JPS6036505A - 重合体製品およびその製造方法 - Google Patents
重合体製品およびその製造方法Info
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- JPS6036505A JPS6036505A JP59135056A JP13505684A JPS6036505A JP S6036505 A JPS6036505 A JP S6036505A JP 59135056 A JP59135056 A JP 59135056A JP 13505684 A JP13505684 A JP 13505684A JP S6036505 A JPS6036505 A JP S6036505A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、トロンビンのような血漿凝固過程に関わりの
ある物質に対する選択的な親和性ならびに■およびＸ因
子のようなある種の凝固因子を乗合体もしくは共重合体
に附与することのできる基によって置換された重合体も
しくは共重合体を基体とする製品に関する。本発明はま
たこれらの特性を有する製品の製造ならびにトロンビン
の分離ならひに精製のためにこの製品を使用することに
関連する。
ある物質に対する選択的な親和性ならびに■およびＸ因
子のようなある種の凝固因子を乗合体もしくは共重合体
に附与することのできる基によって置換された重合体も
しくは共重合体を基体とする製品に関する。本発明はま
たこれらの特性を有する製品の製造ならびにトロンビン
の分離ならひに精製のためにこの製品を使用することに
関連する。
一層特定的に本発明は、重合体もしくは共重合体に特殊
な性質を与える、基ＸおよびＹが統計的に結合している
置換可能な基を鎖中に含む重合体もしくは共重合体を基
体とする製品に関する。
な性質を与える、基ＸおよびＹが統計的に結合している
置換可能な基を鎖中に含む重合体もしくは共重合体を基
体とする製品に関する。
基ＸおよびＹが特別な抗凝固特性をもつこの型の重合体
はフラ／ス特許第２，４６１，７２４号中に一層詳細に
述べられている。この特許において畝グルタミ／酸のご
とく少くとも一つの遊離のカルボニル官能基を望ましく
はもつアミノ酸誘導体を重合体に結合することにより、
抗凝固特性が得られている。この特許に従うとき、アミ
ノ酸がいくつかのアミン官能基金もつ場合、単にスルフ
ォン化のみが行なわｔ’している重合体よりも良い満足
すべき抗凝固特性を得るために、ペンシロキシカルボニ
ルもしくは第三ブチロキシカルボニル基のような生理的
に許容できる電子誘引基によって、ただ一つを除いたす
べてのアミン基を封鎖するととが必要である。
はフラ／ス特許第２，４６１，７２４号中に一層詳細に
述べられている。この特許において畝グルタミ／酸のご
とく少くとも一つの遊離のカルボニル官能基を望ましく
はもつアミノ酸誘導体を重合体に結合することにより、
抗凝固特性が得られている。この特許に従うとき、アミ
ノ酸がいくつかのアミン官能基金もつ場合、単にスルフ
ォン化のみが行なわｔ’している重合体よりも良い満足
すべき抗凝固特性を得るために、ペンシロキシカルボニ
ルもしくは第三ブチロキシカルボニル基のような生理的
に許容できる電子誘引基によって、ただ一つを除いたす
べてのアミン基を封鎖するととが必要である。
上記のフラ／ス特許に記載の製品は抗凝固特性をもって
はいるが、血漿凝固過程に対するこの製品に効果はヘパ
リンのそれと同じであり、従って触媒として作用するの
で、トロ／ビンに対する選択的な親和性をもたない。従
って、トロンビンに関してみた場合、この製品は、その
分離ならびに精製の方法において吸着剤として使用され
うるに十分な程度の親和性と選択性とをもつものではな
い。
はいるが、血漿凝固過程に対するこの製品に効果はヘパ
リンのそれと同じであり、従って触媒として作用するの
で、トロ／ビンに対する選択的な親和性をもたない。従
って、トロンビンに関してみた場合、この製品は、その
分離ならびに精製の方法において吸着剤として使用され
うるに十分な程度の親和性と選択性とをもつものではな
い。
この他さらに、才力モトおよびその他によってジャーナ
ル−オプ メディカル ケミストリー（Ｊｎｕｒｎａｌ
ｏｆ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ）
１９８０年２３巻８号の８２７〜８６６ページおよび
１２９３〜１２９９ページに記載されているごとり、ト
ロンビンに対する抑制効果をもつ、Ｌ−アルギニンから
誘導される分子が知られている。この誘導体は下記の式
を有する： Ｒ１−８０２−ＮＨ−ＣＨ−Ｃｏ−Ｒ”（ＣＨ２） ３ ＮＨ 、イ・０＼ ＮＨＮＨ２ 上記の製品の活性に対する基Ｒ１およびＲ２の影響が研
究されている。しかし、これらの著者はこのような製品
のトロンピ／に対してもちうる親和性を選択性とについ
て何ら詳細を示してい力い。
ル−オプ メディカル ケミストリー（Ｊｎｕｒｎａｌ
ｏｆ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ）
１９８０年２３巻８号の８２７〜８６６ページおよび
１２９３〜１２９９ページに記載されているごとり、ト
ロンビンに対する抑制効果をもつ、Ｌ−アルギニンから
誘導される分子が知られている。この誘導体は下記の式
を有する： Ｒ１−８０２−ＮＨ−ＣＨ−Ｃｏ−Ｒ”（ＣＨ２） ３ ＮＨ 、イ・０＼ ＮＨＮＨ２ 上記の製品の活性に対する基Ｒ１およびＲ２の影響が研
究されている。しかし、これらの著者はこのような製品
のトロンピ／に対してもちうる親和性を選択性とについ
て何ら詳細を示してい力い。
本発明の概要
本発明の目的はトロンビンに対する選択的な親和性をも
つ重合体もしくは共重合体を基体とする製品であって、
従ってトロンビンを他の蛋白質から分離しかつ精製する
ために使用することができる製品である。
つ重合体もしくは共重合体を基体とする製品であって、
従ってトロンビンを他の蛋白質から分離しかつ精製する
ために使用することができる製品である。
本発明の製品は、基Ｘと基Ｙとが統計的に結合している
置換可能な基を鎖中に有する重合体もしくは共重合体か
らなジ、基ＸはＲ１が水素原子もしくは生理的に許容で
きる金属であるとして−５０３−Ｒ１でおる。基Ｙの式
は一３ｏ２−Ｒ２であυ、Ｒ２はアルギニノもしくはア
ルギニンの誘導体から誘導される基であって、そのアミ
ン官能基−ＮＨ−によって−８０２−基に結合している
。
置換可能な基を鎖中に有する重合体もしくは共重合体か
らなジ、基ＸはＲ１が水素原子もしくは生理的に許容で
きる金属であるとして−５０３−Ｒ１でおる。基Ｙの式
は一３ｏ２−Ｒ２であυ、Ｒ２はアルギニノもしくはア
ルギニンの誘導体から誘導される基であって、そのアミ
ン官能基−ＮＨ−によって−８０２−基に結合している
。
Ｒ２は式：
％式％
）
（ここでＲ３は水素またはＣ１から０４のアルキル基を
表わし Ｒ４は水素またはＮＯ２基を表わす）を表わす
のが望ましい。
表わし Ｒ４は水素またはＮＯ２基を表わす）を表わす
のが望ましい。
本発明の方法の望ましい一態様に従うとき、基Ｙは下式
を表わすニ ー５０２−ＮＨ−ＣＨ−Ｃｏｏ−ＣＨ３（ＣＨ２） ｓ ＮＨ ＮＨ″′ｆ″ゝＮＨ２ 従ってこのような製品はトロンピノに対する非常に高い
親和性と選択性とを示し、そのためにこの製品は特に興
味深い。しかし本発明に従うとき、Ｒ２が式： −ＮＨ−ＣＨ−ＣＯＯＨ １ （ＣＨ２）３ ＮＨ ■ −ＮＨ−ＣＨ−Ｃｏ○ＣＨ３ ■ （ＣＨ２）３ ＮＨ −ＮＨ−ＣＨ−ＣＯＯＨ ■ （ＣＨ２）３ ■ ＮＨ ■ である製品を使用することもまた可能である。
を表わすニ ー５０２−ＮＨ−ＣＨ−Ｃｏｏ−ＣＨ３（ＣＨ２） ｓ ＮＨ ＮＨ″′ｆ″ゝＮＨ２ 従ってこのような製品はトロンピノに対する非常に高い
親和性と選択性とを示し、そのためにこの製品は特に興
味深い。しかし本発明に従うとき、Ｒ２が式： −ＮＨ−ＣＨ−ＣＯＯＨ １ （ＣＨ２）３ ＮＨ ■ −ＮＨ−ＣＨ−Ｃｏ○ＣＨ３ ■ （ＣＨ２）３ ＮＨ −ＮＨ−ＣＨ−ＣＯＯＨ ■ （ＣＨ２）３ ■ ＮＨ ■ である製品を使用することもまた可能である。
本発明に従って良好な結果を得るためには、基Ｙの割合
が、重合体もしくは共重合体鋼に結合した基ＸおよびＹ
のすべてに対して約１０ないし２０％であるのが好まし
い。
が、重合体もしくは共重合体鋼に結合した基ＸおよびＹ
のすべてに対して約１０ないし２０％であるのが好まし
い。
本発明に従うに、使用可能な重合体および共重合体は、
クロロスルフォン酸と反応しうる基を鎖に沼って有する
物質である。
クロロスルフォン酸と反応しうる基を鎖に沼って有する
物質である。
コノような重合体の例はポリスチレン、セルロース ポ
リエステル、セルロース ポリエーテル、ポリビニル
アセテート、ポリビニル クロライド、ポリイソプレン
およびポリゲタジエンである。
リエステル、セルロース ポリエーテル、ポリビニル
アセテート、ポリビニル クロライド、ポリイソプレン
およびポリゲタジエンである。
