JPS60155976A - ルイス式血液型の表現型決定方法 - Google Patents
ルイス式血液型の表現型決定方法Info
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- JPS60155976A JPS60155976A JP59192425A JP19242584A JPS60155976A JP S60155976 A JPS60155976 A JP S60155976A JP 59192425 A JP59192425 A JP 59192425A JP 19242584 A JP19242584 A JP 19242584A JP S60155976 A JPS60155976 A JP S60155976A
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- monoclonal
- atcchb
- antibody
- cell hybrid
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- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
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- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
技術分野
本発明は被検者のルイス式血液型の表現型の決定に有用
な方法に関する。
な方法に関する。
発明の背景
ルイス式（Ｌｅ ） 血液型に鵬する抗原には、ａおよ
びｂの２種類があり、抗Ｌｅａおよび抗Ｌｅｂと命名さ
れた２種の抗血清の発見が糸口となって明らかにされた
ものである［ Ａｎｄｅｒｓｏｎ （１９４Ｂ ） ’
Ａｃｚａ Ｐａｚｈ、 Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ、’５ｃａ
ｎｄ、＋ ２５ ： ７２８ 、＋Ｍｏｕｒａｎｔ、
（１９４６） ： Ｎａｔ、ｕｒｅ、 １５８ ： ２
３７参照〕。これらの抗血清に基づき、ルイス式血液ａ
＋ｂ＋ａ−ｂ− 型は４ａｔの狭現壓に分かれる。Ｌｅ 、 ＬｅＬｅａ
＋ｂ−、Ｌｅａ−ｂ＋である。すなわち、各人は１釉ａ
十ｂ−ａ−ｂ十 のルイス抗原をもつか（Ｌｅ またはＬｅ ）、ａ十す
十 両方のルイス抗原をもつか（Ｌｅ ）、あるい−ｂ− はいずれのルイス抗原ももたないか（Ｌｅ ）のどれか
に該尚する（一般的記載についてはＲ１Ｒａｃｅ ＆
Ｒ，Ｓａｎｇｅｒ ： Ｂｌｏｏｄ Ｇｒｏｕｐｓ ｉ
ｎ Ｍａｎ 、第６章、第６版１９７５．参照）。
びｂの２種類があり、抗Ｌｅａおよび抗Ｌｅｂと命名さ
れた２種の抗血清の発見が糸口となって明らかにされた
ものである［ Ａｎｄｅｒｓｏｎ （１９４Ｂ ） ’
Ａｃｚａ Ｐａｚｈ、 Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ、’５ｃａ
ｎｄ、＋ ２５ ： ７２８ 、＋Ｍｏｕｒａｎｔ、
（１９４６） ： Ｎａｔ、ｕｒｅ、 １５８ ： ２
３７参照〕。これらの抗血清に基づき、ルイス式血液ａ
＋ｂ＋ａ−ｂ− 型は４ａｔの狭現壓に分かれる。Ｌｅ 、 ＬｅＬｅａ
＋ｂ−、Ｌｅａ−ｂ＋である。すなわち、各人は１釉ａ
十ｂ−ａ−ｂ十 のルイス抗原をもつか（Ｌｅ またはＬｅ ）、ａ十す
十 両方のルイス抗原をもつか（Ｌｅ ）、あるい−ｂ− はいずれのルイス抗原ももたないか（Ｌｅ ）のどれか
に該尚する（一般的記載についてはＲ１Ｒａｃｅ ＆
Ｒ，Ｓａｎｇｅｒ ： Ｂｌｏｏｄ Ｇｒｏｕｐｓ ｉ
ｎ Ｍａｎ 、第６章、第６版１９７５．参照）。
ＬｅａおよびＬｅｂ抗原は、ヒト唾液、血清、赤血球お
よびその他の体液、組織中の糖脂質および糖タンパク質
の末端糖配列として生じる。Ｌｅａ抗原は末端糖配列 Ｇａｌβ１−３ＧｌｃＮＡｃ− ４ Ｆｕｃａｌ Ｌｅｂ抗原は末端配列 １ Ｆｕｃａｌ Ｆｕｃａｌ を有する。これから明らかなように、Ｌｅｂ抗原はＬｅ
ａ抗原の末端配列にフコシル残基が添７１１１ ｇれた
末端配列をもっている。
よびその他の体液、組織中の糖脂質および糖タンパク質
の末端糖配列として生じる。Ｌｅａ抗原は末端糖配列 Ｇａｌβ１−３ＧｌｃＮＡｃ− ４ Ｆｕｃａｌ Ｌｅｂ抗原は末端配列 １ Ｆｕｃａｌ Ｆｕｃａｌ を有する。これから明らかなように、Ｌｅｂ抗原はＬｅ
ａ抗原の末端配列にフコシル残基が添７１１１ ｇれた
末端配列をもっている。
輸血に先立ってルイス式血液型の表現型をスクリーニン
グすることは、供血者のルイス血液温が受血者のそれと
マツチしないと溶血性輸血反応を生じることがあるので
、重要である。
グすることは、供血者のルイス血液温が受血者のそれと
マツチしないと溶血性輸血反応を生じることがあるので
、重要である。
また、ルイス式血液型抗原は、結腸、胃または膵臓のア
デノカルシノーマの細胞に存在する消化管癌関連抗原（
ＧＩＣＡ）にも関係する。（ＧＩＣＡの抗原決定末端は
シアリルラフ）−Ｎ−７コペンタオース■で、これはシ
アル化されたＬｅａ抗原である。ヒトはＧＩＣＡを表現
するためにルイス末端糖配列を合成できるはずで、同じ
酵素が関与するものと考えられる（たとえば、Ｋｏｐｒ
ｏｗｓｋｉら＝Ｌａｎｃｅｔ、 １９８２年６月１２日
号、１６６２〜１３３６頁参照）。したがって、ＧＩＣ
Ａの存在についての診断的測定結果が陰性である場合、
そのヒトがＬｅａ−ｂ−（全人口の約５％）であるかど
うかを知ることが望ましい。
デノカルシノーマの細胞に存在する消化管癌関連抗原（
ＧＩＣＡ）にも関係する。（ＧＩＣＡの抗原決定末端は
シアリルラフ）−Ｎ−７コペンタオース■で、これはシ
アル化されたＬｅａ抗原である。ヒトはＧＩＣＡを表現
するためにルイス末端糖配列を合成できるはずで、同じ
酵素が関与するものと考えられる（たとえば、Ｋｏｐｒ
ｏｗｓｋｉら＝Ｌａｎｃｅｔ、 １９８２年６月１２日
号、１６６２〜１３３６頁参照）。したがって、ＧＩＣ
Ａの存在についての診断的測定結果が陰性である場合、
そのヒトがＬｅａ−ｂ−（全人口の約５％）であるかど
うかを知ることが望ましい。
ルイス式の血液型の表現型を知るには、ヒトまたは動物
から得られる抗血清が使用されるが、抗血清にはいくつ
