JPS60149529A - 白血病細胞に対する分化誘導因子の産生方法 - Google Patents
白血病細胞に対する分化誘導因子の産生方法Info
- Publication number
- JPS60149529A JPS60149529A JP59005209A JP520984A JPS60149529A JP S60149529 A JPS60149529 A JP S60149529A JP 59005209 A JP59005209 A JP 59005209A JP 520984 A JP520984 A JP 520984A JP S60149529 A JPS60149529 A JP S60149529A
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- JP
- Japan
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- serum
- cells
- differentiation
- ceruloplasmin
- leukemia cells
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- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明はセルロプラスミンを哺乳動物に投与することに
より、白血病細胞に対ｒる分化誘導因子を産生させる方
法並びにその因子を有効成分とする白血病治療剤に関す
る。
より、白血病細胞に対ｒる分化誘導因子を産生させる方
法並びにその因子を有効成分とする白血病治療剤に関す
る。
セルロプラスミンは、その分子中に８個の銅原子を含む
銅結合性血漿蛋白質であり、その生理作用として銅及び
鉄代謝の調節を司ることが知られている。
銅結合性血漿蛋白質であり、その生理作用として銅及び
鉄代謝の調節を司ることが知られている。
近年になり、血清中の抗酸化剤としての役割が明かにさ
れている。更に、骨髄中の赤芽球系及び顆粒球系幹細胞
の増殖促進効果が報告されている〔医学のあゆみ、１１
８，３４５（１９８１）、Ｃｕｒｒｅｎｔ′ｒｂｃｒａ
ｐｅｕｔｉｃ Ｒｅｓ、、 ３１’、 ４３５（１９８
２） ）。また、酸化作用に基づく発癌系などに抗腫瘍
作用を示すことも報告されている（特開昭５６−１２０
６２２）。
れている。更に、骨髄中の赤芽球系及び顆粒球系幹細胞
の増殖促進効果が報告されている〔医学のあゆみ、１１
８，３４５（１９８１）、Ｃｕｒｒｅｎｔ′ｒｂｃｒａ
ｐｅｕｔｉｃ Ｒｅｓ、、 ３１’、 ４３５（１９８
２） ）。また、酸化作用に基づく発癌系などに抗腫瘍
作用を示すことも報告されている（特開昭５６−１２０
６２２）。
一方、セルロプラスミンを各種動物に投与した場合、血
清中に各種細胞の増殖を促進させる因ｐを放出させるこ
とから、組織培養用血清として有用であることが本発明
者によって報身されている（特開昭５８−１４１７８２
）。
清中に各種細胞の増殖を促進させる因ｐを放出させるこ
とから、組織培養用血清として有用であることが本発明
者によって報身されている（特開昭５８−１４１７８２
）。
本発明者は、セルロプラスミンのもつ多岐にわたる存在
意義に注目し、鋭惹ω１究を重ねた結果、セルロプラス
ミンには白血病細胞を主としてマクロファージに分化さ
せる因子を生体内に産生誘導させる作用のあることを見
い出し、本発明を完成した。
意義に注目し、鋭惹ω１究を重ねた結果、セルロプラス
ミンには白血病細胞を主としてマクロファージに分化さ
せる因子を生体内に産生誘導させる作用のあることを見
い出し、本発明を完成した。
白血病とは、白血球が未成熟な段階で分化が停止し、無
制限に増殖する疾患であり、発癌物質や放射線照射で発
症すると考えられている。本症は＋ｆｎ液ガンとも呼は
れ、その治療Ｉこは代謝拮抗剤、アルキル化剤等の制ガ
ン剤や副腎皮質ホルモン等が用いられており、一時的な
