JPS60209176A - ロイコ色素を用いる定量方法 - Google Patents
ロイコ色素を用いる定量方法Info
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- JPS60209176A JPS60209176A JP59065629A JP6562984A JPS60209176A JP S60209176 A JPS60209176 A JP S60209176A JP 59065629 A JP59065629 A JP 59065629A JP 6562984 A JP6562984 A JP 6562984A JP S60209176 A JPS60209176 A JP S60209176A
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- C09B11/10—Amino derivatives of triarylmethanes
- C09B11/12—Amino derivatives of triarylmethanes without any OH group bound to an aryl nucleus
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、トリフェニルメタン系ロイコ・色素ヲ発色剤
として用いる体液成分の定量に於ける、呈色妨害物質の
影響回避方法に関する。
として用いる体液成分の定量に於ける、呈色妨害物質の
影響回避方法に関する。
トリフェニルメタン系ロイコ色素は酸化発色し・た際の
呈色波長が５ＱＱｎｍ以上と長波長側にあシ、分子吸光
係数も５万以上と大きく、しかも呈色後の経時的退色が
殆どないなど、従来の被酸化性呈色試薬と比べて優れた
長所を有している為、微量の酸化性物質例えば過酸化水
素の定量や、ペルオキシダーゼ様物質の定量などへの応
用が試みられている。例えば、Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ
ＣｈｅｍｉｓｔｒｙＶｏｌ、 ４２． ｐ、４１０−４
１１（１９７０）には、ロイコクリスタルバイオレット
（ＬＣＶ ）とペルオキシダーゼ（ＰＯＤ）の組合せ試
薬を用いてＨ２Ｏ２を定量できることが報告されておシ
、又、Ｃ１ｉｎｉｃａｌＣｈｅｍｉｓｔｒｙ Ｖｏｌ、
２１．ｐ、３６２−３６９（１９７５） には、ロイ
コマラカイトグリーン（１，ＭＱ ）とＨｚＯｚ ２用
いてヘモグロビンやその他のヘム化合物の定量を試みた
結果が報告されている。しかしながら、前者に於けるＨ
２Ｏ２の定量は単なる一般的なＨ２Ｏ２の定量であって
、体液成分の定量に於て酵素反応によシ生成するＨ２Ｏ
２の定量に関しては全く触れられていないし、又、後者
に於ては、試料中のタンパクの影響を受け、検量線の直
線性に乏しいことが報告されている。更に、特開昭５６
’−２６１９９号公報には、トリフェニルメタン系ロイ
コ色素でアルａ ヒス（ｐ’−ジエチルアミノフェニル
）−２−スルホフェニルメタン（以下、ＢＳＰＭと略称
する。）を用いる° 血清、尿などの中に含有されてい
る微量成分の定量法°が開示されているが、本発明者ら
の追試によれば、血清について同明細書に記載されてい
るような定量性は全く得られなかった。即ち、体液成分
の定量等の臨床化学分析の分野に於ては、トリフェニル
メタン系ロイコ色素は未だ実用化に到っていないという
のが実状である。
呈色波長が５ＱＱｎｍ以上と長波長側にあシ、分子吸光
係数も５万以上と大きく、しかも呈色後の経時的退色が
殆どないなど、従来の被酸化性呈色試薬と比べて優れた
長所を有している為、微量の酸化性物質例えば過酸化水
素の定量や、ペルオキシダーゼ様物質の定量などへの応
用が試みられている。例えば、Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ
ＣｈｅｍｉｓｔｒｙＶｏｌ、 ４２． ｐ、４１０−４
１１（１９７０）には、ロイコクリスタルバイオレット
（ＬＣＶ ）とペルオキシダーゼ（ＰＯＤ）の組合せ試
薬を用いてＨ２Ｏ２を定量できることが報告されておシ
、又、Ｃ１ｉｎｉｃａｌＣｈｅｍｉｓｔｒｙ Ｖｏｌ、
２１．ｐ、３６２−３６９（１９７５） には、ロイ
コマラカイトグリーン（１，ＭＱ ）とＨｚＯｚ ２用
いてヘモグロビンやその他のヘム化合物の定量を試みた
結果が報告されている。しかしながら、前者に於けるＨ
２Ｏ２の定量は単なる一般的なＨ２Ｏ２の定量であって
、体液成分の定量に於て酵素反応によシ生成するＨ２Ｏ
２の定量に関しては全く触れられていないし、又、後者
に於ては、試料中のタンパクの影響を受け、検量線の直
線性に乏しいことが報告されている。更に、特開昭５６
’−２６１９９号公報には、トリフェニルメタン系ロイ
コ色素でアルａ ヒス（ｐ’−ジエチルアミノフェニル
）−２−スルホフェニルメタン（以下、ＢＳＰＭと略称
する。）を用いる° 血清、尿などの中に含有されてい
る微量成分の定量法°が開示されているが、本発明者ら
の追試によれば、血清について同明細書に記載されてい
るような定量性は全く得られなかった。即ち、体液成分
の定量等の臨床化学分析の分野に於ては、トリフェニル
メタン系ロイコ色素は未だ実用化に到っていないという
のが実状である。
本発明者らは、体液成分の定量に於て、トリフェニルメ
タン系ロイコ色素の酸化発色に影響を及ぼしている呈色
妨害物質について鋭意研究した結果、タンパクと尿酸が
その元兇であり、特に尿酸が大きな妨害となることを突
き止め、これら妨害物質の影響回避方法について更に研
究を重ねた結果、タンパクは特定の界面活性剤又は特定
の金属キレートラ添加することにより、又、尿酸はウリ
カーゼを添加することにより、夫々目的を達し得ること
を見出し、本発明を完成するに到った。
タン系ロイコ色素の酸化発色に影響を及ぼしている呈色
妨害物質について鋭意研究した結果、タンパクと尿酸が
その元兇であり、特に尿酸が大きな妨害となることを突
き止め、これら妨害物質の影響回避方法について更に研
究を重ねた結果、タンパクは特定の界面活性剤又は特定
の金属キレートラ添加することにより、又、尿酸はウリ
カーゼを添加することにより、夫々目的を達し得ること
