JPS60155114A - 制癌剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、新規な制癌剤に関するものである。

従来、癌化学療法剤として、アルキル化剤（ナイｌ−ロ
ゼンマスタード類、エチレンイミン類、スルホン酸エス
テル類）、代謝拮抗物質（葉酸拮抗剤、プリン拮抗剤、
ピリミジン拮抗剤）、植物性核分裂前（コルセミド、ビ
ンブラスチン等）、抗生物質（ザルコマイシン、カルチ
ノフイリン、マイトマイシン等）、ホルモン類（副腎ス
テロイド、男性ホルモン、女性ホルモン）及びポルフィ
リン錯塩（マーフィリン、Ｃ０ＰＰ）等が用いられてい
るが、一般に制癌物質の核酸阻害作用は癌細胞だけでな
く正常細胞にも作用するために毒性が強く、重大な副作
用を呈するので、感染症に対する化学療法剤の如く大量
の薬剤を使用することによって十分な効果をあげること
は困難な現状にある。

本発明者は、先にベンズアルデヒドを有効成分とする新
規且つ有用な制癌剤を開発しく特許第１１５７７３７号
参照）、この有効成分の作用が癌細胞を直接攻撃するも
のではなく、従来考えられて来た化学療法剤とは別異の
作用機作で治療効果を生ずるものと考えられる特異的な
抗癌作用であることを新たに見出したが、更に制癌活性
物質の探索について鋭意研究の結果、芳香族アルデヒド
及びその誘導体においてそれぞれ制癌活性を有する物質
を見出し、これらの物質が癌治療に顕著な効果を発揮し
得ることの新たな知見を得てここに本発明の制癌剤を完
成した。

従来の癌化学療法剤の多くがＳＶ４０発癌ウィルスによ
る癌化細胞よりもエールリッヒ腫瘍などの移植癌に対し
て感受性が高い、いわゆる生体細胞毒性型の物質である
のに対し、本発明の制癌剤の有効成分は、Ｓ　Ｖ　ａ　
ｏ発癌ウィルスによって癌化した細胞に作用して高い感
受性を示す点において、従来の癌化学療法剤の作用機作
とは異なる特異的な制癌作用に基づくものと考えられ、
制癌剤としてずぐれた特色を有するものである。

本発明に用いる制癌活性を有する芳香族アルデヒド及び
その誘導体は、第１表のとおりである。

策上表 上記化合物１〜２１　（以下、上記化合物は化合物番号
をもって示す。）についての参考文献及び物性値を第２
表に示す。

（製造例１） ベンズアルデヒド１０．６ｇとイソブチルアミン７．３
ｇをベンゼン−トルエンの混合溶媒に溶解し、トルエン
と共に共沸してくる水を除去しつつ３時間還流して濃縮
後、蒸留せしめると、Ｎ−ベンジリデンイソブチルアミ
ン（５）（収率：８ｏ％）を得る。（ｂ、ｐ、　７　Ｂ
　−８０℃７２ｍｍＨｇ）（製造例２） ベンズアルデヒド１０．６　ｇと２−エトキシエチルア
ミン９．０ｇをベンゼンに溶解し、ベンゼンと共沸して
くる水を除去しつつ３時間還流して濃縮後、蒸留せしめ
ると、１−ベンジリデンアミノ−２−エトキシエタン（
６）（収率：８０％）を得る。

（ｂ、ｐ、　９０−９１℃／　１　ｍ＋１１８ｇ）（製
造例３） ベンズアルデヒド１０．６　ｇと３−ジメチルアミノ−
ｎ−プロピルアミン１０．５　ｇをベンゼン−トルエン
の混合溶媒に溶解し、共沸してくる水を除去しつつ３時
間還流して濃縮後、蒸留せしめると、１−ベンジリデン
アミノ−３−ジメチルアミノプロハン（７）（収率：９
１％）を得る。（ｂ、ｐ、　１２０−１２３℃／　３　
ｍｍＨｇ） なお、上記化合物５．６及び７は、それぞれ文献未載の
化合物である。

本発明の制癌剤は、経口及び非経口投与のいずれも使用
可能であり、経口投与する場合は、軟・硬カプセル剤又
は錠剤、顆粒剤、細粒剤、散剤として投与され、非経口
投与する場合は、注射剤、点滴剤及び固体状又は懸濁粘
稠液状として持続的□な粘膜吸収が維持できるように生
薬のような剤型で投与され得る。

