JPS6083584A - 生細胞内への物質移入法 - Google Patents

生細胞内への物質移入法

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JPS6083584A
JPS6083584A JP58191379A JP19137983A JPS6083584A JP S6083584 A JPS6083584 A JP S6083584A JP 58191379 A JP58191379 A JP 58191379A JP 19137983 A JP19137983 A JP 19137983A JP S6083584 A JPS6083584 A JP S6083584A
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粕谷　敬宏
Yoji Igawa
井川　洋二
Mikiro Tsukagoshi
塚越　幹郎
Shunichi Kurata
倉田　俊一
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    • H01S3/0007—Applications not otherwise provided for
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    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/87—Introduction of foreign genetic material using processes not otherwise provided for, e.g. co-transformation

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は生細胞内へ物質を移入する方法に係るものであ
る。
遺伝子発現を解析する分野では、生物の形質を決定する
多くの遺伝子のはたらきを解明するために特定の遺伝子
を生細胞内へ移入し、その移入された細胞の形質の変化
（形質変換）を観察することが行なわれる。
例えば癌化した細胞からＤＮＡを抽出し、これを切断し
細分化する。そして特定の断片を正常細胞に移入しても
し癌化が検出できればそのＤＮＡ断片に発癌性遺伝子、
が含まれているということができる。
このようなりＮＡを細胞内に組込む従来技術としては、
ＤＮＡを含有する溶液に生細胞を懸濁し、光学顕微鏡下
で極（細い針状物により生細胞に小さな穴をあけ、その
穴からＤＮＡを取込ませ、そして生細胞が穴を修復する
ことにより細胞内にＤＮＡを組込ませる方法（特願昭５
６−１７１３４７　、特開昭５８−７６０（＋１参照）
と、培養液中にＤＮＡをリン酸カルシウム沈澱として存
在させ、食作用で細胞内へ移入する方法とがある。しか
し、これらの方法にはいくつかの欠点がある。前者は移
入効率はすぐれているが、針状物を利用して生細胞に穴
をあけるのであるから正常細胞を損傷させることなくＤ
ＮＡを移入す・るには熟練と多大の労力を必要とする。
また細胞によっては穴をあけることができずこの物質移
入法を利用することはできない。
後者は多くの細胞を一度に処理できる反面、ＤＮＡの移
入確率は非常に低く、せいぜい１万分の１程度である。
形質変換効率は非常に小さいので非常に多くの細胞にＤ
ＮＡの断片を組込ませることが要請される。また、この
方法は培養液中に高濃度のリン酸カルシウム塩を入れる
ことから細胞に与える損傷も大きくその後の解析に注意
を要する。
本発明の目的は上に述べた欠点のない、極めて大量の生
細胞へ効率よく物質を移入することのできる生細胞内へ
の物質移入法を提供することにある。
この目的は本発明に従って、生細胞にレーザー光を照射
し、その照射部分の細胞の表面状態を改変して物質を取
込める状態としく以、下この状態を説明の便宜上仮に「
穴」又は「穿孔された状態」という）、それから細胞内
に取込もうとする物質を含む媒質内でその物質と細胞と
を会合させ細胞内に物質を取込ませることにより達成さ
れる。
生細胞内に取込ませる物質としては、生体高分子例えば
遺伝子、タンパク質等がある。
レーザー光は指向性が優れており、これを顕微鏡に導入
するとその限界分解（ｉヒまで小さな焦点を結ばせるこ
とができ、これによって細胞試料にサブミクロンの微小
な「穴」をうがつことができる。
又、レーザーは時間中の短かいパルスとして発射するこ
とができるので時間中を調整すれば体位の小さな細胞の
温度をたかめてこれを殺してしまうということしない。
更に、レーザー光は車−波長であるので細胞壁や生体膜
あるいは細胞内に取込ませようとする物質の光学的特性
（吸収率、吸収分光特性）を考慮してその波長を３１！
ｉ　が！すれば異なる種類の細胞にも「穿孔」できる。
レーザー光の使用は電気制御系又はＴＶモニターとの連
携を容易とし、それにより穿孔作業の迅速且つ精確な制
