JPS60190863A - アンジオテンシンの定量方法 - Google Patents
アンジオテンシンの定量方法Info
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- JPS60190863A JPS60190863A JP14521581A JP14521581A JPS60190863A JP S60190863 A JPS60190863 A JP S60190863A JP 14521581 A JP14521581 A JP 14521581A JP 14521581 A JP14521581 A JP 14521581A JP S60190863 A JPS60190863 A JP S60190863A
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- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/531—Production of immunochemical test materials
- G01N33/532—Production of labelled immunochemicals
- G01N33/534—Production of labelled immunochemicals with radioactive label
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
本発明は、アンジオテンシンを定−)Jる方法に関−り
る13さらに訂しく(,16、既知1jjj i’il
試桑をカラムクロマトグラフィにより分離し、4!″I
られた保持容量または保持時間により、生体試料中に含
有されるアンジオテンシンI、IIJ5よび■(以下W
に、△1、AIおよび△■と記す)を同様の条171下
にり[171〜グラフイーを行ない、同一の保持容量ま
たは保持時間にJ、すfilられる分画をラジオイムノ
アセイに(=Jすことにより定量する方法に関づる。 内分泌性血圧調節因子には、レニン、アンジオテンシン
、アルトスプロン、カブコールアミンに代表される臂圧
因子およびカリクレイン、キニン、プロスタグランディ
ンに代表される降圧因子の存在が知られている。 AI、A l1J3よびAIUは、それぞれ次の構造が
明らかとなっている。 1 2 3 4 5 G AI:lI−八Sp −Arg −Val −Tyr
−11e ・ l1is −78910 Pro −Phe −11is −1eu ・011Δ
n:lI ・ Asp −Arg −’Jal −丁
Vr −11e −11is −1月゛0 ・ pH(
! ・ 011 △ 11: II −八rg ・ Vat ・ Tyr
−11e ・ 1lis −P1゛0 ・ P 11
e ・ 011このAIは、レニン重質にレニンが作
用し−C1該基質の10番目および11番目のLeu−
Leu結合を切117iザることにJ、り生成され、Δ
■は、△■変1!/I酵素にJ、す△■の8番目と9′
d′j目のPhe−11is結含を切断りることにより
生成され、そして1△■は、アミノペブヂダーゼにより
△■の1番目と2番L1のAsローAr(]結合を切断
JることにJ:り生成Jる。 コh ラA T 、A If 113J= ヒA II
I LA、+ru IEi−上’R作用をイj−Jるこ
とが知られているが、現在で
る13さらに訂しく(,16、既知1jjj i’il
試桑をカラムクロマトグラフィにより分離し、4!″I
られた保持容量または保持時間により、生体試料中に含
有されるアンジオテンシンI、IIJ5よび■(以下W
に、△1、AIおよび△■と記す)を同様の条171下
にり[171〜グラフイーを行ない、同一の保持容量ま
たは保持時間にJ、すfilられる分画をラジオイムノ
アセイに(=Jすことにより定量する方法に関づる。 内分泌性血圧調節因子には、レニン、アンジオテンシン
、アルトスプロン、カブコールアミンに代表される臂圧
因子およびカリクレイン、キニン、プロスタグランディ
