JPS60249056A - 遊離配位子測定方法 - Google Patents

遊離配位子測定方法

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JPS60249056A
JPS60249056A JP9532385A JP9532385A JPS60249056A JP S60249056 A JPS60249056 A JP S60249056A JP 9532385 A JP9532385 A JP 9532385A JP 9532385 A JP9532385 A JP 9532385A JP S60249056 A JPS60249056 A JP S60249056A
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ligand
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free
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derivative
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JP9532385A
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ロバート　ジエイ　ブーラー
ジエラルド　オズチエル
ルイス　ジエイ　ライスバーグ
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Corning Glass Works
Original Assignee
Corning Glass Works
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Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業−１ニの利用分野） 本発明は配位子を遊離状態および結合状態で含有する液
体試料中における遊離配位子の測定方法に関するもので
ある。より詳細には、本発明は配位子を遊離状態および
結合状態で含有する液体試料中における遊離配位子の測
定方法の改良に関するものである。
（従来技術） 生体液中には様々な種類の物質が遊離状態および結合状
態で存在することが知られている。結合状態において各
物質は一般的に１つ以上の内因性蛋白質すなわち生体液
中に通常存在する蛋白質に結合している。このような結
合の主因となる単一の蛋白質が存在することも多い。ま
た、遊離状態で存在する任意の物質の量は生体液中に存
在するその物質の総量に対して極めて小さな割合を占め
るに過ぎないが、一般にその物質の総量もしくは結合状
態で存在するその物質の量よりも臨床上意味がある。し
かしながら、遊離状態で存在する物質の量およびその物
質の総量の双方を生体液中において知ることが望まれた
り、必要とされたつづる場合もある。
上記の配達に適合する例として最も良く研究されたもの
は甲状腺ホルモン、例えばチロキシンおよび３，５．３
＝−トリョードチロニンである。
ヒ［・血清中において約９９．９７％のチロキシンおよ
び９９．７％の３．５．３−一トリョードチロニンが内
因性血清蛋白質、特にチロキシン結合グロブリン（ＴＢ
Ｇ＞に結合している。
便宜上、以下の説明は甲状腺ホルモンに対して行なう。
しかしながら、このような説明は本発明の精神および範
囲をいかなる流儀においても制限するものと考えられる
べきではない。
ヒト血清中におりる遊離チロキシンもしくは３゜５．３
’−−トリヨードチロキシンの間は一般的にｎｇ／ｄ９
Ｊの１１度で表わされ、平衡透析法がこの量を測定する
ための古曲的な方法となっている。
この方法は正確であるが時間がかかり、臨床研究室、病
院もしくはこれらに類似した設備におけるルーチン試験
には適していない。
したがって、当然ながら従来技術において平衡透析固有
の欠点を克服しようとする試みがなされてきた。このよ
うな試みの１つである米国特許第４．０４６，８７０号
には血清試料中の遊離甲状腺ホルモンｍ度を測定するた
めの方法が記載されており、この方法は阻止剤の存在下
および不在下において各甲状腺ホルモンに対する免疫検
定法によって試料を分析して甲状腺ホルモン結合の差を
明確化し、次いで各遊離甲状腺ホルモン濃度と結合の差
との関係を示す標準曲線に得られた差を相関させること
からなるものである。典型的な阻止剤は濃度２．５Ｒｇ
／ｍｌ、のチオメルサル（ｔｈｉｏｍｅｒｓａｌ）であ
る。
当業者に認識されるように阻止剤存在下で行なわれる免
疫検定の結果は適当な投与量反応曲線すなわち標準曲線
の使用によって総甲状腺ボルモンＳ度と相関させること
ができる。したがって、この方法は遊離甲状腺ホルモン
濃度および総甲状腺濃度の双方を知ることが必要である
場合もしくは望まれる場合に特に有利である。しかしな
がら、この方法においてはＭ離甲状腺ホルモン濃度のみ
が所望される場合にも２つの独立した測定が必要となる
。したがって、このような方法は遊離甲状腺ホルモン測
定に１回の測定しか要求されないような方法よりも好ま
しくないど考えられることが多い。
このような単一測定検定（いわゆる単一段階遊離配位子
免疫検定）はミツシリ−（Ｍｉｄｇｌｅｙ）およびウィ
ルキンス（Ｗｉｌｋｉｎｓ）の米国特許第４，３６６．
１４３号に代表される。ここで開示された方法は分析す
