JPS6036409B2 - 微生物感染処置用組成物 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、０甫乳動物および家禽類における微生物感染
の治療に有効なヒトを除く動物用医薬組成物に関する。

テトラヒドロフオレート補因子は、すべての細胞におい
て、プリン、チミジル酸、セリンおよびその他の数種の
生物学的に重要な化合物の生合成に必須な代謝産物であ
る。この種の補因子の大部分はテトラヒドロ葉酸の一炭
素付加物であり、高等動物および人では、あらかじめ生
成されたフオレートを通常はビタミンの形で含む食物に
より主として供給される。微生物においては、補因子は
簡単な化合物から合成される。

一般に生合成工程は、はじめに「ジヒド。プテリジン」
（Ｐｔ）、すなわち２ーアミノー４ーヒドロキシー６ー
ヒドロキシメチルー７，８ージヒドロプテリジン（ＨＭ
Ｐｔ）ピロホスフエートェステルを、そのすぐ前の前駆
物者であるＨＭＰｔより、酵素ヒドロキシメチルジヒド
ロプテリジン ピロホスキナーゼ（ＨＭＰＰＳ）の存在
下に与える。次にＰｔは、酵素ジヒドロプテロェートシ
ンセターゼの存在下にｐ−ァミノ安息香酸（ｐＡＢ）と
縮合してジヒドロプテロ酸（ＯｐｔＡ）を生成する。こ
の中間体は更にグルタメートと縮合してジヒドロ葉酸（
ＤＦＡまたは「フオレート」）を生成し、これが、たと
えば細菌およびその他の微生物においては、ついで酵素
的に還元されて必須のテトラヒドロフオレートを与える
のである。基本的な構成単位、すなわちプテリジン、ｐ
ＡＢおよびグルタメートからの「フオレート」の生成、
更にこのフオレートのテトラヒド。

フオレートへの変換は２種の方法により阻害されること
が知られている。たとえばスルホンアミドは上言己の反
応経路のｐＡＢを置き換える。その構造がｐＡＢに著し
く類似するため、スルホンアミドまたは類似のその他の
浩抗物質は生合成に加わり、ＤＰｔＡおよびＤＦＡの生
成を妨げる。すなわち、代謝物質ｐＡＢに対する代謝浩
抗物質として働くのである。また、酵素ジヒドロ叢酸リ
ダクターゼの阻害剤である化合物は、テトラヒドロフオ
レートに至る合成工程を遮断することが知られている。

かなりの数のピリミジン誘導体が、このような遮断作用
に基づく抗微生物作用を示す。最近また、この種の阻害
剤がスルホンアミドと相剰的に作用し得ることも明らか
にされた。

すなわち、連続した二重の遮断および二種の物質の抗菌
効果相互の強い相剰作用が考えられる。この−種の物質
を配合して得られる抗微生物作用の強さは、各物質の活
性から期待されるよりも遥かに大きいものであり、個々
の物質に対する感受性はやっと認められるにすぎない微
生物が配合物に対してはきわめて高い感受性を示すので
ある。またＰｔに対する代謝桔抗物質はＤＰｔＡ（およ
びＤＦＡ）の生合成を阻害するという仮説も報告されて
いる（ＨｉｔｃｈｉｎｇおよびＢｍｃｈａｌｌ；Ａｄｖ
ａｎｃｅｓｉｎＥｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，２７，４１７−
４６８（１９６５）参照）が、これまでこの目的で試験
した化合物に関しては、不活性であるかもし〈は著しく
毒性が強くまたはその両者であって、思わしい結果が得
られていない（英国特許第９８１，５０６号および９８
７，９１６号に記載された化合物参照）。

抗微生物という観点において、有用なＰｔの倍抗剤であ
るためには、化合物はＨＭＰＰＳの阻害剤であると同時
に、心脈管系の調整剤として重要な作用を持つノルェピ
ネフリンのごときカテコールアミン類の先駆物質である
フエニルアラニンおよびチロシンのヒドロキシ化に補因
子として働くジヒドロプテリジンに対する代謝措抗物質
として作用しないことが必須であるとされている。この
種の代謝浩抗作用は微生物に感染した通常の宿主である
鳥類または０南乳類に対して決定的な毒性を示すことに
なるからである。更に、この要求を満足する物質、すな
わちＨＭＰＰＳの阻害作用を持ち、たとえば鳥類やラッ
トにおいて試験した宿主に対する毒性の低い物質は、あ
る程度微生物の生長を阻害するばかりでなく、ｐＡＢの
浩抗剤すなわちスルホンアミドおよび類似化合物、もし
くはジヒドロフオレートリダクターゼの選択的阻害剤ま
たはこの種の抗微生物剤の両者と配合すると予想を超え
た著しい協力作用を示すことが発見されたのである。

すなわち、本発明は一つには、それ自身 ＨＭＰＰＳ阻害作用を有しかつ十分低毒性な、微生物に
おけるジヒドロプテリジン浩抗剤（以下「脇力剤」と呼
ぶ）協力剤としての有効協力量を、以下に定義するよう
な浩抗剤もしくは阻害剤または両者の有効量と配合して
なる、微生物系または感染を試験または治療する組成物
を提供するものである。

本発明の配合物が有効な微生物感染は、少くとも、必須
のテトラヒドロフオレート補因子の実質的部分を合成し
ている原虫または細菌によって惹起された感染症である
。

更に詳しくは、本発明配合物が有効な微生物は、本発明
の医薬配合物を十分吸収し、更にこの配合物がその必須
なテトラヒドロフオレート生合成の阻害に相乗り効果を
示すような微生物ということができる。本発明は特に、
協力剤を、通常それ自身では抗微生物剤として十分な有
効性を示さないような量の桔抗剤および／または阻害剤
と組み合わせた場合、この通常は有効でない量の桔抗剤
および／または阻害剤と協力剤の配合が全体的には有効
な抗微生物剤として作用する配合物を与えることを発見
し完成されたものである。

協力剤の量はきわめて少量で、この濃度では全く微生物
に対して作用を示さないような場合でも協力効果は顕著
で、場合によってはきわめて著しいことは特記される。
したがって、ジヒドロ葉酸リダクターゼ「阻害剤」およ
びｐ−アミノ安息香酸「浩抗剤」に関連して用いられる
「有効量」なる語は、ｔａ｝それ自身ある程度の微生物
活性を持っているが、協力剤の使用によって更に効力を
増強される「桔抗剤」または「阻害剤」の量、または‘
ｂ）抗微生物剤として無効であるが協力剤と配合した場
合に抗微生物剤として有効な組成物を与えるような「措
抗剤」または「阻害剤」の量のいずれかを意味する。「
有効協力量Ｊとは、浩抗剤および／または阻害剤の活性
を増大させ、配合物全体として改善されたまたは十分な
有効性を与えるような協力剤の量を意味する。このよう
な方式による生合成工程の阻害は、この３つの例すべて
において、競合的浩抗と呼ぶことができ、この３種のす
べての薬剤の間に相剰作用があると考えることができる
点は留意さるべきである。

「阻害剤い「桔抗剤」および「協力剤」の語は全く任意
的なものであって、本明細書において詳説する配合生成
物の各成分に対して便宜的に付されたものとのみ考える
べきである。協力剤のＨＭＰＰＳに対する阻害活性は、
たとえば末端ホスフェートＡＴＰ−ｒ一皮２のジヒドロ
プテリジンへの遷移を指標として試験することができる
。