を見出し、本発明を完成するに到った。
〔式中、Ｒ＋、几２．Ｒ３，山は水素又は低級アルキル
基を表わし、夫々同じであっても互いに異ってイテも良
（、Ｘｔ 、 Ｘｚハ水素、−８ＯａＭ ＋ 、 −Ｃ
００Ｎ２ 。
基を表わし、夫々同じであっても互いに異ってイテも良
（、Ｘｔ 、 Ｘｚハ水素、−８ＯａＭ ＋ 、 −Ｃ
００Ｎ２ 。
−０（ＣＨ２）ｍｓＯ３Ｍｓ 、 −０（ＣＨｚ ）ｎ
Ｃ００Ｍ４又は−Ｎ＜Ｈ：（但し、Ｍｌ、 Ｎ２ 、
Ｎ３ 、 Ｎ４は水素、アルカリ金属イオン又はＮＨ
４＋を示し、Ｒｓ、几６は水素又は低級アルキル基を示
し、ｍ 、 ｎは夫々２〜４の整数を示す。）を表わし
、夫々同じであっても互いに異っていても良い。〕で表
わされるトリフェニルメタン系ロイコ色素を発色剤とし
て用いる体液成分の定量に於て、（１）ウリカーゼ及び
／又は（１）アニオン系界面活性剤又は金属キレート化
合物、を用いることを特徴とする呈色妨害物質の影響回
避方法である。
Ｃ００Ｍ４又は−Ｎ＜Ｈ：（但し、Ｍｌ、 Ｎ２ 、
Ｎ３ 、 Ｎ４は水素、アルカリ金属イオン又はＮＨ
４＋を示し、Ｒｓ、几６は水素又は低級アルキル基を示
し、ｍ 、 ｎは夫々２〜４の整数を示す。）を表わし
、夫々同じであっても互いに異っていても良い。〕で表
わされるトリフェニルメタン系ロイコ色素を発色剤とし
て用いる体液成分の定量に於て、（１）ウリカーゼ及び
／又は（１）アニオン系界面活性剤又は金属キレート化
合物、を用いることを特徴とする呈色妨害物質の影響回
避方法である。
本発明に於て用いられる、タンパクの妨害を除く効果の
ある界面活性剤としぞは、一般にアニオン系界面活性剤
、特に、一般式■ Ｒｓ（ｙＯ（ＣＨｚＣＨｚＯ）’、８０ａＭｓ （［１
又は一般式１ ％式％［］ 〔但し、Ｒ５は炭素数８〜９のアルキル基を、又Ｒ６は
炭素数８〜１８のアルキル基を夫々表わし、Ｎ５ 、
Ｎ６は夫々アルカリ金属イオン、アンモニウムイオン又
は第４級アンモニウムイオンを表わし、ｋ、ｌは夫々１
〜６の整数を表わす。〕で表わされるアニオン系界面活
性剤が有効であり、具体的商品としては一般式ｌに該当
するものとして、エマールＮＣ（ポリオキシエチレンア
ルキルフェニルエーテル硫酸ナトリウム：花王石鹸■商
品名人ニュコール５６０８Ｆにｔ’リオキシエチレンノ
ニルフェニルエーテル硫酸アンモニウム二日本乳化剤■
商品名）、ニラコール８ＮＰ−１ｆＴ（ポリオキシエチ
レンノニルフェニルエーテル硫ｆＲト’）エタノールア
ミン）等が、一般式〇［ＩＫ該当するものとして、エマ
ール２０Ｃ（ポリオキシエチレンアルキルエーテル硫酸
ナトリウム：花王石鹸■商品名）、す／ノール６０５Ｄ
（ポリオキンエチレンアルキルエーテル硫酸ナトリウム
：ライオン■商品名）、ニラコールＮＦＳ−３０３（ポ
リオキシエチレンアルキルエーテル硫ｆ１２ ） ！Ｊ
エタノールアミン二日光ケミカルズ■商品名）等が挙げ
られるが、これらに限定されるものでないことは云うま
でもない。これら界面活性剤は通常、発色試液中正味０
．０１〜１０チの濃度になるように用いられる。
ある界面活性剤としぞは、一般にアニオン系界面活性剤
、特に、一般式■ Ｒｓ（ｙＯ（ＣＨｚＣＨｚＯ）’、８０ａＭｓ （［１
又は一般式１ ％式％［］ 〔但し、Ｒ５は炭素数８〜９のアルキル基を、又Ｒ６は
炭素数８〜１８のアルキル基を夫々表わし、Ｎ５ 、
Ｎ６は夫々アルカリ金属イオン、アンモニウムイオン又
は第４級アンモニウムイオンを表わし、ｋ、ｌは夫々１
〜６の整数を表わす。〕で表わされるアニオン系界面活
性剤が有効であり、具体的商品としては一般式ｌに該当
するものとして、エマールＮＣ（ポリオキシエチレンア
ルキルフェニルエーテル硫酸ナトリウム：花王石鹸■商
品名人ニュコール５６０８Ｆにｔ’リオキシエチレンノ
ニルフェニルエーテル硫酸アンモニウム二日本乳化剤■
商品名）、ニラコール８ＮＰ−１ｆＴ（ポリオキシエチ
レンノニルフェニルエーテル硫ｆＲト’）エタノールア
ミン）等が、一般式〇［ＩＫ該当するものとして、エマ
ール２０Ｃ（ポリオキシエチレンアルキルエーテル硫酸
ナトリウム：花王石鹸■商品名）、す／ノール６０５Ｄ
（ポリオキンエチレンアルキルエーテル硫酸ナトリウム
：ライオン■商品名）、ニラコールＮＦＳ−３０３（ポ
リオキシエチレンアルキルエーテル硫ｆ１２ ） ！Ｊ
エタノールアミン二日光ケミカルズ■商品名）等が挙げ
られるが、これらに限定されるものでないことは云うま
でもない。これら界面活性剤は通常、発色試液中正味０
．０１〜１０チの濃度になるように用いられる。
又、タンパクの妨害を除く効果のある金属キレート化合
物としては、一般に金属−ＢＤＴＡ（エチレンジアミン
四酢酸）キレートが有効に用いられ、例えば、Ｆｅ（ｌ
［） −Ｅ Ｄ Ｔ Ａ 、 Ｍｎ（ｌ［） −ＥＤＴ
Ａ 。
物としては、一般に金属−ＢＤＴＡ（エチレンジアミン
四酢酸）キレートが有効に用いられ、例えば、Ｆｅ（ｌ
［） −Ｅ Ｄ Ｔ Ａ 、 Ｍｎ（ｌ［） −ＥＤＴ
Ａ 。
Ｎ１（１１） −Ｅ Ｄ Ｔ Ａ等、通常市販されてい
る金属−ＥＤＴＡキレートは全て例外なく使用できる。
る金属−ＥＤＴＡキレートは全て例外なく使用できる。
これら金属キレート化合物の添加量は０．００５％以上
であれば効果が認められるが、通常は０，０１〜０．５
チが好ましく用いられる。
であれば効果が認められるが、通常は０，０１〜０．５
チが好ましく用いられる。
一方、本発明に於て、尿酸の妨害を回避する為に用いる
ウリカーゼは、尿酸の酸化酵素であって、通常、尿酸に
作用してこれをアラントインと過酸化水素及び炭酸ガス
に変えるが、本発明に於ては、トリフェニルメタン誘導
体及びペルオキシダーゼの存在下尿酸にウリカーゼを作
用させることにより、過酸化水素の生成を伴わずにこれ
を分解することができる為、トリフェニルメタン系ロイ
コ色素が尿酸の分解によって生ずる過酸化水素により酸
化されて発色するというようなことは全くなく、妨害物
質である尿酸を極めて容易に且つ効果的に除くことがで
きる。ウリカーゼの添加量は、一般に５０Ｕ／Ｊ以上で
あればよいが、通常は１００〜５００ Ｕ／ｌの範囲が
好筐しく用いられる。即ち、尿酸の妨害を除くには、尿
酸を含有する試料に、例えばｐＨ６〜８の緩衝液中にト
