JPS60500956A - 皮膚の細胞および組織の再生用組成物およびその調整方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 皮膚の細胞および組織の再生 用組成物およびその調製方法 本発明は、皮膚の細胞および組織の再生用組成物に関する。

本発明はこの組成物の調製方法にも関する。

皮膚、更に他の器官はその使用した細胞を再生することによってその若さを保持 する。表皮は、死亡無核細胞からなシこれは角化し次いで除去される。

これらは、表皮中に連続的に形成される若い細胞によって置き代えられねばなら ない。

生理学的細胞の再生は、器官が血液を、介して多くの必須の材料を消費し、毛管 は表皮への接続を与える。

もしも器官が疲労するか又は古く々るとこの欠陥が該再生を妨げる。その結果皮 膚が老化し、更にこれは、器官がそれ自体もはや規則正しく更に適当に供給でき ない因子を皮膚に直接供給することによって回復できる。

本発明の目的は、皮膚の老化防止を可能にし更に皮膚細胞の再生を与えるような 因子を皮膚に提供できるようにした組成物を提供することにある。

本発明によれば、該組成物は発癌性因子のない純粋なりＮＡに富む植物胚の水性 抽出物を含有し、該ＤＮＡそれ自身植物胚から抽出されている。

この組成物の植物胚の水性抽出物は、皮膚にビタミン、アミノ酸および微量元素 を提供する。

この組成物はまた更に特に細胞増殖に対する必須の因子であるＤＮＡを皮膚に供 給する。

組成物はまた次の二つの主な性質を有する。

皮膚による耐性と良好な同化；かくしてそれは不調和の原因とガりそうな動物生 産物を含有してい々い； 発癌性因子が存在しないこと、すなわちもしそうでなければＤＮＡは受容皮膚の 細胞核の中心に来る。

本発明に係る組成物を皮膚に適用すれば、皮膚の水和およびタン・ぐり同化を促 進することにより、不足した細胞の増殖を可能とする。この組成物は又、真皮の 巡回従って栄養を与える。

本発明に係る組成物は、発癌性遺伝子を有しない純粋なりＮＡを約１０重量％を 含むのが好ましい。植物胚は、好ましくは大豆および／又は小麦胚種である。

本発明の他の態様によれば、皮膚の細胞および組織を再生す石ための本発明に係 る組成物の調製方法は次の工程を含んでなる。

植物胚を水性媒質中で抽出し、ＤＮＡ　、ビタミン、アミノ酸および微量元着を 抽出し、抽出されたＤＮＡが発癌性遺伝子因子を有しないことを確認するための 検査を行ない、もし検査が陰性である場合、ｔ°粉細植物胚を離解させることに よって得られた水性拍゛出物にＤＮＡを添加し、もし検査が陽性である場合、Ｄ ＮＡを再溶解し次いで溶液を連続的にルナーゼに適用し更にプロナーゼに適用し 、ＤＮＡが発癌性遺伝子因子を有しないかどうかに関し、新たな検査を行ない、 しかる後植物胚を離解することによって得られた水性抽出物にＤＮＡを添加する ことを含んでなる。

発癌性遺伝子因子を有しないＤＮＡを純粋々状態で得るためには、次の方法が好 ましい： サノ力ロース、ＥＤＴＡ（エチレンジアミン四酢酸）および塩化ナトリウムを含 有する、ＰＨが実質的に９５に緩衝された抽出溶液の存在中で小麦および大豆胚 を粉細し、溶液を沢過し次いでアニオン性洗剤がすでに添加された、ＰＨが実質 的に７．４に緩衝された塩性トリス溶液中に残留物を懸濁させ、室温で攪拌後、 過塩素酸ナトリウムを添加し次いで０℃で攪拌を継続させ、次いで、クロロホル ムおよびオクタツールを添加し、しかる後溶液を遠心分離し、ＤＮＡ−含有水相 を回収し次いでＤＮＡを、氷冷却エタノールを添加して沈殿させる。