ンに代表される降圧因子の存在が知られている。 AI、A l1J3よびAIUは、それぞれ次の構造が
明らかとなっている。 1 2 3 4 5 G AI:lI−八Sp −Arg −Val −Tyr
−11e ・ l1is −78910 Pro −Phe −11is −1eu ・011Δ
n:lI ・ Asp −Arg −’Jal −丁
Vr −11e −11is −1月゛0 ・ pH(
! ・ 011 △ 11: II −八rg ・ Vat ・ Tyr
−11e ・ 1lis −P1゛0 ・ P 11
e ・ 011このAIは、レニン重質にレニンが作
用し−C1該基質の10番目および11番目のLeu−
Leu結合を切117iザることにJ、り生成され、Δ
■は、△■変1!/I酵素にJ、す△■の8番目と9′
d′j目のPhe−11is結含を切断りることにより
生成され、そして1△■は、アミノペブヂダーゼにより
△■の1番目と2番L1のAsローAr(]結合を切断
JることにJ:り生成Jる。 コh ラA T 、A If 113J= ヒA II
I LA、+ru IEi−上’R作用をイj−Jるこ
とが知られているが、現在で
【ま、血月−上り7作用は
、41一体中のAII[の11り定法がIil[立l)
’−cいないため、主としく△Ifの作用にJ、るしの
ど考えられている。 △■【ま、■iii’l腎に夕・1づ−るミネラル■]
ルヂコイド(アンドロスノー1−」ン)放出刺激作用、
■I11動脈に対りる直接数組1作用、■中枢神経を介
り−る面管収れ11作用、J3J、び■)11・′1に
作用してNa貯留、G F R(ル下、K排泄作用等多
様な生理粘性を右し、J、たカブ」−ルアミの10へ・
20 (j′lの背圧作用を右するなど本態性および腎
性高面症を問わず高血圧に係わる因子として重要である
。 また、A■については、副腎皮質に対づ−るアルトス−
jロンの生合成と分泌の促進、コルチゾールと]ルヂコ
ステロンの生合成と分泌の促進等心臓おにび血管に対し
ては血圧上背、心筋に対しては、いわゆるポジティブ−
イノ1−1]ピック作用(positve 1notr
opic action)があること等腎臓に対しては
、腎血流の減少、レニン分泌の抑制等の生理ね5性が知
られている。 したがって、△■からA IIを生成させる△■変換酵
素の活性を阻害づるJ、うな物質、たとえば、t)−3
−メルカプト−−メヂルブに2バノイル−L−ブ[]リ
ン(カブトリル、captori l )を高血圧症の
患者に投与することにより、体内CのAIからA II
J−3よびA IIIの生成を阻害し、昇圧因子を除
く等の治療も考えられている。 しかしながら、これらのシr、 1丁+幾(14を解明
りるだめに、生体内にa)りるAI 、A II it
jよびA11lの(r在1配、生成量あるい(ま浦艮の
測定法および定f(’B法の開発が望J、れ−(いるに
しかかわらヂ、い」:だモイ「立されていない。 Iことえぽ、つΔ−タース゛礼製造のマイクIN・ボン
ドバックC18を充1眞したカラムを使用し、0、(I
IMの耐酸アン−しニウム水溶液と酢酸含イjメヂルア
ル」−ルとを直線グラジェント溶離液どじ、波長210
r+mにJ3ける紫外吸収を測定Jる検出器により、既
知試料の△■、A II、テトラゾカベシタイド(13
J:びii hラベブタイドを分析りるカシムク+a
・/I−グラフ1りb\IJ、力)+ごイ【つ(報告さ
れた。しかしながら、この方法は牛体液中に存在覆るア
ンジン1デンシン等の1万〜100万イjX程度の多作
の試4′81を必要とりるため、直接生体液中のアンジ
オテンシン類を検出し、そして定量り−ることは不可能
で゛ある。 本発明者は、生体液中に存在J8徴吊のAI、AIIお
J、び△■を直接定Tnする方法を開発することを目的
どして検詞し本発明を完成した。 ′?lなわち、本発明は、次の第1■程、第2工程およ
び第3工程からなるアンジオテンシンの定量方法をその
11子とづる・bのである。 (イ)標準試薬アンジオテンシン含右液を特定条件下に
水性系カラムクロマ1〜グラフイーにより分離し、その