この試験法においてＰｔ生成５０％阻害（ＩＣ歌）に要
する濃度はＨＭ円ｔおよびＤＰｔＡの生成に関与する２
種の酵素のいずれかの阻害を測定する他の関連試験によ
って得られた結果と誤差範囲内でよく相関することがわ
かっている。この阻害試験は、たとえばＥ．ｃｏｌｉの
抽出液をｐＡＢ一７−ＣＩ４，ＡＴＰ，Ｍｇおよびジヒ
ドロプテリジンと倍養することにより、容易かつ簡単に
実施できる。未反応のｐＡＢ基質を、たとえばクロマト
グラフィーによって分離した後、ジヒドロプテロェート
−ＣＩ４の生成を定量的に分析することができる。この
試験において、ＩＣ則値が約１００ムＭまたはそれ以下
の化合物、通常は５０ｒＭ以下の化合物は、適当な脊椎
動物における毒性が許容し得るものである限り、有用な
協力効果を示すものである。好ましい値は２５ムＭまた
はそれ以下、たとえば２ないし１２仏Ｍの範囲である。
一般には７仏Ｍ以下であることが好ましい。上に説明し
たように、本発明に関しては、協力剤が宿王である情乳
類または鳥類の心脈管系に対して阻害毒性を持たないこ
とが重要である。

すなわち、低毒性は必須要件であるが、本発明に必要な
活性および毒性の両者をとりいれた治療係数が協力剤の
選択に有利に使用できる。治療指数は、最づ・有効用量
に対する最大耐客用量の比として定義されるものである
。多くの場合、治療指数は１０以上であることが好まし
いが、少くとも５までが適当で、例外的環境にて人に対
し約３、動物に対し２までの程度でも使用することの可
能な場合もある。Ｐｔに対して構造類似性を示す化合物
、すなわち所要の阻害性と毒性を持った各種プテリジン
類が、特に本発明の目的に有利に使用できる。

たとえば、６位が１個の炭素原子で置換され７位がジ置
換された２−ァミノ−４−ヒドロキシ−７，８−ジヒド
ロプテリジン類は協力効果をもつものとして特に有望で
ある。本発明は、特に式（１） （式中、Ｒは所望によりヒドロキシ基によって、または
１もしくは２個以上のハロゲン原子によって置換されて
いてもよいアルキル基であり、ＲＩおよびＲ２は同一ま
たは互に異なる基であってそれぞれアルキル基であるか
またはＲＩおよびＲ２は両者で、プテリジン擬の外部に
４ないし６個の炭素原子を有するスピロシクロアルキル
環を形成することを示す）にて表わされる化合物もしく
はその互変異性体またはその医薬的に許容できる塩（以
下、これらの化合物は、すべて式（１）の化合物の範囲
内に包含される）が以下に述べるように協力剤として有
効であることを発見したものである。

式（１）の化合物において、置換基Ｒ，ＲＩおよびＲ２
のアルキル基は１なし、し４個の炭素原子を有する。

ハロゲン原子としてはフッ素、塩素、臭素またはヨウ素
のいずれでもよく、好ましくはモノまたはジ置換体であ
る。ブロモ置換体が製造上特に便利である。式（１）の
範囲に含まれる特定の群は、Ｒが６−アルキルまたは６
ーヒドロキシアルキル基に限られる化合物によって代表
される。

この化合物における置換基ＲＩおよびＲ２は式（１）に
関して定義したと同じであるが、メチルまたはエチル基
であることが好ましい。たとえば、２ーアミノー４−ヒ
ドロキシ−６−ヒドロキシメチル−７，７−ジメチルー
７，８ージヒドロプテリジン（以下ＤＭＨＰという）お
よび２−アミノー４ーヒドロキシ−６−ヒドロキシメチ
ルー７，７ージヱチル−７，８−ジヒドロプテリジンは
著しい協力作用を持つことが明らかにされている。この
化合物およびその類縁化合物については英国特許出願第
３３０１／７び号（米国特許第３，６３５，９７８号）
および／７２号‘こそれぞれ記載されており、更に、そ
の製法はＰ８ｅｉｄｅｒｅｒおよびＺｏｎｄｌｅｒの報
文、Ｃｈｅｍｅ．茂ｒ．９９．３００８（１９６６）お
よび英国特許出願第３６２８９／７ぴ号およびベルギー
特許第７７０，５７７号に述べられている。式（１）の
範囲内に含まれた第三の群には、Ｒがハロゲ／置換アル
キル基に限られる化合物がある。

ＲＩおよびＲ２は先に定義したと同機である。ハロゲン
含有基はモノまたはジハロゲノ置換体であることが好ま
しく、臭素原子の場合が最も便利である。この群の代表
的化合物としては２−アミノー４ーヒドロキシー６ーフ
ロモメチルー７，７ージメチル−７，８−ジヒドロプテ
リジンおよびその６−ジブロモメチル同族体がある。こ
の化合物は、その類縁化合物と共に英国特許出願第３５
８１５／７２号もこ記載されている。式（１）の化合物
、特にＤＭＨＰは、それ自身は多くの細菌、たとえばＳ
ｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃ雌ａｕｒｅｕｓ，Ｓｔｒｅｐｔ
ｏＣｏＣＣ順 ＰｙｏｇｅｎＳ ， Ｓｔｒｅｐ
ｔ。

ＣｏＣＣｕＳねｅｃａｌｓｓ ，Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉ
ａ Ｃｏｌｉ， Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａｔｙｐｈｉ
， Ｐｒｏｔｅｕｓ ｖ山ｇａｒｉｓ ， Ｐｓｅｕ
ｄｏｍｏｎａｓａｅｍ袋ｎｏＳａ，Ｐａｓｔｅｍｅｌｌ
ａｍｕｌｔｏｃｉ舷等に対してそれ程強い活性を示さな
いが、措抗剤および／または阻害剤の活性を著しく増強
させる作用を有する。すなわち式（１）の化合物の有効
協力量を桔抗剤または阻害剤と共に使用することにより
、この種の細菌の生育を阻止するのに必要な桔抗剤また
は阻害剤の量を有意に減少させることが可能である。式
（１）の化合物の上記製法の骨子は、式（ロ） （式中、Ｒ，ＲＩおよびＲ２は先に定義したと同義であ
り、Ｘはケトン性の酸素原子または保護基たとえばオキ
シムもしくはチオセミカルバゾン基である）にて表わさ
れる化合物またはその塩を２−アミノー４−クロロー６
−ヒドロキシ−５−ニトロピリミジンと反応させ、つい
で保護基があればそれを適宜除去し、得られた生成物を
還元的に閉環するものである。

必要に応じ、本技術分野の常法にしたがい、置換基を他
の置換基に変換することもできる。たとえば６−アルキ
ル基のブロム化により６−フロモアルキルまたは６−ジ
ブロモアルキル譲導体が得られる。本発明の広い範囲内
に包含されるその他のプテリジン協力剤は各種のプテリ
ジン類に関してこれまで報告されていると類似の方法に
よりおよび上述の方法により、また本発明の技術分野に
おいては自明の技術による置換基の変換によって製造す
ることができる。

ｐーアミノ安息香酸の浩抗剤として知られている化合物
または抗微生物剤として知られている化合物は多いが、
ＭｅｒｃｋＩｎｄｅｘ第８版９９２ないし１００刀頁の
抗微生物剤として示されているイオウ化合物を参考例と
してここに引用する。

