれに内装ざ°れた菌体沈降
部材とを主体とした基型発酵槽を用いることにより、培
地の供給量が増大しても菌体を沈降させてその流出を防
止することができる。このように凝集性を有する酵母を
用いると、凝集性を有しない酵母を用いた場合に比べて
多くの利点があり、そのため新規凝集性酵母が要望せら
れている。
槽内の菌体濃度に比例する。そこで発酵槽内の菌体濃度
を高める手段として、優れた凝集性を有する酵母を用い
ることが考えられる。すなわち、酵母が優れた凝集性を
有していると、酵母の沈降速度が速くなり、そのため固
液分離が迅速かつ容易になし得る。そして例えば回分発
酵においては、発酵液を単に静置する戸はモ菌体を沈降
堆積させることができ、発酵液と菌体の分離を容易に行
なって菌体を再使用に供することができる。また連続発
酵においては、小径の流動部とこれの上に連設された菌
体沈降用の大径の沈降部とこれに内装ざ°れた菌体沈降
部材とを主体とした基型発酵槽を用いることにより、培
地の供給量が増大しても菌体を沈降させてその流出を防
止することができる。このように凝集性を有する酵母を
用いると、凝集性を有しない酵母を用いた場合に比べて
多くの利点があり、そのため新規凝集性酵母が要望せら
れている。
従来技術およびその問題点
従来から、上記の要望にこたえるべく、凝集性酵母を取
得する試みがなされて来たが、従来の酵母は自然界から
得られた野生株（たとえば財団法人発酵研究所保存菌Ｉ
ＦＯ−２０１８）であった。しかしこのような野生株は
、凝集性の点では特に問題ないとしても、アルコール発
酵能の点で満足なものではなかった（後記する族３参照
）。
得する試みがなされて来たが、従来の酵母は自然界から
得られた野生株（たとえば財団法人発酵研究所保存菌Ｉ
ＦＯ−２０１８）であった。しかしこのような野生株は
、凝集性の点では特に問題ないとしても、アルコール発
酵能の点で満足なものではなかった（後記する族３参照
）。
この発明は、上記のような実情からなされたものであっ
て、優れた凝集性を有しか、つアルコール発酵能におい
ても申し分のない酵母の製造法を提供することを目的と
する。
て、優れた凝集性を有しか、つアルコール発酵能におい
ても申し分のない酵母の製造法を提供することを目的と
する。
問題点を解決するための手段
この発明による凝集性と発酵能を備えた酵母の製造法は
、サツ力口マイセス （ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ）属に属する凝集性を
有しない酵母を胞子形成処理し、得られた胞子を変異処
理し、変異胞子から得られた優れた凝集性を有する変異
酵母と、サツカロマイセス（ＳａＣＣｈａｒｏｍｙｃｅ
ｓ ）属に属する他の凝集性を有しない酵母とをプロト
プラスト融合させることを特徴とするものである。
、サツ力口マイセス （ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ）属に属する凝集性を
有しない酵母を胞子形成処理し、得られた胞子を変異処
理し、変異胞子から得られた優れた凝集性を有する変異
酵母と、サツカロマイセス（ＳａＣＣｈａｒｏｍｙｃｅ
ｓ ）属に属する他の凝集性を有しない酵母とをプロト
プラスト融合させることを特徴とするものである。
この明細書において、酵母の凝集性の程度（Ｄｅｇｒｅ
ｅ ｏｆ ｆｌＯｃｃｕｌａｔｉｏｎ）は、以下に示す
ギリランド・テスト（Ｇｉｌｌｉｌａｎｄ ｔｅｓｔ
）（ＥｔｌｒＯＥ）ｅａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ
Ａｐｐｌｉｅｄ Ｈｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ
８ｉ０ｔｅＣｈｎ０１０（ＪＶ第７巻、第２２７−２
３４頁、１９７９年〉により求められたＤＦ値で表示さ
れる。すなわち供試菌株をＹＰＧ培地（注１）で３０℃
で１６時間振盪培養した後、菌体の沈降速度、沈降菌体
の容量および硬さを肉眼観察により対照菌株と比較し、
表１に示すＤＦｉｉＯから５の６段階で凝集の程度を表
示する。
ｅ ｏｆ ｆｌＯｃｃｕｌａｔｉｏｎ）は、以下に示す
ギリランド・テスト（Ｇｉｌｌｉｌａｎｄ ｔｅｓｔ
）（ＥｔｌｒＯＥ）ｅａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ
