JPS6083579A - 高力価カタラ−ゼを産生する酵母およびその製造法 - Google Patents
高力価カタラ−ゼを産生する酵母およびその製造法Info
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- JPS6083579A JPS6083579A JP18953683A JP18953683A JPS6083579A JP S6083579 A JPS6083579 A JP S6083579A JP 18953683 A JP18953683 A JP 18953683A JP 18953683 A JP18953683 A JP 18953683A JP S6083579 A JPS6083579 A JP S6083579A
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- Japan
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- iron
- hydrogen peroxide
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、改良された産業上有用な性質を有 −する酵
母菌体に関し、更に詳しくは、高力価カタラーゼを産生
ずる酵母菌体に関する。
母菌体に関し、更に詳しくは、高力価カタラーゼを産生
ずる酵母菌体に関する。
カタラーゼは、嫌気的に生育する細菌を除く殆んどの生
物体に存在している。哺乳類の肝・赤血球細胞、細菌・
酵母等の微生物細胞内に多く存在している。
物体に存在している。哺乳類の肝・赤血球細胞、細菌・
酵母等の微生物細胞内に多く存在している。
従来、カタラーゼは、動物臓器（特に豚肝）或いはミク
ロコツカス・リソデイクテイカス、ロードシュードモナ
ス・スフェロイデスなどの細菌またはサツカロミセス・
セルビシエなどの微生物から抽出され、医薬品・食品な
どで広く使用されている。
ロコツカス・リソデイクテイカス、ロードシュードモナ
ス・スフェロイデスなどの細菌またはサツカロミセス・
セルビシエなどの微生物から抽出され、医薬品・食品な
どで広く使用されている。
本発明者等は、微生物の薬剤耐性獲得の現象に着眼し、
過酸化水素（以下過水と略称する）に微生物を接触させ
ることによって、それらが抵抗性を持ち、過水に対する
適応性を獲イ）すしうるかどうか研究したところ、予想
通りの微生物集団を得た。更にこのようにして得られた
微生物の性質を検討するに、意外にも該微生物が強いカ
タラーゼ活性を有していることを見出して本発明を完成
した。
過酸化水素（以下過水と略称する）に微生物を接触させ
ることによって、それらが抵抗性を持ち、過水に対する
適応性を獲イ）すしうるかどうか研究したところ、予想
通りの微生物集団を得た。更にこのようにして得られた
微生物の性質を検討するに、意外にも該微生物が強いカ
タラーゼ活性を有していることを見出して本発明を完成
した。
通常、微生物は２．５〜３ｔＩ）過水液に接触すること
によって増殖の低下或いは死滅に至ることより、過水液
を殺菌剤として医薬的に使用している。本発明において
は、酵母菌体が死滅しない濃度の過水液を添加した培地
で酵母を培養し、継代毎に順次過水＠厩を上げていくこ
とによって、通常の殺菌剤として使用する約３係程度の
過水濃度の数倍の過水濃度でも増殖する形質を有する酵
母菌体が得られる。
によって増殖の低下或いは死滅に至ることより、過水液
を殺菌剤として医薬的に使用している。本発明において
は、酵母菌体が死滅しない濃度の過水液を添加した培地
で酵母を培養し、継代毎に順次過水＠厩を上げていくこ
とによって、通常の殺菌剤として使用する約３係程度の
過水濃度の数倍の過水濃度でも増殖する形質を有する酵
母菌体が得られる。
このようにして得られた酵母菌体よシ、細胞破壊、抽出
等の常法によってカタラーゼ画分を採取すると、極めて
高い力価を示す。
等の常法によってカタラーゼ画分を採取すると、極めて
高い力価を示す。
本発明の目的とするところは、そのようにして得られた
高力価カタラーゼを産生する酵母菌体を提供することで
あり、他の目的は、そのような酵母菌体を製造する方法
を提供することである。
高力価カタラーゼを産生する酵母菌体を提供することで
あり、他の目的は、そのような酵母菌体を製造する方法
を提供することである。