べき生体液試料中に存在する天然結合剤と実質的に反応
しない標識化した配位子誘導体を用いるものである。
内因性結合蛋白質と実質的に反応しない標識化した配位
子という概念はヒト血清中の遊離甲状腺ホルモンを測定
するために市販されている少なくとも３つのキットの基
本となっている。また、米国特許第４，４１０，６３３
号にもこの概念が記載されている。
実質的に非反応性である標識化した配位子誘導体も実際
には少なくともいくつかの内因性血清蛋白質に結合する
。さらに、市販キットの多くにおいてはウシ血清アルブ
ミンを反応媒体に添加することが要求されるが、恐らく
は標識化したチロキシン誘導体が少なくとも部分的にこ
の添加されたアルブミンに結合するためにこのアルブミ
ンが遊離チロキシンの値に影響を与えることもある。こ
のような現象は例えばアミノ（Ａｍｉｎｏ）等、ＣＩ　
ｉ　ｎ、Ｃｈｅｍ、　、２９．３２１　（１９８３）；
ストツキット（Ｓｔｏｃｋ　ｉ　ｇｔ）等、７）Ｌｔベ
ルチーニ（Ａｌｂｅｒｔｉｎｉ）およびイーキンズ（Ｅ
ｋ　ｉ　ｎｓ）編、「血中の遊離ホルモン（“Ｆｒｅｅ
　）−１ｏｒｍｏｎｅｓ　Ｉｎ　Ｂｌ。
ｏｄ’“）」、エルスピアバイオメディカルプレス（Ｅ
Ｉｓｅｖｉｅｒ　Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ　Ｐｒｅｓｓ、
Ａｍ５ｔｅｒｄａｒｎ）、１９８２、Ｐ、２２３；ヘレ
ニウス（Ｉ−１ｅ　Ｉ　ｅｎ　ｉ　ＬＪＳ）およびリー
ベンダール（Ｌ　ｉ　ｅｗｅｎｄａｈ　ｌ　）、ＣＩ　
ｉｎ、Ｃｈｅｍｌ、２９．８１６（１９８３）；ハイフ
ィールド（Ｂｙｆｉｅｌｄ）等、Ｃｌ１ｎ、Ｅｎｄｒｏ
ｃｌ　１ｎｏ１．　．１９．２７７（１９８３）；およ
びストツキット等、Ｃｌ１ｎ。
Ｃｈｅｍ、　、２９．１４０８　（１９８３）に記載さ
れている。
上述の単一段階遊離チロキシン免疫検定において使用さ
れる標識化したチロキシン誘導体の少なくとも部分的な
結合は血清試料の組成が患者間においてほぼ一定であれ
ば問題とはならない。しかしながら、上述の文献の一部
に示されるようにこのような可能性はない。
血清蛋白質の濃度および組成には遊離チロキシン測定値
を誤って上昇させるような異常の生ずることがある。す
なわち、ヂロキシン抗体（増加したＩｇＧ）を有し、か
つ血清アルブミンもしくはプレアルブミンの値が変化し
ている患者に由来する試料に対する単一段階遊離チロキ
シン検定においては正常値を超える遊離チロキシン値が
示される。このような正常値を超える遊離チロギシン値
は標識化したチロキシン誘導体のＩｏＧ、アル１ミン、
もしくはプレアルブミンに対する結合が増加する一方で
検定用の特定の結合剤、例えば抗チロキシン抗体に対す
る結合がより低いカウント率に低下することに起因する
ものである。
一方、例えばアスピリン、ジフェニルヒダントイン、フ
ェニルブタシン等、ある種の干渉性化合物を含有する患
者の試料においては予想より低い遊離チロキシン値が得
られる。このような干渉性化合物は阻止剤として働き（
例えばＣｈｏｐｒａの米国特許第３．９１１，０９６号
を参照）、外因性ウシ血清アルブミンおよび／もしくは
内因性結合蛋白質から標識化したチロキシン誘導体を遊
離させる。遊離された誘導体は検定に用いられる特定の
結合剤に対して結合可能となる。この結果、カウント率
がより高くなり、したがってチロキサンチン値がより低
くなる。この結果、臨床的には、ある種の薬物を服用し
ている正常な患者を甲状腺機能減退症もしくは甲状腺機
能減退症に近い症状であると誤診することになる。
（発明の解決しようとする問題点） したがって、本発明は遊離状態および結合状態の配位子
を含有する液体試料中におりる遊離配位子を測定するた
めの改良された方法を提供することをその目的とするも
のである。
また、本発明は遊離状態および結合状態の配位子を含有
する液体試料中におけるＭ＠配位子を測定するための改
良された方法であって、従来技術の方法よりも診断上特
異的であり、かつ甲状腺機能減退症領域内の偽陽性が少
ない方法を提供することをその目的とするものである。
また、本発明は改良された単一段階遊離配位子免疫検定
法を提供することをその目的とするものである。
また、本発明は従来技術の単一段階遊離配位子免疫検定
法よりも診断上特異的であり、かつ甲状腺機能減退症領
域内の偽陽性が少ない単一段階遊離配位子免疫検定法を
提供することをその目的とづるものである。
これらおよび他の目的は本明細書および特許請求の範囲
を考慮することによって当業者にとって容易に明らかと
なろう。
（問題点を解決するＩこめの手段） 本発明は遊離状態および結合状態の配位子を含有する液
体試料中における遊離配位子の濃度を測定する方法であ
って、以下の工程： Ａ、特異的な内因性配位子結合蛋白質には有意に結合せ
ず他の蛋白質には有意に結合する標識化した配位子もし
くは標識化した配位子誘導体と、この標識化した配位子
もしくは標識化した配位子誘導体に対して特異的な結合
剤とを前記液体試料に添加する工程； Ｂ、前記■稈Ａで得た混合物をインキュベートする工程
； Ｃ６前記特異的な結合剤に結合した前記標識化した配位
子もしくは標識化した配位子誘導体のωを測定する工程
；および り、前記測定の結果を用いて前記液体試料中の遊離配位
子濃度を算出する工程からなり、工程Ａにおいて結合配
位子を有意に遊離することなく前記標識化した配位子も
しくは標識化した配位子誘導体の内因性および／もしく
は外因性配位子結合蛋白質に対する有意な結合を妨げる
に充分な量の阻止剤を前記試料に添加することを特徴と