効果はみられるものの、多くの場合、これら薬剤の副作
用も含めて予後は極めて不良である。
制限に増殖する疾患であり、発癌物質や放射線照射で発
症すると考えられている。本症は＋ｆｎ液ガンとも呼は
れ、その治療Ｉこは代謝拮抗剤、アルキル化剤等の制ガ
ン剤や副腎皮質ホルモン等が用いられており、一時的な
効果はみられるものの、多くの場合、これら薬剤の副作
用も含めて予後は極めて不良である。
この疾病の原因となっている白１１１１球を成熟白血球
又はマクロファージに分化さぜることか最良の治療法で
あろうことは容易に想（象され、多くの試みはなされて
いるが、現在名その成功例は報告されていない。
又はマクロファージに分化さぜることか最良の治療法で
あろうことは容易に想（象され、多くの試みはなされて
いるが、現在名その成功例は報告されていない。
本発明に係る白（（ＩＬ病細胞の分化誘導因子は、セル
ロブラスミンの刺激により生体より誘導されたものであ
り、これまで知られている白血病治療薬及びホルボール
エステル類等の分化誘導能を有する物質にくらべ、その
臨床的応用に際しても副作用の少ない安全な治療剤であ
ると考えられる。
ロブラスミンの刺激により生体より誘導されたものであ
り、これまで知られている白血病治療薬及びホルボール
エステル類等の分化誘導能を有する物質にくらべ、その
臨床的応用に際しても副作用の少ない安全な治療剤であ
ると考えられる。
本発明に係る白ｔｍ病細胞の分化誘導因子の産生方法に
ついて以下に述べる。
ついて以下に述べる。
本発明に係る白血病細胞の分化誘導因子は、哺乳動物に
セルロブラスミンを投与することにより、その血液中に
産生遊離される。哺乳動物に対するセルロプラスミンの
１回投与−Ｍは休■↓ｌ Ｋｇ当り０．１〜１０ｍ！？
が適当てあり、投与経路は筋肉内投与、腹腔内投与もｂ
ｊ能であるが、静脈内投与が望ましい。投与期間は投与
量及び個体差に依るが、標準的には、１日１回、１週間
以上の反復投与により該因子をその血清中に産生せしめ
ることか出来る。１回のみの投与では不十分であるが、
３週間以上反復投与しても著しい効果の向上は認められ
ないため、１〜３週間反復投与するのが好ましい。
セルロブラスミンを投与することにより、その血液中に
産生遊離される。哺乳動物に対するセルロプラスミンの
１回投与−Ｍは休■↓ｌ Ｋｇ当り０．１〜１０ｍ！？
が適当てあり、投与経路は筋肉内投与、腹腔内投与もｂ
ｊ能であるが、静脈内投与が望ましい。投与期間は投与
量及び個体差に依るが、標準的には、１日１回、１週間
以上の反復投与により該因子をその血清中に産生せしめ
ることか出来る。１回のみの投与では不十分であるが、
３週間以上反復投与しても著しい効果の向上は認められ
ないため、１〜３週間反復投与するのが好ましい。
上記の様にしてセルロブラスミンを投与された呻乳動物
から血液を採取し、常法により商漬を分割した後、これ
を必要に応じ数十分間数十度でｆ＋＋、ｒ温処理した後
、除菌用フィルターで濾過することにより該因子を含有
する血清か得られる。
から血液を採取し、常法により商漬を分割した後、これ
を必要に応じ数十分間数十度でｆ＋＋、ｒ温処理した後
、除菌用フィルターで濾過することにより該因子を含有
する血清か得られる。
上記の様にして得られる血清又Ｊま血液は凍結保存又は
凍結乾燥して長期保存にｍｌえられる製品にすることが
出来る。父上化の血清又は血液は、該因子の活性を保持
した状態でこれを濃縮又は単離精製した後治療剤として
用いることも可能である。
凍結乾燥して長期保存にｍｌえられる製品にすることが
出来る。父上化の血清又は血液は、該因子の活性を保持
した状態でこれを濃縮又は単離精製した後治療剤として
用いることも可能である。
尚、治療に際しては抗原性の観点から、同種属由来の血
７＾を用いることが望ましい。
７＾を用いることが望ましい。
なお、セルロブラスミンの収得法は公知であり、例えば
、ヒト血清画分のコーンＩＶ−１ペーストからエタノー
ル分画法及びイオン交換クロマトグラフィーにて高純度
に精製される。
