JPS60104257A - カテコ−ルアミン類分析法 - Google Patents
カテコ−ルアミン類分析法Info
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- JPS60104257A JPS60104257A JP21307983A JP21307983A JPS60104257A JP S60104257 A JPS60104257 A JP S60104257A JP 21307983 A JP21307983 A JP 21307983A JP 21307983 A JP21307983 A JP 21307983A JP S60104257 A JPS60104257 A JP S60104257A
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- Japan
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- thi
- catecholamines
- sample
- solution
- catechol
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-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/88—Integrated analysis systems specially adapted therefor, not covered by a single one of the groups G01N30/04 - G01N30/86
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- Investigating Or Analyzing Non-Biological Materials By The Use Of Chemical Means (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
（（）産業上の利用分野
この発明は、カテコールアミン類をトリヒドロキシイン
ド−μに変換した後固相抽出しておいて、これを高速液
体クロマドグ２フイに付して分離し蛍光分析する、再現
性良好で島感度で安価なカテコールアミン類の分析法に
関する。
ド−μに変換した後固相抽出しておいて、これを高速液
体クロマドグ２フイに付して分離し蛍光分析する、再現
性良好で島感度で安価なカテコールアミン類の分析法に
関する。
（ロ）従来技術
従来、血漿、尿などの生体試料中のカテコールアミン類
の分析法としては、カテコールアミン類を抽出し次いで
溶離し、その溶離液を、シリカを担体とする化学結合型
逆相カラムを用い酸性Ｍ街液の移動相で溶出する高速液
体クロマトグラフィに付して分離し、次いで３種の反応
試薬を順に反応させてトリヒドロキシインド−／Ｌ／（
ＴＲＩ）に変換して蛍光分析する、いわゆるボストカラ
ム法が知られている。
の分析法としては、カテコールアミン類を抽出し次いで
溶離し、その溶離液を、シリカを担体とする化学結合型
逆相カラムを用い酸性Ｍ街液の移動相で溶出する高速液
体クロマトグラフィに付して分離し、次いで３種の反応
試薬を順に反応させてトリヒドロキシインド−／Ｌ／（
ＴＲＩ）に変換して蛍光分析する、いわゆるボストカラ
ム法が知られている。
しかし上記の方法は、高速液体クロマドグ２フイで分離
したカテコールアミン類をＴＲＩに変換させるための３
種の反応試薬を送液するのにポンプが必要である。この
ためペリスタリックポンプなどのような安価なポンプを
用いると脈動が起シノイズレベルが上昇し、一方バｐス
レスポンプを用いると上記脈動を低下させることができ
るが高価でお夛、いずれにしてもノイズレベルを一定値
以下に低下させることはできない。さらに高速液体クロ
マドグ２フイの溶出液と反応試薬との混合によって希釈
さｉｚて分析感度が低下するという問題点がある。
したカテコールアミン類をＴＲＩに変換させるための３
種の反応試薬を送液するのにポンプが必要である。この
ためペリスタリックポンプなどのような安価なポンプを
