JPS6012029B2 - コレステリンオキシダ−ゼの製法 - Google Patents
コレステリンオキシダ−ゼの製法Info
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- JPS6012029B2 JPS6012029B2 JP55083024A JP8302480A JPS6012029B2 JP S6012029 B2 JPS6012029 B2 JP S6012029B2 JP 55083024 A JP55083024 A JP 55083024A JP 8302480 A JP8302480 A JP 8302480A JP S6012029 B2 JPS6012029 B2 JP S6012029B2
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- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Steroid Compounds (AREA)
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、微生物からコレステリンオキシダーゼを製造
する方法に関する。
する方法に関する。
酵素コレステリンオキシダーゼは、特に体液中のコレス
テリンを非常に特異的かつ敏感に定量測定することを可
能とするので、非常に重要になっている。
テリンを非常に特異的かつ敏感に定量測定することを可
能とするので、非常に重要になっている。
この酵素は、通例、1種以上のコレステリンオキシダー
ゼ誘導物質を含有する媒体上で培養される微生物かち得
られる。しかしながら、誘導物質の添加にもかかわらず
、最大達成可能なコレステリンオキシダーゼ活性は、他
の酵素に比べて比較的低いので、この酵素の達成可能な
力価活性を更に高めることを可能とする方法を見つける
必要がある。
ゼ誘導物質を含有する媒体上で培養される微生物かち得
られる。しかしながら、誘導物質の添加にもかかわらず
、最大達成可能なコレステリンオキシダーゼ活性は、他
の酵素に比べて比較的低いので、この酵素の達成可能な
力価活性を更に高めることを可能とする方法を見つける
必要がある。
この場合、誘導物質として、それ自体所望酵素の基質で
あるか又はこの種の基質と化学的に近似しているような
物質が使用される。
あるか又はこの種の基質と化学的に近似しているような
物質が使用される。
高い活性収率を得るためには、コレステリンオキシダー
ゼ誘導物質の添加が必要であり、即ち誘導物質が存在し
ないと、微生物にとっては酵素を形成することはまった
〈不経済であり、そのために使用できず、その際、まれ
こ誘導物質としての作用を有する物質の酵素分解に使用
される。誘導物質なしでは、種々の微生物は同様にコレ
ステリンオキシダーゼを形成するが、後処理に耐える程
度の量ではなく、一般に約100U/そ程度である。コ
レステリンオキシダーゼ誘導物質を使用すると、一般に
所望酵素の活性収率は高まるが、他方で、この方法は複
雑になり、再現性が負に影響される。
ゼ誘導物質の添加が必要であり、即ち誘導物質が存在し
ないと、微生物にとっては酵素を形成することはまった
〈不経済であり、そのために使用できず、その際、まれ
こ誘導物質としての作用を有する物質の酵素分解に使用
される。誘導物質なしでは、種々の微生物は同様にコレ
ステリンオキシダーゼを形成するが、後処理に耐える程
度の量ではなく、一般に約100U/そ程度である。コ
レステリンオキシダーゼ誘導物質を使用すると、一般に
所望酵素の活性収率は高まるが、他方で、この方法は複
雑になり、再現性が負に影響される。
このことは、使用される誘導物質が、強い親水性を有し
、従って再現可能な微細かつ均一な分配で、微生物の水
性培養媒体に合併することが困難であることに基づく。
従って培養時に誘導物質を添加せずに添加のもとで得ら
れる収率に少なくとも相当する収率でコレステリンオキ
シダーゼを得る方法をみつけることが望ましい。本発明
は、前記問題をまったく又は部分的に解決することを目
的とする。
、従って再現可能な微細かつ均一な分配で、微生物の水
性培養媒体に合併することが困難であることに基づく。
従って培養時に誘導物質を添加せずに添加のもとで得ら
れる収率に少なくとも相当する収率でコレステリンオキ
シダーゼを得る方法をみつけることが望ましい。本発明
は、前記問題をまったく又は部分的に解決することを目
的とする。
殊に、本発明の目的は公知方法におけるよりも高い酵素
収率を得るように実施するコレステリンオキシダーゼの
製法を得ることである。もう1つの課題はコレステリン
オキシダーゼ誘導物質の不存在下に操作できるこの種の