かの問題がある。第一に、抗血清は本来、必然的にポリ
クロナールである。大部分の抗Ｌｅａ血清は、Ｌｅａ
−Ｄ−受血者から得られた場合、弱い抗Ｌｅ をある程
度含有する。沈殿させ凝集させた抗ＩＬｅａ血清は、ニ
ワトリ、ウサギ、ヤギのような動物から得られてきた。
から得られる抗血清が使用されるが、抗血清にはいくつ
かの問題がある。第一に、抗血清は本来、必然的にポリ
クロナールである。大部分の抗Ｌｅａ血清は、Ｌｅａ
−Ｄ−受血者から得られた場合、弱い抗Ｌｅ をある程
度含有する。沈殿させ凝集させた抗ＩＬｅａ血清は、ニ
ワトリ、ウサギ、ヤギのような動物から得られてきた。
抗Ｌｅｂ血清は抗Ｈ抗体を含んでいることが多く、その
ためＬｅｂ＋の誤まった判定結果を招くことがある（
Ｒ，Ｒａｃｅ ＆Ｒ，Ｓａｎｇｅｒ ：前出参照）。
ためＬｅｂ＋の誤まった判定結果を招くことがある（
Ｒ，Ｒａｃｅ ＆Ｒ，Ｓａｎｇｅｒ ：前出参照）。
マウスハイシリドーマがＬｅｂ抗原に対するモノクロナ
ール抗体を産生ずるとの報告がある［ １３ｒ□ｃｋｈ
ａｕｓら（１９８１） ： Ｊ、Ｂｉｏｌ、Ｃｈｅｍ
。
ール抗体を産生ずるとの報告がある［ １３ｒ□ｃｋｈ
ａｕｓら（１９８１） ： Ｊ、Ｂｉｏｌ、Ｃｈｅｍ
。
２５６ ： １３２２３）。しかしながら、これらのモ
ノクロナール抗体はＨ血液抗原と交差特異性を示すこと
が明らかにされた。
ノクロナール抗体はＨ血液抗原と交差特異性を示すこと
が明らかにされた。
したがって、 Ｌｅａ抗原およびＬｅｂ抗原の両者では
なく、そのいずれかと選択的に結合するモノクロナール
抗体を用いる測定法の開発が望まれてきた。さらに、他
の血液型抗原と交差反応を示さないモノクロナール抗体
を用いることが望まれてきたのである。
なく、そのいずれかと選択的に結合するモノクロナール
抗体を用いる測定法の開発が望まれてきた。さらに、他
の血液型抗原と交差反応を示さないモノクロナール抗体
を用いることが望まれてきたのである。
発明の要約
本発明の目的はルイス血液型の衣現溢を決定するための
測定法を提供することにある。
測定法を提供することにある。
本発明の目的は、また、ルイス式血液型の表現型を決定
するための、モノクロナール抗体使用測定法を提供する
ことにある。
するための、モノクロナール抗体使用測定法を提供する
ことにある。
本発明の他の目的は、Ｌｅａ抗原を選択的に固定するが
、Ｌｅｂ抗原や他の血液型抗原のいずれとも交差反応を
示さないモノクロナール抗体を使用する、ルイス式血液
型の表現型を決定する方法を提供することにある。
、Ｌｅｂ抗原や他の血液型抗原のいずれとも交差反応を
示さないモノクロナール抗体を使用する、ルイス式血液
型の表現型を決定する方法を提供することにある。
本発明のさらに他の目的は、Ｌｅｂ抗原を選択的に同定
するが、Ｌｅａ抗原や他の血液微抗原のいずれとも交差
反応を示さないモノクロナール抗体を使用する、ルイス
式血液型の表現型を決定する方法を提供することにある
。
するが、Ｌｅａ抗原や他の血液微抗原のいずれとも交差
反応を示さないモノクロナール抗体を使用する、ルイス
式血液型の表現型を決定する方法を提供することにある
。
本発明のさらに他の目的は、ルイス式血液型の表現型を
決定するのに有用な／・イブリドーマおよびモノクロナ
ール抗体を提供することにある。
決定するのに有用な／・イブリドーマおよびモノクロナ
ール抗体を提供することにある。
これらの目的およびその他の目的は、以下に掲げる本発
明の１または２種以上の態様によって達成される。
明の１または２種以上の態様によって達成される。
本発明は、その−態様として、ヒト組織およびヒト体液
よりなる群から選ばれる試験サンプルを準備し、この試
験サンプル中において、（ハ））融合細胞ハイブリッド
ＡＴＣＣＨＢ ８３３２４ならびに（ｂ）ＡＴＣＣＨＢ
８３５２５およびＡＴＣＣＨＢ ８３５２６よりなる
群から選ばれる融合細胞ノ・イブリッドによって産生き
れるモノクロナール抗体に和尚するモノクロナール試験
抗体が抗原に選択的に結合するかどうかを測定すること
を特徴とするルイス式血液型の表現型決定方法を提供す
る。
よりなる群から選ばれる試験サンプルを準備し、この試
験サンプル中において、（ハ））融合細胞ハイブリッド
ＡＴＣＣＨＢ ８３３２４ならびに（ｂ）ＡＴＣＣＨＢ
８３５２５およびＡＴＣＣＨＢ ８３５２６よりなる
群から選ばれる融合細胞ノ・イブリッドによって産生き
れるモノクロナール抗体に和尚するモノクロナール試験
抗体が抗原に選択的に結合するかどうかを測定すること
を特徴とするルイス式血液型の表現型決定方法を提供す
る。
本発明は、さらに他の態様として、ヒト唾液およびヒト
血液よりなる群から選ばれるサンプルについて、融合細
胞ハイブリッドＡＴＣＣＨＢ ８３３２４ならびにＡＴ
ＣＣＨＢ ８３３２５およびＡＴＣＣＨＢ８３３２６よ
りなる群から選ばれる融合細胞ハイブリッドによって産
生きれるモノクロナール抗体と選択的に結合する抗原決
定基の存在を試験することを特徴とするルイス式血液型
の衣現氾決定方法を提供する。
血液よりなる群から選ばれるサンプルについて、融合細
胞ハイブリッドＡＴＣＣＨＢ ８３３２４ならびにＡＴ
ＣＣＨＢ ８３３２５およびＡＴＣＣＨＢ８３３２６よ
りなる群から選ばれる融合細胞ハイブリッドによって産
生きれるモノクロナール抗体と選択的に結合する抗原決
定基の存在を試験することを特徴とするルイス式血液型
の衣現氾決定方法を提供する。
本発明は、さらに他の態様として、（ａ）ヒト唾液サン
プルと接触させた、糖脂質または糖タンパク質を固定化
できる少なくとも２個の固体支持体を準備し、（ｂ）第
一の固体支持体を融合細胞ノ・イブリッドＡＴＣＣＨＢ
８３３２４によって産生きれるモノクロナール抗体に
相当するモノクロナール試験抗体と接触させ、（Ｃ）第
二の固体支持体をＡＴＣＣＨＢ８３３２５およびＡＴＣ
ＣＨＢ ８３３２６よりなる群から選ばれる融合細胞ハ
イブリッドによって産生されるモノクロナール抗体に相
当するモノクロナール試験抗体に接触させ、（ｄ）モノ
クロナール試駁抗体接触工程後に、各固体支持体をその
モノクロナール試験抗体に選択的に結合、する指示抗体
と接触させ、ついで（、）こ゛の指示抗体がその固体支
持体上でモノクロナール試験抗体に選択的に結合するか
どうかを測定することを特徴とするルイス式血液型の表
現屋決定方法を提供する。
プルと接触させた、糖脂質または糖タンパク質を固定化