する方法である。
より好ましい実施態様において配位子はチロキシンもし
くは３，５．３＝−トリョードチロニン等の甲状腺ホル
モンである。
もう１つのより好ましい実施態様において前記特異的な
結合剤は水不溶性担体上に固定されており、この水不溶
性担体は微粒子状とすることができ、さらに常磁性とす
ることもできる。
本発明において１内因性配位子結合蛋白質（ｅｎｄｏｇ
ｅｎｏｕｓ　ｌｉｇａｎｄ　ｂｉｎｄｉｒｌｇ　ｐｒｏ
ｔｅｉｎｓ）Ｊという語は任意の生体試料中に天然に存
在する配位子結合蛋白質を含むものである。
［外因性配位子結合蛋白質（ｅ　ｘ　ｏ　ｇ　ｅ　ｎ　
ＯＬｌｓ　ｌｉｇａｎｄ　ｂｉｎｄｉｎｇ　ｐｒｏｔｅ
ｉ　ｎ５）Ｊという語は試料調製中もしくは検定操作中
に添加される蛋白質であって、標識化した配位子もしく
は標識化した配位子誘導体と少なくとも部分的に結合可
能なものを含むものである。例えば、多くの遊離チロキ
シン検定操作においては試料に対してウシ血清アルブミ
ンを添加することが要求される。一般に、このようなウ
シ血清アルブミンは検定に用いられる標識化したチロキ
シンもしくは標識化したチロキシン誘導体と少なくとも
部分的に結合可能である。したがって、このような外因
性配位子結合蛋白質は標識化した配位子もしくは標識化
した配位子誘導体に対するその親和性において内因性配
位子結合蛋白質に類似している。
［特異的な内因性配位子結合蛋白質（ｓｐ、ｅｃｉｆｉ
ｃ　ｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓ　ｌｉｇａｎｄｂｉｎｄｉｎ
ｇ　ｐｒｏｔｅｉｎ）Ｊとは配位子を結合する主因とな
る内因性蛋白質を意味する。
特異的な内因性配位子結合蛋白質とは例えばチロキシン
結合グロブリン（ＴＢＧ）である。
一般に阻止剤は標識化した配位子の内因性および／もし
くは外因性配位子結合蛋白質に対する有意な結合を妨げ
ることのできるいかなる化合物であってもよい。これら
は前述の米国特許第３，９１１．０９６号に記載されて
いる。適当な阻止剤には例えば８−アニソロー１−ナフ
タレンスルフォン酸、３−（４−アニリロー１−ナノチ
ルアゾ）−２，７−ナツタレンジスルフォン酸、２，４
゜６−ドリニトロベンゼンスルフＡン酸、α−ナフタレ
ンスルフォン酸、エチル水銀チオサリチル酸ナトリウム
（チオメルサル）、サリチル酸すトリウム、フェニトイ
ン（ジフェニルヒダントインもしくは５．５−ジフェニ
ル−２，４−イミダゾリジンジオン）、ドキセピン（ｄ
ｏｘｅｐ　ｉ　ｎ）、ジアチパム（ｄ　ｉ　ａｚａｐａ
ｍ）、プロクロルペラジン（ｐｒｏｃｈｌｏｒ−ｐｅｒ
ａｚｉｎｅ）、ノ１ニルブタシン、プロピルチオウラシ
ル、メチマゾール（ｍｅｌ　ｈ　ｉｍａＺｏ　ｌ　ｅ）
等が含まれる。より好ましい阻止剤にはフェントインお
よびサリチル酸ナトリウムが含まれる。
阻止剤は結合配位子を有意に遊離することなく、標識化
した配位子もしくは標識化した配位子誘導体の内因性お
よび／もしくは外因性配位子結合蛋白質に対する有意な
結合を妨げるに充分な四を使用する。このような間は特
に阻止剤および標識化した配位子もしくは標識化した配
位子誘導体によって変化する。しかしながら、当業者は
不要な実験を行なうことなく容易にこのような量を決定
することができる。
明らかにこのような量は総配位子検定において通常用い
られる俳よりは有意に少ないものとなる。
例えば米国特許第３．９１１，０９６号において用いら
れた阻止剤の量は血清２５μ見に対して５０μｇ〜１０
ｍｇであり、この量は３．Ｏｎｇ〜２０ｎｇを超える量
のＴＡＧ由来のチロキシンを置換した。ヒト血清は通常
１ｄ９．あたり約１２．５ｎｏ未満のチロキシンを含有
しており、この司は試料２５μ見あたり約３．１ｎｏに
対応する。恐らくα−ナフタレンスルフＡン酸を除く全
ての閉止剤は少なくとも３゜１ｎｇのｌ’　Ｂ　Ｇ由来
チロキシンを遊離する量で用いられた。
本実施例より明らかなようにザリヂル酸ナトリラムはト
レーサー溶液中において０．３７５ｇ／免の濃度で遊離
チロキシンラジオイムノアッセイに好ましく使用された
。使用したトレーサー溶液の量は２００μ免てあり、試
料のサイズは５０μ免であったため、試料２５μ免あた
りのサリチル酸ナトリウム量は３７．５μグであった。
しかしながら、米国特許第３，９１１．０９６号におい
てサリチル酸ナトリウムは試料２５μ免あたり１０ｍｑ
のレベルで試験されており、本実施例に使用されたレベ
ルの２６７倍も多いものとなっている。
（発明の効果） 本発明は上述のような阻止剤の使用によって、（１）結
合配位子を内因性配位子結合蛋白質から遊離するという
公知の阻止剤の機能および（２）少なくともいくつかの
場合においては阻止剤の主要な効果は特異的な配位子結
合蛋白質上に及ぼされるという事実（米国特許第４，０
４６，８７０号参照）に鑑みで予悲できない驚くべき効
果をもたらすものである。
当業者にとって明らかなように、本発明の方法は使用さ
れる特定の薬物に関係なく、試料中に存在プる結合蛋白
質と実質的に非反応性の標識化した配位子もしくは標識
化した配位子誘導体を用いるいかなる単一段階遊離配位
子免疫検定法においても有用なものである。
（実　施　例） 本発明を以下の実施例によって詳細に説明するが、これ
らは本発明の精神もしくは範囲を制限するものではない
。
実　施　例１ コーニングＴ　Ｍ　Ｍ　ＯＰ　ＨＡ　Ｓ　ＥＴＭシング
ルステップＦＴ＆［”ゞＩ］ラジオイムノアッセイキツ