方法をみつけることである。この課題は、本発明により
、コレステリンオキシダーゼの製法により解決され、こ
れは、ストレプトマイセス・グリセオフスクス(Str
eptomyces 稗iseo机sc瓜 DSM40
191 ・ATCC23916)、ストレプトマイセス
・ハイグロスコ ピクス(Streptomyces
hy餌oscopに雌)DSM40771・ATCCI
O976)ストレブトマイセス・アシドマイセテイクス
(Streptomycesacidomycetic
瓜 DSM40798・ATCCI1611)及び/又
はアルトロバクター・パラフイネンス(山throMC
ter paraffi船nS DSM312AT
CCI5591)を培養し、培養液上澄み及び/又は細
胞から酵素を取り出すことによりうる。
収率を得るように実施するコレステリンオキシダーゼの
製法を得ることである。もう1つの課題はコレステリン
オキシダーゼ誘導物質の不存在下に操作できるこの種の
方法をみつけることである。この課題は、本発明により
、コレステリンオキシダーゼの製法により解決され、こ
れは、ストレプトマイセス・グリセオフスクス(Str
eptomyces 稗iseo机sc瓜 DSM40
191 ・ATCC23916)、ストレプトマイセス
・ハイグロスコ ピクス(Streptomyces
hy餌oscopに雌)DSM40771・ATCCI
O976)ストレブトマイセス・アシドマイセテイクス
(Streptomycesacidomycetic
瓜 DSM40798・ATCCI1611)及び/又
はアルトロバクター・パラフイネンス(山throMC
ter paraffi船nS DSM312AT
CCI5591)を培養し、培養液上澄み及び/又は細
胞から酵素を取り出すことによりうる。
ここで使用されている4種の菌株は寄託機関から公表さ
れている1977年のDSM−カタログに収載されてい
る。本発明により使用される微生物を用いて、従来達成
可能な値をはるかに越えた活性が得られる。
れている1977年のDSM−カタログに収載されてい
る。本発明により使用される微生物を用いて、従来達成
可能な値をはるかに越えた活性が得られる。
培養液1夕当り2000Uの従来の最大活性が達成され
たが、本発明によれば、培養液1〆当り約6000Uま
での活性が得られる。しかしながら、これらの優れた収
率は、コレステリンオキシダーゼ誘導物質の添加なしで
得られることは特に意想外のこれである。
たが、本発明によれば、培養液1〆当り約6000Uま
での活性が得られる。しかしながら、これらの優れた収
率は、コレステリンオキシダーゼ誘導物質の添加なしで
得られることは特に意想外のこれである。
本発明により使用される微生物は、公知の本質的コレス
テリンオキシダーゼ生産菌に比べて6の音までも高い酵
素活性を生じる本質的コレステリンオキシダーゼ生産菌
である。この活性は約5〜10夕/そのビオマス含量を
有する培養媒体に関連している。本発明方法で使用され
る微生物は、培養液上澄み中にも酵素を生じ、この際培
養液上澄み中の合計活性は、一般に、細胞の溶解時に得
られる粗エキス中の活性より大きい。
テリンオキシダーゼ生産菌に比べて6の音までも高い酵
素活性を生じる本質的コレステリンオキシダーゼ生産菌
である。この活性は約5〜10夕/そのビオマス含量を
有する培養媒体に関連している。本発明方法で使用され
る微生物は、培養液上澄み中にも酵素を生じ、この際培
養液上澄み中の合計活性は、一般に、細胞の溶解時に得
られる粗エキス中の活性より大きい。
本発明方法で使用される微生物は、通例ストレプトマィ
セス属菌に使用される栄養培地上で好気性条件で特に振
動培養で培養することもできる。
セス属菌に使用される栄養培地上で好気性条件で特に振
動培養で培養することもできる。
可溶性デンプン10〜30夕/夕、ベプトン(肉)2〜
10夕/そ、コウポェキス2〜102/夕並びに慣用の
塩、徴量元素及びビタミンを含有する培地が特に好適で
あると立証された。この種の靖地の使用時に、一般に2
〜5日の培養時間で最大収率が得られる。本発明により
、高いコレステリンオキシダーゼ活性を得ることにより
生産方法を著るしく廉価にすることができる。
10夕/そ、コウポェキス2〜102/夕並びに慣用の
塩、徴量元素及びビタミンを含有する培地が特に好適で
あると立証された。この種の靖地の使用時に、一般に2
〜5日の培養時間で最大収率が得られる。本発明により
、高いコレステリンオキシダーゼ活性を得ることにより
生産方法を著るしく廉価にすることができる。
この場合に、コレステリンオキシダーゼ誘導物質を排除
することができるのは特に有利であり、これは方法を廉
価にするだけでなく、その再現性を箸るしく高める。次