リフェニルメタン系ロイコ色素０．０１〜０．３ ｍ
ｍｏ１７．、ウリカーゼ５０〜５００ Ｕ／７．ペルオ
キシダーゼ１００〜１０，０００ Ｕ／Ａ及び要すれば
適当量の界面活性剤を含む試液を加えれば、尿酸は直ち
に分解される。しかもその際過酸化水素は生成せず、従
って、それによるトリフェニルメタン系ロイコ色素の発
色も全くない。分解された尿酸は、アロキサン又はその
分解生成物と尿素に変っていることが推測されるが、い
ずれにしても、このようにＨｚＵｚの発生を伴わずに尿
酸がウリカーゼにより分解されるというような文献記載
はこれまでに全くない。
ウリカーゼは、尿酸の酸化酵素であって、通常、尿酸に
作用してこれをアラントインと過酸化水素及び炭酸ガス
に変えるが、本発明に於ては、トリフェニルメタン誘導
体及びペルオキシダーゼの存在下尿酸にウリカーゼを作
用させることにより、過酸化水素の生成を伴わずにこれ
を分解することができる為、トリフェニルメタン系ロイ
コ色素が尿酸の分解によって生ずる過酸化水素により酸
化されて発色するというようなことは全くなく、妨害物
質である尿酸を極めて容易に且つ効果的に除くことがで
きる。ウリカーゼの添加量は、一般に５０Ｕ／Ｊ以上で
あればよいが、通常は１００〜５００ Ｕ／ｌの範囲が
好筐しく用いられる。即ち、尿酸の妨害を除くには、尿
酸を含有する試料に、例えばｐＨ６〜８の緩衝液中にト
リフェニルメタン系ロイコ色素０．０１〜０．３ ｍ
ｍｏ１７．、ウリカーゼ５０〜５００ Ｕ／７．ペルオ
キシダーゼ１００〜１０，０００ Ｕ／Ａ及び要すれば
適当量の界面活性剤を含む試液を加えれば、尿酸は直ち
に分解される。しかもその際過酸化水素は生成せず、従
って、それによるトリフェニルメタン系ロイコ色素の発
色も全くない。分解された尿酸は、アロキサン又はその
分解生成物と尿素に変っていることが推測されるが、い
ずれにしても、このようにＨｚＵｚの発生を伴わずに尿
酸がウリカーゼにより分解されるというような文献記載
はこれまでに全くない。
かかる現象は他の被酸化性呈色試薬には全く認められず
、トリフェニルメタン系ロイコ色素に特有の効果である
ことを本発明者らが初めて見出したのであるが、通常の
ウリカーゼの尿酸に対する酵素作用とは全く異った働き
をウリカーゼに誘起させるものであシ全く意想外のこと
である。
、トリフェニルメタン系ロイコ色素に特有の効果である
ことを本発明者らが初めて見出したのであるが、通常の
ウリカーゼの尿酸に対する酵素作用とは全く異った働き
をウリカーゼに誘起させるものであシ全く意想外のこと
である。
通常、血清中にはタンパクと尿酸の両方が存在している
ので、血清中の成分をトリフェニルメタン系ロイコ色素
を発色剤として酵素法（ＨｚＯｚ −ＰＯＤ系）により
測定する場合や、血清中のヘモグロビンｆ Ｈ２Ｏ２系
で測定する場合などは、本発明に係るアニオン系界面活
性剤又は金属キレート化合物とウリカーゼの両者を併用
することにより、タンパク及び尿酸いずれの妨害をも―
避でき、より正確な測定値を容易に得ることができる。
ので、血清中の成分をトリフェニルメタン系ロイコ色素
を発色剤として酵素法（ＨｚＯｚ −ＰＯＤ系）により
測定する場合や、血清中のヘモグロビンｆ Ｈ２Ｏ２系
で測定する場合などは、本発明に係るアニオン系界面活
性剤又は金属キレート化合物とウリカーゼの両者を併用
することにより、タンパク及び尿酸いずれの妨害をも―
避でき、より正確な測定値を容易に得ることができる。
本発明に於て発色剤として用いられるトリフェニルメタ
ン系ロイコ色素は、通常、一般式印〔式中、几１．几２
．Ｒ３，几４は水素又は低級アルキル基を表わし、夫々
同じであっても互いに異っていても良（、Ｘｌ、 Ｘｚ
は水素、−８０３Ｍ１ 、−０００Ｍ２ 。
ン系ロイコ色素は、通常、一般式印〔式中、几１．几２
．Ｒ３，几４は水素又は低級アルキル基を表わし、夫々
同じであっても互いに異っていても良（、Ｘｌ、 Ｘｚ
は水素、−８０３Ｍ１ 、−０００Ｍ２ 。
−０（ＣＨ２）ｍｓｏ ３Ｍ３ 、−（）（ＣＨ２）
ｎ０００Ｍ４又は＜二（但し、Ｍ＋ 、 Ｍ２ 、 Ｍ
３． Ｍ４は水素、アルカリ金属イオン又はＮ）１４＋
を示し、几５．Ｒ６は水素又は低級アルキル基全示し、
ｍ 、 ｎは夫々２〜４の整数を示す。）を表わし、夫
々同じであっても互いに異っていても良い。〕で表わさ
れるものが多く用いられ、具体例としては、例えば前掲
のＬＣＶ、ＬＭＧ 。
ｎ０００Ｍ４又は＜二（但し、Ｍ＋ 、 Ｍ２ 、 Ｍ
３． Ｍ４は水素、アルカリ金属イオン又はＮ）１４＋
を示し、几５．Ｒ６は水素又は低級アルキル基全示し、
ｍ 、 ｎは夫々２〜４の整数を示す。）を表わし、夫
々同じであっても互いに異っていても良い。〕で表わさ
れるものが多く用いられ、具体例としては、例えば前掲
のＬＣＶ、ＬＭＧ 。
ＢＳＰＭの他に、本発明者らが最近開発し、特許出願し
た、ビス−ｆ’−（ジエチルアミノフェニル）−４−ス
ルホプロポキシフェニルメタンナトリウム（以下、Ｂ８
ｐｒｏＰＭと略称する。）や、ビスｐ−ジエチルアミノ
フェニル）−３，４−ジスルホプロポキシフェニルメタ
ンジナトリウム（以下、Ｂ ８ ｄｉｐｒｏ Ｐ Ｍと
略称する。）などが挙げられるが、これらに限定される
ものではなく、実際には、上記一般式には関係なく、発
色剤として用い得る殆ど全てのトリフェニルメタン系ロ
イコ色素がこれに適用され得る。
た、ビス−ｆ’−（ジエチルアミノフェニル）−４−ス
ルホプロポキシフェニルメタンナトリウム（以下、Ｂ８
ｐｒｏＰＭと略称する。）や、ビスｐ−ジエチルアミノ
フェニル）−３，４−ジスルホプロポキシフェニルメタ
ンジナトリウム（以下、Ｂ ８ ｄｉｐｒｏ Ｐ Ｍと
略称する。）などが挙げられるが、これらに限定される
ものではなく、実際には、上記一般式には関係なく、発
色剤として用い得る殆ど全てのトリフェニルメタン系ロ
イコ色素がこれに適用され得る。
本発明はトリフェニルメタン系ロイコ色素全発色剤とし
て用いる、酵素法（Ｈ２Ｃ１２−Ｐ Ｕ Ｄ系）による
体液成分の定量に於て、トリフェニルメタン系ロイコ色
素の酸化発色を妨害する物質の影響を回避し、より正確
な測定値が容易に得られる方法を提供するものであり、
酸、化発色した際の呈色波長が５ Ｑ Ｑ ｎｍ以上と
