JPS5950360A - 癌胚抗原およびその単離方法 - Google Patents
癌胚抗原およびその単離方法Info
- Publication number
- JPS5950360A JPS5950360A JP58146758A JP14675883A JPS5950360A JP S5950360 A JPS5950360 A JP S5950360A JP 58146758 A JP58146758 A JP 58146758A JP 14675883 A JP14675883 A JP 14675883A JP S5950360 A JPS5950360 A JP S5950360A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- column
- proteins
- oea
- molecular weight
- fraction
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 14
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 title description 4
- 239000000427 antigen Substances 0.000 title description 2
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 title description 2
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 title description 2
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 title 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 26
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 26
- VLTRZXGMWDSKGL-UHFFFAOYSA-N perchloric acid Chemical compound OCl(=O)(=O)=O VLTRZXGMWDSKGL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 17
- 102100025475 Carcinoembryonic antigen-related cell adhesion molecule 5 Human genes 0.000 claims description 7
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 claims description 6
- VDQQXEISLMTGAB-UHFFFAOYSA-N chloramine T Chemical compound [Na+].CC1=CC=C(S(=O)(=O)[N-]Cl)C=C1 VDQQXEISLMTGAB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 238000004811 liquid chromatography Methods 0.000 claims description 5
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims description 5
- 108010022366 Carcinoembryonic Antigen Proteins 0.000 claims description 4
- 229960001479 tosylchloramide sodium Drugs 0.000 claims description 4
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 claims description 3
- 230000026045 iodination Effects 0.000 claims description 3
- 238000006192 iodination reaction Methods 0.000 claims description 3
- 229940039227 diagnostic agent Drugs 0.000 claims 2
- 239000000032 diagnostic agent Substances 0.000 claims 2
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims 1
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 claims 1
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 21
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 20
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 10
- 239000000047 product Substances 0.000 description 10
- 101710081722 Antitrypsin Proteins 0.000 description 6
- 230000001475 anti-trypsic effect Effects 0.000 description 6
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 6
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 6
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 6
- 239000002753 trypsin inhibitor Substances 0.000 description 6
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 5
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 5
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 5
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 5
- PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N Sodium azide Chemical compound [Na+].[N-]=[N+]=[N-] PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 4
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 4
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 description 4