Ａｐｐｌｉｅｄ Ｈｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ
８ｉ０ｔｅＣｈｎ０１０（ＪＶ第７巻、第２２７−２
３４頁、１９７９年〉により求められたＤＦ値で表示さ
れる。すなわち供試菌株をＹＰＧ培地（注１）で３０℃
で１６時間振盪培養した後、菌体の沈降速度、沈降菌体
の容量および硬さを肉眼観察により対照菌株と比較し、
表１に示すＤＦｉｉＯから５の６段階で凝集の程度を表
示する。
表 １
この発明による酵母製造法において、凝集性を有しない
酵母としては、アルコール発酵能に優れかつ胞子形成能
を有する酵母であれば、限定な（適用できる。
酵母としては、アルコール発酵能に優れかつ胞子形成能
を有する酵母であれば、限定な（適用できる。
この発明において、胞子形成処理は常法に従ってなされ
る。通常は７凝集性を有しない酵母をＹＰＧ寒天培地（
注２）で培養した後、胞子形成寒天培地（注３）に塗抹
する方法がとられる。
る。通常は７凝集性を有しない酵母をＹＰＧ寒天培地（
注２）で培養した後、胞子形成寒天培地（注３）に塗抹
する方法がとられる。
また単独胞子由来の細胞を得るには、Ｖｆ母細胞壁溶解
用の溶菌酵素を用いて子のうを溶解した後、マイクロマ
ニプユレータを用いて胞子を分離する方法、または同じ
く溶菌酵素で子のうを溶解した後、超音波処理により胞
子を分散させ、胞子を栄養寒天培地で培養する方法がと
られる。
用の溶菌酵素を用いて子のうを溶解した後、マイクロマ
ニプユレータを用いて胞子を分離する方法、または同じ
く溶菌酵素で子のうを溶解した後、超音波処理により胞
子を分散させ、胞子を栄養寒天培地で培養する方法がと
られる。
また変異処理は、胞子形成処理により得られた胞子また
は子のうに公知の突然変異処理、たとえば紫外線、Ｘ線
、γ線を照射する物理的方法、エチルメタンスルホネー
ト、Ｎ−メチル−Ｎ′−二トローＮ−ニトロソグアニジ
ン、４−−ニトロキノリン−Ｎ−オキサイドなどの変異
誘起剤を接触した後に選択培地に生育する化学的方法の
いずれによっても行なわれるが、エチルメタンスルホネ
ートを用いる方法が特に好ましい。
は子のうに公知の突然変異処理、たとえば紫外線、Ｘ線
、γ線を照射する物理的方法、エチルメタンスルホネー
ト、Ｎ−メチル−Ｎ′−二トローＮ−ニトロソグアニジ
ン、４−−ニトロキノリン−Ｎ−オキサイドなどの変異
誘起剤を接触した後に選択培地に生育する化学的方法の
いずれによっても行なわれるが、エチルメタンスルホネ
ートを用いる方法が特に好ましい。
またプロトプラスト融合は常法によって行なわれる。通
常は細胞数１０７〜１，０８個／−の濃度の各菌体懸濁
液を調製し、これら懸濁液を −好ましくは等量混合
した後、酵母細胞壁溶解酵素を含むプロトプラスト調製
液で混合物を処理するか、または各菌体懸濁液を同調製
液で処理した後これらを混合する。
常は細胞数１０７〜１，０８個／−の濃度の各菌体懸濁
液を調製し、これら懸濁液を −好ましくは等量混合
した後、酵母細胞壁溶解酵素を含むプロトプラスト調製
液で混合物を処理するか、または各菌体懸濁液を同調製
液で処理した後これらを混合する。
この発明の製造法で用いる培地としては、炭素源、窒素
源、無機イオン、さらに必要ならば有機微量栄養素を含
有する通常の培地が使用で−きる。炭素源としてはグル
コース、ガラクトース、フラクトース、シュークロース
、スターチ加水分解物、果汁、セルロース分解物などの
炭水化物がよく用いられる。特に好適な培地は、１１ｆ
ｆｉエキス１Ｑ、ポリペプトン２Ｑ、グルコース２ｇ、
蒸留水ｉｏａｍよりなる培地であり、この培地のｐＨは
無調整で５．５である。
源、無機イオン、さらに必要ならば有機微量栄養素を含
有する通常の培地が使用で−きる。炭素源としてはグル
コース、ガラクトース、フラクトース、シュークロース
、スターチ加水分解物、果汁、セルロース分解物などの
炭水化物がよく用いられる。特に好適な培地は、１１ｆ
ｆｉエキス１Ｑ、ポリペプトン２Ｑ、グルコース２ｇ、
蒸留水ｉｏａｍよりなる培地であり、この培地のｐＨは
無調整で５．５である。
培養は温度２５〜４０℃好ましくは３０〜３７℃で、ｐ
Ｈ３，０〜７．０好ましくはｐＨ３，５〜６．０で行な
われる。
Ｈ３，０〜７．０好ましくはｐＨ３，５〜６．０で行な
われる。
