JPS60203197A - アデノシン一リン酸のアデノシン三リン酸への変換方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 大発明は、アデノシン−リン酸（以下ＡＭＰという。）
をアデノシンニリン酸（以下ＡＴ１１という。）へ変換
する方法に関するものである。

生体内において、生命を維持するために故多くの生合成
反応が１（￥素を触媒としで営まれている。

それらのうち、特に重要な結合反応を行うに当たっては
、　ＡＴＰがエネルギー源又は補助因子として必要であ
る。この際、　ＡＴＰ　Ｌ！エネルギー源又は補助因子
として働いたのら、アデノシンニリン酸（以下ＡＤＩＩ
という。）又はＩＰに分解され、消費されてしまうこと
になる。一方１１１↓Ｊ江、牛体内の反応を工業的に工
場内の反応器中で再現しようとする試みが盛んに行わり
、るようになってきている。

これは、近代化学工業の見向しから生体内反応の省エネ
ルギー性、無公害性等が注目さるようになったものであ
り、特にファイン斤ミカルの分す１ｆにおいて必須の技
術になろうとしており、加水分解反応、異性化反応等の
技術分野においてはすでに実用化が成功している。しか
し、結合反応においては上述のように、　ＡＴＰという
高価な物質をエネルギー源又は補助因子として消費する
ために少なくとも経済的には成立ち得ないという問題が
一実用化を妨げている。すなわち、　’　ＡＴＰが消費
された産物であるへ叶、　ＡＭＩＩ、特に最低のエネル
ギーレベルに消費されつくしたＡＭＰをＡＴＰに再生変
換することがこの問題点を打開する重要な技術となるの
である。

このような観点から、　ＡＴＰへ再生変換する技術に関
する研究が種々行われている。例えば、生体内では解糖
系の反応等によりＡＴＰの生産が行われているので、こ
れを利用した試みが知られている。

すなわち、微生物菌体を用いて消費されたＡＴＰの再生
補給するというものなどがある。しかし、これは副反応
の併発、変換効率の悪さ等の点で実用のレベルには達し
ていない。

一方、耐熱性の１１￥素ではないが、　ＡＴＰ変換酵素
の利用も試のられている。例えば、ホワイトサイズらは
アデノシンを酵素的に変換して得たＡＭＰを動物筋肉の
アデニル酸キナーゼ及び大腸菌の酢酸キナーゼでΔＴＰ
に変換している（ジャーナル・オブ・アメリカン・ケミ
カル・ソサ：Ｉ−ティ、　１００　Ｓ。

１号、　３０４　ｇ、　１９７８年）。さらに、ホワイ
トサイズらは上記両酵素をブロムシアンで固定化し、　
ＡＭＰからＡＴＰへの連続変換を試みているが、安定化
剤非存在下では活性残存率は故パーセンｉ・以下にずぎ
す、また長１す１安定性もすこぶる悪かったことを幸す
告している（エンザイムエンジニアリング、２巻、　２
１７　ｗ、　１９７４年、イー・ケ−・パイら偏、プレ
ナムプレス）。しかも、固定化酵素を用い、安定化剤を
添加しても２反応に長時間を要し、変換効率もあまり高
くないうえに、化学工業的なレベルでの長時間の運転に
は利用できないものであった。

本発明者らは、特に最低のエネルギーレベルに分解した
産物である＾ＭＰをＡＴＰに変ｉ＃！再生する技術につ
き、鋭意研究した結果、最ＪＩうノ十育温度が５０′”
Ｃないし８５°Ｃである微生物の産生ずる変換酵素を使
用するに、短時間１高収率で長時間安定してＡＭＰをＡ
’ｌ’ｌ＋に変換できることを見い出しく特開昭５８＝
１２９９　Ｃｒ　２号）、さらにＡＭＰとＡ　’Ｉ’　
Ｉ’との混合比を特定の条件に制４ｉ１１すると、安価
で、かつ操作性良く。

