JPS5951528B2 - 抗コクシジウム剤 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、コクシジウム症予防治療剤に関するものであ
る。

コクシジウム症はスポロシア（５ｐｏｒｏｚｏａ ）の
コクシジアＯ）α１ｄｉａ ）こ属する寄生原虫によっ
て家畜に下痢および栄養障害をおこさせ、ひいては死亡
させる伝染病であって、我が国でも鶏に多発している。

その他、七面鳥、犬、猫等にもコクシジウム症がある。

コクシジウムの１世代であるオーシストは糞と共に体外
へ排泄され、感染源となる。

感染は経口的に行なわれ、宿主の腸管の表層細胞にて繁
殖し、宿主の栄養摂取を妨害し、いわゆるコクシジウム
症をひきおこす。

現在、家禽類の飼育は限られた空間内で可能な限りの多
羽数で行なわれており、そのような産業においては、例
えば、コクシジウム症の如き悪質な伝染性の病気は、極
力避ける必要がある。

そのために従来多くの予防治療剤が提案されてきた。

コクシジウム症に対するものとしては、例えば、ヒ素剤
、ニトロフラゾン剤、ビスフェノール剤、サルファ剤、
サイアミン誘導体、キノリン誘導体等が提案され、市販
されてもいるが、目的とする効力が十分とはいえず、ま
た、これらの薬剤に対して抵抗性のあるコクシジアの出
現などにより広く用いられるに到っていないものが多い
。

本発明者らは、これら従来の化学療法剤の現状を鑑み、
研究の結果、放線菌ストンブトマイセス、タナシェンシ
ス、Ｋ−７３が生産する抗生物質層に一７３Ａが、抗コ
クシジウム剤として著効のあることを見出し研究を完成
するに到った。

