JPS61106519A - 生理活性物質の精製方法及びそれに使用する吸着用担体並びに装置 - Google Patents
生理活性物質の精製方法及びそれに使用する吸着用担体並びに装置Info
- Publication number
- JPS61106519A JPS61106519A JP59228560A JP22856084A JPS61106519A JP S61106519 A JPS61106519 A JP S61106519A JP 59228560 A JP59228560 A JP 59228560A JP 22856084 A JP22856084 A JP 22856084A JP S61106519 A JPS61106519 A JP S61106519A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- physiologically active
- active substance
- adsorption carrier
- substance
- reaction tank
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
- G01N33/54313—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals the carrier being characterised by its particulate form
- G01N33/54326—Magnetic particles
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61M—DEVICES FOR INTRODUCING MEDIA INTO, OR ONTO, THE BODY; DEVICES FOR TRANSDUCING BODY MEDIA OR FOR TAKING MEDIA FROM THE BODY; DEVICES FOR PRODUCING OR ENDING SLEEP OR STUPOR
- A61M1/00—Suction or pumping devices for medical purposes; Devices for carrying-off, for treatment of, or for carrying-over, body-liquids; Drainage systems
- A61M1/36—Other treatment of blood in a by-pass of the natural circulatory system, e.g. temperature adaptation, irradiation ; Extra-corporeal blood circuits
- A61M1/3618—Magnetic separation
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61M—DEVICES FOR INTRODUCING MEDIA INTO, OR ONTO, THE BODY; DEVICES FOR TRANSDUCING BODY MEDIA OR FOR TAKING MEDIA FROM THE BODY; DEVICES FOR PRODUCING OR ENDING SLEEP OR STUPOR
- A61M1/00—Suction or pumping devices for medical purposes; Devices for carrying-off, for treatment of, or for carrying-over, body-liquids; Drainage systems
- A61M1/36—Other treatment of blood in a by-pass of the natural circulatory system, e.g. temperature adaptation, irradiation ; Extra-corporeal blood circuits
- A61M1/362—Other treatment of blood in a by-pass of the natural circulatory system, e.g. temperature adaptation, irradiation ; Extra-corporeal blood circuits changing physical properties of target cells by binding them to added particles to facilitate their subsequent separation from other cells, e.g. immunoaffinity
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Vascular Medicine (AREA)
- Heart & Thoracic Surgery (AREA)