保持容量または保持時間を測定する第1]二程、 (ロ)微量のアンジオテンシン含イ1液を第1工程の特
定条4′1下でカラムクロマトグラフィーを行ない、第
1工程で17られた保持容量または保持時間に等しい分
画を得る第2工程、(ハ)第2]−程で得られた分画を
、ラジAイムノアゼイに付してアンジオテンシンを定f
it する第3工程。 本発明のカラムク【」71〜グラフイーに使用づるカラ
ム充填剤としては、細孔径約30Å以上を有し、交1条
基としてカルボキシアルキレン基(−A l ky l
−COOH>を有づるシリカゲル系の充1眞剤をりλ
げることができる。アル4レン基どしては、メチレン阜
またはエチレン基を挙げることができる。flu t’
1基をイjりる充填剤を使用りる揚台にtよ、A II
、△]7および△■の順に溶離されるが、塩基性!14
をイー]りる充填剤を使用でる場合には、All、A1
およびA IIの順に溶ll!Ilされる。 本発明におりる水性糸カラムク【−17トグラフイーど
は、水を主成分とづる溶離溶媒を使用J−ることをいい
、これらの溶離溶媒としては、各種の緩衝液を使用J−
ることがCさ、好ましく(よ、リン酸緩衝液を挙げるこ
とができる。 カラムクロマ1〜グラフイーを行なう際の溶離法として
は、上記の各種緩衝液、塩溶液、水を組合せた温度勾配
法(グラジ丁ント法)による溶離がりfましく使用され
る。たとえば、リン酸緩衝液とJR,化すl−リウム水
溶8々どの直線グラジ]−ン1〜等は好適である。 本発明方法は、既知試料により一度カラムクロマ1−グ
ラフィーを行ない、得られた保持容D−’tまた(ま保
持時間にJ、す、△■、A 11 、IJよび△■の溶
離(分画を11(定し、検出器によって定バ1不111
能な低温度のAI、A IIおよびAIl[をa有り−
る生体液を等しい条件下でカラムク171へグラフィー
を行ない、上記で■一定しtこ位置の分画を採取し、こ
の分画につい−C微E首分析が11能なラジオイムノア
レイにイ」シて、△■、△HJ>よび△■を定量づ−る
方法である。 本発明方法では、第11′程のカラムクロマ1〜グラフ
イーと、第2工程でのカラムクロア1−グラフィーとを
同一の条(’lで行イ≧うことにより、AI、AIIお
よび△■の溶離位置を一致させる方法を採用しているが
、それは△■、△■およびAmの溶離位置を知る必要か
ら発明されたものであって、同−条イ′1でなく−1も
Δ丁、AII 63J:びAIIIの保持容量または保
持時間を知ることによって容易に分画を採取づることが
できる。 したがって、AI、AIおよびAllの保持容量ま1.
:(ま保14時間を知れば、第]工程と第2工程どのカ
ラムク[1マドグラフイ一条1佳を等しくづる必要はな
い。 本発明方法によれば、生体中のAI、AHa3よびA1
1lのようにピコグラム/ mR(’I)(J/ mで
)程度の低iI:ひ庶の△■、AII J3J、び△■
を正(if「に測定Jることができ、高血圧症の1幾構
解明に資り−るどころ人と考えられる。 次に実施例により4X発明を説明づ−るが、本発明は、
これら実施例に限定されるしのでは4fい3゜実施例
1 (a)4票iシー試&ヒ(既知〉によるカラムクロマ1
−グラフィー 試わl溶液:シグマ社製、AI、AIIおよびA■各3
1J9を、0.135Mの塩化す1〜リウムを含む30
mMのリン酸緩山!Iff (DllG、5)loO
mに溶解した。 カラムクロア63J、び充填剤:東?゛〔曹達(株)製
、11X−5X−53O0平均か“l径5t)、経孔径
約400人であり、−C112−COO11を交換基と
するシリノJグル)を充填した長さ30 cm、内径4
mmのカラム カラム温度:至7ua (約28°0一定)溶離液:
0.135M F7) j’r’、化す1ヘリウムを含
イ1りる30 mJylリンu M tJi+ a (
11If G 5)および0 、 り1M if、A化
ノ1ヘリウムを含む3On+Mリン酸緩衝液(pH6,
5を10分間で0135〜0.5M塩化ブ1ヘリウム濶
磨になるように直線グラジエン1へを行ない、流速0.