用いると脈動が起シノイズレベルが上昇し、一方バｐス
レスポンプを用いると上記脈動を低下させることができ
るが高価でお夛、いずれにしてもノイズレベルを一定値
以下に低下させることはできない。さらに高速液体クロ
マドグ２フイの溶出液と反応試薬との混合によって希釈
さｉｚて分析感度が低下するという問題点がある。
（／９発明の目的
この発明は上記問題点を改善するためになされたもので
あって、再現性良好で高感度で安価なカテコールアミン
類の分析法を提供することを目的とするものでおる。
あって、再現性良好で高感度で安価なカテコールアミン
類の分析法を提供することを目的とするものでおる。
（ニ）発明の構成
この発明は、カテコールアミン類含有の試料、又はこの
試料からカテコールアミン類を抽出した抽出液に、第１
反応に薬のフェリシアン化カリウム緩告液、第２反応試
薬のアスコルビン酸水溶液又はエチレンジアミン四酢酸
含有のアスコルビン酸水溶液、及び第３反応試薬の水酸
化ナトリウム溶液をこの順で加えてカテコールアミン類
をトリヒドロキシインド−μに変換し、その反応液を同
相抽出した後、シリカを担体とする化学結合型逆相カラ
ムを用い酸性緩衝液の移動相で溶出する高速液体り四マ
ドグラフィに付して分離し蛍光分析することを特徴とす
るカテコールアミン類分析法を提供するものである。
試料からカテコールアミン類を抽出した抽出液に、第１
反応に薬のフェリシアン化カリウム緩告液、第２反応試
薬のアスコルビン酸水溶液又はエチレンジアミン四酢酸
含有のアスコルビン酸水溶液、及び第３反応試薬の水酸
化ナトリウム溶液をこの順で加えてカテコールアミン類
をトリヒドロキシインド−μに変換し、その反応液を同
相抽出した後、シリカを担体とする化学結合型逆相カラ
ムを用い酸性緩衝液の移動相で溶出する高速液体り四マ
ドグラフィに付して分離し蛍光分析することを特徴とす
るカテコールアミン類分析法を提供するものである。
この発明の方法は、カテコールアミン類を最初ニＴＨ工
に変換しておいてそのＴＨＩを固相抽出して、共存する
反応試薬や夾雑物を除去してＴＨＩを安定化しておいて
から高速液体クロマトグラフィに付して分離し蛍光分析
することを９９とするもので、このように、トリヒドロ
キシインド−μ反応をプレカラム法（ｐｒｅｃｏｌｕｍ
ｎ ｄｅ、ｒＬｖａｔｉｚａｔｊ−ｏｎ）に採用したカ
テコールアミン類の分析法は知られていない。
に変換しておいてそのＴＨＩを固相抽出して、共存する
反応試薬や夾雑物を除去してＴＨＩを安定化しておいて
から高速液体クロマトグラフィに付して分離し蛍光分析
することを９９とするもので、このように、トリヒドロ
キシインド−μ反応をプレカラム法（ｐｒｅｃｏｌｕｍ
ｎ ｄｅ、ｒＬｖａｔｉｚａｔｊ−ｏｎ）に採用したカ
テコールアミン類の分析法は知られていない。
この発明において、カテコールアミン類含有のＥ料に直
接３つの反応試薬を加えてカテコールアミン類をＴＨＩ
に変換してもよく、又は該試料から常法（例えばホウ酸
ゲｙ１アμミナで抽出して酸で溶離する方法）でカテコ
ールアミン類を抽出しておいてから反応試薬を加えてＴ
ＨＩに変換してもよい。
接３つの反応試薬を加えてカテコールアミン類をＴＨＩ
に変換してもよく、又は該試料から常法（例えばホウ酸
ゲｙ１アμミナで抽出して酸で溶離する方法）でカテコ
ールアミン類を抽出しておいてから反応試薬を加えてＴ
ＨＩに変換してもよい。
上記のようにして得られたＴＨ工金含有反応液にクエン
酸水溶液などの酸を添加してｐＨを３〜５に低下させて
おいてからＴＨＩが同相抽出される。
酸水溶液などの酸を添加してｐＨを３〜５に低下させて
おいてからＴＨＩが同相抽出される。
すなわち、Ｂｏｎｄ、 ｍ旧】ｔ Ｃ１，１（アナリテ
イケム社製）、Ｓ”ｐ−ｐａｃｉ ｃ！、 （ウメータ
ーズ社製）などのごとき逆相クロマドグ２フイの前処理
用シリカのカラムに’Ｉ’Ｈ工を吸着させ、例えばクエ
ン酸ナトリウム水溶液とメタノ−μとの混合液、アセト
ニトリｐとメタノ−μとの混合液などで溶離される。
イケム社製）、Ｓ”ｐ−ｐａｃｉ ｃ！、 （ウメータ
ーズ社製）などのごとき逆相クロマドグ２フイの前処理
用シリカのカラムに’Ｉ’Ｈ工を吸着させ、例えばクエ