本発明の制癌剤組成物の有効成分の割合は、剤型によっ
て変更し得るが、通常、懸濁物又は粘膜吸収に投与され
るとき、はぼ０．３〜１５．０重量％が適当であり、非
経口□投与されるときは、はぼ０．０１〜１０重量％が
適当である。

また、本発明の有効成分を製剤化するに当っては、上記
芳香族アルデヒド誘導体１〜１３の場合□は常法に従い
、水溶性懸濁液、油性製剤などにして皮下或いは静脈注
射用製剤とする□ことができる他、カプセル剤、錠剤、
細粒剤等の剤型に製剤化して経口用に供することができ
るが、上記化合物のうち、芳香族アルデヒド化合物及び
マンゾロニトリルについては、不安定な刺戟性物質で、
あるために組成物の配合において、その変質防止及び刺
戟性の除去、が要求される。

これらの化合物としては、上記化合物１４．１５．１６
．１７．１８．１９．２０及び２１がこれに該当し、そ
の自動酸化を防止すると共にその刺戟性を改善しなけれ
ばならない。

この方法としては、例えば、コレイン酸やシクロデキス
トリン（ＣｙｃＬｏｄｅｘｔｒｉｎ）の包接能を利用し
た包接化合物とすることが適当であり、またマイクロカ
プセルによる製剤化も有効である。

また、上記包接化合物を長時間の保存に耐える安定性及
び耐酸性を附与して薬効ｔ７審今に持続させるために、
更に医薬的に許容φ得る皮膜を、施して製剤化すれば、
すぐれた安定性を有する制癌剤組成物とすることができ
る。

本発明の有効成分の製剤化に用いられる界面活性剤、賦
形剤、滑沢剤、佐剤及び医薬的に許容し得る皮膜形成物
質等を挙げれば、次のとおりである。

本発明の組成物の崩壊、溶、出を良好な、らしめるため
に、界面活性剤、例えばアルコール、エステル類、ボリ
エｔレンゲリコール誘導体、ソルビタンの脂肪酸エステ
ル類、硫酸化脂肪アルコール類等の１種スは２種以上を
、添、加することがで、、き、る。

また７、賦形剤として、例えば蔗糖、乳糖１．デンプン
、結晶、セルローろ、マンニット、軟質無水珪酸、アル
ミン酸マグネシウム、メタ珪酸アルミンマグネシウム、
合、成畦、酸アルミニウム、炭酸カルシ？、ム、炭酸水
素ナトリウム、リン酸水素カルシウム、力、、ポキシメ
チ）Ｌｔ−１！ＪＬｔＯ−７，力、６ウエ等の１種又は
２種以上を組合せ正添加することかで１ きる。　、　、 滑沢剤としては、例えばステアリン酸マグネジ　−ラム
、タルク、硬化油等を１種又は２種以上添加する÷とか
もき、また矯味剤及び矯臭剤として、食塩、ツソカ、リ
ン、糖、マンニット、オレンジ油、カンゾウエキス、ク
エン酸、ブドウ糖、メントール、ユーカリ油、リンゴ酸
等の甘味剤、香料、着色剤、保存料等を含有させてもよ
い。

懸濁剤、湿潤剤の如き佐剤としては、例えばココナツト
油、オリーブ油、ゴマ油、落下注油、乳酸カルシウム、
ベニバナ油、大豆リン脂質等を含有させることができる
。

また、皮膜形成物質としては、セルロース・糖類等の炭
水化物誘導体として酢酸フタル酸セルロース（ＣＡＰ）
　、またアクリル酸系共重合体、二塩基酸モノエステル
類等のポリビニル誘導体としてアクリル酸メチル・メタ
アクリル酸共重合体、メタアクリル酸メチル・メタアク
リル酸共重合体が挙げられる。

また、上記皮膜形成物質をコーティングするに際し、通
常使用されるコーティング助剤、例えば可塑剤の他、コ
ーティング操作時の薬剤相互の付着防止のための各種添
加剤を添加することによって皮膜形成剤の性質を改良し
たり、コーティング操作をより容易ならしめることがで
きる。