75mff/分となるようにカラムに流通さ氾た。 ポンプ:ミル1〜ン]]イ社製シングルプランジ\I−
ポンプ。 (b)第1工程 (a)に示した条件により、△i、AI[およびAII
[の100成を別々に)Jラムクロマ1−グラフィーに
イリし、各△■、A■おJ:び△■の保持容1を測定し
た。次いでAI、AIおよびAIの試料溶液を混合し、
その100成によりカラムクロマ1−グラフィーを行な
い第1図をII7だ。 第1図中ピーク(2)、(1)おにび(3)は、それぞ
れAI、AII A3よびAIIIであり、それらの保
持容■は、3.3d、51mQおよび100m1であっ
た1、上記混合試料に0.004%となるようにリゾデ
ーム(内部標準)を添加し、同一条件によりりロマトグ
ラフイーを行ない第2図をi’、J jこ。第2図中ピ
ーク(4)は、リゾブ−−ムぐある。リゾチームの保持
容13は、9. Grdであつlこ 。 (C)生体液中の△■、ΔII J3よび△■のカラl
\り[171へグラフィー ヒ1〜II・1静脈J、す、予め氷冷した採血管([D
丁△−2K G、 Omgを含む)に5mQの血液を採
取し、4°Cに−(遠心沈降(3000rlJln 、
15分間)させ、血すi、!を17k。ここで得られた
血漿2 meに、10%FDlA−2Na水溶液30成
を加え、jqうした血漿(3N In 酸にでIil
2に調整)を i mMの塩酸にて平衡化した[)ow
ex AG50W−X2(50へ・100メツシユ)の
長さ10 cm、内径5111111のカラムに流)由
ざl、3mQの15%アン′しニア水CΔ丁、AI[お
よび△Illを溶固[づることにより除蛋白を行ない、
次い−C真空凍結乾燥した。 1“1られた凍結乾燥試お1に、]二記 (a)’C試
おI溶油をf[成し人二どIil 4にのリン酸緩衝液
(1こだし、0004%とイfるようにリゾデームを添
加)110成を加え、その10G成を上記(b)と同様
にカラムク+−Jv l−グラフィーを行ない、第3図
のりl」71〜グラムを得るとともに、該(b)項で得
られたAI、A II i15よび△■に相当−りる保
持容ω分両各900成を採取した。 (d)ラジオイムノアゼイ 25 (C)項で得られた△]1分画の400μeに ■(買
伍数125の沃素)で標識されたΔ丁25 (1−AIと記り、以下同様)をAI[分画25 の400成に I−Anを、そしてAI分画の400成
ニ1251− A m ヲ各々100成(1(H)00
c1+m)づつ加え、次いで家兎から得られた抗血清(
八■の抗体価1:10000 、A Iの抗体価1・1
20000、A■にはAII抗血清を使用した。)10
0成を加え、4℃に36時間保持した。これにヂャ一二
】−ルアキストラン溶液(Noril △:0.6%、
1)extrn T−70: 0.06%含有)を1m
ρ加え、4℃に20分間保持した後、遠心沈降させ、沈
澱物の敢q・]線■を測Tし、別に1;ノられlζ検吊
線から、AI、All115よび△■の含イ11iを1
!1だ。結果を第1表に示した。 次に、腎性高血圧患者(9才、女性)にカブ1〜リル6
mgを投与したときの値を第2表に承り。 第28 (1)単位はI]!It/ 戒を示り
、41一体中のAII[の11り定法がIil[立l)
’−cいないため、主としく△Ifの作用にJ、るしの
ど考えられている。 △■【ま、■iii’l腎に夕・1づ−るミネラル■]