スチレン、セルロース エステル、セルロースエーテル
、ビニル アセテート、ビニル クロライド、イソプレ
ンおよびシタジエンから得ら７１．る共重合体を用いる
こともまた可能である。
、ビニル アセテート、ビニル クロライド、イソプレ
ンおよびシタジエンから得ら７１．る共重合体を用いる
こともまた可能である。
本発明に従うとき重合体がポリスチレンであるのが好ま
しい。
しい。
本発明の製品は水中および生理液中に目■溶な生成物で
あるか、水中におよび生理液中に不溶な生成物であって
よい。後者の場合、基ＸおよびＹを担持する塩基性の重
合体もしくは共重合体は、交叉結合共重合体もしくは重
合体であジ、このため製品が不溶性になる。
あるか、水中におよび生理液中に不溶な生成物であって
よい。後者の場合、基ＸおよびＹを担持する塩基性の重
合体もしくは共重合体は、交叉結合共重合体もしくは重
合体であジ、このため製品が不溶性になる。
本発明はまた上記したごとき置換重合体もしくは共重合
体からなる製品の製造方法にも関する。
体からなる製品の製造方法にも関する。
本発明は、
ａ）重合体もしくは共重合体をクロロスルフォン酸と反
応することによりクロロスルフォン化し、かつ ｂ）このようにして重合体もしくは共重合体と結合した
−５０２Ｃｅ基を、クロロスルフォン化された共重合体
もしくは重合体を塩基性媒体中でアルギニンもしくはア
ルギニ／誘導体と反応することによジ、−８○３Ｒ１お
よび一３０２Ｒ２基（ここでＲ２はアルギニ／もしくは
その誘導体から誘導される基である）に転化する ことからなる。
応することによりクロロスルフォン化し、かつ ｂ）このようにして重合体もしくは共重合体と結合した
−５０２Ｃｅ基を、クロロスルフォン化された共重合体
もしくは重合体を塩基性媒体中でアルギニンもしくはア
ルギニ／誘導体と反応することによジ、−８○３Ｒ１お
よび一３０２Ｒ２基（ここでＲ２はアルギニ／もしくは
その誘導体から誘導される基である）に転化する ことからなる。
重合体がポリスチレンであるとき、クロロスルフォン化
反応は以下の反応式に相当する：出発重合体は交叉結合
さ扛たもしくは交叉結合されてない重合体であってよい
。可溶性製品をつくるために非交叉結合重合体を利用す
る場合、スルフォン化は、塩素化溶媒、例えばジクロロ
メタンからなるのが有利である有機媒体中で行なわれ、
そしてこのようにして得られるクロロスルフォン化重合
体は、これをアルギニンもしくはその誘導体と反応する
のに先立って二ｌ・コメタン中で次いで沈澱される。そ
してこれは酸については水−ジオキサ／混合物を含有す
る媒体中でまたアルギニ７エステル誘導体についてはジ
クロロメタンを含有する媒体中で行なわれるのが好まし
い。
反応は以下の反応式に相当する：出発重合体は交叉結合
さ扛たもしくは交叉結合されてない重合体であってよい
。可溶性製品をつくるために非交叉結合重合体を利用す
る場合、スルフォン化は、塩素化溶媒、例えばジクロロ
メタンからなるのが有利である有機媒体中で行なわれ、
そしてこのようにして得られるクロロスルフォン化重合
体は、これをアルギニンもしくはその誘導体と反応する
のに先立って二ｌ・コメタン中で次いで沈澱される。そ
してこれは酸については水−ジオキサ／混合物を含有す
る媒体中でまたアルギニ７エステル誘導体についてはジ
クロロメタンを含有する媒体中で行なわれるのが好まし
い。
しかし、不溶性の置換重合体を得るのが望ましい場合、
出発物質は交叉結合重合体もしくは共重合体でアク、ま
た反応はジクロロメタンおよびニトロメタンのような塩
素化溶媒を含有する混合物中で実施さする。アミノ酸と
の反応は次いで水−ジオキサン混合物を含有する媒体中
で行なわれる。
出発物質は交叉結合重合体もしくは共重合体でアク、ま
た反応はジクロロメタンおよびニトロメタンのような塩
素化溶媒を含有する混合物中で実施さする。アミノ酸と
の反応は次いで水−ジオキサン混合物を含有する媒体中
で行なわれる。
クロロスルフォン化反応のために過剰のクロロスルフォ
ン酸が用いられる。
ン酸が用いられる。
クロロスルフォン化共重合体もしくは重合体のアルギニ
ンもしくはその誘導体との反応は水−ジオキサン混合物
を含有する媒体中で行なわれる。
ンもしくはその誘導体との反応は水−ジオキサン混合物
を含有する媒体中で行なわれる。
以下の式に従って行なわれるこの反応の際ニーＮＵ−Ｃ
Ｈ−ＣＯＯＨ＋ＨＣ’λ （ＣＨ２）３ Ｈ 塩化水素酸の発生がアク、媒体が酸性化される。
Ｈ−ＣＯＯＨ＋ＨＣ’λ （ＣＨ２）３ Ｈ 塩化水素酸の発生がアク、媒体が酸性化される。
ソーダを添加することにより反応媒体のＰＨが８に保た
れ、反応の進行を維持することができる。…が変らなく
なると反応は終了する。この反応に際して、附随的な反
応、特に下記の式に従うクロロスルフォン化ポリスチレ
ンの部分的加水分解が起る。
れ、反応の進行を維持することができる。…が変らなく
なると反応は終了する。この反応に際して、附随的な反
応、特に下記の式に従うクロロスルフォン化ポリスチレ
ンの部分的加水分解が起る。
従って、得られる製品は、反応がソーダの存在で塩基性
媒体中で実施さ扛るので、 −５Ｏ２−アルギニン基と
−５ｏ３Ｈ基より一般には一８○３Ｎａ基とを同時にも
つであろう。
媒体中で実施さ扛るので、 −５Ｏ２−アルギニン基と
−５ｏ３Ｈ基より一般には一８○３Ｎａ基とを同時にも
つであろう。
＋Ｒ２基がアルギニンのアルキルエステルを表わすとき
、クロロスシフォノ化重合体もしくは共重合体は、ジク
ロロメタン中に溶液として導入されるメチルエステルの
ヒドロクロリドと反応さｎる。
、クロロスシフォノ化重合体もしくは共重合体は、ジク
ロロメタン中に溶液として導入されるメチルエステルの
ヒドロクロリドと反応さｎる。
その後、ヒドロクロリドを離脱させるためにトリエチル
アミンを添加する。望ましくはジクロロメタン中ヨって
予め飽和さ扛たクロロスルフォン化共重合体もしくは重
合体を次いで導入する。クロロスルアォン化重合体もし
くは共重合体からクロロヒトリドを離脱させるのに必要
な量のトリ土チルアミ／を次に徐々に添加する。
アミンを添加する。望ましくはジクロロメタン中ヨって
予め飽和さ扛たクロロスルフォン化共重合体もしくは重
合体を次いで導入する。クロロスルアォン化重合体もし
くは共重合体からクロロヒトリドを離脱させるのに必要
な量のトリ土チルアミ／を次に徐々に添加する。
アルギニンもしくはその誘導体との反応の後、このよう
にして得ら扛た変性交叉結合重合体もしくは共重合体に
は、凝固因子と干渉する可能性のあるすべての不純物を
除去するために精製処理がなさ扛るのが望ましい。さら
にまた製品のＰＨは生理的なＰＨ値にバランスするのが
好ましい。
にして得ら扛た変性交叉結合重合体もしくは共重合体に
は、凝固因子と干渉する可能性のあるすべての不純物を
除去するために精製処理がなさ扛るのが望ましい。さら
にまた製品のＰＨは生理的なＰＨ値にバランスするのが
好ましい。
この精製処理は一般に、塩化ナトリウム溶液を用いる何
回かの洗浄操作を行ない、引続いて蒸溜水での洗浄、く
えん酸ナトリウムでの洗浄、ミカエリス（Ｍｉｃｈａｅ
ｌｉｓ ）緩衝液での洗浄、蒸溜水でのすすぎ洗いなら
びに炉内での乾燥を行うことにより実施さｎる。これら
の操作に引続いて、得ら牡る生成物は一般に、より微細
な粒子を得るために、遊星運動式（ｐｌａｎｅｔａｒｙ
）粉砕機もしくはミルによって粉砕される。なぜなら
ば微細な粒子はトロンビンもしくは他の凝固因子を吸収
するのに一層有効であることが証明さｎているからであ
る。
回かの洗浄操作を行ない、引続いて蒸溜水での洗浄、く
えん酸ナトリウムでの洗浄、ミカエリス（Ｍｉｃｈａｅ
ｌｉｓ ）緩衝液での洗浄、蒸溜水でのすすぎ洗いなら
びに炉内での乾燥を行うことにより実施さｎる。これら
の操作に引続いて、得ら牡る生成物は一般に、より微細
な粒子を得るために、遊星運動式（ｐｌａｎｅｔａｒｙ
）粉砕機もしくはミルによって粉砕される。なぜなら
ば微細な粒子はトロンビンもしくは他の凝固因子を吸収
するのに一層有効であることが証明さｎているからであ
る。
粉砕時間の関数たる２ないし１００μｍの平均粒子寸法
を得るために、この操作は一般に遊星運動式粉砕機内で
行なう。
を得るために、この操作は一般に遊星運動式粉砕機内で
行なう。
本発明による方法により得られる製品は、従って、−３
ｏ３Ｒ１基と−５ｏ２Ｒ２基と全同時に含み、また、反
応の進行全制御することによ、Ｏ−５Ｏ２−の数全広い
範囲で、例えば１から６θ％にて変化することができる
。
ｏ３Ｒ１基と−５ｏ２Ｒ２基と全同時に含み、また、反
応の進行全制御することによ、Ｏ−５Ｏ２−の数全広い
範囲で、例えば１から６θ％にて変化することができる
。
しかしトロンビ／との良好な親和性をもつ製品を得るた
めには、重合体もしくは共重合体に結合するアルギニン
基もしくはアルギニン誘導体の数を２Ｑ％以下の値に制
限するのがある場合に望ましい。
めには、重合体もしくは共重合体に結合するアルギニン
基もしくはアルギニン誘導体の数を２Ｑ％以下の値に制
限するのがある場合に望ましい。
従ってアルギニン メチルエステルがら誘導さ扛る基Ｙ