この発明の好ましい実施態様においては、財団法人発酵
研究所の保存菌であるＤＦ値０の酵母サッカロマイセス
・セルビシエ （Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａ
ｅ） Ｉ Ｆ Ｏ−０２２４（以下、単にＩＦＯ−
０２２４と記す）を胞子形成処理し、得られた胞子を変
異処理し、変異胞子から得られたＤＦ値４の酵母サツカ
ロマイセス寺セルビシｘ （Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅ
ｓｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ） ＲＭ −１７（微工研菌
寄第７７７０号）（以下、単にＲＭ−１７と記す）と、
ＤＦ（ｉ［ｏの酵母サッカロマイセス・セルビシエ（Ｓ
ａｃｃｈａｒｏｎ＋ｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）
Ｖ Ｍ −２（微工研菌寄第７７８８号） （以下、
単にＶＭ−２と記す）とをブＯドブラスト融合させ、融
合ＩＩ母を培養することにより、ＤＦ値５の酵母サツカ
ロマイセス（５ａｃｃｈａｒｏａ＋ｙｃｅｓ ） Ｆ
ＲＶＭ１７ Ｍ２ −１（微工研菌寄第７７９２号）を得る。
研究所の保存菌であるＤＦ値０の酵母サッカロマイセス
・セルビシエ （Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａ
ｅ） Ｉ Ｆ Ｏ−０２２４（以下、単にＩＦＯ−
０２２４と記す）を胞子形成処理し、得られた胞子を変
異処理し、変異胞子から得られたＤＦ値４の酵母サツカ
ロマイセス寺セルビシｘ （Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅ
ｓｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ） ＲＭ −１７（微工研菌
寄第７７７０号）（以下、単にＲＭ−１７と記す）と、
ＤＦ（ｉ［ｏの酵母サッカロマイセス・セルビシエ（Ｓ
ａｃｃｈａｒｏｎ＋ｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）
Ｖ Ｍ −２（微工研菌寄第７７８８号） （以下、
単にＶＭ−２と記す）とをブＯドブラスト融合させ、融
合ＩＩ母を培養することにより、ＤＦ値５の酵母サツカ
ロマイセス（５ａｃｃｈａｒｏａ＋ｙｃｅｓ ） Ｆ
ＲＶＭ１７ Ｍ２ −１（微工研菌寄第７７９２号）を得る。
上記実施態様において、出発酵母Ｉ ＦＯ−０２２４は
下記表２に示すごとき諸性質（発酵性および資化性の有
無、生理的性質）を有する。
下記表２に示すごとき諸性質（発酵性および資化性の有
無、生理的性質）を有する。
（以下余白）
表 ２
表２中、ラフィノースの発酵性は、結合部が切断されて
生じる構成単糖フラクトース、グルコースおよびガラク
トースのうちいくつの糖を発酵できるかにより表示され
る。すなわち、発酵性１／３とはフラクトースのみを発
酵する場合を、発酵性２／３とはフラクトースおよびグ
ルコースを発酵する場合を、および発酵性３／３とはす
べての構成単糖を発酵する場合をそれぞれ意味する。
生じる構成単糖フラクトース、グルコースおよびガラク
トースのうちいくつの糖を発酵できるかにより表示され
る。すなわち、発酵性１／３とはフラクトースのみを発
酵する場合を、発酵性２／３とはフラクトースおよびグ
ルコースを発酵する場合を、および発酵性３／３とはす
べての構成単糖を発酵する場合をそれぞれ意味する。
また上記実施態様で得られたＦＲＶ
Ｍ１７ Ｍ２
−１は、下記の菌学的性質を有する。すなわちこの酵母
は、 ・ＤＦ値５なるｉ柔性を有し、液体培養では著しい沈降
性を示す。
は、 ・ＤＦ値５なるｉ柔性を有し、液体培養では著しい沈降
性を示す。
・廃糖蜜（たとえば１５％の全糖分を含む廃糖蜜）を発
酵し、７〜９ｖｏ１％のエタノールを生成する。
酵し、７〜９ｖｏ１％のエタノールを生成する。
・寒天平板上で多少硬い集落を形成する。
・胞子形成能を有する。
またＲＭ−１７は生育にアデニンおよびヒスチジンを要
求し、ＶＭ−２はイソロイシンおよびバリンを要求する
。
求し、ＶＭ−２はイソロイシンおよびバリンを要求する
。
なお、サツカロマイセス（５ａｃｃｈａｒｏｎ＋ｙｃｅ