ルヂコイド(アンドロスノー1−」ン)放出刺激作用、
■I11動脈に対りる直接数組1作用、■中枢神経を介
り−る面管収れ11作用、J3J、び■)11・′1に
作用してNa貯留、G F R(ル下、K排泄作用等多
様な生理粘性を右し、J、たカブ」−ルアミの10へ・
20 (j′lの背圧作用を右するなど本態性および腎
性高面症を問わず高血圧に係わる因子として重要である
。 また、A■については、副腎皮質に対づ−るアルトス−
jロンの生合成と分泌の促進、コルチゾールと]ルヂコ
ステロンの生合成と分泌の促進等心臓おにび血管に対し
ては血圧上背、心筋に対しては、いわゆるポジティブ−
イノ1−1]ピック作用(positve 1notr
opic action)があること等腎臓に対しては
、腎血流の減少、レニン分泌の抑制等の生理ね5性が知
られている。 したがって、△■からA IIを生成させる△■変換酵
素の活性を阻害づるJ、うな物質、たとえば、t)−3
−メルカプト−−メヂルブに2バノイル−L−ブ[]リ
ン(カブトリル、captori l )を高血圧症の
患者に投与することにより、体内CのAIからA II
J−3よびA IIIの生成を阻害し、昇圧因子を除
く等の治療も考えられている。 しかしながら、これらのシr、 1丁+幾(14を解明
りるだめに、生体内にa)りるAI 、A II it
jよびA11lの(r在1配、生成量あるい(ま浦艮の
測定法および定f(’B法の開発が望J、れ−(いるに
しかかわらヂ、い」:だモイ「立されていない。 Iことえぽ、つΔ−タース゛礼製造のマイクIN・ボン
ドバックC18を充1眞したカラムを使用し、0、(I
IMの耐酸アン−しニウム水溶液と酢酸含イjメヂルア
ル」−ルとを直線グラジェント溶離液どじ、波長210
r+mにJ3ける紫外吸収を測定Jる検出器により、既
知試料の△■、A II、テトラゾカベシタイド(13
J:びii hラベブタイドを分析りるカシムク+a
・/I−グラフ1りb\IJ、力)+ごイ【つ(報告さ
れた。しかしながら、この方法は牛体液中に存在覆るア
ンジン1デンシン等の1万〜100万イjX程度の多作
の試4′81を必要とりるため、直接生体液中のアンジ
オテンシン類を検出し、そして定量り−ることは不可能
で゛ある。 本発明者は、生体液中に存在J8徴吊のAI、AIIお
J、び△■を直接定Tnする方法を開発することを目的
どして検詞し本発明を完成した。 ′?lなわち、本発明は、次の第1■程、第2工程およ
び第3工程からなるアンジオテンシンの定量方法をその
11子とづる・bのである。 (イ)標準試薬アンジオテンシン含右液を特定条件下に
水性系カラムクロマ1〜グラフイーにより分離し、その
保持容量または保持時間を測定する第1]二程、 (ロ)微量のアンジオテンシン含イ1液を第1工程の特
定条4′1下でカラムクロマトグラフィーを行ない、第
1工程で17られた保持容量または保持時間に等しい分
画を得る第2工程、(ハ)第2]−程で得られた分画を
、ラジAイムノアゼイに付してアンジオテンシンを定f
it する第3工程。 本発明のカラムク【」71〜グラフイーに使用づるカラ
ム充填剤としては、細孔径約30Å以上を有し、交1条
基としてカルボキシアルキレン基(−A l ky l
−COOH>を有づるシリカゲル系の充1眞剤をりλ
げることができる。アル4レン基どしては、メチレン阜
