JPS60187861A - 酵素抗体架橋法によるインタ−フエロンの定量法 - Google Patents
酵素抗体架橋法によるインタ−フエロンの定量法Info
- Publication number
- JPS60187861A JPS60187861A JP59043599A JP4359984A JPS60187861A JP S60187861 A JPS60187861 A JP S60187861A JP 59043599 A JP59043599 A JP 59043599A JP 4359984 A JP4359984 A JP 4359984A JP S60187861 A JPS60187861 A JP S60187861A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- antibody
- enzyme
- ifn
- immunoglobulin
- interferon
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
- G01N33/57476—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer involving oncofetal proteins
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
- G01N33/57473—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer involving carcinoembryonic antigen, i.e. CEA
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
- G01N2333/475—Assays involving growth factors
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
- G01N2333/575—Hormones
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Immunology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Hematology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Hospice & Palliative Care (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、被検試料液中のインターフェロンを定量する
酵素免疫学的方法に関する。
酵素免疫学的方法に関する。
インターフェロン（ＩＦＮ）の定量は、ウィルス感染症
の診断に用いられる他、ウィルス感染患者や癌患者に投
与されたＩＦＮの体内動態を知る目的で行なわれる。そ
の他、“天然のもしくは組換えＤＮＡ技術により作製さ
れた、ＩＦＮを産生ずるバクテリア、酵母および動物細
胞等の培養物を含む培養上清中のＩＦＮを定量すること
が、研究および工業的に行なわれる。更にはＩＦＮ精製
工程での品ｓＬ管理にも用いられる。
の診断に用いられる他、ウィルス感染患者や癌患者に投
与されたＩＦＮの体内動態を知る目的で行なわれる。そ
の他、“天然のもしくは組換えＤＮＡ技術により作製さ
れた、ＩＦＮを産生ずるバクテリア、酵母および動物細
胞等の培養物を含む培養上清中のＩＦＮを定量すること
が、研究および工業的に行なわれる。更にはＩＦＮ精製
工程での品ｓＬ管理にも用いられる。
その定態法としては、抗ウィルス活性を指標とした生物
学的定量法が一般的であるが、操作が煩雑であるととも
に、測定に長時間を必要とする等の欠点をもつ。近年、
ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）や酵素免疫測定法（Ｅ
ＩＡ）も開発されているが、その測定感度は充分と云え
ない。
学的定量法が一般的であるが、操作が煩雑であるととも
に、測定に長時間を必要とする等の欠点をもつ。近年、
ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）や酵素免疫測定法（Ｅ
ＩＡ）も開発されているが、その測定感度は充分と云え
ない。
こうした状況に艦み、本発明者は、定量の感度を高める
改良を加え、低濃度領域のＩＦＮをも定態できる方法を
見出し、本発明を完成するに至った。
改良を加え、低濃度領域のＩＦＮをも定態できる方法を
見出し、本発明を完成するに至った。
本発明は、■不溶化固体又はコーティング処理した不溶
化固体に、■ＩＦＮを認識する抗体（第一抗体）、■被
測定ｌＦＮ、＜４）前記第一抗体と異なる動物種由来の
ＩＦＮ’を認識する抗体（第二抗体）１．■前記第二抗
体と同（ じ動物種の免疫グロブリンを認識する抗免疫グロブリン
抗体、■第二抗体と同じ動物１を用いて作製し八木抗体
、■酵素を、順次結合させて得た酵素抗酵素抗体複合体
における酵素魚を定態することにより、ＩＦＮｆｆｉを
定態する方法に胸する。
化固体に、■ＩＦＮを認識する抗体（第一抗体）、■被
測定ｌＦＮ、＜４）前記第一抗体と異なる動物種由来の
ＩＦＮ’を認識する抗体（第二抗体）１．■前記第二抗
体と同（ じ動物種の免疫グロブリンを認識する抗免疫グロブリン