ｉポリスチレンがもつ場合、結合した基Ｙの数が基Ｘお
よびＹのすべての１０ないし２０％であるときに、一般
に最良の結果が得られる。
ｉポリスチレンがもつ場合、結合した基Ｙの数が基Ｘお
よびＹのすべての１０ないし２０％であるときに、一般
に最良の結果が得られる。
本発明の製品は特に、トロンビ／に対する非常に良好な
選択性をもつ。従って、製品が不溶性であるとき、多量
のトロノビ／を選択的に吸着することがで＠また適当な
溶液例えば１．５Ｍの塩化ナトリウム溶液もしくは臭化
ヘキザジメトリン〔ポリグレン（Ｐｏ１ｙｂｒｅｎｅ
） 〕によって脱着することによシトロ／ビ／を次いで
回収することができる。
選択性をもつ。従って、製品が不溶性であるとき、多量
のトロノビ／を選択的に吸着することがで＠また適当な
溶液例えば１．５Ｍの塩化ナトリウム溶液もしくは臭化
ヘキザジメトリン〔ポリグレン（Ｐｏ１ｙｂｒｅｎｅ
） 〕によって脱着することによシトロ／ビ／を次いで
回収することができる。
このようにして回収されたトロンビンの酵素活性が維持
されることが証明されているので、上記のことは非常に
興味深い。
されることが証明されているので、上記のことは非常に
興味深い。
同様にして、本発明の製品は血液の凝固ないしは凝血（
ｃｌｏｔｔｉｎｇ ）過程に関与する因子■およびＸに
対する非常に高い親和性を有し、従ってＶＩＪＩ Ｃ抗
体を吸着しうるという特性をもつ。
ｃｌｏｔｔｉｎｇ ）過程に関与する因子■およびＸに
対する非常に高い親和性を有し、従ってＶＩＪＩ Ｃ抗
体を吸着しうるという特性をもつ。
従って本発明の製品には多数の応用方法がある。
水および生理液中に不溶の製品は、抗凝固性物質からつ
くられる心臓導管補綴物（ｃａｒｄｉｎｖａｓｃｕｌａ
ｒｐｒｏｓｔｈｅｓｅｓ ）、カテーテル、縫合糸のよ
うな種種の物品を製造するのに用いることができる。水
中および生理液中に可溶である製品は、薬品として使用
するための抗凝固作用をもつ溶液全製造するために用い
ることができる。
くられる心臓導管補綴物（ｃａｒｄｉｎｖａｓｃｕｌａ
ｒｐｒｏｓｔｈｅｓｅｓ ）、カテーテル、縫合糸のよ
うな種種の物品を製造するのに用いることができる。水
中および生理液中に可溶である製品は、薬品として使用
するための抗凝固作用をもつ溶液全製造するために用い
ることができる。
しかし、本発明の製品の最も興味深い応用の一つは、そ
れが水中および生理液中に不溶の製品であるとき、トロ
ンビンの選択的吸着剤の製造である。
れが水中および生理液中に不溶の製品であるとき、トロ
ンビンの選択的吸着剤の製造である。
本発明はまた、基−３ｏ３−Ｒ１（Ｒ”は水素もしくは
生理的に許容できる金属である）と基−３Ｏ２−１（”
（Ｒ２はアルギニンもしくはアルヤニン誘梼体の基であ
って、その−鉗−アミノ官能基によって一５Ｏ２−に結
合している）とを鎖中にもつ交叉結合重合体もしくは共
重合体からなる不溶性製重金、トロンビンを含む溶液と
接触し、この溶液からトロンビ／を吸着した製品を分離
し、かつ塩化ナトリウムもしくは臭化へキサジメトリン
の溶液を用いて脱着することによシトロンピンを回収す
ることからなるトロンビンの分離ならびに精製のための
方法にも関する。
生理的に許容できる金属である）と基−３Ｏ２−１（”
（Ｒ２はアルギニンもしくはアルヤニン誘梼体の基であ
って、その−鉗−アミノ官能基によって一５Ｏ２−に結
合している）とを鎖中にもつ交叉結合重合体もしくは共
重合体からなる不溶性製重金、トロンビンを含む溶液と
接触し、この溶液からトロンビ／を吸着した製品を分離
し、かつ塩化ナトリウムもしくは臭化へキサジメトリン
の溶液を用いて脱着することによシトロンピンを回収す
ることからなるトロンビンの分離ならびに精製のための
方法にも関する。
使用する不溶性製品は一５Ｏ３Ｎａ基と−８０，−ＮＨ
−ＣＨ−Ｃｏｏ−ＯＨ３（ＣＨ２） ３ ＮＨ １、Ｊｌ（ｚ″′−ＮＨ２ と金有する交叉結合ポリスチレンであるのが好ましい。
−ＣＨ−Ｃｏｏ−ＯＨ３（ＣＨ２） ３ ＮＨ １、Ｊｌ（ｚ″′−ＮＨ２ と金有する交叉結合ポリスチレンであるのが好ましい。
以下に本発明を非限定的な態様に関して添附の図面全参
照しつつ、より詳細に説明する。 第１ないし第４図は、血小板もしくはフィブリノーゲン
の欠乏した血漿の凝固試験の結果全例解するものであり
、不活性化されたトロンビｙの量金、本発明に従って変
性される交叉結合ポリスチレン濃度の関数として表わす
。 第５図は、不活性化さ牡たトロンビンの水準の変化をイ
ンキューペーショ／期間（ｉ、ｎｃｕｂａｔｉｎｎｐｅ
ｒｉｏｄ ）の関数として示す。 第６図は、吸着されたトロンビンの水準全最初に導入さ
れたトロンビンの量の関数として示す。 第７図は、媒体中に残存するトロンビンの濃度第８図は
、本発明に従って交叉結合されかつ変性されるポリステ
レｙの濃度の関数として、吸着されたトロンビ／の水準
の変化を示す。 第９および第１０図は、抗トロンビン厘の存在で実施さ
れる試験で得られた結果であり、吸着さｎたトロンビ／
の百分率の変化を、インギューベー７ヨン期間の関数と
して表わす。 本発明の実施例 例１ 本例はＳＯ３Ｎａ基と、基： ５ｏ２−ＮＵ−ＣＨ−Ｃｏｏｎ （ＣＨ２）３ ＮＨ 篭 ＮＨ？＼ＮＨ２ と金もつ交叉結合ポリステレ／の調製について例解する
。 ａ、） クロロスル７オノ化ポリスチレンの合成粒子寸
法５０ないし１３０μｍの交叉結合ポリスチレン粉末１
００ｇｔＩＭのＮａＯＨ３Ｑ Ｑ ｒｎ１４中にい扛、
環境温度下で１時間ゆっくりと攪拌する。 粉末を真空下で濾過し、蒸溜水で洗浄しかつ１Ｍのｎ＋
：Ｖ４００ｍｌ中で１時間再びゆつくジと攪拌する。粉
末を真空下で濾過し、蒸溜水で次いでメタノールで洗浄
しかつ４０°Ｃにて真空下で最終的に乾燥する。 このようにして洗浄したポリスチレン粉末２０ｇをと９
、乾燥した球形フラスコ中で１６０ｍ１のＣＩ（２Ｃｅ
２と混合する。次いでニトロメタン１３０ｍ１とＨｓｏ
３ｃｄ １１０ ｖｌ／と全被螺下で添加し、次に混合
物を４０°Ｃの油浴上に４時間おく。粉末を真空下で濾
過しかつＣＨ２Ｃｅ２およびアルコールによって瀞液全
ゆっくり脱活する。次に粉末全ニトロメタンで、次いで
ＣＨ２Ｃｅ２およびジオキサンで洗浄し、引続いて真空
下で４０°Ｃにおいて乾燥する。 このようにして、クロロスルフォン化ポリスチレン粉末
２０ｇ金得る。 ｂ） クロロスル７オｙ化ポリスチレン粉末への７５０
０ｍ１のビーカー中に、水９４ｍ１とジオキサ７５６ｍ
１とを含有する水とジオキサンとの混合物１５０Ｍの存
在でアルギニンモノヒドロクロリド２０．９に導入する
。次に、アルギニ／を完全に可溶性にするために２Ｍの
ＮａＯＨソータ゛金添加フる。 次に予め得てあったクロロスル７オ／化ポ゛リスナレン
粉末１０Ｆを添加し、かつソーダの添加によｐＰＨ値全
８〜９に保つ。ｐＨ値に変化がなくなった時、反応が終
了する。次に粉末全饅過し、蒸溜水により十分に洗浄し
、次いでＱ、５ Ｍ ＮｑＯＨソーダ溶液で洗浄し、次
に一晩ゆっくりと攪拌しつ風水中に保つ。次に粉末全濾
過し、蒸溜水で洗浄しかつ真空下で４０°Ｃにて乾燥す
る。ニトロアルギニン全結合するために同じ手続を用い
る。 Ｃ）特性表示 得られる生成物の窒素、硫黄および塩素含有率を次に元
素分析によって決定し、また加水分解によジ放出される
イオンの銀滴定金用いる定量によって塩素水準を決定す
る。結合したアルギニンの量もまたカルボキシル官能基
の酸−塩基定量を行うことにより決定する。これによっ
て、得られる生成物の未変性のステレ／の座位（８１ｔ
８ ）の百分ｍ （Ｗ ） 、スルフォネートの百分率
（ｘ）、アルギニンの百分率（Ｙ）および副生物 ができる。結果は後記の第１表に示す。 例２〜例７ こ扛らの例は一３Ｏ３Ｎａ基と、基ニ ー８０２ＮＨ−ＣＨ−ＣＯＯＣＩ（３ （ＣＨ２） ３ ＮＨ／＼ＮＨ２ と金もつポリスチレ／の調製について例解する。 例１におけるように、クロロスルフォン化ポリスチレ／
を調製する。谷側においてクロロスルフォン化ポリスチ
レンｉ ｏ、ｐｔ用いる。 ｉ拌に行いつつ、アルギニンメチルエステルヒドロクロ
リド１６．６．９ （６４ミリモル）を乾燥の球形フラ
スコ中でＣＨ２０ｇ、３００ ｒｎｌ中に溶解する。 この後、ヒドロクロリドを離脱させるために混合物にト
リエチルアミン２９１ｎｌ（２００ミリモル）、同シく
マたクロロスルフォン化ボリスチレ／１゜ｊｊ （５ｏ
２Ｃ／ ４２．６ミリ当量）を添加する。次いでトリエ
チルアミン６ｍ１（４３ミリモル）ヲゆっくりと添加し
、かつ２０°Ｃで１６時間攪拌を続ける。 次にポリステン／全真空下で濾過し、さらにジオキサン
および水で洗浄しかつ真空下で４０°Ｃにて乾燥する。 得られる生成物金側１におけると同じ分析にかける。得
ら扛た結果もまた第１表に示す。 例８ 本例は−８０３Ｎａ基と、基： −８ｏ、−ＮＨ−ＣＨ−Ｃ’０ＯＣＨ３１ （ＣＨ２）３ ＮＨ Ｃ＝ＮＨ ｕ Ｏ２ と金もつクロロスルフォン化ポリスチレンの調製につい
て例解する。 例１におけるごとく、５ｏ２Ｃ７ｌ’を４２．６ミリ当
量含有するクロロスルフォン化ポリスチレ／を調製スル
。このクロロスルフォン化ポリスチレン１０ｙを用い、