またはエチレン基を挙げることができる。flu t’
1基をイjりる充填剤を使用りる揚台にtよ、A II
、△]7および△■の順に溶離されるが、塩基性!14
をイー]りる充填剤を使用でる場合には、All、A1
およびA IIの順に溶ll!Ilされる。 本発明におりる水性糸カラムク【−17トグラフイーど
は、水を主成分とづる溶離溶媒を使用J−ることをいい
、これらの溶離溶媒としては、各種の緩衝液を使用J−
ることがCさ、好ましく(よ、リン酸緩衝液を挙げるこ
とができる。 カラムクロマ1〜グラフイーを行なう際の溶離法として
は、上記の各種緩衝液、塩溶液、水を組合せた温度勾配
法(グラジ丁ント法)による溶離がりfましく使用され
る。たとえば、リン酸緩衝液とJR,化すl−リウム水
溶8々どの直線グラジ]−ン1〜等は好適である。 本発明方法は、既知試料により一度カラムクロマ1−グ
ラフィーを行ない、得られた保持容D−’tまた(ま保
持時間にJ、す、△■、A 11 、IJよび△■の溶
離(分画を11(定し、検出器によって定バ1不111
能な低温度のAI、A IIおよびAIl[をa有り−
る生体液を等しい条件下でカラムク171へグラフィー
を行ない、上記で■一定しtこ位置の分画を採取し、こ
の分画につい−C微E首分析が11能なラジオイムノア
レイにイ」シて、△■、△HJ>よび△■を定量づ−る
方法である。 本発明方法では、第11′程のカラムクロマ1〜グラフ
イーと、第2工程でのカラムクロア1−グラフィーとを
同一の条(’lで行イ≧うことにより、AI、AIIお
よび△■の溶離位置を一致させる方法を採用しているが
、それは△■、△■およびAmの溶離位置を知る必要か
ら発明されたものであって、同−条イ′1でなく−1も
Δ丁、AII 63J:びAIIIの保持容量または保
持時間を知ることによって容易に分画を採取づることが
できる。 したがって、AI、AIおよびAllの保持容量ま1.
:(ま保14時間を知れば、第]工程と第2工程どのカ
ラムク[1マドグラフイ一条1佳を等しくづる必要はな
い。 本発明方法によれば、生体中のAI、AHa3よびA1
1lのようにピコグラム/ mR(’I)(J/ mで
)程度の低iI:ひ庶の△■、AII J3J、び△■
を正(if「に測定Jることができ、高血圧症の1幾構
解明に資り−るどころ人と考えられる。 次に実施例により4X発明を説明づ−るが、本発明は、
これら実施例に限定されるしのでは4fい3゜実施例
1 (a)4票iシー試&ヒ(既知〉によるカラムクロマ1
−グラフィー 試わl溶液:シグマ社製、AI、AIIおよびA■各3
1J9を、0.135Mの塩化す1〜リウムを含む30
mMのリン酸緩山!Iff (DllG、5)loO
mに溶解した。 カラムクロア63J、び充填剤:東?゛〔曹達(株)製
、11X−5X−53O0平均か“l径5t)、経孔径
約400人であり、−C112−COO11を交換基と
するシリノJグル)を充填した長さ30 cm、内径4
mmのカラム カラム温度:至7ua (約28°0一定)溶離液:
0.135M F7) j’r’、化す1ヘリウムを含
イ1りる30 mJylリンu M tJi+ a (
11If G 5)および0 、 り1M if、A化
ノ1ヘリウムを含む3On+Mリン酸緩衝液(pH6,
5を10分間で0135〜0.5M塩化ブ1ヘリウム濶
磨になるように直線グラジエン1へを行ない、流速0.