ｔ−（Ｃｏｒｎｉｎｇ　Ｍｅｄｉｃａｌ、Ｃｏｒｎｉｎ
ｇ　Ｇｌａｓｓ　Ｗｏｒｋｓ、ＭｅｄｆｉｅＩｄ　Ｍａ
ｓｓａｃｈｕｓｅｔｔｓ）を使用した。
その製造者が推める手法を用いた。キットに付属した３
つの遊離チロキシン標準品およびチロキシン抗体試薬を
変化させることなく使用した。阻止剤不在下で行なった
検定においてはキットに付属したトレーサー試薬も変化
させることなく使用した。本発明により、阻止剤の存在
下で行なった検定においては０．３７５＃Ｉｙ／ｍ９Ｊ
に対応する０゜３７５ｇ／９Ｊのレベルとなるようにサ
リチル酸ナトリウムをキットのトレーサー試薬に添加し
た。
以下の表■および■は正常は母集団において得た臨床デ
ータを要約するものである。
表　工 正常母集団 ８６５７　１．３　０．０４　０．５１８８２９　０．
１１　０．６４ ｇ６５４　２．５　０．４３　１．１５８６３５　１．
１　０．５４　０．９１ｇ６３０　０．８　０．５９　
０，８８８５５３　１．７　０．６１　０．６３巣二Ｉ
ａ」シＦ工、Ｉｔ ８６７３　１．０　０，７３　０，４６８６０４　１．
０　０．７９　０．９３ｇ５６５　１，４　０．８０　
１，１６８６５８　１．０　０．８６　０．８８Ｂ５３
６　１．９　０．８９　１，２０８５５７　１．０　０
，８９　１，１０８６３１　０．８　０．９０　１，１
５８５３１　１．３　０．９１　１，２４８５７６　１
．５　０．９１　０．９３Ｂ５７４　１．３　０．９１
　１，０７８６８７　１．５　０．９２　１．２８８５
５４　１．４　０，９３　１，０７８６３３　１．２　
０．９４　１．２７８６３２　０．６　０，９７　１．
３５Ｂ０８４　１．４　０．９８　０．９３８６２８　
０．９　０．９８　１．１４８５２９　１．２　０．９
９　１．０４単一段階　ＦＴ　定 ８５４７　１．１　１，００　１．１２８Ｇ４７　０．
８　１．０２　０．９７８５４５　１．０　１．０４　
０，８９８６５９　０．８　１，０４　１，１７ｇ５９
４　１．２　１，０７　０．９５８６５５　１．５　１
，０８　１．１１８５３３　１、．０　１，０９　１．
１６８８０５　１．１３　１，２７ ８６７５　１．１　１．１７　１．２３８５７９　１．
１　１．１８　１．２７８６２９　１．２　１．１８　
１．３０８６９４　１．４　１，２０　１．１４ｇ７８
７　１，２０　１．２０ ８６８８　１．２　１．２０　１．００８５５９　１．
８　１．２１　１．４７８８１１　１．２３　１．５０ ８５９７　１．９　１．２５　２．００巣二ｉｉ−比重
Ｊ 患　者　ＦＴ４　サリチル酸　サリチル酸８７８９　１
．２５　１．４１ ８５６７　１．４　１．２５　１．１６８５５６　１．
６　１，２５　１．５９ｇ５２６　１．０　１．２６　
１．４０８６４０　１．９　１．２６　１．３２８５８
７　１．５　１，２８　１．２５８５４１　１．２　１
．２８　１．２４８５７３　１．４　１，２８１．５５ ８７９７　１．２８　１．４１ ８６３８　１．１　１．３１　１．１４８５３４　１．
２　１．３２　１．３７８５４８　１．０　１．３２　
１．１２８５７８　１．１　１．３２　、１．５７８５
９３　１．５　１　、３５　１．３０８５３７　１．０
　１，３６　１，６０８７９２　１．３７　１，１７ ８８１７　１．３８　１．４３ 態二１９１１１４Ｆ工ＬＪＬ」Ｌ ８６７２　１．０　１，３９　１．４２８６１５　１．
３　１，３９　１．’３０８８０９　１．３９　１．６
２ ８６０１　１．３　１，４１　１．３２８６０６　１．
６　１．４１　１．３５８７０１　１．３　１，４１　
１，４３８６２１　１．５’　１．４４　１．６５８５
６２　１．３　１，４４　１．４０８５３９　１．５　
１，４５　１，７６８６４１　１．４６　１，６０ ８６６０　１．０　１．４６　１．１８８６９８　１．
４　１，４７　１．４１８８１８　１．４８　１．３５ ８５４２　１．２　１，４９　１．４０８８０４　１．
５０　１．６１ ８５４９　１．８　１，５１　１．４３８６１７　１．
５　１，５１　１．４０Ｉ１１一段１’ｉ’ｉＦ’ｒ　
検　定 ８６７８　１、　？　１．５３　１，４０８６２４　１
．４　１，５３　１．３５８５５１　１．０　１，５３
　１，２２８７９０　１．５４　１．３２ ８５４４　１、！ｉ　１．５４　１，４７８６１２　１
．８　１．５５　１．５２８８０１　１．５９　１．６
０ ８５４６　１．３　１，６１　１．３０８５９ｇ　１，
６　１，６１　１．３３８８１４　１．６２　１．５５ ８６９２Ｌ３　１．６２　１，２３ ８５８１　１．０　１．６３　１．５３８６９５　１．
８　１．６４　１，８５８５５０　１．５　１．６４　
１．４３８５３０　１．３　１，６４　１．６５ｇ６５
２　１．１　１．６５　１．１５８６９３　１．０　１
．６６　１．４０単一段階　Ｆ　’Ｔ４−検　定 ８６６ｇ　１．３　１．６７　１，６０８５４０　１．
５　１．６７　１，７０８Ｇ３７　１．０　１．６７　
１．４５８７９８　１．６８　１，５０ ８６０７　１．５　１．６＋３　１．４８８５９６　１
．８　１，６９　１，８５８６８５　０．９　１．７０
　１，９４８５２７　１．５　１，７０　１．９７８８
０６　１．７１　１，８０ ８６３９　１．３　１，７１　１，４５８５６３　１　
、３　１　、７３　１　、７５８６０３　１．４　１，
７３　１．５２８５８８　２．２　１．７４　１．７０
８５９９　１．７　１，７５　１．３７８６０５　１．
８　１，７５　１，８５８８００　１．７５　１．５２ ８５９２　１．２　１．７６　１．５６単一段階　ＦＴ