に実施例につき本発明を説明する。
することができるのは特に有利であり、これは方法を廉
価にするだけでなく、その再現性を箸るしく高める。次
に実施例につき本発明を説明する。
例1
ストレプトマイセス・グリセオフスクス
DSMM40191(ATCC23916=IFO12
870)を次の組成の培地中で培養する。
870)を次の組成の培地中で培養する。
可溶性デンプン 20タ′そべプト
ン(肉) 5夕/そコウポエキス(デイ
フコ) 4夕/そCaC〇3
2夕/そKN〇3
1夕/そK2HP〇4
0.5夕/そMgS〇4・7日2〇
1.03夕/そNaCそ
0.5夕/そFeS〇4・7日2〇
○‐02夕/夕菌株を100肌‘−ェーレ
ンマィャーフラスコ中の渚地10地中で2日間培養し、
250の【ェーレンマィャーフラスコ中で同じ培地40
のZ中に移す。
ン(肉) 5夕/そコウポエキス(デイ
フコ) 4夕/そCaC〇3
2夕/そKN〇3
1夕/そK2HP〇4
0.5夕/そMgS〇4・7日2〇
1.03夕/そNaCそ
0.5夕/そFeS〇4・7日2〇
○‐02夕/夕菌株を100肌‘−ェーレ
ンマィャーフラスコ中の渚地10地中で2日間培養し、
250の【ェーレンマィャーフラスコ中で同じ培地40
のZ中に移す。
引続き振動下に3000で培養する。3日後に試料を取
り出し、培養液上澄み及び粗エキス中のコレステリンオ
キシダーゼの活性を検査する。
り出し、培養液上澄み及び粗エキス中のコレステリンオ
キシダーゼの活性を検査する。
粗エキスは、5の‘培養液を遠心分離し、ビオマスを0
.09M燐酸塩緩衝液(pH7)5机上で洗浄し、同じ
緩衝液5の‘中に再懸濁させ10%トリトン×100一
落液0.2の‘を添加して溶解させることにより得られ
る。室温で10分放置の後に遠心分離し、上澄みを粗エ
キスとして得た。活性測定の実施のために、24仇mで
の吸光度増加に基づき、コレステノン形成(pH7.5
で0.5モル/〆燐酸塩緩衝液中で)を測定した。
.09M燐酸塩緩衝液(pH7)5机上で洗浄し、同じ
緩衝液5の‘中に再懸濁させ10%トリトン×100一
落液0.2の‘を添加して溶解させることにより得られ
る。室温で10分放置の後に遠心分離し、上澄みを粗エ
キスとして得た。活性測定の実施のために、24仇mで
の吸光度増加に基づき、コレステノン形成(pH7.5
で0.5モル/〆燐酸塩緩衝液中で)を測定した。
対照のために、それぞれコレステリンを添加せずに空値
を測定した。次の結果が得られた:合計U/そ(培養液
) : 5741 そのうちの粗エキス中U/そ:1118 そのうちの培養液上澄中U/そ : 4628例2例1
の方法をストレプトマィセス・ハィグロスコピクスDS
M40771(=ATCCIO976)の使用下に、繰
り返した。
を測定した。次の結果が得られた:合計U/そ(培養液
) : 5741 そのうちの粗エキス中U/そ:1118 そのうちの培養液上澄中U/そ : 4628例2例1
の方法をストレプトマィセス・ハィグロスコピクスDS
M40771(=ATCCIO976)の使用下に、繰
り返した。
3日及び4日培養の後に測定を行なった。
次の活性が得られた:培養時間 A 計 租エキス
培養液上澄みく日) (Uノム)くUノム) (U
/と)3 4765 1260 35054 5
223 1423 3800 誘導物質としてのコレステリン2%の存吾で培養すると
、活性収率は、やっと半分に達した。
培養液上澄みく日) (Uノム)くUノム) (U
/と)3 4765 1260 35054 5
223 1423 3800 誘導物質としてのコレステリン2%の存吾で培養すると
、活性収率は、やっと半分に達した。
例3ストレプトマイセス・アシドマイセテイクスDSM
40798(=ATCCI1611=m03125)を
用いて、例1記載の方法を繰り返した。
40798(=ATCCI1611=m03125)を
用いて、例1記載の方法を繰り返した。
3日もしくは4日の培養の際の結果を次表に示す。
培養時間 △ 計 粗エキス 培養液上澄みく日)
(U/必) (Uノム) くU/と)3 165
6 721 9354 2052 711 13
41 誘導物質としてのコレステリン2%の存在で培養を実施
すると、活性収率は50%だけ上昇した。
(U/必) (Uノム) くU/と)3 165
6 721 9354 2052 711 13
41 誘導物質としてのコレステリン2%の存在で培養を実施
すると、活性収率は50%だけ上昇した。
例4アルトロバクター・パラフイネンスDSM312(
=ATCCI5591)を用いて、例1記載の方法を繰
り返した。
=ATCCI5591)を用いて、例1記載の方法を繰
り返した。
但し媒体にコレステリン3%をコゥポェキス中の懸濁液