そしてアルギニ／ メチルエステルヒドロクロリドの代
りにニトロアルギニン メチルエステル１７１（６４ミ
リモル）ヲ用いることは別として、例２から例７におけ
るのと同じ操作手順を用いてニトロアルギニン メチル
エステル全結合することによりスル７オＺ化ポリスチレ
／を変性する。操作終了後、得られる生成物音例１にお
けるのと同じ分析にかけ、得られた結果をまた第１表に
示す。 例９ 本例においては例２および例３において得られた生成物
をトロンビン金不活性化するために用いるために、これ
らの生成物を処理する。まづ、得らｎた生成物に対して
血液蛋白質と反応するであろう不純物を完全に除去する
ための処理を行う。 このために、混合物をゆっくりと２時間攪拌しつつ、ポ
リステレ：／４ｇあたｆ） ＮａＣＶ ２５０ ｍｌｋ
用いて、１．５ＭＮａＣｅによる洗浄操作を２回まづ行
なう。次に、”変性したポリスチレン粉末ヲ瀞過し、引
続いて蒸溜水で洗浄し、かつゆっくりと２時間攪拌しつ
〜１ｍのくえん酸三ナトＩＪウムで２回洗浄する。次に
ｐＨ７，３２のミカエリス緩衝液中に粉′末を２時間懸
濁する。この後、蒸溜水で十分に洗浄し、かつ真空下で
オーブン乾燥する。次に遊星運動式粉砕機中で６時間粉
砕しかつ光学顕微鏡での直接的な観察およびブラウン運
動に基礎をおくタルトロエックス（Ｃ０ｕｌｔｒｏｎｉ
ｘ ）法を用いて、得られる粒子の平均直径を測定する
。最後に、ミカエリス緩衝液中での粉末の膨潤の度合い
を測定するが、これは下式に相当する： ここでＷ。およびＷは乾燥の粉末重量およびミカエリス
緩衝液中での水和された粉末の重量である。 得られる結果は下記の第２表に示す。 第 ２ 表 例 ２ ６６ （粉砕せず） ２．５０例 ２ １．６
（粉砕物） 例 ６ ８６ （粉砕せず） ２．５７例１０ 本発明による製品の抗凝固特性を以下の試験を行うこと
により本例において試験する：ａ）本発明に従って変性
された交叉結合ポリステン／粒子全含有する溶液でイン
キユーペーションした人間の血漿について、トロンビ／
の添加により凝固全開始した後の、凝固時間を測定し；
ｂ）同じ重合体溶液で誘導したフイブリノーゲンの凝固
時間を測定し： Ｃ）ポリスチレン懸−液金緩衝溶液にておきかえること
により、フイグリノーデ／の対照凝固時間を測定し； ｄ）レプテラーゼを添加することにより凝固全開始しつ
一１本発明に従って変性されたポリスチレン浴液の存在
でフイブリノーゲンもしくは血漿の凝固時間を測定する
。 本例においては、−３０３Ｎａ基と、基ニー５ｏ２−Ｎ
）（−ＣＨ−ＣＯＯ−ＣＨ３（ＣＨ２）３ ＮＨ ＮＨ４＼□２ と含有する例２で得た交叉結合ポリスチレン（ＰＡＯＭ
）を用いる。 使用′ｆゐ他の反応剤は以下のとおりである。゛血小板
の欠乏した血漿（ｐｐｐ ）は、くえん酸塩化された人
間の血液からつ＜Ｄ、−８℃においていくりかに分けて
保存する。試料全融解しかつ試験に先立って４°Ｃで保
存する。人間の１・ロンビンはパリのサンドル ナショ
ナール ドウ トランスフイジョ７ サンギｙ （Ｃｅ
ｎｔｒｅ Ｎａｔｉｏｎａｌ ｃｌｅｔｒ ａｎＳ ｆ
ｕｇ １０ｎ Ｓａｎ ｇｕ ｌ ｎ ｅ ；国立輸血
センター）（ＣＮＴＳ ）からのものでろ’） ｓ １
０９４ Ｎ工ＨＴＪ／ｍｙの濃度をもつ。こＡｋミカエ
リス緩衝液中に溶解しかつ一８０℃で保存するが、試験
前に４℃に保つ。人間のフイブリノーゲンもまたパリの
ＣＮＴＳからのものであ、０％０．１５ＭのＮａＣｅ溶
液中に６ｍｙ ／ ｍｌの割合で溶解する。これ全試験
中６７℃に保つ。スタビ（Ｓｔａｇｏ ）社により供給
されるレゾテラーゼ全蒸溜水中に溶解し、使用前６７℃
に保つ。 アルギニ／ メチルエステル基を含有する交叉結合ポリ
スチレン試料ｗｔカニリス緩衝液中に懸濁しかつ試験に
先立ち超音波によジ脱ガスする。 種にの凝固時間を測定するために、ＰＡＯＭ懸濁液［］
、Ｑ５ｍもしくは緩衝液０．０５１ｎｌ’ｅ、血小板の
欠乏した人間の血漿０．２０ｍ１Ｋより２７°Ｇで１０
分間インキユーペーションシた。次いでトロンビ／溶液
（１５ＮＩＨｕ／ｍｌ） ０．０５ｍ１？−添加し、Ｋ
Ｃ（１’凝固計を用いて６７（℃にて凝固時間を測定し
た。 血小板の欠乏した血漿の代りに６ ｍｔ） ／ ｍｌの
フイブリノーゲン溶液を用いて、同一の条件下で試験を
行う。ＰＰＰおよびフイブリノーゲンについても同−県
外下でやはり凝固試験を行うが、レプチラーゼの代りに
トロンビンを用いる。 この後、ポリスチレン懸濁液０．０５ｍ１の代りに緩衝
液肌０５ｍ１−ｆｒ−用いて、血小板の欠乏した血漿と
フイグリノーケ９ンとについて凝固試験を行うが、血漿
もしくはフイブリノーゲンの凝固時間を、遊離の１・ロ
ンビ／の濃度の関数として表わす較正曲線をつくるため
に、各種の濃度のトロ／ビア０．０５ｍ１を添加する。 これらの結果に基いて、アルギニン メチルエステルに
よって変性さ扛たポリスチレン（ＰＡＯＭ ）によって
不活性化されるトロンビンの水準を決定することができ
る。不活性化されたトロンビ／の水準を懸濁液のＰＡＯ
Ｍ濃度の関数として決定するために、懸濁液のＰＡＯＩ
、ｉ濃度を変化することによジ種々の試験を行う。 得ら扛る結果全第１図に示す。こ扛は懸濁液のポリステ
レ／濃度（＋＋＋９／ｍｌ）の関数として、不活性化さ
れたトロンビンの水準（ＮＩＩＨｕ／Ｉｎ１）を表わす
。曲線１は血小板の欠乏した血漿についての試験に関し
、また曲線２はフィブリノ−）ｆｙについての試験に関
する。こｎらの試験においては、粉砕されて平均粒子寸
法１．６μｍｉもっ例２のＰＡＯＭ金用いる。 第２図は、粉砕されてなく従って６６±６μｍの平均粒
子寸法をもつＰＡＯＭ を用いて、血漿について実施し
た凝固試験で得られる結果を例解する。 第２図はまた不活性化さ扛たトロ／上／の水準の変化音
、懸濁液の重合体濃度の関数として示す１゜第１図の曲
線１と第２図の曲線１とを比較することにより、平均粒
子寸法１．６μｍのＰＡＯＭ粉末の使用により、平均寸
法６６μｍｆもつＰＡＯＭにて得られるよジも著しく高
い不活性化トロンビン水準を得ることが可能であるのを
知ることができる。 従って、粉砕の後、ＰＡＯＭは大量のトロンビンを抑制
することができるが、これは疑いなく粒子表面上の接近
可能な活性座位の割合がよｐ犬であることによる。 血漿およびフイブリノーゲンについて得られた結果（第
１図の曲線１および２）全比較すると、ＰＡＯｌｖｉの
抗凝固作用には抗トロンビン厘のようなトロンビン抑制
剤の存在を必要とせず、このことはＰＡＯＭがヘパリン
と同じ挙動をしないことを例証するということを知るこ
とができる。 最後に、これらの試験の終了時に、レプテラーゼによる
凝固時間はＰＡＯ１ｖｉ懸濁液の存在下で普通の−１−
であることが判明した。このことから、本発明によるＰ
ＡＯＭの抗凝固効果はフイグリノーケゞンの劣化による
ものでないと推論することができる。 例１１ 例１において得られるアルギニンによって変性されたポ
リスチレン懸濁液（ＰＡ ）もしくは例８においで得ら
れるニトロアルギニン メチルニスデルによって変性さ
れたポリスチレン（ＰＮＡＯＭ ）を用いて同一の凝固
試験を行う。得ら扛る結果金弟６および第４図に示すが
、こ扛らは懸濁液のＰＡもしくはＰＮＡＯＭ濃度の関数
として、不活性化さｎたトロ／ビンの水準を表わす。 第６図は血漿に対してまた第４図はフイグリノーケ８ノ
に対して行った実験に関する。曲線６および６′はＰＮ
ＡＯＭに捷た曲線４および４′はＰＡに関する。 例１２ 本例においては以下の操作手順に従いつ＼、例１のＦＡ
、例２のＰＡＯＭおよび例８のＰＮＡＯＭについてトロ
ンビンの吸着試験を行う。 ＰＡ 、 ＰＡＯＭもしくはＰＮＡＯＭの懸濁液０．２
ｍｌもしくハミカエリス緩衝液Ｑ、２ｍｌを種々の濃度
のトロ／ビア０．２ｍｌにてまた種々の時間にわたって
６７０Ｃにおいて懸濁する。傾瀉もしくは沈降の後、上
澄み液ｏ、ｉｍｌ’ｉ試料としてと９、かつそれを血小
板の欠乏した血漿（ｐｐｐ ） ０．２ ｍ１３に添加
する。次に凝固時間を測定するが、試験で得た結果にも
とづき、上澄み液中に残存するトロンビンの水準を決定
するために較正曲線を用いる。吸着されたトロンビンの
水準は、導入されるトロンビンの量と上澄み液中に残存
するトロンビ／の量との間の差に対応する。 例２のＰＡＯＭにて得られた結果全第５図に示すが、こ
れは吸着されたトロンビンの水準（Ｕ ７ｍｌ）をイン
キューペーショ７期間（分）の関数として表わす。曲線
５は濃度４．６ｍ９／ｍｌのＰＡＯＭ懸濁液および５Ｏ
Ｎ工Ｈｖ ／ ｍｌのト０７ ヒｙ ０．２ ｍｌ Ｋ
ツいて実施した試験に関する。曲線６は１５ｍ９／ｍ
ｅのＰＡＯＭ ’ｉ金含有る懸濁液および２５ ＮＩＨ
ＴＪ ７ｍｌのトロンビ１０．２ｍノの使用に関する。 曲線７は７．５ｍ９／ ｍｌ（７） ＰＡＯＭ’を含有
する懸濁液およびｊ Ｑ ＮＩＨｖ／ｍｌのトロンビ／
Ｑ、２ｒｎｌについて丈施した試験に関する。 第５図において得られる結果は、 ＰＡＯＭ粒子の表面
上へのトロンビ／の吸着は時間とともに増大するが、１
２分たつと飽和することを示す。 第６図は、前述と同じ条件下で試験を行うがたたしＦＡ