即ち、本発明の特徴とするところは、酵母菌体を過水を
含有する培地に継代培養して高力価カタラーゼを産生す
る酵母菌体を得る方法およびそのようにして得られた酵
母菌体である。
含有する培地に継代培養して高力価カタラーゼを産生す
る酵母菌体を得る方法およびそのようにして得られた酵
母菌体である。
次に培養法と過水に適応した酵母細胞から高力価カタラ
ーゼを得る方法について記載する。
ーゼを得る方法について記載する。
本発明において使用される酵母は、真菌類に属する酵母
を特に限定なく、通常は入手しやすいパン酵母、ビール
酵母、清酒酵母、食飼料酵母等のサツカロミセス属、カ
ンジダ属、ミコトルラ属に属するものが好適に使用され
る。
を特に限定なく、通常は入手しやすいパン酵母、ビール
酵母、清酒酵母、食飼料酵母等のサツカロミセス属、カ
ンジダ属、ミコトルラ属に属するものが好適に使用され
る。
基本培地としては、通常の酵母培養用に調製された培地
を、天然培地、合成培地を問わず使用することができる
。本発明における培地は、この基本培地に過水を添加し
、或いは更に鉄分のｂ加をすることによって調製された
。
を、天然培地、合成培地を問わず使用することができる
。本発明における培地は、この基本培地に過水を添加し
、或いは更に鉄分のｂ加をすることによって調製された
。
過水の継代における添加濃度は、酵母菌体が夫々の段階
で死滅しない濃度であれは特に限定はないが、初期の頃
は約０．１〜２％、好ましくは約０．１〜０．５％の範
囲の濃度で培養し、継代毎に順次増量して培養するのが
望ましい。カタラーゼの力価の上昇は、過水濃度約６チ
程度よシ勾配が緩やかとなり、１０チ以上の濃度にして
も菌体の増殖はみられるが、カタラーゼ生産には利する
ところがない。更に、過水を含む培地に鉄分を添加する
ことによって、カタラーゼ産生を促進させることができ
る。鉄分の添加は、培地に水溶性の鉄化合物の１種又は
２種以上全添加すればよく、そのような鉄化合物として
は、例えば好旧バは硫酸鉄、塩化鉄、酢酸鉄などのイル
々の鉄塩およびそれらと他の塩との複塩などがあげられ
る。これらの鉄化合物における鉄の原子価は、２価であ
っても３価であっても差支えない。鉄化合物の添加量は
、通常培地１！中数ｍ！ｌｉ１〜士数ダ程度である。
で死滅しない濃度であれは特に限定はないが、初期の頃
は約０．１〜２％、好ましくは約０．１〜０．５％の範
囲の濃度で培養し、継代毎に順次増量して培養するのが
望ましい。カタラーゼの力価の上昇は、過水濃度約６チ
程度よシ勾配が緩やかとなり、１０チ以上の濃度にして
も菌体の増殖はみられるが、カタラーゼ生産には利する
ところがない。更に、過水を含む培地に鉄分を添加する
ことによって、カタラーゼ産生を促進させることができ
る。鉄分の添加は、培地に水溶性の鉄化合物の１種又は
２種以上全添加すればよく、そのような鉄化合物として
は、例えば好旧バは硫酸鉄、塩化鉄、酢酸鉄などのイル
々の鉄塩およびそれらと他の塩との複塩などがあげられ
る。これらの鉄化合物における鉄の原子価は、２価であ
っても３価であっても差支えない。鉄化合物の添加量は
、通常培地１！中数ｍ！ｌｉ１〜士数ダ程度である。
上記のような過水添加の培地で継代培養された酵母のカ
タラーゼ力価は、基本培地のみで継代培養された酵母の
それに比べて十乃至十数倍高力価であった。
タラーゼ力価は、基本培地のみで継代培養された酵母の
それに比べて十乃至十数倍高力価であった。
本発明において、継代の途中より過水添加量ｍ一定量に
しても、酵母の産生するカタラーゼ力価は上昇する。ま
た、継代の途中より過水添加を止め、基本培地で継代培
養しても、酵母の産生ずるカタラーゼの高力価は保持さ
れる。
しても、酵母の産生するカタラーゼ力価は上昇する。ま
た、継代の途中より過水添加を止め、基本培地で継代培
養しても、酵母の産生ずるカタラーゼの高力価は保持さ
れる。
次に試験例および実施例をあげて本発明を具体的に説明
するが、本発明はこれによって限定されるものではない
。
するが、本発明はこれによって限定されるものではない
。
試験例 各式におけるカタラーゼ活性の測定各式の培養
液を６０００ｒｐｍｌＯ分間遠心沈澱して集菌し、菌を
水に加えて懸濁し、遠ノし沈澱して菌を洗う。これを３
度繰返す。洗滌酵母菌体に、その重量の１０倍量のリン
酸緩衝液（０，０５Ｍ、 ｐＨ７，０）を加えて懸濁さ
せ、４０℃の恒温水槽内で３時間自己消化を行ない、４
（１１胞内からカタラーゼを溶出させた後Ｏ〜５℃に冷