御が可能となる。レーザー光の強度は電気的に広範囲に
制御することができ、又細胞内への焦点の深さを自由に
光学的に調整し得る。このことも、生細胞の手術に有利
である。
本発明ではこのレーザー光の特性を利用しでｌＩ：細胞
の修復機能を損なわない細胞手術を、極めて高い効率で
、実施する。
既に述べたように、本発明によれば生細胞にレーザー光
を照射して生細胞に「穿孔」し、細胞内に取込もうとす
る物質を含む媒質内でその物質と細胞とを会合させ生細
胞内に物質を取込ませ、そして生細胞の修復機能により
孔を閉じてその中に物質を封じ込めるのである。
レーザー光の照射により「穿孔」はするが、。
「穿孔」の際の熱により生細胞を殺してはならない。そ
のためレーザー光の照射時間の調整が必要となるが、そ
の手段の一つとしてレーザー光をパルス状とし照射時間
を制限する。又、連続状のレーザーで生細胞を次々に短
時間照射する。例えば、細胞内に取込もうとする物質と
生細胞を含む培養液をレーザー光の照射域を通して移動
させるか、又は培養液中に懸濁している大量の生細胞を
レーザー光で掃引する。いずれの場合も取込もうとする
物質と生細胞とは培養液中に共存していて、「穿孔」さ
れた直後にその生細胞の付近の物質がその孔から生細胞
内に取込まれる。液浴中に静止している生細胞について
は、顕微鏡下で個々の生細胞の特定の選択位置にレーザ
ー光を照射することもできる。
又、パルス状もしくは連続状のレーザー光の照射域に生
細胞を含む搬送液体を点滴して、その粒滴内の生細胞を
「穿孔」し、それからぞれらの粒滴をレーザー光の照射
域直下の、生細胞に取込も′・）とする物質の懸濁浴に
落下させるようにしてもよい。パルス状レーザー光を使
用した場合には別の光源により各粒滴を照明して散乱光
の広がりから粒滴内の細胞の大きさを決定して細胞を選
別し、特定の細胞にレーザーパルスを照躬才ろこともで
きる。
点滴の代りに、生細胞を含む搬送液体をパルス状又は連
続状のレーザー光の照射域に流してもよく、これは高速
処理に特に適している。
第１図は本発明により物質を移入した生細胞を、その物
質を移入されなかったため死んだ細胞とを対比して示す
細胞形態の顕微鏡写真である。
すなわち、オスポーンメンデルラットの′Ｒ１１ＦＮ由
来の媒養細胞ＮＨＫを大腸菌由来の遺伝子Ｈｃｏｇｐｔ
　（Ｘａｎｔｈｉｎｅ−ｇｕａｎｉｎｅ　ｐｂｏｓｐｂ
ｏｒｉｂｏｓｙｌ−Ｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ　）を取込
まないと生存できない状態に処理し、このように処理し
たＮＨＫを、前記の遺伝子を含む媒質（ＤＭＥＭに１０
％生胎児血清を加えたもの）に加えた。
レーザ一本体（ＹＡＧレーザ−）から発射される赤外線
（波長１．ｏ６ｔクロン）を紫外線（波長３３５ナノメ
ーター）に変換してレーザー顕ｉａ！＜　ａｌｔに導入
し、顕微鏡下で前記の媒質中に懸垂している生細胞に閃
光時間１０ナノ秒のレーザーパルスを照射した。レーザ
ーパルスは毎秒１０パルスの率でくり返すので、多数個
の細胞を同一条件で処理することができた。その結果を
第１図の左半部に、パルスを照射しなかった細胞（第１
図の右半部）と対比して示す。
レーザー光を照射された生細胞は遺伝子を取込み生存し
ているのに対し、レーザー光を照射されなかった生細胞
はすべて死滅した。
生細胞は「穿孔」されるとその直後に修復してしまう。
第′２図に前記のＮ　ＲＫがレーザー照射により「鉢：
孔」された直後の様子をビデオで撮影収録した再生画面
からの写真で示す。第２図（ハ）は「穿孔された状態」
を、第２図（ロ）は「穿孔」直後の状態を、そして第２
図（Ｃ）は修復後の状態をそれぞれ示す（矢印は「穴」
を示す）。
第３図はと１−の赤血球を染色し、これにレーザー光を
照射して「穿孔」した状態を示す。この図は生細胞に１
穿孔」した直後の状態と同じ様相を示し、本発明の方法
により細胞の特定１１８１所を選択して「穿孔」するこ
とができることを示している。
このように本発明により細胞に物質を移入する「穿孔」
が可能であるばかりでなく、細胞の一部を切断したり融
着したり、或は特定の細胞小器管を破壊するなどの基本
的な細胞手術が可能である。
細胞内への遺伝子の移入に本発明を通用することにより
、いろいろな有用物質の細胞内生産（例えばヒトの有用
物質（インシュリン等）を生細胞内で合成）、家畜や農
産物の品種改良のための遺伝子移入（交配しない異種間
植物での遺伝子の置換；受精を経由しない増殖での優良
遺伝子の導入）を実現することができる。
【図面の簡単な説明】
第１図は本発明に従って遺伝子ＥｃｏｇｐＬを移入した
ＮＨＫ細胞の形態を示す顕微鏡写真であり、　゛第２図
は、ＮＨＫ細胞のレーザー照射による「穿孔」及び修復
状況を示すビデオ内生画面からの細胞の形態の顕微鏡写
真である。 第３図は「穿孔」した細胞（ヒトの赤血球）の形態を示
す顕微鏡写真である。 第１図 一： 第３図