　検　定 ８８２１　１．７６　１，５０ ８６４２　１．２　１．７７　１．７５８６００　１．
７　１．７７　１．９５ｇ８１０　１，７８　１．７５ ８７００　１．１　１，７９　１，４０８５７５　２．
５　１．８０　２．００　・８６１１　１．８　１．８
１　１．４５８８０ｇ　１　、８３　２　；　００ ８５８１　１．８　１，８４　１．５８８８１６　１．
８４　１．７５ ８８１５　１．８５　１．８０ ８６７７　１．２　１，８５　１．６０８７９４　１．
８６　１，６３ ８６４９　１．６　１．８６　’　１，７２８７９１　
１．８７　１．７２ ８５２８　１．４　１．９１　１．８７８５６４　１．
５　１．９’２　１．８０単一段階　Ｆ　Ｔ　検　定 ８５９１　１．６　１．９４　１，３０ａｓ５ｓ　１，
９　１．９５　２．２０８８２０　−　１，９５　２，
４８ ８８１９　１．９６　１．９０ ８６８９　１．０　１．９７　１，６５８８０２　１　
、９８　１．７８ ８７９Ｂ　１．９８　、１．１３５ ８６９９　１．０　１，９９　１，５０８７９３　２．
０　１．５８ ８７８８　２．０３　２．００ ８６０８　２．０　２，１０　１，９４８６０２　１．
７　２，１２　２，１０８６９１　１．３　２，１７　
１，７８８５７０　２．０　２．１Ｂ　２．５３８８０
７　２．２１　２，３０ ８７９５　２．２５　２．２０ ８Ｂ２２　２．２８　２．３３ 敷二ＪＲＩＭ　Ｆ工（Ｊし」し ８６６１　０．９　２．３１　２，０５８７９９　２．
３２　２，２０ ８７８５　２．３３　２．３３ ８５６９　２．３　２．３４　２．２０８６２５　１．
５　２，３４　１，８５８６５１　２．３６　１．８０ ８８０３　２．３６　１．８７ ８６２３　１．８　２，４２　１．８３８６５０　１．
６　２，４９　２．４０８６１３　２．３　２，４９　
２．３０８６７９　１．４　２．６４　２．５２″ｍｌ
／ｄ見（平衡透析による） １′ｎｇ／ｄＱ。
表■に示したデータは（１）平衡透析による分析をも行
なった試料および（２）全試料の２群として統計分析を
行なった。この統計分析値を表■に示す。
表　■ ← 第１δＦ（１１５試料） 単一段階　ＦＴ　検　定 ＦＴ＋　サリチル酸　サリチル酸 Ｅ、Ｄ、無　添　加　添　開 平　均　１，３８　１．４５　１．４４±Ｉ　Ｓ　Ｄ　
０．３７　０．４７　０．３９±２３　Ｄ　Ｏ’、７４
　０．９４　０．７８第２群（１５３試料） 平　均　１．５３　１．５０ ±Ｉ　Ｓ　Ｄ　Ｏ，４７Ｑ、４０ ±２　Ｓ　Ｄ　Ｏ，９４０，８０ ａ　全ての値はｎｃｌ／ｄ９Ｊで表示した。
ｂ　平衡透析による分析をも行なった試料。
Ｃ表工に表示した全試料。
正常な個体に関する検定はほぼ同一の平均値をを基準と
すれば、サリチル酸の使用はいくらかより正確な検定を
もたらりものといえる。
実施例２ 異常患者母集団の試料を用いて実施例１の手法を行なっ
た。このデータを表■〜Ｘ■に要約する。
表　ＩＩＩ 異常患者母集団 １　０．１０　０．８３　３１１．０ ２　０．２０　０．８３　４Ｂ４．０ ３　０．２０　０，６４　４１７．５ ４　０．２７　０．７３　５２，７ ５　０．３１　０．８９　３４４．０ ６　０．４５　０．９１　２７２．０ ７　０．５０　０．５８　１４８．０ 単−ｇ！階　「］−検　定 試　料　サリチル酸　サリチル酸　命中サリチル酸８　
０．５２　０，８８　’１７．８ ９　０．５９　０，５３　１４４．０ １０　０．６０　０，９５　１０１，０１１０．６０　
０，８２　９７，８ １２　．０．６２　１，０５　２７４，０１３　０．６
６　１．１８　４３．９ １４’　０．７３　０．９８　５８．２１５　０．７５
　１，０５　１０８，０１６　０．８０　１．０５　１
３２．０１７　０．８２　１．００　＜　２５．０１８
　０．８６　Ｔ、２０　１７１．０１９　０．８６　１
，１９　１１８．０２０　０．８６　０．９２　３５．
６ ２１　０．９’ｌ　１．４０　８８．３２２　１．０１
　１，３３　＜　２５．０２３　１．０８　１，１３　
８７．０ 単一段階　Ｆ　Ｔ　検　定 試　料　サリチル酸　サリチル酸　血中４７１ノチル酸
２５　１．２９　１．１５　＜　２５．０２６　２．３
　１．７８　＜　２５．０ｎｇ／ｄＱ。
ｋ）ｕｇ／ｒｒ１ 表　ｉＶ 異常患者母集団 患　者　サリチル酸　サリチル酸 ８８９９　０　０ ８９０５　０．０５　０ ９９８３　０、１８　０．１８ ９９８６　、　０．１Ｂ　０．１８ ９９７８　０．１９　０，１８ ０　２０　０．１８ 単−階　ＦＴ　検　定 ９９４０　０．２９　’　０．３８ ９９９１　０．３１　０．２５ ９９８０　０．３９　０，４０ ９９８７　０．４６　０，２０ ９９７６　０．４６　０．５１ ９９８４　０．４７　０．３６ ８８４６　０．４７　０．４５ ８８４８　０．５１　０．５１ ９９８２　０．５２　０．４７ ９９８１　０．５５　０，３５ ９９７９　０．５９　０，４５ ８８９８　０．６０　０．５０ ９９９２　０．７０　０，６９ ９９７７　０．８３　０．９０ ９９８５　０．９７　０．４７ ９９８８　１．０ｇ　０．７９ ＆ｎ　ｇ／ｄ　Ｒ 表　Ｖ 異常患者母集団 ８８９２　２．２２　２．２５ ８８５４　３．７２　３，８２ ８８７５　４．２９　４．０５ ８８９４　４．９６　４．３ ８Ｂ９５　４．７６　４，３ ８８７６　６．３２　６，２ ８８５０　６．４　６，４ ８８９１　６．４　６．４ αｎｇ／ｄ免 表　ＶＩ 異常患者母集団 息　者　サリチル酸　サリチル酸 ９９４５　０．１９　０，４１ ９９５０　０．６２　０．９７ ９９４０　０．６３　０．７７ ９９４２　０．６４　０．７４ ９９４ｇ　０．