抗生物質ＡＫ−７３Ａはストレプトマイセス、タナシェ
ンシス、Ｋ−７３を栄養源含有培地に接種して好気的に
培養せしめることにより得られる。

本菌株の菌学的性質は次の通りである。

■形態 天然及び合成培地上でゆるく波打った基底菌糸を作って
発育し、気中菌糸は比較的簡単な分枝をなしてゆるく波
打っている。

胞子は円筒形で０．５〜０．６Ｘ０．９〜１．１μの大
きさを有し、はぼ直線状の連鎖を形成し、表面は平滑で
ある。

■ 培地における生育状態 （１）シー−クロース・ツアペック寒天培地（２７℃）
無色で貧弱な発育をし、気菌糸は白色で乏しく、溶解色
素は生じない。

（２）グルコース・アスパラギン寒天培地（２７℃）灰
黄色の中位の発育で、気中菌糸は灰色であり、淡褐色の
溶解色素を生ずる。

（３） リンゴ酸カルシウム寒天培地（２７℃）黄色
の中位の発育で、気中菌糸は白色であり、赤褐色の溶解
色素を生成する。

（４）ペプトン・硝酸塩液（２７℃） 表面に菌膜を生じ、一面に灰色の気中菌糸で被われる。

下部には僅かな紫状生育がある。溶解色素は薄い褐色。

（５）普通寒天培地（２７℃） 淡褐色の光沢ある生育で、気中菌糸は僅かで、淡床褐色
の溶解色素を生ずる。

（６）グルコース栄養寒天培地（２７℃）半透明な淡褐
色の生育で、湿った細かな摺装を生ずる。

気中菌糸はうすく表面をおおい、灰色褐色の溶解色素を
生ずる。

（７） レフラー氏血清培地（３７℃）灰褐色の生育
で、気中菌糸を生じない。

深い褐色の溶解色素を生じ、血清を水解する。

（８）バレイショ切片（２７°Ｃ） 黒乃至黄褐色の細かな摺装を持つ隆起した生育で、気中
菌糸は褐色がかった灰色、溶解色素は暗褐色。

（９） ゼラチン培地（２４℃） 褐色のリング状生育で、気中菌糸は褐色がかった灰白色
である。

暗褐色の溶解色素を生じ、ゼラチンを液化する。

αｅ スターチ寒天平板培地（２７℃） 白色の発育を示し、気中菌糸は灰色である。

淡褐色の溶解色素を生ずる。

殿粉を強く水解する。

αＤ ミルク（３７℃） クリーム色のリング状生育で、気中菌糸は生じない。

褐色の溶解色素を生じる。（１２） セルロース・ツ
アペック寒天培地（２７℃）白色がかった貧弱な発育で
、気中菌糸は僅かに生じる。

溶解色素なし。αｌ ペネット・寒天培地（２７℃） 褐色がかった良好な発育で、褐色がかった灰色の気中菌
糸を生じる。

可溶性色素は暗褐色。

α４）チロシン寒天培地 生育は中位であり、気中菌糸は灰色。

チロシナーゼを生じ、培地は暗褐色に色ずく。

（１５）グルコースツアペック液 生育は中位、下部に綿毛状の球型コロニーを生じ、表面
生育はない。

溶解色素はなし。１１６＋ イーストエキス・マルト
エキス寒天培地生育は良好で、褐色がかった灰色の気中
菌糸を生ずる。

可溶性色素は深い褐色。（１７） オートミール寒天
培地 貧弱な生育で偏平。

褐色がかった灰色の気中菌糸がうすく表面をおおう。

可溶性色素はうすい黄色。

０８） グリセリン・アスパラギン寒天培地中位の生
育で、気中菌糸は灰色。

可溶性色素は黄色。

■ 生理的性質 （１）生育湿度 １０〜４０℃（２）生
育ｐＨ４，５〜８．０ （３）ゼラチンの液化 陽性（４）ス
ターチの加水分解 陽性（５）脱脂牛乳の
ペプトン化 陽性（６） メラニン様色素
の生成 陽性（７）チロシナーゼの生成
陽性（８）硝酸塩還元能
陽性（９）セルロースの分解 陽性０
０）脱脂牛乳を凝固しない。

（１１）カゼイン分解能 陽性■ 炭素
源の同化性 グルコース＋＋ グリセロール＋＋ ガラクトース＋
マルトース ＋キシロース ＋アラビノース＋ フルク
トース士イノシトール −ラフイノースーマンニトール
ークエン酸ナトリウム−ラムノース−シュークロース− （注） ＋士長く同化する。

土間化する。±少し同化する。

一同化しない。以上の菌学的諸性質をバージ−のマニ
ュアル・オプ・デターミネイティブ・バクテリオロジイ
、第７版に照合し、その菌種を検索するに、本菌株は好
気的条件下で良く生育し、その生育適温は２５〜３５℃
であること、気菌糸と気中菌糸の部分からなること、気
菌糸には円筒形の胞子を形成し、胞子は直線的に連鎖し
ていること、及び気菌糸には隔壁がないことなどから本
菌株はストレプトミセス属に属する。

而して、本菌株はストレプトマイセス属に属する菌の中
で特にストレプトマイセス・タナシェンシス（Ｓｔ、
ｔａｎａｓｈｉｅｎｓｉｓ ）に類似する。

しかし、この両菌株を比較すると次の如き差異を有する
。

■ シュークロース・ツアペック寒天培地で、本菌株は
白色の気菌糸を生ずるが、タナシェンシスは気菌糸を生
じない。

■ グルコース・アスパラギン寒天培地で、本菌株は淡
褐色の可溶性色素を生ずるが、タナシェンシスは可溶性
色素を生産しない。

■ グルコース栄養寒天培地上で、本菌株は明るい灰色
の気菌糸を生ずるが、タナシェンシスはほとんど気菌糸
をつけず、僅かに白色となる。

■ バレイシフ切片上で、本菌株は褐色がかった灰色の
気菌糸を着生するがタナシェンシスでは褐白色の気菌糸
である。

■ ベネット寒天培地で、本菌株は暗褐色の可溶性色素
を生ずるが、タナシェンシスでは淡褐色の可溶性色素を
生ずる。

■ イーストエキス・マルトエキス寒天培地上で、タナ
シェンシスは気菌糸が灰色で、生産される可溶性色素は
淡褐色であるが、本菌株は褐色がかった灰色の気菌糸を
生じ、可溶性色素は深い褐色である。

■ オートミール寒天培地で、本菌株は黄色の可溶性色
素を生ずるが、タナシェンシスは可溶性色素を生産しな
い。

■ グリセリン・アスパラギン寒天培地で、本菌株は黄
色の可溶性色素を生ずるが、タナシェンシスは可溶性色
素を生産しない。

以上の諸性質から、本菌株はストレプトマイセス・タナ
シェンシスによく類似するが、細部では明らかな相違が
認められる。

従って、本発明者らは本菌株をストレプトマイセス・タ
ナシェンシスＫ −７３（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ
ｔａｎａｓｈｉｅｎｓｉｓＫ −７３）と命名し、工業
技術院微生物工業技術研究所に受理番号第２７８７号と
して寄託した。

上記新菌株、ストレプトマイセス−タナシェンシス・Ｋ
−７３を栄養源含有培地に、接種して好気的に培養をせ
しめることにより、抗生物質ＡＫ−７３の複合体が得ら
れる。