措抗剤として公知な化合物のうち、以下のスルホンアミ
ド化合物（またはその医薬的に許容しうる塩）は本発明
の目的に特に好ましい。

すなわち、スルフアニルアミド、スルフアジアジン、ス
ルフアメチサゾール、スルフアピリジン、スルフアチア
ゾール、スルフアメラジン、スルフアメタジン、スルフ
イソキサゾール、スルフオールメトキシ、スルフアソミ
ジン、ス／レフアジミジン、スルフアクロルピリダジン
、スルフアフラゾール、２一（ｐーアミノベンゼン）ス
ルフオンアミドー３ーメトキシピラジン（Ｋｅｌｆｉｚ
ｉＭ）、Ｑ−アミノーｐ−トルエンスルホンアミド、５
−スルフアニルアミドー２，４ージメチルピリミジソ、
４一（Ｎ′ーアセチルスルフアニルアミド）一５，６一
ジメトキシピリミジン、３ースルフアニルアミド一４，
５−ジメチルイソキサゾール、４−スルフアニルアミド
ー５−メトキシー６ーデシルオキシピリミジン、スルフ
アモノメトキシン、４−Ｐ−（８ーヒドロキシーキニリ
ニルー４ーアゾ）ーフエニルスルフアニルアミド−５，
６一ジメトキシピリミジン、スルフアジメトキシン、ス
ルフアメトキサゾール、スルフアキノキサリンおよびｐ
−（２ーメチル−８ーヒドロキシーキノリニルー‘５｝
ーアゾ）−フエニルスルフアニルアミドー５，６一ジメ
トキシピリミジンである。同様に、ジヒドロ葉酸リダク
ターゼを阻害し、抗微生物剤として働く化合物は多く知
られているが、本発明において適当に使用される化合物
の例は、たとえば米国特許第２．６５８，８９７号；２
，７６７，１８３号：３，０２１，３３２号：２，９３
７，，′，１２８４号：３，３２２，７６５号：２，９
０９，５２２号；２，６２４，７３２号：２，５７９，
２５９号；２，９４５，８５９号；２，５７６，９３ｙ
号：２，９２６，１６６号；２，６９７，７１び号；２
，７４９，３４５号および２，７４９，３４４号に示さ
れている。

しかしながら、以下に示す阻害剤（またはその医薬的に
許容し得る塩）が、本発明の目的に好ましい。

すなわち、２，４−ジアミノー６−エチル−５一ｐーク
ロロフエニルピリミジン（ピリメタミン）、２，４ージ
アミノー５一（３′，４′，５′一トリメトキシベンジ
ル）ピリミジン（トリメトブリム）、２，４ージアミノ
ー５一（３′，４′ージメトキシベンジル）ピリミジン
（ジアベリジン）、２，４ージアミノ−５一（２−イソ
プロピルーイークロロフエノキシ）ピリミジン、２，４
−ジアミノー５ーメチルー６一ｓｅｃーブチルピリド〔
２，３一ｄ〕ピリミジン、２，４ージアミノー５−メチ
ル一６ーベンジルピリド〔２，３一ｄ〕ピリミジン、２
，４ージアミノー５，６ーテトラメチレンキナゾリソ、
２，４−ジアミノー５一（２′，４′，５′−トリメト
キシベンジル）ピリミジン、２，４ージアミノー５一（
２′ーエチルー４′，５−ジメトキシベンジル）ピリミ
ジン、２，４ージアミノ−５一（２′ーメチル−４′，
５′−ジメトキシベンジル）ピリミジンである。特に好
ましい配合は、ＤＭＨＰを、括抗剤としてスルフアジア
ジン、スルフアメトキサゾール、スルフアドキシンもし
くはスルフアキノキサリン、または阻害剤としてトリメ
トプリム、ジアベリジンもしくはピリメタミンと配合し
たものである。

ある種の浩抗剤および阻害剤を用いると特定の疾患に対
しては相剰効果が期待できる点およびこの両タイプの抗
微生物化合物による式（１）の化合物の増強作用という
点から、たとえばＤＭＨＰと上述の好ましい桔抗剤の一
種および上述の阻害剤の一種を組み合わせた三者配合物
を調製することも好ましい。たとえば、スルフアジアジ
ンノトリメトブリム／ＤＭＨＰまたはスルフアメトキサ
ゾール／トリメトプリム／ＤＭＨＰまたはスルフアドキ
シン／トリメトプリム／ＤＭＨＰ、またはスルフアキノ
キサリンノジアベリジンノＤＭＨＰは、単一成分または
その二者配合物に比して改善された有効性を示すことが
明らかである。式（１）の化合物と、措抗剤および／ま
たは阻害剤とは、担体と配合して、非経口的、局所的、
経直腸的または経口的投与に適当な医薬剤とすることも
できる。

経口的または経直腸的投与用薬剤は、各化合物の一定量
を含有する錠剤、カプセル、カシュー、アンプルまたは
坐剤のような分離剤型とすることが有利であるが、また
粉末剤顎粒剤、水もしくは非水液体中の溶液剤もしくは
懸濁剤、または局所投与用の場合は軟膏剤もしくはペー
スト剤とすることもできる。非経口投与用の場合は、水
または非水液体担体中を加えた製剤を滅菌し、密閉容器
中に封入する。この製剤は公知の任意の方法によって製
造することができ、以下の補助成分すなわち、希釈剤、
溶液を血液と等張にするための容質、緩衝剤、贋味剤、
結合剤、分散剤、界面活性剤、増粘剤、滑沢剤および被
覆物質、防腐剤、殺菌剤、抗酸化剤、坐剤および軟膏基
剤、並びにその他の医薬的に許容し得る任意の競形剤の
一種または二種以上を含有せしめることができる。協力
剤を桔抗剤または阻害剤と組み合わせた製剤は、またこ
の各成分を別々に包装単位または用量単位毎に一式とし
、使用時に配合使用することを指示したかたちで提供す
ることもできる。

指示には、投与方法およびその製剤の適応症なども明記
することができる。上述の各化合物は、無機または有機
酸たとえば塩酸、硫酸、酢酸、クエン酸、乳酸、マレィ
ン酸またはサリチル酸などによるその医薬的に許容し得
る塩であってもよい。

またスルホンアミド浩抗剤の場合は、塩基たとえば水酸
化ナトリウムまたはカリウムの塩であってもよい。本発
明の組成物に用いられる治療的に活性な化合物の比は広
範囲に変えることができる。

使用条件によって、組成物には、適当な割合および用量
で、協力剤並びに措抗剤および／または阻害剤を加える
ことができる。たとえばｉｎｖｉｖｏで使用する場合は
、各成分がある割合で、血清または絹識液中に、好まし
くは長期間、維持されることが望ましい。各成分の吸収
、解離または分配速度の相違により、製剤中の各成分の
初期含量をよび比率とｉｎｖ手ｖｏにおける目的の組議
における含量および比率は変ってくる。動物の疾患の一
般的治療の際の処方および用量は、疾患をもつ対称の要
求、原因となっている微生物に対する措抗剤または阻４
害成分の活性、各成分のｉｎｖｉｖｏにおける半減期お
よび毒性、およびその他個々の場合の要求を考慮して決
定されるべきである。たとえば、本発明のヒトを除く動
物用医薬組成物は、式（１）の協力作用のある化合物約
１なし・し３の部、好ましくは５なし、し１５部または
その塩の当量、並びに浩抗剤１ないし３礎都、好ましく
は５なし、し１５部またはその塩の当量、および／また
は阻害剤１部またはその塩の当量を配合させる。用量は
感染微生物によって変ってくる。しかしながら、通常の
場合、協力剤および措抗剤それぞれ約６０の９／ｋ９ま
で、および阻害剤約７．５の９／ｋ９までの配合剤を１
日に、数回に分けて投与する。式（１）の化合物を措抗
剤および／または阻害剤と配合してなる医薬製剤は、ま
た、洗浄後の傷たとえば主術後に細菌の生育を阻止する
ために溶液として使用することもできる。たとえば、殺
菌液の好ましい濃度は、医薬的に許容し得る外用に適当
な溶媒中に、式（１）の化合物１−３０の９／地、桔抗
剤１−３０の９／肌‘および／または阻害剤０．０３−
１の９／泌である。式（１）の化合物の協力効果は、ｉ
ｎｖｉｔｒｏで比較的容易に示され、研究にまた臨床的
に使用することができる。

