JPS6062945A - 突然変異原性のないコ−ヒ−飲料の製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （Ｎ　技術分野 本発明は、突然変異原性のないコーヒー飲料の製造法に
関する。

（Ｂｌ　背景技術 現在、ヒトの癌発生の大部分は、生活環境中の発癌因子
に起因していると考えられている。ヒトの癌のうち、遺
伝的要因のみで発生する割合は約２％程度に過ぎないと
推定される（Ｈｉｇｇｉｎｓｏｎ＋Ｊ、　＆　Ｍｕｉｒ
、　Ｃ，Ｓ、　：　Ｊ、Ｎａｔｌ、　Ｃａｎｃｅｒ　Ｉ
ｎ５ｔ、、　Ｖｏｌ。

６！１，１２９１．ニア９）。

ヒトの死亡原因の約１７４〜１１５　を占める癌の原因
としては、我々が日常摂取する飲食品が最も重要視され
ているし、とうした見解を支持する疫学的データは枚挙
にいとまがない。

飲食品、医薬品をはじめとする環境因子の発癌性を予見
する手段として、近年ヒスチジン要求性を指標としたサ
ルモネラ・テスト（別称、エームス法）が確立された（
Ａｍｅｓ、　Ｂ、Ｎ、　ｅｔ　ａｌ、　：１＆ｔａｔｉ
ｏｎ　Ｒｅｓ、、　Ｖｏｌ　３１　、３４７　、　’　
７５　）。本法罠より調べられた化合物の突然変異原性
と発癌性の間には８０〜９０％の高い相関性が多くの研
究機関で認められている（ＭｃＣａｎｎ、　Ｊ、　ｅｔ
　ａｌ、　：Ｐｒｏｃ、　ｋｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃ
ｉ、　（（Ｊ、Ｓ、Ａ、）、　Ｖｏｌ、　７２　。

５１３５、’７５）。

従って、突然変異原性をなくすことは発癌リスクからヒ
トを守る上で少なからぬ効果が期待される。のみならず
、突然変異は染色体あるいはＤＮＡに対する障害の結果
として起こるものであり、仮に発癌に至らないまでも突
然変異原のヒトの健康に及ぼす影響は決して軽視できる
ものではない。

突然変異原性のない飲食品が望まれる所以である。

今日、飲食品、嗜好品に含まれることが明らかな突然変
異原としては、−クンノ［ａ）ピレン、７７ラトキシン
Ｂ１．２−アミノフルオレン、ベンズ〔ａ〕アンスラセ
ン、クリセン、ジメチルニトロンアミン、β−す７チル
アミン、ニトロソピロリジン、メチルグリオキザールな
どがあり、発癌性の証明されている物質が多い。しかし
、如何に突然変異原性が認められたとしても、飲食品、
嗜好品のように昔からヒトの生活と密接に結びついてい
る物品の場合には、法的な禁止措置を採ることは熱論、
これらを避けて生活することもむずかしい。

特に嗜好品の中には日常飲食品に比して高い突然変異原
性を有するものが多い（表１参照）。

紙巻きタバコ１本　５，５００（ＴＡ９８．十　）イン
スタントコーヒー１杯（１５圓）　４５，０００（ＴＡ
ｌｏｏ、−）レギュラーコーヒー１杯（１５０ｆｆｌＪ
）　１９５，０００（ＴＡｌｏｏ、−）紅茶１杯（１５
０ｍＡ’）　３８，０００（ＴＡｌｏｏ、　−）緑茶１
杯（１５０ｍＡ）　２ｉ、０００（ＴＡｌｏｏ、−）※
　サルモネラ・ティフィムリウム はＴＡ９８株を用いた。

※※　ラット肝ホモジネート（３９ミツクス）存在の有
無を示す。

（＋）　：　Ｓ　９ミツクス添加、（−）　：　Ｓ　９
ミツクス無添加。

事実、タバコと口腔咽頭癌、喉頭癌、食道癌、胃癌、肺
癌、コーヒーと膵臓癌、膀胱癌、アルコール飲料と食道
癌、肝癌などはしばしば相関性が報告されている。

本発明は、食品又は嗜好品の突然変異原性を消滅させる
か又はこれを減弱させることによって、当該物品の安全
性を向上させ、ひいては当該物品に対する信頼性を回復
させようとするものである。

コーヒーが日常的な飲み物として生活の中に位置づけら
れたのは１４００年代のアラビアと言われている。以後
、人間社会の高度な文明化に伴ない嗜好品としての需要
が益々高まっている。我が国でも最近コーヒー消費の急
速な伸び（１９６９年以降１０年間で約６倍）を記録し
ている。