、０Ｍ懸濁液とトロンビンとの接触時間を１２分に制限
した場合の、例２のＰＡＯＭ ８子上のトロンビンの吸
着曲線を示す。曲線８は７．５ｍ９／ｍｌのＰＡＯＩＡ
全含有するＰＡＯＭ懸濁液を用いる時性られる結果金、
また曲線９は懸濁液のＰＡＯＭ含有率が４．６ｍｙ／、
ｄである時に得られる結果を例解する。 こ扛らの曲線はトロンビ／の最初の濃度（ＮＩＨＵ／
ｍｌ、で表示）の関数として、吸着されたトロンビンの
水準の変化を表わす。曲線９はＰＡＯＭ含有率４．６ｍ
９／ｍ−１に対応し、最初ゆるい勾配をもち、トｏ７ビ
／の初期濃度約１１０ ＮＩＨＴＪ ／ｙｔｌにおいて
平坦部に到達する。従ってこのことから、試験条件下で
トロンビ／の吸着が２７ＮＩＨＴＪ／ゴまでに限定さ扛
、樹脂１７’１９がトロ／ビン５．９ ＮＩＨｕＡｎノ
のトロンビンを吸着しうると結論することができる。Ｐ
Ａ（：）Ｍ粒子の寸法を念頭におくならば、トロンビン
の表面濃度は１．７±０．５μｇ／ｃｒｒ］２でらると
仮定することができる。従ってθがトロ／ビ／でθ 被覆されたＰＡＯＭの表面を表わすとして、１−６の比
を決定することができる。第７図はこの比の変化を％Ｎ
ＩＨｖ ／ ｍｌで表わした遊離のトロンビン濃度の関
数として表わす。これらの結果に基き、ＰＡＯＭとトロ
／ビンとの間の親和性係数を決定することができ、粒子
寸法と懸濁液のＰＡＯ１ｖｌ濃度とに関係ないその値は
２．６±０．２ １３６７ｍｏｅである。 例１６ 本例においては、例１２の手順に従って、ただし例１で
得た粒子寸法２ないし７０μｍのアルギニンで変性され
ているポリステレ／粒子、直径２４μｍ全もつ例８のニ
トロアルギニン メチルエステルで変性されたポリスチ
レン粒子（ＰＮＡＯＭ）、同じくまた直径６５μｍのニ
トロアルギニンで変性さ扛たポリスチレン粒子（ＰＮＡ
） ′ｆ：用いて吸着試験を再び行う。吸着したトロ
ンビンの水準は懸濁液に添加さｎるトロンビンの最初の
濃度（Ｎ１１ｌｕ／ｍＪで表示する）の関数として決定
される。 得られる結果全第８図に示すが、同図は吸着したトロン
ビンの濃度の変化を懸濁液の重合体濃度の関数として表
わす。曲線１０はＰＡに、曲線１１はＰＮＡＯＭにまた
曲線１２はＰＮＡに関する。曲線１６は粒子寸法６６μ
ｍのＰＡＯＭにて得ら扛る結果全比較して示す。 例１４ 本例においては例１２のＰＡＯＭ粒子の懸濁液の存在も
しくは不存在の下でトロンビンおよびその抑制剤である
抗トロ／ビン■の接触を行なう。誘導は６７℃で種々の
時間にわたって行う。その後、上澄み液中に残存するト
ロ／ビンの量の測定を行う。得られる結果を第９および
第１０図に示す。 これらの図は脱活したトロンビンの百分率（ＮＩＨＵ
／分で表示）を時間（分）の関数として表わす。 第９図において曲線１４は抗トロンビ／の量がト０／ビ
ンの童の２倍に相当する場合、ＰＡＯＭの存在もしくは
不存在の下に得られる結果を表わす。 第１０図において曲線１５は抗トロンビ／の量が１・口
／ビ／の量の６倍である場合のＰＡＯＭの存在もしくは
不存在の下に得ら扛る結果全表わす。 このようにして、ＰＡＯＭの存在は抗トロンヒフ量によ
るトロンビ／の抑制に何ら影響を与えないことまたそれ
が凝固過程に触媒として働かないことを知ることができ
る。 第 １ １ ２人１ １４．８６ １．１９ １．６９２ ＰＡ
ＯＭｌ １２．１５ ０．８７ ０．８５−０．８７３
ＰＡＯＭ２ ５．６６ ０．９６ ０．９６−０．９
９４ ＰＡＯＭ４ ５．８７ ０．８６ Ｃ１，８５−
０，９０５ｐＡｏ）、＋５１１．４４ ０．１５４−０
．２６ＰＡ、（’）Ｍ６ ９−０３ ０．８９７ ＰＡ
ＯＭ７１３−５５ ０−５９−０−５２０．５５Ｂ Ｐ
ＮＡＯＭｌ ４．１３ １．００ １．Ｉ ０８ＯｉＮ
ａ＝ １６ ２０．９ ５５ ２ − １６ ＜５３ １９ ２ ２．５０ ’＋６’６０ ２２ １ − １６６３１９１ − １６７９３．０ − １６ ６Ｂ ８．３ ２．４６ ２７ ６６ ６．７６ ３．００ ３５ ４０ ２４ − ＣＨ２−ＣＨ−、、。 ４、図面の簡単な説明 第１ないし第４図は血小板もしくはフイグリノーケ９／
の欠乏した血漿の凝固試験の結果を示す。 第５図は不活性化さしたトロンビンの水準の変化を示す
。 第６図は吸着さｎるトロンビンの水準を示す。 第８図は吸着されるトロンビ／の水準の変化を示ア。 第９図および第１０図は抗トロンビンの存在下での実施
した試験結果を示す。 代理人 浅 村 晧 ＦＩＧ、２ 鴇 ） 噂 ト ト 憤 偽 リ 〉ト ’Ｉｔ ｌｉ、ｙ／７７ｔ ％υ：／／７７／ 第１頁の続き ＠発明者 ダニエル グリノ フラ ジ。 ０発 明 者 ジャクリーン ジョグ フラフオンビク
ズ ｏ発 明 者 マルセル ジョズフォ フランビクズ
照しつつ、より詳細に説明する。 第１ないし第４図は、血小板もしくはフィブリノーゲン
の欠乏した血漿の凝固試験の結果全例解するものであり
、不活性化されたトロンビｙの量金、本発明に従って変
性される交叉結合ポリスチレン濃度の関数として表わす
。 第５図は、不活性化さ牡たトロンビンの水準の変化をイ
ンキューペーショ／期間（ｉ、ｎｃｕｂａｔｉｎｎｐｅ
ｒｉｏｄ ）の関数として示す。 第６図は、吸着されたトロンビンの水準全最初に導入さ
れたトロンビンの量の関数として示す。 第７図は、媒体中に残存するトロンビンの濃度第８図は
、本発明に従って交叉結合されかつ変性されるポリステ
レｙの濃度の関数として、吸着されたトロンビ／の水準
の変化を示す。 第９および第１０図は、抗トロンビン厘の存在で実施さ
れる試験で得られた結果であり、吸着さｎたトロンビ／
の百分率の変化を、インギューベー７ヨン期間の関数と
して表わす。 本発明の実施例 例１ 本例はＳＯ３Ｎａ基と、基： ５ｏ２−ＮＵ−ＣＨ−Ｃｏｏｎ （ＣＨ２）３ ＮＨ 篭 ＮＨ？＼ＮＨ２ と金もつ交叉結合ポリステレ／の調製について例解する
。 ａ、） クロロスル７オノ化ポリスチレンの合成粒子寸
法５０ないし１３０μｍの交叉結合ポリスチレン粉末１
００ｇｔＩＭのＮａＯＨ３Ｑ Ｑ ｒｎ１４中にい扛、
環境温度下で１時間ゆっくりと攪拌する。 粉末を真空下で濾過し、蒸溜水で洗浄しかつ１Ｍのｎ＋
：Ｖ４００ｍｌ中で１時間再びゆつくジと攪拌する。粉
末を真空下で濾過し、蒸溜水で次いでメタノールで洗浄
しかつ４０°Ｃにて真空下で最終的に乾燥する。 このようにして洗浄したポリスチレン粉末２０ｇをと９
、乾燥した球形フラスコ中で１６０ｍ１のＣＩ（２Ｃｅ
２と混合する。次いでニトロメタン１３０ｍ１とＨｓｏ
３ｃｄ １１０ ｖｌ／と全被螺下で添加し、次に混合
物を４０°Ｃの油浴上に４時間おく。粉末を真空下で濾
過しかつＣＨ２Ｃｅ２およびアルコールによって瀞液全
ゆっくり脱活する。次に粉末全ニトロメタンで、次いで
ＣＨ２Ｃｅ２およびジオキサンで洗浄し、引続いて真空
下で４０°Ｃにおいて乾燥する。 このようにして、クロロスルフォン化ポリスチレン粉末
２０ｇ金得る。 ｂ） クロロスル７オｙ化ポリスチレン粉末への７５０
０ｍ１のビーカー中に、水９４ｍ１とジオキサ７５６ｍ
１とを含有する水とジオキサンとの混合物１５０Ｍの存
在でアルギニンモノヒドロクロリド２０．９に導入する
。次に、アルギニ／を完全に可溶性にするために２Ｍの
ＮａＯＨソータ゛金添加フる。 次に予め得てあったクロロスル７オ／化ポ゛リスナレン
粉末１０Ｆを添加し、かつソーダの添加によｐＰＨ値全
８〜９に保つ。ｐＨ値に変化がなくなった時、反応が終
了する。次に粉末全饅過し、蒸溜水により十分に洗浄し
、次いでＱ、５ Ｍ ＮｑＯＨソーダ溶液で洗浄し、次
に一晩ゆっくりと攪拌しつ風水中に保つ。次に粉末全濾
過し、蒸溜水で洗浄しかつ真空下で４０°Ｃにて乾燥す
る。ニトロアルギニン全結合するために同じ手続を用い
る。 Ｃ）特性表示 得られる生成物の窒素、硫黄および塩素含有率を次に元
素分析によって決定し、また加水分解によジ放出される
イオンの銀滴定金用いる定量によって塩素水準を決定す
る。結合したアルギニンの量もまたカルボキシル官能基
の酸−塩基定量を行うことにより決定する。これによっ
て、得られる生成物の未変性のステレ／の座位（８１ｔ
８ ）の百分ｍ （Ｗ ） 、スルフォネートの百分率
（ｘ）、アルギニンの百分率（Ｙ）および副生物 ができる。結果は後記の第１表に示す。 例２〜例７ こ扛らの例は一３Ｏ３Ｎａ基と、基ニ ー８０２ＮＨ−ＣＨ−ＣＯＯＣＩ（３ （ＣＨ２） ３ ＮＨ／＼ＮＨ２ と金もつポリスチレ／の調製について例解する。 例１におけるように、クロロスルフォン化ポリスチレ／
を調製する。谷側においてクロロスルフォン化ポリスチ
レンｉ ｏ、ｐｔ用いる。 ｉ拌に行いつつ、アルギニンメチルエステルヒドロクロ
リド１６．６．９ （６４ミリモル）を乾燥の球形フラ
スコ中でＣＨ２０ｇ、３００ ｒｎｌ中に溶解する。 この後、ヒドロクロリドを離脱させるために混合物にト
リエチルアミン２９１ｎｌ（２００ミリモル）、同シく
マたクロロスルフォン化ボリスチレ／１゜ｊｊ （５ｏ
２Ｃ／ ４２．６ミリ当量）を添加する。次いでトリエ
チルアミン６ｍ１（４３ミリモル）ヲゆっくりと添加し
、かつ２０°Ｃで１６時間攪拌を続ける。 次にポリステン／全真空下で濾過し、さらにジオキサン
