JPS59210366A - 免疫学的定量用不溶化抗原および不溶化抗体の作製法 - Google Patents
免疫学的定量用不溶化抗原および不溶化抗体の作製法Info
- Publication number
- JPS59210366A JPS59210366A JP8445683A JP8445683A JPS59210366A JP S59210366 A JPS59210366 A JP S59210366A JP 8445683 A JP8445683 A JP 8445683A JP 8445683 A JP8445683 A JP 8445683A JP S59210366 A JPS59210366 A JP S59210366A
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- carrier
- antigen
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-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
- G01N33/54393—Improving reaction conditions or stability, e.g. by coating or irradiation of surface, by reduction of non-specific binding, by promotion of specific binding
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、免疫学的定量法において、不溶化抗原および
不溶化抗体を作製する方法の改良に関する。
不溶化抗体を作製する方法の改良に関する。
さらに詳しくは、免役学的定量法において不溶化担体を
被覆材でおおい、この被覆材を介して抗原および抗体を
不溶化担体に結合させることを特徴とする、不溶化抗原
および不溶化抗体の作製法に関する。免疫学的定量法に
おいて、抗原抗体複合体を、複合体を形成していない可
溶化抗原又は抗体から分離することは、基本的な操作で
ある。その方法の一つとして、抗原又は抗体を不溶化担
体に結合させることによって抗原又は抗体を不溶化する
ことか、抗原抗体複合体の分離操作上、前便であるオＵ
点より、広く用いられている。
被覆材でおおい、この被覆材を介して抗原および抗体を
不溶化担体に結合させることを特徴とする、不溶化抗原
および不溶化抗体の作製法に関する。免疫学的定量法に
おいて、抗原抗体複合体を、複合体を形成していない可
溶化抗原又は抗体から分離することは、基本的な操作で
ある。その方法の一つとして、抗原又は抗体を不溶化担
体に結合させることによって抗原又は抗体を不溶化する
ことか、抗原抗体複合体の分離操作上、前便であるオＵ
点より、広く用いられている。
不溶化抗原および不溶化抗体を作製する方法としては、
抗原および抗体を直接、不溶化担体に結合させることが
広く行なわれているが、結合量が微量であるため感度が
低く、しかも、不溶化抗原および不溶化抗体に加える定
量用試薬が、非特異的に不溶化担体に吸着するため、バ
ックグラウンド値が不規則に上昇し、短音の感度および
精度が妨げられている。
抗原および抗体を直接、不溶化担体に結合させることが
広く行なわれているが、結合量が微量であるため感度が
低く、しかも、不溶化抗原および不溶化抗体に加える定
量用試薬が、非特異的に不溶化担体に吸着するため、バ
ックグラウンド値が不規則に上昇し、短音の感度および
精度が妨げられている。
こうした状況にかんがみ、本発明者は次の点を改良する
ことによって、免疫学的定量法において定量の感度およ
び精度が顕著に改善されることを見出し、本発明を完成
するに至った。
ことによって、免疫学的定量法において定量の感度およ
び精度が顕著に改善されることを見出し、本発明を完成
するに至った。
即ち、不溶化担体を従来と異なり被覆材でおおい、この
被覆材を介して抗原および抗体を不溶化担体に結合せし
め、不溶化抗原および不溶化抗体を作製する。不溶化担
体としては、例えはポリ塩化ビニール又はポリスチレン
製マイクロプレートおよびポリスチレン製ビーズを用い