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 4
- 230000000951 immunodiffusion Effects 0.000 description 4
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 4
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 4
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 4
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 3
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 3
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 3
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 3
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 3
- 238000002834 transmittance Methods 0.000 description 3
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 2
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 2
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- 241000951471 Citrus junos Species 0.000 description 2
- 102000006395 Globulins Human genes 0.000 description 2
- 108010044091 Globulins Proteins 0.000 description 2
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 2
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 2
- 239000012506 Sephacryl® Substances 0.000 description 2
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 2
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 2
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 102000015395 alpha 1-Antitrypsin Human genes 0.000 description 2
- 108010050122 alpha 1-Antitrypsin Proteins 0.000 description 2
- 229940024142 alpha 1-antitrypsin Drugs 0.000 description 2
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 2
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 description 2
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 2
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 2
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 2
- 238000000760 immunoelectrophoresis Methods 0.000 description 2
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 239000002002 slurry Substances 0.000 description 2
- 239000012064 sodium phosphate buffer Substances 0.000 description 2
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 2
- ZICZZIRIRHGROF-UHFFFAOYSA-N 1-$l^{1}-oxidanyl-2,2,4,5,5-pentamethylimidazole Chemical compound CC1=NC(C)(C)N([O])C1(C)C ZICZZIRIRHGROF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 1
- 206010003445 Ascites Diseases 0.000 description 1
- 102000004506 Blood Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010017384 Blood Proteins Proteins 0.000 description 1
- 101710117545 C protein Proteins 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 description 1
- 239000001856 Ethyl cellulose Substances 0.000 description 1
- ZZSNKZQZMQGXPY-UHFFFAOYSA-N Ethyl cellulose Chemical compound CCOCC1OC(OC)C(OCC)C(OCC)C1OC1C(O)C(O)C(OC)C(CO)O1 ZZSNKZQZMQGXPY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000018522 Gastrointestinal disease Diseases 0.000 description 1
- 102000004407 Lactalbumin Human genes 0.000 description 1
- 108090000942 Lactalbumin Proteins 0.000 description 1
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 description 1
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 1
- 102000012404 Orosomucoid Human genes 0.000 description 1
- 108010061952 Orosomucoid Proteins 0.000 description 1