長期間安定してへ肝を実質上はとんど１００％で／ＩＴ
Ｐに変換できることを見い出し、先に出願した（特開昭
５８−２０９９９０号）。しかしながら、これらの方法
でも化学工業的レベルでのＡＴＰへの連続再生産におけ
る生産性の点でまだ不十分であり、かつ高価な＾Ｔ１１
を触媒として、まだがなり多ｆ７１に使用しなけれはな
らず、化学工業的レベルでのＡＴＩＩへの連続変換には
経済的に不満昆であった。しがも、　ＡＴＩＩへの変換
率を厳密にｉｌｉ制御するには不十分であった。

そこで９本発明者らはこれらの点を改良すべくさらに鋭
意（ＩＩＦ究した結果、　ＡＭＰ　濃度を５ｍＭ以上に
設定すると、＾Ｔ１１　＞Ｈ度を１１６著に低減化でき
、これにより安価で生産性よく、かつ長期間安定にＡＭ
Ｐを実質上はとんど１００％／ＩＴＰに変換できること
を見い出し５本発明を完成した。

ずなわら１本発明は最適生育温度が５０’ｃないし８５
℃である微生物の産生ずるアデノソンー・リン酸をアデ
ノシンニリン酸に変換する酵素又はアデノシンニリン酸
をアデノシンニリン酸に変換する酵素を固定化し、得ら
れたアデノシン−リン酸をアデノシンニリン酸に変換す
る固定化酵素及びアデノシンニリン酸をアデノシンニリ
ン酸に変換する固定化酵素を糾み合わせてアデノシンニ
リン酸をアデノシンニリン酸に変換させるに際し、アデ
ノンンーリン酸の温度を５ｍＭ以北に設定することを特
徴とするアデノンンーリン酸のアデノシンニリン酸への
変換方法である。

本発明は、　ＡＭＰをへ旧Ｊに変換するごとと、ここで
生成したＡ　１１　ＰをＡＴＰに変換するごとがらなり
。

ＡＭＰをＡＤＰに変換する酵素としては２例えばアデニ
ル酸キナーゼが使用され、この１（Ｗ３　ＡＭ＋１への
リン酸供与体としてＡＴＰが使用される。次いで、へ叶
をＡＴＰに変換する酵素としては、　（Ｊｌｊえは酢酸
キナーゼ、カルバミン酸ギナーゼ、クレアーｆ−ンキナ
−ゼ、３−ボスホグリセリン酸キナーゼ、ピルビン酸キ
ナーゼ、ポリリン酸キナーゼ等多くのものが使用できる
が、リン酸供与体の価格、　Ａ１’Ｐへの変換粘性、酵
素の人手の容易さ等を勘案すると、酢酸キナーゼを使用
するのが最も有利であり、この際リン酸供与体としては
アセチルリン酸が使用される。このように、アデニル酸
キナーゼを使用するに際して各酵素のリン酸供与体とし
てはＡＴＰとアセチルリン酸を使用することになるが、
リン酸供与体としてのＡＴＰは最終変換物であるＡＴＰ
を循環使用することができるので、結局リン酸供与体と
してはアセチルリン酸だりを供給すればよいことになる
。このようなシステム化により効率的な１画がはかれる
のもこれら両酵素の利点である。

以上のように、二種類の変換酵素を使用することにより
ＡＭＰをＡＴＩＩに変換することが可能になるが、これ
ら酵素は最適生育温度が５０℃ないし８５℃である微生
物の産生ずる酵素であることが必要である。このような
微生物としては、バチルス・ステアロサーモフィルス、
バチルス・プレビス、バチルス・コアギユランス、バチ
ルス・サーモプロテオリティクス３バチルス・アソ）カ
ルダリウス等のバチルス属の微生物、クロストリジウム
属の微生物、ザーモアクチノマイセス属の微生物、アク
ロモバクタ−属の微生物、ストレプトマイセス属の微生
物、ミクロポリスボラ属の微生物、サーーマス・アクア
ティクス、ザーマス・→ノ゛−モフィルス、ザーマス・
フラブス等のサーマス属の微生物。