75mff/分となるようにカラムに流通さ氾た。 ポンプ:ミル1〜ン]]イ社製シングルプランジ\I−
ポンプ。 (b)第1工程 (a)に示した条件により、△i、AI[およびAII
[の100成を別々に)Jラムクロマ1−グラフィーに
イリし、各△■、A■おJ:び△■の保持容1を測定し
た。次いでAI、AIおよびAIの試料溶液を混合し、
その100成によりカラムクロマ1−グラフィーを行な
い第1図をII7だ。 第1図中ピーク(2)、(1)おにび(3)は、それぞ
れAI、AII A3よびAIIIであり、それらの保
持容■は、3.3d、51mQおよび100m1であっ
た1、上記混合試料に0.004%となるようにリゾデ
ーム(内部標準)を添加し、同一条件によりりロマトグ
ラフイーを行ない第2図をi’、J jこ。第2図中ピ
ーク(4)は、リゾブ−−ムぐある。リゾチームの保持
容13は、9. Grdであつlこ 。 (C)生体液中の△■、ΔII J3よび△■のカラl
\り[171へグラフィー ヒ1〜II・1静脈J、す、予め氷冷した採血管([D
丁△−2K G、 Omgを含む)に5mQの血液を採
取し、4°Cに−(遠心沈降(3000rlJln 、
15分間)させ、血すi、!を17k。ここで得られた
血漿2 meに、10%FDlA−2Na水溶液30成
を加え、jqうした血漿(3N In 酸にでIil
2に調整)を i mMの塩酸にて平衡化した[)ow
ex AG50W−X2(50へ・100メツシユ)の
長さ10 cm、内径5111111のカラムに流)由
ざl、3mQの15%アン′しニア水CΔ丁、AI[お
よび△Illを溶固[づることにより除蛋白を行ない、
次い−C真空凍結乾燥した。 1“1られた凍結乾燥試お1に、]二記 (a)’C試
おI溶油をf[成し人二どIil 4にのリン酸緩衝液
(1こだし、0004%とイfるようにリゾデームを添
加)110成を加え、その10G成を上記(b)と同様
にカラムク+−Jv l−グラフィーを行ない、第3図
のりl」71〜グラムを得るとともに、該(b)項で得
られたAI、A II i15よび△■に相当−りる保
持容ω分両各900成を採取した。 (d)ラジオイムノアゼイ 25 (C)項で得られた△]1分画の400μeに ■(買
伍数125の沃素)で標識されたΔ丁25 (1−AIと記り、以下同様)をAI[分画25 の400成に I−Anを、そしてAI分画の400成
ニ1251− A m ヲ各々100成(1(H)00
c1+m)づつ加え、次いで家兎から得られた抗血清(
八■の抗体価1:10000 、A Iの抗体価1・1
20000、A■にはAII抗血清を使用した。)10
0成を加え、4℃に36時間保持した。これにヂャ一二
】−ルアキストラン溶液(Noril △:0.6%、
1)extrn T−70: 0.06%含有)を1m
ρ加え、4℃に20分間保持した後、遠心沈降させ、沈
澱物の敢q・]線■を測Tし、別に1;ノられlζ検吊
線から、AI、All115よび△■の含イ11iを1
!1だ。結果を第1表に示した。 次に、腎性高血圧患者(9才、女性)にカブ1〜リル6
mgを投与したときの値を第2表に承り。 第28 (1)単位はI]!It/ 戒を示り
第1図は、AI、△■、おJ:びAI[[のクロマ1−
グラムであり、第2図は、△i 、A II、A Il
lおJ:びリゾチームのクロマ1〜グラムであり、そし
−C第3図は、リゾチームを添加した生体液のクロマ1
〜グラムである。 ビークト・・・・AI ピーク2・・・・・AI ピーク3・・・・・AI[l ピーク4・・・・・リゾチーム 特R′F出願人 星 野 忠 夫 第11羽 不21渇 」l続ネ市正拶)(方式) %式% 1 事件の表示 昭和56年特¥1願第145215号 2 発明の名称 アンジオテンシンの定量方法 3 補正をする者 事イ′1どの関係 特y(出願人 4 補正命令の日イ」 昭和59年11月27日(発送日) 5 ?di正の対象 明細書 6 補正の内容 願書に最初に添(=i した明細書の予相・別紙のどd
3す(内容に変更なし)
グラムであり、第2図は、△i 、A II、A Il
lおJ:びリゾチームのクロマ1〜グラムであり、そし
−C第3図は、リゾチームを添加した生体液のクロマ1
〜グラムである。 ビークト・・・・AI ピーク2・・・・・AI ピーク3・・・・・AI[l ピーク4・・・・・リゾチーム 特R′F出願人 星 野 忠 夫 第11羽 不21渇 」l続ネ市正拶)(方式) %式% 1 事件の表示 昭和56年特¥1願第145215号 2 発明の名称 アンジオテンシンの定量方法 3 補正をする者 事イ′1どの関係 特y(出願人 4 補正命令の日イ」 昭和59年11月27日(発送日) 5 ?di正の対象 明細書 6 補正の内容 願書に最初に添(=i した明細書の予相・別紙のどd
