JPS63240775A - アルコ−ル発酵力の高い酵母菌株 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用方法） この発明は、例えば甜菜糖蜜を原料とするアルコールの
生産においてアルコール発酵力の高い酵母菌株に関する
ものである。

（従来の技術） 甘蔗糖蜜はアルコール発酵の原料或はパン酵母培養等多
方面に利用されている。

これに対して甜菜から砂糖を分離した後に排出される甜
菜糖蜜は、現在のところ飼料用添加物として利用されて
いるに過ず、その用途は限られている。

甜菜１蜜の用途拡大の一つとしてアルコール発酵による
スピリッツの生産が考えられるが、本発明者等は先に、
サツカロマイセス（ＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅＳ）属セ
レエウィジェ（ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）に属する凝集性
の１８０株（国税庁醸造試験新番号）及びキラー性の９
０９−１株（国税庁醸造試験新番号）の２株の酵母菌株
か甜菜糖蜜並びに甘蔗糖蜜に対して優れたアルコール発
酵力を示すことを見出した。

（発明か解決しようとする問題点） しかし、酵母菌株を使用して工業的にアルコール発酵に
よりアルコール生産を行なわせる場合、野生酵母に対す
るキラー性、及び凝集性等が要求されるか、上記酵母菌
株はキラー性、凝集性何れか一方の性質しか有していな
い。

（問題点を解決するための手段） この発明は、上記実情に鑑み、醒菜糖蜜を原料としてア
ルコール発酵を行なわせた場合にもアルコール分及び発
酵歩合が高く、しかもキラー性、凝集性向れの性質をも
兼備えた酵母菌株を見出すべく鋭意実験と研究を重ねた
結果、サツカロマイセス（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ
）属セレエウィジｘ　（ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）　Ｈ−
１株で表示される酵母菌株及びその変異株であってサツ
カロマイセス（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）属セレエ
ヴイジｚ　（ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）　Ｍ　−９株て表
示される酵母菌株が上述の目的に適う酵母菌株であるこ
とを見出したものである。

この発明に係るサツカロマイセス（５ａｃｃｈａｒｏＩ
Ｉｙｃｅｓ）属セレエヴイジｘ　（ｃｅｒｅｖｉｓｉａ
ｅ）　Ｈ−１株及びＭ−９株は、工業技術院微生物工業
技術研究所に微工研菌寄第８８８５号及び微工研菌寄第
９４０１号として寄託されている。

上記Ｈ−１株はサツカロマイセス（Ｓａｃｃｈａｒｏｍ
ｙｃｅｓ）属セレエヴイジｘ　（ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ
）の９０９−１株とサツカロマイセス（Ｓａｃｃｈａｒ
ｏｍｙｃｅｓ）属セレエヴイジェ（ｃｅｒｅｖｉｓｉａ
ｅ）の１８０株を親株とするもので、親株である９０９
−１株（２倍体）はへテロタリツクなキラー酵母であり
、サツカロマイセス（Ｓａｃｃｈａ、ｒｏｌＩｌｙｃｅ
ｓ）属セレエヴイジ、：ｃ　（ｃｅｒｅｖｉｓｉａｃ）
の１８０株（２倍体）はホモタリックな凝集性酵母であ
り、Ｈ−１株の製造は次の要領で行なう。

キラー性酵母であるサツカロマイセス（５ａｃｃｈａｒ
ｏＢｃｅｓ）属セレエヴイシエ（ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ
）の９０９−１株（ヘテロタリック、２倍体）を胞子形
成させ、細胞壁溶解酵素（Ｚｙｍｏｌｙａｓｅ　１０Ｏ
Ｔ）て胞子を露出分散させた後、完全培地（ＹＰＤプレ
ート）上でコロニーを生育させる。生育したコロニーに
ついて甜菜糖蜜によるアルコール発酵力や発酵後半の生
存率等てスクリーニングし、優れた半数体く接合型ａ）
を分離した。これをＡ−４株とする。

一方、凝集性酵母であるサツカロマイセス（Ｓａｃｃｈ
ａｒｏｍｙｃｅｓ）属セレエウィシｘ　（ｃｅｒｅｖｉ
ｓｉａｅ）の１８０株（完全ホモタリツク、２倍体）を
胞子形成させ、形成した子のう胞子４分子の各々に上記
Ａ−４株を胞子対細胞（ｓｐｏｒｅ　ｔｏ　ｃｅｌｌ）
て直接接合させる。約１７２の確立で接合するか、この
接合子の形成を確認しつつ、この接合子を完全培地上で
培養し、コロニーの数珠を得る。これらの接合株につい
て甜菜糖蜜によるアルコール発酵力と発酵後半の生存率
でスクリーニングを行ない、その中て発酵力及び発酵後
半の生存率の高い株を選択した。これがこの発明に係る
Ｈ−１株である。