- 206010061902 Pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 102000009843 Thyroglobulin Human genes 0.000 description 1
- 108010034949 Thyroglobulin Proteins 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 238000005571 anion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000002494 anti-cea effect Effects 0.000 description 1
- 230000002421 anti-septic effect Effects 0.000 description 1
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 1
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 239000004020 conductor Substances 0.000 description 1
- ATDGTVJJHBUTRL-UHFFFAOYSA-N cyanogen bromide Chemical compound BrC#N ATDGTVJJHBUTRL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 1
- 238000003795 desorption Methods 0.000 description 1
- HPNMFZURTQLUMO-UHFFFAOYSA-N diethylamine Chemical compound CCNCC HPNMFZURTQLUMO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 239000012154 double-distilled water Substances 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 235000019325 ethyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 229920001249 ethyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 1
- 210000000416 exudates and transudate Anatomy 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000010931 gold Substances 0.000 description 1
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000001794 hormone therapy Methods 0.000 description 1
- 125000004029 hydroxymethyl group Chemical group [H]OC([H])([H])* 0.000 description 1
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- JEIPFZHSYJVQDO-UHFFFAOYSA-N iron(III) oxide Inorganic materials O=[Fe]O[Fe]=O JEIPFZHSYJVQDO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 1
- 208000015486 malignant pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 208000037819 metastatic cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000011575 metastatic malignant neoplasm Diseases 0.000 description 1
- NQMRYBIKMRVZLB-UHFFFAOYSA-N methylamine hydrochloride Chemical compound [Cl-].[NH3+]C NQMRYBIKMRVZLB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- ZIUHHBKFKCYYJD-UHFFFAOYSA-N n,n'-methylenebisacrylamide Chemical compound C=CC(=O)NCNC(=O)C=C ZIUHHBKFKCYYJD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000771 oncological effect Effects 0.000 description 1
- 210000000496 pancreas Anatomy 0.000 description 1
- 201000002528 pancreatic cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000008443 pancreatic carcinoma Diseases 0.000 description 1
- VLTRZXGMWDSKGL-UHFFFAOYSA-M perchlorate Inorganic materials [O-]Cl(=O)(=O)=O VLTRZXGMWDSKGL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 238000011045 prefiltration Methods 0.000 description 1
- 238000001959 radiotherapy Methods 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 239000012475 sodium chloride buffer Substances 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 239000008399 tap water Substances 0.000 description 1
- 235000020679 tap water Nutrition 0.000 description 1
- 210000000115 thoracic cavity Anatomy 0.000 description 1
- 229960002175 thyroglobulin Drugs 0.000 description 1
- 230000001052 transient effect Effects 0.000 description 1