また、投与量は、所望の治療効果及び治療期間によって
左右されるが、大人では通常、１日当り上記化合物とし
て０．５〜５，０００ｍｇ、小人では通常、０．５〜３
，０００ｍｇである。

次に、上記化合物の制癌活性を確認した制癌性試験法に
ついて述べる。

Ｃ３Ｈマウスの腎細胞を５ｖ４ｏ発癌ウィルスで癌化さ
せた細胞Ｗ２Ｋ・１１を供試細胞とし、これを次の方法
によって培養した。

（１１増殖培養液の調製 イーグルＭＥＭ培地９．４ｇを蒸留水９００ｍ４に溶か
し、１２０℃、１５分間加圧滅菌し、冷却後、仔牛血清
１００ｍｎ及び別途１１５°Ｃ１１５分間加圧滅菌した
１０％炭酸水素ナトリウム液を３〜５　ｍ　ｌ加えてｐ
Ｈ７，１〜７．２に調整する。接地使用直前にミリボア
・フィルターで濾過したＬ−グルタミ７　（２，９２ｇ
／　１０　ＱｍＡり溶液１０ｍβを加える。

なお、供試細胞の保存には、更に最終濃度１０％のジメ
チルスルホキサイドを加える。

（２）移植細胞の調製 ジープ・フリーザー（−８０℃）で保存された供試細胞
を室温で溶解させ、６７０ＸｇＳ分間遠心分離して上滑
を捨て、沈殿した細胞を増殖培地５　Ｑ　ｍ　１に懸濁
した後にルー・フラスコに移し、３７℃で培養すると、
細胞はフラスコ底面に耐着しながら増殖を始め、３〜４
日で十分に増殖する。培養液をデカントし、次いで０．
２％トリプシン溶液（イーグルＭＥＭ培地（日永製薬側
製）４．７ｇ、重曹０．６ｇ及びトリプシン１ｇを蒸留
水５０　ＱｍＡに溶かし、ミリボア・フィルターで濾過
した溶液）１０ｍＡを加えて室温で２〜３分間トリプシ
ン処理した後、トリプシン溶液をデカントする。更に新
鮮な増殖培地５０ｍβを加え、駒込ピペットで耐着して
いる細胞を洗い落して細胞浮遊液とする。

一部はルー・フラスコを用いて継代培養する。

（３）細胞培養と被験化合物の投与 前記細胞浮遊液１．８　ｍβをディスポーザル・シャー
レ（直径３５ｍｍ）に分注し、炭酸ガスインキュベータ
ー（５％Ｃｏｔ、９５％ａｉｒ　）中で３７℃、２４時
間培養する。

この時点で被験化合物の溶液０．２　ｍ　１２を投与し
て培養を継続する。

細胞増殖の状態は、倒立顕微鏡を用いて連日観察し、投
与後、４８時間に細胞の生存数を数える。なお、被験化
合物は、蒸留水又はエタノール（最終濃度２％）に溶解
させた後、ミリボア・フィルターで濾過する。

（４）細胞数の数え方 被験化合物投与後、４８時間のシャーレをデカントして
上滑（培養液）を捨て、前記０．２％トリプシン溶液１
．　Ｏｍ　／！でシャーレの底に耐着した細胞を処理す
ると単細胞になる。これをデカントしてトリプシン溶液
を除去し、１０ミリモルの燐酸緩衝液（ｐＨ７，０）を
含む生理食塩水で細胞浮遊液を作り、その一部の１ない
し２滴を血球計算板にとり、カバーグラスをかぶせ顕微
鏡下で細胞数を数える。

供試細胞増殖の抑制率は、次式によりめた。

×　１００ 次に、本発明の有効成分の化合物の毒性については、い
ずれの化合物も低分子構造のために速かに生体外に排泄
されるので副作用を住じないこと、またマウスの皮下注
射及び経口投与におけるＬＩＤ５゜値もいずれも他の制
癌物質に比し低毒性であり、例えば、上記化合物１５．
１９．２０及び２１のマウスの経口投与の場合のＬ　Ｄ
ｓｏ　（ｍｇ／ｋｇ）は、それぞれ５００，５００、ｓ
、ｏｏｏおよびａ、ｏｏ。