- Hematology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Anesthesiology (AREA)
- Cardiology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Pathology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- External Artificial Organs (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Treatment Of Liquids With Adsorbents In General (AREA)
- Solid-Sorbent Or Filter-Aiding Compositions (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〔産業上の利用分野〕
本発明は生理活性物質を特異的に効率よく精製するｊｉ
！１Ｍ方法及びそれに使用する吸着用担体並びに装置に
関するものである。
！１Ｍ方法及びそれに使用する吸着用担体並びに装置に
関するものである。
現在、生体の各組織又は培養液から各種のホルモン、抗
体、生理活性ペプチド等が回収、濃縮されている。
体、生理活性ペプチド等が回収、濃縮されている。
しかし、これらの回収、ａ１１工程においては、除蛋白
、イオン交換カラムクロマトグラフィー、分子フルイカ
ラムクロマトグラフィー等の操作を行なわなければなら
ないため、これらの工程は工業化の際に大きなランニン
グコストを占め、工業化の妨げとなっている。
、イオン交換カラムクロマトグラフィー、分子フルイカ
ラムクロマトグラフィー等の操作を行なわなければなら
ないため、これらの工程は工業化の際に大きなランニン
グコストを占め、工業化の妨げとなっている。
１ｉ１１記工程を簡易高能率とする事は産業上極めて重
要な事項であるため、本発明者はこの工程を工業的によ
り高効率とするべく鋭意研究し、本発明を完成した。
要な事項であるため、本発明者はこの工程を工業的によ
り高効率とするべく鋭意研究し、本発明を完成した。
本発明の生理活性物質の吸着用担体は、磁性鉄を包含し
たポリスチレンビーズの表面に、カルボキシル基又はア
ミノ基を導入し、該カルボキシル基又はアミノ基を介し
て生理活性物質と反応する物質を結合する事により構成
した。
たポリスチレンビーズの表面に、カルボキシル基又はア
ミノ基を導入し、該カルボキシル基又はアミノ基を介し
て生理活性物質と反応する物質を結合する事により構成
した。
ここで、磁性鉄を包含したポリスチレンビーズとは、鉄
粉或は磁性鉄粉を核としてその周囲にポリスチレンをコ
ーティングしたものである（以下磁性ビーズとする）。
粉或は磁性鉄粉を核としてその周囲にポリスチレンをコ
ーティングしたものである（以下磁性ビーズとする）。
飛
該磁性ビーズにカルボキシル基或はアミノ基を導入する
場合は、例えば二官能性物質を磁性ビーズの表面に化学
的に結合し、遊離のカルボキシル基又はアミノ基を多数
配列させる。
場合は、例えば二官能性物質を磁性ビーズの表面に化学
的に結合し、遊離のカルボキシル基又はアミノ基を多数
配列させる。
磁性ビーズ表面に導入したカルボキシル基又はアミノ基
に結合する物質は、免疫グロブリンＧ（［ｇＧ）と結合
するプロティンＡ（ブドウ状球菌由来〕、各免疫グロブ
リンクラス（ｒｇＧ、 ＴｓＭ、ｒｇ＾、 ■ｓＥ）に
対す抗体等がある。これらの物質を酸アミド結合により
、磁性ビーズ衷面に導入したカルボキシル基又はアミノ
基に結合する事ができる。
に結合する物質は、免疫グロブリンＧ（［ｇＧ）と結合
するプロティンＡ（ブドウ状球菌由来〕、各免疫グロブ
リンクラス（ｒｇＧ、 ＴｓＭ、ｒｇ＾、 ■ｓＥ）に
対す抗体等がある。これらの物質を酸アミド結合により
、磁性ビーズ衷面に導入したカルボキシル基又はアミノ
基に結合する事ができる。
又、生理活性物質の＃ｌ１ｌｉに使用する装置は、反応
槽と、永久磁石又は電磁石を埋設した攪拌羽根を下端に
有する撹拌棒と、該撹拌棒を前記反応槽内で回転させる
ための駆動モータと、油記攪拌棒及び駆動モータを昇降
させる昇降装置とにより構成した。
槽と、永久磁石又は電磁石を埋設した攪拌羽根を下端に
有する撹拌棒と、該撹拌棒を前記反応槽内で回転させる
ための駆動モータと、油記攪拌棒及び駆動モータを昇降
させる昇降装置とにより構成した。
ここで、反応槽はステンレス等の金」、ホーロー容器、
ポリエチレン等のプラスチック、ガ （５
，１よ、工ｔ□９．。６゜、９６．□ （□鉄粉を
用いた磁性ビーズを使用する場合は非鉄製の反応槽を用
いる事が望ましい。必要な場合には内面をシリコン処理
するか或はメチル基を導入して疎水処理してもよい。又
、反応槽の外周に恒温水槽を設置してもよい。
ポリエチレン等のプラスチック、ガ （５
，１よ、工ｔ□９．。６゜、９６．□ （□鉄粉を
用いた磁性ビーズを使用する場合は非鉄製の反応槽を用
いる事が望ましい。必要な場合には内面をシリコン処理
するか或はメチル基を導入して疎水処理してもよい。又