抗体、■第二抗体と同じ動物１を用いて作製し八木抗体
、■酵素を、順次結合させて得た酵素抗酵素抗体複合体
における酵素魚を定態することにより、ＩＦＮｆｆｉを
定態する方法に胸する。
本発明を以下、詳細に説明する。（１）不溶化固体とは
、例えばポリ塩化ビニール、ポリスチレン又はポリエチ
レン等のプラスチックから成る成形物、例えばプレート
、マイクロプレートや試賑管等の容器、又はビーズ等で
あるっなかでもポリ塩化ビニール製マイクロプレートは
、抗ＩＦＮ抗体の結合容量が大きい点、洗滌操作が簡易
である点から、好ましい。
、例えばポリ塩化ビニール、ポリスチレン又はポリエチ
レン等のプラスチックから成る成形物、例えばプレート
、マイクロプレートや試賑管等の容器、又はビーズ等で
あるっなかでもポリ塩化ビニール製マイクロプレートは
、抗ＩＦＮ抗体の結合容量が大きい点、洗滌操作が簡易
である点から、好ましい。
ける為に、不溶化固体を洗滌すること、又はコンカナバ
リンＡ（ＣｏｎＡ）、フィトへ、マグルチニン（ＰＨＡ
）等の植物性凝集素、デキストラン等の多糖体、アミノ
酸モノ・ヘテロポリマー、プロティンＡ等の菌体成分な
どのコーティング剤でコーティング処理することができ
る。コーティング処理は、例えば次のようにして行うこ
とができる。すなわち、不溶化固体がポリ塩化ビニール
製マイクロプレート（９６穴）である場合には このマ
イクロプレートに、水又はリン酸緩衝生理食塩水（以下
ＰＢＳと略）等の緩衝液に溶解されたＰ ＨＡ −Ｐ
（Ｅ ＩＩＹ Ｉ、ａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社製、Ｉ！
１１、、−１８００ ）等のコーティング剤ｌＯ〜５０
０μｙ／−溶液を５０〜２００μ４加え、４〜８７℃で
１５分〜２時間インキュベートすることにより、不溶化
固体をコーティング剤でコーティングすることができる
。次いでコーティング剤を含む溶液を除去後、２０〜８
７℃にて乾燥させ、さらにＰＢＳ等の緩衝液にて１〜４
度洗滌する。
リンＡ（ＣｏｎＡ）、フィトへ、マグルチニン（ＰＨＡ
）等の植物性凝集素、デキストラン等の多糖体、アミノ
酸モノ・ヘテロポリマー、プロティンＡ等の菌体成分な
どのコーティング剤でコーティング処理することができ
る。コーティング処理は、例えば次のようにして行うこ
とができる。すなわち、不溶化固体がポリ塩化ビニール
製マイクロプレート（９６穴）である場合には このマ
イクロプレートに、水又はリン酸緩衝生理食塩水（以下
ＰＢＳと略）等の緩衝液に溶解されたＰ ＨＡ −Ｐ
（Ｅ ＩＩＹ Ｉ、ａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社製、Ｉ！
１１、、−１８００ ）等のコーティング剤ｌＯ〜５０
０μｙ／−溶液を５０〜２００μ４加え、４〜８７℃で
１５分〜２時間インキュベートすることにより、不溶化
固体をコーティング剤でコーティングすることができる
。次いでコーティング剤を含む溶液を除去後、２０〜８
７℃にて乾燥させ、さらにＰＢＳ等の緩衝液にて１〜４
度洗滌する。
■ＩＦＮを認識する抗体（第一抗体）とはＧ、ＩＦＮに
対する抗血清（ポリクローン性抗体）、単クローン性抗
体および抗原認識部位を異にする複数の単クローン性抗
体の混合物のいずれかを意味する。このような第一抗体
としては、未精製抗体又は硫安分画、イオン交換クロマ
トゲ−７７ノー アフノ二テＪ々ロマトクラフィー等の
公知の生化学的技術によって精製された抗体を用いるこ
とができる。また、イムノグロブリン全分子のみならず
、Ｆ（ａｂ’）ｚフラグメントも用いることができる。
対する抗血清（ポリクローン性抗体）、単クローン性抗
体および抗原認識部位を異にする複数の単クローン性抗
体の混合物のいずれかを意味する。このような第一抗体
としては、未精製抗体又は硫安分画、イオン交換クロマ
トゲ−７７ノー アフノ二テＪ々ロマトクラフィー等の
公知の生化学的技術によって精製された抗体を用いるこ
とができる。また、イムノグロブリン全分子のみならず
、Ｆ（ａｂ’）ｚフラグメントも用いることができる。
この抗体（第一抗体）としては、用いる抗酵素抗体（後
述）の出来する動物種以外の動物種由来抗体を用いるこ
とが必要である。
述）の出来する動物種以外の動物種由来抗体を用いるこ
とが必要である。
抗血清は、ウサギ、ヤギ、ヒツジ等の動物にＩＦＮを公
知の方法により免疫することによって得ることができる
。単りローン性抗ＩＦＮ抗体は、例えばに６ｈｌｅｒ
ｅｔ、 ａｌ 、 ＳｏｍａｔｉｃＣｅｌｌ Ｇｅｎｅ
ｔｉｃｓ ８ 、８０Ｂ（１９７７）または特願昭５７
−１６０５１６号明細書に記載される方法のごとくマウ
ス、ラット等の動物にＩＦＮを免疫して得た動物の牌臓
等の抗ＩＦＮ抗体産生細胞とマウス（ラット）骨髄腫細
胞とにより融合細胞（ハイブリドーマ）を作製し、該ハ
イブリドーマをクローン化した後、試験繁内にて培養す
るか、又は動物を用いて腹水化することによって得るこ
とができる。
知の方法により免疫することによって得ることができる
。単りローン性抗ＩＦＮ抗体は、例えばに６ｈｌｅｒ
ｅｔ、 ａｌ 、 ＳｏｍａｔｉｃＣｅｌｌ Ｇｅｎｅ
ｔｉｃｓ ８ 、８０Ｂ（１９７７）または特願昭５７
−１６０５１６号明細書に記載される方法のごとくマウ
ス、ラット等の動物にＩＦＮを免疫して得た動物の牌臓
等の抗ＩＦＮ抗体産生細胞とマウス（ラット）骨髄腫細
胞とにより融合細胞（ハイブリドーマ）を作製し、該ハ