ＤＮＡが発癌性遺伝子を有しないかどうかを検査す４ るため、前記ＤＮＡを鋭敏な結晶化に委ね次いで細胞培養に関しその作用を試験 に委ねる。

もしも前記検査が陽性である場合、ＤＮＡを塩化ナトリウムおよびｐＨ７に緩衝 化されたくえん葭項の溶液中に再溶解し、しかる後約８０℃に加熱し引き続き０ ℃に急冷することによってドナ〜ゼが予じめ除去されている溶液からルナーゼを 約３７℃で作用せしめ；次いでゾロナーゼを約３７℃で作用させしかル後クロロ ホルムおよびオクタツールを添加し次いでＤＮＡを水冷却エタノールで沈殿させ る。

好ましくは、本発明に係る組成物はＤＮＡの活性を強化するため陰性イオン流に 委ねる。

本発明に係る組成物の調製方法を、実施例により非制限的に説明する。

１００ｇの新鮮な麦芽および１００ｇの新鮮な小麦胚種を粉細し次いで水ｌｔ中 ビール酵母２０．９を添加後離解したが、該水には２００．９のグリセリンがＰ Ｈを７に保つだめの硼酸塩緩衝液および抗酸化剤が添加された。

同時に、４０Ｉの大豆および小麦胚種が抽出緩衝液（０，２５Ｍのサッカロース 、０．０５ＭのＥＤＴＡ　。

０．０５ＭのＮａ−Ｃ１、ｐＨ９，５において）の存在中ンオンテエイングラウ 砂と共に粉砕機中で粉細した。次いで、得られた粉細材料を４層のガーゼで流過 し次いでろ液を２５０００．９で、４℃で１０分間遠心分離した。

残留物を４ゴの塩性トリス緩衝液（０，１５ＭのＮａＣ１、７，４に等しいＰＨ のトリスの０．０１５Ｍ）を含むビーカーに懸濁させ、これに１．２　ｍｌの３ ０％アニオン性洗剤を添加した。室温で１５分間攪拌後、１２ｍ１の過塩素酸ナ トリウム（ＮａＣｔ０４５Ｍ）を添加し次いで０℃で攪拌を継続させた。次いで 、５　ｍｌのクロロホルムおよび０．６　ｍｌのｎ−オクタツールを添加し次い で混合物を更に１５分間攪拌した。得られた溶液を２５０００　＆で１０分間４ ℃で遠心分離した。

これによシ三相を得る。底部のクロロホルム相、中間タンパク皮膚、およびＤＮ Ａを含有する核酸を含む頂部水相。この相を注意深く回収する。水冷エタノール ２　ｍｌを添加するとＤＮＡ繊維を沈殿させる。次いで繊維をガラス棒の周囲に 巻きつけ更にアセトン中で冷温に保った。

得られた繊維は主にＤＮＡを含み、小量のＲＮＡおよびアミノ酸を含有する。こ れらの繊維が発癌性遺伝子もしくは発癌性因子を保持しないことを確保するため のチェックを行う必要がある。この目的のため、鋭敏な結晶化法および細胞培養 に対するＤＮＡ繊維の作用を用いた。もしこの検査が陰性である場合、予じめ調 製した水相抽出物にＤＮＡを添加する。もしも検査が陽性である場合、精製を継 続せねばならない。

アセトンかりＤＮＡ繊維を除去し次いで空気流で乾燥せしめた後、該繊維を最少 の塩化ナトリウムおよびくえん酸塩溶液（ＮａＣｌ　０．１５　Ｍ　、　ｐＨ７ のくえん酸塩０、Ｏ］、５Ｍ）に再溶解する。

タン・やりおよびすｄ２ヌクレイツク汚染物を減少させるため、ルナーゼ（濃度 ：ＰＨ５でＮａＣｌ　０．１５　Ｍ中最終ｍｌ当たり１．００層ｇ）を、熱的制 御されたタンク内で３７℃で３０分間適用する。

汚染ドナーゼ（ＤＮＡ５Ｅ　）を、この目的に対し８゜℃で１０分間加熱し更に ０℃に急冷することにょシ使用したルナーゼ（ＲＮＡ５Ｅ　）から除去する。

次いで、ルナーゼ（最終ｍｌに対し５００ｇｇ）を３７℃で数時間適用する。ノ ロナーゼは予じめ攪拌しながら３７℃で２時間次いで３７℃で１時間自己消化さ れなければなら々い。