このＨ−１株のｒ　”Ｔｈｅ　Ｙｅａｓｔ　”　ａ　ｔ
ａｘｏｎｏｍｉｃｓｔｕｄｙ　３ｒｄ　ｅｄ（Ｎ、Ｊ、
Ｗ、Ｋｒｅｇｅｒ−ｖａｎ　Ｒｉｊ編）」によルタキソ
ノミ・ンクテスト（ＴへｘＯＮＯＭＩＣＴＥＳＴＳ）の
結果は下記に示す通りである。

胞子形成（Ｓｐｏｒｅ　Ｆｏｒｍａｔｉｏｎ）　：陽性
糖類の発酵ニゲルコース、ガラクトース、スクロース、
マルトース、ラフィノース　いずれも陽性 炭素源の資化性ニゲルコース、ガラクトース、スクロー
ス、マルトース、トレハロース、ラフィノース、α−メ
チル−Ｄ−タルコサイトいずれも陽性、メレチトース、
ＤＬ−乳酸いずれも弱陽性 硝酸塩の資化性：なし ビタミン要求性、なし ３７°Ｃにおける生育：あり １０％食塩培地における生育：あり これによりＨ−１株はサツカロマイセス（３ａｃｃｈａ
ｒｏｌＩｌｙｃｅｓ）属セレエウ°イジｘ　（ｃｅｒｅ
ｖｉｓｉａｅ）であると、同定された。

更に１本願発明者等は上記Ｈ−１株より優れた発酵力の
強い酵母を得る目的で研究を行なった。

即ち、本願発明者等の研究によれば、甜菜糖蜜のアルコ
ール発酵後の蒸留廃液（以下、ウェストと略す）中て酵
母を培養すると死滅していくという現象か認められた。

これは、ウェスト中に何等かの増殖阻害物質が存在する
と考えられるか、その阻害物質に耐性のあるＨ−１株の
変異株を取得することによって、よりアルコール発酵力
の強い酵母か取得てきるとの結論に達した。

そこて、Ｈ−１株の変異株であるＭ−９株の製法は次の
要領で行なう。

即ち、Ｈ−１株を甜菜糖蜜のアルコール発酵後のウェス
ト中て培養を繰返し、培養後の菌体なウェスト寒天培地
に接種し、培養してコロニーを生育させる。生育したコ
ロニーについて甜菜糖蜜によるアルコール発酵力や発酵
後半の生存率等でスクリーニングし、優れた株を分離し
た。これをＷ−９株とする。

更に、Ｗ−９株を２−デオキシクルコース（２ＤＯＧ）
入り甜菜糖糖蜜中で培養を繰返し、培養後の菌株を２Ｄ
ＯＧ入り甜菜糖蜜寒天培地に接種し、培養してコロニー
を生育させる。これによってカタボライトリプレッショ
ンが解除されたコロニーが得られる。このコロニーにつ
いて再び甜菜糖蜜によるアルコール発酵力や発酵後半の
生存率等てスクリーニングし、優れた発酵力を持つ株を
分離した。これかこの発明に係るＭ−９株である。

このＭ−９株について前記Ｈ−１株と同様なタキソノミ
ック　テストを行なったところ前記同様な結果か得られ
た。

この結果Ｍ−９株はサツカロマイセス（Ｓａｃｃｈａｒ
ｏｍｙｃｅｓ）属セレエヴイジｚ　（ｃｅｒｅｖｉｓｉ
ａｅ）であって、Ｈ−１株の変異株であると同定された
。

（発明の効果） 更に、本願発明者等の研究によればＨ−１株及びＭ−９
株には甜菜糖蜜等に優れたアルコール発酵力を示すと共
に、凝集性、キラー性、連続利用性、発酵力の再現性等
についても優れた性質を有している。特に、Ｍ−９株は
凝集性及び連続利用性、発酵力の再現性について親株で
あるＨ−１株より優れた性質を有している。

なお、上記菌株を利用してアルコール生産を行なう場合
の原料としては、甜菜糖蜜の他に、甘蔗糖蜜、甘藷、馬
鈴薯、とうもろこし、キャッサハ、米、農産廃棄物、お
よびこれらの加水分解物等を使用することができる。ま
た、この発明に係る菌株はキラー性かあるのて、滅菌工
程を簡略化し、例えば無蒸煮物を原料とすることもてき
る。