、ヒト血清画分のコーンＩＶ−１ペーストからエタノー
ル分画法及びイオン交換クロマトグラフィーにて高純度
に精製される。
次に該因子の白血病細胞に対する分化誘導効果を実験例
を挙げて説明ずろ。
を挙げて説明ずろ。
実験例（１）
マウス骨髄性白血病細胞Ｍ１の分化誘導効果セルロブラ
スミンを反復投与した家兎血清を用いて、上記Ｍ１細胞
に及はす効果について検討した。
スミンを反復投与した家兎血清を用いて、上記Ｍ１細胞
に及はす効果について検討した。
〜１□細胞を１０％牛脂児血清を含有するＭＥＭ培地に
２×１０ 個／ｍｔ、の濃度で懸濁させ、プラスチック
シャーレに播き、５％炭酸ガス含有空気中、３７℃で培
養し、この培地中にあらかじめセルロプラスミンを反復
投与したのち得た家兎血清（実施例１で得られた血清）
を最終濃度として１０，２０゜３０．４０％濃度に添加
し、経日的に細胞形態及びラテックス粒子貧食能を観察
した。
２×１０ 個／ｍｔ、の濃度で懸濁させ、プラスチック
シャーレに播き、５％炭酸ガス含有空気中、３７℃で培
養し、この培地中にあらかじめセルロプラスミンを反復
投与したのち得た家兎血清（実施例１で得られた血清）
を最終濃度として１０，２０゜３０．４０％濃度に添加
し、経日的に細胞形態及びラテックス粒子貧食能を観察
した。
この実験の対照群として、セルロブラスミンそれ自体及
びヒトアルブミンを静脈内に反復投与した家兎の血清を
用いた。このヒトアルブミン投与血清は、ヒトアルブミ
ン（Ｓｉｇｍａ製品ｔｒａｃｔ ｉｏｎ Ｖ ）を家兎
に１ ｍＷ ／ Ｋ９体重の投与量で１日１回、耳静脈
内に７日間連日投与し、８日目に採取した血液より血清
を分軸し１．５６℃で３０分間熱処理したものである。
びヒトアルブミンを静脈内に反復投与した家兎の血清を
用いた。このヒトアルブミン投与血清は、ヒトアルブミ
ン（Ｓｉｇｍａ製品ｔｒａｃｔ ｉｏｎ Ｖ ）を家兎
に１ ｍＷ ／ Ｋ９体重の投与量で１日１回、耳静脈
内に７日間連日投与し、８日目に採取した血液より血清
を分軸し１．５６℃で３０分間熱処理したものである。
実験結果を第１表に示す。
第１表 Ｍ１細胞に対する分化誘導効果（培養期間：３
日） 米付着性細胞当りの百分率 セルロプラスミン投与家兎血清を添加した場合、培養３
日目にマクロファージに特徴的な細胞形態への変化を認
め、培養の継続とともに細胞数の増加が抑えられ、１０
％濃度以上に添加した場合には細胞数が対照群の約ｖ２
に減少した。これはＮＩ□細胞が７クロフアージ細胞に
分化したため細胞分裂能を失なったことを示すものであ
る。１０％濃度の添加により全細胞の８０〜９０％はシ
ャーレ底に付着し、マクロファージに特徴的な形態を示
し、かつこれら付着性細胞の７０％は貧食能をもってい
た。
日） 米付着性細胞当りの百分率 セルロプラスミン投与家兎血清を添加した場合、培養３
日目にマクロファージに特徴的な細胞形態への変化を認
め、培養の継続とともに細胞数の増加が抑えられ、１０
％濃度以上に添加した場合には細胞数が対照群の約ｖ２
に減少した。これはＮＩ□細胞が７クロフアージ細胞に
分化したため細胞分裂能を失なったことを示すものであ
る。１０％濃度の添加により全細胞の８０〜９０％はシ
ャーレ底に付着し、マクロファージに特徴的な形態を示
し、かつこれら付着性細胞の７０％は貧食能をもってい
た。
第１表に示したごとく、Ｍ□白血病細胞をマクロファー
ジに分化させる効果はセルロブラスミンそのものにはな
く、セルロブラスミンを反復投与されることにより、そ
の生体内に該分化誘導内ｒか産生されるものである。ま
た、この分化誘導因子の産生が異種蛋白の抗原性による
ものでないことは、ヒトアルブミンの投与例でこの分化
誘導活性が検出されなかったことから明らかである。即
ち、この分化誘導因子の生体内でのＩ（＝、’生誘導は
セルロブラスミンに特異的な作用であると考えられる。
ジに分化させる効果はセルロブラスミンそのものにはな
く、セルロブラスミンを反復投与されることにより、そ