却する。冷却後、膣液の２倍量の１冷アセトン（−１０
℃）を徐々に圧加し、１０分間放置した後ｐ紙渥過によ
って沈澱を採取する。沈澱を少賛の冷アセトンで洗って
水分を除去し、硫酸を使用するデシケータ−中で減圧乾
燥すると、乾燥粉末が得られる。この酵母菌体粉末をカ
タラーゼカ価測定に使用した。
液を６０００ｒｐｍｌＯ分間遠心沈澱して集菌し、菌を
水に加えて懸濁し、遠ノし沈澱して菌を洗う。これを３
度繰返す。洗滌酵母菌体に、その重量の１０倍量のリン
酸緩衝液（０，０５Ｍ、 ｐＨ７，０）を加えて懸濁さ
せ、４０℃の恒温水槽内で３時間自己消化を行ない、４
（１１胞内からカタラーゼを溶出させた後Ｏ〜５℃に冷
却する。冷却後、膣液の２倍量の１冷アセトン（−１０
℃）を徐々に圧加し、１０分間放置した後ｐ紙渥過によ
って沈澱を採取する。沈澱を少賛の冷アセトンで洗って
水分を除去し、硫酸を使用するデシケータ−中で減圧乾
燥すると、乾燥粉末が得られる。この酵母菌体粉末をカ
タラーゼカ価測定に使用した。
試験管（３０ｘ１２０朋）に、酵母菌体粉末およびその
５，０００〜１０，０００倍の精製水を加え、３０℃恒
温水槽で５分間正確に予熱する。これに予め３０℃に保
温した過水液（３０チ過水を０．０５Ｍリン酸緩衝液ｐ
Ｈ７，０で８００倍に稀釈）５ｍを加え、反応を開始し
、正確に５分後にＩＮ−硫酸２−を加え、混合して反応
を停止させる。
５，０００〜１０，０００倍の精製水を加え、３０℃恒
温水槽で５分間正確に予熱する。これに予め３０℃に保
温した過水液（３０チ過水を０．０５Ｍリン酸緩衝液ｐ
Ｈ７，０で８００倍に稀釈）５ｍを加え、反応を開始し
、正確に５分後にＩＮ−硫酸２−を加え、混合して反応
を停止させる。
次に１０％沃化カリウム水溶液１−および１％モリブデ
ン酸アンモニウム溶液１滴を加え、更にデンノン指示薬
（０，５１デンゾン液）５滴を加えて、Ｎ／２００チオ
硫酸す） ＩＪウム溶液で滴定する。この滴定値をＡと
し、酵母液の代シに水を使用して滴定した値をＢとする
。
ン酸アンモニウム溶液１滴を加え、更にデンノン指示薬
（０，５１デンゾン液）５滴を加えて、Ｎ／２００チオ
硫酸す） ＩＪウム溶液で滴定する。この滴定値をＡと
し、酵母液の代シに水を使用して滴定した値をＢとする
。
上記条件で１分間に１μＭｏｔのＨ２Ｏ２七分解する酵
素量をカタラーゼ１単位（ＩＵ）とし、次式およびカタ
ラーゼ作用標準曲線（図面参照）よシ算出する。
素量をカタラーゼ１単位（ＩＵ）とし、次式およびカタ
ラーゼ作用標準曲線（図面参照）よシ算出する。
Ｔ ＝ （Ｂ−Ａ）Ｘ２．５Ｘｆ
Ｔ：５分間に分解したＨ２０□のμＭｏｌ数ｆ：Ｎ／２
００チオ硫酸ナトリウム溶液の係数 酵母菌体のカタラーゼカ価（Ｕ／ｆ）は標準曲線よ請求
められるカタラーゼ活性Ｍと菌体粉末の稀釈倍数ｎとの
槓によって表わされる。
００チオ硫酸ナトリウム溶液の係数 酵母菌体のカタラーゼカ価（Ｕ／ｆ）は標準曲線よ請求
められるカタラーゼ活性Ｍと菌体粉末の稀釈倍数ｎとの
槓によって表わされる。
実施例１
培地 廃糖蜜（てん菜糖） ６６ｖ
硫酸アンモニウム ６ｙ
リン酸−ナトリウム ２ｖ
硫酸マグネシウム １２
硫酸第一鉄 ５ ｍｇ
ビオチン Ｑ、 （１１ｍ９
以上を水に溶かして１にとする。
糖度５°、ｐＨ５，２
酵母 サツカロミセス・セルビシエ
（三共株式会社製、生イースト）
培地は、５００ｍ容振盪フラスコに２００ｍ／！注加し
て、圧加０℃で２０分間加熱滅菌した。
て、圧加０℃で２０分間加熱滅菌した。
冷却後３０％過水３．３ ｍｌ （培地中退水濃度Ｏ５
％）添加後、生イースト５？接種し、振盪培養器〔（株
）いわしや生物科学製〕で、２７℃で４８時間、１２０
ｒｐｒｎで振盪培養する。対照として、過水を添加しな
い培一つ同様に培養した。
％）添加後、生イースト５？接種し、振盪培養器〔（株
）いわしや生物科学製〕で、２７℃で４８時間、１２０
ｒｐｒｎで振盪培養する。対照として、過水を添加しな
い培一つ同様に培養した。
培養終了後、２００１ｎｔの培養液を６０００ｒｐｍで
１０分間遠心沈澱して上清を捨て、沈澱に水を加えて懸
濁させ、遠心沈澱の操作を３回繰返し、洗滌湿醇母菌体
１２グを得た。これに０．０５Ｍリン酸緩衝液（Ｐ）＋
７．２ ） １２０ゴを加えて懸濁し、４０℃恒温水槽
で３時間自己消化後５℃に冷却して、冷アセトン（−１
０℃）２４０７！を加え、１０分後生じた沈澱をν別、
更に沈澱に冷アセトン１２０ｔｎｌを圧加して再戸別す