菌株としては、それ自体はもとより、これに紫外線、Ｘ
線またはナイトロジエン・マスタード等を作用せしめて
淘汰または突然変異せしめた結果生ずる変異株も同様に
使用できる。

栄養源としては、窒素源、炭素源及び生長促進物質とし
て、大豆粉、ペプトン、肉エキス、コーンステイープリ
カー、綿実粕、落下生釉、麦芽エキス、酵母エキス、硝
酸塩、アンモニウム塩等の窒素源；ブドウ糖、グリセロ
ール、ガラクトース、キシロース、マルトース、澱粉等
の炭素源を使用する。

無機塩としては、例えばアルカリ金属、アルカリ土類金
属、マグネシウム、鉄、コバルト、亜鉛またはマンガン
の塩化物、硝酸塩、リン酸塩、硫酸塩等が使用される。

培養は培地のｐＨを５゜５〜８．０に調整して、２５〜
３５℃で行なうのが好ましく、工業的には深部通気攪拌
培養を行なうのが良い結果を与える。

培養液の抗菌活性は２４〜９６時間の培養で最高に達す
る。

このようにして得られる培養液中から抗生物質／ｆＬＫ
−７３複合体を採取するには、培養液を中性附近で涙過
するか、または塩酸、硫酸等の鉱酸又は蓚酸、酢酸等の
有機酸でｐＨな酸性とし、必要あらばこれを加温後濾過
等の方法で菌体を分離除去し、Ｐ液を水に不溶の有機溶
剤で抽出することによりなし得る。

有機溶剤としてはクロロホルム、酢酸エチル、酢酸ブチ
ル、ベンゼン、ブタノール、ニーデル等が使用される。

当該抗生物質は培養液中以外に菌体中にも若干存在する
。

菌体よりの抽出には前記溶剤の外にメタノール、エタノ
ール、アセトン等の親水性溶剤又はこの溶剤と水との混
合物を使用できる。

工業的に多量の培養液から抗生物質ＡＫ −７３複合体
を採取するには、上述の抽出法の外に、活性吸着剤又は
沈澱剤を使用する方法も採用し得る。

吸着剤としては活性炭、カオリン、合成吸着剤等が、沈
澱剤としてはピクリン酸、ヘリアチンＢ等が使用される
。

以上の如くして得られる抗生物質ＡＫ−７３複合体は２
種以上の抗生物質の複合体であるが、これから通常の化
学的精製法、例えばクロマトグラフィー法、沈澱法、溶
媒抽出法、アルコール類またはアセトンによる再結晶法
あるいはこれらの組合せによって抗生物質ＡＫ−７３Ａ
を分離することができる。

このようにして得られる抗生物質ＡＫ−７３Ａの塩酸塩
は次の如き理化学的性質ならびに抗菌活性を有する。

Ａ 理化学的性質 （１）元素分析値 Ｃ５７，７３，Ｈ６，３９，Ｎ ２．３５（２）分子
量 ４９６（マススペクトル） （３）融点 １８０℃（分解） （４）比旋光度 〔α）Ｄ＋１７７（Ｃ＝２、クロロホルム）（５）分子
量 Ｃ２４Ｈ２゜ＮＯ６・ＨＣｌ （６）紫外線吸収スペクトル 第１図 （７）赤外線吸収スペクトル 第２図 （８）溶剤に対する溶解性 メタノール、アセトン、水、エタノール、酢酸エチル、
ベンゼンに可溶、石油エーテル、ｎ−ヘキサンに不溶。

（９）呈色反応 バイエル、アンスロン、フェーリング、キノン反応陽性
、ニンヒドリン、ビウレット、工〜ルソンモルガン反応
陰性。

αＯ性質 塩基性物質（ｐＫａ ＝９−５ ） Ｂ 抗菌活性 抗生物質ＡＫ−７３Ａは、単独に又は飼料に混合して、
家畜の種類、症状、方今に応じて用いる。

投与法は散剤、顆粒剤、錠剤、カプセル剤、油剤、水剤
、乳剤、懸濁剤等を用いることが出来る。

また投与に際しては希釈して与えてもよく、希釈剤とし
ては飼料もしくは飼料の１成分となり得るものが望まし
い。

例えば大麦粉、小麦粉、裸麦粉、トウモロコン粉、大豆
粉、大豆粕、菜種粕、モミガラ、米ヌカ、脱脂ヌカ、豆
腐粕、各種の澱粉、繊維素、乳糖、蔗糖、ブドウ糖、果
糖、酵母、廃酵母、菌体残渣、魚粉、醗酵残留物等が用
いられまた一般に知られている飼料添加物、例えば各種
ビタミン類、ミネラル類、防腐剤、酵素製剤、蛋白質、
炭水化物、アミノ酸類、解熱剤、鎮静剤、消炎剤、殺菌
剤などを配合併用して用い得る。