ることができる。とりわけ、ポリ塩化ビニール製マイク
ロプレートが洗浄操作上の簡易さ、結合容量等で利点を
もち好ましい。
被覆材を介して抗原および抗体を不溶化担体に結合せし
め、不溶化抗原および不溶化抗体を作製する。不溶化担
体としては、例えはポリ塩化ビニール又はポリスチレン
製マイクロプレートおよびポリスチレン製ビーズを用い
ることができる。とりわけ、ポリ塩化ビニール製マイク
ロプレートが洗浄操作上の簡易さ、結合容量等で利点を
もち好ましい。
本発明に使用される被機材には、コンカナバリンＡ （
ＣｏｎＡ）、フィトヘマグ＃ チー１− ン（ＰＨＡ）
などの植物性凝集素、テキストランなどの多糖体、アミ
ノ酸モノ及びヘテロポリマー、プロティン人なとの菌体
成分かある。この中でも特にＰＨＡ−Ｐ（Ｅ−Ｙ Ｌ
ａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社製 Ａ Ｌ−１８００）を
被棟材として用い、不溶化抗原及び不溶化抗体を作製す
ることにより、免疫学的定量法において、低濃度領域で
の感度改善及び測定値の精度向上、とりわけ非特異的吸
着の低減に著しい効果が見られる。
ＣｏｎＡ）、フィトヘマグ＃ チー１− ン（ＰＨＡ）
などの植物性凝集素、テキストランなどの多糖体、アミ
ノ酸モノ及びヘテロポリマー、プロティン人なとの菌体
成分かある。この中でも特にＰＨＡ−Ｐ（Ｅ−Ｙ Ｌ
ａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社製 Ａ Ｌ−１８００）を
被棟材として用い、不溶化抗原及び不溶化抗体を作製す
ることにより、免疫学的定量法において、低濃度領域で
の感度改善及び測定値の精度向上、とりわけ非特異的吸
着の低減に著しい効果が見られる。
本発明の概略は以下の通りである。まず、用いる不溶化
担体を洗浄し乾燥させた後、被覆材と共にインキュベー
トする。被覆材は １０〜５００μＰ／ｍｌの濃度でリ
ン酸緩衝生理食塩水（以下ＰＢ８と略）に溶解する。又
インキュベーションの条件は４℃〜８７℃ １時ｍＪ〜
１夜とする。インキュベーション後、不溶化担体を乾燥
させＰＢＳにて１〜５回洗浄することにより不溶化担体
は被機材でおおわれ、ここに抗原または抗体を加えてイ
ンキュベートすることにより、不溶化抗原または不溶化
抗体が作製され、これらを免疫学的定量に使用する。次
に実施例をあげて本発明をさらに具体的に説明する。な
お、本発明は以下の実施例により限定されるものではな
い。
担体を洗浄し乾燥させた後、被覆材と共にインキュベー
トする。被覆材は １０〜５００μＰ／ｍｌの濃度でリ
ン酸緩衝生理食塩水（以下ＰＢ８と略）に溶解する。又
インキュベーションの条件は４℃〜８７℃ １時ｍＪ〜
１夜とする。インキュベーション後、不溶化担体を乾燥
させＰＢＳにて１〜５回洗浄することにより不溶化担体
は被機材でおおわれ、ここに抗原または抗体を加えてイ
ンキュベートすることにより、不溶化抗原または不溶化
抗体が作製され、これらを免疫学的定量に使用する。次
に実施例をあげて本発明をさらに具体的に説明する。な
お、本発明は以下の実施例により限定されるものではな
い。
実施例１
洗浄したポリ塩化ビニル製９６穴マイクロプレートに、
リン酸緩衝生理食塩水（以下ＰＢＳと略）に溶解された
ＰＥＡ−Ｐ（Ｅ、ＹＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社製＆
Ｌ １８００ Ｌｏｔ、０４０４７８）２０μがゴ
を １穴あたり１００β加え、３７℃１時間インキュベ
ートした。反応液除去後３７℃で１０分間乾燥し、ＰＢ
Ｓにて１回洗浄後、同じ（ＰＢＳに溶解されたウサギ抗
■ＧＨ抗血清１００μ５＋／ゴを、■穴あたり１００μ
ｌ加え、８７℃、２時間インキュベートした。反応液除
去後、３７℃で１０分間乾燥し、３チ牛血清アルブミン
（以下ＢＳＡと略）を含むＰＢＳ ２００＃を加え、
３７℃ １時間反応させることにより、抗ＨＧＨ抗血清
の吸着しなかった部分をＢＳＡでブロックした。
リン酸緩衝生理食塩水（以下ＰＢＳと略）に溶解された
ＰＥＡ−Ｐ（Ｅ、ＹＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社製＆