この種の可能性としては、診断および患者の細菌叢の同
定、並びにそれにもとづく臨床的な治療スケジュールの
選択がある。本発明の化合物は、微生物たとえば ＳねｐｈｙｌｏｃＭｃ雌 ａｕｒｅｕｓ ， Ｐ
ＳｅｕｄｏｍｏｎａＳａｅｍ鉾ｎｏＳａおよびｐａｓｔ
ｅｍｅｌｌａ ｍｕｌｔｏｃｉ船によって惹起された感
染の治療に有用である。

各種の配合物を多孔性のディスクたとえば炉紙ディスク
）または寒天栄養培地またはその他の感応性を決定する
ための細菌の生育用培地に加える。

協力作用のある化合物を桔抗剤および／または阻害剤化
合物と共に加えた物品を、上述の目的で医院、病院およ
び診断所に配布または販売することもできる。代表的な
試験用ディスクは、ｐーアミノ安息香酸桔抗剤５なし、
し５０仏夕／机【、ジヒドロ粟酸リダクターゼ阻害剤０
．５なし・し５仏ぞ／泌およびＤＭＨＰ約１０ないし１
００仏夕／叫を、水性浸出液と馬の筋肉のパパィン消化
物との混合物よりなる媒体中に含有した溶液を浸み込ま
せて調製される。更に、増強された桔抗剤または阻害剤
を用いるこの種の医薬的試験は、細菌をその感受性およ
びその特殊な抵抗剤たとえば単独で用いた場合の括抗剤
に対する性質により特徴づけるために使用することもで
きる。

本発明による各種製剤を用いた研究は、治療目的のため
に製剤を選択しその組成を決定する基礎ともなる。式（
１）の化合物の毒性は、通常用いられる浩抗剤または阻
害剤の毒性に比し、一般にかなり低い。したがって、治
癒比の増大または薬剤の毒性もしくは副作用の減少と共
に、製剤の抗菌性の有効度を維持または増大することが
可能になる。上述の浩抗剤および阻害剤のｊｎｖｉｔｒ
ｏにおける抗細菌活性に加えて、本配合物は家畜または
家禽の微生物による感染たとえばＰａｓｔｅｍｅｌｌａ
ｍｕ肋ｃｉｄａ、特に原虫による疾患コクシジウム症に
対して使用することもできる。

コクシジウム症は、世界的に、経済上重要な家畜の疾患
であって、特に各種の家禽にみられ、胞子虫類の有害群
であるｇｅｎｅｒａＥｉｍｅｒｉａおよびｌｓｏｐｏｒ
ａによって起こされるものである。この感染症には普通
二種のタイプが知られている。すなわち、一つは胞子虫
類のＥ；ｍｅｒｉａｔｅｎｅｌｌａによって起こされる
急性または「盲腸性」の感染約５日後に烈しい出血を生
ずることを特徴とするもので、もう一つは慢性または「
腸性」のもので、アィメリア属の数種類、Ｅ．ａｃｅｒ
ｖｕｌｉ雌，Ｅ．ｎｅｃａｔｒｉｘ，Ｅ．ｍａｘｉｍａ
およびＥ．ｂｒ皿ｅｔｔｉによって惹起される。たとえ
ば、ある種のスルホンアミド類、スルフアメタジン、ス
ルフアジアジンおよび特にスルフアキノキサリンは家禽
のコクシジゥム症に有効であることが知られているが、
治療用量では有害な副作用が生じる。

また、ある種の２，４−ジアミノー５ーベンジル−また
は一５一フエニルーヒリミジン類、特に５−置換（３一
低級ァルコキシベンジル）ピリミジン、ことに２，４ー
ジアミノー５一（３，４′−ジメトキシベンジル）ピリ
ジン（以下「ジアベリジン」という）は、この疾病に対
して有効である。しかしながら、細菌の代謝に対するピ
リミジン阻害剤は、スルホンアミドよりも一般にはるか
に高価であるが、この阻害剤はスルホンアミドの作用を
増強し、その結果、この疾患に対してより少量の混合物
で有効となり、スルホンアミドの有効用量はＩＱ分の１
以下にまで低下できる。本発明の協力剤、特に式（１）
の化合物は、ある種のスルホンアミドおよびピリミジン
類と配合すると、コクシジウム症に対して活性な三者配
合物を与える。

また、ある場合には、式（１）の化合物単独でも、たと
えばＥ．ａｃｅｗ肌ｎａに対して有効である。スルフア
キノキサリンとジアベリジンおよびＤＭＨＰの配合物は
家禽特に鶏のコクシジウム症に対して有効であることが
明らかにされた。

このニ者配合物は、スルホンアミドまたはピリミジン成
分単独よりも低濃度で有効であって良好な感染阻止を示
し、これまで知られている組成物の３なし、し４倍もの
活性を有する。しかも家禽にこの疾病を起こさせるすべ
ての関係Ｅｉｍｅｒｉａに対して概して満足できる有効
性をもっという利点をもっている。コクシジウム症に対
する製剤の各化合物は、家禽の飼料または飲料水の混合
添加用として個別に、または配合して提供されるのが好
ましい。

この添加物は、所要の化合物を化合物単独ではなく希釈
した形で、しかし家禽に投与する時よりも濃厚に含有す
る濃縮飼料配合物または飲料添加物とする。飼料配合物
は、本発明の化合物を、その他の任意の適合性ある必要
活性成分、たとえば抗生物質、ビタミンまたはミネラル
と共に、担体または希釈剤、たとえばフスマ、粉砕トー
モロコシ、大麦もしくはその他の穀類、小麦ショート、
穀類の外皮、野菜、麦粉「大豆粉、パン肩およびこの種
その他の飼料、またその他の希釈剤たとえば粉砕した石
灰石、砂石等と合し、慣用技術たとえば研磨、鷹粋、粉
砕、タンブリング等によって各成分を完全に混合する。

かくして得られた混合物をそのまま粉末または小粒子組
成物として提供するか、または更に手を加えてベレーま
たは類似物の添加剤に調製する。この飼料配合物を、こ
の配合物中の活性成分の濃度に応じて、飼料ｌｃｗｔに
つきたとえばｌｉｄの濃度で、他の飼料に加える。また
別法として、この化合物を、直接家禽に投与できる形に
含有した調製混合飼料とすることもできる。この成分を
飲料添加剤とする場合は、通常その酸付加塩を使用する
。この添加物は、任意にその他の添加物を混合した微粉
末固体の剤型としてもよいし、またこの化合物を適当な
溶媒中に含有させた濃縮物としてもよい。この粉末また
は濃縮物は、飲料水に添加される。飲料添加物を使用し
て家禽に投与する方法は、家禽の飲料摂取が飲料額取に
比べて一定していないので、飼料添加物とする方法に比
し適当とはいえない。家禽の飼料中に、協力剤を約３０
なし・し１０帆．ｐｍ（すなわち０．００３ないし０．
０１％）の濃度で、ジアベリジンまたはスルフアキノキ
サリン１０ないし６０ｐ．ｐ．ｍと配合して用いると改
善された効果の得られることが明らかにされたが、この
三者の成分を配合すると更に好結果が得られる。

この三者配合物中の各成分の濃度は広範囲に変えること
ができるが、協力剤約５なし、し２５蛇．ｐ．ｍ好まし
くは１０ないし９０ｐ．ｐ．ｍ、ジアベリンおよびスル
フアキノキサリンはそれぞれ約１０なし、し１００ｐ．
ｐ．ｍ、好ましくは１５ないし６０ｐ．ｐ．ｍの相対濃
度が特に好ましい。一方、総薬剤濃度が低い場合はスル
フアキノキサリン対ジァベリジンの濃度比は１：１ない
し２．１とすることが特に好ましいが、総菜剤濃度が高
い場合はこの比を４：１まで上げることが望ましい。Ｄ
ＭＨＰをその６−メチル類縁体に代えても同様に目的を
達することができるが、コクシジウム症に対する協力作
用は若干低下する。