ｓ）属に属する酵母は下記のような菌学的性質を有する
ことが知られている（ Ｊ、 Ｌｏｄｄｅｒ著［Ｔｈｅ
Ｙｅａｓｔｓ、 Ａ Ｔａｘｏｎｏｉｉｃ ５ｔｕｄｙ
Ｊ第２版、Ｎ０ｒｔｈ−Ｈｏｌｌａｎｄ Ｐｕｂｌｉ
ｓｈｉｎｇ社発行、１９７０年）。
ｓ）属に属する酵母は下記のような菌学的性質を有する
ことが知られている（ Ｊ、 Ｌｏｄｄｅｒ著［Ｔｈｅ
Ｙｅａｓｔｓ、 Ａ Ｔａｘｏｎｏｉｉｃ ５ｔｕｄｙ
Ｊ第２版、Ｎ０ｒｔｈ−Ｈｏｌｌａｎｄ Ｐｕｂｌｉ
ｓｈｉｎｇ社発行、１９７０年）。
すなわち、この属に属する酵母は、
・多極出芽によって増殖する。
・子のう胞子を形成する。
・硝酸塩を資化しない。
・真菌糸を欠くかまたはわずかじか形成しない。
・成熟子のうは容易に開裂しない。
・胞子の形状は球形ないし卵形である。
・グルコースをよく発酵する。
・麦芽汁培地に皮膜を形成しない。
発明の効果
この発明は以上のとおり構成されているので、野生株以
上に優れた凝集性を有しかつアルコール発酵能において
も申し分のない新規’Ｆｉ母を得ることができる。した
がってこうして得られた凝集性酵母を用いてアルコール
発酵を行なうことにより、冒頭で説明したように回分発
酵においても連続発酵においてもアルコ−ル発酵槽内の
菌体濃度を高く維持して、エタノールの生産 ・
性を大幅に向上することができる。
上に優れた凝集性を有しかつアルコール発酵能において
も申し分のない新規’Ｆｉ母を得ることができる。した
がってこうして得られた凝集性酵母を用いてアルコール
発酵を行なうことにより、冒頭で説明したように回分発
酵においても連続発酵においてもアルコ−ル発酵槽内の
菌体濃度を高く維持して、エタノールの生産 ・
性を大幅に向上することができる。
実 施 例
つぎにこの発明の実施例を示し、上記効果を実証する。
■ 製造例
（ａ） ＲＭ−１７の調製
凝集性を有しない酵母サツカロマイセス・セルビシｘ
（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ
） Ｉ Ｆ ０−０２２４をＹＰＧ寒天培地（注２）
で３０℃で２４時間培養し、ついで胞子形成寒天培地（
注３）に塗抹し、３０℃で３〜５日間培養を行なった。
（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ
） Ｉ Ｆ ０−０２２４をＹＰＧ寒天培地（注２）
で３０℃で２４時間培養し、ついで胞子形成寒天培地（
注３）に塗抹し、３０℃で３〜５日間培養を行なった。
こうして胞子を形成させた。
ついで胞子数が１０７個／ｗになるように、子のうを無
菌水１層に懸濁させ、集菌後リン酸緩衝液（注４）で洗
浄した。ついで子のうを溶菌酵素溶液（注５）２Ｎ中で
３０℃で１時間振盪して、子のうを溶解させた。ついで
集菌後、遊離した胞子を無菌水１ｗ／で洗浄してリン酸
緩衝液３１１１１に懸濁させた。
菌水１層に懸濁させ、集菌後リン酸緩衝液（注４）で洗
浄した。ついで子のうを溶菌酵素溶液（注５）２Ｎ中で
３０℃で１時間振盪して、子のうを溶解させた。ついで
集菌後、遊離した胞子を無菌水１ｗ／で洗浄してリン酸
緩衝液３１１１１に懸濁させた。
こｇ）懸濁液に変異誘起剤としてエチルメタンスルホネ
ートを０．１ｗ添加し、懸濁液を３０℃で２時間Ｓ盪し
た。こうして胞子を変異処理した。ついで集菌後、変異
胞子をリン酸緩衝液０．２ｗに懸濁させ、懸濁液に５％
チオ硫酸ナトリウム水溶液３ｆｆｉ／を添加して、懸濁
液を３０℃で１０分間振盪した。こうして変異誘起剤を
中和した。
ートを０．１ｗ添加し、懸濁液を３０℃で２時間Ｓ盪し
た。こうして胞子を変異処理した。ついで集菌後、変異
胞子をリン酸緩衝液０．２ｗに懸濁させ、懸濁液に５％
チオ硫酸ナトリウム水溶液３ｆｆｉ／を添加して、懸濁
液を３０℃で１０分間振盪した。こうして変異誘起剤を
中和した。
集菌後、変異胞子をリン酸緩衝液１１／Ｉｌで２回洗浄
して同緩衝液５ｗ！に懸濁させ、懸濁液を水冷下に３分
間超音波処理することにより変異胞子を懸濁液中に分散
させた。ついで集菌後、懸濁液を無菌水で濃度１／１０
’〜１／１０Ｂに希釈し、希釈懸濁液０．１ＮをＹＰＧ
寒天培地（注２）に塗抹して３０℃で４８時間培養し、
単独胞子由来の集落を得た。
して同緩衝液５ｗ！に懸濁させ、懸濁液を水冷下に３分
間超音波処理することにより変異胞子を懸濁液中に分散