長波長側にあり、分子吸光係数も５万以上と大きく、而
も呈色後の経時的退色が殆どないなど優れた長所を有す
るトリフェニルメタン系ロイコ色素の臨床化学分析への
応用を可能ならしめた点に於て、斯業に貢献するところ
極めて大なるものである。
て用いる、酵素法（Ｈ２Ｃ１２−Ｐ Ｕ Ｄ系）による
体液成分の定量に於て、トリフェニルメタン系ロイコ色
素の酸化発色を妨害する物質の影響を回避し、より正確
な測定値が容易に得られる方法を提供するものであり、
酸、化発色した際の呈色波長が５ Ｑ Ｑ ｎｍ以上と
長波長側にあり、分子吸光係数も５万以上と大きく、而
も呈色後の経時的退色が殆どないなど優れた長所を有す
るトリフェニルメタン系ロイコ色素の臨床化学分析への
応用を可能ならしめた点に於て、斯業に貢献するところ
極めて大なるものである。
以下に、実施例、参考例及び比較例を挙げて本発明を更
に具体的に説明するが、本発明はこれらの実施例に限定
されるものでないことは云うまでもない。
に具体的に説明するが、本発明はこれらの実施例に限定
されるものでないことは云うまでもない。
実施例 １
（１）試薬の調製
■発色試液
０．０５Ｍリン酸緩衝液（１）Ｈ７，Ｏ）中ニＢ Ｓ
、ｄｉｐｒ。
、ｄｉｐｒ。
ＰＭ Ｑ、０５ ｍｍｏ／Ａ、 Ｐ ＵＤ ３，０００
Ｕ／／及び呈色妨害防止剤として、界面活性剤の場合
は２チ、金属キレートの場合は０．２％を含むよう・に
調製し、夫々発色試液とする。
Ｕ／／及び呈色妨害防止剤として、界面活性剤の場合
は２チ、金属キレートの場合は０．２％を含むよう・に
調製し、夫々発色試液とする。
■アルブミン溶液
人アルブミｙ （Ｓｉｇｍａ社製ＡＪｂｕｍｉｎ 、
ＨｕｍａｎＦｒａｃｔｉｏｎ Ｖ ９６〜９９％）５ｇ
をとり蒸留水を加えて全量１００１ｒＬｌとする。
ＨｕｍａｎＦｒａｃｔｉｏｎ Ｖ ９６〜９９％）５ｇ
をとり蒸留水を加えて全量１００１ｒＬｌとする。
■尿酸標準液
常法に従い尿酸１５０ｍ９／ｌの水溶液を調製する。
■Ｈｚ（Ｊｚ標準液
ＨｚＯｚｉ夫々３ Ｑｐｐｍ 、 ６ ｏｐｐｍ’を含
む水溶液を調製しＨｚＯｚ標準液１．ＩＩとする。
む水溶液を調製しＨｚＯｚ標準液１．ＩＩとする。
（２１測定操作
試料として、水、アルブミン溶液及び尿酸標準深谷５０
μＡ’ｒと９、発色試液３ｒＩＬｌｉ加えて混合したの
ち、Ｈ２Ｏ２標準液Ｉ又は１１２０μｌを加えて３７℃
恒温槽中１０分間放置したのち試薬ブランクを対照とし
て、波長６２０ｎｍにおける吸光度を測定する。
μＡ’ｒと９、発色試液３ｒＩＬｌｉ加えて混合したの
ち、Ｈ２Ｏ２標準液Ｉ又は１１２０μｌを加えて３７℃
恒温槽中１０分間放置したのち試薬ブランクを対照とし
て、波長６２０ｎｍにおける吸光度を測定する。
結果全第１表に示す。
第 １ 表
第１表よシ明らかなように、本発明に係るアニオン系界
面活性剤又は金属キレ−Ｍｅ用いることによりアルブミ
ンによる呈色妨害は回避することができる。しかし、こ
れにより尿酸の妨害を回避することはできない。
面活性剤又は金属キレ−Ｍｅ用いることによりアルブミ
ンによる呈色妨害は回避することができる。しかし、こ
れにより尿酸の妨害を回避することはできない。
参考例
（１）試薬の調製
■発色試液
実施例１１Ｃ同じ。（呈色妨害防止剤含まず。）■尿酸
標準液 常法に従い尿酸０，２５，５０，７５，１００ｍ９／１
１の水溶液を調製する。
標準液 常法に従い尿酸０，２５，５０，７５，１００ｍ９／１
１の水溶液を調製する。
■Ｈ２Ｏ２標準液
ＨｚＯｚｉ夫々１５．３０，４５．６０ｐｐｍ’ｅ含む
水溶液全調製する。
水溶液全調製する。
（２）測定操作
実施例１に従い試料として尿酸標準液を用いて操作し吸
光度を測定する。
光度を測定する。
結果を第２表及び第１図に示す。
第 ２ 表
第２表及び第１図から明らかなように尿酸の存在により
負の誤差を生じ、検量線は湾曲し原点を通らない。負誤
差は尿酸の量が増えるて従い大きくなるが比例はしない
。
負の誤差を生じ、検量線は湾曲し原点を通らない。負誤
差は尿酸の量が増えるて従い大きくなるが比例はしない
。
実施例 ２
（１１試薬の調製
■発色試液
実施例１に同じ。（呈色妨害防止剤含まず。）■尿酸標
準液 上記参考例に同じ。
準液 上記参考例に同じ。
■Ｈ２Ｏ２標準液
上記参考例に同じ。
（２）測定操作
発色試液にウリカーゼ？ ２００ Ｕ／ｌの濃度になる
よ５に添加し、それを用いて参考例と同様に操作して吸
光度を測定する。
よ５に添加し、それを用いて参考例と同様に操作して吸
光度を測定する。
結果を第３表に示す。
第 ３ 表
第３表から明らかなように、ウリカーゼを用いることに
より尿酸の影響は全く消失し、８２０２の測定値には全
く影響が無い。
より尿酸の影響は全く消失し、８２０２の測定値には全
く影響が無い。
実施例 ３１ｊ１清モノアミンオキシダーゼの活性測定
（１）試薬の調製
■基質発色試液
２０ ｍ Ｍ ＩＪ ７酸緩衝液（ｐＨ７，０）に、基
質としてアリルアミ７ １５ｍｍｏｌ／ｌ、ウリカーゼ
２０ ｏＵ／ｌ、 Ｈ８ｄｉｐｒｏ ＰＭ Ｏ，０３ｍ
ｍｏＡ ／ｌ。
質としてアリルアミ７ １５ｍｍｏｌ／ｌ、ウリカーゼ
２０ ｏＵ／ｌ、 Ｈ８ｄｉｐｒｏ ＰＭ Ｏ，０３ｍ
ｍｏＡ ／ｌ。
エマールＮＣ（花王石鹸■商品名）５チの濃度になるよ
うに溶解し、基質発色試液とする。
うに溶解し、基質発色試液とする。
■反応停止液
ジエチルジチオカルバミン酸ナトリウム ８．９ｍ ｍ
ｏｌ ／ ｌの水溶液を調製する。
ｏｌ ／ ｌの水溶液を調製する。
■モノアミンオキシダーゼ溶液
Ｓｉｇｍａ社製牛由来モノアミンオキシダーゼを用いて
、５ ＩＵ ／ｌ 、１０ ＩＵ／１２． ２０１Ｕ／
Ｉｔの水溶液を調製する。
、５ ＩＵ ／ｌ 、１０ ＩＵ／１２． ２０１Ｕ／
Ｉｔの水溶液を調製する。
（２）測定操作
血清５０μＡ’にとり、基質発色試液３ゴを加え、３７
℃の恒温槽中３０分間加温後反応停止液５０μに刃口え
て混和したのち、試薬ブランクを対照として波長６２０
ｎｍにおける吸光度を測定する。
℃の恒温槽中３０分間加温後反応停止液５０μに刃口え
て混和したのち、試薬ブランクを対照として波長６２０
ｎｍにおける吸光度を測定する。
モノアミンオキシダーゼ溶液を用いて血清と同様に操作
して吸光度を測定し、検量線を作成する。