、反応槽の外周に恒温水槽を設置してもよい。
撹拌棒はテフロン、疎水処理したガラス、疎水処理した
ステンレス等により形成し、下端に取り付けた攪拌羽根
は該撹拌棒の回転による遠心ツノにより開閉可能として
もよい。該攪拌羽根の先端に電磁石を取り付けた場合に
は、該攪拌羽根及び撹拌棒の中に電線を埋設しておく。
ステンレス等により形成し、下端に取り付けた攪拌羽根
は該撹拌棒の回転による遠心ツノにより開閉可能として
もよい。該攪拌羽根の先端に電磁石を取り付けた場合に
は、該攪拌羽根及び撹拌棒の中に電線を埋設しておく。
撹拌棒を回転させる回転用モータを昇降させる昇降器は
、ネジ切りロッド或はシリンダ等を使用する事ができる
。
、ネジ切りロッド或はシリンダ等を使用する事ができる
。
更に、本発明の生理活性物質の精製方法は、生理活性物
質を含有する溶液に、磁性鉄を包含し且つ該生理活性物
質と特異的に結合する物質を表面に結合した吸着用担体
を懸濁し、生理活性物質を結合した吸着用担体を磁力を
利用して分離し、しかる後吸着用担体から生理活性物質
を解離して回収する事を特徴とする。
質を含有する溶液に、磁性鉄を包含し且つ該生理活性物
質と特異的に結合する物質を表面に結合した吸着用担体
を懸濁し、生理活性物質を結合した吸着用担体を磁力を
利用して分離し、しかる後吸着用担体から生理活性物質
を解離して回収する事を特徴とする。
生理活性物質としては各種のホルモン、抗体、生理活性
ペプチド、抗原物質、酵素等があり、これらを含有する
溶液としては生体組織の抽出液、動物又は植物細胞の培
養液が用いられる。
ペプチド、抗原物質、酵素等があり、これらを含有する
溶液としては生体組織の抽出液、動物又は植物細胞の培
養液が用いられる。
これらの溶液は予め遠心分離操作により、浮遊物、沈殿
物を除去しておくとよい。
物を除去しておくとよい。
吸着用担体の景は前記溶液中の生理活性物質を充分結合
出来る量とするのがよく、懸濁操作は攪拌機等を用いて
行なう。
出来る量とするのがよく、懸濁操作は攪拌機等を用いて
行なう。
生理活性物質を結合した吸着用担体の９踏用の磁力とし
ては永久磁石、’ｉ電磁石利用し、曲記攪拌機の攪拌羽
根に埋設してもよく、別途に反応槽内に挿入するように
してもよい。分離操作は永久磁石又は電磁石を引き上げ
るか又は前記溶液を反応槽から排出することにより行な
う。
ては永久磁石、’ｉ電磁石利用し、曲記攪拌機の攪拌羽
根に埋設してもよく、別途に反応槽内に挿入するように
してもよい。分離操作は永久磁石又は電磁石を引き上げ
るか又は前記溶液を反応槽から排出することにより行な
う。
分離した生理活性物質結合吸着用担体から生理活性物質
を解離する手段としては、高濃度塩溶液、低ＰＨ緩衝液
等を用い、生理活性物質及び生理活性物質と特異的に結
合する物質の物理化学的性質を考慮するとよい。
を解離する手段としては、高濃度塩溶液、低ＰＨ緩衝液
等を用い、生理活性物質及び生理活性物質と特異的に結
合する物質の物理化学的性質を考慮するとよい。
前記吸着用担体は微粒子状であるため、溶液中に均一に
容易に懸濁する事ができ、溶液中の生理活性物質を効率
よく結合、回収する事ができる。内部に磁性鉄を包含し
ているので、磁力により容易に回収分離する事ができる
。
容易に懸濁する事ができ、溶液中の生理活性物質を効率
よく結合、回収する事ができる。内部に磁性鉄を包含し
ているので、磁力により容易に回収分離する事ができる
。
前記生理活性物質の精製に使用する装置は、反応槽内で
攪拌羽根を昇降させつつ回転させることができ、反応槽
内を均一に斑なく攪拌する事ができる。又、永久磁石又
は電磁石の磁力により反応槽内に分散している磁性ビー
ズを効率よく回収する事ができる。
攪拌羽根を昇降させつつ回転させることができ、反応槽
内を均一に斑なく攪拌する事ができる。又、永久磁石又
は電磁石の磁力により反応槽内に分散している磁性ビー
ズを効率よく回収する事ができる。
従って、生理活性物質と吸着用担体は均一に攪拌されて
充分に反応し、生理活性物質は吸着用担体に結合され、
しかる後生理活性物質を結合した吸着用担体を攪拌羽根
の磁力により効率よく回収する事ができる。又、前記溶
液を解離１’１１（用の塩溶液に変えれば、吸着用担体
から生理活性物質を解離する事ができ、生理活性物質を
高濃度に回収する事ができる。
充分に反応し、生理活性物質は吸着用担体に結合され、
しかる後生理活性物質を結合した吸着用担体を攪拌羽根
の磁力により効率よく回収する事ができる。又、前記溶
液を解離１’１１（用の塩溶液に変えれば、吸着用担体
から生理活性物質を解離する事ができ、生理活性物質を
高濃度に回収する事ができる。
更に、生理活性物質の精製方法は、溶液中の生理活性物
質と該溶液中に均一に懸濁された吸着用担体表面上の特
異的結合物質とが反応し、生理活性物質は吸着用担体に
結合される。吸着用担体は内部に磁性鉄を包含している
ので、磁力を反応槽内に作用させれば、吸着用担体は生
理活性物質を結合したまま磁気体に殆ど吸着される。該
磁気体を引き上げるか又は溶液を反応槽から排出するこ
とにより分離した後、解＃液を作用させると吸着用担体
に結合した生理活性物質が解離され、精製回収する事が