本発明の特定の態様としては、更に以下の各項を挙げる
ことができる。

‘ａ’上述の組成物において、協力剤は６位が一個の炭
素原子により置換されかつ７位がジ置換された２−アミ
ノ−４ーヒドロキシ−７，８−ジヒドロプテリジンのよ
うなプテリジン化合物である組成物。

特に、上述の式（１）の化合物、特に７位がジメチルま
たはジェチル置換された化合物よりなる組成物。‘ｂ｝
前項‘ａ｝に特定した組成物において、Ｒが６ーアル
キルまたは６−ヒドロキシアルキル基である式（１）の
化合物よりなる組成物。

アルキル基はメチル基であることが好ましい。【ｃ｝
前項‘小こ特定した組成物において、Ｒがハロゲン置換
アルキル基である式（１）の化合物よりなる組成物。

特にモノまたはジ置換化合物、特に臭素置換体が好まし
い。‘ｄー 前記｛ａ｝ないし｛ｃ）の組成物において
、協力剤の有効協力量を浩抗剤および阻害剤両者の有効
量４と配合してなる組成物。

｛ｅ｝ 上述の組成物の任意の一種を医薬的に許容し得
る坦体と配合して含有する医薬製剤。

｛ｆ｝ 前項｛ｅ｝の医薬製剤において、ｉｎｖｉｔｒ
ｏまたはｉｎｖｉｖｏ条件下で微生物によるジヒドロ案
酸生成阻害に用いられる液体剤型医薬製剤。

（ｇ） 上記医薬製剤において、協力剤、桔抗剤または
阻害剤を別個に包装して一式とし、これを人を除く動物
医薬用の目的で配合して使用するように指示を付した医
薬製剤。

（ｈ） 有効協力量のＤＭＨＰを、有効量のスルフアキ
ノキサリンおよびジアベリジンと配合してなる、胞子虫
類系または感染の試験または治療用医薬製剤。

（ｉ） 有効量の適当な成分を混合し、配合剤型とする
上記組成物または医薬製剤の製法。

（ｉ） 上述の組成物または医薬製剤の任意の一種を宿
主に投与することにより微生物感染の治療および予防方
法。

（ｋ） 微生物を上述の組成物または医薬製剤に接触さ
せることよりなる微生物のジヒドロ葉酸生成阻害方法。

例１ジヒドロプテロ酸（ＤＰｔＡ）の生合成を行なう酵
素、すなわちヒドロキシメチルジヒドロプテリジンピロ
フオスホキナーゼ（ＨＭＰＰＳ）およびジヒドロプテロ
ェートシンセターゼ（以下、シンセターゼという）に対
する阻害作用を検討して、有効な協力剤であるプテリジ
ン桔抗物質を試験する。

Ｉ ＨＭＰＰＳ ２−アミノ−４−ヒドロキシー６ーヒドロキシメチル−
７，８ージヒドロプテリジン（ＨＭＳｔ）＋アデノシン
トリホスフエ−ト（ＡＴＰ）Ｍｇ２十２−アミノ−４
ーヒドロキシ−６−ピロホスホメチル−７，８−ジヒド
ロプテリジン（Ｐｔ）＋アデノシン モノホスフエート
（ＡＭＰ）〔Ｍず十は酵素活性化剤として用いられ、Ａ
ＴＰがホスフェート ドナーとして働く大部分の酵素反
応ではその活性形はＭｇＡＴ皮‐鎖体である〕２ シン
セターゼ Ｆｔ十ｐ−アミノ安息香酸盤＋ジヒド。

プ。テロ酸（ＤＰｔＡ）＋ピロホスフェート｛ａ’ＨＭ
ＰＰＳの定量を行なう。

ＡＴＰ−ｙ−凶２の末端ホスフェートのＰｔへの遷移を
指標とする。これが被検化合物によるＨＭＰＰＳの阻害
量と相関する。代謝物および酵素よりなる各種混合物を
表＊１に示したように試験管中にとに、これに被検化合
物を加える。

表１ 混合物の成分は次の通りである。

１：２−アミノ−４ーヒドロキシー６ーヒドロキシメチ
ル−７，８−ジヒドロブテリジン（ＨＭＰｔ）、濃度８
００ムＭ。

ロ：Ｅ ｃｏｌｉ抽出物から得られ、Ｒｉｃｈｅｙおよ
びＢｒｏｗｎの方法（Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２４４
，１５８２一１５９２（１９６９）により、セフアデツ
クスＧ−１００上でシンセターゼと分離したＨＭＭＰＳ
源ｍ：３ｈＭ．ＡＴＰーツー戊２Ｎ：０．１０Ｍ ＡＴ
Ｐ中性（ラベルしていない）Ｖ：０．０２Ｍ，ＭｇＣ１
２・ＱＨ２０ の：０．１Ｍ，ＭｇＣ１２・８日２０ 肌：ＨＭＰＰＳ源およびシンセターゼ 肌：彼検化合物、濃度０．９３×１０‐３ＭＫ：０．４
ｍＭ ｐＡＢ−ＣＩ４表１に示したように、試験管１〜
９は、すべてＨＭ円ＰＳ源ラベルしたＡＴＰおよび０．
０２Ｍ，ＭｇＣ１２・母ＬＯを含んでいて、試験管２な
し、し９は更にＨＭ円ｔを、試験管４なし、し９は更に
被検化合物を含んでいる。

対照の１０なし・し１２はＨＭＰＰＳ源およびシンセタ
ーゼの両者、ラベルしていないＡＴＰ、０．１Ｍ−Ｍｇ
Ｃ１２・母ＬＯおよびラベルしたｐＡＢを含んでいる。
表に示した成分を所定量含んだ試験管１ないし９は蒸留
水で２００ム〆とし、３７℃において６０分間培養し、
ついで氷で冷却する。

デキストロース（７２．１の９／の‘を含む液２０＃そ
）およびへキソキナーゼ（２００山単位／叫を含む液５
ムク）を溶液に加え、次に室温に１５分間放置する。Ｄ
ａｒｃｏ−Ｇ−６０（登録商標）１０ｍ９を各試験管に
加え、内容を１０分間一定時間毎に蝿拝する。活性炭を
ｍｉｌｌｉｐｏｒｅＡＰ２５０２２００（登録商標）炉
紙を通して除き、炉紙を各１０の‘の冷水で３回洗浄す
る。活性炭および炉紙の放射能を測定する。試験管２お
よび３は被検化合物を含んでおらずしたがって酵素阻害
は０％であるので試験管２および３の内容物から得られ
た放射能カウント数を最高カウントとする。

その他の試験管の内容物における％阻害率は、その放射
能カウント数を上述の最高値と比べて計算する。試験管
ｉｏないし１２の内容は‘ｂ｝に記載した方法によりク
ロマトグラフィーで分析し、対照として用いた。

試験管１０および１１は被検化合物を含んでおらず（し
たがって阻害率は０％である）１００％の値を与える。
‘ｂーの実験において、試験管含有物が示す％阻害率は
、それぞれのクロャトグラムを比較し、これに関して計
算できる。【ｂー 試験化合物のシンセターゼに対する
活性は、ジヒドプテロェート−ＣＩ４の生成を指標とし
て、次のようにして定量した。

ＰｔのプールをＡＴＰ中性（５０メタ、０．１Ｍ）、Ｍ
ｇＣｌ２・細２０（５０仏夕、０．１Ｍ）、ジチオトラ
ィトール（１００仏〆、０．１Ｍ）、トリス緩衝液（１
００仏そ、０．４Ｍ、ｐＨ８‐３）、ＨＭＰｔ（２５仏
そ、８７６山Ｍ ）およびＨＭＰＰＳ含有溶液１７０山
〆より調製する。