しかし、近年コーヒーについては様々なかたちで健康へ
の悪影響が懸念され始め、昨年米国においてコーヒー消
費が低迷した主要な原因と考えられている。すなわち、
カフェインのもつ細胞毒性を始めとして癌との関係、殊
にマクメーン博士が指摘したコーヒー飲用と膵臓癌との
相関は欧米を中心にセンセ−ジョンを起こした（Ｍａｃ
Ｍａｈｏｎ、　Ｂ・ｅｔ　ａｌ、　：Ｎ、　Ｅｎｇｌ、
　Ｊ、Ｍｅｄ、　Ｖｏｌ、　５０４　、　６３０　。

１９８１）。膵臓癌以外で、コーヒーによる発癌率の上
昇が見られる器官は、膀胱をはじめとする下部泌尿器で
ある（Ｓｉｍｏｎ、　Ｄ、　ｅｔ　ａｌ、　：　Ｊ、　
ＮａｔｌＣａｎｃｅｒ　Ｉｎ５ｔ、、　Ｖｏｌ、　５４
　＋　５８７　、１９７５　）、ｏ更妃、前立腺癌、白
血病、卵巣癌発生を増加させるという報告もあり、今後
更に詳細な調査が待たれる。

先述した突然変異原性についても、コーヒーは日常飲食
品の中でも高い水準にある（表１参照）。

コーヒーが日常的な飲み物として大量に消費される今日
、健康に有害と考えられる諸点を解消することが早急に
望まれる。この分野の研究については今日までに多くの
成果が出ている。例えば、発癌物質の’ｒｒｐ−ｐ−１
に対するパーオキシダーゼ、Ｎ−メｆルーＮ′−ニトロ
ー１−ニトロソクアニジンに対するチオール化合物、７
．１２−ジメチルベンズアンスラセンに対するセレン化
合物にそれぞれ発癌物質の突然変異原性不活性化作用が
報告されている（Ｍａｒｔｉｎ、Ｓ、Ｅ、　ｅｔ　ａｎ
、、：　Ｉｉ’１ｕｔａｔｉｏｎＲｅｓ、、　Ｖｏｌ、
　８２　、４１　、　’１９８１など）。しかしながら
、多く、の不活性化剤はそれ自体生体に有害であったり
、嗜好性の面で常時飲用に不適当であるため実用化が困
難である。

ヒトが日頃飲用しても無害で、味、香りなどのコーヒ一
本来の特性を損なわない物質によって、コーヒーの細胞
毒性や突然変異原性をなくすことは、ヒトの健康を守る
上で是非とも必要とされよう。

ｆｃ）　発明の開示 本発明者等は、前記の目的を達成するために、鋭意研究
に努め、カタラーゼの抗変異原作用を認め、それに基づ
く特許出願を行なった（特願昭５８−１０５６０号）。

従来、コーヒー中の突然変異原としては、メチルグリオ
キサール、ジアセチルに代表されるジカルボニル化合物
が同定され、コーヒーの突然変異原性の原因物質と考え
られてきた（Ｌ−Ｆ、Ｂｊ　ｅｌｄａｎｅｓａｎｄ　Ｈ
，Ｃｈｅｗ、　ＭｕｔａｔｉｏｎＲｅｓ、、　Ｖｏｌ、
　６７　＋　３６７　。

１９７９　；　Ｈ，Ｋａｓａｉ　ｅｔ　ａｌ、、　Ｇａ
ｎｎ、　Ｖｏｌ、　７３　。

６８７．１９８２）。しかしながら、カタラーゼによる
不活性化の事実から、コーヒーの突然変異原性は、フリ
ーラジカルあるいは有機ラジカルが直接あるいは間接に
関与していることが示唆された。

実際に表２に示す如く、コーヒー中の突然変異ボニル化
合物と想定すると、Ｌ−システィン（Ｃｙｓ）、ジチオ
スレイトール（ＧＴＴ）　、還元型グルタチオン（ＧＳ
Ｈ）及びカタラーゼとの反応においてコーヒーとメチル
グリオキサールとは、異なった挙動を示し、矛盾する。