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000004885 white matter Anatomy 0.000 description 1
- 235000021241 α-lactalbumin Nutrition 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K51/00—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo
- A61K51/02—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo characterised by the carrier, i.e. characterised by the agent or material covalently linked or complexing the radioactive nucleus
- A61K51/04—Organic compounds
- A61K51/08—Peptides, e.g. proteins, carriers being peptides, polyamino acids, proteins
- A61K51/10—Antibodies or immunoglobulins; Fragments thereof, the carrier being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. a camelised human single domain antibody or the Fc fragment of an antibody
- A61K51/1045—Antibodies or immunoglobulins; Fragments thereof, the carrier being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. a camelised human single domain antibody or the Fc fragment of an antibody against animal or human tumor cells or tumor cell determinants
- A61K51/1048—Antibodies or immunoglobulins; Fragments thereof, the carrier being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. a camelised human single domain antibody or the Fc fragment of an antibody against animal or human tumor cells or tumor cell determinants the tumor cell determinant being a carcino embryonic antigen
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/0005—Vertebrate antigens
- A61K39/0011—Cancer antigens
- A61K39/00118—Cancer antigens from embryonic or fetal origin
- A61K39/001182—Carcinoembryonic antigen [CEA]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2123/00—Preparations for testing in vivo
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Oncology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Mycology (AREA)
- Pregnancy & Childbirth (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Gynecology & Obstetrics (AREA)
- Reproductive Health (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Optics & Photonics (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
癌腫抗原（ＣａｒｃｉｎｏｅｍｂｒｙＯｎｉｃ ａｎｔ
ｉｇｅｎ、場合によりｌ”Ｏｌｊと略記する）は、電気
泳動上β１の移動度および約２００，０００ダルトンの
見掛は分子量を有する糖蛋白質であり、健康患者の抽清
および／または抑漿中に数ｎφｉという低濃度で検出で
き、良性疾病、特に腸、肝臓およびすい臓の良性疾病の
患者および多数の悪性疾病（主として胃腸病、すい臓癌
、肺癌および胸部転移瘤）の患者の場合には過渡的に約
２０〜３０ｎＰ／ｍｅの濃度１でのやや増加した濃度を
示すが、またはわずかに増加したレベルをｉ申続的に示
し、典型的には肺Ｗにおいて形成されそして血液または
他の体液中の有意ないし顕著な濃度増加（最高１０．０
００ ｎｒ ／ ｍｅ以上にもなる）を伴なう。本質的
な臨床上の意義は、腫瘍患者の治療コントロールおよび
フォローアツプ（手術およびホルモン療法、放射線療法
および化学療法）にある。
ｉｇｅｎ、場合によりｌ”Ｏｌｊと略記する）は、電気
泳動上β１の移動度および約２００，０００ダルトンの
見掛は分子量を有する糖蛋白質であり、健康患者の抽清
および／または抑漿中に数ｎφｉという低濃度で検出で
き、良性疾病、特に腸、肝臓およびすい臓の良性疾病の
患者および多数の悪性疾病（主として胃腸病、すい臓癌
、肺癌および胸部転移瘤）の患者の場合には過渡的に約
２０〜３０ｎＰ／ｍｅの濃度１でのやや増加した濃度を
示すが、またはわずかに増加したレベルをｉ申続的に示
し、典型的には肺Ｗにおいて形成されそして血液または
他の体液中の有意ないし顕著な濃度増加（最高１０．０
００ ｎｒ ／ ｍｅ以上にもなる）を伴なう。本質的
な臨床上の意義は、腫瘍患者の治療コントロールおよび
フォローアツプ（手術およびホルモン療法、放射線療法
および化学療法）にある。
何故なら、多くのこれらの患者においてＩＡレベルの変
化が生じしかもその変化はしばしば何ケ月も臨床症状発
現に先行するからである［ｒＩＱｉｎ。
化が生じしかもその変化はしばしば何ケ月も臨床症状発
現に先行するからである［ｒＩＱｉｎ。
Ｗｓｃｈｒ、Ｊ第５′５巻第１９′５〜２０３頁（１９
７５年）参照〕。
７５年）参照〕。
Ｃ！ＦｉＡの抽出、精製および単離については多くの方
法が科学文献に記載されている（前掲の文献参照）。過
塩素酸による腫瘍組織抽出がもつともよく用いられてい
る。大抵の方法においては、ゲル濾過工程と電気泳動工
程とを組み合わ、せることにより、また方法によっては
その上に免疫吸着を用いることにより、更に精製が行わ
れる。
法が科学文献に記載されている（前掲の文献参照）。過
塩素酸による腫瘍組織抽出がもつともよく用いられてい
