JPS6011425A - コレステロ−ル低下性蛋白加水分解物及びその製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は血中コレステロール濃度低下作用を有する蛋白
加水分解物及びその製造法に関する。

（従来技術） 蛋白質は、脂肪や炭水化物とならび必須の栄養源である
と同時に生体内において重要な生理的役割を果たしてい
る。例えば、血中コレステロール濃度低下作用について
、蛋白質に関し多くの研究がなされ、なかでも、大豆蛋
白質等の植物性蛋白質はカゼイン等の動物性蛋白質に比
べて血中コレステロール濃度低下作用のより顕著なこと
が報告されている。更に、これらの内規つかの蛋白質の
加水分解物やアミノ酸混合物もまた血中コレステロール
濃度低下作用のあることが報告されている例えば、＾Ｃ
ＡＤＨＭＩＣＰＲＥＳＳ　発行　ＳＯＹ　ＰＩＩＯＴＥ
ＩＮＡＮＤ　ＩＩＵＭＡＮ　ＮＩＪＴＲＩＴＩＯＮ　（
１９７９年）には、大豆蛋白質がカゼイン等との比較に
おいて種々の観点から検討されている。そして、Ｃａｒ
ｒｏｌ等による脂質代謝、特にコレステロール代謝に関
する研究のなかで、大豆蛋白質及びカゼインの作用が記
載されている。これによれば、大豆蛋白質及び大豆蛋白
加水分解物は、カゼイン加水分解物及びカゼインに比べ
て、血中コレステロール濃度抑制効果が顕著である旨記
載されている。但し、ここで用いられている酵素はパン
クレアチンである。そしてこの場合、カゼイン加水分解
物は、血中コレステロール濃度低下作用が認められてい
ない。、・詳細は八ｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ、２
Ｂ＋１８７−１９５＋　（１９７７年）に記載されてい
る。

一方、特公昭５７−４５５６０には、２種以上のプロテ
アーゼを用い分子量７００以下のペプチドが８０％以上
の低分子ペプチド組成物の製造法が記載され、腸官吸収
効率がよくなる、血中コレステロール値が低下する等の
効果も記載されている。

特公昭４６−２４０７１には、５乃至２５％の蛋白質液
をプロテアーゼとホスファターゼを用いて分解度５０％
以上で苦味が減少され快的な味を持つ蛋白質氷解物を得
る方法が記載されているが、血中コレステロール濃度低
下作用については記載されていない。

その他、栄養と食糧幻２，１６３同じ＜１６７　（１９
６８年）及び同２６．４２３　（１９’７３年）に酵素
処理蛋白質の栄養に関する報告がなされているが、黒麹
菌由来の酸性プロテアーゼ等による分解率６〜２５％の
加水分解物に関するもので、血中コレステロール濃度低
下作用については報告されていない。

（目的） 本発明者等は血中コレステロール濃度低下作用を有する
蛋白加水分解物を得ることを目的として研究を行った。

（経過） 本発明者等は大豆蛋白質の血中コレステロール濃度低下
作用発現に到る過程を解明するなかで、ｉ）大豆蛋白質
は胃内でペプシン消化を受け、分子量５０００乃至１ｏ
ｏｏｏ付近のポリペプチドと分子量１０００付近のオリ
ゴペプチドを生成するＨｉｉ）ポリペプチドは大豆蛋白
質のアミノ酸組成と類似しているが、オリゴペプチドの
アミノ酸組成はそれらと全く異なっている；１ｉｉ）こ
のオリゴペプチドは数種類のオリゴペプチドの混合物で
ある；＋ｖ）このオリゴペプチドはカゼイン摂取時には
胃内で検出されない；ことを見出した。

そこで、かかるオリゴペプチドが血中コレステロール濃
度低下作用に関与していると推察し、かかるオリゴペプ
チドを含む蛋白加水分解物を人工消化により得ることを
目的として鋭意研究するなかで、限られた消化条件のも
とて分子量１０００付近のオリゴペプチドを含む蛋白加
水分解物が得られること、及びかかる蛋白加水分解物が
血中コレステロール濃度低下作用を示す知見を得て本発
明を完成するに到つた。