以上である。

以下に、本発明を製剤例及び試験例によって具体的に説
明する。

製剤例１　（注射・点滴剤） 上記化合物１．５００ｍｇを含有するように粉末ぶどう
ｌ１５ｇを加えてバイアルに無菌的に分配し、密封した
上、窒素、ヘリウム等の不活性ガスを封入して冷暗所に
保存する。使用前に、０．８５％生理的食塩水５００ｍ
１を添加して静脈内注射剤とし、１日、１′θ〜５００
ｍ１を症状に応じて静脈内注射又は点滴で投与する。

製剤例２（注射・点滴剤） 上記化合物３．５０＋＋＋ｇを用いた他は、製剤例１と
同様の方法により軽症用静脈内注射剤とし、１日、１０
〜５００ｍｆｆ１を症状に応じて静脈内注射又は点滴で
投与する。

製剤例３（注射剤、カプセル剤） 上記化合物１４．３０ｍｇを精製ゴマ油１ｇ及びステア
リン酸アルミニウムゲル１００ｍｇに溶解し密封した上
、窒素、ヘリウム等の不活性ガスを封入して冷暗所に保
存し、皮下注射用製剤とする。

症状に応じて１日に１回、１〜ｌ　Ｑｍｊ！を皮下注射
で投与する。

また、前記製剤を０．５　ｍ　ｌづつカプセルに分注し
て経口用カプセル剤とし、１日、１−１０カプセルを症
状に応じて経口投与する。

製剤例４（ｌ！溶性錠剤） β−シクロデキストリン（日本食品化工■製）の飽和水
溶液３．０００ｍｊ＋に上記化合物２１．１５ｇを入れ
て混合し、５時間攪拌すると包接物が沈殿するので、こ
の沈殿物を減圧乾燥すると、１００ｇの上記化合物２１
の包接化合物が得られる。

以下の成分組成で腸溶性錠剤大人用（イ）及□び小人用
（ロ）各々１，０００個を製造した。

（Ａ） （イ）　（ロ） 主剤（上記化合物２１　１００（ｇ）５１００（の包接
化合物） 乳　１！　９９．４　４９．７ ヒドロキシプロピル　０．６　０．３ セルロース ステアリン酸マグネシウム　２．８　１．０（Ｂ） 酢酸フタル酸セルロース　６．０　（ｇ）　４．０　（
ｇ）ヒドロキシプロピルメチル　６．０　４．０セルロ
ースフタレート （Ａ）の成分を各々とり、よく混合し、このものを直接
に加圧するか、またはよく練合した後、押し出し型製粒
機のスクリーンを通して顆粒成形を行い、十分によく乾
燥したものを加圧して錠剤を製造した。

次に、成形された錠剤によく溶解させた（Ｂ）の基埜を
被覆して腸壇性の錠剤とする。

この錠剤について日本薬局方（以下、１日局」という。

）崩壊試験法、腸溶性製剤の人工胃液（ｐＨ１，２）試
験を行ったところ、１時間振盪しても崩壊せず、人工腸
液（ｐＨ７，５）試験においては５〜６分で崩壊した。

製剤例５（腸溶性顆粒剤） 以下の成分で腸溶性顆粒剤１．ＯＱＯｇを製造した。

（Ａ） 主剤（上記化合物１６　１００　（ｇ）の包接化合物） 乳　Ｐ！７３７ ヒドロキシプロピル　３ セルロース （Ｂ） 酢酸フタル酸セルロース　８０　（ｇ）ヒドロキシプロ
ピルメチル　８゜ セルロースフタレート （Ａ）の成分を各々とり、よく混合した後、常法に従っ
て粒状に成形し、それをよく乾燥して篩別し、ビン、ヒ
ートシール包装などに適した顆粒剤を製造した。次に、
この顆粒を浮遊流動させながら溶解したＣＢ）の基材を
被覆し、腸溶性の顆粒剤とする。この顆粒剤は、日周の
崩壊試験器を用いて崩壊試験を行なったところ、ｐＨ１
，２の人工胃液に１時間振盪しても崩壊しない。ｐｌ＋
７．５の人工腸液では５分で崩壊した。