る。大抵の方法においては、ゲル濾過工程と電気泳動工
程とを組み合わ、せることにより、また方法によっては
その上に免疫吸着を用いることにより、更に精製が行わ
れる。
適当な細胞培養物からのＯＥＡもまた適切な出発材料で
ある。
ある。
本発明者は今や（ａ）比較的高い分子量の蛋白質をゲル
濾過により分際し、（ｂ）ａｇＡ抗原性を有する蛋白質
を免疫吸着により溶出液から選択的に分取し、そして（
Ｃ）これらを高性能カラムでの液体クロマトグラフィー
〔以下「高性能液体クロマトグラフィーＪ （ｈｉｇｈ
ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ １１ｑ、ｕｉｄｃｈｒｏｍ
ａｔＯｇｒａｐｈｙ） （ＨＰＬＯ）と呼ぶ〕で分離す
れば、電気泳動工程なしにＯＥ’Ａ含有過塩素酸抽出物
から極めて純粋な０ＦｊＡが得られることを見出した。
濾過により分際し、（ｂ）ａｇＡ抗原性を有する蛋白質
を免疫吸着により溶出液から選択的に分取し、そして（
Ｃ）これらを高性能カラムでの液体クロマトグラフィー
〔以下「高性能液体クロマトグラフィーＪ （ｈｉｇｈ
ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ １１ｑ、ｕｉｄｃｈｒｏｍ
ａｔＯｇｒａｐｈｙ） （ＨＰＬＯ）と呼ぶ〕で分離す
れば、電気泳動工程なしにＯＥ’Ａ含有過塩素酸抽出物
から極めて純粋な０ＦｊＡが得られることを見出した。
このようにして得られるＯＥＡは電気泳動的に不均一で
あるが免疫学的には均一である。それは診断用放射性沃
素化銹導体の製１貴に適している。 − 次に、本発明の好ましい具体例をより詳細に記載する。
あるが免疫学的には均一である。それは診断用放射性沃
素化銹導体の製１貴に適している。 − 次に、本発明の好ましい具体例をより詳細に記載する。
前述の比較的高い分子量の蛋白質は、Ｃ！Ｊ！ｉＡより
も顕著に高い分子量の蛋白質も分備する蛋白分画範囲を
有する架橋デキストランを用いるこの目的に適したカラ
ムでのケ゛ル濾過により分熱サレる。溶出液は両分（フ
ラクション）として集め、ＯＥＡ含量は通常の分析法に
より測定し、また相当するＯＥＡ陽性画分は合体して濃
縮する。
も顕著に高い分子量の蛋白質も分備する蛋白分画範囲を
有する架橋デキストランを用いるこの目的に適したカラ
ムでのケ゛ル濾過により分熱サレる。溶出液は両分（フ
ラクション）として集め、ＯＥＡ含量は通常の分析法に
より測定し、また相当するＯＥＡ陽性画分は合体して濃
縮する。
抽出物中におけるＯｎと交叉反応する成分（主とじでＮ
ＯＡ ＝非特異的交叉反応性抗原ンの含量忙よっては、
この段階で既に予備精製を行ない、（分子量がより小さ
いために）遅れて溶出されるＮｃＡを除去する。
ＯＡ ＝非特異的交叉反応性抗原ンの含量忙よっては、
この段階で既に予備精製を行ない、（分子量がより小さ
いために）遅れて溶出されるＮｃＡを除去する。
更にクロマトグラフィ一工程に付して溶出液を精製する
ことも可能であるが必要ではない。
ことも可能であるが必要ではない。
これにはより狭い蛋白質画分分離１１１！、囲、例えば
５Ｘ１０”〜！５Ｘ１０５Ｉ）の分画範囲ｒもったカジ
ノ、を用いる仁とができる。これによってしばしばＯＥ
Ａ 、！： ＮＯＡの分画を向上させることができる。
５Ｘ１０”〜！５Ｘ１０５Ｉ）の分画範囲ｒもったカジ
ノ、を用いる仁とができる。これによってしばしばＯＥ
Ａ 、！： ＮＯＡの分画を向上させることができる。
このようにして比較的高い分子量の告白質のみならず低
分子１１にの蛋白質の除がり、たＯＥＡ陽性画分を本発
明の次の工程で免疫吸１．ｎにより分Ｍする。この目的
には、例えば）兎゛または山羊を免疫することにより得
られた多りローナル抗０ＥＡ−抗珀１漬または乍−クロ
ーナル抗ＩＡ−抗血清の予め精製された工ｇＧグロブリ
ンを組込んだ適宜の吸着カラムが用いられる。前の工程
からのＣＭ陽性画分をこのアフィニティークロマトグラ
フィーカラムに載せ、そして結合しない蛋白質をまず溶
出含せる。次いで抗体に固定された蛋白質を脱着用緩衝
液で溶出させ、そして溶出液を濃縮する。
分子１１にの蛋白質の除がり、たＯＥＡ陽性画分を本発
明の次の工程で免疫吸１．ｎにより分Ｍする。この目的
には、例えば）兎゛または山羊を免疫することにより得
られた多りローナル抗０ＥＡ−抗珀１漬または乍−クロ
ーナル抗ＩＡ−抗血清の予め精製された工ｇＧグロブリ
ンを組込んだ適宜の吸着カラムが用いられる。前の工程
からのＣＭ陽性画分をこのアフィニティークロマトグラ
フィーカラムに載せ、そして結合しない蛋白質をまず溶
出含せる。次いで抗体に固定された蛋白質を脱着用緩衝
液で溶出させ、そして溶出液を濃縮する。
正常の過塩素酸肺抽出物金含有する第２のアフィニティ
ークロマトグラフィーカラムに多りローナル抗（ＪＡ−
抗血清をチャージすることも可能であり、その場合、Ｎ
ＯＡに対する抗体が結合して抗血清から除去される。
ークロマトグラフィーカラムに多りローナル抗（ＪＡ−
抗血清をチャージすることも可能であり、その場合、Ｎ
ＯＡに対する抗体が結合して抗血清から除去される。
ヒト面清蛋白質、例えばアルブミン、α１−アンチトリ
プシンおよびα１−酸性糖蛋白質などに対するカップリ
ングされた工ｇＧ抗体を用いて別にアフィニティークロ
マトグラフィーカラムを調製することも可能である。Ｏ
ＥＡ含有調製物をこのカラムでのクロマトグラフィーに
かけることにより、最初のアフィニティークロマトグラ
フィーの際に非特異的に吸着した柚清蛋白質不純物を除
去することができる。
プシンおよびα１−酸性糖蛋白質などに対するカップリ
ングされた工ｇＧ抗体を用いて別にアフィニティークロ
マトグラフィーカラムを調製することも可能である。Ｏ
ＥＡ含有調製物をこのカラムでのクロマトグラフィーに
かけることにより、最初のアフィニティークロマトグラ
フィーの際に非特異的に吸着した柚清蛋白質不純物を除
去することができる。
無傷の０ＩＩＣＡおよびＮＯＡのほかに、このようにし
てイクもれた両分は、免疫吸着カラ２・の抗ＣＥＡ抗体
と一様に反応してしまったａｍＡ断片をも含有する。そ
こで更に分離するために、高性能液体クロマトグラフィ
一工程が次に続く。
てイクもれた両分は、免疫吸着カラ２・の抗ＣＥＡ抗体
と一様に反応してしまったａｍＡ断片をも含有する。そ
こで更に分離するために、高性能液体クロマトグラフィ
一工程が次に続く。
この最終段階では、前段階からのＯＥＡ陽性画分が高性
能液体クロマトグラフィーカラムで分離される。このよ
うにして次の両分が得られる。
能液体クロマトグラフィーカラムで分離される。このよ
うにして次の両分が得られる。
１ 分子量、範囲２５０．ＯＤＤ〜１５０，０００．純
粋で無傷のＯＥＡ。
粋で無傷のＯＥＡ。
■ 分子量範囲１５０．［３００〜ａｏ、ｏ、ｏｏ、免
疫反応性ＣＥＡ断片（依然として免疫するには適当であ
る）、および ■ 分子針φ１Σ囲（５０，０００〜４０，０００．無
傷のＩＯＡおよび低分子ＯＥＡ断片。
疫反応性ＣＥＡ断片（依然として免疫するには適当であ
る）、および ■ 分子針φ１Σ囲（５０，０００〜４０，０００．無
傷のＩＯＡおよび低分子ＯＥＡ断片。
濃縮後、画分Ｉは、クロラミンＴ法によるＯＥＡの放射
性沃素化に直接用いることができる。
性沃素化に直接用いることができる。
濃縮した両分は、適当なカラムを用いて脱塩し次いで凍
結乾燥できる。