（構成） 本発明は（１）蛋白質を酵素を用いて加水分解して得た
分子量２００乃至１５００のペプチドを含むコレステロ
ール低下性蛋白加水分解物であり、更に本発明は（２）
蛋白質を酵素を用いて加水分解することを特徴とする分
子量２００乃至１５００のペプチドを含むコレステロー
ル低下性蛋白加水分解物の製造法である。

本発明において使用する蛋白質は、カゼイン、卵白、食
肉等の動物性蛋白質、大豆蛋白質、落花生蛋白質、向日
葵蛋白質、各種食用豆類蛋白質、油種種子蛋白質等の植
物性蛋白質、又は微生物蛋白質等の１種又は２種以上を
用いることができる。Ａｒｇ　／Ｌｙｓ比の高い植物性
蛋白質が好ましく、特に好ましくは大豆蛋白質が適当で
ある。

本発明において使用する酵素は、分子量１０００（＝ｊ
近のオリゴペプチドまで加水分解できる酵素で、そのオ
リゴペプチド中のＡｒｇ　／Ｌｙｓ比が０．６以上にな
るように加水分解できる酵素であれば、植物由来、動物
由来、又は微生物由来の酵素を１種または２種以上用い
ることができるが好ましくは酸性プロテアーゼが適当で
あり、特に好ましくはペプシンが適当である。

ペプシンを用いた場合を例にして説明する。

酵素分解の条件は、ｐＨ３未満、好ましくは１．６乃至
２付近、且つ、蛋白質濃度は、１０％以下では目的とす
るオリゴペプチドの収率が良（ない為、通常４　ｗ　／
　ｗ％未満好ましくは３　ｗ　／　ｗ％以下、特に好ま
しくは’ｌ　ｗ　／　ｗ％以下の限られた条件で十分加
水分解することにより、血中コレステロール濃度低下作
用を有する蛋白加水分解物（分子量１０００付近のオリ
ゴペプチドを含む）を得ることができる。

ペプシンの至ＪｐＨは、通常１．６でその作用ｐｌ＋は
中性付近まであるが、本発明においてペプシンを作用さ
せるｐＨが３以上では目的とする分子量ｉｏｏ。

付近のオリゴペプチドを含む蛋白加水分解物は得難り、
分子量５０００乃至１ｏｏｏｏ付近のポリペプチドを含
む蛋白加水分解物が主として得られ易い。ｐｌ＋３未満
特に１．６乃至２付近で目的とするオリゴペプチドが多
く生成される。例えばセファデックスＧ−２５分画法に
よるピーク面積を単純に計算してもｐｌ＋３以上では目
的とするペプチドは３０％にも満たなくｐＨ３以上で３
０％以上、ａｌｌ　１．６以上では３５乃至４０％以上
生成することができる。

この際同時に、ペプシンを作用させる蛋白質原料の蛋白
質濃度が４　ｗ　／　ｗ％以上では分子量１０００付近
のオリゴペプチドは得難く、３　ｗ　／　ｗ％以下好ま
しくは’ｌ　ｗ　／　ｗ％付付近−はこれ以下の濃度で
はじめて、分子１１０００付近のオリゴペプチドが多く
生成される。

本発明のオリゴペプチドの分子量は、１０００付近、換
言ずれば２００乃至１５００であり、好ましくは７００
乃至１４００で、そのＡｒｇ　／Ｌｙｓ比は０．６以上
、好ましくは０．８以上、特に好ましくは１．３以上で
あることが適当である。オリゴペプチドのＡｒｇ　／Ｌ
ｙＳ比が高い程血中コレステロール抑制作用が顕著であ
る傾向にある。これは恐らく、かかるオリゴペプチドが
胃或いは小腸内でインシュリンやグルカゴン等のホルモ
ン系に関与し、コレステロール代謝に影響するものと推
察される。

本発明の蛋白加水分解物は、かかるオリゴペプチドを３
０Ｗ／Ｗ％以上含み血中コレステロール濃度低下作用を
顕著に示すものである。

本発明の蛋白加水分解物は酵素分解処理した後、通常不
溶性区分を遠心分離等の手段により除去して得られ、中
性乃至ｐ１１２付近の酸性水系下においても全く可溶性
であると同時に、最終濃度１０％トリクロール酢酸に可
溶である。