混合物を３７０で６０分間培養し、氷上で短時間冷却し
、次にデキストロース（７２．１の９／の‘を含む液１
００仏〆）およびへキソキナーゼ（２０００単位／地を
含む液２０り夕）を室温で溶液に加え、この温度に１８
分間放置する。ＭｇＣｌ２・細２０（１０一夕、０．１
Ｍ）、ｐＡＢ‐ＣＩ４（１０Ａそ、０．４ｍＭ）、ジチ
オトライトール（２０仏そ、０．１Ｍ）およびトリス緩
衝液（２０仏そ、０．４Ｍ、ｐＨ８．３）の溶液を５本
の試験管それぞれにとり、次にそれぞれにプールの内容
物８０仏そを表２に示したようにシンセターゼおよび／
または試験化合物を加える。

次に溶液を蒸留水で２００仏そにする。それぞれ、ＡＴ
Ｐ（ｉｏ仏〆、０．１Ｍ）、ＭｇＣ１２・細２０（１０
〃そ、０．１Ｍ）、ジチオトラィトール（２０仏〆、０
．１Ｍ）、トリス緩衝液（２０ｒそ、０．４Ｍ、ＰＨ８
．３）、ＰＡＢ−Ｃ１４（ｉ○仏夕、０．４ｍＭ）、お
よび活性の分かっているＨＭＰＰＳおよびシンセターゼ
を含む溶液２０ｒ夕を含有する２個の対照試験管を調製
する。

この２個の試験管の一つに試験化合物を最終濃度１０‐
５Ｍまで加え、両試験とも蒸留水で２００仏そにする。
表２ 全部の７個の試験管を３７０で３０分間培養し、氷冷し
、（ａ｝における対照試験管と共に、次のようにしたク
ロマトグラフィーにより定量する。

各試験管の内容物１００Ａ夕を、Ｗｈａｔｍａｎ小Ｍ号
のクロマトグラフィー用炉紙（２×２０肌）の原点につ
け、Ｓｏｒｅｎｓｏｎのリン酸カリウム、リン酸ナトリ
ウム緩衝液（０．１Ｍ、ｐＨ７．０）により下行法で１
０なし、し１５肌展開する。

各試験管の内容物によって得られた相対位置のスポット
から、それぞれのシンセターゼ阻害率が、阻害率０％の
対照試験管１０および１１の場合との比較で測定できる
。表１のＸ欄および表２の４欄には試験化合物としてＤ
ＭＨＰを用いた場合の阻害率を示した。この試験法によ
って１００ＡＭまたはそれ以下の濃度で５０％阻害を示
す化合物は有用な協力作用を有するものであり、その毒
性が好ましいものであれば、本発明の組成物に加えるこ
とができる。

本発明の好ましい協力剤によって得られた阻害の結果を
表３に示す。

表３ 例２ 式（１）の化合物の有効性を単独で、また桔抗剤または
阻害剤との配合において確立し、胞子菌類を抑制し殺滅
するのにもっとも有用な各成分の相対濃度を決定するた
めに、スクリーニングテストを実施した。

Ｒａｎ舞ｒ雄性ヒナドリの群を、足柳して個別の室に位
置させて、底を鉄線とした小さな加熱ケージに入れ、Ｅ
．ｔｅｎｅｌｌａまたはＥ．ａｃｅｗ山ｉｎａのような
Ｅｉｍｅｒｉａ属の胞子形成卵母細胞を経口的に与えて
感染させる。

適当な試験化合物（ＤＭＨＰ、スルフアキノキサリソ（
ＳＱＸ）またはジアベリジン（ＤＶ）またはこの任意の
配合物）を、特に処方した実験用ビタミン欠乏飼料（Ｌ
．Ｄ．４メッシュ）の少量に加え、きれを１／１の飼料
配合物とし、これを水平ローラードラムによって飼料と
混合して、ヒナドリの群に感染１日前から与え、一部の
群は試験化合物の投与を行はないで対照とする。投与を
数日間、たとえば８なし、し９日間続ける。試験期間中
に死亡したヒナドリおよび投与最終日に解剖したヒナド
リの盲腸壁の病変によって示される損傷量を検討し、治
療活性測定のための基礎として対照群と比較する。更に
各群の死亡率および体重増加率を測定する。死亡率が類
似または同一であっても、体重増加および病変の得点に
よって示される病変拡大の減少が重要であって、投与薬
剤の著しいまたは明白な効果が認められる。実験 １生
後１週間のヒナドリ５羽の群に、Ｗｅｙｂｒｉｄｇｅ種
Ｅ．ｔｅｎｅｌｌａの胞子形成卵母細胞２００，０００
を経口的に与えて感染させる。

この感染の１日前から、ＤＭＨＰを飼料に、１０，３０
，９０また２５岬．ｐ．ｍ．の割合で、単独にまたはジ
アベリジン（３０ｐ．ｐ．ｍ）およびスルフアキノキサ
リン（３の．ｐ．ｍ．）の混合物と配合して投与し、こ
れを８日間続ける。コクシジウム症による死亡率および
病変を感染の６日後に測定し、またヒナドリの群の体重
増加は感染の日から感染６日後まで測定して、非処理の
対照群と比較する。実験 ２ 生後一週間のヒナドリＩ０羽の群に、Ｗｅｙｂｒｉｄｇ
ｅ種Ｅ．ｔｅｎｅｌｌａの胞子形成卵母細胞２００，０
００を与えて感染させ、実験１の操作と同様にして、ジ
ァベリジンノスルフアキノキサリン混合物を、６０′６
０，３０／３０，１５′１５および７．５／７．５ｐ．
ｐ．ｍの濃度で単独に、または濃度１０血．ｐ．ｍのＤ
ＭＨＰと配合して投与し、ＤＭＨＰの協力効果を測定す
る。

実験 ３ 生後１週間のヒナドリ１０羽の群に、Ｗｅｙｂｒｉｄｇ
ｅ種Ｅ．ｔｅｎｅｌｌａの胞子形成卵母細胞１００，０
００を与えて感染させ、ジアベリジンノスルフアキノキ
サリンの最適以下の配合物（１５／１５ｐ．ｐ．ｍ）を
単独および濃度３，１０，３０および９血．ｐ．ｍのＤ
ＭＨＰと配合して投与する。

実験 ４ 生後１週間のヒナドリ１０羽の群にＥ．にｎｅｌｌａ胞
子形成卵母細胞１００，０００を感染させ、ジアベリジ
ン（１０，２０ｐ．ｐ．ｍ）、スルフアキノキサリン（
２０，４血．ｐ．ｍ）およびＤＭＨＰ（１０，２血．ｐ
．ｍ）の各種配合物を、各成分単独におよび他の一種ま
たは他の二種の成分と共に投与して、ＤＭＨＰがピリミ
ジンまたはスルホンアミド成分により著しい増強作用を
示すかどうかを確認する。

実験 ５ 生後１週間のヒナドリ５羽の群に、Ｅ．ｔｅｎｅｌｌａ
胞子形成卵母細胞１００，０００を与えて感染させる。

ジアベリジンノスルフアキノキサリンの最適以下の濃度
（計４０ｐ．ｐ．ｍ）において１：１から５．１までの
５種の割合の混合物がＤＭＨＰ５なし、し４０ｐ．ｐ．
ｍの４種の濃度で配合して投与し、３種の成分の至適割
合および最小必要薬剤量を決定する。実験 ６生後３週
間のヒナドリ５羽の群に、Ｗｅｂｒｉｄｇｅ種Ｅ．ａｃ
ｅｗｕｌｉＭの胞子形成卵母細胞５００，０００を与え
て感染させ、実験１の操作にしたがって、試験化合物の
投与を９日間続ける。

コクシジウム症による死亡率および病変、感染第５，６
および７日目の各ヒナドリの卵母細胞排出、および感染
日から感染７日後までの体重増加を検査する。実験 ７ 生後３週間のヒナドリ５羽の群を実験６と同機にして感
染させ、感染の１日前から、飼料にＤＭＨＰを５，１０
，３０または９の．ｐ．ｍの濃度で単独に加えて、およ
びジアベリジン（１帆．ｐ．ｍ）およびスルフアキノキ
サリン（１ゆ．ｐ．ｍ）の混合物を配合して加えて投与
し、これを９日間続ける。