結乾燥できる。
次に本発明を実施例をもってよ抄詳細に記載する。これ
ら実施例において特に断らなければパーセントは＠量を
基準としている。
ら実施例において特に断らなければパーセントは＠量を
基準としている。
それら実施例に用いたＯＥＡ抽出液しよりルはイ（Ｋｒ
ｕｐｅｙ）氏等の方法〔「工ｍｍｕｎｏｃｈｅｍ、 Ｊ
第９巻第６１７頁（１９７２）参照〕の変法により採取
した。
ｕｐｅｙ）氏等の方法〔「工ｍｍｕｎｏｃｈｅｍ、 Ｊ
第９巻第６１７頁（１９７２）参照〕の変法により採取
した。
貯留された腫瘍組織（原発性腫瘍、なかんずく結腸癌、
肝臓転移癌、抽出１回あたり湿重量的５００〜１．００
０５’）を−７０℃で保存し、処理のために融解し、ま
ず鋏とナイフで粗く粉砕し、次いで更に機械式粉砕器〔
ブラウン−マルチミックス（Ｂｒａｕｎ−ＭＵＬＴ工Ｍ
ＩＸ）、Ｃｅｎ００社からのビルチス（■工ＲＴ工Ｓ）
−ホモゲ゛ナイザー６０．毎分３０．０００回転、１時
間、４℃〕を用いて約同容量の滅菌蒸留水と共に処理し
、そして最後にボツターーエルベエム（Ｐｏｔｔｅｒ−
Ｅｌｖｅｈｊｅｍ）装置（６０ｍｌ容）逢、ブラウン社
製品）およびモータ駆動式ガラス乳棒を用いてホモゾナ
イズして微分散スラリーとした。この組織スラリー混合
物−・、またはｌ：ＥＡ含量の高い体液（例えば胸膜滲
出液または腹水、１． Ｄ ＯＯｎｒ ／ｍｅより高い
０１！！Ａ濃度）へ等容量の１．２Ｍ過塩素酸を添加し
、そしてその混合物を室温（Ｒ，Ｔ、）で３０分間攪拌
する。遠心外１１１（１，０００ｆ、２０〜′５０分間
、Ｂ、Ｔ、）後、沈殿を捨て、そして上澄液をそれが透
明である場合にはその−１ま、あるいはそれが濁ってい
る（脂肪を含有している）場合には前もって濾過〔ブラ
オバント（Ｂｌ’ａｕｂａｎｄ）フィルタＮα５８９．
５ｃｈｉｅｉｃｈｅｒ ＆Ｆ３ａｈ′ｌｉ：１１社製品
〕した後に透析チューブ（Ｋａ１１８社製品、口径３８
、長さ１００ｍ以下）１に移し、そしてこれらチューブ
を水道水が流れかつ連続出入口を有する容器（１〜口２
／分）内に入れて２４〜４８時間透析する。次にそ
−の透析液（１〜３ Ａ ） ＫＮａＮｓを添加し、そ
してその透析液を濃縮装置［： Ａｍｌｃｏｎ社製品、
限外濾過セルＵＦ４００．透析膜ＰＭＩＯ，４１液槽付
〕により約１００ｍ／まで濃縮し、滅菌した２回蒸留水
を用いて再びその容量の１０倍ＫＬ、そして再び１００
ｍ７！まで濃縮する。この最終濃縮液を遠心分離しく１
０，０００ｆ、１時間、４℃）、そしてその上澄液を、
限外濾過〔ザ・ル１トリウス（ＳＡＲＴＯＲＩＵ８）
７ （／Ｉ／ ターφ２５問、０．２．０．６および３
．０μｍ）した後、凍結乾燥する。出発時の量５００〜
ｉ、ｏｏｏｆの湿潤組織から得られた過塩素酸抽出物の
最終重量は５００〜５．ＯＤＤキである。
肝臓転移癌、抽出１回あたり湿重量的５００〜１．００
０５’）を−７０℃で保存し、処理のために融解し、ま
ず鋏とナイフで粗く粉砕し、次いで更に機械式粉砕器〔
ブラウン−マルチミックス（Ｂｒａｕｎ−ＭＵＬＴ工Ｍ
ＩＸ）、Ｃｅｎ００社からのビルチス（■工ＲＴ工Ｓ）
−ホモゲ゛ナイザー６０．毎分３０．０００回転、１時
間、４℃〕を用いて約同容量の滅菌蒸留水と共に処理し
、そして最後にボツターーエルベエム（Ｐｏｔｔｅｒ−
Ｅｌｖｅｈｊｅｍ）装置（６０ｍｌ容）逢、ブラウン社
製品）およびモータ駆動式ガラス乳棒を用いてホモゾナ
イズして微分散スラリーとした。この組織スラリー混合
物−・、またはｌ：ＥＡ含量の高い体液（例えば胸膜滲
出液または腹水、１． Ｄ ＯＯｎｒ ／ｍｅより高い
０１！！Ａ濃度）へ等容量の１．２Ｍ過塩素酸を添加し
、そしてその混合物を室温（Ｒ，Ｔ、）で３０分間攪拌
する。遠心外１１１（１，０００ｆ、２０〜′５０分間
、Ｂ、Ｔ、）後、沈殿を捨て、そして上澄液をそれが透
明である場合にはその−１ま、あるいはそれが濁ってい
る（脂肪を含有している）場合には前もって濾過〔ブラ
オバント（Ｂｌ’ａｕｂａｎｄ）フィルタＮα５８９．
５ｃｈｉｅｉｃｈｅｒ ＆Ｆ３ａｈ′ｌｉ：１１社製品
〕した後に透析チューブ（Ｋａ１１８社製品、口径３８
、長さ１００ｍ以下）１に移し、そしてこれらチューブ
を水道水が流れかつ連続出入口を有する容器（１〜口２
／分）内に入れて２４〜４８時間透析する。次にそ
−の透析液（１〜３ Ａ ） ＫＮａＮｓを添加し、そ
してその透析液を濃縮装置［： Ａｍｌｃｏｎ社製品、
限外濾過セルＵＦ４００．透析膜ＰＭＩＯ，４１液槽付
〕により約１００ｍ／まで濃縮し、滅菌した２回蒸留水
を用いて再びその容量の１０倍ＫＬ、そして再び１００
ｍ７！まで濃縮する。この最終濃縮液を遠心分離しく１
０，０００ｆ、１時間、４℃）、そしてその上澄液を、
限外濾過〔ザ・ル１トリウス（ＳＡＲＴＯＲＩＵ８）
７ （／Ｉ／ ターφ２５問、０．２．０．６および３
．０μｍ）した後、凍結乾燥する。出発時の量５００〜
ｉ、ｏｏｏｆの湿潤組織から得られた過塩素酸抽出物の
最終重量は５００〜５．ＯＤＤキである。
実施例
１、 ゲル濾過
Ｎ、Ｎ’−メチレン−ビスアクリルア゛ミドで架橋され
そして４０〜１０５μｍのビーズ直径−および２Ｘ１０
４〜８×１０６の蛋白質分画範ｌ：′１１を有するアリ
ルデキストラン〔セファクリル（計ｐＨΔａＲｙｂＰ）
Ｓ ４６ ｏ、ファルマシア社製品〕を装填したカラム
（２，５Ｘ８０ ｃｍ ） （カラム１）においてｐＨ
６，５の０．０５Ｍ）リスーＨＣλ緩衝液〔トリス−（
ヒドロキシメチル）アミノメタン塩酸塩、緩衝液１〕を
用いて２５０〜６５０■の抽出物をケ゛ルｐ過にかける
。溶出速度は２０〜２５ ｍｅ ７時であり５ ｍＡず
つの両分上して集める。次のような溶出図が得られた（
２８０ｎｍでの透過率測定）。１．小さな初期ピーク（
画分１）、２．中間帯域（画分２）、６、急勾配の立上
り部を有する幅広の主ピーク（分画３）および４．あま
り急勾配でない降下部（分画４）。
そして４０〜１０５μｍのビーズ直径−および２Ｘ１０
４〜８×１０６の蛋白質分画範ｌ：′１１を有するアリ
ルデキストラン〔セファクリル（計ｐＨΔａＲｙｂＰ）
Ｓ ４６ ｏ、ファルマシア社製品〕を装填したカラム
（２，５Ｘ８０ ｃｍ ） （カラム１）においてｐＨ
６，５の０．０５Ｍ）リスーＨＣλ緩衝液〔トリス−（
ヒドロキシメチル）アミノメタン塩酸塩、緩衝液１〕を
用いて２５０〜６５０■の抽出物をケ゛ルｐ過にかける
。溶出速度は２０〜２５ ｍｅ ７時であり５ ｍＡず
つの両分上して集める。次のような溶出図が得られた（
２８０ｎｍでの透過率測定）。１．小さな初期ピーク（
画分１）、２．中間帯域（画分２）、６、急勾配の立上
り部を有する幅広の主ピーク（分画３）および４．あま
り急勾配でない降下部（分画４）。
個別に集めたＳ ｍｅずつの両分を抗０ＦｉＡ−標準抗
血清を用いた免疫拡散試験により、°またはＯＥＡ −
Ｒ工Ａで試験しそして合体して前述の集合画分とする。
血清を用いた免疫拡散試験により、°またはＯＥＡ −
Ｒ工Ａで試験しそして合体して前述の集合画分とする。
両分１はぼＡ（およびＮＯＡ ）を含有せず、両分２〜
４において０ＦｉＡ含量は順次減少し、そしてＮＯＡ含
量は画分６から増加する。
４において０ＦｉＡ含量は順次減少し、そしてＮＯＡ含
量は画分６から増加する。
所望により、両分２〜４を（個別にまたは合体して）第
２のクロマトグラフィーにかけることによりＯＥＡおよ