本発明の蛋白加水分解物は、使用形態を工夫することに
より、血中コレステロール濃度低下を目的として種々の
分野で用いることができる。

例えば、本発明の蛋白加水分解物は、経口栄養食、経管
栄養食（経腸栄養食或いは経胃栄養食等）等の食餌（Ｄ
ｉｅｔ）等として用いることができる有効量は４ｇ／２
００ｇラット／日程度、あるいはこれ以上である。

以下実施例により本発明の実施態様を説明する比較例１ カゼイン２０ｇを用いた半合成金（表−１に示す）及び
水を、市販固形飼料ＮＭＦ　（オリエンタル酵母■製）
で飼育したＳ　Ｄ　（Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙ）
系ラット（体重２００ｇ、１群　３匹）に自由摂取で与
え、経時的に尾静脈より採血し、酵素法（和光純薬工業
　コレステロールＣテストによる）を用いて血中コレス
テロール濃度を測定した。

結果を第１図に示した。

表−１ カゼイン　２０ｇ コーン油　１ｇ ミネラル混合物　４ｇ セルロースパウダー　２ｇ コリンクロライド　０．２ｇ コレステロール（注２）　０．５ｇ （注１）オリエンタル酵母ｉ１ｍ製 （注２）日本化学飼料（株）製 実施例１ 大豆蛋白（分離大豆蛋白　フジプロＲ：不二製油株式会
社製）２０ｇを１ｐの水に熔解しペプシン（ＳＩＧＭ＾
Ｎｏ　ｐ−７０００２４００ｕｎｉｔｓ／ｍｇ　ｐｒｏ
ｔｅｉｎ　）２００　ｍｇを加え濃塩酸を用いてｐＨ１
，６に調整し、３７℃で２４時間反応させたのち７０°
Ｃで１５分間加熱処理し酵素失活させたのち１００００
ｇで１５分間遠心分離して上清を得た。この上清はＴＣ
Ａ　（トリクロール酢酸）が最終濃度１０％になるよう
に調整しても全く沈澱を生ぜず可溶化した状態にあった
。

この上清をエバボレークーを用い４０°Ｃ以下で約１０
倍に濃縮し凍結乾燥して大豆蛋白加水分解物１７ｇを得
た。

上記と同様にして得た上清１０ｍ１をセファデックスＧ
−２５を用いたカラム（内径２ｃｍ、高さ５０ｃｍ）に
０．０５Ｍ酢酸ソーダ緩衝液（ｐＨ５，５＞　を用い流
速２５ｍ１／ｈｒで展開させ、フラクションコレクター
を用い１フラクション２ｍｌずつ採取し分光々変針（日
立ｔｌＶ−ＶＩＳ　ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｅ
ｒ　１３９　）を用い２８０ｒｕｎにおけるＡｂｓｏｒ
ｂａｎｃｅを測定した。結果を第２図に示した。

又、このときのＦ２のアミノ酸組成を、常法により６Ｎ
塩酸で２４時間分解しアミノ分析機北Ｃ−６ＡＩ＋　（
日本電子工業（株製）を用いて測定した。結果を表２に
示す。

上記と同様にして得た蛋白加水分解物２０ｇを比較例１
のカゼインの代わりに用い比較例１と同様にＳＤ系ラッ
トに与え血中コレステロール濃度を測定した。結果を第
１図に示した。

第１図より明らかなようにカゼインに比べ大豆蛋白加水
分解物は血中コレステロール濃度低下作用が顕著に認め
られた。

実施例２ 実施例１の大豆蛋白質のかわりに、カゼイン（和光純薬
工業（掬製）を用い、実施例１と同様にしてカゼイン加
水分解物を得た。この」二消を実施例１と同様にしてセ
ファデックスＧ−２５にかけた結果を第３図に示した。

又このときのＦ２のアミノ酸組成を表−２に示す。

表−２ Ｌｙｓ　２．４　０．９ １１ｉｓ　２．７　０．７ へｒｇ　２．１　２．４ 八ｓｐ　１１．９　３．４ Ｔｈｒ　３．０　１．０ ３ｅｒ　５．９　２．６ Ｇｌｕ　１２．　８　１０．　９ Ｐｒｏ　２２．　５　３４．　７ Ｇｌｙ　４．８　２．９ 八ｌａ　５．１　６．３ Ｖａｌ　４．４　０．９ Ｍｅｔ　０．　４　ｔｒａｃｅ ｌｌｅｕ　Ｏ，３０，３ Ｌｅｕ　８．０　１２．９ Ｔｙｒ　３．６　１１．９ Ｐｈｅ　６．１　８．４ 実施例１の大豆蛋白加水分解物のかわりに、上記カゼイ
ン加水分解−物を実施例１と同様に用いてラットの飼育
を行ない、血中コレステロール濃度をｉ＋＋定した。結
果を第１図に示した。