および水で洗浄しかつ真空下で４０°Ｃにて乾燥する。 得られる生成物金側１におけると同じ分析にかける。得
ら扛た結果もまた第１表に示す。 例８ 本例は−８０３Ｎａ基と、基： −８ｏ、−ＮＨ−ＣＨ−Ｃ’０ＯＣＨ３１ （ＣＨ２）３ ＮＨ Ｃ＝ＮＨ ｕ Ｏ２ と金もつクロロスルフォン化ポリスチレンの調製につい
て例解する。 例１におけるごとく、５ｏ２Ｃ７ｌ’を４２．６ミリ当
量含有するクロロスルフォン化ポリスチレ／を調製スル
。このクロロスルフォン化ポリスチレン１０ｙを用い、
そしてアルギニ／ メチルエステルヒドロクロリドの代
りにニトロアルギニン メチルエステル１７１（６４ミ
リモル）ヲ用いることは別として、例２から例７におけ
るのと同じ操作手順を用いてニトロアルギニン メチル
エステル全結合することによりスル７オＺ化ポリスチレ
／を変性する。操作終了後、得られる生成物音例１にお
けるのと同じ分析にかけ、得られた結果をまた第１表に
示す。 例９ 本例においては例２および例３において得られた生成物
をトロンビン金不活性化するために用いるために、これ
らの生成物を処理する。まづ、得らｎた生成物に対して
血液蛋白質と反応するであろう不純物を完全に除去する
ための処理を行う。 このために、混合物をゆっくりと２時間攪拌しつつ、ポ
リステレ：／４ｇあたｆ） ＮａＣＶ ２５０ ｍｌｋ
用いて、１．５ＭＮａＣｅによる洗浄操作を２回まづ行
なう。次に、”変性したポリスチレン粉末ヲ瀞過し、引
続いて蒸溜水で洗浄し、かつゆっくりと２時間攪拌しつ
〜１ｍのくえん酸三ナトＩＪウムで２回洗浄する。次に
ｐＨ７，３２のミカエリス緩衝液中に粉′末を２時間懸
濁する。この後、蒸溜水で十分に洗浄し、かつ真空下で
オーブン乾燥する。次に遊星運動式粉砕機中で６時間粉
砕しかつ光学顕微鏡での直接的な観察およびブラウン運
動に基礎をおくタルトロエックス（Ｃ０ｕｌｔｒｏｎｉ
ｘ ）法を用いて、得られる粒子の平均直径を測定する
。最後に、ミカエリス緩衝液中での粉末の膨潤の度合い
を測定するが、これは下式に相当する： ここでＷ。およびＷは乾燥の粉末重量およびミカエリス
緩衝液中での水和された粉末の重量である。 得られる結果は下記の第２表に示す。 第 ２ 表 例 ２ ６６ （粉砕せず） ２．５０例 ２ １．６
（粉砕物） 例 ６ ８６ （粉砕せず） ２．５７例１０ 本発明による製品の抗凝固特性を以下の試験を行うこと
により本例において試験する：ａ）本発明に従って変性
された交叉結合ポリステン／粒子全含有する溶液でイン
キユーペーションした人間の血漿について、トロンビ／
の添加により凝固全開始した後の、凝固時間を測定し；
ｂ）同じ重合体溶液で誘導したフイブリノーゲンの凝固
時間を測定し： Ｃ）ポリスチレン懸−液金緩衝溶液にておきかえること
により、フイグリノーデ／の対照凝固時間を測定し； ｄ）レプテラーゼを添加することにより凝固全開始しつ
一１本発明に従って変性されたポリスチレン浴液の存在
でフイブリノーゲンもしくは血漿の凝固時間を測定する
。 本例においては、−３０３Ｎａ基と、基ニー５ｏ２−Ｎ
）（−ＣＨ−ＣＯＯ−ＣＨ３（ＣＨ２）３ ＮＨ ＮＨ４＼□２ と含有する例２で得た交叉結合ポリスチレン（ＰＡＯＭ
）を用いる。 使用′ｆゐ他の反応剤は以下のとおりである。゛血小板
の欠乏した血漿（ｐｐｐ ）は、くえん酸塩化された人
間の血液からつ＜Ｄ、−８℃においていくりかに分けて
保存する。試料全融解しかつ試験に先立って４°Ｃで保
存する。人間の１・ロンビンはパリのサンドル ナショ
ナール ドウ トランスフイジョ７ サンギｙ （Ｃｅ
ｎｔｒｅ Ｎａｔｉｏｎａｌ ｃｌｅｔｒ ａｎＳ ｆ
ｕｇ １０ｎ Ｓａｎ ｇｕ ｌ ｎ ｅ ；国立輸血
センター）（ＣＮＴＳ ）からのものでろ’） ｓ １
０９４ Ｎ工ＨＴＪ／ｍｙの濃度をもつ。こＡｋミカエ
リス緩衝液中に溶解しかつ一８０℃で保存するが、試験
前に４℃に保つ。人間のフイブリノーゲンもまたパリの
ＣＮＴＳからのものであ、０％０．１５ＭのＮａＣｅ溶
液中に６ｍｙ ／ ｍｌの割合で溶解する。これ全試験
中６７℃に保つ。スタビ（Ｓｔａｇｏ ）社により供給
されるレゾテラーゼ全蒸溜水中に溶解し、使用前６７℃
に保つ。 アルギニ／ メチルエステル基を含有する交叉結合ポリ
スチレン試料ｗｔカニリス緩衝液中に懸濁しかつ試験に
先立ち超音波によジ脱ガスする。 種にの凝固時間を測定するために、ＰＡＯＭ懸濁液［］
、Ｑ５ｍもしくは緩衝液０．０５１ｎｌ’ｅ、血小板の
欠乏した人間の血漿０．２０ｍ１Ｋより２７°Ｇで１０
分間インキユーペーションシた。次いでトロンビ／溶液
（１５ＮＩＨｕ／ｍｌ） ０．０５ｍ１？−添加し、Ｋ
Ｃ（１’凝固計を用いて６７（℃にて凝固時間を測定し
た。 血小板の欠乏した血漿の代りに６ ｍｔ） ／ ｍｌの
フイブリノーゲン溶液を用いて、同一の条件下で試験を
行う。ＰＰＰおよびフイブリノーゲンについても同−県
外下でやはり凝固試験を行うが、レプチラーゼの代りに
トロンビンを用いる。 この後、ポリスチレン懸濁液０．０５ｍ１の代りに緩衝
液肌０５ｍ１−ｆｒ−用いて、血小板の欠乏した血漿と
フイグリノーケ９ンとについて凝固試験を行うが、血漿
もしくはフイブリノーゲンの凝固時間を、遊離の１・ロ
ンビ／の濃度の関数として表わす較正曲線をつくるため
に、各種の濃度のトロ／ビア０．０５ｍ１を添加する。 これらの結果に基いて、アルギニン メチルエステルに
よって変性さ扛たポリスチレン（ＰＡＯＭ ）によって
不活性化されるトロンビンの水準を決定することができ
る。不活性化されたトロンビ／の水準を懸濁液のＰＡＯ
Ｍ濃度の関数として決定するために、懸濁液のＰＡＯＩ
、ｉ濃度を変化することによジ種々の試験を行う。 得ら扛る結果全第１図に示す。こ扛は懸濁液のポリステ
レ／濃度（＋＋＋９／ｍｌ）の関数として、不活性化さ
れたトロンビンの水準（ＮＩＩＨｕ／Ｉｎ１）を表わす
。曲線１は血小板の欠乏した血漿についての試験に関し
、また曲線２はフィブリノ−）ｆｙについての試験に関
する。こｎらの試験においては、粉砕されて平均粒子寸
法１．６μｍｉもっ例２のＰＡＯＭ金用いる。 第２図は、粉砕されてなく従って６６±６μｍの平均粒
子寸法をもつＰＡＯＭ を用いて、血漿について実施し
た凝固試験で得られる結果を例解する。 第２図はまた不活性化さ扛たトロ／上／の水準の変化音
、懸濁液の重合体濃度の関数として示す１゜第１図の曲
線１と第２図の曲線１とを比較することにより、平均粒
子寸法１．６μｍのＰＡＯＭ粉末の使用により、平均寸
法６６μｍｆもつＰＡＯＭにて得られるよジも著しく高
い不活性化トロンビン水準を得ることが可能であるのを
知ることができる。 従って、粉砕の後、ＰＡＯＭは大量のトロンビンを抑制
することができるが、これは疑いなく粒子表面上の接近
可能な活性座位の割合がよｐ犬であることによる。 血漿およびフイブリノーゲンについて得られた結果（第
１図の曲線１および２）全比較すると、ＰＡＯｌｖｉの
抗凝固作用には抗トロンビン厘のようなトロンビン抑制
剤の存在を必要とせず、このことはＰＡＯＭがヘパリン
と同じ挙動をしないことを例証するということを知るこ
とができる。 最後に、これらの試験の終了時に、レプテラーゼによる
凝固時間はＰＡＯ１ｖｉ懸濁液の存在下で普通の−１−
であることが判明した。このことから、本発明によるＰ
ＡＯＭの抗凝固効果はフイグリノーケゞンの劣化による
ものでないと推論することができる。 例１１ 例１において得られるアルギニンによって変性されたポ
リスチレン懸濁液（ＰＡ ）もしくは例８においで得ら
れるニトロアルギニン メチルニスデルによって変性さ
れたポリスチレン（ＰＮＡＯＭ ）を用いて同一の凝固
試験を行う。得ら扛る結果金弟６および第４図に示すが
、こ扛らは懸濁液のＰＡもしくはＰＮＡＯＭ濃度の関数
として、不活性化さｎたトロ／ビンの水準を表わす。 第６図は血漿に対してまた第４図はフイグリノーケ８ノ
に対して行った実験に関する。曲線６および６′はＰＮ
ＡＯＭに捷た曲線４および４′はＰＡに関する。 例１２ 本例においては以下の操作手順に従いつ＼、例１のＦＡ
、例２のＰＡＯＭおよび例８のＰＮＡＯＭについてトロ
ンビンの吸着試験を行う。 ＰＡ 、 ＰＡＯＭもしくはＰＮＡＯＭの懸濁液０．２
ｍｌもしくハミカエリス緩衝液Ｑ、２ｍｌを種々の濃度
のトロ／ビア０．２ｍｌにてまた種々の時間にわたって
６７０Ｃにおいて懸濁する。傾瀉もしくは沈降の後、上
澄み液ｏ、ｉｍｌ’ｉ試料としてと９、かつそれを血小
板の欠乏した血漿（ｐｐｐ ） ０．２ ｍ１３に添加
する。次に凝固時間を測定するが、試験で得た結果にも
とづき、上澄み液中に残存するトロンビンの水準を決定
するために較正曲線を用いる。吸着されたトロンビンの
水準は、導入されるトロンビンの量と上澄み液中に残存
するトロンビ／の量との間の差に対応する。 例２のＰＡＯＭにて得られた結果全第５図に示すが、こ
れは吸着されたトロンビンの水準（Ｕ ７ｍｌ）をイン
キューペーショ７期間（分）の関数として表わす。曲線
５は濃度４．６ｍ９／ｍｌのＰＡＯＭ懸濁液および５Ｏ
Ｎ工Ｈｖ ／ ｍｌのト０７ ヒｙ ０．２ ｍｌ Ｋ
ツいて実施した試験に関する。曲線６は１５ｍ９／ｍ