サーモミクロビウム属の微生物等があげられる。

また、これら微生物の遺伝子を導入した常温生育微生物
も含まれる。なお、これら微生物の中でもアデニル酸キ
ナーゼ、酢酸キナーゼの両酵素の産生に特に適したもの
はバチルス・ステアロサーモフィルスである。この微生
物から得られる両酵素は精製が容易であり、比活性が高
い。

本発明において、上記酵素を固定化して使用する。その
ためには、酵素を適当な担体１例えばセルロース、デキ
ストラン、アガロース等のような多Ｕ！！　類のｙＨＢ
体、ポリスチレン、エチレン−マレイン酸共重合体、架
橋ポリアクリルアミドη二のようなビニルポリマーの誘
導体、Ｌ−アラニン−１、−グルタミン酸共重合体、ポ
リアスパラギン酸等のようなポリアミノ酸又はポリアミ
ドの誘導体。

ガラス、アルミナ、ヒドロキシアパタイト等のような無
機物の誘導体等に結合、包括あるいは吸着せしめれはよ
く、これをカラム等の反応器に充填して使用すればよい
。

本発明で八１Ｉｌｌ）を訂１）に変換するには、　ＡＭ
１１濃度を５ｍＭ以上の濃度に設定することが必要であ
り。

特にＨａｍ門〜２Ｍが好ましく’、　１０ｍＭ〜５００
酵が最適である。そのときに、酢酸キナーゼ反応へのリ
ン酸供与体であるアセチルリン酸を５ｍＭ〜５００ｍＭ
、好ましくはｌ０ｍＭ〜４００ｍＭ、より好ましくは１
０ｍＭ〜３００ｍＭとし、上記２種の活性とともに供給
するＡＴＰを。

ＡＭＰｎ度に応じて下記（イ）式を満足する量だけ充填
層型反応器の一端から供給し５反応器内でＡＭＰ−八Ｄ
　Ｐ−・Ａ　’ｒ　１１の変換を行わしめればよい。

伺 〔ただし、八ＭＰは八ＶＩＰの７農度（ｍＭ）　、＾１
’Ｐば八ＴＰの濃度（ｍＭ）を表し、Ｔは削〕Ｐを訂）
」に変換する酵素の固定化酵素活性とＡＭＩ＋を／ＩＩ
ＩＰに変換する酵素の固定化酵素活性との比で１以−Ｉ
−のＩＥの数を表す。〕 その際２反応器から溶出した反応液を適当な分析システ
ムで分析し、＾ＭＰ、　ＡＤＩＩ、　ＡＴｌｌの各製置
及びＡＴＰへの変換率をめることができる。このとき１
反応器中に充填する固定化酵素量としては。

例えばＡＭＰ瀉度に応して反応器ｍ１当り０−００１　
ｊｊｊ位〜ｌＸ１０５華位、好ましくは０．０巨１１位
〜ｌＸｌ０’ｊ１３．位の間の適当な贋を選定すること
かできる。また、流速としては１反応器の大きさ、固定
化酵素量及び４肝深度により異なるか、　（１／ｌ！え
は０．３．ｒ！ｎ／時間〜１×１０′′７！／時間、好
ましくは３μＩ！／時間〜ｌＸ１０５７！／時間の適当
な流」声をが定ずη。

はよい。反応器から溶出した反応液の一部を反応器人口
に循環して戻し、初Ｈ！Ｊ４に供給していたＡ　’Ｉ’
　Ｐ液の供給を停止することによって］Ｓ続的に／ＩＴ
Ｉ＋を再生産することができる。

上記のＡＴＰ再生反応系を実施するための装置としては
、　４．（ｑ７供給部、上記２柿類の変換酵素を含む反
応槽、自動→ノンプリング部２分析装置及び制福１部か
ら構成される装置を具部１したものを用いるのが望まし
い。その基質供、給部としては１例えば４田１槽、　Ａ
ＴＰ槽、アセチルリン酸相から構成され。