Claims (1)

  1. 【特許請求の範囲】 １、生細胞にレーザー光を照射し、生細胞内に取込もう
    とする物質を含む媒質内でその物質と生細胞とを会合さ
    せ生細胞内に物質を取込ませることを特徴とする生細胞
    内への物質移入法。 ２、前記のレーザー光はパルス状である特許請求の範囲
    第１項に記載の生細胞内べの物質移入法。 ３、前記のレーザー光は連続状であり、レーザー光の照
    射域を通して前記の生Ｉ［ｌ胞を搬送する特許請求の範
    囲第１項に記載の生細胞内−５の物質移入法。 ４、前記のレーザー光は連続状であり、前記の媒質が生
    細胞を含みレーザー光が前記の媒質を掃引する特許請求
    の範囲第１項に記載の生細胞内への物質移入法。 ５、前記の媒質が前記の生細胞のｉ養液である特許請求
    の範囲第４項に記載の生細胞内への物質移入法。 ６、前記の物質は生体高分子であることを特徴とする特
    許請求の範囲第１項に記載の生細胞内への物質移入法。
JP58191379A 1983-10-13 1983-10-13 生細胞内への物質移入法 Granted JPS6083584A (ja)

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EP19840112218 EP0137504B1 (en) 1983-10-13 1984-10-11 Method and apparatus of implanting living cells with a foreign substance
CA 465446 CA1284302C (en) 1983-10-13 1984-10-15 Method and apparatus of implanting living cells with foreign substance
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Families Citing this family (34)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5141131A (en) * 1989-06-30 1992-08-25 Dowelanco Method and apparatus for the acceleration of a propellable matter
EP0501688A1 (en) * 1991-02-27 1992-09-02 Hitachi, Ltd. Apparatus and method for applying a laser beam through a microscope
US5795755A (en) * 1994-07-05 1998-08-18 Lemelson; Jerome H. Method of implanting living cells by laser poration at selected sites
US6177614B1 (en) 1995-03-16 2001-01-23 Cold Spring Harbor Laboratory Control of floral induction in plants and uses therefor
US5874266A (en) * 1997-03-27 1999-02-23 Palsson; Bernhard O. Targeted system for removing tumor cells from cell populations
US6534308B1 (en) * 1997-03-27 2003-03-18 Oncosis, Llc Method and apparatus for selectively targeting specific cells within a mixed cell population
US6753161B2 (en) * 1997-03-27 2004-06-22 Oncosis Llc Optoinjection methods
US6060315A (en) * 1997-12-01 2000-05-09 Lockheed Martin Energy Research Corporation Method for facilitating the introduction of material into cells
JP3125047B2 (ja) * 1998-01-20 2001-01-15 工業技術院長 表面改質された高分子成形品の製造方法
EP1063287A4 (en) * 1998-03-12 2006-12-06 Toudai Tlo Ltd PROCESS FOR LOCAL IMPROVEMENT IN CELLS.
US6642018B1 (en) 1998-03-27 2003-11-04 Oncosis Llc Method for inducing a response in one or more targeted cells
AU785026B2 (en) * 1998-12-04 2006-08-24 Genetronics, Inc. Facs assisted methods for introducing individual chromosomes into cells
US6824549B1 (en) 2000-06-07 2004-11-30 Iris Ginron Chao Method & device for making reversed bypass with cultured vessel in situ
JP4491661B2 (ja) * 1999-11-17 2010-06-30 株式会社トプコン 光波距離計
WO2001040454A1 (en) * 1999-11-30 2001-06-07 Oncosis Method and apparatus for selectively targeting specific cells within a cell population
US6804385B2 (en) 2000-10-24 2004-10-12 Oncosis Method and device for selectively targeting cells within a three-dimensional specimen