の形で(合計10タ′〆)が添加した。4日培養の後に
、粗エキス中には4470U/そが認められた。
の形で(合計10タ′〆)が添加した。4日培養の後に
、粗エキス中には4470U/そが認められた。
Claims (1)
- 1 コレステリンオキシダーゼを製造するために、スト
レプトマイセス・グリセオフスクスDSM40191、
ストレプトマイセス・ハイグロスコピクスDSM407
71、ストレプトマイセス・アシドマイセテイクスDS
M40798及び/又はアルトロバクター・パラフイネ
ンスDSM312を培養液上澄及び/又は細胞から酵素
を得ることを特徴とする、コレステリンオキシダーゼの
製法2 ロレステリンオキシダーゼ誘導物質を含有しな
い媒体中で培養する特許請求の範囲第1項記載の方法3
可溶性デンプン10〜30g/l、ペプトン2〜10
g/l、コウポエキス2〜10g/l並びに塩、微量元
素及びビタミンを含有する媒体中で培養する、特許請求
の範囲第1項又は第2項記載の方法
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
DE19792924875 DE2924875A1 (de) | 1979-06-20 | 1979-06-20 | Verfahren zur gewinnung von cholesterinoxidase |
DE2924875.7 | 1979-06-20 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPS565094A JPS565094A (en) | 1981-01-20 |
JPS6012029B2 true JPS6012029B2 (ja) | 1985-03-29 |
Family
ID=6073683
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP55083024A Expired JPS6012029B2 (ja) | 1979-06-20 | 1980-06-20 | コレステリンオキシダ−ゼの製法 |
Country Status (7)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US4334023A (ja) |
EP (1) | EP0021311B1 (ja) |
JP (1) | JPS6012029B2 (ja) |
AT (1) | ATE976T1 (ja) |
CA (1) | CA1145278A (ja) |
DE (2) | DE2924875A1 (ja) |
SU (1) | SU1026656A3 (ja) |
Families Citing this family (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
DE3046241A1 (de) * | 1980-12-08 | 1982-07-15 | Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim | Verfahren und reagenz zur bestimmung von cholesterin |
IT1140326B (it) * | 1981-12-11 | 1986-09-24 | Anic Spa | Metodo per la produzione di cellule contenenti colesterolo ossidasi |
JPS6131097A (ja) * | 1984-07-23 | 1986-02-13 | Toyo Jozo Co Ltd | 新規な高感度酵素的測定法 |
US5206148A (en) * | 1989-07-24 | 1993-04-27 | Asahi Kasei Kogyo Kabushiki Kaisha | Method for assaying aliphatic alcohol, aliphatic aldehyde or ω-carboxylic acid derivatives thereof |
US5238816A (en) * | 1989-07-24 | 1993-08-24 | Asahi Kasei Kogyo Kabushiki Kaisha | Omega carboxyalcohol oxidase enzyme |
JP2786679B2 (ja) * | 1989-07-24 | 1998-08-13 | 旭化成工業株式会社 | 新規なω位カルボキシアルコール酸化酵素 |
KR100464674B1 (ko) * | 2002-08-27 | 2005-01-03 | 학교법인 계명기독학원 | 스트렙토마이세스 속 유래의 균주로부터 콜레스테롤 산화효소의 생산방법 |