アルコール発酵のための上記菌株の使用量は、原料の種
類により異なるか、甜菜糖蜜を原料とした回分発酵の場
合、１０５〜１０８Ｃｅ１１Ｓ／ＩＭ１の植菌量てよく
、また連続利用の場合も１（１５〜ｌ０９ｃｅｌｌｓ／
ｍｌの槽内菌体濃度てよい。

更に、アルコール発酵条件は、一般にＰＨ４〜６、温度
は２５〜３７℃（好ましくは３０°Ｃ付近）である。

アルコール発酵方法は、攪拌槽による回分発酵法でも連
続利用法てもよい。回分法で行なう場合は主にスピリッ
ツ等の生産に適し、連続法の場合は主に燃料アルコール
の生産に適する。

なお１この発明に係るＨ−１株及びＭ−９株は凝集沈降
性かよいので、連続利用法を使用した場合、高濃度仕込
の発酵を行なうことがてき、また沈降槽も特別な分離手
段を設けることなく、コンパクトなものにすることかで
きるなどの利点がある。

（実施例） 以下、この発明の実施例を示す。

実施例１（Ｈ−１株の育種法） キラー性酵母であるサツカロマイセス（Ｓａｃｃｈａｒ
ｏｍｙｃｅｓ）屈セレエウ゛イシｘ　（ｃｅｒｃｖｉｓ
ｉａｅ）　９０９−１株（ヘテロタリ・ンク　２倍体）
を胞子形成培Ｊｆ！！　（酢酸カリウム１ｚ、イースト
エキス０．２ｚ、クルコース０．２ｚ、寒天２％）て胞
子形成させる。形成した子のう胞子４分子について細胞
壁溶解酵素＜ｌｙｍｏｌｙａｓｅ　１００Ｔ）て胞子を
露出分散させた後、マイクロマニプレータて解剖し、完
全培地（イーストエキス１ｚ、ペプトン２ｚ、グルコー
ス２ｚ、寒天２２）に接種、培養し、生育したコロニー
について下記の条件て発酵テストを行なった。

［発酵テストの条件コ 前培養、甜菜糖蜜を全糖分１０％　、ＰＨ５，０、ＫＨ
２ＰＯ４を７００ｐｐｍとなるように培養培地を調整し
、オートクレーブ後、保存スラントより一白金耳接種し
、３０°Ｃ１２日間振どう培養を行なう。

発酵試験：甜菜糖蜜を全糖分２４Ｌ　　ＰＩ＋５．０に
なるように培養培地を調整し、オートクレーブを行ない
、その２５ａ１に前培養酵母懸濁液を４．０×１０’ｃ
ｅｌｌｓ／ｍｌとなるように接種した。

発酵力の最も優れ、しかも発酵後半でも生存率の高いＡ
−４株を取得した。

一方、サツカロマイセス（５ａｃｃｈａｒｏ［ｌ１ｙｃ
ｅｓ）属セレエウイシｘ　（ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）の
１８０株（完全ホモタリック、２倍体）を胞子形成培地
上て培養し、形成した子のう胞子４分子の各々と上記Ａ
−４株とを胞子対細胞（ｓｐｏｒｅ　ｔｏ　ｃｅｌｌ）
で直接接合させる。これを３０°Ｃ程度の温度で完全培
地上で培養し、顕微鏡下で接合子の形成を経時的に確認
して接合子を形成したものを性的交雑（ｍａｔｉｎｇ）
　Ｌ／た株として選択し、再び上記の発酵テストを行な
い、その中て発酵力及び発酵後半の生存率の高い株を選
択した。このようにしてＨ−１株を得た。

上記製法によるＨ−１株製造と同程度の発酵力を有する
菌株の出現率は７０％以上である。

実施例２（！ｉｔ菜糖蜜を原料とする３０°ＣてのＨ−
１株によるエタノール発酵テスト） 前培養：実施例１と同し 発酵試験：甜菜側布を全糖分２４２．Ｐ１１５．０、Ｋ
ｌＩ□Ｐ０．７００ｐｐｍに培養培地調整した。この培
養培地を用い、１０１００Ｏ容発酵瓶（実仕込量５００
＋ｎｌ）内てＨ−１株を、培養温度３０℃、ＰＨ５，０
、緩速攪拌（１００〜２００ｒｐｍ）、鎌気条件下て培
養し、エタノール発酵を行なった。