できる少なくとも２個の固体支持体を準備し、（ｂ）第
一の固体支持体を融合細胞ノ・イブリッドＡＴＣＣＨＢ
８３３２４によって産生きれるモノクロナール抗体に
相当するモノクロナール試験抗体と接触させ、（Ｃ）第
二の固体支持体をＡＴＣＣＨＢ８３３２５およびＡＴＣ
ＣＨＢ ８３３２６よりなる群から選ばれる融合細胞ハ
イブリッドによって産生されるモノクロナール抗体に相
当するモノクロナール試験抗体に接触させ、（ｄ）モノ
クロナール試駁抗体接触工程後に、各固体支持体をその
モノクロナール試験抗体に選択的に結合、する指示抗体
と接触させ、ついで（、）こ゛の指示抗体がその固体支
持体上でモノクロナール試験抗体に選択的に結合するか
どうかを測定することを特徴とするルイス式血液型の表
現屋決定方法を提供する。
さらに、本発明の態様には、融合細胞ノ１イゾリンドＡ
ＴＣＣＨＢ ８３３２２、ＡＴＣＣＨＢ ８３３２３、
ＡＴＣＣＨＢ、８３３２４、ＡＴＣＣＨＢ ８３３２５
およびＡＴＣＣ！ ＨＢ ８３３２６、ならびにこれら
の融合細胞ハイブリッドによって産生きれるモノクロナ
ール抗体が包含される。
ＴＣＣＨＢ ８３３２２、ＡＴＣＣＨＢ ８３３２３、
ＡＴＣＣＨＢ、８３３２４、ＡＴＣＣＨＢ ８３３２５
およびＡＴＣＣ！ ＨＢ ８３３２６、ならびにこれら
の融合細胞ハイブリッドによって産生きれるモノクロナ
ール抗体が包含される。
図面は、本発明に従って実施される酵素連結イムノアブ
ソーベント測定法に用いられる典型的な試験サンプル反
応トレーの例である。 発明の詳細な記述 本発明は各個人のルイス式血液型の表現型な決定するた
めに効果的な方法を提供する。本発明の測定法は迅速、
正確で、その−態様においては、被検者からの血液採取
も要しない。この測定法はモノクロナール抗体を産生す
る新規な融合細胞ハイブリッド、ならびにこれらの抗体
の抗原決定基を利用するものである。 ＬｅａおよびＬｅｂ抗原は、糖脂質または糖タンパク質
を含有する各種ヒト体液および組織に認められる。たと
えば血液、唾液、尿、赤血球等であるが、これに限定さ
れるものではなく、他の組織および体液に認められる。 したがって、糖タンパク質または糖脂質含有試験サンプ
ルを採取すれは、それが本発明の測定方法の基質となる
。好ましい試験サンプルは、皮屑の穿刺を袈しない点で
、唾液である。しかも、ルイス式血液型抗原は被検者が
分泌型であっても非分泌型であっても、唾液中には辰現
される。しかしながら、本発明が、たとえば血液、尿ま
たは他のサンプルを用いて容易に実施できることももち
ろんである。糖脂質はホルマリンのような固定液で分解
されることはないので、パラフィン包埋組織サンプルも
使用できる。 ＬｅａおよびＬｅｂ抗原の存在を決定するための好まし
い方法では、特定の融合細胞ハイプリドーマによって産
生される抗体に相当、するモノクロナール試験抗体が使
用される。これらの融合細胞ノ・イブリッドは、ルイス
式血液型抗原と特定の抗原決定基において選択的に結合
するモノクロナール抗体を産生ずる。このハイプリドー
マはマウスを、ＬｅｉｂｏｙｌｚらＣＣａｎｃｅｒ Ｒ
ｅ５０． ３６ ： ４５６２（１９７６））の報告し
た結腸カル７ノーマ細胞系５Ｗ１１１６およびＳＷ’
１２２２によって免疫処置すると産生きれる。免疫処置
マウスの屏風細胞を、本技術分野において公知の方法に
従い、マウス骨髄腫Ｐ ３ ｘ ６３ Ａｇ８と融合さ
せ、ハイプリドーマを回収する（たとえば、Ｋｏｐｒｏ
Ｗｓｋｉら：米国特許第４．１９６．２６５号参照）。 本発明に有用な数種のハイプリドーマが上述の方法によ
って開発された。融合細胞ハイブリッドＡＴＣＣＨＢ
８３３２４は、Ｌｅａ抗原のラクト−Ｎ−７コペンタオ
一ス■活性末端配列に選択的に結合するモノクロナール
抗体Ｃｏ −５１４（ＩｇＧ３アイソタイプ）を産生ず
る。融合細胞ハイブリッドＡＴＣＣＨＢ ８３３２５お
よびＡＴＣＣＨＢ ８６３２６はＬｅｂ抗原のラクト−
Ｎ −’）フコヘキサオース１活性末端配列と選択的に
結合するモノクロナール抗体ｃｏ −４３１およびｃｏ
−３０１（１ｇＭアイソタイプ）をそれぞれ分泌する
。Ｂｒｏｃｋｈａｕｓら［Ｊ。 Ｂｉｏｌ−Ｃｈｅｍｍ２５６．１３２２３ （１９８１
）］によって報告されているハイプリドーマ１１１６Ｎ
Ｓ−１０からのモノクロナール抗体と異なり、上述の抗
体は他の血液製抗原、たとえばＨ抗原と交差反応するこ
とがない。融合細胞ハイブリッドＡＴＣＣＨＢ ８３ろ
２２およびＡＴＣＣＨＢ ８３３２３はそれぞれ、Ｌｅ
ａおよびＬｅｂ抗原の両者と選択的に結合するモノクロ
ナール抗体ｃｏ −５１２（ｘｇ（）３アインタイゾ）
およびＣｏ −５１３（ＩｇＧｓアイソタイプ）を産生
ずる。これらの融合細胞ハイブリッドは、１９８３年７
月２８日、Ａｍｅｒｉｃａｎ ＴｙｐｅＣｕｌｉｕｒｅ
Ｃｏ１１ｅｃｔ、ｉｏｎ （ＡＴＣＣ）、１２３０１
Ｐａｒｋｌａｗｎ Ｄｒｉｖｅ、Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ、
Ｍａｒｙｌａｎｄ ２０８５２に寄託された。実質的
に他の抗体を含まない、上述のモノクロナール抗体含有
溶液を調製するには融合細胞ハイブリッドの生育培地の
上清を集めればよい。 本発明に用いられる好ましいモノクロナール試験抗体は
上述のハイプリドーマによって産生きれ全抗体である。 これら力好ましい試験抗体に相当するモノクロナール抗
体も使用できる。抗原に選択的に結合する試験抗体が融
合細胞）Ｓイブリッドによって産生きれる抗体の選択的
結合を遮断し、両統体が同一の抗原決定基に関与する場
合、モノクロナール試験抗体は融合細胞ハイブリッドに
よって産生きれる抗体に相当すると呼んでいる。融合細
胞ハイブリッド抗体に相当する抗体は、たとえは、競合
的結合測定法によって容易に決定できる。本発明の測定
法に使用されるモノクロナール試験抗体は必ずしもマウ
スの抗体である必要はない。ラット、ハムスター、ウサ
ギ、ヒト等の抗体が使用できるが、これに限定されるも
のではない。 上述のモノクロナール試験抗体は、試験サンプル中のル
イス式血液型抗原ＬｅａおよびＬｅｂの存在を決定する
好ましい方法にそのまま使用される。 好ましい試験サンプルは唾液である。唾液からの糖脂質
または糖タンパク質は、糖脂質または糖タンパク質を収
着する能力をもつ同体支持体上に固定化させることがで