製剤例５　（腸溶性カプセル剤） 以下の成分で腸溶性カプセル剤１．０００個を製造した
。

（Ａ） （イ）　（ロ） 主剤（上記化合物１７　１００（ｇ）５１００（の包接
化合物） 乳　糖　２４．６　７４．４ ヒドロキシプロピル　０．４　Ｑ、４ セルロース （Ｂ） 酢酸フタル酸セルロース　１０（ｇ）　１０（ｇ）ヒド
ロキシプロピルメチ＃１０　１０ セルロースフタレート 上記の成分で製剤例５に記載した同様の方法でカプセル
用に適した腸溶性の顆粒剤を製造し、その組成物をカプ
セルに充填して腸溶性カプセルとした。

このカプセルは、日周の崩壊試験器を用いて崩壊試験を
行ったところ、ｐＨ１，２の人工胃液に１時間振盪して
も崩壊または溶出を認めず、ｐＨ７，５の人工腸液に５
分で崩壊または全量が溶出した。

試験例１ 芳香族アルデヒド誘導体の被験化合物として上記化合物
１．２．３．４．５．６．７．８．９、ｉｏ、ｌｉ、１
２．１３及び１４を用い、前記試験法によりＳＶ４０発
癌ウィルスによって癌化したＣ３Ｈマウスの癌細胞Ｗ２
に−１１の増殖抑制率（％）を算出し、ヘンズアルデヒ
ド（対照）の増殖抑制率（％）を１００とした場合の上
記被験化金物の増殖抑制率相対活性値を算出した。第３
表に示す結果が得られた。

第３表 試験例２ 芳香族アルデヒドの被験化合物として上記化合物１５．
１６．１７．１８．１９．２ｏ及び２１を用い、試験例
１と同様にして上記被験化合物の増殖抑制率相対活性値
を算出したところ、第４表のとおり結果が得られた。

第４表 〔考察〕 試験例１及び２の結果から明らかなように、上記被験化
合物は、すぐれた制癌活性を有するベンズアルデヒドの
増殖抑制率を１００とした場合においていずれもベンズ
アルデヒドと同等ないしそれ以上の活性値を示しており
、すぐれた制癌活性を有することが立証された。

なお、上記被験化合物中、化合物２の活性値が他の化合
物に比して低い。しかしながら、従来の癌化学療法剤の
多くが動物の移植癌に比し、ＳＶ、。

発癌ウィルスによる癌化細胞に活性が低いのに対して上
記化合物がこれに作用して抑制効果を示すことは極めて
特徴的であることに注目すべきことである。

即ち、従来の細胞毒性型の制癌剤の多くは動物の実験腫
瘍、即ち移植癌に対して顕著な活性を示すのに比し臨床
的には多くの問題点を残しており、有効例は極めて少い
のが実状であって、これは移植癌と初発癌との間の根本
的な差異に基づくものと考えられ、人為的な初発癌とも
いえるＳＶ４゜ウィルス誘発癌に活性を有する上記化合
物は極めて特徴的な制癌活性を有するものと認められる
ものである。

特許出願人　理化学研究所 同　上　東風睦之 同　上　科研製薬株式会社

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. ０−フルオロベンズアルデヒド、ｍ−フルオロベンズア
   ルデヒド、Ｐ−フルオロベンズアルデヒド、０−フタル
   アルデヒド酸、０−フタルアルデヒド、ｍ−フタルアル
   デヒド、Ｐ−フタルアルデヒド、ベンズアルデヒド亜硫
   酸付加物ナトリウム塩、モノベンザルペンタエリスリト
   ール、Ｎ−ベンジリデンエチルアミン、Ｎ−ベンジリデ
   ンメチルアミン、Ｎ−ベンジリデンイソブチルアミン、
   １−ベンジリデンアミノ−２−エトキシエタン、ｌ−ベ
   ンジリデンアミノ−３−ジメチルアミノプロパン、１−
   ベンジリデンアミノ−２−プロパツール、２−ベンジリ
   デンアミノ−２メチルプロパツール、３−ベンジリデン
   アミノ−１−プロペン、α−ベンズアルドキシム、３−
   エチル−２−フェニルオキサゾリジン、３−（２”　−
   ヒドロキシエチル）−２−フェニルオキサジノン及びマ
   ン、デ９ニトリルから成る群から選ばれる少なくとも１
   種の化合物を有効成分とする制癌剤。