７５　０．６５ ９９４６　０．８１　０．６８ ９９４４　０．８２　０．７５ ９９４９　１．０３　１，００ ９９４７　１．０６　１，０８ ９９４１　１．０７　１．１５ ９９４３　１．１５　１．２０ へ ｎ　ｑ／ｄ　９゜ 表　ＶＩＩ 異常患者母集団 患　者　サリチル酸　サリチル酸 ９３２８　０．５２　０，４０ ９３３７　０．５９　０．５３ ９３２９　０．４９　０．８４ ９３２６　０．６４　０，９２ ９３３２　０、７１　０．７２ ９３４２　０、７８　０゜７６ ９３２５　０．８９　０．９２ ９３３４　０．９３　０．５４ ９３３９　１．０１　１．２７ ９３４０　１．０８　１，０８ ９３２４　１．１２　１．２２ ９３３８　１．１３　０．８６ ９３３３　１．３７　０．９４ 単一段階　ＦＴ　検　定 患　者　サリチル酸　サリチル酸 ９３３０　１．４４　１．２５ ９３４１　１．８８　１．６０ ９３３６　２．０１　１，１７ 久ｎ　Ｇ／ｄ　９゜ 表−ヱ」」」− 異常患者母集団 患　者　サリチル酸　サリチル酸 １、Ｄ、Ｎｏ、　無　添　加　添　加 ８８５１　０．９１　０．８９ ８８８０　１．４０　１．２５ ８８８１　１．６０　丁′、３５ ８８５２　１．６２　１．３５ ８８８５　１．６５　１．４０ 単一段階　ＦＴ　検　定 忠　者　サリチル酸　サリチル酸 ８ｇ８６　１．７２　１．６０ ８８８４　１．７５　１，４８ ８８７８　１．７７　１．４５ ８８５６　１．８２　１．７４ ｇ８８２　１．８７　１．７０ ８８７９　１．９２　１．５６ ８８５７　２．０３　１．９０ ８８５５　２．１０　１．８３ ８８８３　２．１５　１．７５ 久ｎ　ｇ／ｄ　９゜ 表　ＩＸ 異常患者母集団 患　者　サリチル酸　サリチル酸 ９Ｂ１１　１．０２　１，５３ ９６０３　１．２０　１．１４ ９６０２　１．２５　１．１２ ９６０９　１．５６　１．３０ ９６０７　１．６３　１．３７ ９６１７　１．６４　１．６３ ９６０６　１．６６　１．３５ ９６０１　１．６８　１．５０ ９６１６　１．７３　１．４５ ９６１５　１．７４　１．６４ ９６１０　１．７７　１．５３ ９６１４　１．８２　１．３７ ９６１３　１．９３　１．５２ 単一段階　ＦＴ　検　定 患　者　サリチル酸　サリチル酸 １、Ｄ、Ｎｏ。
□　無　添　加　添　加 ９６００　１．９４　１．６３ ９６１２　１．９７　１．７５ ９６０４　２．０２　１．７８ 異常忠者母集団 妊娠−第２の３力月期 単一段剛−ＬシェＬｉ 息　者　サリチル酸　サリチル酸 １、Ｄ、Ｎｏ、　無　添　加　添　加　“０５９５　１
　、１８　１、．００ ９５８６　１．１８　１．２４ ９５９１　１．２４　１．２３ ９５８３　１．２５　１．２３ 甲一段階　ＦＴ　検　定 店　者　→ノリデル酸　サリチル酸 ９５９９　１．２８　１，１３ ９５８１　１．３６　１．１３ ９５９７　１．４０　１．２５ ９５８４　１．６１　１．５２ ９５９２　１．６５　１，５０ ９５９８　１．６７　１．２５ ９５８７　１．７３　１．６０ ９５９３　．１，７９　１．４５ ９！ｉ８２　１．８８　１．７２ ９５９４　１．９４　１．３２ ９５８９　’　１．９６　１．９３ ９５８８　２．０６　２．０２ ９５８５　’２．１５　２．００ ９５９０　２．１５　１．８５ ９５９６　２．２０　１．１７ ｎ　Ｑ／ｄ　９Ｊ 表　ＸＩ 異常患者母集団 患　者　サリチル′ｒａ　サリチル酸 ９５７３　０．８５　’０．８７ ９５７１　０．８５　０．９６ ９５７９　０．９０　０，９５ ９５６７　０．９８　１．０７ ９５６８　１．０８　１．０７ ９５７０　１．０９　０．９８ ９５６９　１．１０　１．００ ９５７５　１．３０　１．１３ ９５８０　１．６０　１．５５ ９５９６　、　１，６１　１．６８ ９５７２　１．７６　１．７７ ”ｎＧ／ｄ９゜ 表　ＸＩＩ 異常患者母集団 高Ｔ’　Ｂ　Ｇ 単一段階　ド［検　定 患　者　サリチル酸　サリチル酸 ９５７３　０．８５　０．８７ ９５７１　０．８５　０，９６ ９５７９　０．９０　０，９５ ９５６７　０．９８　１．０７ ９６１１　１．０２　１．５３ ９５６８　１．０８　１．０７ ９５８６　１．１８　１．２４ ９６０３　１．２０　１．１４ ９５９１　１　、２４　１　、２３ ９５８３　１．２５　１，２３ ９５９９　１．２８　１．１３ ９５７５　１．３０　１．１３ ９５８１　１．３６　１．１３ 単一段階　ＦＴ　定 ９５９７　１．４０　１．２５ ９５８０　１．６０　１．５５ ９５７Ｇ　１．６１　１，６８ ９５８４　１．６１　１，５２ ９５９２　１．６５　１，５０ ９５９８　１．６７　１，２５ ９６１６　１．７３　１．４５ ９５ｇ７　１，７３　１．６０ ９６１５　１．７４　１，６４ ９５７２　１．７６　１，７７ ９５９３　１．７９　１．４５ ９５８２　１．８８　１．７２ ９６１３　１．９３　１．５２ ９５９４　１．９／ｌ　１．３２ ９５８９　１．９６　１．９３ ９６１２　１．９７　１．７５ ９５８８　２．０６　２．０２ 単一段階　ＦＴ　検　定 患　者　サリチル酸　サリチル酸 ９５９０　２、１５　１．８５ ９５８５　２．１５　２．００ ９５８６　２．２０　１．１７ ’ｎ　ｇ　７　ａ免 表■〜ＸｌＦに包括的に要約された異常患者母集団のい
くつかに対する診断性を向上するサリチル酸の効果は表
Ｘ■から明らかであり、最も顕著な改善はサリチル酸を
投薬した患者に関するものである。
表　ＸＩＩＩ 異常患者母集団 サリチル酸　サリチル酸 無　添　加　添　加 条　件　数　％　数　％ サリチル酸投薬　１１　４２　２２　８５甲状腺機能減