させた。ついで集菌後、懸濁液を無菌水で濃度１／１０
’〜１／１０Ｂに希釈し、希釈懸濁液０．１ＮをＹＰＧ
寒天培地（注２）に塗抹して３０℃で４８時間培養し、
単独胞子由来の集落を得た。
こうして得られた集落のプレートをマスタープレートと
してレプリカ法により変異株の検出を行なった。すなわ
ち、殺菌したベルベット布地を用いて、前記マスタープ
レートの集落を最小培地（注６）にレプリカし、同培地
で３０℃で４日間培養し、最小培地で増殖できない菌株
を栄養要求性変異株としてマスタープレートから釣菌し
た。
してレプリカ法により変異株の検出を行なった。すなわ
ち、殺菌したベルベット布地を用いて、前記マスタープ
レートの集落を最小培地（注６）にレプリカし、同培地
で３０℃で４日間培養し、最小培地で増殖できない菌株
を栄養要求性変異株としてマスタープレートから釣菌し
た。
その結果マスタープレートの菌株２５株のうち凝集性に
優れた株サッカロマイセス・セルビシエ（Ｓａｃｃｈａ
ｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ） ＲＭ −１
７（微工研菌奇第７７７０号）を得た。この株はアデニ
ンおよびヒスチジン要求性の菌株であった。
優れた株サッカロマイセス・セルビシエ（Ｓａｃｃｈａ
ｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ） ＲＭ −１
７（微工研菌奇第７７７０号）を得た。この株はアデニ
ンおよびヒスチジン要求性の菌株であった。
（ｂ） ＶＭ−２の調製
工業技術院微・生物工業技術研究所応用技術部生物化学
工学研究室から分譲を受けた凝集性を有しない酵母サッ
カロマイセス・セルビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅ
ｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ） Ｅ Ｙ −１（微工研菌
寄第７７９３号）をＲＭ−１７の調製と同じ操作で変異
処理し、レプリカ法によりイソロイシンおよびバリン要
求性の栄養要求性変異株として酵母サッカロマイセス・
セルビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖ
ｉｓｉａｅ） Ｖ Ｍ −２（微工研菌寄第７７８８号
）を得た。
工学研究室から分譲を受けた凝集性を有しない酵母サッ
カロマイセス・セルビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅ
ｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ） Ｅ Ｙ −１（微工研菌
寄第７７９３号）をＲＭ−１７の調製と同じ操作で変異
処理し、レプリカ法によりイソロイシンおよびバリン要
求性の栄養要求性変異株として酵母サッカロマイセス・
セルビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖ
ｉｓｉａｅ） Ｖ Ｍ −２（微工研菌寄第７７８８号
）を得た。
（ｃ） ＲＭ−１７とＶＭ−２のプロトプラスト融合
ＲＭ−１７をＹＰＤ培地１０層で３０℃で１６時間振盪
培養し、集菌後混合物１層で洗浄した。ついでこれをプ
ロトプラスト調製液（注７）約２層に懸濁させ、懸濁液
を３０℃で１時間振盪し、集菌後混合物（注８）１２／
で２回洗浄を行なった。
培養し、集菌後混合物１層で洗浄した。ついでこれをプ
ロトプラスト調製液（注７）約２層に懸濁させ、懸濁液
を３０℃で１時間振盪し、集菌後混合物（注８）１２／
で２回洗浄を行なった。
ＶＭ−２についても上記と同じ操作で処理を行なった。
つｌ／）でこうして得られたＲＭ−１７の処理菌体とＶ
Ｍ−２の処理菌体とを同１ｍ（細胞数１０８個／層ずつ
）とって混合し、集菌後混合物を等張渡０．１１１Ｉｌ
に懸濁させ、懸濁液にポリエチレングリコール水溶液（
注９）２層を添加した。この懸濁液を３０℃で１５分間
静置してプロトプラスト融合を完結した。ついで集菌後
、菌体を等張渡１ｒＩｌに懸濁し、懸濁液を２０’Ｃで
１５分間静置した。ついで懸濁液を等張渡で濃度１／１
０〜１／１０２に希釈し、希釈懸濁液を最小培地（注６
）に塗抹し、重層用培地（注１０）を重層した。この状
態で３０℃で４日間培養を行ない、優れた凝集性を有す