イブリドーマをクローン化した後、試験繁内にて培養す
るか、又は動物を用いて腹水化することによって得るこ
とができる。
上記不溶化固体、又はコーティング処理した不溶化固体
に抗ＩＦＮ抗体を結合するには例えば次のような方法を
行うことができる。
に抗ＩＦＮ抗体を結合するには例えば次のような方法を
行うことができる。
すなわち、ＰＢＳ等の緩衝液に溶解された抗ＩＦＮ抗体
ｌＯ〜５００μ２／−の溶液を、該不溶化固体から成る
マイクロプレート等の容器に５０〜２００μ４加え、２
０〜３７℃、１〜５時間インキュベートすることにより
該不溶化固体に抗ＩＦＮ抗体を結合させ、次いで抗ＩＦ
Ｎ抗体溶液を除去後、２０〜３７℃にて乾燥させる。さ
らに１〜５％牛血清アルン ブ′ｅ、％（ＢＳＡ）溶液を５０〜２００μｌ加え、２
０〜３７℃で１〜５時間反応させる仁とにより、抗ＩＦ
Ｎ抗体の不溶化固体に結合しなかった部分をＢＳＡでブ
ロックする。過剰のＢＳＡ＃ｉ液を除去後、２０〜８７
℃にて乾燥させる。
ｌＯ〜５００μ２／−の溶液を、該不溶化固体から成る
マイクロプレート等の容器に５０〜２００μ４加え、２
０〜３７℃、１〜５時間インキュベートすることにより
該不溶化固体に抗ＩＦＮ抗体を結合させ、次いで抗ＩＦ
Ｎ抗体溶液を除去後、２０〜３７℃にて乾燥させる。さ
らに１〜５％牛血清アルン ブ′ｅ、％（ＢＳＡ）溶液を５０〜２００μｌ加え、２
０〜３７℃で１〜５時間反応させる仁とにより、抗ＩＦ
Ｎ抗体の不溶化固体に結合しなかった部分をＢＳＡでブ
ロックする。過剰のＢＳＡ＃ｉ液を除去後、２０〜８７
℃にて乾燥させる。
以上のこと◇不溶化固体へ抗ＩＦＮ抗体を非特異的に結
合させることにより、その抗ＩＦＮ抗体を介して被検試
料中のＩＦＮを特異的、かつ多鰍に結合することを可能
とし、その結果、定置の感度を高めることができた。
合させることにより、その抗ＩＦＮ抗体を介して被検試
料中のＩＦＮを特異的、かつ多鰍に結合することを可能
とし、その結果、定置の感度を高めることができた。
なお、不溶化固体へ直接ＩＦＮ、を非特異的に結合させ
た場合には、結合されるＩＦＮ分子数が少なく定量の感
度が低かった。
た場合には、結合されるＩＦＮ分子数が少なく定量の感
度が低かった。
■被測定ＩＦＮとは、測定の対象となる被検討試料であ
る血漿、血清、尿、バクテリア、酵母、動物細胞等の培
養物を含む培養上清、精製工程における中間試料又は製
剤品である。
る血漿、血清、尿、バクテリア、酵母、動物細胞等の培
養物を含む培養上清、精製工程における中間試料又は製
剤品である。
必要に応じ抽出等の前処理をする。被測定■ＦＮは、例
えば次のようにして結合させることができる。
えば次のようにして結合させることができる。
上記の抗ＩＦＮ抗体を結合させた不溶化固体に、被検試
料を５０〜２００μｌ加え、２０〜８７℃で１〜５時間
又は４℃で一夜又は２０〜３７℃で１〜５時間に引き続
き４℃で一夜インキ、ベートすることにより、被検試料
中のＩＦＮを結合させる。次いで被検試料を除去後、Ｐ
ＢＳ等の緩衝液にて洗滌する。
料を５０〜２００μｌ加え、２０〜８７℃で１〜５時間
又は４℃で一夜又は２０〜３７℃で１〜５時間に引き続
き４℃で一夜インキ、ベートすることにより、被検試料
中のＩＦＮを結合させる。次いで被検試料を除去後、Ｐ
ＢＳ等の緩衝液にて洗滌する。
■ＩＦＮを認識する抗体（第二抗体）は、前記第一抗体
と異なる動物種で作製された抗ＩＦＮ抗体である。抗血
清（ポリクローン性抗体）、単クローン性抗体又は複数
の単クローン性抗体から成る抗体のいずれでも良いが、
好ましくは、第−抗体または第二抗体のいずれか一方ま
たはいずれも単クローン性抗体を用いる。単りローン性
抗ＩＦＮ抗体を用いる交叉性が低減される。抗血清およ
び単クローン性抗体の作製方法は、第一抗体の場合と同
じである。また、イムノグロブリン全分子のみならず、
Ｆ（ａｂ’）２フラグメン１−をも用−いることができ
る。
と異なる動物種で作製された抗ＩＦＮ抗体である。抗血
清（ポリクローン性抗体）、単クローン性抗体又は複数
の単クローン性抗体から成る抗体のいずれでも良いが、
好ましくは、第−抗体または第二抗体のいずれか一方ま
たはいずれも単クローン性抗体を用いる。単りローン性
抗ＩＦＮ抗体を用いる交叉性が低減される。抗血清およ
び単クローン性抗体の作製方法は、第一抗体の場合と同
じである。また、イムノグロブリン全分子のみならず、
Ｆ（ａｂ’）２フラグメン１−をも用−いることができ
る。
第二抗体を結合させるには、例えば、被検試料液中のＩ
ＦＮを結合させた不溶化固体に、５〜ｌＯ％正常動物血
清と０．１−０．５％ツインＯ２０と’ｘ含ｂＭ衛すで
５０〜５，０００倍希釈した抗ＩＦＮ抗体（第二抗体）
溶液を５０〜２００μｌ加え、２０〜８７℃で１〜５時
間インキュベートし、次いでＰＢＳ等の緩衝液にて洗滌
する。又、別態様として、抗ＩＦＮ抗体（第二抗体）を
前記被検試料と同時に添加することにより被検ＩＦＮ、
抗ＩＦＮ抗体（第二抗体）を順次反応させることができ
る。この場合、抗ＩＦＮ抗体（第一抗体）を結合させた
不溶化固体に、被検試料５０〜２００μｅおよび５〜１
０％正當動物血清、Ｏ１〜０．５％ツインＯ２０を含む
緩衝液で５０〜５，０００倍希釈されｔこ抗ＩＦＮ抗体
（第二抗体）溶液５０〜２００μ４を加え、２０〜３７
゛Ｃで１〜５時間、又は４℃で一夜、又は２０〜８７℃
で１〜５時間に引き続き４℃で一夜インギュヘートする
。