できる。
質と該溶液中に均一に懸濁された吸着用担体表面上の特
異的結合物質とが反応し、生理活性物質は吸着用担体に
結合される。吸着用担体は内部に磁性鉄を包含している
ので、磁力を反応槽内に作用させれば、吸着用担体は生
理活性物質を結合したまま磁気体に殆ど吸着される。該
磁気体を引き上げるか又は溶液を反応槽から排出するこ
とにより分離した後、解＃液を作用させると吸着用担体
に結合した生理活性物質が解離され、精製回収する事が
できる。
すなわち、磁性鉄を包含したポリスチレンビーズにプロ
ティンＡ（ブドウ状球菌由来）、各免疫グロブリンクラ
スに対する抗体（抗１１Ｇ、抗１ｇＭ、抗１ｇＡ 、抗
ＩＩ！Ｅ）をビーズ上に導入したカルボキシル基、アミ
ノ基等によって結合した吸着用担体を利用する事によっ
て、各イムノグロブリンを分別結合する事ができ、又、
目的とするホルモン、生理活性物質に対する特異抗体を
用いる事によって、その免疫化学的反応で特異的結合を
行なわせた後、磁力によってこの反応体を濃縮、精製す
る事ができる。又、この濃縮回収した反応体は高ｋＭ濃
度溶液等で処理する事によって、目的生理活性物質のみ
を回収する事ができる。
ティンＡ（ブドウ状球菌由来）、各免疫グロブリンクラ
スに対する抗体（抗１１Ｇ、抗１ｇＭ、抗１ｇＡ 、抗
ＩＩ！Ｅ）をビーズ上に導入したカルボキシル基、アミ
ノ基等によって結合した吸着用担体を利用する事によっ
て、各イムノグロブリンを分別結合する事ができ、又、
目的とするホルモン、生理活性物質に対する特異抗体を
用いる事によって、その免疫化学的反応で特異的結合を
行なわせた後、磁力によってこの反応体を濃縮、精製す
る事ができる。又、この濃縮回収した反応体は高ｋＭ濃
度溶液等で処理する事によって、目的生理活性物質のみ
を回収する事ができる。
更に、特異抗体を高精製する場合には、その目的とする
抗体と対応する抗原部位を吸着、又は結合させた吸着担
体による特異抗体の分別精製が行ない得る。
抗体と対応する抗原部位を吸着、又は結合させた吸着担
体による特異抗体の分別精製が行ない得る。
これにより、従来のカラムクロマトグラフィー法のよう
なイオン交換、分子フルイ効果によらない、先に述べた
免疫化学的反応によって、目的とする生理活性物質を特
異的に結合し、その結合担体である磁性ビーズを磁力に
よって濃縮、回収する精製をバッチワイズ（Ｂａｔｃｈ
ｗｉｓｅ）で行なう事ができる。
なイオン交換、分子フルイ効果によらない、先に述べた
免疫化学的反応によって、目的とする生理活性物質を特
異的に結合し、その結合担体である磁性ビーズを磁力に
よって濃縮、回収する精製をバッチワイズ（Ｂａｔｃｈ
ｗｉｓｅ）で行なう事ができる。
以下本発明の実施例を比較例と共に説明する。
実施例 バイブリド−マス培養液からのモノクローナ
ル抗体の精製 抗ジステンパーウィルスモノクローナル抗体を生産する
バイブリド−マスを培地（Ｄ−ＭＥＭ、１０％ＦＢＳ
Ｃ牛胎児血清）、ビタミン２％、ペニシリン５ｕ／ ｍ
Ｑ ］ １０ Ｑを用いて培養し、その培養液中の抗体
の精製、回収を行なった。
ル抗体の精製 抗ジステンパーウィルスモノクローナル抗体を生産する
バイブリド−マスを培地（Ｄ−ＭＥＭ、１０％ＦＢＳ
Ｃ牛胎児血清）、ビタミン２％、ペニシリン５ｕ／ ｍ
Ｑ ］ １０ Ｑを用いて培養し、その培養液中の抗体
の精製、回収を行なった。
第１図及びｖｌｚ図は本発明の装置の一実施例であり、
３７°Ｃの恒温水槽１内に内面をシリコン処理により疎
水処理した反応槽２を収容し、該反応槽２内に攪拌機３
の攪拌ｐＪ４を挿入し、該攪拌機３をネジ切りロッド５
により昇降し得るように設置しである。
３７°Ｃの恒温水槽１内に内面をシリコン処理により疎
水処理した反応槽２を収容し、該反応槽２内に攪拌機３
の攪拌ｐＪ４を挿入し、該攪拌機３をネジ切りロッド５
により昇降し得るように設置しである。
前記撹拌棒４は、下端部にＴ字型の攪拌羽根６を取り付
けてあり、該各型拌羽根６の先端部に電磁石７を埋設し
、更に該攪拌羽根６及び撹拌棒４内に前記電磁石７に電
気を通ずるための電線８を埋設しである。図中、１０は
回転用モータを示す。
けてあり、該各型拌羽根６の先端部に電磁石７を埋設し
、更に該攪拌羽根６及び撹拌棒４内に前記電磁石７に電
気を通ずるための電線８を埋設しである。図中、１０は
回転用モータを示す。
１０Ｑの培養液を遠心分１ｆｔ！ｆ （３０００ｒ、ｐ
、ｍ、 Ｘ ２０分〕して細胞を除去し、上澄を反応槽
２内に入れる。
、ｍ、 Ｘ ２０分〕して細胞を除去し、上澄を反応槽
２内に入れる。
該反応槽ｚ内に磁性鉄を包含したポリスチレンビーズに
該磁性ビーズ表面に導入したカルボキシル基を介してプ
ロティンＡを結合した吸着用担体を加えて懸濁する。５
０ｒ、ｐ、ｍ、で２時間攪拌槻３により攪拌する。この
とき電磁石７には通電せず非励磁状態とし吸着用担体を
均一に分散させモノクローナル抗体（ＩＪＩＧ）と吸着
用担体に結合されたプロティンＡとを充分に反応させ、
溶液中のモノクローナル抗体を殆ど吸着用担体に結合さ
せる。
該磁性ビーズ表面に導入したカルボキシル基を介してプ
ロティンＡを結合した吸着用担体を加えて懸濁する。５
