JPS60207598A - ナイアシン検出用試験紙、結核菌検出方法および結核菌検出用キツト - Google Patents
ナイアシン検出用試験紙、結核菌検出方法および結核菌検出用キツトInfo
- Publication number
- JPS60207598A JPS60207598A JP6387884A JP6387884A JPS60207598A JP S60207598 A JPS60207598 A JP S60207598A JP 6387884 A JP6387884 A JP 6387884A JP 6387884 A JP6387884 A JP 6387884A JP S60207598 A JPS60207598 A JP S60207598A
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- JP
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- Investigating Or Analyzing Non-Biological Materials By The Use Of Chemical Means (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は結核菌のナイアシン検出用試験紙、結核菌検出
方法および結核菌検出用キットに関する。
方法および結核菌検出用キットに関する。
一般に結核菌、特にヒト型結核薗（Ｍｙｃｏｂａｃｔ−
ｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）が産生ずるナ
イアシンを検出するナイアシン試験は結核菌鑑別のため
の重要な試験である。ナイアシン試験の方法として、従
来アニリンエタノール液とブロムシアン液を用いる方法
（結核指針法）が使用されてきたが、試薬の保存性がよ
くない事や、ブロムシアン取扱い上の危険性のため簡易
な試験紙法が開発さ扛た。
ｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）が産生ずるナ
イアシンを検出するナイアシン試験は結核菌鑑別のため
の重要な試験である。ナイアシン試験の方法として、従
来アニリンエタノール液とブロムシアン液を用いる方法
（結核指針法）が使用されてきたが、試薬の保存性がよ
くない事や、ブロムシアン取扱い上の危険性のため簡易
な試験紙法が開発さ扛た。
一般に、ナイアシン試験の手順として、まず４〜６週間
小川培地で培養した結核菌に熱い蒸留水を注ぎ、ナイア
シンの抽出を行い、この抽出液を小試験管に移して検液
とする。検液作製の手順については上記従来法、試験紙
法ともほぼ同様である。
小川培地で培養した結核菌に熱い蒸留水を注ぎ、ナイア
シンの抽出を行い、この抽出液を小試験管に移して検液
とする。検液作製の手順については上記従来法、試験紙
法ともほぼ同様である。
しかるのち、従来法ではこの検液にアニリンエタノール
欲とブロムシアン液を滴加し、検液が黄色に発色したも
のをナイアシン試験陽性と判定する。一方、試験紙法で
は検液に試験紙を投入し、試験紙上に赤い発色を認めた
ものをナイアシン試験陽性とするものが多い。
欲とブロムシアン液を滴加し、検液が黄色に発色したも
のをナイアシン試験陽性と判定する。一方、試験紙法で
は検液に試験紙を投入し、試験紙上に赤い発色を認めた
ものをナイアシン試験陽性とするものが多い。
しかし、従来法と試験紙法の判定方法、特に、発色の色
調が上記のように相当異なるため、従来法に慣扛た使用
者には異和感を与え、判定しがたいという欠点がある。
調が上記のように相当異なるため、従来法に慣扛た使用
者には異和感を与え、判定しがたいという欠点がある。
また市販のナイアシン試験紙は投入方向が決められてい
るにもかかわらず、試験紙の上下が同形であり、しかも
各試薬は無色であるため上下を混同するという欠点もあ
った。
るにもかかわらず、試験紙の上下が同形であり、しかも
各試薬は無色であるため上下を混同するという欠点もあ
った。
そこで、これらの欠点を解決すべく、本発明者等は涙紙
片の一端にクロラミンＴの含浸部を形成し、他端にパラ
アミノ安息香酸ナトリウム塩の含浸部を形成し、両端の
間に、該クロラミンＴの含浸部に近い方にクエン酸の含
浸部を、該パラアミノ安息香酸ナトリウム塩の含浸部に
近い方にチオシアン醒カリウムの含浸部上形成し、パラ