Citations (3)
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JPS502594A (ja) * | 1973-03-01 | 1975-01-11 | ||
JPS5167786A (en) * | 1974-12-10 | 1976-06-11 | Nagase & Co Ltd | Koresuterooru okishidaazeno seizoho |
JPS5476893A (en) * | 1977-12-02 | 1979-06-19 | Banyu Pharmaceut Co Ltd | Novel preparation of chlesterol oxidase |
Family Cites Families (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
FR2047147A5 (ja) * | 1969-05-06 | 1971-03-12 | Kyowa Hakko Kogyo Kk | |
US4035237A (en) * | 1975-11-07 | 1977-07-12 | Eastman Kodak Company | Method for the preparation of cholesterol oxidase |
US4052263A (en) * | 1975-12-11 | 1977-10-04 | Eastman Kodak Company | Production of cholesterol esterase using Nocardia cholesterolicum |
-
1979
- 1979-06-20 DE DE19792924875 patent/DE2924875A1/de not_active Withdrawn
-
1980
- 1980-05-07 US US06/147,460 patent/US4334023A/en not_active Expired - Lifetime
- 1980-05-30 CA CA000353078A patent/CA1145278A/en not_active Expired
- 1980-06-04 SU SU802930501A patent/SU1026656A3/ru active
- 1980-06-16 AT AT80103354T patent/ATE976T1/de not_active IP Right Cessation
- 1980-06-16 DE DE8080103354T patent/DE3060364D1/de not_active Expired
- 1980-06-16 EP EP80103354A patent/EP0021311B1/de not_active Expired
- 1980-06-20 JP JP55083024A patent/JPS6012029B2/ja not_active Expired
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPS502594A (ja) * | 1973-03-01 | 1975-01-11 | ||
JPS5167786A (en) * | 1974-12-10 | 1976-06-11 | Nagase & Co Ltd | Koresuterooru okishidaazeno seizoho |
JPS5476893A (en) * | 1977-12-02 | 1979-06-19 | Banyu Pharmaceut Co Ltd | Novel preparation of chlesterol oxidase |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
EP0021311B1 (de) | 1982-05-05 |
DE3060364D1 (en) | 1982-06-24 |
DE2924875A1 (de) | 1981-01-29 |
CA1145278A (en) | 1983-04-26 |
EP0021311A1 (de) | 1981-01-07 |
SU1026656A3 (ru) | 1983-06-30 |
JPS565094A (en) | 1981-01-20 |
US4334023A (en) | 1982-06-08 |
ATE976T1 (de) | 1982-05-15 |
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