０ｒ、ｐ、ｍ、で２時間攪拌槻３により攪拌する。この
とき電磁石７には通電せず非励磁状態とし吸着用担体を
均一に分散させモノクローナル抗体（ＩＪＩＧ）と吸着
用担体に結合されたプロティンＡとを充分に反応させ、
溶液中のモノクローナル抗体を殆ど吸着用担体に結合さ
せる。
次いで、電磁石７に通電して励磁させた状態で、３５ｒ
、ｐ、＋ｎ、にて２時間攪拌羽Ｈ１６をネジ切りロッド
５により上下させながら回転攪拌し、吸着用担体を磁力
により残らず電磁石７に吸着させる。
、ｐ、＋ｎ、にて２時間攪拌羽Ｈ１６をネジ切りロッド
５により上下させながら回転攪拌し、吸着用担体を磁力
により残らず電磁石７に吸着させる。
吸着用担体を吸着した撹拌棒４を５０−の２ＭＮａＣＱ
溶液中に移し、電磁石７を通電した状態で２Ｏｒ、ｐ、
ｍ、にて１時間回転し、吸着用担体に結合′、ｉニジた
モノクローナル抗体を解離する。前記撹拌棒４を引き上
げると、吸着用担体は攪拌羽根６の電磁石７に吸着され
たまま前記解離液から分離され、精製されたモノクロー
ナル抗体が回収される。
溶液中に移し、電磁石７を通電した状態で２Ｏｒ、ｐ、
ｍ、にて１時間回転し、吸着用担体に結合′、ｉニジた
モノクローナル抗体を解離する。前記撹拌棒４を引き上
げると、吸着用担体は攪拌羽根６の電磁石７に吸着され
たまま前記解離液から分離され、精製されたモノクロー
ナル抗体が回収される。
以上の操作により、原液中の総抗体価５６０万単位（５
６０ｕ／ｒｎＱ Ｘ １０．０００ｍＱ ）から、精製
後に総抗体価５３７万単位（１０７，４００ｕ／ｍｌｌ
Ｘ ５ＱｆｆｌＱ）が回収された（回収率約９６％）
。所要操作時間は７時間である。
６０ｕ／ｒｎＱ Ｘ １０．０００ｍＱ ）から、精製
後に総抗体価５３７万単位（１０７，４００ｕ／ｍｌｌ
Ｘ ５ＱｆｆｌＱ）が回収された（回収率約９６％）
。所要操作時間は７時間である。
比較例
１ｔｉＩ記実施例と同様の原料を用いて従来法によリネ
＾製、回収した。
＾製、回収した。
１０Ｑの培養液を遠心分１４ （３，０ＯＯｒ、ｐ、ｍ
、 ｘ ２０分）して細胞を除去し、上憤を５０％硫安
飽和とする。
、 ｘ ２０分）して細胞を除去し、上憤を５０％硫安
飽和とする。
遠心分！ （３，０００ｒ、ｐ、＋ｎ−Ｘ ３０分）に
よって沈殿を回収し、沈殿を再溶解（３００１！ＩＱ）
シて透析する。
よって沈殿を回収し、沈殿を再溶解（３００１！ＩＱ）
シて透析する。
ＩＪＥＡＥセルロースカラ五によってγ−グロブリン分
画を分画し、次いで１ｌｌｊｌＬだ後分子フルイカラム
〔セファデックスＧ１００）によってｆＧ分画号 を分取する。ＩｇＧ分唾を硫安沈殿により更に濃
ｉ縮し、再透析する。
画を分画し、次いで１ｌｌｊｌＬだ後分子フルイカラム
〔セファデックスＧ１００）によってｆＧ分画号 を分取する。ＩｇＧ分唾を硫安沈殿により更に濃
ｉ縮し、再透析する。
これにより、原液中の総抗体価５６０万単位から、精製
後に総抗体価３９２万単位（７８，４００ｕ／ ｍＱＸ
５０ｙｎｌｌ ）が回収された（回収率約７０％）。
後に総抗体価３９２万単位（７８，４００ｕ／ ｍＱＸ
５０ｙｎｌｌ ）が回収された（回収率約７０％）。
所要操作日数は５日間である。
以上のように、本発明によって短期間で高回収率の精製
が出来る。又、本発明の方法に使用する磁性ビーズは従
来法のイオン交換樹脂及び分子フルイ担体のような消耗
品的でなく、繰り返し使用可能なものであり、経済的に
は工業化の場き、大きな要因を占めるものである。
が出来る。又、本発明の方法に使用する磁性ビーズは従
来法のイオン交換樹脂及び分子フルイ担体のような消耗
品的でなく、繰り返し使用可能なものであり、経済的に
は工業化の場き、大きな要因を占めるものである。
なお、本発明の生理活性物質の精製方法及びそれに使用
する吸着用担体並びに装置は、上述の実施例のみに限定
されるものではなく、磁性ビーズに抗ＩＪＩＧ抗体、抗
［ｘＭ抗体、抗ＩＪＩＥ抗体を結合すれば夫々ＩｘＧ
、 ＩｇＡ 、 ［ｇ阿、 ＩｇＥを精製する事ができ
、抗原特異性エピトープを結合すれば対応する抗体Ｃｌ
５Ｇ 、 ＩＡＭ等）を精製する事ができ、更に磁性ビ
ーズに生理活性を有する抗原物質に対する特異的抗体（
ＩｇＧ、 ｒｘＡ、Ｉｄ 、 ＩＪ！Ｍ）を結合すれば
、対応する抗原物質を精製する事ができるのみならず、
磁性ビーズに結合したプロティンＡを介して抗原物質に
特異的なＩＪ！Ｇを結合すれば抗原物質を精製する事が
できる、又、攪拌羽根６は第３図イ）（ロ）に示すよう
に円板型の電磁石ｉを取り付けた攪拌羽［６を撹拌棒４
の回転による遠心力により開閉可能に撹拌棒４に取り付
けてもよく、第４図イ） （０）に示すように永久磁石
９を設けた攪拌羽ｍ ｒ；’を開閉可能に取り付けても
よい事等、本発明の要旨を逸脱しない範囲内において極
々変更を加え得ることは勿論である。
する吸着用担体並びに装置は、上述の実施例のみに限定
されるものではなく、磁性ビーズに抗ＩＪＩＧ抗体、抗
［ｘＭ抗体、抗ＩＪＩＥ抗体を結合すれば夫々ＩｘＧ
、 ＩｇＡ 、 ［ｇ阿、 ＩｇＥを精製する事ができ
、抗原特異性エピトープを結合すれば対応する抗体Ｃｌ
５Ｇ 、 ＩＡＭ等）を精製する事ができ、更に磁性ビ