る融合株を２２株分離し、そのうちの１株を酵母サツ力
ロマイセＭ１７Ｍ２”微 ス（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ） Ｆ ＲＶ工研菌
奇第７７９２号〉とした。
Ｍ−２の処理菌体とを同１ｍ（細胞数１０８個／層ずつ
）とって混合し、集菌後混合物を等張渡０．１１１Ｉｌ
に懸濁させ、懸濁液にポリエチレングリコール水溶液（
注９）２層を添加した。この懸濁液を３０℃で１５分間
静置してプロトプラスト融合を完結した。ついで集菌後
、菌体を等張渡１ｒＩｌに懸濁し、懸濁液を２０’Ｃで
１５分間静置した。ついで懸濁液を等張渡で濃度１／１
０〜１／１０２に希釈し、希釈懸濁液を最小培地（注６
）に塗抹し、重層用培地（注１０）を重層した。この状
態で３０℃で４日間培養を行ない、優れた凝集性を有す
る融合株を２２株分離し、そのうちの１株を酵母サツ力
ロマイセＭ１７Ｍ２”微 ス（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ） Ｆ ＲＶ工研菌
奇第７７９２号〉とした。
なお、プロトプラスト融合に用いた両親株（ＲＭ−１７
とＶＭ−２’）は上記最小培地に生育できなかった。
とＶＭ−２’）は上記最小培地に生育できなかった。
■ 凝集性およびアルコール発酵能の測定ＩＦＯ−２０
１８、ＩＦＯ−Ｑ２２４、ＲＭ−１７、ＥＹ−１、ＶＭ
−２およびＦＲＶＭ１７ Ｍ２−１について、それぞれ凝集性の程度を示すＤＦ値
およびアルコール発酵能を測定した。
１８、ＩＦＯ−Ｑ２２４、ＲＭ−１７、ＥＹ−１、ＶＭ
−２およびＦＲＶＭ１７ Ｍ２−１について、それぞれ凝集性の程度を示すＤＦ値
およびアルコール発酵能を測定した。
ＤＦ値は前述した方法で求めた。
またアルコール発酵能は下記の方法で求めた。
すなわち沖縄産の廃糖蜜３４Ｃ１／／に硫酸アンモニウ
ム３．４ｑ ／ ｌとピロ亜硫酸カリウム０．２０ ／
ｌとを混合溶解した後、硫酸でｐＨを４．５に調整し
、混合液を３０００回転／分で１０分間遠心分離機にか
けた。こうして得られた上澄液を７０ｒＩｌずつとり、
多液にそれぞれ菌株の前培養液を７ｗＩ加え、これらを
３０℃で間欠撹拌（３０秒間撹拌と１０分間静置の反復
）して回分培養を行ない、２４時間後および４８時間後
の各培養液についてそれぞれエタノール生成量をガスク
ロマトグラフィーにより測定した。
ム３．４ｑ ／ ｌとピロ亜硫酸カリウム０．２０ ／
ｌとを混合溶解した後、硫酸でｐＨを４．５に調整し
、混合液を３０００回転／分で１０分間遠心分離機にか
けた。こうして得られた上澄液を７０ｒＩｌずつとり、
多液にそれぞれ菌株の前培養液を７ｗＩ加え、これらを
３０℃で間欠撹拌（３０秒間撹拌と１０分間静置の反復
）して回分培養を行ない、２４時間後および４８時間後
の各培養液についてそれぞれエタノール生成量をガスク
ロマトグラフィーにより測定した。
測定結果は下記表３のとおりである。
（以下余白）
表 ３
表３から明らかなように、ＲＭ−１７およびＶＭ−２は
変異株であるため、アルコール発酵能は野生型の親株の
発酵能より劣るが、融合株であるＦＲＶ −１は野
生株以上に優れＭ１７ Ｍま た凝集性を有しかつアルコール発酵能においても野生株
と比べて遜色がない。
変異株であるため、アルコール発酵能は野生型の親株の
発酵能より劣るが、融合株であるＦＲＶ −１は野
生株以上に優れＭ１７ Ｍま た凝集性を有しかつアルコール発酵能においても野生株
と比べて遜色がない。
■ 培地および試薬
培地および試薬はそれぞれつきのとおりである。
（注１） ＹＰＧ培地
酵母エキス 値０Ｑ／／ポリペプトン
２０ｇ／／グルコース ２
０９／／（注２） ＹＰＧ寒天培地 酵母エキス １０Ｑ／１ポリペプトン
２０Ｑ／１グルコース ２
０ｑ／／寒天 ２００／／（注３
） 胞子形成培地 酢酸ナトリウム ５Ｑ／／ 寒天 ２０Ｑ／ｌ（注４） リ
ン酸緩衝液 ０．１Ｍリン酸緩衝液 ｐＨ−７，５ （注５） 溶菌酵素溶液 ０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ１，５）にザイモリアーゼ
２０Ｔ（生化学工業社製）を０．０５％溶かした溶液２
ｒ１１１と、２−メルカプトエタノール１，４μｌとの
混合液 （注６） 最小培地 Ｄｉｆｃｏ−Ｙｅａｓｔ Ｎｉｔｒｏｇｅｎ Ｂａ５ｅ