本発明の抗生物質ＡＫ−７３Ａは家畜の種類、投与方法
、投与目的、症状などによって一概にはいえないが、例
えば飼料中は０．００５〜０，０１％程度になるように
して用いる。

またコクシジウム症の治療の目的で飼料に混合して使用
する場合は、使用濃度の上限を更に高くして用いること
が出来る。

従って本発明のコクシジウム症予防治療剤は飼料等に添
加して用いる場合は、培養液よりの抽出精製物、あるい
はＡＫ−７３Ａ高濃度含有培養液の乾燥物をそのまま用
いてもよいが１〜５０％の中間希釈剤としておき、更に
使用目的に応じて希釈して用いるのがよい。

実施例１゜ 供試ヒナは実験開始時に９日令である白色レグホンを用
いた。

卿化直后の初生ヒナを試験開始時迄抗コクシジウム剤の
含まれている初生ヒナ用配合飼料を与えて、コクシジウ
ムの感染のないように飼育した。

ＡＫ−７３Ａは抗コクシジウム剤を含有していない初生
ヒナ用配合飼料に０．００５．０．０１％の割合で混合
し試験に供した。

試験方法としてはまずヒナの健康状態を観察し、特に異
状の認められないもののなかからヒナの体重を測定し各
群の体重分布がほぼ等しくなるように１０羽づつ組合け
し試験群とした。

対照群として感染対照及び無感染対照をおいた。

各試験群には所定のＡＫ−７３Ａ含有飼料を対照群には
ＡＫ−７３Ａを含まない飼料を用いた。

これら各群への飼料給与開始２４時間後に無感染対照群
を除く各群へ１羽あたり５ Ｘ １０’個のアイメリア
・テネラの成熟オーシストを経口投与した。

各群のヒナの体重増加率、血便の出方を観察し、更にオ
ーシスト感染后７日目に全供試ヒナを解剖し、盲腸の病
変状態を検査してＡＫ−７３Ａの抗コクシジウム剤とし
ての効果を判定した。

次に実施した試験の結果を表に示す。

尚表中の記載事項についての説明は下記の通りである。

体重増加率；試験終了時の平均体重を試験開始時の平均
体重で除したもの。

体重増加率比；無感染対照群の体重増加率に対する各群
の増加率の割合 出血状況；ヒナの腸からの出血量を血痕数の多少で表示 盲腸の病変；剖検の結果を下記の記号により表示し、全
供試ヒナの病変及び比率を示した。

次に本発明の化合物を有する代表的な飼料補助剤の実施
例を示す。

（１）粉 剤 ４に一７３Ａ Ｏ，１部 小麦粉 ９９部 （２）粉 剤 ４に一７３Ａ Ｏ，２部大豆粉
９０部 澱 粉 １０ 部（３）粉
剤 屋に一７３Ａ Ｏ，１部廃酵母
８０部 小麦粉 ２０部 （４）錠 剤 ＡＫ−７３Ａ Ｏ，１部澱 粉
４０ 部蔗 糖
４０ 部炭酸カルシウム ２
０ 部（５）水和剤 ＡＫ−７３Ａ Ｏ，５部乳 糖
３０ 部蔗 糖
６０ 部澱 粉
１ｏ 部ビタミンＢ２ ３ 部（６
）粒 剤 ＡＫ−７３Ａ Ｏ，５部澱 粉
９０ 部繊維素 １０
部 （７）粉 剤 ＡＫ−７３Ａ含有培養液乾燥物 ５ 部トウモロコシ
粉 ５０ 部小麦粉 ４
５部 以上述べたようにＡＫ−７３ＡもしくはＡＫ−７３Ａ培
養液の乾燥物を各種の補助剤と混合して、これを家禽の
飼育状況にあわせて与えてやることにより家禽をコクシ
ジウム症から防禦することが出来る、更にＡＫ−７３Ａ
の投与により、先の例に示すように体重増加率が上昇す
る等の良好な結果がみられる。

又飼料に混合する場合、いかなる飼料及び飼料補助剤と
もよく混合し、使用法もきわめて容易である。

【図面の簡単な説明】

第１図は、抗生物質ＡＫ−７３Ａの塩酸塩の紫外線吸収
スペクトルを示す。 第２図は、抗生物質ＡＫ ７７３ Ａの塩酸塩の赤外線
吸収スペクトルを示す。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. １ ストレフトマイセス、タナシェンシス、Ｋ−７３が
   生産する抗生物質４に一７３Ａを含有する抗コクシジウ
   ム剤。