ン酸ナトリウム水溶液とメタノ−μとの混合液、アセト
ニトリｐとメタノ−μとの混合液などで溶離される。
得られた溶離液は、シリカを担体とする化学結合型逆相
カラムを用い酸性緩衝液の移動相で溶出する高速液体ク
ロマトグラフィに付して分離して蛍光分析される。この
カラムとしてはゾルパックスＯＤＳ （チーＩＬボン社
製）、Ｓｈｉｍ −ｐａｃｋ Ｆ′ＬＣ−０ＤＳ （高
車製作所製）などが用いられ、移動相としてはクエン酸
ナトリウム、酢酸ナトリウム、リン酸ナトリウムなどの
水溶液でｐＨ４〜５のものが用いられる。
カラムを用い酸性緩衝液の移動相で溶出する高速液体ク
ロマトグラフィに付して分離して蛍光分析される。この
カラムとしてはゾルパックスＯＤＳ （チーＩＬボン社
製）、Ｓｈｉｍ −ｐａｃｋ Ｆ′ＬＣ−０ＤＳ （高
車製作所製）などが用いられ、移動相としてはクエン酸
ナトリウム、酢酸ナトリウム、リン酸ナトリウムなどの
水溶液でｐＨ４〜５のものが用いられる。
この発明のプレカラム法によれば上記のようにＴＨＩが
高速液体クロマトグラフィに付される前に同相抽出され
て反応試薬や夾雑物が除去されるのでＴＨＩが化学的に
安定化され、再現性の良好な分析結果が得られる。また
この発明の方法を従来性われているボヌトカラム法に比
べると希釈による蛍光分析クロマトグラムのピークのひ
ろがりがなくて高感度で分析ができ、また各反応試薬送
液用のポンプや反応管が不要で安価であるという大きな
利点を有する。
高速液体クロマトグラフィに付される前に同相抽出され
て反応試薬や夾雑物が除去されるのでＴＨＩが化学的に
安定化され、再現性の良好な分析結果が得られる。また
この発明の方法を従来性われているボヌトカラム法に比
べると希釈による蛍光分析クロマトグラムのピークのひ
ろがりがなくて高感度で分析ができ、また各反応試薬送
液用のポンプや反応管が不要で安価であるという大きな
利点を有する。
（ホ）実施例
試料のヒト血漿ＩＦＩＩ７１をアルミナによって常法で
処理して含有カテコールアミンを抽出した抽出液２ｏｏ
ｌＪ金、次の手順でカテコールアミンをＴＨＩに変換し
固相抽出した。
処理して含有カテコールアミンを抽出した抽出液２ｏｏ
ｌＪ金、次の手順でカテコールアミンをＴＨＩに変換し
固相抽出した。
（１）第１反応試薬の添加
Ｉ Ｗ／Ｖ ９６のフェリシアン化カリウム含有の０１
Ｍリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ６，８）を３０１４添加
して３０秒放置。
Ｍリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ６，８）を３０１４添加
して３０秒放置。
（り第２反応試薬の添加
１ｗ／Ｖ９（）の７スコルビン酸水溶液５０１ｔｇを添
加して３０秒放置。
加して３０秒放置。
（り第３反応試薬の添加
１０規定の水酸化ナトリウム溶液５０ ｌＬｇを添加し
て１０分放置。
て１０分放置。
（ｌｖ）１Ｍクエン酸水溶液３００ ｇｇを添加してｐ
Ｈを３〜５に低下させた後、この液をＢｏｎｄ Ｅｌｕ
ｔ（／Ｉ８で処理して’Ｉ’ｌｌＩを吸着させ、ＣＬＩ
Ｍクエン酸ナトジナトリウム水溶液 ４．４ ）とメタ
ノールとの混合液（混合比２ ： １ ） ２００ ／
１４３で溶離した。
Ｈを３〜５に低下させた後、この液をＢｏｎｄ Ｅｌｕ
ｔ（／Ｉ８で処理して’Ｉ’ｌｌＩを吸着させ、ＣＬＩ
Ｍクエン酸ナトジナトリウム水溶液 ４．４ ）とメタ
ノールとの混合液（混合比２ ： １ ） ２００ ／
１４３で溶離した。
次いで得られた溶Ｐ：ｌＣ液１００ ｇ（３を第１図′
に示す分析装置を用い高速液体クロマトグラフィに付し
て分離した後蛍光分析した。すなわち（１）はＯユＭク
エン酸リーすリウノ・水溶液（ｐＨ４，４）の移動相で
あ’り、（４）はゾルパックスＯＤＳカラムである。
に示す分析装置を用い高速液体クロマトグラフィに付し
て分離した後蛍光分析した。すなわち（１）はＯユＭク
エン酸リーすリウノ・水溶液（ｐＨ４，４）の移動相で
あ’り、（４）はゾルパックスＯＤＳカラムである。
まずカラム（りを４０℃に保持しながら、移動相（１）
をポンプ（２）によって分析装置全体に送って定常状態