すなわちコーヒーの突然変異原性は、ジカルボニル化合
物では説明できないことが判明した。

表２ −１００　１００ Ｈ８Ｏ３−（３，７５Ｎｌイｉｃ２シＩｖ）　０　０Ｃ
ｙｓ　（４々イ（マレ厄ル）　０　１００ＤＴＴ　（４
７４１９，ｒ＞＊）ｖ）　Ｑ　１００ＧＳＨ（４マイ？
！−聾１し）　Ｏｉｏ。

カタラーゼ（７，５ｊｌイｔう、−＋）　１００　１０
−トに相当） ※※　１５■インスタントコーヒー粉末／プレート（３
８６復帰変異コロニー数／プレートに相当）本発明者ら
は、こうした知見に基づき、カタラーゼ以外のラジカル
除去酵素について検索したところはルオキシダーゼ（ｐ
ｅｒｏｘｉｄａｓｅ）　がコーヒーの突然変異原性を不
活性化することを認めた。

イルオキシダーゼ（ｄｏｎｏｒ　：　Ｈ２Ｏ２−ｏｘｉ
ｄｏｒｅｄｕｃｔａｓｅＥＣ１，１１，１，７）　の抗
変異原作用については下記の物質に対して報告されてい
る。すなわち、Ｔｒｐ−Ｆ’−１、Ｔｒｐ−Ｐ−２（イ
ずれもトリプトファンの熱分解産物）、Ｇｌｕ−ｐ−ｉ
（グルタミン酸の熱分解物）、及び２−アミノ−α−カ
ルポリン（グロブリンの熱分解物）　（Ｍ、　Ｙａｍａ
ｄａら、Ｂ、Ｂ、Ｒ，Ｏ，。

Ｖｏｌ、９０（３）、７６９−７７６．１９７９）、自
動酸化したりルン酸（Ｔ　、Ｙａｍａｇｕｃｈｉら、Ａ
ｇｒｉｃ、　Ｂｉｏｌ。

Ｃｈｅｍ、、　Ｖｏｌ、　４４（４）、　９５９〜９６
１　、１９８０　）、２−アミノアンスラセン、トリプ
トファン熱分解物、エチジウムズロマイド、オルニチン
熱分解物（山田宏和ら、特開昭５５−３７１８０）があ
る。

これらの物質の突然変異原性の挙動もコーヒーの突然変
異原性の挙動と異なることが判明している。

本発明は、コーヒーの突然変異原性の実体にっいて解析
し、新しい知見にもとづき完成した。

すなわち、コーヒーにペルオキシダーゼを配合し、その
突然変異原性を低下、消失せしめたこと及び当該操作に
よって作られた突然変異原性のないコーヒー飲料は全（
新規な事項に属する。

コーヒーの突然変異原性を消失せしめるために必要なは
ルオキシダーゼの量は、通常飲用する濃度（１５をコー
ヒー粉末／ｍｌ！　）　ｉ　ｍＡ’に対して０１〜１０
単位である。

由来のものが使用でき、これらの材料から単離精製され
たイルオキシダーゼばかりでなく、精製の各段階で得ら
れる粗ペルオキシダーゼが使用できる。

一方本法によって突然変異原性を消失せしめたコーヒー
は、加熱されることにより再び突然変異原性の現われる
ことがあるが、これを解決するには、啄ルオキシダーゼ
をコーヒーに作用させる際に、過酸化水素の存在下に作
用せしめると、不可逆的な不活性化が可能となる。これ
もまた新規な事項に属１−る。過酸化水素の存在は、コ
ーヒー飲料の製造工程上、容易に組み込めるものであり
、インスタントコーヒーの製造での常法であるスプレー
・ト９ライ法あるいはフリーズ・ト８ライ法によってコ
ーヒーを乾燥粉末化する際に除去することができる。

本発明の製造方法において、イルオキシダーゼの作用時
期は任意の時点が選択されうる。たとえば、コーヒー豆
またはコーヒー豆粉砕物とはルオキシダーゼを混合する
（レギュラータイプ）、焙煎したコーヒー豆から抽出し
定コーヒー液にイルオキシダーゼを添加する（液状コー
ヒータイプ、例、缶入りコーヒー飲料）、コーヒー豆か
らその抽出液にＲルオキシダーゼ添加後粉末化する（イ
ンスタントコーヒータイプ）　、するいは、スプレート
ゝライやフリーズドライによって粉末化したコーヒーに
はルオキシダーゼを均質に混ぜ合わせたり、同酵素を液
体としてコーヒー粉末に吹きつけること（流動層造粒法
；インスタントコーヒータイプ）によって製造すること
が可能である。