Ｌ １８００ Ｌｏｔ、０４０４７８）２０μがゴ
を １穴あたり１００β加え、３７℃１時間インキュベ
ートした。反応液除去後３７℃で１０分間乾燥し、ＰＢ
Ｓにて１回洗浄後、同じ（ＰＢＳに溶解されたウサギ抗
■ＧＨ抗血清１００μ５＋／ゴを、■穴あたり１００μ
ｌ加え、８７℃、２時間インキュベートした。反応液除
去後、３７℃で１０分間乾燥し、３チ牛血清アルブミン
（以下ＢＳＡと略）を含むＰＢＳ ２００＃を加え、
３７℃ １時間反応させることにより、抗ＨＧＨ抗血清
の吸着しなかった部分をＢＳＡでブロックした。
反応液除去後、３７℃で１０分間乾燥し、ＰＢＳにて３
回洗浄した。洗浄後、被検試料液に代えて１チＢＳＡ、
Ｏ，１％ツイン２０をを加え、４℃１夜インキユベート
した。翌男、反応液を除去、ＰＢＳにて８回洗浄後、１
０％正常ウサつ血清０．１％ツイン２０を含むＰＢＳで
１００倍に希釈されたマウス抗ＨＧＨ抗体１００μｌ加
え、３７℃ １時間インキュベートした。ＰＢＳで３回
洗浄後、前記溶液で２００倍に希釈された、ウサギ抗マ
ウス免疫グロブリン抗体を１００ｇ加え、８７℃１時間
インキュベートし、さらにＰＢＳで３回洗浄後、前記溶
液で２００倍に希釈されたマウス抗ペルオキシダーゼ抗
血清を１００μｌ加え、３７℃１時間インキュベートシ
た。
回洗浄した。洗浄後、被検試料液に代えて１チＢＳＡ、
Ｏ，１％ツイン２０をを加え、４℃１夜インキユベート
した。翌男、反応液を除去、ＰＢＳにて８回洗浄後、１
０％正常ウサつ血清０．１％ツイン２０を含むＰＢＳで
１００倍に希釈されたマウス抗ＨＧＨ抗体１００μｌ加
え、３７℃ １時間インキュベートした。ＰＢＳで３回
洗浄後、前記溶液で２００倍に希釈された、ウサギ抗マ
ウス免疫グロブリン抗体を１００ｇ加え、８７℃１時間
インキュベートし、さらにＰＢＳで３回洗浄後、前記溶
液で２００倍に希釈されたマウス抗ペルオキシダーゼ抗
血清を１００μｌ加え、３７℃１時間インキュベートシ
た。
ＰＢＳにて８回洗浄後、ＰＢＳに溶解されｆ、Ｚペルオ
キシラーゼ５ｐＶ ３７℃３０分間インキュベートした後、ＰＢＳにて３回
洗浄し、過ホウ酸ナトリウムを含むクエン酸−リン酸緩
衝液にて２５η／ゴ に調製された、アジノービス（３
−エチルベンゾチアゾリン−６−スルフォン酸）（以下
Ａ．ＢＴ８と略）基質液１００μｌを加え３７℃１０分
間反応させ、呈色させた。波長４ ０ ５ ｎｍでの吸
光度を測定し、作成した。
キシラーゼ５ｐＶ ３７℃３０分間インキュベートした後、ＰＢＳにて３回
洗浄し、過ホウ酸ナトリウムを含むクエン酸−リン酸緩
衝液にて２５η／ゴ に調製された、アジノービス（３
−エチルベンゾチアゾリン−６−スルフォン酸）（以下
Ａ．ＢＴ８と略）基質液１００μｌを加え３７℃１０分
間反応させ、呈色させた。波長４ ０ ５ ｎｍでの吸
光度を測定し、作成した。
標準１ｉ Ｇ Ｈのｄ１１］定値を表１に標準曲線を図
１に示した。
１に示した。
図１は実施例で求めた標準曲線を示す。横軸は、ＦｆＧ
Ｈの濃度（ｎｇ−／ｍｅ ）を示し、縦軸は吸光度（Ａ
４０５ ）を示す。 ・不溶化担体にＰ １ｉＡ −Ｐを被覆した場合バック
グラウンド Ａ４０５＝０．１０７補正済ｏ Ｐ ＨＡ
−Ｐによる被覆を行なわなかった場合（無処理） バッククラランド Ａ４０５＝０．２８５袖正済図１ ＝３！
Ｈの濃度（ｎｇ−／ｍｅ ）を示し、縦軸は吸光度（Ａ
４０５ ）を示す。 ・不溶化担体にＰ １ｉＡ −Ｐを被覆した場合バック
グラウンド Ａ４０５＝０．１０７補正済ｏ Ｐ ＨＡ
−Ｐによる被覆を行なわなかった場合（無処理） バッククラランド Ａ４０５＝０．２８５袖正済図１ ＝３！
Claims (3)
- （１） 免疫学的定量法において、抗原および抗体を
被樋材を介して不溶化担体に結合させることを特徴とす
る、不溶化抗原および不溶化抗体の作製法。 - （２）該不溶化担体にプラスデック容器またはプラスチ
ックビーズを用いる、特許請求の範囲第１項記載の作製
法。 - （３）該被粉材に植物性凝集素、多糖体、アミノ酸ポリ
マー菌体成分を用いる特許請求の範囲第１項記載の作製