カゼイン加水分解物も大豆蛋白加水分解物と同様、カゼ
インに比べ血中コレステロール濃度低下作用を示した。

参考例１ 大豆蛋白（フジプロＲ）を実施例１と同様にしてペプシ
ンを用いて加水分解し、このときのｐｌ＋を１．６．２
．０．３．０と変化させてみた。

得られた上清を実施例１と同様にしてセファデックスＧ
−２５にかけた結果を第３図に示した。即ち、ｐＨ３以
上では分子量１０００付近のオリゴペプチドの生成は顕
著ではなかった。因に、第２図のフラクションＮｏ３８
を境としてＦ２の生成割合をそのピーク面積より単に計
算するとｐＨ１，６のとき約４４％、ｐＨ１２のとき約
４５％、ｐＨ３のとき約３０％となったこのときのアミ
ノ酸組成を表−３す。

表−３ Ｌｙｓ　５．８ ｔｌｉｓ　４．２ へｒｇ　３．８ Δｓｐ　１０．４ Ｔｈｒ　３．８ Ｓｅｒ　６．３ Ｇｌｕ　１０．０ Ｐｒｏ　６・　７ ｃｔｙ　６．７ ＾１ａ　６．３ ＶａＬ　４．　６ Ｍｅｔ　Ｏ，８ １ｉｅｕ　５．　８ しｅｕ、　８．８ Ｔｙｒ　６．７ Ｐｈｅ　９．２ Ａｒｇ　／Ｌｙｓ比　０．６６ 参考例２ 参考例１と同様にして、大豆蛋白のかわりにカゼインを
用いｐｌｌを１．６．３．０．５．０と変化させて実験
をおこなった。結果を第３図に示した即ち、ｐａ＋３以
上では分子量１０００付近のオリゴペプチドの生成は顕
著ではなかった。参考例１と同様にして第３図のフラク
ションＮｏ３Ｂを境としてＦ２の生成割合を計算すると
、ｐＨ１，６のとき約４５％、ｐｌｌ３のとき約３１％
、ｐｌｌ５のとき約２６％であった。

このときのアミノ酸組成を表−４に示す。

参考例３ 実施例１と同様にして、大豆蛋白（フジプロＲ）を用い
、ｐＨ１，６、ＩＥ　／Ｓ比（ペプシン／フジプロＲ比
）を１　／１００として、大豆蛋白の濃度をそれぞれ１
．０，２．０，３．０，４．０，５．０，７．０　ｗ／
ｗ％と変えて加水分解を行った。

又、カゼインを用いて同様の実験を行った。

大豆蛋白、又はカゼインの濃度が４．０乃至７．Ｏｗ　
／　ｗ％のときの結果を第４図に示した。即も、蛋白質
濃度が４．咋／唇％以上では分子量１０００付近表−４ Ｌｙｓ　２．９ ｆｉｔｓ　１．０ ＾ｒｇ　５．５ Ａｓｐ　５．Ｉ Ｔｈｒ　２．４ Ｓｅｒ　４．６ Ｇｌｕ　１１．Ｉ Ｐｒｏ　２０．０ Ｇｌｙ　３．６ ＾１ａ　６．０ Ｖａｌ　４．Ｉ Ｍｅｔ　Ｏ，７ １１ｅｕ　１．　９ Ｌｅｕ　１６．Ｉ Ｔｙｒ６．５ Ｐｈｅ’　、８．７ Ａｒｇ　／Ｌｙｓ比比　２．６６ のオリゴペプチドの生成は顕著でなかった。