実験 ８生後３週間のヒナドリ５羽の群にＷｅｙｂｒｉ
ｄ袋種Ｅ．ａｃｅｗｕｌｉＭの胞子形成卵母細胞５，０
００，０００を感染させ、ＤＭＨＰのみを５，１０およ
び３０Ｐ．Ｐ．ｍの濃度で投与するほかは実験７と同機
に操作する。

実験 ９生後１週間のヒナドリ５羽の群にＷｅｙｂｒｌ
ｄ袋種Ｅ．にｎｅｌｌａの胞子形成卵母細胞１００，０
００例１と同様に操作して感染させる。

４：１スルフアキノキサリン／ジアベリジン混合物８０
／２０，６０／１５，４０／１０および２０ノ５ｐ．ｐ
．ｍの濃度で単独に、および広範囲に亘る低濃度のＤＭ
ＨＰと配合してヒプド川こ投与する。

このスクリーニング試験の結果を、各種成分の飼料中濃
度（ｐ．ｐ．ｍ）、コクシジウム症による死亡率、体重
増加率、病変評点、卵母細胞排出および活性について表
４に示した。

盲腸病変指数は次の評点系列を用いて計算した。０＝病
変なし １＝わずかに出血、盲腸壁の肥厚なし ２＝中程度の出血、盲腸壁の肥厚 ３＝多数の出血、盲腸核が認められる ４こ多数の出血、大きな核をもって盲腸は肥大更に、実
験中にコクシジウム症によって死亡したヒナド川こは、
すべて評点４を与えた。

盲腸病変指数＝性存動物の総病変評点）十（４ｘ死亡動
物数）はじめの全動物数活性欄の十十十、十十、十、±
および−はそれぞれ試験した薬剤のＥｉｍｅｒｉａ感染
に対する活性が、きわめて高い、高い、わずか、疑問、
なしを意味する。

結果 実験の結果、ＥＭＨＰ単独では試験したすべての濃度に
おいてＥ．ｔｅｎｅｌｌａ感染に対して不活性であるが
、ＤＭＨＰは試験したジアベリジンノスルフアキノキサ
リン混合物の大部分の活性を増強させた。

多くの場合、感染の抑制、盲腸病変の著しい軽減、感染
前の体重の回復において３ないし４倍もの効果を示す。
ＤＭＨＰの濃度を下げると活性の低下が認められるが、
ｌｏｐ．ｐ．ｍの濃度で配合しても、活性の著しい改善
がみられる。一方、病変評点の低下は４：１スルフアキ
ノキサリンノジアベリジン混合物にわずか５ｐ．ｐ．ｍ
のＤＭＨＰを添加しても認められた。表４ ジアベリジンまたはスルフアキノキサリンの単独にＥＮ
ＨＰを添加しても、試験した濃度では、Ｅ．にｎｅｌｌ
ａ感染に対する治療に対し増強作用は認められず、良好
な活性のためには三者混合物が必須のものと考えられる
。

しかしながら、他の濃度での単一成分の増強の可能性は
ないわけではない。三成分の相対濃度を広範囲に変えて
も好ましい活性が得られるが、特に有効性の高い配合物
は前述の如く、スルフアキノキサリン１５なし、し６帆
．ｐ．ｍ．ジアベリジン１５なし、し６的．ｐ．ｍ．お
よびＤＭＨＰＩＯないし９０ｐ．ｐ．ｍ．よりなる組成
物であることが明らかである。スルフアキノキサリン／
ジアベリジンの好ましい濃度比は、総薬剤濃度の低い時
に１：１または２：１、もっと高い濃度では４：１まで
である。穏和な感染を腸に生ずるＥ．ａｃｅｗ山ｉｎａ
についての実験では、ＤＭＨＰ単独も２５０および９０
ｐ．ｐ．ｍの濃度で活性であることがわかったが、これ
より低い濃度では体重増加率の低下と卵母細胞の排出増
加にみられるように活性が低下する。

同様に、ジベリジン１ｏｐ．ｐ．ｍ．／スルフアキノキ
サリンｌｏｐ．ｐ．ｍの混合物は単独ではほとんど不活
性であるが、ＤＭＨＰの添加により、活性が著しく増大
し、使用したＤＭＨＰの最低濃度でもこの活性は維持さ
れた。感染源として用いるＥ．ａｃｅｒｖｕｌｉｎａの
卵母細胞を１桁多くすると、ＤＭＨＰ単独も、ジベリジ
ンｌｏｐ．ｐ．ｍ／スルフアキノキサリン１ｏｐ．ｐ．
ｍ混合物も不活性となる。

この場合は、混合物にＤＭＨＰを加えた三者では、試験
したすべてのＤＭＨＰ濃度で感染が抑制され、作用の増
強が認められた。例３ 式（１）の化合物が、Ｐａｓにｕｒｅｌｌａｍ山ｔｏｃ
ｊｄａによる感染を抑制または治療する措抗剤および／
または阻害剤の作用を増強するがどうかを検討するため
に、更に実験を実施した。

実験 １ ヒナドリ１０羽の群に細菌Ｐａｓｔｅｍｅｌｌａｍｕｌ
のｃｉｄａ８×１ぴを経口的に与えて感染させ、この２
日前から、飼料に８５′１５スルフアキノキサリンノジ
アベリジン混合物を単独で、またＤＭＨＰと５０／２０
，５０′１０，５０／５，２５／２，２５′１０および
２５／５ｐ．ｐ．ｍの比率で配合して与え、一部の群は
対照として投与を行なわない。

感染日からの総致死率および非感染対照の体重増加に対
する体重増加率を測定し、結果を表５に示す。実験 ２ ８５′１５スルフアキノキサリン／トリメトプリム（Ｔ
ＭＰ）混合物をＤＭＨＰと２５／２０，２５／１０，２
５／５，１２．５／２０，１２．５／１０および１２．
５／５の割合で配合して実験１と同様の実験を実施した
。

感染日からの総致死率を表６に示す。表５ 表５ 実験１の結果から、ジアベリジンは単独では活性が低く
、単独で良好な活性を示すスルフアキノキサリンに対し
て増強作用をほとんど示さない。

しかしながら、ＤＭＨＰの添加は飼料に５ｐ．ｐ．ｍ加
えただけでも、ジアベリジン／スルフアキノキサリン混
合物の活性を著しく増強させる。第二の実験においては
、トリメトプリムとスルフアキノキサリン配合物に対す
るＤＭＨＰの増強作用は使用した用量では第一の実験の
場合に比して小さいことが確認された。表６ 例４ 更に、スルフアメトキサゾールおよびトリメトプリムを
単独にまた三者混合物としてＤＭＨＰと配合した場合の
抗菌活性を検討した。

ＤＭＨＰはＳねｐｈｙｌｏｃｏｃｃ雌ａｕｒｅｕｓに対
するスルフアメトキサゾールおよびトリメトプリムの活
性をそれぞれ増強し、両者で作用する場合のこの薬剤の
相剰作用も増強した。Ｗｅｌｌｃｏｍｅ寒天栄養培地を
用い、培養は３７０において１報時間行なった実験の結
果を表７にまとめる。表７ 例５ ＤＭＨＰの増強作用を、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ
ａｕｒｅｕＳＮ４９１の生長速度のトリメトプリムおよ
びスルファメトキサゾールによる阻害効果の冗進によっ
ても測定した。

Ｗｅｎｃｏｍｅ栄養塔地中、３７℃におし、て７時間培
養し、混濁度測定法による。この実験では有効用量以下
のトリメトプリムおよびスルフアメトキサゾールを用い
た。阻害率を表８に示す。表８ 例６ 例４に記載したと同様の実験の結果を表９にグラフで示
す。