定型ポンプ等の可変則送液装置と自動調節弁の作動によ
り一定流頃、一定濃度で酵素反応槽に各Ｊ、（質を送液
することができる。自動サンプリング部は、酵素反応槽
からの反応液をあらかしめ設定した時間間隔で自動的に
一定量採取し２分析装置に送ることができる。分析装置
はＡＭＰ、　ＡＤＰ、＾ＴＰの各濃度を計算し、この値
をもとに制御部はｉｉＪ変尾送液装置と自動調整弁の作
動を制御し、　ＡＴＰ丙生反応系に供給する４肝、　Ａ
ＴＰ及びアセチルリン酸の甲を調整することができる。

また１反応器は勿論室温で使用してもよいが＋　／Ｉ！
！＋度を維持する手段を付加する方が好ましい。また２
反応器からの反応液の分析システムとしては、　ＡＭＰ
、　Ａ叶、＾Ｔ１１を検出ずろ〕ｆ法であれば特に限定
されないが１例えば高速液体クロマ）・グラフ装置を用
いるのが好ましい。さらＧこ、固定化１！ｉ＃素４Ｉ、
性とは、固定化された酵素の活性を表し１例えばアデニ
ル酸キナ−セの場合は八Ｍ＋’−４−ＡＴＩ’→２・Ａ
ＩＩＰなる方向のマ古性を示し、酢酸キナーゼの場合は
へ〇Ｐ十アセチルリン酸−ＡＴ１１＋酢酸なる方向の活
性を示す。この・活性を測定するには、所定量の固定化
酵素１例えば活性の度合に応じて５〜ｌＯμｌを、活性
測定用溶液に加え３遊風の酵素と同様にして分光光度計
で吸光度変化として追跡して測定すればよい。酵素活性
１華位とは、３０°Ｃでアデニル酸キナーゼの場合。

１分間に１マイクロモルのＡＤＰを生成する里を。

酢酸キナーゼの場合、１分間に１マイクロモルのＡＴＰ
を生成するダである。

本発明に用いられるＡ　１’　１）としては、上記反応
による最終変換物であるＡＴＩ’を循環使用してももら
ろんよい。この場合には、結局リン酸供ｒう体としては
、アセチルリン酸だけを供給ずわ、ばよいことになる。

本発明の実施にあたって、　ＡＭＰをＡＴＩ）に変換す
るときの温度とし７ては、常ｌ晶付近ないし酵素産生微
生物の最適生育温度の５°Ｃ以下に設定するのが好）：
己しい。また、計１）をＡ　’ｒ　ＩＩに変換するとき
のｐＨとしては、中性伺近、ずなわち６．５〜ＩＬ　好
ましくは６．５〜９．０．さらに好ましくは７〜８の範
囲が使用される。緩衝液としては、これらのｐｌ＋に適
した通常のものを使用することができる。例えば。

７付近ではリン酸塩、イオダゾール塩、Ｉ−リス塩酸塩
、コリジン塩、ハルビタ〜ル塩酸塩等をあげることがで
きる。また、アデニル酸キリー−セと酢酸キナーゼの反
応をより効果的に進行さ−Ｕるために、神々の２価金属
イオンを使用することができイ）。この２価金属イオン
としては２例えばマグ不シウＪ、イオン、マンガンイオ
ンが特に１イ（奨される。