きる。この支持体としては、本技術分野において公知の
任意の支持体を使用できるが、好ましい固定支持体はプ
ラスチック類である（たとえは、ホリスチレン、ポリプ
ロピレンまたはポリビニル）。このようなプラスチック
のビーズを被検者の日中に瞬間的に入れれは、その表現
に糖脂質または糖タンパク質が固定化される。 この固体支持体上（または任意の試験サンプル中）にお
けるルイス式血液型抗原の存在は、たとえは、同体支持
体（またはサンプル）をモノクロナール試験抗体と接触
させることにより容易に決定できる。試験サンプルを、
最小限、Ｌｅａ抗原を選択的に結合するモノクロナール
試験抗体１種およびＬｅｂ抗原を選択的に結合する他の
モノクロナール試験抗体１種と接触させる。必須ではな
いがＬｅａ−ｔ）−の場合の結果を確認するために、Ｌ
ｅａおよびＬｅｂの両抗原と選択的に結合するモノクロ
ナール試験抗体と試験サンプルを接触させる対照を設け
ることも望ましい。 ＬｅａまたはＬｅｂ抗原の存在、すなわちルイス式血液
型の表現型は、モノクロナール試験抗体が試験サンプル
中でこれらの抗原を選択的に結合するかどうかを示す測
定法によって決定できる。結合の測定技術としては、多
くの方法が本技術分野において公知である（たとえば、
米国特許第４，３８０，５８０号、第４，３７５．９７
２号、餓４．３７６．１１．０号、第４．３７６，１６
５号、第３．７９１．９３２号、第３．６５４．０９０
号、米国再発行特許第３１．００６号診照）。一般的に
、これらの測定法は、モノクロナール試験抗体、または
モノクロナール試験抗体を選択的に結合する抗体（指示
抗体）のいずれかに標識を付すことにより行われる。試
験サンプル、好ましくは固定化された抗原を含む試験サ
ンプルを、次に、（ａ）標識試験モノクロナール抗体と
接触させるか、または（ｂ）非標識モノクロナール試験
抗体と接触させついで標識指示抗体と接触させる。試験
サンプルに連結した標識が検知されれば、試験サンプル
中の抗原決定基にモノクロ、ナール試験抗体が選択的に
結合したことを示す。 本技術分野においては多くの標識が公知である。 たとえば、放射性同位元素（放射免疫測定法）、酵素（
ＥＬＩＳＡまたは酵素連結イムノアゾソーベント測定法
）および螢光化合物（免疫螢光測定法）などが用いられ
る。このほかにも、抗体の抗原への結合を測定する方法
は本技術分野においてよく知られていて、たとえば、沈
降反応、放射免疫拡張法、免疫電気泳動、凝集反応、ロ
ゼツト反応等がある〔たとえば、Ｂ、Ｄ、Ｄａｖｉｓら
： Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ。 ６０６〜５５２．６５５＜５版、１９８０ ’） ；Ｍ
ｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ３７６〜
４０２ （Ｒ，Ｈ。 Ｋｅｎｎｅｔｔ、 ’ｒ、 、ｒ、 ＭｃＫｅａｒｎ
＆ Ｋ、 Ｂ、 Ｂｅｃｈｔｏｌ、 ｌ ９８Ｑ版χＤ
ａｖｉｄら（１９７４） ： Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒ
ｙ、 １６： １０１４〜１０２ ｉ ； Ｒａｄｉｏ
ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ Ｍｅｔｈｏｄｓ（Ｋｉｒｋｈ
ａｍ ＆ Ｈｕｎｔｅｒ １９７０版） ； Ｂ（ｕｎ
ｔｅｒら（１９６２） ： Ｎａｔｕｒｅ、 １４４
： ９４５ ｓ米国特許第３，９４０，４７５号、第３
，８６７，５１７号、第３．６４５，０９０号参照〕。 一部の定量法の場合には、試験抗体または指示抗体のい
ずれかを固定化しておくことが望ましいことがある。こ
の場合、免疫定量法に用いられる一般的な任意の支持体
が使用できる。たとえば、ろ紙およびプラスチックピー
ズまたは容器（たとえば、ポリビニル、ポリスチレン、
ポリプロピレン等）を挙げることができるが、これに限
定されるものではない。ポリサッカライドポリマーも抗
体を結合させるために使用できる（たとえば、米国特許
第３，６４５．８５２号参照）。 好ましい測定法は、本技術分野においてよく知られてい
る放射免疫定量法である〔たとえば・、ｃ、 ｗ、 Ｐ
ａｒｋｅｒ ： Ｆｉａｄｉｏ ｉｍｍｕｎｏａｅｓａ
ｙ ｏｆ ＢｉｏｌｏｇｉｃａｌｌｙＡｃｔｉｖｅ Ｃ
ｏｍｐｏｕｎｄ日（１９７６）参照〕。しかしながら、
とくに好ましい測定法は、酵素連結イムノアブソーベン
ト測定法（ＥＬＩＳＡ）である（たとえば、米国特許第
３，７９１，９３２号、第５．６５４，０９０号、米国
再発行特許第３１，００６号参照）。この種の方法は、
たとえば医師の事務室で、簡単な装置を用い、放射性同
位元素を使用することなく、わずか数分間で簡単に実施
することができる。測定法に採用される特定のパラメー
ターは、採用された特定の放射免疫測定法またはＥＬＩ
ＳＡによって広範囲に変動するが、至適条件は本技術分
野における平均的技術をもつ者であれば、容易に確立さ
せることができる。たとえば１．唾液を使用した場合、
１００，０００倍まで希釈することができ、それでも測
定に適当な基質である。 次に本発明を実施例によってさらに詳細に説明するが、
これは単に例示の目的であって、本発明の範囲を限定す
るものではない。本発明の範囲は特許請求の範囲に明示
したとおシである。 例 １ 男女の被検者６０名からそれぞれ１ｄの唾液サンプルを
採取した。被検者の年齢は２５〜７５歳であった。唾液
サンプルを水浴中で８５℃に６０分加熱して不活性化し
た。次にサンプルをリン酸塩緩衝食塩液（ＰＢＳ ）で
１：４に希釈し、測定まで一２０℃に保存した。 測定直前に唾液サンプルを１：２０に（または第２表に
特定したように）希釈した。ポリスチレンビーズ（Ｐｒ
ｅｃｉｓｉｏｎ Ｐ’１ａｓｔｉｃ Ｂａｌ：Ｌ Ｃ！
ｏ、 Ｃｈｉｃａｇｏ。 ■：ｎ、、 １被検者あた夛５個）を唾液サンプル（２
００μｌ／ビーズ）とインキュベートし、ついで０．０
１ Ｍホウ酸ナトリウム（ｐＨ８，０）中１チゼラチン
により、室温で１時間洗浄した。洗浄したビーズを１検
体につき５個のウェルをもつ反応トレーにとった。１被
検者からの唾液サンプルを含む５個のウェルにそれぞれ
、融合細胞ハイブリッドＡＴｃｃＨＢ８３３２４ （Ｌ
ｅａ）、ＡＴＣＣＨＢ ８３３２５（Ｌｅｂ’）、ＡＴ