ｅのＰＡＯＭ ’ｉ金含有る懸濁液および２５ ＮＩＨ
ＴＪ ７ｍｌのトロンビ１０．２ｍノの使用に関する。 曲線７は７．５ｍ９／ ｍｌ（７） ＰＡＯＭ’を含有
する懸濁液およびｊ Ｑ ＮＩＨｖ／ｍｌのトロンビ／
Ｑ、２ｒｎｌについて丈施した試験に関する。 第５図において得られる結果は、 ＰＡＯＭ粒子の表面
上へのトロンビ／の吸着は時間とともに増大するが、１
２分たつと飽和することを示す。 第６図は、前述と同じ条件下で試験を行うがたたしＦＡ
、０Ｍ懸濁液とトロンビンとの接触時間を１２分に制限
した場合の、例２のＰＡＯＭ ８子上のトロンビンの吸
着曲線を示す。曲線８は７．５ｍ９／ｍｌのＰＡＯＩＡ
全含有するＰＡＯＭ懸濁液を用いる時性られる結果金、
また曲線９は懸濁液のＰＡＯＭ含有率が４．６ｍｙ／、
ｄである時に得られる結果を例解する。 こ扛らの曲線はトロンビ／の最初の濃度（ＮＩＨＵ／
ｍｌ、で表示）の関数として、吸着されたトロンビンの
水準の変化を表わす。曲線９はＰＡＯＭ含有率４．６ｍ
９／ｍ−１に対応し、最初ゆるい勾配をもち、トｏ７ビ
／の初期濃度約１１０ ＮＩＨＴＪ ／ｙｔｌにおいて
平坦部に到達する。従ってこのことから、試験条件下で
トロンビ／の吸着が２７ＮＩＨＴＪ／ゴまでに限定さ扛
、樹脂１７’１９がトロ／ビン５．９ ＮＩＨｕＡｎノ
のトロンビンを吸着しうると結論することができる。Ｐ
Ａ（：）Ｍ粒子の寸法を念頭におくならば、トロンビン
の表面濃度は１．７±０．５μｇ／ｃｒｒ］２でらると
仮定することができる。従ってθがトロ／ビ／でθ 被覆されたＰＡＯＭの表面を表わすとして、１−６の比
を決定することができる。第７図はこの比の変化を％Ｎ
ＩＨｖ ／ ｍｌで表わした遊離のトロンビン濃度の関
数として表わす。これらの結果に基き、ＰＡＯＭとトロ
／ビンとの間の親和性係数を決定することができ、粒子
寸法と懸濁液のＰＡＯ１ｖｌ濃度とに関係ないその値は
２．６±０．２ １３６７ｍｏｅである。 例１６ 本例においては、例１２の手順に従って、ただし例１で
得た粒子寸法２ないし７０μｍのアルギニンで変性され
ているポリステレ／粒子、直径２４μｍ全もつ例８のニ
トロアルギニン メチルエステルで変性されたポリスチ
レン粒子（ＰＮＡＯＭ）、同じくまた直径６５μｍのニ
トロアルギニンで変性さ扛たポリスチレン粒子（ＰＮＡ
） ′ｆ：用いて吸着試験を再び行う。吸着したトロ
ンビンの水準は懸濁液に添加さｎるトロンビンの最初の
濃度（Ｎ１１ｌｕ／ｍＪで表示する）の関数として決定
される。 得られる結果全第８図に示すが、同図は吸着したトロン
ビンの濃度の変化を懸濁液の重合体濃度の関数として表
わす。曲線１０はＰＡに、曲線１１はＰＮＡＯＭにまた
曲線１２はＰＮＡに関する。曲線１６は粒子寸法６６μ
ｍのＰＡＯＭにて得ら扛る結果全比較して示す。 例１４ 本例においては例１２のＰＡＯＭ粒子の懸濁液の存在も
しくは不存在の下でトロンビンおよびその抑制剤である
抗トロ／ビン■の接触を行なう。誘導は６７℃で種々の
時間にわたって行う。その後、上澄み液中に残存するト
ロ／ビンの量の測定を行う。得られる結果を第９および
第１０図に示す。 これらの図は脱活したトロンビンの百分率（ＮＩＨＵ
／分で表示）を時間（分）の関数として表わす。 第９図において曲線１４は抗トロンビ／の量がト０／ビ
ンの童の２倍に相当する場合、ＰＡＯＭの存在もしくは
不存在の下に得られる結果を表わす。 第１０図において曲線１５は抗トロンビ／の量が１・口
／ビ／の量の６倍である場合のＰＡＯＭの存在もしくは
不存在の下に得ら扛る結果全表わす。 このようにして、ＰＡＯＭの存在は抗トロンヒフ量によ
るトロンビ／の抑制に何ら影響を与えないことまたそれ
が凝固過程に触媒として働かないことを知ることができ
る。 第 １ １ ２人１ １４．８６ １．１９ １．６９２ ＰＡ
ＯＭｌ １２．１５ ０．８７ ０．８５−０．８７３
ＰＡＯＭ２ ５．６６ ０．９６ ０．９６−０．９
９４ ＰＡＯＭ４ ５．８７ ０．８６ Ｃ１，８５−
０，９０５ｐＡｏ）、＋５１１．４４ ０．１５４−０
．２６ＰＡ、（’）Ｍ６ ９−０３ ０．８９７ ＰＡ
ＯＭ７１３−５５ ０−５９−０−５２０．５５Ｂ Ｐ
ＮＡＯＭｌ ４．１３ １．００ １．Ｉ ０８ＯｉＮ
ａ＝ １６ ２０．９ ５５ ２ − １６ ＜５３ １９ ２ ２．５０ ’＋６’６０ ２２ １ − １６６３１９１ − １６７９３．０ − １６ ６Ｂ ８．３ ２．４６ ２７ ６６ ６．７６ ３．００ ３５ ４０ ２４ − ＣＨ２−ＣＨ−、、。 ４、図面の簡単な説明 第１ないし第４図は血小板もしくはフイグリノーケ９／
の欠乏した血漿の凝固試験の結果を示す。 第５図は不活性化さしたトロンビンの水準の変化を示す
。 第６図は吸着さｎるトロンビンの水準を示す。 第８図は吸着されるトロンビ／の水準の変化を示ア。 第９図および第１０図は抗トロンビンの存在下での実施
した試験結果を示す。 代理人 浅 村 晧 ＦＩＧ、２ 鴇 ） 噂 ト ト 憤 偽 リ 〉ト ’Ｉｔ ｌｉ、ｙ／７７ｔ ％υ：／／７７／ 第１頁の続き ＠発明者 ダニエル グリノ フラ ジ。 ０発 明 者 ジャクリーン ジョグ フラフオンビク
ズ ｏ発 明 者 マルセル ジョズフォ フランビクズ
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、基Ｘと基Ｙとが統計的に結合している置換可能な基
を鎖中に有する重合体もしくは共重合体であって、上記
基Ｘが５ｏ３−Ｒ１（ただしＲ１は水素原子もしくは生
理的に許容できる金属である）であり、また上記基Ｙが
−３０２−Ｒ２（ただしＲ２はアルギニンもしくはアル
ギニン誘導体から銹導される基であって、そのアミノ官
能基−ＮＨ−によって−８０２−基に結合する）である
重合体もしくは共重合体からなる製品。 ２、Ｒ２が式 ％式％ ） （ただしＲ３は水素もしくはＣ１から０４のアルキル基
を表わしまたＲ４は水素もしくはＮｏ２基を表わす）の
基を表わす上記第１項の製品。 ６、Ｒ２が式： ％式％ ） を光わす上記第２項の製品。 ４、Ｒ２が式： ％式％ ） を表わす上記第２項の製品。 ５、Ｒ２が式： −ＮＨ−ＣＨ−ＣＯＯＣＨ３ ■ （ＣＨ２）３ ＮＨ ■ を表わす上記第２項の製品。 ６、Ｒ２が式： ％式％ ） を表わす上記第２項の製品。 ７、Ｎ合体がポリスチレン、セルロース ポリエステル
、セルロース ポリエーテル、ポリビニルアセテ−１−
、ポリビニル クロライド、ポリイソプレンおよびポリ
ゲタジエンから選択される上記第１項の製品。 ８、重合体がポリスチレンである上記第７項の製品。 ９、Ｎ合体−１：、ｉスチレン、セルロース エステル
、セルロース エーテル、ビニル アセテート、ビニル
クロライドイソプレンもしくはグタジエ／の共重合体
である上記第１項の製品。 １０、重合体もしくは共重合体が交叉結合可能である上
記第１項の水に不溶解な製品。 １１、ａ）重合体もしくは共重合体をクロロスルフォン
酸と反応することによりクロロスルフォン化し、かつ の このようにして重合体もしくは共重合体と結合した
−５Ｏ２Ｃｅ基を、クロロスルフォン化された共重合体
もしくは重合体を塩基性媒体中でアルギニンもしくはア
ルギニ／誘導体と反応することにより、−３ｏ３Ｒ１お
よび一３Ｏ２Ｒ２基（ここでＲ１は生理的に許容可能な
金属でありまたＲ２はアルギニンもしくはその誘導体か
ら誘導される基である）に転化する ことからなる上記第１項および第２項のいづれかの製品
の製造方法。 １２、重合体もしくは共重合体のクロロスル７オ／化が
ジクロロメタンを含む媒体中で実施さ扛る上記第１１項
の方法。 １６、重合体もしくは共重合体が交叉結合さ扛る上記第
１１項の方法において、クロロスルフォン化がジクロロ
メタ／およびニトロメタンを含有する媒体中で実施され
る上記第１１項の方法。 １４、アルギニンもしくはアルギニ／誘導体との反応が
、酸に関しては水とジオキサンとの混合物を含む媒体中
でまたアルギニン エステル誘導体に関してはジクロロ
メタンを含有する媒体中で実施さ扛る上記第１１項の方
法。 １５、上記第１項もしくは第２項の製品をトロンビンを
含有する溶液と接触し、トロンビ／を吸着した生成物を
この溶液から分離しかつ塩化ナトリウム溶液もしくはヘ
キサジメトリン溶液を用いて脱着することによりトロン
ビンを回収することからなる上記第１５項の方法。 １６、製品が、−３Ｏ３Ｎａ基と基ニ ーＳ○２−ＮＨ−ＣＨ−Ｃｏｏ−ＣＨ３（ＣＨ２）３ ＮＨ ＮＨ””’＼１、Ｒ２ と金もつ交叉結合されたポリスチレンである上記第１５
項の方法。
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Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS57210068A (en) * | 1981-06-17 | 1982-12-23 | Asahi Chemical Ind | Production of polyurethane fiber having anti-fungal property |