の生体内に該分化誘導内ｒか産生されるものである。ま
た、この分化誘導因子の産生が異種蛋白の抗原性による
ものでないことは、ヒトアルブミンの投与例でこの分化
誘導活性が検出されなかったことから明らかである。即
ち、この分化誘導因子の生体内でのＩ（＝、’生誘導は
セルロブラスミンに特異的な作用であると考えられる。
実験例（２１
ラット白血病細胞（５ｂａｙ顆粒球肉腫細胞）の分化誘
導効果 ラット白血病細胞である５ｈａｙ ％粒球肉肚細胞に対
する分化誘導能を実施例１で得たセルロブラスミン反復
投与家兎血清を用いて実験例（１）と同じ実験条注で検
定した。
導効果 ラット白血病細胞である５ｈａｙ ％粒球肉肚細胞に対
する分化誘導能を実施例１で得たセルロブラスミン反復
投与家兎血清を用いて実験例（１）と同じ実験条注で検
定した。
５ｂａｙ 顆粒球内ＩＩ！Ｉ７細胞は昭和大学医学部第
二内）・１で樹立された株化細胞である〔日野研一部ら
、日本血液学会雑誌±１（６）、１１７１（１９８３）
〕。
二内）・１で樹立された株化細胞である〔日野研一部ら
、日本血液学会雑誌±１（６）、１１７１（１９８３）
〕。
この白血病細胞に対する分化誘導能を公知の分化誘導物
質であるデキサメサゾン、ホルボール−１２−ミリステ
ート−１３−アセテート（Ｔ Ｐ Ａと略記する。）及
びビタミンＡ酸の効果と比較した。その結果を第２表に
示した。
質であるデキサメサゾン、ホルボール−１２−ミリステ
ート−１３−アセテート（Ｔ Ｐ Ａと略記する。）及
びビタミンＡ酸の効果と比較した。その結果を第２表に
示した。
この結果から明らかなように、セルロプラスミン反復投
与家兎血清の添加によりデキサメサゾンＴ Ｐ Ａ及び
ビタミンＡ酸とほぼ同等の分化誘導効果を示した。
与家兎血清の添加によりデキサメサゾンＴ Ｐ Ａ及び
ビタミンＡ酸とほぼ同等の分化誘導効果を示した。
第２表 Ｓｈａ ｙ顆粒球肉腫細胞に対する分化誘導効
果（培養期間２５日） 幻付着性細胞当りの巨分率 該分化誘尋因子産生の具体例を以下に示す。
果（培養期間２５日） 幻付着性細胞当りの巨分率 該分化誘尋因子産生の具体例を以下に示す。
実施例１
ヒト血漿から公知の方法により精製したセルロブラスミ
ンを生理食塩液にで溶解し除菌濾過したのち成熟家兎（
体重２．８ ＫＳＪ ）に体重Ｉ Ｋｇ当り１ｍ７を１
日１回耳静脈内に７日間連日投与した。第８白目に心臓
より採血し、−夜装置したのち、分離した血清を遠心管
に移し、１５．０Ｏｒｐｍ １０分の遠心分割にて夾雑
の血球成分を除去した。得られた血清を５６℃で３０分
間加熱処理したのち、除菌濾過（孔径０．２μＩＩＩ
） Ｌ、滅菌チューブに分注し、−２０℃で凍結保存し
た。
ンを生理食塩液にで溶解し除菌濾過したのち成熟家兎（
体重２．８ ＫＳＪ ）に体重Ｉ Ｋｇ当り１ｍ７を１
日１回耳静脈内に７日間連日投与した。第８白目に心臓
より採血し、−夜装置したのち、分離した血清を遠心管
に移し、１５．０Ｏｒｐｍ １０分の遠心分割にて夾雑
の血球成分を除去した。得られた血清を５６℃で３０分
間加熱処理したのち、除菌濾過（孔径０．２μＩＩＩ
） Ｌ、滅菌チューブに分注し、−２０℃で凍結保存し
た。
実施例２
成熟家兎（体重２．５ Ｋ９ ）にセルロブラスミンを
３ ｎｒ９ ／ Ｋｙ体重の投与量で１日１回、大腿部
筋肉内に３週間にわたり連日投与し、最終投与後３日目
に無麻酔ドに固定し、頚動脈より採血した。実施例１と
同様に血清分離し、５６℃３０分間加熱除菌硬過したの
ち、−２０℃で凍結保存した。
３ ｎｒ９ ／ Ｋｙ体重の投与量で１日１回、大腿部
筋肉内に３週間にわたり連日投与し、最終投与後３日目
に無麻酔ドに固定し、頚動脈より採血した。実施例１と
同様に血清分離し、５６℃３０分間加熱除菌硬過したの
ち、−２０℃で凍結保存した。
Claims (3)
- （１）セルロブラスミンを噛脱％−１７）＋に投与する
ことによる白血病細胞に対する分化誘導因子の産生方法 - （２）セルロブラスミンを哺乳動物に投与することによ
り産生される白血病細胞に対する分化誘導因子を有効成