る。沈澱を硫酸を使用したデシケータ−中で減圧乾燥し
、酵母菌体粉末を得た。
１０分間遠心沈澱して上清を捨て、沈澱に水を加えて懸
濁させ、遠心沈澱の操作を３回繰返し、洗滌湿醇母菌体
１２グを得た。これに０．０５Ｍリン酸緩衝液（Ｐ）＋
７．２ ） １２０ゴを加えて懸濁し、４０℃恒温水槽
で３時間自己消化後５℃に冷却して、冷アセトン（−１
０℃）２４０７！を加え、１０分後生じた沈澱をν別、
更に沈澱に冷アセトン１２０ｔｎｌを圧加して再戸別す
る。沈澱を硫酸を使用したデシケータ−中で減圧乾燥し
、酵母菌体粉末を得た。
この粉末のカタラーゼカ価は次の通シである。
実施例２
過水濃度１％添加した培地２００−に、実施例１の培養
液（菌体採取前）２０ゴを接種し、実施例１におけると
同様に培養し、培養終了後の処理をして酵母菌体を採取
する。湿菌収邦は１２．４ｒであシ、その酵母菌体粉末
のカタラーゼカ価は次の通シである。
液（菌体採取前）２０ゴを接種し、実施例１におけると
同様に培養し、培養終了後の処理をして酵母菌体を採取
する。湿菌収邦は１２．４ｒであシ、その酵母菌体粉末
のカタラーゼカ価は次の通シである。
実□施例３
実施例２の培養液を２％過水添加培地２０〇−に実施例
２におけると同様に接種し、実施例１におけると同様に
培養し、培養後の処理をする。以下全く同様に１代毎に
過水濃度を１チすつ上昇させて培養し、培養器の処理を
する。各世代の湿菌量及びカタラーゼカ価は次の通シで
ある。
２におけると同様に接種し、実施例１におけると同様に
培養し、培養後の処理をする。以下全く同様に１代毎に
過水濃度を１チすつ上昇させて培養し、培養器の処理を
する。各世代の湿菌量及びカタラーゼカ価は次の通シで
ある。
実施例４
実施例３で記載した３％過水添加培地で増殖させて得た
酵母を、同じ３％過水添加培地で３代継代培書して得た
酵母菌体粉床のカタラーゼ力価は２０９．（１００Ｕ／
ｆであった。
酵母を、同じ３％過水添加培地で３代継代培書して得た
酵母菌体粉床のカタラーゼ力価は２０９．（１００Ｕ／
ｆであった。
実施例５
実施例′１における培地から硫酸第一鉄を除いた培地を
基本培地とし、これに過水添加区と過水及び硫酸第−鉄
添加区とで実施例１と同様に培養して得られる酵母菌体
粉末について、カタラーゼ力価を測定する。
基本培地とし、これに過水添加区と過水及び硫酸第−鉄
添加区とで実施例１と同様に培養して得られる酵母菌体
粉末について、カタラーゼ力価を測定する。
実施例６
実施例３において、過水濃度６％で培養した７代目の酵
母を、過水無添加培地で継代培養し、酵母菌体粉末を得
て、そのカタラーゼ力価−ｑ ｇｌ定する。
母を、過水無添加培地で継代培養し、酵母菌体粉末を得
て、そのカタラーゼ力価−ｑ ｇｌ定する。
第１図は、カタラーゼの作用標準曲線で、縦軸はＨ２Ｏ
２の分解量（μＭｏｔ７５ ｍｉｎ ） を示１、横軸
はカタラーゼ活性（Ｍ）を示す。 耳 １ 図 ５ １０ １５
２の分解量（μＭｏｔ７５ ｍｉｎ ） を示１、横軸
はカタラーゼ活性（Ｍ）を示す。 耳 １ 図 ５ １０ １５
Claims (5)
- （１）酵母菌体を過酸化水素を含有する培地に継代培養
して得られる高力価カタラーゼを産生する酵母菌体。 - （２）酵母菌体がサツカロミセス属に属する特許請求の
範囲第１項記載の酵母菌体。 - （３）酵母菌体を過酸化水素を含有する培地に継代培養
することを特徴とする高力価カタラーゼを産生する酵母
菌体の製造法。 - （４）酵母菌体を過酸化水素を含有する培地に鉄分を添
加した培地に継代培養することを特徴とする高力価カタ
ラーゼを産生する酵母菌体の製造法。 - （５）酵母菌体がサツカロミセス属に属する特許請求の
範囲第３項および第４項記載の方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP18953683A JPS6083579A (ja) | 1983-10-11 | 1983-10-11 | 高力価カタラ−ゼを産生する酵母およびその製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP18953683A JPS6083579A (ja) | 1983-10-11 | 1983-10-11 | 高力価カタラ−ゼを産生する酵母およびその製造法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6083579A true JPS6083579A (ja) | 1985-05-11 |