また過酸化水素を存在させる場合は、コーヒー液に４ル
オキシダーゼとともに添加するのが実際的である。また
その添加量は、コーヒー粉末１５ｍｇ当り１〜３５マイ
クロモルが適当である。

さらに本発明の方法によれば突然変異原性を消失させる
だけでなく、細胞毒性も低下させるという効果も有する
。

本発明によって製造されたコーヒーは、嗜好性も優れて
おり、ヒトの健康へのリスク軽減の目的を達成する上で
より望ましい製品を提供できる。

以下実施例により説明する。

（Ｄｌ　実施例 ■）突然変異原性及び突然変異原性抑制効果の測定方法 （１）方法：ブレインキュベーション法（杉材、長屋；
ケミカルミュータジエンス、第６巻、４１頁、１９８１
）による。

（ｎ）　使用菌株：ヒスチジン要求性のサルモネラ・テ
ィフィムリウム（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ　ｔｙｐｈｉｍ
ｕｒｉｕｍ）　Ｔａ２０５株（以下”Ｓ、ＴＡ１００株
１と略す）。

（ｉｌｉ）　試料の調製 イ）インスタントコーヒーの場合：インスタントコーヒ
ー（粉末）は蒸留水か又は所定濃度の過酸化水素水に溶
かす。一方、所定量のペルオキシダーゼも蒸留水に溶解
し、両液を５ｏｐｇずつ混合する。

口）レギュラーコーヒーの場合：焙煎コーヒー豆をその
２０＆当り２５０ｍ１の熱蒸留水で抽出し、抽出液をコ
ーヒーフィルター４−パー（カリタ製／ｌ６１２）で濾
過する。ろ液を凍結乾燥し、乾重量を測定後、蒸留水が
所定濃度の過酸化水素水に溶かす。一方、所定量のベル
オ、キシダーゼも夫々蒸留水に溶解し、両液を５０μｅ
ずつ混合する。

（１ｖ）突然変異原性の測定 前１１ｉｉ）、イ）〜口）により得られた各試料１００
μｌに、５００μｅの０．１１ｉ１１リン酸ナトリウム
緩衝液（ｐＨ７，４）　Ｋ　Ｉ　ＤＯ／’ｄ　ノＳ、Ｔ
Ａ　１００株培養液を加えたものを加える。この混合液
を３７℃で２０分間振とり後、溶解した２１の軟寒天に
混ぜ、０．１％グルコース寒天プレートに拡げる。なお
、前記軟寒天には菌をプレート上で数回分裂させるのに
必要な０．１マイクロモル／　２　ｍｌ軟寒天／プレー
トのヒスチジンを加えておく。３７℃で４８時間靜置後
、プレート上のコロニー数を復帰突然変異株として数え
る。なお、突然変異原性の抑制率は下記の式より算出す
る。

×１００％ （■）細胞毒性の測定 動物細胞として、チャイニーズノ・ムスター肺線維芽細
胞（以下、ＣＨＬ細胞と称す）を用いる。

ＣＨＬ細胞（５Ｘ１０４）をビタミン類とアミノ酸類、
及び１０％ウシ胎児血清を添加したＭＥＭ培地（ＶＡＭ
ＥＭ）中テ５％ＣＯ２，３７℃で４８時間培養した。培
養容器としては５．５　ｃｍ　２の平底の培受管を用い
る。培地は所定濃度のコーヒーを含む１０％ウシ胎児血
清を含む１ｍｌのＶＡＭＥＭに３時間だけ交換する。コ
ーヒーで処理後、ＣＨＬ細胞はリン酸緩衝液（１３５ｍ
ＭＮａｒｄ　、　２．７ｍｔＪＫＧＩ、５．３　ｍ　Ｍ
Ｎａ　２ＨＰＯ４及び１．４５　ｍ　ＭＫＨｚＰＯ４）
で細胞をトリプシン処理によって取り除き、２０〇−４
００細胞を６０ｔｎｍシャーレに播き、１０％ウシ胎児
血清を含む５ｍ／のＶＡＭＥＭ中で培養する。

平板効率（ｐｌａｔｉｎｇ　ｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙ）は
培養７日目に調べた。生存率は下記の式からめた。

饋）　イルオキシダーゼ 下記のペルオキシダーゼについて実験した。

１）イルオキシダーゼ（セイヨウワサビ由来１００〜１
５０単位／即：和光純薬工業株式会社大阪） ２）グルタチオン被ルオキシダーゼ（ウシ赤血球由来、
０．５単位／■：ベーリンガー・マンハイム山之内株式
会社、東京） ３）ラクトペルオキシダーゼ（牛乳由来、４０単位／■
：　Ｐ、Ｌバイオケミカル社、−ライスコンシン、米国
） （ｉ）　ペルオキシダーゼのコーヒーの突然変異原性に
対する抑制効果。