分とする白血病治療剤 - （３） セルロブラスミン投与咄乳動物から採取した面
漬を有効成分とする白血病治療剤
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP59005209A JPS60149529A (ja) | 1984-01-14 | 1984-01-14 | 白血病細胞に対する分化誘導因子の産生方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP59005209A JPS60149529A (ja) | 1984-01-14 | 1984-01-14 | 白血病細胞に対する分化誘導因子の産生方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS60149529A true JPS60149529A (ja) | 1985-08-07 |
| JPH0533205B2 JPH0533205B2 (ja) | 1993-05-19 |
Family
ID=11604799
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP59005209A Granted JPS60149529A (ja) | 1984-01-14 | 1984-01-14 | 白血病細胞に対する分化誘導因子の産生方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS60149529A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1998025634A1 (en) * | 1996-12-10 | 1998-06-18 | Hadasit Medical Research Services & Development Company Ltd. | Serum-derived factor inducing cell differentiation and medical uses thereof |
-
1984
- 1984-01-14 JP JP59005209A patent/JPS60149529A/ja active Granted
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1998025634A1 (en) * | 1996-12-10 | 1998-06-18 | Hadasit Medical Research Services & Development Company Ltd. | Serum-derived factor inducing cell differentiation and medical uses thereof |
| US6372262B1 (en) | 1996-12-10 | 2002-04-16 | Hadasit Medical Research Services & Development Company Ltd. | Serum-derived factor inducing cell differentiation and medical uses thereof |
| US6783775B2 (en) | 1996-12-10 | 2004-08-31 | Hadasit Medical Research Services And Development Ltd. | Serum-derived factor inducing cell differentiation and medical uses thereof |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0533205B2 (ja) | 1993-05-19 |
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