ーズに生理活性を有する抗原物質に対する特異的抗体（
ＩｇＧ、 ｒｘＡ、Ｉｄ 、 ＩＪ！Ｍ）を結合すれば
、対応する抗原物質を精製する事ができるのみならず、
磁性ビーズに結合したプロティンＡを介して抗原物質に
特異的なＩＪ！Ｇを結合すれば抗原物質を精製する事が
できる、又、攪拌羽根６は第３図イ）（ロ）に示すよう
に円板型の電磁石ｉを取り付けた攪拌羽［６を撹拌棒４
の回転による遠心力により開閉可能に撹拌棒４に取り付
けてもよく、第４図イ） （０）に示すように永久磁石
９を設けた攪拌羽ｍ ｒ；’を開閉可能に取り付けても
よい事等、本発明の要旨を逸脱しない範囲内において極
々変更を加え得ることは勿論である。
〔発明の効果］
本発明により、イオン交換カラムクロマトグラフィー、
分子フルイカラムクロマトグラフィーを行なうのに必要
であった手間と時間及び消耗品であるイオン交換担体及
び分子フルイ担体の経費等を大幅に軽減し、且つ従来法
の精製回収率７０％に比べ、本発明の方法によって９０
％以上の回収率を上げる事が可能となった。
分子フルイカラムクロマトグラフィーを行なうのに必要
であった手間と時間及び消耗品であるイオン交換担体及
び分子フルイ担体の経費等を大幅に軽減し、且つ従来法
の精製回収率７０％に比べ、本発明の方法によって９０
％以上の回収率を上げる事が可能となった。
本発明は鋭敏に反応する抗原抗体反応等を利用して、粘
稠度が高くしかも大量の溶液中に微量に存在する目的物
質を確実に吸着用担体に結合し、磁力を利用して分離す
るので、培養液からの生理活性物質の精製に好適であり
、しかも吸着用担体は繰り返し使用可能であるため経済
的にも非常に有利である。
稠度が高くしかも大量の溶液中に微量に存在する目的物
質を確実に吸着用担体に結合し、磁力を利用して分離す
るので、培養液からの生理活性物質の精製に好適であり
、しかも吸着用担体は繰り返し使用可能であるため経済
的にも非常に有利である。
第１図は本発明の装置の一実施例の説明図、第２図は第
１図の■部詳細図、第３図〔イ）（ロ）は第１図におけ
る攪拌羽根の他の例であり、第３図〔イ〕は停止時の状
態を示す図、第３図（１：１１は回転時に１■拌羽根が
開いた状態を示す図、第４図〔イ］（ロ）は第１図にお
ける攪拌羽根の更に他の例であり、第４図〔イ〕は停止
時の状態を示す図、第４図（ロ）は回転時に攪拌羽根が
開いた状態を示す図である。 ２は反応槽、３はＷｌ拌機、４は攪拌線、５はネジ切り
ロッド、６．ｇ、ｇは攪拌羽根、７は電磁石、９は永久
磁石である。
１図の■部詳細図、第３図〔イ）（ロ）は第１図におけ
る攪拌羽根の他の例であり、第３図〔イ〕は停止時の状
態を示す図、第３図（１：１１は回転時に１■拌羽根が
開いた状態を示す図、第４図〔イ］（ロ）は第１図にお
ける攪拌羽根の更に他の例であり、第４図〔イ〕は停止
時の状態を示す図、第４図（ロ）は回転時に攪拌羽根が
開いた状態を示す図である。 ２は反応槽、３はＷｌ拌機、４は攪拌線、５はネジ切り
ロッド、６．ｇ、ｇは攪拌羽根、７は電磁石、９は永久
磁石である。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １）磁性鉄を包含したポリスチレンビーズの表面に、カ
ルボキシル基又はアミノ基を導入し、該カルボキシル基
又はアミノ基を介して生理活性物質と反応する物質を結
合してなる事を特徴とする生理活性物質の吸着用担体。 ２〕生理活性物質を含有する溶液に、磁性鉄を包含し且
つ該生理活性物質と特異的に結合する物質を表面に結合
した吸着用担体を懸濁し、生理活性物質を結合した吸着
用担体を磁力を利用して分離し、しかる後吸着用担体か
ら生理活性物質を解離して回収する事を特徴とする生理
活性物質の精製方法。 ３）反応槽と、永久磁石又は電磁石を埋設した攪拌羽根
を下端に有する撹拌棒と、該撹拌棒を前記反応槽内で回
転させるための駆動モータと、前記撹拌棒及び駆動モー
タを昇降させる昇降装置とから成る事を特徴とする生理
活性物質の精製装置。 ４）反応槽がその内面をシリコン処理或はメチル基の導
入により疎水処理した反応槽である特許請求の範囲第３
項記載の生理活性物質の精製装置。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP59228560A JPS61106519A (ja) | 1984-10-30 | 1984-10-30 | 生理活性物質の精製方法及びそれに使用する吸着用担体並びに装置 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP59228560A JPS61106519A (ja) | 1984-10-30 | 1984-10-30 | 生理活性物質の精製方法及びそれに使用する吸着用担体並びに装置 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS61106519A true JPS61106519A (ja) | 1986-05-24 |
Family
ID=16878283