アミノ安息香酸ナトリウム塩の含浸部からなる一端？ク
ロラミンＴの含浸部からなる他端とは異なる形状に裁断
してなるナイアシン検出用試験紙を創製した。好ましく
は、上記パラアミノ安息香酸ナトリウム塩の含浸部から
なる一端を三角形のとがった形状に裁断する。
片の一端にクロラミンＴの含浸部を形成し、他端にパラ
アミノ安息香酸ナトリウム塩の含浸部を形成し、両端の
間に、該クロラミンＴの含浸部に近い方にクエン酸の含
浸部を、該パラアミノ安息香酸ナトリウム塩の含浸部に
近い方にチオシアン醒カリウムの含浸部上形成し、パラ
アミノ安息香酸ナトリウム塩の含浸部からなる一端？ク
ロラミンＴの含浸部からなる他端とは異なる形状に裁断
してなるナイアシン検出用試験紙を創製した。好ましく
は、上記パラアミノ安息香酸ナトリウム塩の含浸部から
なる一端を三角形のとがった形状に裁断する。
本発明はさらに結核菌を含む検体を小川培地でで４週間
培養し、充分な菌量が得られたら、培地上に熱蒸留水を
注加し、培地表面を水平に保ち１５〜３０分間ナイアシ
ンの抽出を行い、抽出液０．６−を小試験管にとり、特
許請求の範囲第１項記載の試験紙をパラアミノ安息香酸
ナトリウム塩の含浸部を下にして該試験管にへ扛で密栓
し、時々試験管を振り、１５分後に柚四織よの発色を観
察し、この発色を、同様の小試験管にナイアシン陽性コ
ントロール液を滴加したものを（＋）の判定のだめの色
調として比較し、ナイアシンの生成をた遮光びんとナイ
ア”シン陽性コントロール敦ヲ入ｎて密栓したびんから
なる結核菌検出用キットをも包含する〇 図面を参照しつつ本発明を具体的に説明すると、第１図
は本発明のナイアシン検出用試験紙の概略図であり、１
は戸紙片であって、吸水時に形状を保てるに充分な厚み
を肩している。２はクロラミンＴの含浸部であり、３は
クエン酸の含浸部であ２．３．４．５の含浸部は各々互
いに重なり合うことなく間隔をあけて設けである。ここ
で、ｐ紙ｉ通 片の一端であるパラアミノ安息香酸ナトリウム含浸部５
を他端のクロラミンＴ含浸部２とは異なる形状、例えば
戸紙片の長辺に対して４５°の角度で裁断する。
培養し、充分な菌量が得られたら、培地上に熱蒸留水を
注加し、培地表面を水平に保ち１５〜３０分間ナイアシ
ンの抽出を行い、抽出液０．６−を小試験管にとり、特
許請求の範囲第１項記載の試験紙をパラアミノ安息香酸
ナトリウム塩の含浸部を下にして該試験管にへ扛で密栓
し、時々試験管を振り、１５分後に柚四織よの発色を観
察し、この発色を、同様の小試験管にナイアシン陽性コ
ントロール液を滴加したものを（＋）の判定のだめの色
調として比較し、ナイアシンの生成をた遮光びんとナイ
ア”シン陽性コントロール敦ヲ入ｎて密栓したびんから
なる結核菌検出用キットをも包含する〇 図面を参照しつつ本発明を具体的に説明すると、第１図
は本発明のナイアシン検出用試験紙の概略図であり、１
は戸紙片であって、吸水時に形状を保てるに充分な厚み
を肩している。２はクロラミンＴの含浸部であり、３は
クエン酸の含浸部であ２．３．４．５の含浸部は各々互
いに重なり合うことなく間隔をあけて設けである。ここ
で、ｐ紙ｉ通 片の一端であるパラアミノ安息香酸ナトリウム含浸部５
を他端のクロラミンＴ含浸部２とは異なる形状、例えば
戸紙片の長辺に対して４５°の角度で裁断する。
このような形状の試験紙のパラアミノ安息香酸ナトリウ
ム塩含浸部からなる一端を下にして投入する場合、その
形状が他端の形状と異なっていることは有効な目印とな
り上下を混同するような事故を防止できる。
ム塩含浸部からなる一端を下にして投入する場合、その
形状が他端の形状と異なっていることは有効な目印とな
り上下を混同するような事故を防止できる。
投入さｔた試験紙のパラアミノ安息香酸ナトリウム塩は
検液中へ浴出する。パラアミノ安息香酸は発色剤であっ
て、ナイアシン陽性の場合、従来法と同様に検液自体が
黄色に発色するため）従来法に慣れている使用者も異和
感なく判定できる。
検液中へ浴出する。パラアミノ安息香酸は発色剤であっ
て、ナイアシン陽性の場合、従来法と同様に検液自体が
黄色に発色するため）従来法に慣れている使用者も異和
感なく判定できる。
ナイアシンの検液は通常０．５−と非常に少量であるた
め、試験管も管口径１０ｍｍ程度のものが用いられる。
め、試験管も管口径１０ｍｍ程度のものが用いられる。
その際、投入される試験紙が従来品のわれない。したが
って本発明の試験紙のようにパラアミノ安息香酸ナトリ
ウム塩の含浸部を尖鋭に従来、試験紙法で使用される試