3す(内容に変更なし)
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 次の第1]−稈、第2]二稈および第3工程からなるア
ンジオテンシンの定娘力法。 (イ)標ン11.試檗アンシフ1ラーンシン含イj液を
1、”■定条171下に水性系カラムクロマ1〜グラノ
イーにより分画し、その保持容量または保持+1,7間
を測定する第1工程、 (u)i数量のう7ンジAアンシン含イJ液を第1 I
程の特定条1′1干でカラムクロマ1〜グラフイーを?
−7ない、第1丁稈C:i!1られた保1、lI容[0
または保持1151間に等しい分画を1(I8第2」二
稈、(ハ)第2土程で1!、Jられだの画を、ランAイ
ムノアセイに(”l t、 ’U)7ンジAラーンシン
を定J’1 ′?Jる第31−程、。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP14521581A JPS60190863A (ja) | 1981-09-14 | 1981-09-14 | アンジオテンシンの定量方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP14521581A JPS60190863A (ja) | 1981-09-14 | 1981-09-14 | アンジオテンシンの定量方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPS60190863A true JPS60190863A (ja) | 1985-09-28 |
JPH0219909B2 JPH0219909B2 (ja) | 1990-05-07 |
Family
ID=15380027
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP14521581A Granted JPS60190863A (ja) | 1981-09-14 | 1981-09-14 | アンジオテンシンの定量方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JPS60190863A (ja) |
Cited By (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH01227961A (ja) * | 1988-03-09 | 1989-09-12 | Kissei Pharmaceut Co Ltd | アンジオテンシン2の酵素免疫化学的測定方法 |
JPH01288766A (ja) * | 1988-01-26 | 1989-11-21 | Univ California | 低濃度のジオキシン類の免疫診断検出法 |
JPH03277297A (ja) * | 1990-03-28 | 1991-12-09 | Saitetsuku Res:Kk | 組換え型ヒトアンジオテンシノーゲンの定量方法 |
CN118501313A (zh) * | 2024-07-11 | 2024-08-16 | 杭州佰辰医学检验所有限公司 | 一种血管紧张素检测试剂盒及其制备方法 |
-
1981
- 1981-09-14 JP JP14521581A patent/JPS60190863A/ja active Granted
Cited By (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH01288766A (ja) * | 1988-01-26 | 1989-11-21 | Univ California | 低濃度のジオキシン類の免疫診断検出法 |
JPH01227961A (ja) * | 1988-03-09 | 1989-09-12 | Kissei Pharmaceut Co Ltd | アンジオテンシン2の酵素免疫化学的測定方法 |
JPH03277297A (ja) * | 1990-03-28 | 1991-12-09 | Saitetsuku Res:Kk | 組換え型ヒトアンジオテンシノーゲンの定量方法 |
CN118501313A (zh) * | 2024-07-11 | 2024-08-16 | 杭州佰辰医学检验所有限公司 | 一种血管紧张素检测试剂盒及其制备方法 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JPH0219909B2 (ja) | 1990-05-07 |
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