ルナーゼおよびノロナーゼ酵素の作用の後、ＤＮＡの最終脱タンパクはクロロホ ルムおよびオクタツールの混合物を用いて行々い、次いで先に説明した如く水冷 却エタノールを用いて沈殿させた後、精製ＤＮＡ繊維をガラス棒に巻く。

次いで発癌性遺伝子因子が存在しないことを確認するため、新たな検査を行う。

次いでＤＮＡを溶液Ａに添加できる。

先に説明した例に従って調製した組成物は、何らかの発癌性遺伝子因子のない純 粋々ＤＮＡ約５％、ビタミンＡ　、　Ｂ１．　Ｂ２．　Ｂ５．　Ｂ１２．　Ｅ　 、　Ｋ　、　Ｄ　、　ＨおよびＰＰ、カルシウム、鉄、マグネシウム、ナトリウ ム、カリウム、塩素、イオウ、珪素、亜鉛、マンガン、コバルト、銅および砒素 の如き微量元素および小量のアミノ酸を含有する。

この組成物は、少なくとも１％の純粋なりＮＡを含有するようにそのような形態 であるいは又希釈された形態で市販することが意図される。

ＤＮＡの作用は、溶液を陰性イオン流に委ねることによシ好ましく強化される。

本発明に係る組成物は、他の化粧用又は医薬成分と混合してローション剤、クリ ーム剤、軟膏剤等の形態で皮膚に適用することが可能である。

化粧用配合物のいくつかの実施例を以下に掲げる。

（１）　ローション剤 ＤＮＡ組成物　１（ＪＪｇ ｐＨ５，８の硼酸塩緩衝液：２５０ｍ１リシノール酸ナトリウム：１０ｍ１ 蒸留ハマメリス水で１０００ｄとする 低アレルギー性香料　適量 （２）　クリーム剤 ＤＮＡ組成物゛２５Ｉ ｐＨ５，８４７）硼酸塩緩衝液：５０ｍｌ８ ア−；′　ド泊：２０ｍ１ パーヒドロスクアレン：３ｍｌ ・２　ヒ刑　、００９ 蒸ｄ・−で水で２５０ｇとする 低アレルー′Ｊ゛−性香料、適量 本発臥に係る組成物は又、ＤＮＡの毒性がないため飲料可能な又は注入可能なア ンプル剤の形態で提供す２ことも−きる。

一″−施例′Ｃしれげ　−の種の飲料可能な又は注入可能なアンプル剤の組成は 次の如くである。

純粋なりＮＡ　：　２．５　ｇ 生理食塩水で１．ｏｍｌとする 耕°下に示す臨床試験は、本発明に係る組成物の有効性を示す。

一連の臨床試験は、皮膚又は頭髪が有効な再生治療からの利益を得るような患者 について行なった。

ＤＮＡ、ビタミンおよび微量元素の共用は真の再生共同作用を与える。非常に肯 定的な結果が見出され、これは次の症例において幾度もすばらしいものであった 。

結膜派揄の２症例 顔および首の深艷しわの４症例 一般的に定義された条件のもとての皮膚の生活力不足の２症例 ９　特表口Ｕ　ＧＯ−５００！１５ｆｉ　（４）脂漏の１症例 および局所蜂菓織炎の３症例 頭髪の治療により頭垢、脂漏が排除され、頭髪損失が停止し更にすでにつやがな く更に脆弱な毛が再生した。

本発明に係る組成物が、不十分な細胞増殖を再活性させ、更に皮膚水和およびタ ン・ぐり同化を促進するように作用することが見出された。また、この組成物は 捷だ皮膚の血行を刺激し、従って細胞への栄養を刺激する。