退症　１９　８６　２１　９６甲状腺機能几進症　８　
１００　８　１００甲状腺機能正常疾患　７　６４　６
　５５ジアンチン投薬　１０　６２　１１　６９エスト
ロゲン投薬　１４　１００　ｉａ　ｉｏ。
妊　娠　４７　１００　４７　１００ 高ＴＢＧ　３５　１００　’３５　１００合　計　１５
１　８４　１６４　９２ 実施例３ 甲状腺機能正常疾患の患者に由来する患者試料を用いて
実施例１の手法を行なった。表ｘｒｖｔま患者の診断を
要約するものであり、表Ｘｖ【まトレーサー試薬にサリ
チル酸を添加して、および添加せずに行なった単管遊離
チロキシン検定の結果を要約するものである。
表　Ｘ　ＩＶ 甲状１ｌＩｉｌＩｌＩ能正常疾患 患者の診断 患　者 Ｎｏ　診　断 １　リンパ球リンパ腫 ２　大赤向球性貧血 ３　卒　中 ４　結　核、糖尿病 ５　糖尿病 ６′　胃腸出血 げ　柔組織肉腫 患　者 Ｎｏ　診　断 ８　腎臓癌、脳転移性 ９　僧帽弁説 １０　肺腺腫１敗血症 １１　糖尿病 １２　胃腸出血、潰　瘍 １３　僧帽弁裂傷 １４　心房性細動 １５　気管支拡張症 １６　肺　炎、高面圧症 １７　心房性細動 １８　心筋梗塞症 １９　胃腸出血、貧　血 ２０　肺　炎 ２１　胃腸出血、潰　瘍 ２２　肺　癌 ２３　肺　癌 ２４　急性心筋梗塞症 ２５“　乳　癌 患　者 順　診　断 ２６　心筋梗塞症 ２７　心不全、アテローム性動脈硬化症２８　胃腸出自 ２９６　急性肺塞栓。
リウマチ様関節炎 ３０　喘　息、慢性肺病 ３１　アンギナ ３２　急性膵炎 ３３　急性喘息発作 ３４“　胸　痛 ３５　肺　癌 ３６　急性喘息発作 ３７　リンパ腫 ３８　多発性骨髄腫 ３９　胃腸出血、潰瘍 ４０　アンギナ、大鵬炎 ４１　急性心筋梗塞症 ４２　ＩＩ忘症 患者 Ｎα　診　断 ４３　高面圧症 ４４　低ナトリウム血症、貧血、糖尿病４５　急性心筋
梗塞症 ４６　完全ブロック ４７　心筋梗塞症、基底細胞癌 ４８“　乳　癌 ４９　慢性白血病 ５０　高血圧、貧　血 ５１　慢性肺病 ５２　全身性狼癒 ５３　急性心筋梗塞症 ５４°′　急性糖尿病酸性症 ５５　リンパ球すンパ胛 ５６　欝白性心不全 ５７　肺　癌 ５８　脳血管性障害 ５９　急性白面病 ３甲状腺製剤を投与されている患者 衣　ＸＶ 患　・ 甲状腺機能正常疾患 患者の結果　１４ 単一　階　ＦＴ　検　定　１５ 忠　者　サリチル酸　サリチルａｌｌ　１６１ １１、θ１　１．５９　１ｇ ２　１　、０９　１　、０９　１９ ３　１．３８　１．２４　２゜ ４　０．８４　０．７７　−　２１ ５　１．４４　１．３５　２２ ６”　０．９１　０．９０　２３ ７ｂ１，３８　１．２１　２４ ８　１．６１　１．６９　２５’ ９　０．６９　０，８６　．２６ １０　１．１５　１．４４　２７ １１　１．１９　１．１９　２３ 単一段階　ＦＴ４　定 １　サリチル酸　サリチル酸 １　、６５　１．７８ １　、６２　１　、３８ １．７４　１　、７９ １．２１　１．３７ ０．２１　０，５９ １．５４　１，５３ １．３３　１．４６ １．１２　１．１７ １　、７２　１　、７３ １．５３　１，６０ ０．５５　０．６５ １．３３　１，１４ ０．６７　０．７３ ０．０１　０．５６ １．６５１．６６ 単一段階　ＦＴ　検　定 ３１　０．９４　１．２８ ３２　０．９８　１．１３ ３３　１．３７　１．２９ ３４ト　１，６９　１．５４ ３５　？、１２　１．１２ ３６　１．４０　１．３７ ３７１゜１４　１．０ｇ ３８　１．４５　１．４０ ３９　１．６１　１．５１ ４０　１．３０　１．３２ ４７　１．２４　１．２７ ４２　１．４９　１，３５ ４３　１．４４　１．４５ ４４　２．２５　２，４１ ４５　２．２２　１，９１ ４６　１．０２　ＬＯ６ ４７１，２６，１，１７ 単一段階　Ｆ　−ｒ　検　定 患　者　サリチル酸　サリチル酸 ４８１′１．２５　１．２６ ４９　１．４８　１，３８ ５０　１．８７　１，９０ ５１　０．３７　０．６８ ５２　２．１７　２．７３ ５３　０．６４　１．００ ５４′）１．４０　１．４９ ５５　１．５５　１．６０ ５６　０．９４　１，１４ ５７　０．９０　０．９３ ５８　１．６４　１．４７ ５９　１．１０　．１．１γ αｎｇ／ｄ、Ｑ。
ト甲状腺製剤を投与されている患者 正常域を０．７７−２．４９ｎｇ／ｄ９Ｊとすると、正
常域内に入る麿者数はサリチル酸を用いない場合には５
１であり、サリチル酸を用いた場合には５４であること
が表ｘｖから明らかとなる。
診断精度はサリチル酸を用いない場合には８６％、サリ
チル酸を用いた場合には９２％である。
実施例４ 透析の前後に採取した患者試料について実施例１の手法
を用いた。そのデータを表ＸＶＩおよびＸｖＩに要約丈
る。
表　ＸＶｌ １　８２８２　１、７８　１．５５ ２　８２８Ｇ　０，９３　１．２７ ３　８２８８　０．０　０．４０ ４　８２９０　１．１６　１．２０ ！＋　８２９２　１．３２　１．７５ ６　８２９４　０．７３　０．９６ 単一段階　ＦＴ　検　定 ７　８２９６　１．２８　１．７５ ８　８２９８　’　１．１１　１．１２αｎ　ｇ／ｄ　
９゜ サリチル酸を用いない検定および用いた検定において正
常域内にある患者の数はそれぞれ６Ｊブよび７であり、
＃断精度はそ机ぞれ７５％および８７．５％である。
表　ＸＶＩＩ 患　者　１．Ｄ、　サリチル酸　サリチル酸ＮｏＮ０　
無　添　加　添　加 １　８２８３　０．６ｉ　０．８７ ２　８２Ｂ７　０．２３　０．９６ ３、　８２８９　０．１３　０．４８ 単一段階　Ｆ１牛検　定 患　者　１．Ｄ、　サリチル酸　サリチル酸Ｎｏ、　Ｎ