験紙では発色剤としてｐ−アミンサリチル酸ナトリウム
塩を使用しているが、本発明の試験紙においては上記の
如く発色剤としてｐ−アミン安息香酸ナトリウム塩を使
用している。ｐ−アミノ安息香酸ナトリウム塩を使用す
ることによる効果は第２図に示すとおりであって、従来
のｐ−アミンサリチル酸ナトリウム塩を使用した場合に
比較して著しく発色強度が改善される。
って本発明の試験紙のようにパラアミノ安息香酸ナトリ
ウム塩の含浸部を尖鋭に従来、試験紙法で使用される試
験紙では発色剤としてｐ−アミンサリチル酸ナトリウム
塩を使用しているが、本発明の試験紙においては上記の
如く発色剤としてｐ−アミン安息香酸ナトリウム塩を使
用している。ｐ−アミノ安息香酸ナトリウム塩を使用す
ることによる効果は第２図に示すとおりであって、従来
のｐ−アミンサリチル酸ナトリウム塩を使用した場合に
比較して著しく発色強度が改善される。
第２図はパラアミノサリチル酸ナトリウム塩とパラアミ
ノ安息香酸ナトリウム塩による発色強度の差を示すグラ
フであって、縦軸は４７０情μにおける光学密度であり
、横幅はナイアシン濃度９５％エタノール中の浴液につ
いての値である。
ノ安息香酸ナトリウム塩による発色強度の差を示すグラ
フであって、縦軸は４７０情μにおける光学密度であり
、横幅はナイアシン濃度９５％エタノール中の浴液につ
いての値である。
第３図は本発明の結核菌検出用キットを例示した概略図
であって、袋６の中に遮光びん７の中に試験紙１を入れ
栓８で密栓したものとナイアシン陽性コントロール液９
を入れた滴びん１０を栓１１によって密栓したものとが
封入されていへ遮光びん７に吸湿剤としてシリカゲルを
分包したもの１２を入れてもよい。
であって、袋６の中に遮光びん７の中に試験紙１を入れ
栓８で密栓したものとナイアシン陽性コントロール液９
を入れた滴びん１０を栓１１によって密栓したものとが
封入されていへ遮光びん７に吸湿剤としてシリカゲルを
分包したもの１２を入れてもよい。
以下実施例、比較例によって本発明をより詳細に説明す
る。
る。
実施例り
まず下記組成を有する１％小川培地を調製した：ＫＨ２
ＰＯ４１０ｇ グルタミン酸ナトリウム １０ｇ ２％マラカイトグリーン ６〇− グリセロール ６Ｍ 蒸留水 １０００ｄ 全卵液 ２０００＃＋１！ この小川培地を１９Ｘ１６０關の試験管に７−ずつ分注
し、９０℃６０分間凝固滅菌しながら斜面培地とした。
ＰＯ４１０ｇ グルタミン酸ナトリウム １０ｇ ２％マラカイトグリーン ６〇− グリセロール ６Ｍ 蒸留水 １０００ｄ 全卵液 ２０００＃＋１！ この小川培地を１９Ｘ１６０關の試験管に７−ずつ分注
し、９０℃６０分間凝固滅菌しながら斜面培地とした。
これに表１の抗酸菌７６株を接種し３７℃で４週間培養
した。１本の試験管の培地表面当り２．０−の熱した蒸
留水を注ぎ、培地表面を水平に保ち、３０分間ナイアシ
ンを抽出し、抽出液の０．６−を小試験管へ分注し、本
発明の試験紙（小林製薬株式会社製のナイアシンテスト
「小林」）を投入し、発色を１５分後に判定した。比較
のために抽出液０．２ｍ１（同時にブランク用に０．２
ｍｇ）についてアニリン法による試験を並行して行なっ
た。
した。１本の試験管の培地表面当り２．０−の熱した蒸
留水を注ぎ、培地表面を水平に保ち、３０分間ナイアシ
ンを抽出し、抽出液の０．６−を小試験管へ分注し、本
発明の試験紙（小林製薬株式会社製のナイアシンテスト
「小林」）を投入し、発色を１５分後に判定した。比較
のために抽出液０．２ｍ１（同時にブランク用に０．２
ｍｇ）についてアニリン法による試験を並行して行なっ
た。
試験は２回ずつ行なった。結果は表１に示すとおりであ
る。
る。
表１から明らかなとおり、マイコバクテリウム・マリナ
ム（Ｍ、 ｍａｒ ｉ ｎｕｍ ）以外の菌株について
は両者とも同様の結果が得られた。
ム（Ｍ、 ｍａｒ ｉ ｎｕｍ ）以外の菌株について
は両者とも同様の結果が得られた。
マイコバクテリウム・マリナムはナイアシンの産生がほ
とんどないか、非常に少ないといわれており、上記結果
にもばらつきが見られるが、ナイアシンテスト「小林」
で（＋）と判定されたものが２検体あるのに対し、アニ
ＩＪン法では（±）と（−）のみであり、ナイアシンテ
スト「小林」の方がアニリン法よりナイアシンに対する
感度のよいことがわかる。
とんどないか、非常に少ないといわれており、上記結果
にもばらつきが見られるが、ナイアシンテスト「小林」