ＷｌｏＡｍｉｎｏ ａｃｉｄ（Ｄｉｆｃｏ社製）
６．７ｇ／ １グルコース ２０Ｑ／
１寒天 ２０Ｑ／１（注７）
プロトプラスト調製液 １．５Ｍ塩化カリウム０．８ＩＩＩｌと、２／１５Ｍリ
ン酸緩衝液（ｐＨ７，５） １．０１１１１と、２−
メルカプトエタノール１，４μｌと、ザイモリアーゼ２
０Ｔ（生化学工業社製）を０．１Ｍリン緩衝液（ｐｔ−
１７，５）に０．２５％溶かした溶液０．２１１１との
混合液（注８） 等張渡 ０．６Ｍ塩化カリウム水溶液 （注９） ポリエチレングリコール水溶液塩化カルシ
ウム ５．６０ ／ ／ポリエチレングリコー
ル （ＰＥＧ−６ｏ００） ３００ａ／／（注１
０） 重層用培地 グルコース ２０Ｑ／１Ｄｉｆｃｏ−Ｙ
ｅａｓｔ Ｎｉｔｒｏｇｅｎ Ｂａ５ｅ ＷｌｏＡｍｉ
ｎｏ ａｃｉｄ（Ｄｉｆｃｏ社製） ６．７ｃｘ／
／Ｄｉｆｃｏ−Ｂａｃｔ ＡＱａｒ（ＤｉｆＣＯ’社製
）３０ａ／／ 以 上 特許出願人 日立造船 株式会社 外４名
２０ｇ／／グルコース ２
０９／／（注２） ＹＰＧ寒天培地 酵母エキス １０Ｑ／１ポリペプトン
２０Ｑ／１グルコース ２
０ｑ／／寒天 ２００／／（注３
） 胞子形成培地 酢酸ナトリウム ５Ｑ／／ 寒天 ２０Ｑ／ｌ（注４） リ
ン酸緩衝液 ０．１Ｍリン酸緩衝液 ｐＨ−７，５ （注５） 溶菌酵素溶液 ０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ１，５）にザイモリアーゼ
２０Ｔ（生化学工業社製）を０．０５％溶かした溶液２
ｒ１１１と、２−メルカプトエタノール１，４μｌとの
混合液 （注６） 最小培地 Ｄｉｆｃｏ−Ｙｅａｓｔ Ｎｉｔｒｏｇｅｎ Ｂａ５ｅ
ＷｌｏＡｍｉｎｏ ａｃｉｄ（Ｄｉｆｃｏ社製）
６．７ｇ／ １グルコース ２０Ｑ／
１寒天 ２０Ｑ／１（注７）
プロトプラスト調製液 １．５Ｍ塩化カリウム０．８ＩＩＩｌと、２／１５Ｍリ
ン酸緩衝液（ｐＨ７，５） １．０１１１１と、２−
メルカプトエタノール１，４μｌと、ザイモリアーゼ２
０Ｔ（生化学工業社製）を０．１Ｍリン緩衝液（ｐｔ−
１７，５）に０．２５％溶かした溶液０．２１１１との
混合液（注８） 等張渡 ０．６Ｍ塩化カリウム水溶液 （注９） ポリエチレングリコール水溶液塩化カルシ
ウム ５．６０ ／ ／ポリエチレングリコー
ル （ＰＥＧ−６ｏ００） ３００ａ／／（注１
０） 重層用培地 グルコース ２０Ｑ／１Ｄｉｆｃｏ−Ｙ
ｅａｓｔ Ｎｉｔｒｏｇｅｎ Ｂａ５ｅ ＷｌｏＡｍｉ
ｎｏ ａｃｉｄ（Ｄｉｆｃｏ社製） ６．７ｃｘ／
／Ｄｉｆｃｏ−Ｂａｃｔ ＡＱａｒ（ＤｉｆＣＯ’社製
）３０ａ／／ 以 上 特許出願人 日立造船 株式会社 外４名
Claims (4)
- （１）サッカロマイセス（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ
）属に属する凝集性を有しない酵母を胞子形成処理し、
得られた胞子を変異処理し、変異胞子から得られた優れ
た凝集性を有する変異酵母と、サッカロマイセス（Ｓａ
ｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）属に属する他の凝集性を有し
ない酵母とをプロトプラスト融合させることを特徴とす
る、優れた凝集性と優れたアルコール発酵能とを兼ね備
えた酵母の製造法。 - （２）ＤＦ値０の酵母サッカロマイセス・セルビシエ（
Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）
ＩＦＯ−０２２４を胞子形成処理し、得られた胞子を変
異処理し、変異胞子から得られた優れた凝集性を有する
変異酵母と、サッカロマイセス（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙ
ｃｅｓ）属に属する他の凝集性を有しない酵母とをプロ
トプラスト融合させて、優れた凝集性と優れたアルコー
ル発酵能とを兼ね備えた酵母を得る、特許請求の範囲第
１項記載の酵母の製造法。 - （３）ＤＦ値０の酵母サッカロマイセス・セルビシエ（
Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）
ＩＦＯ−０２２４を胞子形成処理し、得られた胞子を変
異処理し、変異胞子から得られたＤＦ値４の酵母サッカ