して吸光度を測定し、検量線を作成する。
第２図に検量線を示す。
検量線から試料中のモノアミンオキシダーゼ活性をめる
。
。
実施例 ４ 血清中の微量ヘモグロビンの定量（１）試
薬の調製 ■試液Ｉ ロイコマラカイトグリ−／２．ｌｉ＋ｉ酢酸
３容と水ｌ容の混液１００ゴに溶解する。
薬の調製 ■試液Ｉ ロイコマラカイトグリ−／２．ｌｉ＋ｉ酢酸
３容と水ｌ容の混液１００ゴに溶解する。
■試液■ グリシン３０ｇ、尿素２００ｇ’ｉ水約９０
０ｍ１に溶解後塩酸でｐＨ４，５に調整し、エマールＮ
Ｏ３０ｇ’に加えたのち水で全量１，０００属とする。
０ｍ１に溶解後塩酸でｐＨ４，５に調整し、エマールＮ
Ｏ３０ｇ’に加えたのち水で全量１，０００属とする。
■試液１［３０％ＨｚＯｚ１ｍｌニ水を加えて１００−
とする。
とする。
■ウリカーゼ溶液
０．０５Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７，０）にウリカーゼ−
（ｉ−２０００／／の濃度になるよう溶解する。
（ｉ−２０００／／の濃度になるよう溶解する。
■血清
ヘモグロビン不含のプール血清（尿酸５０■４を含有）
にヘモグロビンを加えて、夫々ヘモクロピン０．３４
、０．６８ 、１．０ 、１．５ 、２．０１１全含む
血清を調製する。
にヘモグロビンを加えて、夫々ヘモクロピン０．３４
、０．６８ 、１．０ 、１．５ 、２．０１１全含む
血清を調製する。
（２）測定操作
血清０．１ ｍＪをとり、ウリカーゼ溶液１ｍ！ｉを加
えて３７℃恒温槽中５分間加温後、試液ｌ１−１試液１
１ｍ１、試液１［０，２ＩＩＬｌ’に加えて３７℃恒温
槽中６０分間加温したのち、試薬ブランクを対照として
６２０ｎｍにおける吸光度を測定する。
えて３７℃恒温槽中５分間加温後、試液ｌ１−１試液１
１ｍ１、試液１［０，２ＩＩＬｌ’に加えて３７℃恒温
槽中６０分間加温したのち、試薬ブランクを対照として
６２０ｎｍにおける吸光度を測定する。
第３図に検量線を示す。
比較例 血清中の微量ヘモグロビンの定量（１）試薬の
調製 ■試液Ｉ 実施例４に同じ。
調製 ■試液Ｉ 実施例４に同じ。
■試液■ 実施例４の試液■の組成のうち、エマールＮ
Ｏを含まないもの。
Ｏを含まないもの。
■試液■ 実施例４に同じ。
（２）測定操作
血清０．１１１Ｌｌｋとり、ｏ、ｏｓＭリン酸緩衝液（
ｐＨ７，０）１ｄ、試液１１ｄ、試液■１σ、試液１［
０，２ｒｒＬｌヲ加えて実施例４と同様に操作し６２０
ｎｍにおける吸光度を測定する。
ｐＨ７，０）１ｄ、試液１１ｄ、試液■１σ、試液１［
０，２ｒｒＬｌヲ加えて実施例４と同様に操作し６２０
ｎｍにおける吸光度を測定する。
第３図に検量線を示す。
第３図から明らかなように、本発明に係る実施例４は原
点を通る直線になるが比較例では、タンパク及び尿酸の
影響の為原点を通らない。
点を通る直線になるが比較例では、タンパク及び尿酸の
影響の為原点を通らない。
第１図は、実施例２に於て、第２表の結果を図示したも
のであシ、横軸の各Ｈ２Ｏ２標準液濃度（ｐｐｍ ）に
ついて得られた吸光度（ＯＤ）を、縦軸に沿ってプロッ
トした点を結んだものである。 但し、−×−×−は尿酸標準液濃度が０ｍ９／ｌ （水
）、−＃−〇−は２５７ｎ９／１．−ｏ−ｏ−１ｊ、５
０ｍｇ／ＩＪ、−へ一△−は７５ ｍ９／ｌ及び−ロー
ロー１ｔ１００■／ｌの場合全夫々表わす。 第２図は、実施例３に於て得られた検量線を表わし、横
軸の各モノアミンオキシダーゼ活１（ＩＵ／１３）につ
いて得られた吸光度（（Ｊｌ））を、縦軸に沿ってプロ
ットした点を結んだものである。 第３図は、実施例４及び比較例に於て得られた検量線を
表わし、−×−×−は実施例４の、−・−・−は比較例
の場合全夫々表わす。′夫々横軸のへモグロビ／濃度（
筋句ンについて得られた吸光度（ＵＤ）’ｋ、縦軸に沿
ってプロ・ソトした点を結んだものである。 尚、上記測定のセル層厚はいずれもｉｏｍｉである。 特許出願人 和光純薬工業株式会社 １う 氏 ０１ 第１図 ）） ０ １．５ ３０ ４５ ６０ 過酸化水素濃度（ｐｐｍ） 第 ２ 図 モノアミンオキシダーゼ活性値（ＩＵ／Ａ）第 ３ 図 手続補正書 昭和５２年 ５月 ｒｇ日 １ 事件の表示 ２、発明の名称 ３ 補正をする者 事件との関係 特許出願人 連絡先 特許課（東京） 置 ０３−２７０−８５７１
４、補正命令の日付 臼 垢 ５、補正の対象 明細書の特許請求の範囲の欄及び発明の詳細な説明の欄
。 ６、補正の内容 （１）特許請求の範囲を別紙の通シ補正する。 （２）明細書１２頁１７行目に記載の［ビス−ｐ−（ジ
エチルアミノフェニル）ｊをｒビス（ｐ−ジエチルアミ
ノフェニル杓と補正する。 （３）明細書１２頁１９行目から２０行目にかけて記載
の「ビスｐ−ジエチルアミノフェニル）」ヲ「ビス（ｐ
−ジエチルアミノフェニル）」と補正する。 （４）明細書１３頁７行目から同頁９行目にかけて記載
の「本発明は・・・・・・・・・定量に於て、」を「本
発明はトリフェニルメタン系ロイコ色素を発色剤として
用いる、酵素法（Ｒ２０□−ＰＯＤ系）による体液成分
の定量、例えば体液中のグルコース、コレステロール、
トリグリセライド、リン脂質、コリン、クレアチン、ク
レアチニン、胆汁酸等の基質の定量やモノアミンオキシ
ダーゼ等の酵素活性の測定に於て、並びにＲ２０を用い
た体液中のペルオキシダーゼ様物質、例えばヘモグロビ
ン等の定量に於て、」と補正する。 ゛（５）明細書１９頁６行目に記載の［５％Ｊの次に「
、ＰＯＤ３０００Ｌ）／ｌＪを加入する。 （６）明細書２１頁４行目に記載の「ウリカーゼ溶液１
属を加え」を［ウリカーゼ溶液１１１Ｌｅ、試液Ｉｌ属
を加え」と補正する。 （７）明細書２１頁５行目に記載の［試液１１７ｄ、Ｊ
を削除する。 （８）明細書２１頁１５行目に記載の「■試液■実施例
４に同じ。」の次に改行して「■血清 実施例４に同じ
。」を加入する。 以上 別 紙 ２、特許請求の範囲 （１）一般式〇〕 〔式中、Ｒ，、Ｒ２，Ｒ３，Ｒ４は水素又は低級アルキ
ル基を表わし、夫々同じであっても互いに異って（但し
、Ｍ、 、 Ｍ２． Ｍ３． Ｍ４は水素、アルカリ金
属イオン又はＮＨ４＋を示し、Ｒ５１Ｒ６は水素又は低
級アルキル基を示し、ｍ、ｎは夫々２〜４の整数を示ｔ