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP59228560A Pending JPS61106519A (ja) | 1984-10-30 | 1984-10-30 | 生理活性物質の精製方法及びそれに使用する吸着用担体並びに装置 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS61106519A (ja) |
Cited By (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1996009115A1 (fr) * | 1994-09-21 | 1996-03-28 | Kanegafuchi Kagaku Kogyo Kabushiki Kaisha | Adsorbant pour interleukines, procede d'elimination de celles-ci par adsorption et dispositif d'adsorption |
| JP2006223723A (ja) * | 2005-02-21 | 2006-08-31 | Hitachi Ltd | 血液浄化装置及び血液浄化方法 |
| JP2007522938A (ja) * | 2004-02-17 | 2007-08-16 | イー・アイ・デュポン・ドウ・ヌムール・アンド・カンパニー | 磁場および磁場勾配により促進される遠心固液分離 |
| US8066877B2 (en) | 2005-02-17 | 2011-11-29 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Apparatus for magnetic field and magnetic gradient enhanced filtration |
| US8075771B2 (en) | 2005-02-17 | 2011-12-13 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Apparatus for magnetic field gradient enhanced centrifugation |
| JP2013542420A (ja) * | 2010-09-23 | 2013-11-21 | エクセレレックス インク． | 単回使用のスラリー化−クロマトグラフィーシステム |
| CN103501913A (zh) * | 2011-03-11 | 2014-01-08 | 杨贵生 | 磁性颗粒清除装置及方法 |
-
1984
- 1984-10-30 JP JP59228560A patent/JPS61106519A/ja active Pending
Cited By (12)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1996009115A1 (fr) * | 1994-09-21 | 1996-03-28 | Kanegafuchi Kagaku Kogyo Kabushiki Kaisha | Adsorbant pour interleukines, procede d'elimination de celles-ci par adsorption et dispositif d'adsorption |
| US5902877A (en) * | 1994-09-21 | 1999-05-11 | Kanegafuchi Kagaku Kogyo Kabushiki Kaisha | Adsorbent of interleukins, process for removing the same, and adsorber for the same |
| JP2007522938A (ja) * | 2004-02-17 | 2007-08-16 | イー・アイ・デュポン・ドウ・ヌムール・アンド・カンパニー | 磁場および磁場勾配により促進される遠心固液分離 |
| US8012357B2 (en) | 2004-02-17 | 2011-09-06 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Magnetic field and field gradient enhanced centrifugation solid-liquid separations |
| US8119010B2 (en) | 2004-02-17 | 2012-02-21 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Magnetic field enhanced cake-filtration solid-liquid separations |
| US8066877B2 (en) | 2005-02-17 | 2011-11-29 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Apparatus for magnetic field and magnetic gradient enhanced filtration |