国際調査報告 ＡＮＮＥＸ　Ｔｏ　ＴｈＥ　ＩＮＴＥＲＮＡＴＩＯＮＡＬ　５ＥＡＲＣＨＲＥＰ ＯＲＴ　０ＮＩＮＴＥＲＮＡＴＩＯＮＡＬ　ＡＰＰＬＩＣＡＴＩＯＮ　Ｎｏ、　 ＰＣＴ／ＦＲ８４１０○０７８’（ＳＡ　６８２１）ＦＲ−Ａ−１２７８０６５ Ｎｏｎｅ 第１頁の続き ０発　明　者　ドウラツフルド　ジャン−マックス フランス国、７５１１６　パリ、アベニュ　ビクトル　ニーゴー　１１ビス

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、皮膚の細胞および組織の再生用組成物であって、発癌性因子のない純粋なり ＮＡに富む、植物胚の水性抽出物を含有し、該ＤＮＡそれ自身植物胚から抽出さ れている、前記組成物。 ２　発癌性因子のない純粋なりＮＡ　１〜１０重量％を特徴する請求の範囲第１ 項記載の組成物。 ３　ビタミン、微量元素およびアミノ酸をも含んでなる、請求の範囲第１項又は 第２項記載の組成物。 ４　大豆および／又は麦芽から抽出されたＤＮＡを特徴する請求の範囲第１〜第 ３項のいずれかに記載の組成物。 ５　請求の範囲第１〜第４項のいずれかに記載の皮膚の細胞および組織の再生用 組成物の製造方法であって、次の工程 植物胚を水性媒質中で抽出し、ＤＮＡ、ビタミン、アミノ酸および微量元素を抽 出１〜、 抽出されたＤＮＡが発癌性遺伝子因子を有し々いことを確認するための検査を行 ない、 もし検査が陰性である場合、粉細植物胚を離解させることによって得られた水性 抽出物にＤＮＡを添加しミ もし検査が陽性である場合、ＤＮＡを再溶解し次いで溶液を連続的にルナーゼに 適用し更にプロナーゼに適用し、 ＤＮＡが発癌性遺伝子因子を有しないかどうかに関し、新た々検査を行ない、し かる後 植物胚を離解することによって得られた水性抽出物にＤＮＡ　ｉ添加することを 含んでなる、前記方法。 ６　前記ＤＮＡを得るため、次のＩ「程。 サッカロース、ＥＤＴＡ　（エチレンノアミン四酢酸）および塩化す）　ＩＪウ ムを含有する、ｐｌ（が実質的に９５に緩衝された抽出溶液の存在中、小麦およ び大豆胚を粉細し、 溶液を沖過し次いでアニオン性洗剤が添加された、ＰＨが実質的に７４に緩衝さ れた塩性トリス溶液中に、残留物を懸濁させ、 室温で攪拌後、過塩素酸すｌ−１）ラムを添加し次いで０℃で攪拌を継続させ、 次いで、クロロホルトおよびオククノールを添加し、しかる後溶液を遠心分離し 、Ｉ）ＮＡ−含有水相を回収１〜次いでＩ）ＮＡを、水冷却エタノールを添加し て沈殿させる、前記方法。 ７　前記ＤＮＡを鋭敏な結晶化に委ね次いで細胞項部に関しその作用を試験する ことにょシ、該１）ＮＡが発癌性遺伝子因子を有するか否かに関し検査を行う、 請求の範囲第５項又は第６項記載の方法。 ８　もしも前記検査が陽性である場合、ＤＮＡを塩化１２ ナトリウムおよびＰＨ７に緩衝化されたくえん酸塩の溶液中に再溶解し、しかる 後約８０℃に加熱し引き続き０℃に急冷することによってドナーゼが予じめ除去 されている溶液からルナーゼを約３７℃で作用せしめ；次いでプロナーゼを約３ ７℃で作用させしかる後クロロホルムおよびオクタツールを添加し次いでＤＮＡ を氷冷却エタノールで沈殿させる、請求の範囲第７項記載の方法。 ９　発癌性遺伝子因子を、ＰＨ７の硼酸塩緩衝液および抗酸化剤の存在中、大豆 および小麦胚の水性マセレートに添加する、請求の範囲第５項〜第８項のいずれ かに記載の方法。 １０、前記ＤＮＡの活性度を強化するため陰性イオン流に該組成物を委ねる、請 求の範囲第５項〜第９項のいずれかに記載の方法。