（イ）　レギュラーコーヒー 先述の方法で調製したコーヒー豆抽出エキス粉末１５■
を蒸留水に溶がし５ｏμｅ　とする。一方、はルオキシ
ダーゼを所定量（０，，０３〜１５単位）蒸留水に懸濁
または溶解して全量５０μｅにし、両者を混合し室温で
２０分間静置する。これに０．１Ｍリン酸ナトリ′ウム
緩衝液（ｐＨ７，４）０．５ｍｇと前記Ｓ、ＴＡＩ　Ｏ
０株の培養液Ｑ、　１ｍｇを順次混合し、前ｆｃ）Ｉ）
（＋）の方法によって突然変異原性を測定し、第１図（
ａ）に示した結果を得た。

レギュラーコーヒーの突然変異原性は、抽出後凍結乾燥
したコーヒー粉末１５■に対してペルオキシダーゼを０
，４単位添加すれば、はとんどもしくは完全に不活性化
できる。第１図（ａ）で復帰変異コロニー数は０ではな
いが、本実験における自然発生復帰変異コロニー数（対
照）は１０４であり到底有意に突然変異原性が認められ
るものではない。通例では対照の２００％未満の数値は
有意とは認められないので、本図において１０６以下の
コロニー数は０との間に有意差がないものと判断した。

これは以下の実験に於いても同様である。

（ロ）　インスタントコーヒー 市販のインスタントコーヒー粉末を用い、レギュラーコ
ーヒーの場合と同様の操作でペルオキシダーゼの抗変異
原活性を調べた。結果を第１図（ｂ）に示す。

インスタントコーヒーの場合も、先述したレギュラーコ
ーヒーと同じ＜ハルオキシターセによって突然変異原性
が著しく低減もしくは完全に消失した。すなわち、イン
スタントコーヒー粉末１５■に対して０．２２５単位の
イルオキシダーゼを添加すれば、その突然変異原性をほ
とんどもしくは完全に抑制することが可能である。なお
、レギュラーコーヒー、インスタントコーヒーともＳ９
ミツクス（ラット肝ホモジネートの９０００ｇ上澄と還
元型ニコチン酸アミド９アデニンジヌクレオチド燐酸（
ＮＡＤＰＨ）産生系を合わせたもの）添加によって一度
不活性化した突然変異原性が再び現れることはなかった
。

（１１）　過酸化水素添加効果 前述のようにコーヒーの突然変異原性は昼ルオキシダー
ゼによって減少する。しかし、突然変異原性をなくした
コーヒーの中には、加熱処理（例えば、オートクレーブ
処理（１２０℃、２０分間））をすると再び突然変異原
性の現れるもののあることが判明した。　１ コーヒーの突然変異原性の不可逆的な不活性化のための
条件を検討したところ第２図に示した如く、過酸化水素
添加が有効であった。すなわち、オートクレーブ処理に
よって、ペルオキシダーゼを配合したコーヒーの突然変
異原性が無処理（は化オキシダーゼおよび過酸化水素水
を添加せず、オートクレーブ処理もしない）のコーヒー
の突然変異原性に対して約６２％だけ再び出現したのに
対し、インスタントコーヒー粉末１５ｍｇに対し約６．
５マイクロモルだけ過酸化水素（６０％過酸化水素水０
．４μｅ／プレートに相当）をベルオキシダーゼと共に
添加したコーヒーの突然変異原性は不活性化されたまま
であった。過酸化水素は製造工程上、例えばスプレー・
ドライあるいはフリーズ・ドライ法によってコーヒーを
乾燥粉末化する際に除去することができる。

ｆｉｉｉ）　ハルオキシダーゼ、あるいははルオキシダ
ーゼと過酸化水素で処理したコーヒーの細胞毒性。

コーヒー粉末１ｍ９に対してペルオキシダーゼを１単位
、更に過酸化水素を２６５ナノモル添加（あるいは無添
加）後凍結乾燥した標品奪実験開始前に蒸留水にて所定
濃度になるように溶解し、膜フイルタ−（ポアサイズ：
０．４５μｍ）にて除菌後、先述した方法Ｖにより、チ
ャイニーズ・ハムスター肺線維芽細胞（ＣＨＬ細胞）に
対する各種コーヒーの細胞毒性を調ベタ（表３）。