ロマイセス・セルビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ
ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）ＲＭ−１７（微工研菌寄第７
７７０号）と、ＤＦ値０の酵母サッカロマイセス・セル
ビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓ
ｉａｅ）ＶＭ−２（微工研菌寄第７７８８号）とをプロ
トプラスト融合させ、優れた凝集性と優れたアルコール
発酵能とを兼ね備えた酵母を得る、特許請求の範囲第１
項記載の製造法。 - （４）ＤＦ値０の酵母サッカロマイセス・セルビシエ（
Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）
ＩＦＯ−０２２４を胞子形成処理し、得られた胞子を変
異処理し、変異胞子から得られたＤＦ値４の酵母サッカ
ロマイセス・セルビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ
ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）ＲＭ−１７（微工研菌寄第７
７７０号）と、ＤＦ値０の酵母サッカロマイセス・セル
ビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓ
ｉａｅ）ＶＭ−２（微工研菌寄第７７８８号）とをプロ
トプラスト融合させ、ＤＦ値５の酵母サッカロマイセス
（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）ＦＲ＿Ｍ＿１＿７Ｖ＿
Ｍ＿２−１（微工研菌寄第７７９２号）を得る、特許請
求の範囲第１項記載の製造法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP59230895A JPS61108376A (ja) | 1984-10-31 | 1984-10-31 | 凝集性と発酵能を備えた酵母の製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP59230895A JPS61108376A (ja) | 1984-10-31 | 1984-10-31 | 凝集性と発酵能を備えた酵母の製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS61108376A true JPS61108376A (ja) | 1986-05-27 |
| JPS6365310B2 JPS6365310B2 (ja) | 1988-12-15 |
Family
ID=16914978
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP59230895A Granted JPS61108376A (ja) | 1984-10-31 | 1984-10-31 | 凝集性と発酵能を備えた酵母の製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS61108376A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS6344880A (ja) * | 1986-08-12 | 1988-02-25 | Hitachi Zosen Corp | 新規凝集性酵母、その製造法およびこれを用いるアルコ−ル発酵法 |
-
1984
- 1984-10-31 JP JP59230895A patent/JPS61108376A/ja active Granted
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS6344880A (ja) * | 1986-08-12 | 1988-02-25 | Hitachi Zosen Corp | 新規凝集性酵母、その製造法およびこれを用いるアルコ−ル発酵法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS6365310B2 (ja) | 1988-12-15 |
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