。）を表わし、夫々同じであっても互いに異っていても
良い。〕で表わされるトリフェニルメタン系ロイコ色素
を発色剤として用いる体液成分の定量に於いて、（１）
ウリカーゼ及び／又は（１１）アニオン系界面活性剤又
は金属キレート化合物、を用いることを特徴とする呈色
妨害物質の影響回避方法。 （２）体液成分の定量が基質、又は酵素反応によシ生成
した物質に酸化酵素を作用させ、生成する過酸化水素を
定量することによシ行う体液中の基質又は酵素活性の定
量である特許請求の範囲第１項に記載の呈色妨害物質の
影響回避方法。 （３）ペルオキシダーゼの存在下、発色剤を酸化発色さ
せてその呈色を比色定量することによシ過酸化水素を定
量する特許請求の範囲第２項に記載の呈色妨害物質の影
響回避方法。 （４）体液成分がグルコース、コレステロール、トリグ
リセライド、リン脂質、コリン、クレアチン、クレアチ
ニン、胆汁酸、モノアミンオキシダーゼ、である特許請
求の範囲第１項〜第３項のいずれかに記載の呈色妨害物
質の影響回避方法。 その他のヘム化合物である特許請求の範囲第５項に記載
の呈色妨害物質の影響回避方法。 （７）呈色妨害物質が尿酸で１、ウリカーゼを用いてこ
れの影響を回避する特許請求の範囲第１項〜第６項のい
ずれかに記載の呈色妨害物質の影響回避方法。 （８）呈色妨害物質がタンパクであシ、アニオン系界面
活性剤を用いてこれの影響を回避する特許請求の範囲第
１項〜第６項のいずれかに記載の呈色妨害物質の影響回
避方法。 （９）呈色妨害物質がタンパクであり、金属キレート化
合物を用いてこれの影響を回避する特許請求の範囲第１
項〜第６項のいずれかに記載の呈色妨害物質の影響回避
方法。 （１の呈色妨害物質が尿酸及びタンパクでアシ、ウリカ
ーゼを用いて尿酸の影響を回避し、アニオン系界面活性
剤を用いてタンパクの影響を回避する特許請求の範囲第
１項〜第６項のいずれかに記載の呈色妨害物質の影響回
避方法。 （１１）呈色妨害物質が尿酸及びタンパクであシ、ウリ
カーゼを用いて尿酸の影響を回避し、金属キレート化合
物を用いてタンパクの影響を回避する特許請求の範囲第
１項〜第６項のいずれかに記載の呈色妨害物質の影響回
避方法。 （１２）一般式（９） ％式％ 又は一般式叫 Ｒ６０（ＣＨ２ＣＨ２０）ｌＳ０３Ｍ６１ＸＩＩｌｌ〔
但し、Ｒ５は炭素数８〜９のアルキル基を、又Ｒ６は炭
素数８〜１８のアルキル基を夫々表わし、Ｍ５． Ｍ６
は夫々アルカリ金属イオン、アンモニウムイオン又は第
４級アンモニウムイオンを表わし、ｋ、ｌは夫々１〜６
の整数を表わす。〕で表わされるアニオン系界面活性剤
を用いる特許請求の範囲第８項又は第１０項に記載の呈
色妨害物質の影響回避方法。 （１３）金属キレート化合物が金属−ＥＤＴＡ（エチレ
ンジアミン四酢酸）キレートである特許請求の範囲第９
項又は第１１項に記載の呈色妨害物質の影響回避方法。 以上 手続補正書 ｌ 事件の表示 一召如ｓＱ牟餅許廓第６５６２９冴 ２ 発明の名称 ３、 補正をする者 事件との関係 特許出願人 郵便番号 ５４１ 連絡先 特許課（東京） 置 ０３−２７０−８５７１
白 聴 ５ 補正の対象 明細書の発明の詳細な説明の欄。 ６、 補正の内容 （１）昭和５９年５月１８日付提出の手続補正書３頁１
行目に記載の田２０」を「Ｈ２Ｏ２」 と補正する。 以上
のであシ、横軸の各Ｈ２Ｏ２標準液濃度（ｐｐｍ ）に
ついて得られた吸光度（ＯＤ）を、縦軸に沿ってプロッ
トした点を結んだものである。 但し、−×−×−は尿酸標準液濃度が０ｍ９／ｌ （水
）、−＃−〇−は２５７ｎ９／１．−ｏ−ｏ−１ｊ、５
０ｍｇ／ＩＪ、−へ一△−は７５ ｍ９／ｌ及び−ロー
ロー１ｔ１００■／ｌの場合全夫々表わす。 第２図は、実施例３に於て得られた検量線を表わし、横
軸の各モノアミンオキシダーゼ活１（ＩＵ／１３）につ
いて得られた吸光度（（Ｊｌ））を、縦軸に沿ってプロ
ットした点を結んだものである。 第３図は、実施例４及び比較例に於て得られた検量線を
表わし、−×−×−は実施例４の、−・−・−は比較例
の場合全夫々表わす。′夫々横軸のへモグロビ／濃度（
筋句ンについて得られた吸光度（ＵＤ）’ｋ、縦軸に沿
ってプロ・ソトした点を結んだものである。 尚、上記測定のセル層厚はいずれもｉｏｍｉである。 特許出願人 和光純薬工業株式会社 １う 氏 ０１ 第１図 ）） ０ １．５ ３０ ４５ ６０ 過酸化水素濃度（ｐｐｍ） 第 ２ 図 モノアミンオキシダーゼ活性値（ＩＵ／Ａ）第 ３ 図 手続補正書 昭和５２年 ５月 ｒｇ日 １ 事件の表示 ２、発明の名称 ３ 補正をする者 事件との関係 特許出願人 連絡先 特許課（東京） 置 ０３−２７０−８５７１
４、補正命令の日付 臼 垢 ５、補正の対象 明細書の特許請求の範囲の欄及び発明の詳細な説明の欄
。 ６、補正の内容 （１）特許請求の範囲を別紙の通シ補正する。 （２）明細書１２頁１７行目に記載の［ビス−ｐ−（ジ
エチルアミノフェニル）ｊをｒビス（ｐ−ジエチルアミ
ノフェニル杓と補正する。 （３）明細書１２頁１９行目から２０行目にかけて記載
の「ビスｐ−ジエチルアミノフェニル）」ヲ「ビス（ｐ
−ジエチルアミノフェニル）」と補正する。 （４）明細書１３頁７行目から同頁９行目にかけて記載
の「本発明は・・・・・・・・・定量に於て、」を「本
発明はトリフェニルメタン系ロイコ色素を発色剤として
用いる、酵素法（Ｒ２０□−ＰＯＤ系）による体液成分
の定量、例えば体液中のグルコース、コレステロール、
トリグリセライド、リン脂質、コリン、クレアチン、ク
レアチニン、胆汁酸等の基質の定量やモノアミンオキシ
ダーゼ等の酵素活性の測定に於て、並びにＲ２０を用い
た体液中のペルオキシダーゼ様物質、例えばヘモグロビ
ン等の定量に於て、」と補正する。 ゛（５）明細書１９頁６行目に記載の［５％Ｊの次に「
、ＰＯＤ３０００Ｌ）／ｌＪを加入する。 （６）明細書２１頁４行目に記載の「ウリカーゼ溶液１
属を加え」を［ウリカーゼ溶液１１１Ｌｅ、試液Ｉｌ属
を加え」と補正する。 （７）明細書２１頁５行目に記載の［試液１１７ｄ、Ｊ
を削除する。 （８）明細書２１頁１５行目に記載の「■試液■実施例
４に同じ。」の次に改行して「■血清 実施例４に同じ
。」を加入する。 以上 別 紙 ２、特許請求の範囲 （１）一般式〇〕 〔式中、Ｒ，、Ｒ２，Ｒ３，Ｒ４は水素又は低級アルキ