ＦＮを結合させた不溶化固体に、５〜ｌＯ％正常動物血
清と０．１−０．５％ツインＯ２０と’ｘ含ｂＭ衛すで
５０〜５，０００倍希釈した抗ＩＦＮ抗体（第二抗体）
溶液を５０〜２００μｌ加え、２０〜８７℃で１〜５時
間インキュベートし、次いでＰＢＳ等の緩衝液にて洗滌
する。又、別態様として、抗ＩＦＮ抗体（第二抗体）を
前記被検試料と同時に添加することにより被検ＩＦＮ、
抗ＩＦＮ抗体（第二抗体）を順次反応させることができ
る。この場合、抗ＩＦＮ抗体（第一抗体）を結合させた
不溶化固体に、被検試料５０〜２００μｅおよび５〜１
０％正當動物血清、Ｏ１〜０．５％ツインＯ２０を含む
緩衝液で５０〜５，０００倍希釈されｔこ抗ＩＦＮ抗体
（第二抗体）溶液５０〜２００μ４を加え、２０〜３７
゛Ｃで１〜５時間、又は４℃で一夜、又は２０〜８７℃
で１〜５時間に引き続き４℃で一夜インギュヘートする
。
■抗免疫グロブリン抗体とは、前記第二抗体と同じ動物
種の免疫グロブリンを認識する抗血清である。公知の方
法により、前記第二抗体の動物種と異なる動物を、前記
第二抗体と同じ動物種の免疫グロブリンで免疫し、抗が
できる。
種の免疫グロブリンを認識する抗血清である。公知の方
法により、前記第二抗体の動物種と異なる動物を、前記
第二抗体と同じ動物種の免疫グロブリンで免疫し、抗が
できる。
本抗免疫グロブリン抗体を結合させるには例えば、前記
のごとく第二抗体を結合された不溶化固体をＰＢＳ等の
緩衝液で１〜４回洗滌後、５〜工０％正富動物血清と０
．１−０．５ぞツイン ２０とを含む緩衝液で５０〜５
．０００倍希釈された抗免疫グロブリン抗体を５０〜２
００μｌ加え、２０〜３７℃で０．５〜５時間インキュ
ベートする。
のごとく第二抗体を結合された不溶化固体をＰＢＳ等の
緩衝液で１〜４回洗滌後、５〜工０％正富動物血清と０
．１−０．５ぞツイン ２０とを含む緩衝液で５０〜５
．０００倍希釈された抗免疫グロブリン抗体を５０〜２
００μｌ加え、２０〜３７℃で０．５〜５時間インキュ
ベートする。
又、この抗免疫クロプリン抗体を、催陽→ト＋ 櫂−
前記被検試料および前記ＩＦＮを認識す゛る抗体（第二
抗体）と同時に添加することにより。
抗体）と同時に添加することにより。
被検Ｉ ＦＮ、第二抗体、抗免疫グロブリン抗体を順次
反応させることができる。この場合、抗ＩＦＮ抗体（第
一抗体）を結合させた不溶化固体に被検試料５０に２０
０μｌ、５〜ｌＯシ止富動物血清（又は１〜５％ＢＳＡ
）と０．１〜０５％ツインｅ２０とを含む緩衝液で５〜
５００倍希釈された抗ＩＦＮ抗体（第二抗体）溶液５０
〜２００μｌおよび上記緩衝液にて５０〜５，０００倍
希釈された抗免疫グロブリン抗体５０〜２００μｌを同
時に加える。
反応させることができる。この場合、抗ＩＦＮ抗体（第
一抗体）を結合させた不溶化固体に被検試料５０に２０
０μｌ、５〜ｌＯシ止富動物血清（又は１〜５％ＢＳＡ
）と０．１〜０５％ツインｅ２０とを含む緩衝液で５〜
５００倍希釈された抗ＩＦＮ抗体（第二抗体）溶液５０
〜２００μｌおよび上記緩衝液にて５０〜５，０００倍
希釈された抗免疫グロブリン抗体５０〜２００μｌを同
時に加える。
２０〜３７℃で０５〜５時間、４℃で一夜、又は２０〜
８７℃で０．５〜５時間に引き絖き４℃で一夜インキユ
ベートする。
８７℃で０．５〜５時間に引き絖き４℃で一夜インキユ
ベートする。
抗免疫グロブリン抗体としては、後記の酵素を化学的に
結合させ標識した抗免疫クロプリン抗体と非標識抗免疫
グロブリン抗体との混合物を用いることができる。この
場合、５〜１０％正常動物血清と０．１−０．５％ツイ
ン０２０とを含む緩衝液で１０〜１００倍希釈された酵
素標識抗免疫グロブリン抗体５０〜２００μｌと、上記
緩衝液にて５０〜５，０００倍希釈された非標識抗免疫
グロブリン抗体２０〜２００μｅとを同時に添加し、２
０〜８７℃で０．５〜５時間インキュベートする。
結合させ標識した抗免疫クロプリン抗体と非標識抗免疫
グロブリン抗体との混合物を用いることができる。この
場合、５〜１０％正常動物血清と０．１−０．５％ツイ
ン０２０とを含む緩衝液で１０〜１００倍希釈された酵
素標識抗免疫グロブリン抗体５０〜２００μｌと、上記
緩衝液にて５０〜５，０００倍希釈された非標識抗免疫
グロブリン抗体２０〜２００μｅとを同時に添加し、２
０〜８７℃で０．５〜５時間インキュベートする。
この抗免疫グロブリン抗体は、前記抗ＩＦＮ（第二抗体
）と後記の抗酵素抗体との間に介在して、それらを架橋
する。この架橋は抗原抗体反応を利用して行なう。この
結合方法（酵素抗体架橋法）は、従来の化学的反応によ
る＃素の抗体への結合方法にくらべ、反応条件か極めて
軟和であり、化φ的結合法における酵素活性の低下を避
けることができる。
）と後記の抗酵素抗体との間に介在して、それらを架橋
する。この架橋は抗原抗体反応を利用して行なう。この
結合方法（酵素抗体架橋法）は、従来の化学的反応によ
る＃素の抗体への結合方法にくらべ、反応条件か極めて
軟和であり、化φ的結合法における酵素活性の低下を避
けることができる。
又、抗酵素抗体分子数
ロブリン抗体は１分子に限らず、多数の分子が結合する
と考えられるし、しかも抗免疫グロブリン抗体Ｉ分子に
結合する抗酵素抗体分子数も１分子に隈らず多数の分子
が結合する。
と考えられるし、しかも抗免疫グロブリン抗体Ｉ分子に
結合する抗酵素抗体分子数も１分子に隈らず多数の分子
が結合する。
すなわち、被検試験料中のＩＦＮ１分Ｊに結合する酵素