本発明によれは、＾旧）から１買１〕への変換において
、　へＭＰ濃度を５ｍＭ以−にとすることにより酢酸ギ
リーーセ反応のリン酸供与体であるＡＴｐ甲を著しく滅
することかでき、しかもＡ　’ｌ’　Ｐへの変換率を安
定に維持できる。このことにより、化学工業」−１経済
的に２操作」二、多大の効果をもたらすことが可能とな
った。その−１−、へ田〕深度を５ｍＭ以上とすること
により１反応単位時間当り、」１１位固定化酵素量当り
の変換された前’ｐ　量（生産性）と、固定化酵素量と
の関係かＡＭＰ濃度濃度５思 値となる。このことは、流速や固定化酵素活性に多少の
変化が生じても生産性は常に一定であることを示し．化
学工業上．　ＡＴＩＩ変換率を長期にわたり安定に維持
することができる。只−だ２本発明でリン酸供↓Ｊ体と
してのＡＴＰは，充填層型反応２÷；で４肝からＡ　’
Ｉ’　１１に変換されたものでもよいことは利点の一つ
である。さらに、出発Ｉｔ；を灯としては２純枠なＡＭ
Ｐ　テある必要はなく　、　ＡＭＩＩ　ｃ．ｚへｕｐ，
　Ａ′ｒ＋＋のＪＪＩＩわった混合物でもよく．この点
も化学工業」−採用する場合，非常に有利な点である。

また、最初に述べたような生体内で行われている結合反
応を生体外の化学工業的な反応としてマーｌう，いわゆ
るバイオリアクターの稼動がｏＪ能になる。例えば、生
体内の最も重要な反応であるアミノ酸粘性化酵素による
タンパク′６合成反応やペプチド合成反応などは，　Ａ
ＴＰをエネルギー係として必要とし，その１際，使用さ
れる高価なＡ　’ｌ’　＋１は４旧）に消費分解される
ため、生体外でこの反応を行う場合、　ＩＩＭＰを／Ｉ
ＴＩＩに変換再生することが実用上不可欠なことであっ
た。本発明によれば、このような反応の実用化が可能に
なり、この価値は工業上計り知れないものがある。

なお、上のように目的とする１合成反応とＡＴＰの再生
反応とを組み合わせる場合、生成ＡＭＰを目的生成物、
リン酸供与体の反応生成物（例えば酢酸等）等から分離
するシステムも必要になる。これは、クロマトグラフィ
ー等の技術により可能となり、目的とする反応系、　Ａ
ＴＰの再生系、　ＡＭＰの分離系の３者を組み合わせた
化学工業上の１つのシステムとして完成させることにな
る。

本発明は、このようにＡＴＰの再生利用に極めて有用に
適用できるものであるが、観点をかえて。

ＡＭｌｌを原料としたＡＴＰの生産法としてとらえるこ
ともできる。すなわち、　ＡＴＰは医薬品としても重要
な物質であり、工業的レベルで生産されている。

しかし、現行法の発酵法では副産物ができやずいとか、
生産性が悪い等の問題があり、　ＡＴＰの価格も高いも
のにならざるをえなかった。しかし１本発明によればこ
のような問題を一挙に排除でき。