ル基を表わし、夫々同じであっても互いに異って（但し
、Ｍ、 、 Ｍ２． Ｍ３． Ｍ４は水素、アルカリ金
属イオン又はＮＨ４＋を示し、Ｒ５１Ｒ６は水素又は低
級アルキル基を示し、ｍ、ｎは夫々２〜４の整数を示ｔ
。）を表わし、夫々同じであっても互いに異っていても
良い。〕で表わされるトリフェニルメタン系ロイコ色素
を発色剤として用いる体液成分の定量に於いて、（１）
ウリカーゼ及び／又は（１１）アニオン系界面活性剤又
は金属キレート化合物、を用いることを特徴とする呈色
妨害物質の影響回避方法。 （２）体液成分の定量が基質、又は酵素反応によシ生成
した物質に酸化酵素を作用させ、生成する過酸化水素を
定量することによシ行う体液中の基質又は酵素活性の定
量である特許請求の範囲第１項に記載の呈色妨害物質の
影響回避方法。 （３）ペルオキシダーゼの存在下、発色剤を酸化発色さ
せてその呈色を比色定量することによシ過酸化水素を定
量する特許請求の範囲第２項に記載の呈色妨害物質の影
響回避方法。 （４）体液成分がグルコース、コレステロール、トリグ
リセライド、リン脂質、コリン、クレアチン、クレアチ
ニン、胆汁酸、モノアミンオキシダーゼ、である特許請
求の範囲第１項〜第３項のいずれかに記載の呈色妨害物
質の影響回避方法。 その他のヘム化合物である特許請求の範囲第５項に記載
の呈色妨害物質の影響回避方法。 （７）呈色妨害物質が尿酸で１、ウリカーゼを用いてこ
れの影響を回避する特許請求の範囲第１項〜第６項のい
ずれかに記載の呈色妨害物質の影響回避方法。 （８）呈色妨害物質がタンパクであシ、アニオン系界面
活性剤を用いてこれの影響を回避する特許請求の範囲第
１項〜第６項のいずれかに記載の呈色妨害物質の影響回
避方法。 （９）呈色妨害物質がタンパクであり、金属キレート化
合物を用いてこれの影響を回避する特許請求の範囲第１
項〜第６項のいずれかに記載の呈色妨害物質の影響回避
方法。 （１の呈色妨害物質が尿酸及びタンパクでアシ、ウリカ
ーゼを用いて尿酸の影響を回避し、アニオン系界面活性
剤を用いてタンパクの影響を回避する特許請求の範囲第
１項〜第６項のいずれかに記載の呈色妨害物質の影響回
避方法。 （１１）呈色妨害物質が尿酸及びタンパクであシ、ウリ
カーゼを用いて尿酸の影響を回避し、金属キレート化合
物を用いてタンパクの影響を回避する特許請求の範囲第
１項〜第６項のいずれかに記載の呈色妨害物質の影響回
避方法。 （１２）一般式（９） ％式％ 又は一般式叫 Ｒ６０（ＣＨ２ＣＨ２０）ｌＳ０３Ｍ６１ＸＩＩｌｌ〔
但し、Ｒ５は炭素数８〜９のアルキル基を、又Ｒ６は炭
素数８〜１８のアルキル基を夫々表わし、Ｍ５． Ｍ６
は夫々アルカリ金属イオン、アンモニウムイオン又は第
４級アンモニウムイオンを表わし、ｋ、ｌは夫々１〜６
の整数を表わす。〕で表わされるアニオン系界面活性剤
を用いる特許請求の範囲第８項又は第１０項に記載の呈
色妨害物質の影響回避方法。 （１３）金属キレート化合物が金属−ＥＤＴＡ（エチレ
ンジアミン四酢酸）キレートである特許請求の範囲第９
項又は第１１項に記載の呈色妨害物質の影響回避方法。 以上 手続補正書 ｌ 事件の表示 一召如ｓＱ牟餅許廓第６５６２９冴 ２ 発明の名称 ３、 補正をする者 事件との関係 特許出願人 郵便番号 ５４１ 連絡先 特許課（東京） 置 ０３−２７０−８５７１
白 聴 ５ 補正の対象 明細書の発明の詳細な説明の欄。 ６、 補正の内容 （１）昭和５９年５月１８日付提出の手続補正書３頁１
行目に記載の田２０」を「Ｈ２Ｏ２」 と補正する。 以上
Claims (9)
- （１）一般式印 〔式中、＋Ｒ＋、 Ｒ＋ｚ、 Ｒ３，几４は水素又は低
級アルキル基を表わし、夫々同じであっても互いに異っ
ていても良（、Ｘｌ、 Ｘ２は水素、−８０３Ｍ１ 、
−０００Ｍ２ 。 （但し、Ｍｌ、Ｍ２．Ｍａ、Ｍ４は水素、アルカリ金属
イオン又はＮＨ４＋を示し、Ｒｓ、几６は水素又は低級
アルキル基を示し、ｍ 、 ｎは夫々２〜４の整数を示
す。）を表わし、夫々同じであっても互いに異っていて
も良い。〕で表わされるトリフェニルメタン系ロイコ色
素を発色剤として用いる体液成分の定量に於て、（１）
ウリカーゼ及び／又は（１リアニオン系界面活性剤又は
金属キレート化合物、を用いることを特徴とする呈色妨
害物質の影響回避方法。 - （２）体液成分の定量が基質、又は酵素反応によシ生成
した物質に酸化酵素を作用させ、生成する過酸化水素を
定量することにより行う体液中の基質又は酵素活性の定
量である特許請求の範囲第１項に記載゛の呈色妨害物質
の影響回避方法。 - （３）ペルオキシダーゼの存在下、発色剤を酸化発色さ
せてその呈色を比色定量することにより過酸化水素を定
量する特許請求の範囲第２項に記載の呈色妨害物質の影
響回避方法。 - （４）体液成分力クルコース、コレステロール、トリグ
リセライド、リン脂質、コリン、クレアチン、クレアチ
ニン、胆汁酸、モノアミンオキシダーゼ、ヘム様物質で
ある特許請求の範囲第１項〜第３項のいずれかに記載の
呈色妨害物質の影響回避方法。 - （５）呈色妨害物質が尿酸であり、ウリカーゼを用いて
これの影響を特徴とする特許請求の範囲第１項〜第４項
のいずれかに記載の呈色妨害物質の影響回避方法。 - （６）呈色妨害物質がタンパクであり、アニオン系界面
活性剤を用いてこれの影響を回避する特許請求の範囲第
１項〜第４項のいずれかに記載の呈色妨害物質の影響回
避方法。 - （７）呈色妨害物質がタンパクであり、金属キレート化
合物を用いてこれの影響を回避する特許請求の範囲第１
項〜第４項のいずれかに記載の呈色妨害物質の影響回避
方法。 - （８）呈色妨害物質が１尿１酸、及ｌ−びタンパクであ
り、ウリカーゼを用いて尿酸の影響を回避し、アニオン
系界面活性剤を用いてタンパクの影響を回避する特許請
求の範囲第１項〜第４項のいずれかに記載の呈色妨害物
質の影響回避方法。 - （９）呈色妨害物質が尿酸及びタンパクであり、ウリカ
ーゼを用いて尿酸の影響を回避し、金属キレート化合物
を用いてタンパクの影響を回避する特許請求の範囲第１
項〜第４項のいずれかに記載の呈色妨害物質の影響回避
方法。 （ｌＯ） 一般式叩 又は一般式（Ｉｌ［〕 几６０（ＣＨ２ＣＨ２０） １８ＵａＭｅ （ｌ ］〔