分子数は、増幅され、定訳の感度が極めて高まった。
分子数は、増幅され、定訳の感度が極めて高まった。
Φを抗酵素抗体とは、用いる後記の酵素を認識する抗体
である。抗血清（ポリクローン性抗体ン、単クローン性
抗体のいずれでも良いが、前記第二抗体と同じ動物株で
作製された抗体でなければならない。本抗体としては、
イムノグロブリン全分子のみならず、Ｆ（ａｂ’）ｚフ
ラグメントをも用いることができる。
である。抗血清（ポリクローン性抗体ン、単クローン性
抗体のいずれでも良いが、前記第二抗体と同じ動物株で
作製された抗体でなければならない。本抗体としては、
イムノグロブリン全分子のみならず、Ｆ（ａｂ’）ｚフ
ラグメントをも用いることができる。
抗血清は、公知の方法により、第二抗体と動物種の同じ
動物を、用いる酵素（後記）で免疫し血清を得る。
動物を、用いる酵素（後記）で免疫し血清を得る。
単りロ〜ン性抗体は、公知の方法（例えばにδ旧ｅｒ
ｅｔ、 ａｌ Ｓｏｍａｔｉｃ Ｇｅ１ｌ Ｇｅｎｅｔ
ｉｃｓ ８ 。
ｅｔ、 ａｌ Ｓｏｍａｔｉｃ Ｇｅ１ｌ Ｇｅｎｅｔ
ｉｃｓ ８ 。
８０Ｂ（１９７７））に従って、抗酵素抗体産生細胞と
骨負腫細胞とを融合させ、得られたハイブリドーマを試
験管内にて培養するか、又は動物を用いて腹水化するこ
とにより得る。
骨負腫細胞とを融合させ、得られたハイブリドーマを試
験管内にて培養するか、又は動物を用いて腹水化するこ
とにより得る。
抗酵素抗体の結合は、例えば前記抗免疫グロブリン抗体
の結合した不溶化固体をＰＢＳ等の緩衝液にて１〜４回
洗滌後、５〜１０％正常動物血清と０．１−０．５％ツ
イン０２０とを含む緩衝液にて１００〜５，０００倍希
釈された抗酵素抗体を５０〜２００μｌ加え、２０〜８
７℃でｌＯ分〜２時間インキュベートすることにより行
なう。
の結合した不溶化固体をＰＢＳ等の緩衝液にて１〜４回
洗滌後、５〜１０％正常動物血清と０．１−０．５％ツ
イン０２０とを含む緩衝液にて１００〜５，０００倍希
釈された抗酵素抗体を５０〜２００μｌ加え、２０〜８
７℃でｌＯ分〜２時間インキュベートすることにより行
なう。
（力酵素とは、酵素免疫法において一般に使われる酵素
を意味する。例えば、ペルオキシダーゼ、アルカリフォ
スファターゼ、β−カラクトシターセ等である。酵素を
結合するには、例えば、前記抗酵素抗体の結合した不溶
化固体を緩衝液にて１〜４回洗滌後、緩衝液にて０．１
〜１０μｉ／−の濃度に希釈された酵素液５０〜２００
μ４を加え、２０〜８７℃でｌＯ分〜２時間インキュベ
ートすることにより行なう。この酵素を、前記抗酵素抗
体と同時に添加することにより、抗酵素抗体、酵素を順
次に結合させることもできる。この場合、抗免疫クロプ
リン抗体の結合した前記不溶化固体を、ＰＢＳ等の緩衝
液にて１−４回洗滌後、５〜ｌＯ％正常動物血清と０．
１〜０．５％ツイノ ２０とを含む緩衝液にて１００〜
５，０００倍希釈された抗酵素抗体５０〜２００μｌお
よび上記緩衝液にて０．１−１０μｙ／ｖｔの濃度に希
釈された酵素液５０〜２００μｌを加え、２０〜８７℃
で１０分〜２時間インキュベートする。
を意味する。例えば、ペルオキシダーゼ、アルカリフォ
スファターゼ、β−カラクトシターセ等である。酵素を
結合するには、例えば、前記抗酵素抗体の結合した不溶
化固体を緩衝液にて１〜４回洗滌後、緩衝液にて０．１
〜１０μｉ／−の濃度に希釈された酵素液５０〜２００
μ４を加え、２０〜８７℃でｌＯ分〜２時間インキュベ
ートすることにより行なう。この酵素を、前記抗酵素抗
体と同時に添加することにより、抗酵素抗体、酵素を順
次に結合させることもできる。この場合、抗免疫クロプ
リン抗体の結合した前記不溶化固体を、ＰＢＳ等の緩衝
液にて１−４回洗滌後、５〜ｌＯ％正常動物血清と０．
１〜０．５％ツイノ ２０とを含む緩衝液にて１００〜
５，０００倍希釈された抗酵素抗体５０〜２００μｌお
よび上記緩衝液にて０．１−１０μｙ／ｖｔの濃度に希
釈された酵素液５０〜２００μｌを加え、２０〜８７℃
で１０分〜２時間インキュベートする。
結合酵素量の測定は、対応する基質と反応させ、通常、
分光学的方法によって、基質に対応した波長での吸光度
を測定する。測定される結合酵素量は、被検試料液中に
存在するＩＦＨ量を反映する。すなわち、既知量のＩＦ
Ｈと結合する酵素量との関係を、別途、検鳳線でめ、こ
の検凰線を用いて被検ＩＦＨ量を定量する。
分光学的方法によって、基質に対応した波長での吸光度
を測定する。測定される結合酵素量は、被検試料液中に
存在するＩＦＨ量を反映する。すなわち、既知量のＩＦ
Ｈと結合する酵素量との関係を、別途、検鳳線でめ、こ
の検凰線を用いて被検ＩＦＨ量を定量する。
基質としてアジノービス（８−エチルベンゾチアゾリン
−６−スルフォン酸）（ＡＢＴＳ）を用いる場合には、
波長４０５ｎｍでの吸光度を測定する。
−６−スルフォン酸）（ＡＢＴＳ）を用いる場合には、
波長４０５ｎｍでの吸光度を測定する。
以上に詳しく述べたように、第一に不溶化固体に抗ＩＦ
Ｎ抗体を介して被検試料液中のＩＦＮを効率よく結合さ
せること、第二に、被検試料中のＩＦＮを鋭敏に、かつ
、定態的に検出するのに、抗ＩＦＮ抗体と抗酵素抗体と
を抗免疫グロブリン抗体によって架橋し、抗酵素抗体と
結合する酵素量を知る（酵素抗体架橋法）点が、本発明
の基本となるものである。又、抗免疫グロブリン抗体と
して、酵素標識物と非標識物との混合物を用いると一層
定員感度を高めることができる。