比較のためＨ−１株の親株である９０９−１株、Ａ−４
株、１８０株を同一条件下でエタノール発酵を行なわせ
た。この結果を第１図及び第２図に示す。

第１．２図の結果から親株９０９−１株については、エ
タノール生産速度は比較的速いか、３日後て１２Ｖ／Ｖ
％と頭打ちになり、菌体生存率も急速に下降する。

これに対して９０９−１株より分離したＡ−４株は３日
以降もエタノール生産速度は下降しないか、エタノール
の生産は１２．５Ｖ／Ｖ＄程度に留まっている。

一方、１８０株は立ちあがりがやや遅れているか、５日
後ても徐々にではあるが、エタノールを生産しており、
生存率も極めて高いが、エタノールの生産は１２Ｖ／Ｖ
％に留まっている。

これに対してＨ−１株は初期エタノール生産速度が９０
９−１株、Ａ−４株、１８０株を上廻り、しかもエタノ
ールの生産は５日後で１３Ｖ／Ｖ％に達する。したかっ
て最終エタノール濃度も９０９−１株、１８０株より短
時間内にｌ　Ｖ／Ｖｘ上廻る結果となる。

実施例３（甘蔗ａ蜜を原料とする３０’ＣてのＨ−１株
によるエタノール発酵テスト） 前項Ｈ：２％ＹＭ培地（市版品Ｄｉｆｃｏ社製、　ＹＭ
　ｂｒ。

ｔｈ）をオートクレーブ後、保存スラントより一白金耳
接種し、３０°Ｃ１２日間振どう培養を行なう。

発酵試験：甘蔗糖蜜を全糖分２４％　、　Ｐｌ＋５．０
になるように培養培地を調整し、助成剤として（ＮＨ４
）２Ｓ０，０．　ＩＬ　ＫＨ□ＰＯ，０，１％を加え、
オートクレーブ後、その２５０ｍ１に前培養酵母懸濁液
を４．０×１０７ｃｅｌｌｓ／ｌｌ１ｌとなるようにＨ
−１株を接種してエタノール発酵を行なった。

比較のため９０９−１株、１８０株と従来甘蔗糖蜜アル
コール発酵の実用株として使用されてきた台研（Ｔａｉ
ｋｅｎ）３９６株を同一条件下で行なわせた。この結果
を第３図に示す。

第３図より明らかなように、甘蔗糖蜜な同一糖濃度の甜
菜糖蜜とを比べると、上記何れの酵母菌株を使用したエ
タノール発酵テスｌ〜においても発酵の立ちあかりは極
めて速く、３日後に１３Ｖ／Ｖ＄以上になった。

このうち、Ｈ−１株、９０９−１株、１８０株ハ従来ノ
実用株であるＴａ１ｋｅｎ　３９６株に比べて立ちあが
りか速く、特にこの発明に係るＨ−１株は立ちあがりが
速いことか明らかとなった。

実施例４（Ｈ−１株の凝集沈降テスト）Ｈ−１株並びに
対照として９０９−１株を、温度３０°Ｃ１嫌気条件、
攪拌下て培養したとき、攪拌時の培養液及び攪拌終了後
１分間静養後の培養液にツイテ濁度（０，Ｄ：波長６６
０ｎｍ、　１０１１１１１１（？　）Ｌｔによる吸光度
）と培養液中に占る菌体の容量百分率（Ｖ／Ｖ％）を以
下に示す。

濁度（０，Ｄ） 攪拌時（０，Ｄ）　　　静置工分後（０，Ｄ）Ｈ−１株
　８．５６　　　　　　０．１２９０９−１株８．４４
　　　　　７．２０培養液に占る菌体の容量百分率（％
） 攪拌時（ｚ）　　　静置１分後＜’ｔ、＞Ｈ−１株　＋
００　　　５　（９５％は上澄み）９０９−１株　１０
０　　　９８（２鬼は上澄み）以上の結果より明らかな
ように、９０９−１株を使用した場合攪拌終了後１分間
静置しても懸濁状態にあったか、Ｈ−１株においては攪
拌を停止すると、直ちに凝集沈降し、１分以内に完全に
沈降分離した。この場合、菌体は沈降圧密されて培養液
全容績の１７１０以下となり、上澄みは菌体を含まず透
明となり、強い凝集力を示す。