| JP2015504925A (ja) * | 2012-01-30 | 2015-02-16 | バクスター・インターナショナル・インコーポレイテッドＢａｘｔｅｒ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｃｏｒｐ０Ｒａｔｅｄ | 非抗凝固性の硫酸化またはスルホン酸化合成ポリマー |
| JP2015509923A (ja) * | 2012-01-30 | 2015-04-02 | バクスター・インターナショナル・インコーポレイテッドＢａｘｔｅｒ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｃｏｒｐ０Ｒａｔｅｄ | 非抗凝固性の硫酸化またはスルホン酸化多糖 |
Families Citing this family (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR2582815B1 (fr) * | 1985-05-31 | 1989-04-07 | Commissariat Energie Atomique | Procede de separation des anticorps antifacteur viii : c, utilisable notamment pour l'epuration du plasma sanguin d'un hemophile de type a |
| FR2635019B1 (fr) * | 1988-08-02 | 1992-06-12 | Centre Nat Rech Scient | Materiau capable de fixer les substances biologiques, et ses applications notamment comme support de chromatographie d'affinite |
| US5116994A (en) * | 1989-04-19 | 1992-05-26 | Fuji Photo Film Co., Ltd. | Deacylating agent and deacylating method |
| ATE221546T1 (de) * | 1997-03-01 | 2002-08-15 | Vestolit Gmbh & Co Kg | Formmassen mit antikoagulierenden eigenschaften, ihre herstellung und verarbeitung zu gegenständen,die in der medizintechnik verwendungen finden |
| DE19908525C2 (de) * | 1999-02-26 | 2001-05-31 | Inst Chemo Biosensorik | Wasserlösliches Copolymer und Verwendung hiervon |
| FR2816621A1 (fr) * | 2000-11-13 | 2002-05-17 | Bioracs | Resines de polystyrene fonctionnalise par des groupements methyl ester de la l-tyrosine et leurs applications |
| US20090038701A1 (en) | 2006-01-17 | 2009-02-12 | Baxter International Inc. | Device, system and method for mixing |
| EP2213245B1 (en) * | 2006-01-17 | 2012-07-04 | Baxter International Inc. | Device and method for mixing |
| US20100246316A1 (en) * | 2009-03-31 | 2010-09-30 | Baxter International Inc. | Dispenser, kit and mixing adapter |
| US8641661B2 (en) * | 2010-01-05 | 2014-02-04 | Baxter International Inc. | Mixing system, kit and mixer adapter |
| CA2726566A1 (en) * | 2010-01-11 | 2011-07-11 | Baxter International Inc. | Pipette system, pipette tip assembly and kit |
Family Cites Families (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US2808405A (en) * | 1955-03-11 | 1957-10-01 | Ohio Commw Eng Co | Acylated amino acid esters of dextran products and method of making same |
| US3301848A (en) * | 1962-10-30 | 1967-01-31 | Pillsbury Co | Polysaccharides and methods for production thereof |
| BE757783A (fr) * | 1969-10-25 | 1971-04-21 | Stamicarbon | Liaison chimique d'un acide amine a un support polymere |
| NL7001822A (ja) * | 1970-02-10 | 1971-08-12 | ||
| IT1075599B (it) * | 1977-04-27 | 1985-04-22 | Ferruti Paolo | Polimero comprendente blocchi poliamido-amminici atto a formare materiali eparinizzabili per la fabbricazione di manufatti antitrombogeni |
| FR2461724A1 (fr) * | 1979-07-20 | 1981-02-06 | Christine Fougnot | Polymeres substitues par des groupes leur conferant des proprietes anti-coagulantes et leur procede de preparation, objets constitues par et/ou comprenant lesdits polymeres et leurs procedes de fabrication, application desdits objets en chirurgie et en medecine, et compositions pharmaceutiques contenant lesdits polymeres substitues |
-
1983
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-
1984
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- 1984-06-25 DE DE8484401327T patent/DE3466399D1/de not_active Expired
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Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS57210068A (en) * | 1981-06-17 | 1982-12-23 | Asahi Chemical Ind | Production of polyurethane fiber having anti-fungal property |
| JP2015504925A (ja) * | 2012-01-30 | 2015-02-16 | バクスター・インターナショナル・インコーポレイテッドＢａｘｔｅｒ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｃｏｒｐ０Ｒａｔｅｄ | 非抗凝固性の硫酸化またはスルホン酸化合成ポリマー |
| JP2015509923A (ja) * | 2012-01-30 | 2015-04-02 | バクスター・インターナショナル・インコーポレイテッドＢａｘｔｅｒ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｃｏｒｐ０Ｒａｔｅｄ | 非抗凝固性の硫酸化またはスルホン酸化多糖 |
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