に達してから、前記溶離液を試料注入部（３）に注入し
て力ジム（４）で分離し、次いで（５〕の蛍光検出器で
測定した。
をポンプ（２）によって分析装置全体に送って定常状態
に達してから、前記溶離液を試料注入部（３）に注入し
て力ジム（４）で分離し、次いで（５〕の蛍光検出器で
測定した。
得られた蛍光分析のクロマドグ２ムを第２図に示した。
図中のＮＡとＡはノルアドレナリン及びアドレナリンの
ピークを示す。ピークのひろが）や割れもなく高感度で
カテコールアミン類が分析された。
ピークを示す。ピークのひろが）や割れもなく高感度で
カテコールアミン類が分析された。
（へ）発明の効果
この発明の方法によれに、再現性良好で高感度で安価に
カテコールアミン類を分析することができる。
カテコールアミン類を分析することができる。
であシ、第２図はこの発明の方法の一実施例で測定され
た試料の蛍光分析クロマトグラムである。
た試料の蛍光分析クロマトグラムである。
（１）・・・移動相、（２）・・・ポンプ、（３片■試
料注入部、（す・・・逆相力２ム、（５）・・・蛍光検
出器、（６）・・・分析データ処理器及び（））・・・
分析液ＰＦ。
料注入部、（す・・・逆相力２ム、（５）・・・蛍光検
出器、（６）・・・分析データ処理器及び（））・・・
分析液ＰＦ。
秦管路。
代理人 弁理士 野河信太部
Claims (1)
- １、 カテコールアミン類含有の試料、又はこの試料か
らカテコールアミンＭｆ、抽出した抽出液に、第１反応
試薬の７エリシアン化カリウム緩衝液、第２反応試薬の
アスコルビン酸水溶液又はエチレンジアミン四ｆｆｉ：
ａ含有のアスコルビン酸水溶液、及び＃￥３反応試薬
の水酸化ナトリウム溶液をこの順で加えてカテコールア
ミン類をトリヒドロキシインド−μに変換し、その反応
液を面相抽出した後、シリカを担体とする化学結合型逆
相カラムを用い酸性緩行液の移動相で溶出する＾速液体
クロマトグラフィに付して分離し蛍光分析することを特
徴とするカテコールアミン類分析法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP21307983A JPS60104257A (ja) | 1983-11-11 | 1983-11-11 | カテコ−ルアミン類分析法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP21307983A JPS60104257A (ja) | 1983-11-11 | 1983-11-11 | カテコ−ルアミン類分析法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS60104257A true JPS60104257A (ja) | 1985-06-08 |
Family
ID=16633193
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP21307983A Pending JPS60104257A (ja) | 1983-11-11 | 1983-11-11 | カテコ−ルアミン類分析法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS60104257A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH0448263A (ja) * | 1990-06-15 | 1992-02-18 | Hitachi Ltd | カテコールアミンの分析方法および分析装置 |
-
1983
- 1983-11-11 JP JP21307983A patent/JPS60104257A/ja active Pending
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH0448263A (ja) * | 1990-06-15 | 1992-02-18 | Hitachi Ltd | カテコールアミンの分析方法および分析装置 |
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