ＯＣＨＥＩ ８３３２２ （Ｌｅａｂ）、ＡＴＣ！ＯＨ
Ｂ８３３２３ （Ｌｅａｂ）およびマウス骨髄腫細胞Ｐ
３Ｘ６３Ａｇ８（対照）を含む生育細胞培地の上清を加
えた。ビーズを細胞培養上清と室温で１時間インキュベ
ートさせたのち、０．０５％ウシ血清アルブミン（ＢＳ
Ａ ）含有ＰＢＳで６回洗浄した。 次にビーズを １２５ Ｉ標識、親和性精製、ウサギ抗
マウスＦ （ａｂ’ ）２免疫グロブリンの１ビーズあ
たりＩ Ｘ １０５ｃｐｍと室温で６０分間インキュベ
ートした。ついで、ビーズをＰＢＢ中０．５％ＢＳＡと
６回洗浄し、カウントした。 第１表には上述の放射免疫測定法で得られた結ａ＋ｂ＋ 果を示す。被検者ｃｐはＬｅ 、２４はＬｅａ−ｂ−Ｊ
Ｌ ハＩ、θａ＋ｂ−１ＩＳ ハＬｅａ−” ”’Ｑ
アッタ。第２表はＬｅ ａ ” ｂ−およびＬｅａ−ｂ
＋被検者の唾液サンプルを１００．０００倍まで希釈し
ても、４種のモノクロナール抗体によって明らかに陽性
の選択的結合がみられることを示している。Ｌｅ の被
検者の唾液はいずれの希釈濃度で試験してもモノクロナ
ール抗体を選択的に結合することはなかった。第６表は
６０名の被検者中のルイス式血液型の各表現型の割合を
示している。 第１表 唾液サンプルに対する抗ルイス抗体の結合のＲ
工Ａ’による検出 抗 体 唾液サンプルの結合 コード 特異性 ＣＰ ２４ ＪＬＩｓｏｏ−５１６Ｌ
ｅａ’ｂ ９，８６０ ４８０ ９，５３０ １２．０
１０００”’１４Ｌｅａ１０，７８０ ３３１０．７９
０ ３５０００＝３１ Ｌｅｂ４，４９０ ３２０６９
０ １１．０９０００−５１２Ｌｅａｂ１０．５８ｏ１
８ｏ１ｏ、ｏ６ｏ１２，７１゜Ｐ３Ｘ６３Ａｇ８ 対照
４５２ ４２６ ４５３ ４８１ａ １ビーズあたり
１００，０００ ａｍｐ添加値は同一条件下に２回連続
測定した１ビーズあたシのｃｐｍである 第６表 ６０例の被検者の唾液から得られた被検者数
１（１，６）ａ、４（６，６）１２（２０，０）４３（
７１，６）６０ａ（）内は合計に対するチ Ｌｅ は４種のすべての抗体と反応し、Ｌｅａ−ｂ−は
４種の抗体のいずれとも反応しない。 Ｌｅ ａ ＋ ｂ−は抗体ｃｏ −４３１とＬｅ は抗
体ｃｏ−５１４と反応しない。 例 ２ 本発明の測定を、１２５工標識ウサギ抗マウス抗体に代
えて、パーオキシダーゼ−抗パーオキシダーゼ（ＰＡＰ
）系を用いた酵素連結イムノアゾソーベント測定法に
よシ実施した。 ＰＡＰ測定法においては、ポリスチレンピーズを唾液と
インキュベーション後、例１におけるような反応トレー
中で試験モノクロナール抗体とインキユベートシ、つい
でビオチニル化抗マウス抗体（ビオチン−アビジン免疫
パーオキシダーゼキット、Ｖｅｃｔｏｒ Ｌａｂｓ 、
Ｂｕｒｌｉｎｇａｍｅ 、Ｃａ１ｉｆ ）に室温で３
０分間暴露した。ビーズをＰＢＳで６回洗浄し、アビジ
ンＤ）Ｉ−ビオチニル化ホースラディツシュパーオキシ
ダーゼＨと室温で３０分間インキュベートし、再びＰＢ
Ｓで６回洗浄した。パーオキシダーゼ基質（５ｍ９ジア
ミノベンジジン、１０μ！３０％Ｈ２Ｏ２、１００ｔｔ
ｌｌ Ｉ Ｍ イミダゾールを０．１Ｍトリス緩衝液ｐ
Ｈ７，６，１０ｄにとる）を反応トレー中のウェルに加
えた。陽性のヒースは５〜１０分間のインキュベーショ
ン後に、明らかな暗褐色への染色を示した。 第１図は第１表に：Ｆ６ける４名の被検者の唾液サンプ
ルによる典型的な反応パターンを示す。図中、５１−２
．４３−１．５１−４および５１−６は、それぞれ融合
細胞ハイブリドーマＡＴＣＣＩＨＢ ８３３２２＋ＡＴ
ＣＣＨＢ ８３３２５． ＡＴＣＣＨＢ ８３３２４お
よびＡ’Ｉ’ＣＣＨＢ８３３２３によって産生きれるモ
ノクロナール抗体を示す。Ｐ３はマウス骨髄腫培地Ｐ３
Ｘ６３Ａｇ８の上清を加えた対照ウェルである。図は、
被検者ＣＰ ＊ ２４ ｒ ＪＬおよびＩｓのルイス式
血液ａ＋ｂ＋ ａ−ｂ− 型の表現型がそれぞれ、Ｌｅ 、 ＬｅＬｅａ＋ｂ−お
よびＬｅａ−ｂ＋であることを示している。 これらの結果は、例１における放射免疫測定法の結果と
一致している。 以上に本発明の範囲内に含まれる測定法のい（つかの特
定例を示したが、上述の操作に改変が可能なことは、本
技術分野の熟練者には自明のとおりである。本発明は特
許請求の範囲によってのみ限定される。 ４、図面の簡単な説明 図面は、本発明の方法の実施に使用できる代表的な試験
サンプル反応トレー上で、酵素連結イムノアゾン−ベン
ト測定法によって本発明の方法を行った結果を示す図で
ある（例２参照）。 代理人 浅 村 皓 第１頁の続き ■Ｉｎｔ、ＣＩ、４ 識別記号 庁内整理番号０発 明
者 メーンハード ノ）−リ アメリカ合衆国ペンン
ロード １２２３ ンルバニア州ウインウツド、ノツクス
ソーベント測定法に用いられる典型的な試験サンプル反
応トレーの例である。 発明の詳細な記述 本発明は各個人のルイス式血液型の表現型な決定するた
めに効果的な方法を提供する。本発明の測定法は迅速、
正確で、その−態様においては、被検者からの血液採取
も要しない。この測定法はモノクロナール抗体を産生す
る新規な融合細胞ハイブリッド、ならびにこれらの抗体
の抗原決定基を利用するものである。 ＬｅａおよびＬｅｂ抗原は、糖脂質または糖タンパク質
を含有する各種ヒト体液および組織に認められる。たと
えば血液、唾液、尿、赤血球等であるが、これに限定さ
れるものではなく、他の組織および体液に認められる。 したがって、糖タンパク質または糖脂質含有試験サンプ
ルを採取すれは、それが本発明の測定方法の基質となる
。好ましい試験サンプルは、皮屑の穿刺を袈しない点で
、唾液である。しかも、ルイス式血液型抗原は被検者が
分泌型であっても非分泌型であっても、唾液中には辰現
される。しかしながら、本発明が、たとえば血液、尿ま
たは他のサンプルを用いて容易に実施できることももち
ろんである。糖脂質はホルマリンのような固定液で分解
されることはないので、パラフィン包埋組織サンプルも
使用できる。 ＬｅａおよびＬｅｂ抗原の存在を決定するための好まし
い方法では、特定の融合細胞ハイプリドーマによって産
生される抗体に相当、するモノクロナール試験抗体が使
用される。これらの融合細胞ノ・イブリッドは、ルイス
式血液型抗原と特定の抗原決定基において選択的に結合
するモノクロナール抗体を産生ずる。このハイプリドー
マはマウスを、ＬｅｉｂｏｙｌｚらＣＣａｎｃｅｒ Ｒ
ｅ５０． ３６ ： ４５６２（１９７６））の報告し