生長速度は分光分析法により測定した。表中、黒い榛で
表わしたものは１０メタ／泌のＤＭＨＰを用いた場合に
得られた生育率で、斜線を施したものはＤＭＨＰを加え
なかった場合の生育率である。表？ この実験から、ＤＭＨＰは、トリメトプリムおよびスル
フアメトキサゾールを単独に用いた場合の作用を増強さ
せるだけでなく、その配合物の活性を改善し増強させる
ものであることが結論できる。

例７ この実験では、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓａｕｒｅ
ｕｓに対するトリメトプリムおよびスルフアメトキサゾ
ール単独および配合物の殺菌活性へのＤＭＨＰの作用を
検討した。

結果を表１０に示す。

殺菌活性は、３７０に２独特間＊培養した後に生存して
いるはじめの接種物を生存計数によって測定し百分率で
示した。接種は、微生物の最終濃度が１ぴ／地となるよ
うにした。この実験によれば、１．０山夕／叫のトリメ
トプリムも１０Ａ夕／机上のスルフアメトキサゾールも
ＤＭＨＰがない場合は殺菌作用を示さないが、１０〃夕
／叫のＤＭＨＰが存在すれば両者とも活性を示す。更に
０．１山夕／泌のスルフアメトキサゾールの配合でも殺
菌活性は１０仏夕／の‘のＤＭＨＰの存在により明らか
に増大する。表 １０ 例８ この実験では、ＤＭＨＰまたはその７，７−ジェチル類
縁体のトリメトプリム（ＴＭＰ）および／またはスルフ
アメトキサゾールとの配合におけるＳ笹ｐｈｙｌ比Ｍｃ
雌 ａｍｅ船 お よ びＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓａｅ
ｍｇｎｏｓａに対する相剰効果を評価するため抑制帯の
データをとった。

べトリ皿にとったチミジン含量の低い大豆べプトン媒体
（Ｗｅｌｌｃｏにｓｔ感度試験寒天）にブテリジンを加
え、他の成分は媒体から小さな栓子を除いて得られたウ
ェルに加える。媒体の表面に試験微生物を接種し、培養
する。抑制帯の量を表１１に示す。表中の数は完全抑制
帯を表わし（伽数は約６倍倍率でのゥェルの緑からの長
さ）、かっこ内の数字は部分抑制帯である。表 １１結
果は、ＳｔａｐｈｙｌｏｃＭｃｕｓａｌｌｒｅｕｓに対
しては、両化合物ともＴＭＰおよびＳＭＸ単独に対して
相剰効果を示し、また両者に対して多相相剰作用を示す
。

ジェチル類縁体の方がＤＭＨＰよりわずかに活性が強い
。Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓａｅｍｇｌｎｏｓａに対して
もＤＭＨＰの増強作用は認められ、この微生物に対する
方が増強作用は大きい。例９ 標準栄養塔地を用い、協力剤を、剤菌の生育に対する桔
抗剤および／または阻害剤と共に含む処方の試験ディス
クの有用性も試験した。

結果を表１２に示す。表 １２ ＊６のの炉紙デスクあたり 例 １０ ‐この実験で
は「 マウスの腹控内に、３％の豚の胃のムチンに懸濁
したＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃ船ａｍｅ雌を与えて感染
させた。

実験動物にトリメトプリムおよびスルフアメトキサゾー
ルを単独に、またはＤＭＨＰと共に、１日２回、３日間
経口または腹腔内投与した。結果を表１３に示す。ＤＭ
ＨＰはＴＭ円およびＳＭＸの保護効果を増強する。例１
１ 原虫、Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａｇｏｎｄｉｉで感染させた
マウスについて、ピリメタミン単独またはスルフアメト
キサゾールと配合した場合の活性に対するＤＭＨＰの作
用を試験した。

実験動物はマウスの１０‐３漠出液０．５叫（原虫５０
００）で感染させる。

このＬＤ５ｏ用量は約１０００である。化合物または配
合物を感染後直ちに、６時間後、更に２４および４斑時
間後に投与する。結果を表１４に示す。ＤＭＨＰはピリ
メタミン単独およびスルフアメトキサゾールと配合した
場合の抗原虫作用をいずれも増強する。表 １３ 表 １４ そのＲがセドロキシメチルでありそしてＲＩとＲ２とが
一緒にスピロシクロベンチルを表わす式１の化合物はま
た１００ムタ／似の投与量でィンピトロ試験でＥｉｍｅ
ｒｉａｔｅｎｅｌｌａに対し抗コクシジウム活性を有す
ることがまた見出された。

この化合物は単独で試験して３の抑制活性（活性が無い
場合を０としそして生長の完全抑制を５として評価する
）を示し、他方サルフアキノキサリン（ＳＱＸ）０．０
１の９／泌およびジアベリジン（ＤＩＡＶ）０．０３１
２５の９／地と組合せると、５の抑制活性を示す。

例 １２ 錠剤処方 ＤＭＨＰ（純粋） １００のｏ
トリメトプリム（純粋） ２５雌スルフ
アグアニジン（Ｂ．Ｐ．Ｃ） １００のｏ十コー
ンスターチ、乳糖、ゼラチン、タルクおよびステアリン
酸マグネシウム製方 上記成分の公知の製薬技術を用いて混合して額粒を作り
、次にこれを錠剤に打錠する。

例 １３ 錠剤処方 ピレマチミン（ピリメタミン）Ｂ．Ｐ． １５の０Ｄ
ＭＨＰ（純粋） １５０の９こ
れを例１１と同様にして錠剤を調製する。

例 １４錠剤処方 スルフアニルアミド Ｂ．Ｐ．Ｃ． １５０
机９ＤＭＨＰ（純粋） １７５
の９これを例１１と同様にして錠剤を打錠する。

例 １５カプセル処方 トリメトプリム（純粋） ２０の９ＤＭ
ＨＰ（純粋） １００の９製法
額粒状にした化合物を、乳糖、コーンスターチおよびス
テアリン酸マグネシウムと混合する。

この粉末を、カプセル製造機を用いて二片硬質ゼラチン
カプセルに充填する。例１６ 葱注溶液 ＤＭＨＰ（純粋） １のｐ／の【ト
リメトプリム（純粋） ０．２の夕／の【溶媒
水例 １７ 漣注溶液 ＤＭＨＰ（純粋） ２の９／泌Ｑー
ァミノーｐートルェンスルホンァミド（純粋）
２雌／泌例 １８溶液

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ それ自体が酵素ヒドロキシメチルジヒドロプテリジ
   ンピロホスホキナーゼを阻害しかつ十分低毒性である以
   下に定義するような協力剤の有効協力量を、テトラヒド
   ロ葉酸の微生物生合成におけるｐ−アミノ安息香酸拮抗
   剤として作用しうるスルホンアミドまたはジヒドロホレ
   ートリダクターゼ阻害剤であるアリール−またはヘテロ
   アリール−メチルピリミジン、またはその両方の有効量
   と組合せて含有する微生物系または感染の試験または治
   療のためのヒトを除く動物用医薬組成物であつて、協力
   剤が式（I）▲数式、化学式、表等があります▼ （式中、Ｒは場合によりヒドロキシ基によつて、また
   は１もしくは２個以上のハロゲン原子によつて置換され
   ていてもよいアルキル基であり、Ｒ＾１およびＲ＾２は
   同一または互に異なる基であつて、それぞれアルキル基
   であるか、またはＲ＾１およびＲ＾２は両者で、プテリ
   ジン環構造の外部に４ないし６個の炭素原子を有するス
   ピロシクロアルキル環を形成する）にて表わされる化合
   物もしくはその互変異性体またはそのヒトを除く動物用
   医薬として許容できる塩であることを特徴とするヒトを
   除く動物用医薬組成物。