表３ ０　０　０　１００ １　０　０　３９ ２　９　０　１７ ４　０　０　２ ０　４　０　１００ １　１　０　６２ ２　２　０　５８ ４　４　０　２ ０　０　９４０　１００ １　１　２３５　１１５ ２　２　４７０　５３ ４４９４０２６ その結果、ペルオキシダーゼ、アルイハハルオキシダー
ゼと過酸化水素を配合したコーヒーのＣＨＬ細胞に対す
る細胞毒性は低下した。例えば、コーヒー濃度が２　ｍ
９　／　ｍ１３では、ＣＨＬ細胞の生存率は１７％であ
るが、ペルオキシダーゼを２単位／ｍｅ添加したコーヒ
ーでは５８％、ペルオキシダーゼ（２単位／ｌｎ／ｌ）
と過酸化水素（９４０ナノモルフ１ｒＬｅ）を添加した
コーヒーでは５３％と生存率の上昇が確認された。

ペルオキシダーゼの種類による差は実験に用いた６種の
間では顕著ではない。すなわち、インスタントコーヒー
粉末１５ｍｇの突然変異原性を抑制するためにはペルオ
キシダーゼ（セイヨウワサビ製）で、０．３単位、グル
タチオンイルオキシダーゼ（ウシ赤血球製）で０．２５
単位ラクトペルオキシダーゼ（牛乳製）で０，５単位が
必要であった。

また、ハルオキシダーゼあるいはハルオキシダーゼと過
酸化水素処理して突然変異原性や細胞毒性を低下・消失
させたコーヒーは嗜好品本来の味香りは損なわれていな
い。

【図面の簡単な説明】

第１図ｆａ）及び第１図（ｂ）はそれぞれレギュラーコ
ーヒー、市販インスタントコーヒーに対するハルオキシ
ダーゼの突然変異原性不活性化作用を示すグラフであり
、第２図は、過酸化水素添加の効果を示すグラフである
。第２図中※印は無処理（４ルオキシダーゼおよび過酸
化水素を添加せず、オートクレーブ処理もしない）のコ
ーヒーの突然変−ノ処理したコーヒーの突然変異原性を
示す。ここでコーヒーはインスタントコーヒー１５１ｎ
９／プレートを使用し、はルオキシダーゼは１５単位／
プレート添加しである。 特許出願人　サン）　ＩＪ−株式会社 （外４名） 秦１回（（１） べ°ルオ〜シクーで゛、震イ立／フ゛レート秦１図Ｃｂ
） イノシ料し９イ、車値／プレート ＃、２図 ａｏＸ蓮畷化７祷氷、ｌノ／デし一ト 手続補正書 昭和５９年７　月）−に日 特許庁長官　若杉和夫　殿　１ １、事件の表示 昭和５８年特許願第−１７０９５３号 ２、発明の名称 突然変異原性のないコーヒー飲料の製造法６、補正をす
る者 事件との関係　特許出願人 住所 名称（１９０）サントリー株式会社 ４、代理人 明細書の〔発明の詳細な説明〕の欄 ６、補正の内容 （１）明細書を下記の如く訂正する。 頁　行　訂正前　訂正後 ７　１４　ＭｕｔａｔｉｏｎＲｅｓ、、　Ｍｕｔａｔｉ
ｏｎ　Ｒｅｓ、。 ８　６　突然変異原性　突然変異原性の大部分 ９　１６　リノレン酸　リノレン酸 １０　１６　一方　一方、 （２）明細書９頁１９行目と２０行目との間に下記を挿
入する。 「　すなわちＴｒｐ　−Ｐ−ｉ、Ｔｒｐ−Ｐ−２，２−
アミノ−α−カルボリンなど上記の物質は、いずれもフ
レームシフト型変異を引き起こスカ、コーヒ＝は塩基置
換型変異を生ずる。従ってコーヒーの突然変異原性は上
記のいずれの物質によっても説明できない。」 以　上

Claims (3)

【特許請求の範囲】
1. （１）　コーヒー飲料に、Ｒルオキシダーゼを作用せし
   めることを特徴とする突然変異原性のないコーヒー飲料
   を製造する方法。
2. （２）過酸化水素存在下にはルオキシダーゼを作用せし
   める特許請求の範囲第（１）項記載の方法。
3. （３）　、：−ヒー飲料カインスタントコーヒーである
   特許請求の範囲第（１）項または第（２）項記載の方法
   。