但し、几５は炭素数８〜９のアルキル基を、又ｍは炭素
数８〜１８のアルキル基を夫々光わし、Ｍｓ 、 Ｍｅ
は夫々アルカリ金属イオン、アンモニウムイオン又は第
４級アンモニウムイオンを表わし、ｋ、／は夫々１〜６
の整数を表わす。〕で表わされるアニオン系界面活性剤
を用いる特許請求の範囲第６項又は第８項に記載の呈色
妨害物質の影響回避方法。 （ロ）金属キレート化合物が金属−ＥＤＴＡ （エチレ
ンジアミン四酢酸）キレートである特許請求の範囲第７
項又は第９項に記載の呈色妨害物質の影響回避方法。
Priority Applications (7)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP59065629A JPS60209176A (ja) | 1984-04-02 | 1984-04-02 | ロイコ色素を用いる定量方法 |
| EP19840902363 EP0174371B1 (en) | 1984-03-02 | 1984-06-12 | Triphenylmethane derivatives and method for determining oxidative substances using them as color-forming component |
| PCT/JP1984/000305 WO1985003942A1 (en) | 1984-03-02 | 1984-06-12 | Triphenylmethane derivatives and method for determining oxidative substances using them as color-forming component |
| AT84902363T ATE56735T1 (de) | 1984-03-02 | 1984-06-12 | Triphenylmethanabkoemmlinge und verfahren zur bestimmung der oxydativen agenzien bei deren verwendung als farbstoffbilder. |
| EP19890117475 EP0355864A3 (en) | 1984-03-15 | 1984-06-12 | Method of quantitatively measuring an oxidative substance by using triphenyl methane type leuco compounds as coloring matter |
| DE8484902363T DE3483269D1 (de) | 1984-03-02 | 1984-06-12 | Triphenylmethanabkoemmlinge und verfahren zur bestimmung der oxydativen agenzien bei deren verwendung als farbstoffbilder. |
| US06/649,479 US4778753A (en) | 1984-03-15 | 1984-09-11 | Method of quantitatively measuring an oxidative substance using triphenyl methane type leuco-pigment as a coloring substance |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP59065629A JPS60209176A (ja) | 1984-04-02 | 1984-04-02 | ロイコ色素を用いる定量方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS60209176A true JPS60209176A (ja) | 1985-10-21 |
| JPH0536037B2 JPH0536037B2 (ja) | 1993-05-28 |
Family
ID=13292495
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP59065629A Granted JPS60209176A (ja) | 1984-03-02 | 1984-04-02 | ロイコ色素を用いる定量方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS60209176A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2006087325A (ja) * | 2004-09-22 | 2006-04-06 | Fuji Photo Film Co Ltd | 分析用試薬、乾式分析要素、および分析方法 |
| JP2020537014A (ja) * | 2017-10-12 | 2020-12-17 | ミリケン・アンド・カンパニーＭｉｌｌｉｋｅｎ ＆ Ｃｏｍｐａｎｙ | 真正性を決定するための、組成物、方法および試験キット |
-
1984
- 1984-04-02 JP JP59065629A patent/JPS60209176A/ja active Granted
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2006087325A (ja) * | 2004-09-22 | 2006-04-06 | Fuji Photo Film Co Ltd | 分析用試薬、乾式分析要素、および分析方法 |
| JP2020537014A (ja) * | 2017-10-12 | 2020-12-17 | ミリケン・アンド・カンパニーＭｉｌｌｉｋｅｎ ＆ Ｃｏｍｐａｎｙ | 真正性を決定するための、組成物、方法および試験キット |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0536037B2 (ja) | 1993-05-28 |
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