高純度のＡＴＰが生産性よく供給できることも可能であ
る。本発明にはこのような目的も包含されている。

次に１本発明を実施例によりさらに具体的に説明する。

実施例１〜３ アデニル酸キナーゼと酢酸キナーゼは、重版バチルス・
ステアロサーモフィルス由来の標品（住化学工業販売）
を使用した。

゛活性化ＣＩ＋−セファロース４Ｂ　（ファルマシア社
製）５．０ｇを洗浄膨潤後、酢酸キナーゼ２０００華位
を加えて反応させ、固定化酢酸キナ−セ１０３５華位を
得た。同様にして２５０単位のアデニルキナーゼから１
Ｏ１−＜＝位の固定化アデニル酸キナーゼを得た。この
ようにして得た固定化酢酸キナーゼと固定化アデニル酸
キナーゼをＡＴＰ再住産用カラム（内径が１．６　ｃｍ
で長さが７．５　ｃｍ）に充填し、１０ｍ門塩化マグネ
シウムを含む１００ｍＭ００ｍＭイミダゾール塩酸緩衝
液　７．５）に（岩屑した４！Ｌ７ｍＭ　ＡＭＰ、　０
．２５ｍＭ　へＴＰ＋１７０ｍＭアセナルリン酸を１７
０ｍ１／時間の流速でカラムに供給し７た（実施例１）
。このカラムに６Ｊ変送液装置〃、電磁弁及びマイクロ
コンピュータ−を設置した。カラム内の温度を３０°Ｃ
に保った。カラＪ、より溶出された反応液中のＡ１１１
）、　ＡＤＩＴ、＾ＴＰ深度を高速液体クロマトグラフ
装置で定電した。同様にして５１２　、ｉｉ’ξ位の固
定化酢酸キナーゼと５　Ｑ−Ｑｘ位の固定化アデニル酸
キナーゼを実施例１と同様のカラムに充填し、　１０ｍ
Ｍ塩化マグネシウムを含む５０ｍＭイミタ゛ソ゛−／し
塩西変緩衝ン夜（ｐＨ７，５）にン岩屑した２２．７ｍ
Ｍ八ＭＰ、　０．１７ｍＭ　ＡＴＰ、　７８ｍＭアセチ
ルリン酸を１８５　ｍｌ／時間の流速でカラムに供給し
た（実施例２）。また、２５０華位の固定化酢酸キナ一
ゼと２５単位の同定化アデニル酸キナーゼを実施例１と
同様にカラムに充填し、１０ｍ旧話化マグソシウムを含
む２５１イミダヅール塩酸緩衝液（ｐＨ７，５）に溶解
した１０．１ｍＭ　ＡＭＰ、　０．１ｍＭ　Ａ１’Ｐ、
　３４ｍＭアセチルリン酸を１９０ｍ１／時間の流速で
カラムに供給した（実施例３）。

その結果、カラムに各−１（質を供給後、わずかに２０
〜３０分後にすでに八ＭＰは検出されず、　ＡＴｌｌが
９８　、　（１〜９８．９％、　ＡＤＰが１．１〜２．
０％検出された。このとき１反応１時間当り、使用固定
化アデニル酸キナーゼ活性１華位当りの生産性は、実施
例１で５．６ｍＭ、実施例２で５．５ｍＭ、実施例３で
５．２ｍＭであった。

比較例１〜３ 実施例１と同様にして得た固定化酢酸キナ−セ５４単位
と固定化アデニル酸キナーゼ５　、３　ｉｉｉ位とをＡ
ＴＰ再生産用カラム（内径が１　、６ｃｍで長さ７．５
ｃｍ）に充崩し、　］ＯｍＭ塩化マグネシウムを含む２
５ｍＭイミダ・ゾール塩酸ｉ呆ｊ１・青＆　（ｐＨ７，
５）にン容箭′した。３．２ｍＭ　ＡＭＰ、　０．３ｍ
Ｍ　ＡＴＰ、　１１ｍＭアセチルリン酸を５２ｍ１／時
間の流速でカラムに供給した（比較例１）。

同様にして、１２１　貼付の固定化酢酸キナーゼと１２
単位の固定化アデニル酸キナーゼを比較例１と同様のカ
ラムに充填し、１０１塩化マグネシウムを含む２５ｍＭ
イミダゾール塩酸緩衝液（ｐＨ７，５）に溶解した２、
　７ｍＭ八ＭＰ、　０．２７　ｍＭ　ＡＴＰ、　９．２
ｍＭアセチルすン酸を１５０　ｍｌ／時間の流速でカラ
ムに供給した（比較例２）。また、比較例２と同じカラ
ムに１０ｍ　Ｍ　’Ａ７１化マグネシウムを含む２５ｍ
Ｍイミダゾール塩酸手汲’ｉｊｉ’ｌＦｌ　（ｐｌ！　
７．５）にン岩屑した２、　７ｍＭ八Ｍｌ’、　０．０
２７ｍＭＡＴＰ、　９．２ｍＭアセチルリン酸を１５（
１ｍｌ／時間の流速でカラムに供給した（比較例３）。

その結果、　ＡＴＰへの変換率は比較例１では９８．５
％、比較例２では９８．１％、比較例３では７２％であ
り、また生産性は比較例１では２．１ｍＭ、比較例２で
は２．４耐１．　比較例３では１．８＋ｎＭであった。