Ｎ抗体を介して被検試料液中のＩＦＮを効率よく結合さ
せること、第二に、被検試料中のＩＦＮを鋭敏に、かつ
、定態的に検出するのに、抗ＩＦＮ抗体と抗酵素抗体と
を抗免疫グロブリン抗体によって架橋し、抗酵素抗体と
結合する酵素量を知る（酵素抗体架橋法）点が、本発明
の基本となるものである。又、抗免疫グロブリン抗体と
して、酵素標識物と非標識物との混合物を用いると一層
定員感度を高めることができる。
本発明により、定量感度を高めることができ、被検試料
液中に存在する低濃度領域のＩＦＮを定量可能とした。
液中に存在する低濃度領域のＩＦＮを定量可能とした。
このことは、不溶化固体に抗ＩＦＮ抗体を結合させるこ
とにより被検試料液中のＩＦＮをより多く不溶化固体に
結合することができたこと、および、従来の酵素免疫法
で広く用いられている方法、すなわち、酵素を化学的反
応により直接、抗体へ結合させる方法の代わりに、抗原
抗体反応を利用し酵素を抗体へ結合させる。方法（酵素
抗体架橋法ンを用いることにより、１分子のＩＦＨに結
合する酵素分子数を増加し、かつ化学的結合による酵素
活性の低下を防ぐ仁とによって達成された考えられる。
とにより被検試料液中のＩＦＮをより多く不溶化固体に
結合することができたこと、および、従来の酵素免疫法
で広く用いられている方法、すなわち、酵素を化学的反
応により直接、抗体へ結合させる方法の代わりに、抗原
抗体反応を利用し酵素を抗体へ結合させる。方法（酵素
抗体架橋法ンを用いることにより、１分子のＩＦＨに結
合する酵素分子数を増加し、かつ化学的結合による酵素
活性の低下を防ぐ仁とによって達成された考えられる。
従来の方法によるＩＦＮの定量感度はｌＯ〜５０ Ｕ／
、を以上であったが、本発明では８Ｕ／ｄ以上となった
。
、を以上であったが、本発明では８Ｕ／ｄ以上となった
。
又、本発明では、抗ＩＦＮ抗体として、第−抗体又は第
二抗体の少なくともいずれかに単クローン性抗体を用い
ることによって、測定対象である特定のタイプＯサブタ
イプのＩＦＮと、化学構造上類似した他のＩＦＮとの交
叉性を低減し、特異性を高めることができた。
二抗体の少なくともいずれかに単クローン性抗体を用い
ることによって、測定対象である特定のタイプＯサブタ
イプのＩＦＮと、化学構造上類似した他のＩＦＮとの交
叉性を低減し、特異性を高めることができた。
次に実施例をあけて本発明をさらに具体的に説明する。
実施例１
洗滌したポリ塩化ビニール製９６六マイクロプレートに
、リン酸緩衝生理食塩水（以下ＰＢＳと略）に溶解され
たＩＦＮ−αセ担体としたアフィニティカラムによる精
製ウサギ抗ＩＦＮ−α抗血清１００μｙ／ｄ の水溶液
を１穴あたり１００μ！加え、３７℃で２時間インキュ
ベートした。前記反応液を除去、次いで８７℃にて１０
分間乾燥後、８％牛血清アルブミン（以下ＢＳＡと略）
を含むＰＢＳ２００μｌを加え、８７℃で１時間反応さ
せることにより抗ＩＦＮ−α抗血消の吸着しなかった部
分をＢＳＡでブロックした。上記緩衝液を除去、８７℃
にて１０分間乾燥、次いでＰＢＳにて８回洗滌後、定量
すべきＩＦＮ−αを含む被検試料液１００μ４および５
％ＢＳＡ’、０．１％ツインＯ２０を含むＰＢＳにて１
５００倍希釈されたマウス単りローン性抗ＩＦＮ−α抗
体（ウェルカム社製；クローンＷＨＣ４６のマウス腹水
精製品；１ｇＧ１５〜／ｍ）２０μｌを加え、４℃で一
夜インキュベー１−シた。前記反応液を除去、ＦＢ、Ｓ
にて８回洗滌後、１０％正常ウサギ血清、０．１弊ツイ
ンｏ２０を含むＰＢＳで５０倍に希釈されたウサギ抗マ
ウス免疫グロブリン抗体１００μｌを加え８７℃で８０
分間インキュベートした。ＰＢＳにて８回洗滌後、□上
記緩衝液で１，０００倍に希釈されたマウス抗ペルオキ
シダーゼ抗血清および上記緩衝液にてｌμｙ／−に希釈
されたペルオキシダーゼから成る混合液１００μｌを加
え８７℃で８０分間インキュベートした。前記混合反応
液を除去、ＰＢＳにて３回洗滌後、過ホウ酸ナトリウム
を含むクエン酸−リン酸緩衝液にて１２．５■／ ｄ
ノ１９２に開時調製されたアジノービス（８−エチルベ
ンゾチアゾリン−６−スルフォン酸）（以下ＡＢＴＳと
略）基質液１００μｌを加え、３７℃で３０分間反応さ
せ呈色させた。波長４０５ｎｍでの吸光度を測定し、検
量線と対比して被検試料液中のＩＦＮ−α鰍をめた。検
量線は、上記の被検試料液に代えて、５％ＢＳＡ、０．
１％ツイン０２０を含むＰＢＳに溶解した標準ＩＦＮ−
〇を用い、上記のごとくに測定して作製した。表１に検
量線の値を示した。
、リン酸緩衝生理食塩水（以下ＰＢＳと略）に溶解され
たＩＦＮ−αセ担体としたアフィニティカラムによる精
製ウサギ抗ＩＦＮ−α抗血清１００μｙ／ｄ の水溶液
を１穴あたり１００μ！加え、３７℃で２時間インキュ
ベートした。前記反応液を除去、次いで８７℃にて１０
分間乾燥後、８％牛血清アルブミン（以下ＢＳＡと略）
を含むＰＢＳ２００μｌを加え、８７℃で１時間反応さ
せることにより抗ＩＦＮ−α抗血消の吸着しなかった部
分をＢＳＡでブロックした。上記緩衝液を除去、８７℃
にて１０分間乾燥、次いでＰＢＳにて８回洗滌後、定量
すべきＩＦＮ−αを含む被検試料液１００μ４および５
％ＢＳＡ’、０．１％ツインＯ２０を含むＰＢＳにて１
５００倍希釈されたマウス単りローン性抗ＩＦＮ−α抗
体（ウェルカム社製；クローンＷＨＣ４６のマウス腹水
精製品；１ｇＧ１５〜／ｍ）２０μｌを加え、４℃で一
夜インキュベー１−シた。前記反応液を除去、ＦＢ、Ｓ