Family
ID=16242945
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP18953683A Pending JPS6083579A (ja) | 1983-10-11 | 1983-10-11 | 高力価カタラ−ゼを産生する酵母およびその製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS6083579A (ja) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP1301078A1 (en) * | 2000-07-19 | 2003-04-16 | Arch Personal Care Products, L.P. | Peroxide treated yeast extract and method of production |
| WO2009104622A1 (ja) | 2008-02-18 | 2009-08-27 | 明治製菓株式会社 | 耐熱性カタラーゼ |
| EP1514537A4 (en) * | 2004-03-11 | 2012-10-31 | Shiseido Co Ltd | AGGREGATE AGAINST THE AGING PROCESS AND PROMOTER OF COLLAGEN PRODUCTION |
-
1983
- 1983-10-11 JP JP18953683A patent/JPS6083579A/ja active Pending
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| JOURNAL OF BIOLOGICAL EDUCATION=1974 * |
Cited By (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP1301078A1 (en) * | 2000-07-19 | 2003-04-16 | Arch Personal Care Products, L.P. | Peroxide treated yeast extract and method of production |
| EP1301078A4 (en) * | 2000-07-19 | 2004-03-24 | Arch Personal Care Products L | YEAST EXTRACT TREATED WITH A PEROXIDE AND PROCESS FOR PRODUCING THE SAME |
| JP2004519208A (ja) * | 2000-07-19 | 2004-07-02 | アーチ パーソナル ケア プロダクツ、エル．ピー． | 過酸化物で処理された酵母エキス及びその製造法 |
| US6858212B2 (en) | 2000-07-19 | 2005-02-22 | Arch Personal Care Products, L.P. | Water-soluble yeast extract produced by adding peroxide to growing yeast cells |
| EP1514537A4 (en) * | 2004-03-11 | 2012-10-31 | Shiseido Co Ltd | AGGREGATE AGAINST THE AGING PROCESS AND PROMOTER OF COLLAGEN PRODUCTION |
| WO2009104622A1 (ja) | 2008-02-18 | 2009-08-27 | 明治製菓株式会社 | 耐熱性カタラーゼ |
| US8975053B2 (en) | 2008-02-18 | 2015-03-10 | Meiji Seika Pharma Co., Ltd. | Thermostable catalase |
| US9512409B2 (en) | 2008-02-18 | 2016-12-06 | Meiji Seika Pharma Co., Ltd. | Thermostable catalase |
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