た結腸カル７ノーマ細胞系５Ｗ１１１６およびＳＷ’
１２２２によって免疫処置すると産生きれる。免疫処置
マウスの屏風細胞を、本技術分野において公知の方法に
従い、マウス骨髄腫Ｐ ３ ｘ ６３ Ａｇ８と融合さ
せ、ハイプリドーマを回収する（たとえば、Ｋｏｐｒｏ
Ｗｓｋｉら：米国特許第４．１９６．２６５号参照）。 本発明に有用な数種のハイプリドーマが上述の方法によ
って開発された。融合細胞ハイブリッドＡＴＣＣＨＢ
８３３２４は、Ｌｅａ抗原のラクト−Ｎ−７コペンタオ
一ス■活性末端配列に選択的に結合するモノクロナール
抗体Ｃｏ −５１４（ＩｇＧ３アイソタイプ）を産生ず
る。融合細胞ハイブリッドＡＴＣＣＨＢ ８３３２５お
よびＡＴＣＣＨＢ ８６３２６はＬｅｂ抗原のラクト−
Ｎ −’）フコヘキサオース１活性末端配列と選択的に
結合するモノクロナール抗体ｃｏ −４３１およびｃｏ
−３０１（１ｇＭアイソタイプ）をそれぞれ分泌する
。Ｂｒｏｃｋｈａｕｓら［Ｊ。 Ｂｉｏｌ−Ｃｈｅｍｍ２５６．１３２２３ （１９８１
）］によって報告されているハイプリドーマ１１１６Ｎ
Ｓ−１０からのモノクロナール抗体と異なり、上述の抗
体は他の血液製抗原、たとえばＨ抗原と交差反応するこ
とがない。融合細胞ハイブリッドＡＴＣＣＨＢ ８３ろ
２２およびＡＴＣＣＨＢ ８３３２３はそれぞれ、Ｌｅ
ａおよびＬｅｂ抗原の両者と選択的に結合するモノクロ
ナール抗体ｃｏ −５１２（ｘｇ（）３アインタイゾ）
およびＣｏ −５１３（ＩｇＧｓアイソタイプ）を産生
ずる。これらの融合細胞ハイブリッドは、１９８３年７
月２８日、Ａｍｅｒｉｃａｎ ＴｙｐｅＣｕｌｉｕｒｅ
Ｃｏ１１ｅｃｔ、ｉｏｎ （ＡＴＣＣ）、１２３０１
Ｐａｒｋｌａｗｎ Ｄｒｉｖｅ、Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ、
Ｍａｒｙｌａｎｄ ２０８５２に寄託された。実質的
に他の抗体を含まない、上述のモノクロナール抗体含有
溶液を調製するには融合細胞ハイブリッドの生育培地の
上清を集めればよい。 本発明に用いられる好ましいモノクロナール試験抗体は
上述のハイプリドーマによって産生きれ全抗体である。 これら力好ましい試験抗体に相当するモノクロナール抗
体も使用できる。抗原に選択的に結合する試験抗体が融
合細胞）Ｓイブリッドによって産生きれる抗体の選択的
結合を遮断し、両統体が同一の抗原決定基に関与する場
合、モノクロナール試験抗体は融合細胞ハイブリッドに
よって産生きれる抗体に相当すると呼んでいる。融合細
胞ハイブリッド抗体に相当する抗体は、たとえは、競合
的結合測定法によって容易に決定できる。本発明の測定
法に使用されるモノクロナール試験抗体は必ずしもマウ
スの抗体である必要はない。ラット、ハムスター、ウサ
ギ、ヒト等の抗体が使用できるが、これに限定されるも
のではない。 上述のモノクロナール試験抗体は、試験サンプル中のル
イス式血液型抗原ＬｅａおよびＬｅｂの存在を決定する
好ましい方法にそのまま使用される。 好ましい試験サンプルは唾液である。唾液からの糖脂質
または糖タンパク質は、糖脂質または糖タンパク質を収
着する能力をもつ同体支持体上に固定化させることがで
きる。この支持体としては、本技術分野において公知の
任意の支持体を使用できるが、好ましい固定支持体はプ
ラスチック類である（たとえは、ホリスチレン、ポリプ
ロピレンまたはポリビニル）。このようなプラスチック
のビーズを被検者の日中に瞬間的に入れれは、その表現
に糖脂質または糖タンパク質が固定化される。 この固体支持体上（または任意の試験サンプル中）にお
けるルイス式血液型抗原の存在は、たとえは、同体支持
体（またはサンプル）をモノクロナール試験抗体と接触
させることにより容易に決定できる。試験サンプルを、
最小限、Ｌｅａ抗原を選択的に結合するモノクロナール
試験抗体１種およびＬｅｂ抗原を選択的に結合する他の
モノクロナール試験抗体１種と接触させる。必須ではな
いがＬｅａ−ｔ）−の場合の結果を確認するために、Ｌ
ｅａおよびＬｅｂの両抗原と選択的に結合するモノクロ
ナール試験抗体と試験サンプルを接触させる対照を設け
ることも望ましい。 ＬｅａまたはＬｅｂ抗原の存在、すなわちルイス式血液
型の表現型は、モノクロナール試験抗体が試験サンプル
中でこれらの抗原を選択的に結合するかどうかを示す測
定法によって決定できる。結合の測定技術としては、多
くの方法が本技術分野において公知である（たとえば、
米国特許第４，３８０，５８０号、第４，３７５．９７
２号、餓４．３７６．１１．０号、第４．３７６，１６
５号、第３．７９１．９３２号、第３．６５４．０９０
号、米国再発行特許第３１．００６号診照）。一般的に
、これらの測定法は、モノクロナール試験抗体、または
モノクロナール試験抗体を選択的に結合する抗体（指示
抗体）のいずれかに標識を付すことにより行われる。試
験サンプル、好ましくは固定化された抗原を含む試験サ
ンプルを、次に、（ａ）標識試験モノクロナール抗体と
接触させるか、または（ｂ）非標識モノクロナール試験
抗体と接触させついで標識指示抗体と接触させる。試験
サンプルに連結した標識が検知されれば、試験サンプル
中の抗原決定基にモノクロ、ナール試験抗体が選択的に
結合したことを示す。 本技術分野においては多くの標識が公知である。 たとえば、放射性同位元素（放射免疫測定法）、酵素（
ＥＬＩＳＡまたは酵素連結イムノアゾソーベント測定法
）および螢光化合物（免疫螢光測定法）などが用いられ
る。このほかにも、抗体の抗原への結合を測定する方法
は本技術分野においてよく知られていて、たとえば、沈
降反応、放射免疫拡張法、免疫電気泳動、凝集反応、ロ
ゼツト反応等がある〔たとえば、Ｂ、Ｄ、Ｄａｖｉｓら
： Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ。 ６０６〜５５２．６５５＜５版、１９８０ ’） ；Ｍ
ｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ３７６〜
４０２ （Ｒ，Ｈ。 Ｋｅｎｎｅｔｔ、 ’ｒ、 、ｒ、 ＭｃＫｅａｒｎ
＆ Ｋ、 Ｂ、 Ｂｅｃｈｔｏｌ、 ｌ ９８Ｑ版χＤ
ａｖｉｄら（１９７４） ： Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒ
ｙ、 １６： １０１４〜１０２ ｉ ； Ｒａｄｉｏ
ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ Ｍｅｔｈｏｄｓ（Ｋｉｒｋｈ
ａｍ ＆ Ｈｕｎｔｅｒ １９７０版） ； Ｂ（ｕｎ
ｔｅｒら（１９６２） ： Ｎａｔｕｒｅ、 １４４
： ９４５ ｓ米国特許第３，９４０，４７５号、第３
，８６７，５１７号、第３．６４５，０９０号参照〕。 一部の定量法の場合には、試験抗体または指示抗体のい
ずれかを固定化しておくことが望ましいことがある。こ
の場合、免疫定量法に用いられる一般的な任意の支持体
が使用できる。たとえば、ろ紙およびプラスチックピー
ズまたは容器（たとえば、ポリビニル、ポリスチレン、
ポリプロピレン等）を挙げることができるが、これに限
定されるものではない。ポリサッカライドポリマーも抗
体を結合させるために使用できる（たとえば、米国特許
第３，６４５．８５２号参照）。 好ましい測定法は、本技術分野においてよく知られてい
る放射免疫定量法である〔たとえば・、ｃ、 ｗ、 Ｐ
ａｒｋｅｒ ： Ｆｉａｄｉｏ ｉｍｍｕｎｏａｅｓａ
ｙ ｏｆ ＢｉｏｌｏｇｉｃａｌｌｙＡｃｔｉｖｅ Ｃ
ｏｍｐｏｕｎｄ日（１９７６）参照〕。しかしながら、
とくに好ましい測定法は、酵素連結イムノアブソーベン
ト測定法（ＥＬＩＳＡ）である（たとえば、米国特許第
３，７９１，９３２号、第５．６５４，０９０号、米国
再発行特許第３１，００６号参照）。この種の方法は、
たとえば医師の事務室で、簡単な装置を用い、放射性同
位元素を使用することなく、わずか数分間で簡単に実施
することができる。測定法に採用される特定のパラメー
ターは、採用された特定の放射免疫測定法またはＥＬＩ
ＳＡによって広範囲に変動するが、至適条件は本技術分
野における平均的技術をもつ者であれば、容易に確立さ
せることができる。たとえば１．唾液を使用した場合、
１００，０００倍まで希釈することができ、それでも測
定に適当な基質である。 次に本発明を実施例によってさらに詳細に説明するが、
これは単に例示の目的であって、本発明の範囲を限定す
るものではない。本発明の範囲は特許請求の範囲に明示
したとおシである。 例 １ 男女の被検者６０名からそれぞれ１ｄの唾液サンプルを
採取した。被検者の年齢は２５〜７５歳であった。唾液
サンプルを水浴中で８５℃に６０分加熱して不活性化し
た。次にサンプルをリン酸塩緩衝食塩液（ＰＢＳ ）で
１：４に希釈し、測定まで一２０℃に保存した。 測定直前に唾液サンプルを１：２０に（または第２表に
特定したように）希釈した。ポリスチレンビーズ（Ｐｒ
ｅｃｉｓｉｏｎ Ｐ’１ａｓｔｉｃ Ｂａｌ：Ｌ Ｃ！
ｏ、 Ｃｈｉｃａｇｏ。 ■：ｎ、、 １被検者あた夛５個）を唾液サンプル（２
００μｌ／ビーズ）とインキュベートし、ついで０．０
１ Ｍホウ酸ナトリウム（ｐＨ８，０）中１チゼラチン
により、室温で１時間洗浄した。洗浄したビーズを１検
体につき５個のウェルをもつ反応トレーにとった。１被
検者からの唾液サンプルを含む５個のウェルにそれぞれ
、融合細胞ハイブリッドＡＴｃｃＨＢ８３３２４ （Ｌ
ｅａ）、ＡＴＣＣＨＢ ８３３２５（Ｌｅｂ’）、ＡＴ
ＯＣＨＥＩ ８３３２２ （Ｌｅａｂ）、ＡＴＣ！ＯＨ
Ｂ８３３２３ （Ｌｅａｂ）およびマウス骨髄腫細胞Ｐ
３Ｘ６３Ａｇ８（対照）を含む生育細胞培地の上清を加
えた。ビーズを細胞培養上清と室温で１時間インキュベ
ートさせたのち、０．０５％ウシ血清アルブミン（ＢＳ
Ａ ）含有ＰＢＳで６回洗浄した。 次にビーズを １２５ Ｉ標識、親和性精製、ウサギ抗
マウスＦ （ａｂ’ ）２免疫グロブリンの１ビーズあ
たりＩ Ｘ １０５ｃｐｍと室温で６０分間インキュベ
ートした。ついで、ビーズをＰＢＢ中０．５％ＢＳＡと
６回洗浄し、カウントした。 第１表には上述の放射免疫測定法で得られた結ａ＋ｂ＋ 果を示す。被検者ｃｐはＬｅ 、２４はＬｅａ−ｂ−Ｊ
Ｌ ハＩ、θａ＋ｂ−１ＩＳ ハＬｅａ−” ”’Ｑ
アッタ。第２表はＬｅ ａ ” ｂ−およびＬｅａ−ｂ
＋被検者の唾液サンプルを１００．０００倍まで希釈し
ても、４種のモノクロナール抗体によって明らかに陽性
の選択的結合がみられることを示している。Ｌｅ の被
検者の唾液はいずれの希釈濃度で試験してもモノクロナ
ール抗体を選択的に結合することはなかった。第６表は
６０名の被検者中のルイス式血液型の各表現型の割合を
示している。 第１表 唾液サンプルに対する抗ルイス抗体の結合のＲ
工Ａ’による検出 抗 体 唾液サンプルの結合 コード 特異性 ＣＰ ２４ ＪＬＩｓｏｏ−５１６Ｌ
ｅａ’ｂ ９，８６０ ４８０ ９，５３０ １２．０
１０００”’１４Ｌｅａ１０，７８０ ３３１０．７９
０ ３５０００＝３１ Ｌｅｂ４，４９０ ３２０６９
０ １１．０９０００−５１２Ｌｅａｂ１０．５８ｏ１
８ｏ１ｏ、ｏ６ｏ１２，７１゜Ｐ３Ｘ６３Ａｇ８ 対照
４５２ ４２６ ４５３ ４８１ａ １ビーズあたり
１００，０００ ａｍｐ添加値は同一条件下に２回連続
測定した１ビーズあたシのｃｐｍである 第６表 ６０例の被検者の唾液から得られた被検者数
１（１，６）ａ、４（６，６）１２（２０，０）４３（
７１，６）６０ａ（）内は合計に対するチ Ｌｅ は４種のすべての抗体と反応し、Ｌｅａ−ｂ−は
４種の抗体のいずれとも反応しない。 Ｌｅ ａ ＋ ｂ−は抗体ｃｏ −４３１とＬｅ は抗
体ｃｏ−５１４と反応しない。 例 ２ 本発明の測定を、１２５工標識ウサギ抗マウス抗体に代
えて、パーオキシダーゼ−抗パーオキシダーゼ（ＰＡＰ
）系を用いた酵素連結イムノアゾソーベント測定法に
よシ実施した。 ＰＡＰ測定法においては、ポリスチレンピーズを唾液と
インキュベーション後、例１におけるような反応トレー
中で試験モノクロナール抗体とインキユベートシ、つい
でビオチニル化抗マウス抗体（ビオチン−アビジン免疫
パーオキシダーゼキット、Ｖｅｃｔｏｒ Ｌａｂｓ 、
Ｂｕｒｌｉｎｇａｍｅ 、Ｃａ１ｉｆ ）に室温で３
０分間暴露した。ビーズをＰＢＳで６回洗浄し、アビジ
ンＤ）Ｉ−ビオチニル化ホースラディツシュパーオキシ
ダーゼＨと室温で３０分間インキュベートし、再びＰＢ
Ｓで６回洗浄した。パーオキシダーゼ基質（５ｍ９ジア
ミノベンジジン、１０μ！３０％Ｈ２Ｏ２、１００ｔｔ
ｌｌ Ｉ Ｍ イミダゾールを０．１Ｍトリス緩衝液ｐ
Ｈ７，６，１０ｄにとる）を反応トレー中のウェルに加