にて８回洗滌後、１０％正常ウサギ血清、０．１弊ツイ
ンｏ２０を含むＰＢＳで５０倍に希釈されたウサギ抗マ
ウス免疫グロブリン抗体１００μｌを加え８７℃で８０
分間インキュベートした。ＰＢＳにて８回洗滌後、□上
記緩衝液で１，０００倍に希釈されたマウス抗ペルオキ
シダーゼ抗血清および上記緩衝液にてｌμｙ／−に希釈
されたペルオキシダーゼから成る混合液１００μｌを加
え８７℃で８０分間インキュベートした。前記混合反応
液を除去、ＰＢＳにて３回洗滌後、過ホウ酸ナトリウム
を含むクエン酸−リン酸緩衝液にて１２．５■／ ｄ
ノ１９２に開時調製されたアジノービス（８−エチルベ
ンゾチアゾリン−６−スルフォン酸）（以下ＡＢＴＳと
略）基質液１００μｌを加え、３７℃で３０分間反応さ
せ呈色させた。波長４０５ｎｍでの吸光度を測定し、検
量線と対比して被検試料液中のＩＦＮ−α鰍をめた。検
量線は、上記の被検試料液に代えて、５％ＢＳＡ、０．
１％ツイン０２０を含むＰＢＳに溶解した標準ＩＦＮ−
〇を用い、上記のごとくに測定して作製した。表１に検
量線の値を示した。
表１
※（バックグランド値Ａ４０５＝０．８００補正済み）
この結果、本発明に基づく定態法によって、８１Ｊ／、
ｒ以上のＩＦＮ−αを再現性良く測定することができ、
その測定感度が大幅に改善された。
この結果、本発明に基づく定態法によって、８１Ｊ／、
ｒ以上のＩＦＮ−αを再現性良く測定することができ、
その測定感度が大幅に改善された。
実施例２
実施例１の方法により、ＩＦＮ−αを担体としたアフィ
ニテイカラムによる精製ウサギ抗ＩＦＮ−α抗血清、Ｂ
ＳＡを結合させたマイクロプレートに、実施例１のごと
く被検試料およびマウス単りローン性抗ＩＦＮ−〇抗体
を加え、４℃で一夜インキユベートし、ＰＢＳにて３回
洗滌後、１０％正常ウサギ血清とＯ１％ツイノ ２０と
を含むＰＢＳで１００倍に希釈されたウサギ抗マウス免
疫グロブリン抗体および前記溶液にて２０倍に希釈され
たペルオキシダーゼ標識ヒツジ抗マウス免疫クロプリン
抗体から成る混合液１００μｌを加えた。３７℃で８０
分間インキュベートした。上記混合反応液を除去、ＰＢ
Ｓにて３回洗滌後、１０％正常ウサギ血清と０，１％ツ
インｏ２０ ト’ｘ含（ｒＰ Ｂ Ｓ テ１，０００倍
１？−’Ｓｉ釈されたマウス抗ペルオキシダーゼ抗血清
および上記緩衝液にてＩμｙ／−に希店されたペルオキ
シダーゼから成る混合液１００μｅを加え、３７℃で３
０分間インキュベートした。
ニテイカラムによる精製ウサギ抗ＩＦＮ−α抗血清、Ｂ
ＳＡを結合させたマイクロプレートに、実施例１のごと
く被検試料およびマウス単りローン性抗ＩＦＮ−〇抗体
を加え、４℃で一夜インキユベートし、ＰＢＳにて３回
洗滌後、１０％正常ウサギ血清とＯ１％ツイノ ２０と
を含むＰＢＳで１００倍に希釈されたウサギ抗マウス免
疫グロブリン抗体および前記溶液にて２０倍に希釈され
たペルオキシダーゼ標識ヒツジ抗マウス免疫クロプリン
抗体から成る混合液１００μｌを加えた。３７℃で８０
分間インキュベートした。上記混合反応液を除去、ＰＢ
Ｓにて３回洗滌後、１０％正常ウサギ血清と０，１％ツ
インｏ２０ ト’ｘ含（ｒＰ Ｂ Ｓ テ１，０００倍
１？−’Ｓｉ釈されたマウス抗ペルオキシダーゼ抗血清
および上記緩衝液にてＩμｙ／−に希店されたペルオキ
シダーゼから成る混合液１００μｅを加え、３７℃で３
０分間インキュベートした。
上記混合反応液を除去、ＰＢＳにて３回洗滌後、実施例
１に示されたごとく基質Ａ Ｂ Ｔ Ｓを加え呈色させ
た。検量線は、上記の被検試料液に代えて５％ＢＳＡ、
０．１％ツイノ ２０を含むＰＢＳに溶解しｊこ標準Ｉ
ＦＮ１００μｌを加え、上記のごとくに測定して作成し
た。
１に示されたごとく基質Ａ Ｂ Ｔ Ｓを加え呈色させ
た。検量線は、上記の被検試料液に代えて５％ＢＳＡ、
０．１％ツイノ ２０を含むＰＢＳに溶解しｊこ標準Ｉ
ＦＮ１００μｌを加え、上記のごとくに測定して作成し
た。
表２に検量線の値を示した。
表２
Claims (3)
- （１） 不溶化固体、又はコーティング処理した不溶化
固体に、インターフェロンを認職スる抗体（第一抗体）
、被測定インターフェロン、前記第一抗体と異なる動物
種由来のインターフェロンを認識する抗体（第二抗体）
、前記第二抗体と同じ動物種の免疫グロブリンを認識す
る抗免疫グロブリン抗体、第二抗体と同じ動物種を用い
て作製した抗酵素抗体、および酵素を、順次納会させて
得た酵素抗酵素抗体複合体における酵素鳳を測定するこ
とにより、インターフェロンを定量する方法。 - （２）該インターフェロンを認識する抗体（第一抗体お
よび第二抗体）のいずれが、又は両方が単クローン性抗
体である、特許請求風する方法 - （３）該免疫グロブリンをＭｍする抗免疫グロブリン抗
体が、酵素を化学的に結合させ標識した抗免疫グロブリ
ンと非標識抗免疫グロブリン抗体との混合物である、特
許請求の範囲第１項または第２項のインターフェロンを
定量する方法。
Priority Applications (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP59043599A JPS60187861A (ja) | 1984-03-07 | 1984-03-07 | 酵素抗体架橋法によるインタ−フエロンの定量法 |