| US8075771B2 (en) | 2005-02-17 | 2011-12-13 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Apparatus for magnetic field gradient enhanced centrifugation |
| JP2006223723A (ja) * | 2005-02-21 | 2006-08-31 | Hitachi Ltd | 血液浄化装置及び血液浄化方法 |
| JP2013542420A (ja) * | 2010-09-23 | 2013-11-21 | エクセレレックス インク． | 単回使用のスラリー化−クロマトグラフィーシステム |
| CN103501913A (zh) * | 2011-03-11 | 2014-01-08 | 杨贵生 | 磁性颗粒清除装置及方法 |
| JP2014515694A (ja) * | 2011-03-11 | 2014-07-03 | ギーシェン ヤン、 | 磁性粒子スカベンジング装置および方法 |
| JP2016155122A (ja) * | 2011-03-11 | 2016-09-01 | ヤン、 ギーシェンＹＡＮＧ， Ｇｕｉｓｈｅｎｇ | 磁性粒子スカベンジング装置および方法 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CA1188612A (en) | Recovery | |
| US4672040A (en) | Magnetic particles for use in separations | |
| Logeat et al. | One-step immunoaffinity purification of active progesterone receptor. Further evidence in favor of the existence of a single steroid binding subunit | |
| US11577218B2 (en) | High-loading and alkali-resistant protein a magnetic bead and method of use thereof | |
| WO1988006632A1 (en) | Magnetic particles for use in separations | |
| KR19990035924A (ko) | 폴리비닐 알코올을 토대로 한 자성 중합체 입자,그것의 제조방법 및 용도 | |
| JPS58131918A (ja) | 因子８親凝集性活性蛋白質の調整方法およびその方法に使用する免疫吸着剤 | |
| JPH0354959B2 (ja) | ||
| JPH07265606A (ja) | アフィニテイ分離法 | |
| US4752563A (en) | Monoclonal antibody for recovery of leukocytes in human peripheral blood and method of recovery employing said monoclonal antibody | |
| JP4612982B2 (ja) | 磁性細胞分離カラムにおける選択された細胞の改変方法 | |
| JPS61106519A (ja) | 生理活性物質の精製方法及びそれに使用する吸着用担体並びに装置 | |
| JPH0588116B2 (ja) | ||
| JPH02152541A (ja) | 流体媒体から材料の生化学分離法 | |
| JP3783677B2 (ja) | 生体物質精製方法および生体物質精製用キットおよび生体物質分析システム | |
| AU641119B2 (en) | Ultrapurification of factor IX and other vitamin K-dependent proteins | |
| JP5691161B2 (ja) | タンパク質の精製方法 | |
| Scott et al. | Purification of Monoclonal Antibodies from Large‐Scale Mammalian Cell Culture Perfusion Systems | |
| JP2002090366A (ja) | フェライトを固定した生体特異的親和性キャリヤとその製造方法 | |
| JPS62259596A (ja) | ハイブリツドタンパク質の精製方法 | |
| CA1065305A (en) | PROCESS FOR THE ENRICHMENT OF THE PREGNANCY-SPECIFIC .beta.1-GLYCOPROTEIN | |
| JPH0459797A (ja) | 抗体の精製法 | |
| JPH06217767A (ja) | 風疹ウイルスの精製および濃縮方法 | |
| JPH02231095A (ja) | インスリン様細胞成長因子２の製造法 | |
| JPS63226290A (ja) | 有用物質の回収・精製方法および装置 |