法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP8445683A JPS59210366A (ja) | 1983-05-13 | 1983-05-13 | 免疫学的定量用不溶化抗原および不溶化抗体の作製法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP8445683A JPS59210366A (ja) | 1983-05-13 | 1983-05-13 | 免疫学的定量用不溶化抗原および不溶化抗体の作製法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS59210366A true JPS59210366A (ja) | 1984-11-29 |
Family
ID=13831121
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP8445683A Pending JPS59210366A (ja) | 1983-05-13 | 1983-05-13 | 免疫学的定量用不溶化抗原および不溶化抗体の作製法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS59210366A (ja) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0192320A1 (en) * | 1985-01-11 | 1986-08-27 | Unilever Plc | Preparation of reagents |
| FR2616915A1 (fr) * | 1987-06-16 | 1988-12-23 | Ire Medgenix Sa | Solution d'une substance de nature polypeptidique, et utilisation pour des dosages immunologiques |
| WO1995018375A1 (fr) * | 1993-12-28 | 1995-07-06 | Ss Pharmaceutical Co., Ltd. | Procede et necessaire de detection de constituants sanguins |
| DE19853640A1 (de) * | 1998-11-20 | 2000-06-08 | Molecular Machines & Ind Gmbh | Mehrgefäßanordnung mit verbesserter Empfindlichkeit für die optische Analytik |
-
1983
- 1983-05-13 JP JP8445683A patent/JPS59210366A/ja active Pending
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0192320A1 (en) * | 1985-01-11 | 1986-08-27 | Unilever Plc | Preparation of reagents |
| FR2616915A1 (fr) * | 1987-06-16 | 1988-12-23 | Ire Medgenix Sa | Solution d'une substance de nature polypeptidique, et utilisation pour des dosages immunologiques |
| WO1995018375A1 (fr) * | 1993-12-28 | 1995-07-06 | Ss Pharmaceutical Co., Ltd. | Procede et necessaire de detection de constituants sanguins |
| DE19853640A1 (de) * | 1998-11-20 | 2000-06-08 | Molecular Machines & Ind Gmbh | Mehrgefäßanordnung mit verbesserter Empfindlichkeit für die optische Analytik |
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