実施例４ 実施例１と同様にして得た固定化酢酸キナーゼ１２１単
位、固定化アデニル酸キナーゼ１２ｉｉ’ｊ位を前゛Ｐ
再生産用カラム（内径が１．６　ｃｍで長さ７．５ｃｍ
）に充填し、　０１ｍＭ塩化マグネシウムを含む２５ｍ
Ｍイミダゾール卑酸緩ｉＪｊ液（ｐＨ７，５）に溶解し
た５、２ｍＭ八Ｈへ、　０．’（１７ｍＭ　ＡＴＰ、　
１７．８ｍＭアセチルリン酸を１５３ｍ１／時間の流速
でカラムに供給した。

その結果、　ＡＴＰへの変換率は９８．６％に達し、ま
た生産性は４．４ｍＭであった。

比較例４ 実施例１と同様にして得た固定化酢酸キナーゼ１３３華
位、固定化アデニル酸キナーゼｌ；惇ｊｊ８位を／ＩＴ
Ｉ’再生産川再生産川内ラム１．６　ｃｍ、　長さが７
．５　ｃｍ）に充填し、　１０ｎ＋Ｍ塩化マグネシウム
を含む２５ｍＭイミダゾール塩酸緩衝液（ｐＨ７，５）
を溶解した４、４ｍＭ八門へ、　０．３ｍＭ　ＡＴＰ、
１５．５ｍＭアセチルリン酸を８１ｍ１／時聞及び１４
８ｍ１／時間の流速でカラムに供給した。

その結果、　８１ｍ１／時間の流速ではＡＴＰへの変換
率は９８．０％であったが、生産性はｒ、８ｎ＋Ｐであ
った。

一方、　１４８　ｍｌ／時間の流速では訂Ｐへの変換率
は７５％となり、生産性も２．５ｍＭと低いことがわか
った。

実施例５ 実施例１と同様にして得た固定化！１１１酸キナーゼ８
４０単位、固定化アデニル酸キナーゼ８４　、ｔｒｔ位
を内径１．６ｃｍで長さ１０ｃｍのガラス製カラムに充
填し。

１０ｍ−塩化マグネシウムと０．０４％ナトリウムアジ
ドを含む１００ｍＭ００ｍＭイミダゾール塩酸緩衝液　
７．５）にン岩屑した４６．２ｍＭ　ＡＭＰ、　０．２
３ｍＭΔＴＰ　（ＡＴＩ）と八ＭＰの濃度比は０．６３
％）　、　１５６ｍＭアセチルリン酸を２００ｍ１／時
間の流速でカラムに供給し３反応を開始した。３０分後
にカラムからの溶出液（９８，５％を含む）を、　ＡＴ
ＩＩの代わりに八ＴＰと八ＭＰの濃度比が０．６３％と
なるようにカラムに循環供給しｒ　＆）；ｊ運転を開始
した。

その結果１反応開始後２０日間にはたり、　ＡＴＰへの
変換率ハ！１８．５〜９８．７％、生産性は５．４〜５
．５ｍＭで１１１移した。

代理人　児玉維五

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. （１）最適生育’／ｌｒ！ｒ度が５０°Ｃないし８５°
   Ｃである微生物の産生ずるアデノシン−リン酸をアデノ
   シンニリン酸に変換する酵素又はアデノシンニリン酸を
   アデノシンニリン酸に変換する酵素を固定化し、得られ
   たアデノシンニリン酸をアデノシンニリン酸に変換する
   固定化酵素及びアデノシンニリン酸をアデノシンニリン
   酸に変換する固定化酵素を組合せてアデノシンニリン酸
   をアデノシンニリン酸に変換させるｉ際に、アデノシン
   −リン酸の温度を５ｍＭ以」二に設定することを特徴と
   するアデノシン−リン酸のアデノシンニリン酸への変換
   方法。
2. （２）アデノンンーリン酸をアデノシンニリン酸に変換
   する酵素が、アデニル酸キナーゼであり。 アデノシンニリン酸をアデノシンニリン酸に変換する酵
   素が、酢酸キナーゼである特許請求の範囲第１項記載の
   変換方法。