JP2002325572A (ja) 2000-12-25 2002-11-12 Univ Osaka 外来物質の導入方法
JP3780334B2 (ja) * 2001-01-17 2006-05-31 国立大学法人大阪大学 細胞の加工方法
US20030133119A1 (en) * 2002-01-17 2003-07-17 Bachur Nicholas R. Rapid imaging of particles in a large fluid volume through flow cell imaging
US7329798B2 (en) * 2002-06-28 2008-02-12 University Of Guelph Harvest-inducible regulatory elements and methods of using same
CA2490781A1 (en) 2002-06-28 2004-01-08 University Of Guelph Harvest-inducible genes from alfalfa (medicago sativa) and methods of use thereof
DE10260071A1 (de) * 2002-12-19 2004-07-08 Gkss-Forschungszentrum Geesthacht Gmbh Vorrichtung zur Analyse von in einer Flüssigkeit enthaltenen biologischen Zellen
US20050095578A1 (en) * 2003-10-31 2005-05-05 Koller Manfred R. Method and apparatus for cell permeabilization
US7425426B2 (en) * 2004-03-15 2008-09-16 Cyntellect, Inc. Methods for purification of cells based on product secretion
JP4504082B2 (ja) * 2004-04-28 2010-07-14 富士通株式会社 液体注入装置
FR2870942B1 (fr) * 2004-05-25 2006-08-25 Airbus France Sas Systeme de mesure anticipee d'une turbulence en amont d'un aeronef
KR20110108390A (ko) 2009-01-12 2011-10-05 신텔렉트 인코포레이티드 레이저로 매개된 박막 절개 및 세포 군체의 이동
US9017991B2 (en) * 2009-03-13 2015-04-28 Tufts University Methods tip assemblies and kits for introducing material into cells
JP5581958B2 (ja) * 2010-10-12 2014-09-03 ソニー株式会社 照明装置、投影型表示装置、直視型表示装置
DE102011109999A1 (de) * 2011-08-11 2013-02-14 Lavision Biotec Gmbh Laseranordnung
US8778682B2 (en) 2011-08-30 2014-07-15 General Electric Company Optical based delivery of exogenous molecules to cells
US20130052725A1 (en) * 2011-08-30 2013-02-28 General Electric Company System for optical based delivery of exogenous molecules to cells
WO2018085542A1 (en) * 2016-11-03 2018-05-11 President And Fellows Of Harvard College Cellular poration using continuous laser radiation
JP2021034090A (ja) 2019-08-28 2021-03-01 キオクシア株式会社 不揮発性半導体記憶装置

Family Cites Families (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3848104A (en) * 1973-04-09 1974-11-12 Avco Everett Res Lab Inc Apparatus for heat treating a surface
FR2290623A1 (fr) * 1974-11-06 1976-06-04 Lorraine Laminage Tole pour emboutissage profond ou extraprofond et procede d'obtention d'une telle tole
US4302670A (en) * 1978-06-27 1981-11-24 Claude E. Corson Electrogenic seed treater
US4338397A (en) * 1980-04-11 1982-07-06 President And Fellows Of Harvard College Mature protein synthesis
EP0081570A4 (en) * 1981-06-12 1985-09-02 Univ Ohio GENETIC TRANSFORMATION OF ZYGOTS.
JPS5876091A (ja) * 1981-10-28 1983-05-09 Mitsuru Furusawa 真核生物の遺伝形質変換方法

Also Published As

Publication number Publication date
JPS627838B2 (ja) 1987-02-19
US5013660A (en) 1991-05-07

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