（効果） 以上詳述したように、本発明により血中コレステロール
濃度低下効果を有する蛋白加水分解物及びこれを製造す
ることが可能になったものである

【図面の簡単な説明】

図面は本発明の詳細な説明する為のものである。 第１図はカゼイン、カゼイン加水分解物、及び大豆蛋白
質加水分解物をラットに与えた場合の血中コレステロー
ル濃度値を示す図、第２図は大豆蛋白をｐＨを変えてペ
プシン分解したときのセファデックスＧ−２５による分
画図、第３図はカゼインをｐｉを変えてペプシン分解し
たときのセファデックスＧ−２５による分画図、第４図
は大豆蛋白又はカゼインの濃度が４〜７ｗ／ｗ％のとき
のペプシン分解したときのセファデックスＧ−２５によ
る分画図である。 Ｆｌ：分子量５０００〜１００００付近のポリペプチド
、Ｆ２：分子量１０００付近のオリゴペプチド。 特許出願人　不二製油株式会社 代理人　弁理士　門　脇　清 第１図 日軌 □　α七　ＰＨ１，６ ヤ、。ＬｐＨ３，−０ 千トα＋ＰＩ−１２，０ ）”ｒｃｘｃ七’ｔｏｎ　Ｎｕｍｂｅｒ−８αｔ　Ｆ８
１．６ −（）−０−ａｔ　ｒＨ５″、〇 −に一＾−Ｑ６ｔ　ＰＨ３，０ ０ Ｆｒｃｃｃｔｊｏｎ　Ｎｕｍｂｅｒ ＦｒＣＬｃｔｉｏｎ　Ｎｕｍｂｅｒ 手続補正杏（自発） 昭和５８年６月３　（ｌ　ＩＪ提出の特許願２、発明の
名称 コレステし１−ル低゛１・性蛋白加水分解物及びその製
造法 ３、　補正をする者 事件との関係　特許出願人 住所　人販市南区へ幡町６番１ 名称　不二製油株式会社 代表者　西祠政太部 ４、代理人 大阪市淀用区東三国１丁目３２番１２号（■５３２）５
、補正の対象 ６、補正の内容 明細書第３頁下から４行目Ｆ、腸官・・・」とあるを「
、腸管・・・」と訂正する。 明細書第１３頁「表−２」　とあるを「表−２（単位は
モル％）」と訂正する。 明細書第１６頁第４行「・・示した」とあるを「・・示
した。」と訂正する。 ■、小事件表示 特願昭５８−１１９８１１８ ２、発明の名称 コレステロール低重性蛋白加水分解物及びその製造法 ３、補正をする者 事件との関係　特許出願人 住所　大阪市南区へ輔町６番１ 名称　不二製油株式会社 代表者　西利政太部 ４、代理人 大阪市淀用区東三国１丁目３２番１２号（■５３２）５
、補正の対象 ６、補正の内容 明細書箱３Ｆ３．第２行「・・・Ｃａｒｒｏｌ・・・」
とあるを１”・・・Ｃａｒｒｏｌｌ　・・・」と訂正す
る。 明細書第１１頁第４行「・・・７０００２４００　・・
・」とあるを１−・・・７０００．２４００　・・・」
と訂正する。 明細書第１７頁　表−４１−・・Ｆ２（ｐＨ３，０）・
・」とあるを１・・Ｆ　２　（ｐＨ５，０）　・・」と
訂正する。

Claims (7)

【特許請求の範囲】
1. （１）蛋白質を酵素を用いて加水分解して得た分子Ｎ２
   ００乃至１５００のペプチドを含むコレステロール低下
   性蛋白加水分解物。
2. （２）ペプチドの＾ｒｇ　／Ｌｙｓ比が０．６以上であ
   る特許請求の範囲第（１）項記載の蛋白加水分解物。
3. （３）蛋白加水分解物が１０％トリクロール酢酸に可溶
   である特許請求の範囲第＋１）項又は第（２）項に記載
   の蛋白加水分解物。
4. （４）蛋白質を酵素を用いて加水分解することを特徴と
   する分子量２００乃至１５００のペプチドを含むコレス
   テロール低下性蛋白加水分解物の製造法。
5. （５）蛋白質が大豆蛋白質である特許請求の範囲第（４
   ）項記載の製造法。
6. （６）蛋白質がカゼインである特許請求の範囲第（４）
   項記載の製造法。
7. （７）＃素がペプシンである特許請求の範囲第（４）項
   乃至第（６）項のいずれかに記載の製造法。