| EP84303171A EP0125893A3 (en) | 1983-05-12 | 1984-05-10 | The quantitative analysis of antigen by the enzyme-antibody bridge method |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP59043599A JPS60187861A (ja) | 1984-03-07 | 1984-03-07 | 酵素抗体架橋法によるインタ−フエロンの定量法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS60187861A true JPS60187861A (ja) | 1985-09-25 |
Family
ID=12668274
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP59043599A Pending JPS60187861A (ja) | 1983-05-12 | 1984-03-07 | 酵素抗体架橋法によるインタ−フエロンの定量法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS60187861A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS63118656A (ja) * | 1986-05-13 | 1988-05-23 | Sanyo Chem Ind Ltd | 酵素免疫測定法 |
-
1984
- 1984-03-07 JP JP59043599A patent/JPS60187861A/ja active Pending
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS63118656A (ja) * | 1986-05-13 | 1988-05-23 | Sanyo Chem Ind Ltd | 酵素免疫測定法 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US5262296A (en) | Freeze-dried composition containing enzyme-labeled anti-human interferon-β antibody and enzyme immunoassay kit containing the composition | |
| US4886761A (en) | Polysilicon binding assay support and methods | |
| JPH06258325A (ja) | 異なる２又は３種類のモノクローナル抗体を使用する 抗原測定法及び該モノクローナル抗体を利用した試験 キット | |
| WO2022193980A1 (zh) | 针对新型冠状病毒核衣壳蛋白的抗体或其抗原结合片段及其应用 | |
| JPH01254868A (ja) | 超高感度抗原物質の測定法 | |
| WO2018133039A1 (zh) | 制备抗体对的方法、试剂盒及试剂盒的应用和制备抗体对的系统 | |
| EP2141180B1 (en) | Antibody recognizing canine CRP and human CRP | |
| JPH081438B2 (ja) | 酵素免疫測定法 | |
| JP2867325B2 (ja) | 抗ｐｉｖｋａ−ｉｉ抗体産生ハイブリドーマ及び免疫学的測定方法 | |
| JP2736058B2 (ja) | 免疫検定用器具の製造方法 | |
| JPH0198968A (ja) | ヒス・インスリンの測定方法 | |
| JPS6113156A (ja) | ヒトインタ−フエロン−αの定量用試薬及び定量法 | |
| EP0918218A2 (en) | Method for immunological assay | |
| JPS60187861A (ja) | 酵素抗体架橋法によるインタ−フエロンの定量法 | |
| JPH0587814A (ja) | リウマチ診断方法及びリウマチ診断薬並びにアガラクト シルＩｇＧの定量方法 | |
| JP3212597B2 (ja) | ヒトｉｌ―６レセプターの免疫化学的測定法及び測定用キット | |
| JP2613107B2 (ja) | 抗体を測定する方法および試薬 | |
| EP0322102A2 (en) | Methods of improved antigen capture assays and compounds therefor | |
| JPS59210366A (ja) | 免疫学的定量用不溶化抗原および不溶化抗体の作製法 | |
| Ashihara et al. | Enzyme inhibitory homogeneous immunoassay for high molecular weight antigen (I) | |
| JPS60188848A (ja) | 酵素抗体架橋法による癌胎児性抗原の定量法 | |
| JPS59208464A (ja) | 酵素抗体架橋法によるヒト成長ホルモンの定量法 | |
| JPH04221762A (ja) | 免疫学的測定法 | |
| JPS63151856A (ja) | ヒトプロテインｓに対するモノクローナル抗体を用いた免疫学的測定試薬及びキット | |
| JPH0518974A (ja) | 免疫学的測定方法 |