で（＋）と判定されたものが２検体あるのに対し、アニ
ＩＪン法では（±）と（−）のみであり、ナイアシンテ
スト「小林」の方がアニリン法よりナイアシンに対する
感度のよいことがわかる。
比較例
本発明の試験紙に発色剤として使用したパラアミノ安息
香酸す） ＩＪウム塩（ＰＡＢ）と従来の試験紙の発色
剤として使用されていたパラアミノサリチル酸ナトリウ
ム＜１）ＡＳ）との発色強度の比較を行なった。
香酸す） ＩＪウム塩（ＰＡＢ）と従来の試験紙の発色
剤として使用されていたパラアミノサリチル酸ナトリウ
ム＜１）ＡＳ）との発色強度の比較を行なった。
まず、Ｏ；２．５；５；１０；２０；４０；６０；ｓｏ
；ｉｏｏμ９／−のニコチン酸（ナイアシン）溶液を、
ＪＷｌ−た、ＰＡＢ用にさらに１．２５μ９７ｍ７！の
溶液も調製した。
；ｉｏｏμ９／−のニコチン酸（ナイアシン）溶液を、
ＪＷｌ−た、ＰＡＢ用にさらに１．２５μ９７ｍ７！の
溶液も調製した。
各濃度のナイアシン浴液を０．６−ずつ小試験管（１３
Ｘ７５１１１１１）に分注し、試験紙を投入した。
Ｘ７５１１１１１）に分注し、試験紙を投入した。
試験紙を投入後１５分して発色液の４７０．ｎｍにおけ
る吸光度を分光光度計を使用して測定した。
る吸光度を分光光度計を使用して測定した。
試験は３回ずつ行なった。結果は表３に示し、第２図に
グラフとして表わした。第２図において横軸はナイアシ
ンの濃度（μ９／ｍｔ ） 、縦軸は４７０ｎｍにおけ
る光学密度である。
グラフとして表わした。第２図において横軸はナイアシ
ンの濃度（μ９／ｍｔ ） 、縦軸は４７０ｎｍにおけ
る光学密度である。
表３および第２図から明らかなとおり、本発明で発色剤
として使用したパラアミノ安息香酸ナトリウム塩の方が
はるかに発色強度が大である。この点からも本発明の試
験紙を使用すれば従来のものに比べて結核菌の検出が簡
便に行えることは証明される。
として使用したパラアミノ安息香酸ナトリウム塩の方が
はるかに発色強度が大である。この点からも本発明の試
験紙を使用すれば従来のものに比べて結核菌の検出が簡
便に行えることは証明される。
第１図は本発明のナイアシン検出用試験紙の概略図であ
り、１は戸紙片であって、吸水時に形状を保てるに充分
な厚みを有している。２はクロラミンＴの含浸部であり
、３はクエン酸の含浸部であり、４はチオシア酸カリウ
ムの含浸部であり、５はパラアミノ安息香酸ナトリウム
の＠反部である。第２図はパラアミノサリチル酸ナトリ
ウム塩とパラアミノ安息香酸ナトリウム塩による発色強
度の差を示すグラフであって、縦軸は４７０ｍμにおけ
る光学密度であり、横軸はナイアシン濃度９５％エタノ
−次中の溶液についての値である。 第３図は本発明の結核菌検出用キットを例示した概略図
であって、袋６の中に遮光びん７の中に試験紙１を入れ
栓８で密栓したものとナイアシン陽性コントロール液９
を入れた滴びんｌＯを栓１１によって密栓したものとが
封入されてい４遮光びん７に吸湿剤としてシリカゲルを
分包したもの１２を入れてもよい。 特許出願人 小林製薬株式会社 （外４名）
り、１は戸紙片であって、吸水時に形状を保てるに充分
な厚みを有している。２はクロラミンＴの含浸部であり
、３はクエン酸の含浸部であり、４はチオシア酸カリウ
ムの含浸部であり、５はパラアミノ安息香酸ナトリウム
の＠反部である。第２図はパラアミノサリチル酸ナトリ
ウム塩とパラアミノ安息香酸ナトリウム塩による発色強
度の差を示すグラフであって、縦軸は４７０ｍμにおけ
る光学密度であり、横軸はナイアシン濃度９５％エタノ
−次中の溶液についての値である。 第３図は本発明の結核菌検出用キットを例示した概略図
であって、袋６の中に遮光びん７の中に試験紙１を入れ
栓８で密栓したものとナイアシン陽性コントロール液９
を入れた滴びんｌＯを栓１１によって密栓したものとが
封入されてい４遮光びん７に吸湿剤としてシリカゲルを
分包したもの１２を入れてもよい。 特許出願人 小林製薬株式会社 （外４名）
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 （υ Ｆ紙片の一端にクロラミンＴの含浸部を形成し、
他端にパラアミノ安息香酸ナトリウム塩の含浸部を形成
し、両端の間に、該クロラミンＴの含浸部に近い方にク
エン酸の含浸部を、該パラアミノ安息香酸ナトリウム塩
の含浸部に近い万にチオシアン酸カリウムの含浸部を形
成し、パラアミノ安息香酸す） ＩＪウム塩の含浸部か