びＮｃＡｋ含有する個々の両分の分断ｔを向上させるこ
とができる。これにはセファクリル８２００カラム（２
，５Ｘ８０ ｃｍ、蛋白質分画範囲５ｘｉｏｓ〜２．５
Ｘ１’０５、カラム２）を用いる。これによって両分５
〜７が得られ、画分５は主として０１を含有し、画分６
および７は主としてＮＯＡを含有する。
２のクロマトグラフィーにかけることによりＯＥＡおよ
びＮｃＡｋ含有する個々の両分の分断ｔを向上させるこ
とができる。これにはセファクリル８２００カラム（２
，５Ｘ８０ ｃｍ、蛋白質分画範囲５ｘｉｏｓ〜２．５
Ｘ１’０５、カラム２）を用いる。これによって両分５
〜７が得られ、画分５は主として０１を含有し、画分６
および７は主としてＮＯＡを含有する。
両分２〜４または５〜７を濃縮／透析装置（コロジオン
外殻を有する濃縮容器、ザルトリウス）において緩衝液
（０，０２％のアジ化ナトリウムを含むｐＨ７，３のｄ
、ｏ２ｕ＞井酸ナトリウム緩衝液中の０．１５ Ｍ ｊ
Ｋ化ナナトリウム緩ＶｉＪ液２）に対して透析し、そし
てその透析液を０．５〜１．５ｒＪｔまで濃縮する。
外殻を有する濃縮容器、ザルトリウス）において緩衝液
（０，０２％のアジ化ナトリウムを含むｐＨ７，３のｄ
、ｏ２ｕ＞井酸ナトリウム緩衝液中の０．１５ Ｍ ｊ
Ｋ化ナナトリウム緩ＶｉＪ液２）に対して透析し、そし
てその透析液を０．５〜１．５ｒＪｔまで濃縮する。
゛アガロースカラムセファロース（ＳＥＰＨＡＲＯ８的
６Ｂ（ファルマシア社製品、カラム６）全カラム１の代
わりに用いても同じく良好な結果が得らノ１．る。
６Ｂ（ファルマシア社製品、カラム６）全カラム１の代
わりに用いても同じく良好な結果が得らノ１．る。
セファデックス（ＳＦ：ＰＨＡＤ１！：Ｘ■） Ｇ’２
Ｃｌ Ｏカラム（ファルマシア社製品、カラム４）を
カラノ、２０代わりに用いても比肩し得る公式（ｔが達
成される。
Ｃｌ Ｏカラム（ファルマシア社製品、カラム４）を
カラノ、２０代わりに用いても比肩し得る公式（ｔが達
成される。
２、 アフィニティークロマトグラフィー（免疫吸着）
免疫吸着カラムに必要とされる抗０ＥＡ−抗血清は、高
度に精製されたＯＥＡまたは予め精製された０ＴｉｉＡ
含有過塩素酸抽出物で兎を免疫することにより調製する
。吸収は凍結乾燥正常薄情（約１０り／−）および洗滌
されたヒ）’Ａ／Ｂ赤柚球を用いて（抗血清の補体除去
後）非反応性（免疫拡散、顕微鏡試験）となるまで行な
う。
度に精製されたＯＥＡまたは予め精製された０ＴｉｉＡ
含有過塩素酸抽出物で兎を免疫することにより調製する
。吸収は凍結乾燥正常薄情（約１０り／−）および洗滌
されたヒ）’Ａ／Ｂ赤柚球を用いて（抗血清の補体除去
後）非反応性（免疫拡散、顕微鏡試験）となるまで行な
う。
抗イ■清の吸収後、ＩｇＧ調製をＤＥＡＢ−セファセル
（ｓｍｐＨＡｏｍｂ■）カラム（ジエチルアミンエチル
セルロース）、ファルマシア社製品、カラム５）での連
続式陰イオン交換クロマトグラフィーにより行なう。ｐ
Ｈ８，０の０．０１Ｍ燐酸ナトリウム緩衝液（緩衝液６
）を出発緩衝液として用い、そしてｐＨ４，５の０．５
Ｍ燐酸す） ＩＪウム緩衝液（緩衝液４）を極限緩衝液
として用い、カラムを極めて凹型のｐＨおよびモル濃度
勾配で溶出する〔例えばウルトログラード（ＵＬＴＲＯ
ＧＲＡＤ）勾配混合器使用、 ＬＫＢ社製品〕。ＯＥＡ
反応性の純粋な抗ＯＦ’、Ａ−ＩｇＧ画分（初期画分、
両分８）を免疫拡散または免疫電気泳動試験によって選
別し、そして比較的遅い時点で溶出されるが他の遊白質
により汚染されているＯＢＡ反応性抗体を別個に集り、
そして免疫拡散または免疫電気泳動用抗廂清として用い
る（両分９）。
（ｓｍｐＨＡｏｍｂ■）カラム（ジエチルアミンエチル
セルロース）、ファルマシア社製品、カラム５）での連
続式陰イオン交換クロマトグラフィーにより行なう。ｐ
Ｈ８，０の０．０１Ｍ燐酸ナトリウム緩衝液（緩衝液６
）を出発緩衝液として用い、そしてｐＨ４，５の０．５
Ｍ燐酸す） ＩＪウム緩衝液（緩衝液４）を極限緩衝液
として用い、カラムを極めて凹型のｐＨおよびモル濃度
勾配で溶出する〔例えばウルトログラード（ＵＬＴＲＯ
ＧＲＡＤ）勾配混合器使用、 ＬＫＢ社製品〕。ＯＥＡ
反応性の純粋な抗ＯＦ’、Ａ−ＩｇＧ画分（初期画分、
両分８）を免疫拡散または免疫電気泳動試験によって選
別し、そして比較的遅い時点で溶出されるが他の遊白質
により汚染されているＯＢＡ反応性抗体を別個に集り、
そして免疫拡散または免疫電気泳動用抗廂清として用い
る（両分９）。
免疫吸着カラムを調製するために、カラム（１，５Ｘ２
０α）Ｋ１０〜２０りの架橋デキストラン（臭化シアン
で活性化されたセファロース４Ｂ。
０α）Ｋ１０〜２０りの架橋デキストラン（臭化シアン
で活性化されたセファロース４Ｂ。
ファルマシア社製品、カラム６）および１００〜２００
〜のカップリングされ、クロマトグラフィー精製された
抗０ＥＡ−抗而清の工ｇＧグロブリン（画分８）を装填
する。２〜４ゴの画分２〜４または５〜７をこのカラム
の上に排出させ、そ、してそのカラムを２〜４時間にわ
たって緩衝液２でゆっくりと（２０秒／滴）溶出した（
２８０ｎｍにおける透過率測定）。結合しない蛋白質を
完全に溶出後、抗体に固定された蛋白質を脱着用緩衝液
（緩衝液２に２．０ Ｍ ＫＳＯＮを加えたもの、ｐ）
！ ７．５、緩衝液５）で溶出する（１０秒／滴）。
〜のカップリングされ、クロマトグラフィー精製された
抗０ＥＡ−抗而清の工ｇＧグロブリン（画分８）を装填
する。２〜４ゴの画分２〜４または５〜７をこのカラム
の上に排出させ、そ、してそのカラムを２〜４時間にわ
たって緩衝液２でゆっくりと（２０秒／滴）溶出した（
２８０ｎｍにおける透過率測定）。結合しない蛋白質を
完全に溶出後、抗体に固定された蛋白質を脱着用緩衝液
（緩衝液２に２．０ Ｍ ＫＳＯＮを加えたもの、ｐ）
！ ７．５、緩衝液５）で溶出する（１０秒／滴）。
高く鋭い勾配が溶出ダイアダラムに現われ、そして更に
演出を続けると徐々に下降してプラトーとなるが、その
プラトーはＫＥＩＯＮが２８０ ｎｍにおける透過を妨
害するために出発時レベル（１００チ透過ライン）より
も有意に上方に位置する。
演出を続けると徐々に下降してプラトーとなるが、その
プラトーはＫＥＩＯＮが２８０ ｎｍにおける透過を妨
害するために出発時レベル（１００チ透過ライン）より
も有意に上方に位置する。
溶出の完了した後（プラトーラインは前記１００チライ
ンに平行となる）、カラムを緩衝液２で再生すると、溶
出ダイアダラム前記プラトーラインは再び透過率測定の
１００％出発時ラインにまで下降する。
ンに平行となる）、カラムを緩衝液２で再生すると、溶
出ダイアダラム前記プラトーラインは再び透過率測定の
１００％出発時ラインにまで下降する。
次の両分すなわち両分１０（結合しない蛋白質）、画分
１１（中間画分）および画分１２（結合した蛋白質）を
集める。画分１２は無傷のＯＦＡ。
１１（中間画分）および画分１２（結合した蛋白質）を
集める。画分１２は無傷のＯＦＡ。
ＯＥＡ断片およびＮＯＡを含有する。
両分１０は緩衝液２に対し透析する（コロジ３オン袋）
ことにより０．５〜１．０ ｍｅ ｆで濃縮しそしてａ
ｖ：ｐ、 ／ ＮＯＡを検査する。両分１１は捨てる。
ことにより０．５〜１．０ ｍｅ ｆで濃縮しそしてａ
ｖ：ｐ、 ／ ＮＯＡを検査する。両分１１は捨てる。
画分１２けｐＨ７，５の０．０５Ｍｆ２♀酸ナトリウム