このＨ−１株の性質により、培養後の菌体分離工程にお
いて、遠心分＃機やセパレータ等の機器を使用すること
なく、単に静置するだけで、数分のうちに培養液から菌
体分離が可能となり、直ちに上澄み液は蒸留工程等へ送
り、沈降菌体はリサイクルして再利用することが可能と
なる。

実施例５（Ｈ−１株の連続利用性） 前培養：甜菜糖蜜を全糖分１０％　、　ＰＩ！５．０．
　ＫＩＩ□Ｐ０４か７圓ｐｐｍ含まれるように培養培地
を調整後、スラントから１白金耳接種、３０°Ｃ，２日
間振どう培養する。

発酵試験　全糖分２８％、ＰＩ！５．０に調整した甜菜
糖蜜２５０ｍ１　ヘ初発菌数か５　Ｘ　ＩＯ’ｃｃｌｌ
ｓ／ｍｌ　となるよう発酵させ、発酵後、上澄みを捨て
再び上記甜菜糖蜜を添加し、発酵を行なわせ、この操作
を４回繰り返して行なった。

発酵は、全て発酵栓を付けて嫌気条件の下て行ない、攪
拌はマクネテック　スターラー約２００’ｒｐｍで行な
った。

Ｅｔｈａｎｏｌ　　初発菌数　発酵後菌数（Ｖ／Ｖ％）
　　（ｃｅｌｌｓ／ｍｌ）　　（ｃｅｌｌｓ／ｍ１）１
回目　　　１３．２　　５．Ｏｘ　１０’　　　３．４
ｘ　１０’２回目　　　　１２．７　　３．４　ｘ　１
０５４．Ｏｘ　１０′３３回目　　　１：１．０　　４
．Ｏｘ　１０’　　　３．５ｘ　１０’４回目　　　１
３．０　　３．５　ｘ　１０’　　　３．Ｏｘ　１０’
実施例６（Ｈ−１株のキラー性） 培養培地として全糖分２４％、ＰＨ５，０の甜菜糖蜜を
用い、協会７０１号（Ｋ−７０１）を酵母ｆｉ５　Ｘ　
１０Ｑｃｅｌｌｓ／ｍｌと、Ｈ−１株を酵母数５　Ｘ　
１０７ｃｅｌｌｓ／ｍｌとなる様に接種し、３０°Ｃて
攪拌して混合培養して培養後１日後のに一７０１株の生
菌数をβ−アラニンプレートでカウントした。

また、対照として同一条件でに一７０１株のみを接種、
培養してその生菌数をカウントした。

甜菜Ｓ室中の生菌数（ｅｅｌ　Ｉｓ／ｍｌ）以上の結果
より明らかなように、接種時にはＨ−１株の１０倍存在
していたに〜７０１株は１日後て約１／１０００となり
死滅して行くことかわかる。〜方Ｈ−１株の菌数は変ら
ず、この結果Ｈ−１株に他の酵母に対するキラー性かあ
ることか明らかとなフた。

実施例７　（Ｍ−９株の育種法） 実施例１で得られたキラー性凝集性酵母であるサツカロ
マイセス（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）属セレエウイ
シｘ　（ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）　Ｈ−１株をウェスト
培地（Ｔ。

Ｃ５０，ＯＯＯＰＰＭ、全糖分２．５Ｌｐｆ１５．０）
テ培養シ、３０°Ｃての培養後の生存菌体を再び上記ウ
ェスト培地に接種し培養を行ない、このプロセスを１１
）回繰返して行なった。培養後の菌体なウェスト寒天培
地（寒天２％）に接種、３０°Ｃて培養し、生育したコ
ロニーについて下記の条件で発酵テストを行なった。

［発酵テストの条件コ 前培養：甜菜糖蜜な全糖分ＩＯ’Ｌ　、　ＰＨ５，０、
ＫＨ２１’０４を７（１（１１）ｌ）ｆｆ＋となるよう
に培養培地を調整し。

オートクレーフ後、保存スラントより一白金耳接種し、
３０°Ｃ２２日間振どう培養を行なう。

発酵試験：　ｇｔｔ菜糖蜜を全糖分２信、　ＰＨ５，０
になるように培養培地を調整し、オートクレーフを行な
い、その２５０１に前培養酵母懸濁液を４．０×１０’
ｃｃｌｌｓ／ｍｌ　となるように接種した。