らなる一端をクロラミンＴの含浸部からなる他端とは異
なる形状に裁断してなるナイアシン検出用試験紙。 （２）ハラアミノ安息香酸ナトリウム塩の含浸部からな
る一端を尖鋭な形状に裁断してなる特許請求の範囲第１
項記載の試験紙。 （３１結核菌を含む検体を小川培地で４週間培養し、光
分な菌量が得られたら、培地上に熱蒸留水を注加し、培
地表面を水平に保ち１５〜３０分間ナイアシンの抽出を
行い、抽出液０．６ｍ／全小試験管にとり、特許請求の
範囲第１項記載の試験紙をパラアミノ安息香酸ナトリウ
ム塩の含浸部を下にして該試験管に入ｎて密栓し、時々
試験管を振り、１５分後に抽出液ｌの発色全観察し、こ
の発色を、同様の小試験’ｔにナイアシン陽性コントロ
ール液を滴加したものを（＋）の判定のだめの色調とし
て比較し、ナイアシンの生成を判定することからなる結
核菌検出方法。 （４−）ナイアシン陽性コントロール液ｆｒ”ＡｙＭリ
ン酸緩衝液（ｐＨ６，４）と０．０２％フェノールレッ
ド９５％エタノール溶液との混合物で必る特許請求の範
囲第３項記載の方法。 （引 特許請求の範囲第１項記載の試験紙を入れて密栓
した遮光ぴんとナイアシン陽性コントロール液を入扛で
密栓したびんからなる結核菌検出用キ、ッ ト。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP6387884A JPS60207598A (ja) | 1984-03-30 | 1984-03-30 | ナイアシン検出用試験紙、結核菌検出方法および結核菌検出用キツト |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP6387884A JPS60207598A (ja) | 1984-03-30 | 1984-03-30 | ナイアシン検出用試験紙、結核菌検出方法および結核菌検出用キツト |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS60207598A true JPS60207598A (ja) | 1985-10-19 |
| JPH0524461B2 JPH0524461B2 (ja) | 1993-04-07 |
Family
ID=13241989
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP6387884A Granted JPS60207598A (ja) | 1984-03-30 | 1984-03-30 | ナイアシン検出用試験紙、結核菌検出方法および結核菌検出用キツト |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS60207598A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0622626A2 (de) * | 1993-04-23 | 1994-11-02 | Roche Diagnostics GmbH | System zur Analyse von Inhaltsstoffen flüssiger Proben |
-
1984
- 1984-03-30 JP JP6387884A patent/JPS60207598A/ja active Granted
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0622626A2 (de) * | 1993-04-23 | 1994-11-02 | Roche Diagnostics GmbH | System zur Analyse von Inhaltsstoffen flüssiger Proben |
| EP0622626A3 (de) * | 1993-04-23 | 1995-01-25 | Boehringer Mannheim Gmbh | System zur Analyse von Inhaltsstoffen flüssiger Proben. |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0524461B2 (ja) | 1993-04-07 |
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| EXPY | Cancellation because of completion of term |