ｏ　狐　添　加　添　加 ７１　Ｂ２９１　０．９４　１．０５ ５　８２９３　０．０９　０．７７ ６　８２９５　０．５４　１．２７ ７　８２９７　０．３２　０，８６ ８　８２９９　０．０　０．５９ ％（Ｊ／ｄ９゜ サリチル酸を用いない検定および用いた検定において正
常域内にある患者の数はそれぞれ１および６であり、サ
リチル酸の使用によって有意な改善が得られる。サリチ
ル酸を用いない場合および用いた場合にｄ３Ｇブる診断
精度はそれぞれ１２．５％および７５％である。
前述のように上記の詳細な説明は単に例証的なものであ
り、本発明の精神および範囲を逸脱することなく多くの
変更を行なうことが可能ひある。

Claims (1)

  1. 【特許請求の範囲】 １）　Ｔｉ離状態および結合状態の配位子を含有する液
    体試料中における遊離配位子の濃度を測定する方法であ
    って、以下の工程： Ａ、特異的な内因性配位子結合蛋白質には有意に結合せ
    ず他の蛋白質には有意に結合する標識化した配位子もし
    くは標識化した配位子誘導体と、この標識化した配位子
    もしくは標識化した配位子誘導体に対して特異的な結合
    剤とを前記液体試料に添加する■程： Ｂ、前記工程Ａで得た混合物をインキュベートする工程
    ； Ｃ２前記特異的な結合剤に結合した前記標識化した配位
    子もしくは標識化した配位子誘導体の量を測定する■程
    ：および り、前記測定の結果を用いて前記液体試料中の遊離配位
    子濃度を算出する工程がらなり；前記工程Ａにおいて結
    合配位子を有意に遊離することなく前記標識化した配位
    子もしくは標識化した配位子誘導体の内因性および外因
    性配位子結合蛋白質の少なくとも一方に対する有意な結
    合を妨げるに充分な量の阻止剤を前記試料に添加するこ
    とを特徴とする方法。 （２１前記配位子が甲状腺ホルモンであることを特徴と
    する特許請求の範囲第１項記載の方法。 （３）前記配位子がチロキシンであることを特徴とする
    特許請求の範囲第２項記載の方法。 （４）前記配位子が３．５．３−一トリョードチロニ′
    ンであることを特徴とする特許請求の範囲第２項記載の
    方法。 （５）　前記特異的な結合剤が水不溶性担体上に固定さ
    れていることを特徴とする特許請求の範囲第１項記載の
    方法。 （６）前記水不溶性担体が微粒子状であることを特徴と
    する特許請求の範囲第５項記載の方法。 （７）前記水不溶性担体が常磁性であることを特徴とす
    る特許請求の範囲第６項記載の方法。 （８）　前記特異的な結合剤が抗配位子抗体であること
    を特徴とする特許請求の範囲第５項記載の方法。 （９）前記配位子が甲状腺ホルモンであることを特徴と
    する特許請求の範囲第８項記載の方法。 （１０）　前記配位子がチロキシンであることを特徴と
    する特許請求の範囲第９項記載の方法。 （１１）　前記配位子が３．５．３＝−ｉ−リョードチ
    ロニンであることを特徴とする特許請求の範囲第９項記
    載の方法。 （１２）　遊離状態および結合状態の配位子を含有する
    液体試料中における遊離配位子の′ｌｌＡ度を測定覆る
    方法であって、以下の工程： Ａ、特異的な内因性配位子結合蛋白質には有意に結合せ
    ず他の蛋白質には有意に結合づる標識化した配位子もし
    くは標識化した配位子誘導体と、この標識化した配位子
    もしくは標識化した配位子誘導体に対して特異的であっ
    て水不溶性担体に固定化された結合剤とを前記液体試料
    に添加する工程； Ｂ、前記工程Ａで得た混合物をインキュベートする工程
    ： Ｃ，インキュベートした混合物を配位子および標識化し
    た配位子もしくはｅ！識化した配位子誘導体に結合した
    固定化された特異的な結合剤からなる固相と液相とに分
    離する工程； Ｄ、前記同相もしくは液相のいずれかに存在覆る標識化
    した配位子もしくは標識化した配位子誘導体の量を測定
    する工程：および Ｅ、前記工程りにおいて得た測定値を、既知濃度の遊離
    配位子を含有する試料から調製した投与量−反応曲線と
    比較して前記液体試料中の遊離配位子濃度を算出する工
    程からなり；前記工程Ａにおいて結合配位子を有意に遊
    離することなく前記標識化した配位子もしくは標識化し
    た配位子誘導体の内因性および外因性配位子結合蛋白質
    の少なくとも一方に対する有意な結合を妨げるに充分な
    量の阻止剤を前記試料に添加することを特徴とする方法
    。 （１３）　前記配位子が甲状腺ホルモンであることを特
    徴とする特許請求の範囲第１２項記載の方法。 （１４）　前記配位子がチロキシンであることを特徴と
    する特許請求の範囲第１３項記載の方法。 （１５）　前記配位子が３．５．３′−１−リョードチ
    ロニンであることを特徴とする特許請求の範囲第１３項
    記載の方法。 （１６）　前記特異的な結合剤が抗配位子抗体であるこ
    とを特徴とする特許請求の範囲第１３項〜第１５項のい
    ずれか１項に記載の方法。 （１７）　前記水不溶性担体が微粒子状であることを特
    徴とする特許請求の範囲第１２項記載の方法。 （１８）　前記水不溶性担体が常磁性であることを特徴
    とする特許請求の範囲第１７項記載の方法。
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