発酵力の最も優れ、しかも発酵後半ても生存率の高いＷ
〜９株を取得した。

更に、甜菜糖蜜培地（全糖分１０％ｐＨ５，０ＫＩＩ２
Ｐ０．７００ｐｐｍ）へ２−デオキシクルコースを１５
０ｐｐｍとなるように加え、Ｗ−９株を接種し、培養を
行なった。培養後、上記組成の２−デオキシグリコース
入り甜菜糖蜜寒天培地（寒天２Ｘ）上に生育するコロニ
ーを釣り、同一操作を繰返して３回行なう。培養後の菌
体を上記寒天培地に接種、培養し、生育したコロニーに
ついて前述の条件で発酵テストを行なった。その結果発
酵力の最も優れ、しかも発酵後半ても生存率の高いＭ−
９株を取得した。

実施例８（甜菜糖蜜を原料とする３０°ＣでのＭ−９株
によるエタノール発酵テスト） 前培養・実施例７と同じ 発酵試験：甜菜糖蜜を全糖分２４％、Ｐ１１５．０、Ｋ
＋１２ＰＯ４７００ｐｐｍに培養培地調整した。この培
養培地を用い、１０１００Ｏ容発酵瓶（実仕込１５００
ａ＋Ｉ）内てＭ−９株を、Ｉ　Ｘ　１０’ｃｅｕｓ／ｍ
ｌとなるように接種し、培養温度３０℃、緩速攪拌（１
００〜２００　ｒｐｎ＋）、嫌気条件下て培養し、エタ
ノール発酵を行なった。

比較のためＭ−９株の親株であるＨ−１株を同一条件下
てエタノール発酵を行なわせた。この結果を第４図に示
す。

この結果から親株については、エタノール生産速度は、
比較的速いか、５日後の１２．８Ｖ／Ｖ鬼て頭打ちとな
った。

これに対して、Ｍ−９株は、初期エタノール生産速度か
Ｈ−１株を上まわり、しかもエタノールの生産は、５日
後で］　３．５Ｖ／Ｖ％に達する。したかって、最終エ
タノール濃度もＨ−１株より短時間のうちにＩＶ／Ｖ％
上まわる結果となった。

また、発酵５日後の生菌数を下表に示す。

発酵５日後の生菌数（ｃｅ　ｌ　Ｉｓ／ｍ　Ｉ）この結
果より明らかなように、Ｍ−９株は発酵後半てもＨ−１
株より７倍多い菌体が存在し、接種時の菌数を維持して
いた。

実施例９　（Ｍ−９株の連続利用性） Ｍ−９株を用い、回分発酵を繰返し実験を行なった。

前培養：実施例７と同じ 発酵試験二全糖分１！Ｊ　、　ｐＨ５，０に調整した甜
菜糖蜜２５０ｍ１へ初期菌数が１　ｘ　ｌ０８ｃｅｌｌ
ｓ／ｍｌとなるように前培養酵母懸濁液を接種し、３０
’Ｃて攪拌し、２日間発酵させ、発酵後１０分静置し、
上澄みを捨て、再び上記糖濃度の甜菜糖蜜を添加し、回
分発酵を行なわせ、この操作を５回繰返して行なった。

発酵は、全て発酵枠を付けて嫌気条件の下て行ない、攪
拌はマクネチックスターラーで約１１００ｒｐ回転して
行なった。この結果を第５図及び下表に示す。

第５図に明らかなように、連続利用により生ノ％される
アルコールは、糖濃度１５％の場合安定しており、また
上記表より酵母の生菌数は、接種時の菌数を維持するこ
とが明らかとなった。また、発酵終了後短時間て、且つ
静止するたけて容易に本酵母は沈殿し、密度の高いスラ
リーを形成するため、短時間で、清澄な発酵液を得るこ
とかてきる。

【図面の簡単な説明】

第１図は、実施例２におけるエタノール生産の経口変化
を示す図、第２図は、同じ〈実施例２における生菌数の
経日変化を示す図、第３図は、実施例３におけるエタノ
ール生産の経日変化を示す図、第４図は実施例８におけ
るエタノール生産の経口変化を示す図、第５図は実施例
９におけるアルコール発酵毎のエタノール生産の推移を
示す図である。 第２図 第３図 時間（り 第４図 時間（印

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. （１）サッカロマイセス（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ
   ）属セレエヴィジェ（ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）Ｈ−１株
   （微工研菌寄第８８８５号）で表示されるアルコール発
   酵力の高い酵母菌株。
2. （２）サッカロマイセス（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ
   ）属セレエヴィジェ（ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）Ｍ−９株
   （微工研菌寄第９４０１号）で表示されるアルコール発
   酵力の高い酵母菌株。