えた。陽性のヒースは５〜１０分間のインキュベーショ
ン後に、明らかな暗褐色への染色を示した。 第１図は第１表に：Ｆ６ける４名の被検者の唾液サンプ
ルによる典型的な反応パターンを示す。図中、５１−２
．４３−１．５１−４および５１−６は、それぞれ融合
細胞ハイブリドーマＡＴＣＣＩＨＢ ８３３２２＋ＡＴ
ＣＣＨＢ ８３３２５． ＡＴＣＣＨＢ ８３３２４お
よびＡ’Ｉ’ＣＣＨＢ８３３２３によって産生きれるモ
ノクロナール抗体を示す。Ｐ３はマウス骨髄腫培地Ｐ３
Ｘ６３Ａｇ８の上清を加えた対照ウェルである。図は、
被検者ＣＰ ＊ ２４ ｒ ＪＬおよびＩｓのルイス式
血液ａ＋ｂ＋ ａ−ｂ− 型の表現型がそれぞれ、Ｌｅ 、 ＬｅＬｅａ＋ｂ−お
よびＬｅａ−ｂ＋であることを示している。 これらの結果は、例１における放射免疫測定法の結果と
一致している。 以上に本発明の範囲内に含まれる測定法のい（つかの特
定例を示したが、上述の操作に改変が可能なことは、本
技術分野の熟練者には自明のとおりである。本発明は特
許請求の範囲によってのみ限定される。 ４、図面の簡単な説明 図面は、本発明の方法の実施に使用できる代表的な試験
サンプル反応トレー上で、酵素連結イムノアゾン−ベン
ト測定法によって本発明の方法を行った結果を示す図で
ある（例２参照）。 代理人 浅 村 皓 第１頁の続き ■Ｉｎｔ、ＣＩ、４ 識別記号 庁内整理番号０発 明
者 メーンハード ノ）−リ アメリカ合衆国ペンン
ロード １２２３ ンルバニア州ウインウツド、ノツクス
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 （１） ヒト組織およびヒト体液よりなる群から選ばれ
る試験サンプルを準備し、この試験サンプル中において
（ａ）融合細胞ハイブリッドＡＴＣＣＨＢ ８３３２４
ならびに（ｂ） ＡＴＣＣＨＢ ８３３２５およびＡ’
Ｉ’ＣＣＨＢ８３３２６よりなる群から選ばれる融合細
胞ハイブリッドによって産生きれるモノクロナール抗体
に相当するモノクロナール試験抗体が抗原に選択的に結
合するかどうかを測定することを特徴とするルイス式血
液型の表現を決定方法。 （２） 試験サンプルは唾液および血清よりなる群から
選ばれる特許請求の範囲第１項記載の方法。 （３） 試験サンプルは唾液である特許請求の範囲第１
項記載の方法。 （４）融合細胞ハイブリッドＡＴＣＣＨＢ ８３３２２
およびＡＴＣＣＴ（Ｂ ８３３２３によって産生される
モノクロナール抗体よりなる群から選ばれるモノクロナ
ール抗体に相当するモノクロナール試験抗体が試験サン
プル中の抗原に選択的に結合するかどうかをさらに測定
する特許請求の範囲第１項記載の方法。 （５）融合細胞ハイブリッドＡＴＣＣＨＢ ８３３２２
およびＡＴＣＣＨＢ ８３３２５によって産生きれるモ
ノクロナール抗体よりなる群から選ばれるモノクロナー
ル抗体に相当するモノクロナール試験抗体が試験サンプ
ル中の抗原に選択的に結合するかどうかをさらに測定す
る特許請求の範囲第２項記載の方法。 （６） 融合細胞ハイブリッドＡＴＣＣＨＢ ８３３２
２およびＡＴＣＣ’ｍＢ８５３２３によって産生きれる
モノクロナール抗体よりなる群から選ばれるモノクロナ
ール抗体に相当するモノクロナール試験抗体が試験サン
プル中の抗原に選択的に結合するかどうかをさらに測定
する特許請求の範囲第６項記載の方法。 （カ ヒト唾液およびヒト血液よりなる群から選ばれる
サンプルについて、融合細胞）−イゾリツドＡＴＣＣＨ
Ｂ ８３３２４ならびにＡＴＣＣＩＨＢ ８３３２５お
よびＡＴＣＣＨＢ ８３３２６よりなる群から選ばれる
融合細胞ハイブリッドによって産生きれるモノクロナー
ル抗体と選択的に結合する抗原決定基の存在を試験する
ことを特徴とするルイス式血液型の表現型決定方法。 （８） 試験は放射免疫測定法による特許請求の範囲第
７項記載の方法。 （９）試験は酵素連結イムノソルベント測定法による特
許請求の範囲第７項記載の方法。 （１０） （ａ）ヒト唾液サンプルと接触させた、糖脂
質または糖タンパク質を固定化できる少なくとも２個の
固体支持体を準備し、（ｂ）第一の固体支持体を融合細
胞ハイブリッドＡＴＣＣＨＢ ８３３２４によって産生
きれるモノクロナール抗体に相当するモノクロナール試
験抗体と接触させ、（Ｃ）第二の固体支持体をＡＴＣＣ
ＨＢ ８３３２５およびＡＴＣＣＨＢ８６６２６よりな
る群から選ばれる融合細胞ハイブリッドによって産生き
れるモノクロナール抗体に相当するモノクロナール試験
抗体に接触させ、（ｄ）モノクロナール試験抗体接触工
程後に、各固体支持体をそのモノクロナール試験抗体に
選択的に結合する指示抗体と接触させ、ついで（ｅ）こ
の指示抗体がその固体支持体上でモノクロナール、試験
抗体に選択的に結合するかどうかを測定することを特徴
とするルイス式血液型の表現型決定方法。 Ｑｌ） 工程（ｅ）は放射免疫測定法および酵素連結測
定法よりなる群から選ばれる方法によって実施する特許
請求の範囲第１０項記載の方法。 （１２＋ 第三の唾液接触固体支持体を融合細胞）・イ
ブリントＡＴＣＣＨＢ ８’３ろ２２およびＡＴＣＣＨ
Ｂ ８５５２５よりなる群から選ばれる融合細胞ノ・イ
ブリントによって産生きれる抗体に相当するモノクロナ
ール試験抗体に接触させる特許請求の範囲第１０項記載
の方法。 （１３ｊ 融合細胞ハイブリッドＡＴＣＣＨＢ ８３３
２２（１車 融合細胞ハイブリッドＡＴＣＣＨＢ ８３
３２ろ０５）融合細胞ハイブリッドＡＴＣＣＨＥ ８３
３２４（Ｉ６）融合細胞ハイブリッドＡＴＣＣＨＢ ８
３３２５（ｔ７１ 融合細胞ハイブリッドＡＴＣＣＨＢ
８３ ｇ ２６Ｑ８） 特許請求の範囲第１６項記載
の融合細胞ハイブリッドによって産生きれるモノクロナ
ール抗体からなる組成物。 （１１特許請求の範囲第１４項記載の融合細胞ハイブリ
ッドによって産生きれるモノクロナール抗体からなる組
成物。 （２Ｑ 特許請求の範囲第１５項記載の融合細胞ハイブ
リッドによって産生きれるモノクロナール抗体からなる
組成物。 （２、特許請求の範囲第１６項記載の融合細胞ハイブリ
ッドによって産生きれるモノクロナール抗体からなる組
成物。 ０鴎 特許請求の範囲第１７項記載の融合細胞ハイブリ
ッドによって産生されるモノクロナール抗体からなる組
成物。
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