緩衝液（緩衝液６）に対して透析しそしてその透析液を
５０〜２００μ２まで濠縮する。
緩衝液（緩衝液６）に対して透析しそしてその透析液を
５０〜２００μ２まで濠縮する。
カラム６に最初に正常の肺臓または肺臓組織抽出物（高
いＮＯＡ含量）を用いて吸収が行なわれ従ってＩＯＡに
対する抗体を含まない抗抑清の抗ＣＥΔ−ＩｇＧ抗体を
組込んだＪＰＪ合には、両分１２はもはやＮＯＡを含有
しない。
いＮＯＡ含量）を用いて吸収が行なわれ従ってＩＯＡに
対する抗体を含まない抗抑清の抗ＣＥΔ−ＩｇＧ抗体を
組込んだＪＰＪ合には、両分１２はもはやＮＯＡを含有
しない。
両分１２がカラ１・６における非特異的吸着の故に依然
と１−て而清蛋白質不純物（例えばアルブミン、α１−
アンチトリプシンまたはα１−Ｐ性糖蛋白質）を含−有
を−ている場合には、これらはヒトの薄情ｙ（白質また
は過塩素酸で抽出された薄情蛋白質に対する１ｇＧ抗体
をカップリングさせた別のカラムでの免疫吸着により除
くことができ、その場合最初に溶出される両分（画分１
ろ）有する。
と１−て而清蛋白質不純物（例えばアルブミン、α１−
アンチトリプシンまたはα１−Ｐ性糖蛋白質）を含−有
を−ている場合には、これらはヒトの薄情ｙ（白質また
は過塩素酸で抽出された薄情蛋白質に対する１ｇＧ抗体
をカップリングさせた別のカラムでの免疫吸着により除
くことができ、その場合最初に溶出される両分（画分１
ろ）有する。
以後の処理に用いる両分は無傷のＯＥＡおよびＮＯＡの
ほかに０ＩｉＪ断片をも含有する。
ほかに０ＩｉＪ断片をも含有する。
３、 高性能クロマトグラフィー
ＣＫＡ 、 ＮＯＡおよびｃＥＡ断片の最終的単離は、
ウルトローバック（Ｕｌｔｒｏ−Ｐａｃ） ＴＥ３Ｋ
Ｇ４０００８Ｗ高性能液体クロマトグラフィーカラＡ
（７，５Ｘ６００調、蛋白質分画範囲５，０００〜ｉ、
ｏｏｏ、ｏｏｏ、 ゛ＬＫＢ社、製品、カラム８）
を用いた高性能立体排除（ｓｔｅｒｉｃ ｅｘｃｌｕｓ
ｉＯｎ）クロマトグラシイ−により行なう。ＬＫＢ社の
高性能液体クロマトグラフィー装置〔マルチパーはツク
ス（Ｍｕｄｔ＞ −ｐｇＲｐｕｘ ）ポンプ、ＵＶ７ｏ
−光度計ユビコード（ＵＶ１００ＲＤ）’Ｓ 。
ウルトローバック（Ｕｌｔｒｏ−Ｐａｃ） ＴＥ３Ｋ
Ｇ４０００８Ｗ高性能液体クロマトグラフィーカラＡ
（７，５Ｘ６００調、蛋白質分画範囲５，０００〜ｉ、
ｏｏｏ、ｏｏｏ、 ゛ＬＫＢ社、製品、カラム８）
を用いた高性能立体排除（ｓｔｅｒｉｃ ｅｘｃｌｕｓ
ｉＯｎ）クロマトグラシイ−により行なう。ＬＫＢ社の
高性能液体クロマトグラフィー装置〔マルチパーはツク
ス（Ｍｕｄｔ＞ −ｐｇＲｐｕｘ ）ポンプ、ＵＶ７ｏ
−光度計ユビコード（ＵＶ１００ＲＤ）’Ｓ 。
フラクションコレクターウルトロジック（Ｕｌｔｒ。
ＲＡＯ） ■、２チャネル平床式記録計〕を用いた。
５０〜２５０μ℃の濃縮画分１２中の５０〜５００μ２
の蛋白質をカラムにかける。溶出は緩衝液６（脱気済み
％ ０．４５μｍで濾過済み）を用い６π１！／時の溶
出速度で全部で５時間の分離時間にわたって３５０μ２
画分ずつ集めて行なう。
の蛋白質をカラムにかける。溶出は緩衝液６（脱気済み
％ ０．４５μｍで濾過済み）を用い６π１！／時の溶
出速度で全部で５時間の分離時間にわたって３５０μ２
画分ずつ集めて行なう。
溶出ダイアグラム（感度を０．０１からｏ、ｉ’ｔで可
変として２８０ ｎｍにおける透過および吸収を測定）
には３個の主ピークがあり、その中間のピークは肩を有
する。すなわち少なくとも２つの亜両分よりなる。
変として２８０ ｎｍにおける透過および吸収を測定）
には３個の主ピークがあり、その中間のピークは肩を有
する。すなわち少なくとも２つの亜両分よりなる。
溶出ダイアグラムに従って次の両分を集める。
すなわち画分１４（主画分、 ０Ｔｉｌ！Ａ反応性）
、画分１５ （ＯＥＡ反応性）および画分１６ （ＮＯ
Ａ −反応性およびｑＥＡ反応性）。
、画分１５ （ＯＥＡ反応性）および画分１６ （ＮＯ
Ａ −反応性およびｑＥＡ反応性）。
この高性能液体クロマトグラフィーカラムを標準蛋白質
〔チログロブリン（分子量３３０１１００ ）〜α−乳
アルブミン（分子量１４，４００）］を用いて検定した
後、得られた両分の分子量は次のように見好＜もること
ができる。両分１４二２５ Ｄ、１１０．０−７１５０
．０．．００ Ｄ、画分１５ ： １５０，０００〜８
０．０ＯＯＤおよび画分１６ ： ８０．ＯＤＤ 〜４
０．０［１０：［１。
〔チログロブリン（分子量３３０１１００ ）〜α−乳
アルブミン（分子量１４，４００）］を用いて検定した
後、得られた両分の分子量は次のように見好＜もること
ができる。両分１４二２５ Ｄ、１１０．０−７１５０
．０．．００ Ｄ、画分１５ ： １５０，０００〜８
０．０ＯＯＤおよび画分１６ ： ８０．ＯＤＤ 〜４
０．０［１０：［１。
緩衝液６中１００〜２００ｎまで濃縮後、それら両分は
クロラミン−Ｔ法による放射性沃素化に直接用いること
ができる。それらはまたセファデックス０２５カラム（
２，ＯＸ ２ Ｑ ｃｎＩ、カラム９）で脱塩し次いで
凍結乾燥することもでき、 １００〜１，０００μグの
最終蛋白質量が得られる。
クロラミン−Ｔ法による放射性沃素化に直接用いること
ができる。それらはまたセファデックス０２５カラム（
２，ＯＸ ２ Ｑ ｃｎＩ、カラム９）で脱塩し次いで
凍結乾燥することもでき、 １００〜１，０００μグの
最終蛋白質量が得られる。
画分１４は高度に精製された無傷のＯｉを含有しそして
画分１６は無傷のＮＯＡを含有するのに対し、画分１５
け例えば免疫に用いることもできる免疫反応性０ＦｊＡ
断片を含有する０４、 ＯＥＡの沃素化 ２０パのｐＨ７，４の０．０５Ｍ燐酸ナトリウム緩衝液
（以下「緩衝液７」と呼ぶ）中の２０μ２のａｙを約１
．．５ ｍｏｉのＮａ ｌ ２５工（１０パ℃の０．５
Ｍ緩衝液７で緩衝されている）と混合し、そしてクロ
ンミンーＴ溶液（１θＤμ２の０．０５ Ｍ緩衝液７中
に２０１１１のクロラミン−Ｔを含む）を添加した後、
反応混合物を６０秒間攪拌する。次にメタ重亜硫ｒ’ｒ
２ナトリウム（５ｏｔｌｐ、のｏ、ｏｓＭ緩衝液７中１
ｃ２ａ’ｔｔｙのＮａ２８２０ｓ ′５ｒ：含む）を添
加することにより反（６を止める。史に６０秒間混合を
続け、そして安定化のために０．２ ｍｅの牛血清アル
ブミン溶液（１−の牛血清アルブミン、 ｏ、ｏｓＭ４
ｑ衝液７．０，１％のＮａ）Ｊｓ）を添加する。
画分１６は無傷のＮＯＡを含有するのに対し、画分１５
け例えば免疫に用いることもできる免疫反応性０ＦｊＡ
断片を含有する０４、 ＯＥＡの沃素化 ２０パのｐＨ７，４の０．０５Ｍ燐酸ナトリウム緩衝液
（以下「緩衝液７」と呼ぶ）中の２０μ２のａｙを約１
．．５ ｍｏｉのＮａ ｌ ２５工（１０パ℃の０．５
Ｍ緩衝液７で緩衝されている）と混合し、そしてクロ
ンミンーＴ溶液（１θＤμ２の０．０５ Ｍ緩衝液７中
に２０１１１のクロラミン−Ｔを含む）を添加した後、
反応混合物を６０秒間攪拌する。次にメタ重亜硫ｒ’ｒ
２ナトリウム（５ｏｔｌｐ、のｏ、ｏｓＭ緩衝液７中１
ｃ２ａ’ｔｔｙのＮａ２８２０ｓ ′５ｒ：含む）を添
加することにより反（６を止める。史に６０秒間混合を
続け、そして安定化のために０．２ ｍｅの牛血清アル
ブミン溶液（１−の牛血清アルブミン、 ｏ、ｏｓＭ４
ｑ衝液７．０，１％のＮａ）Ｊｓ）を添加する。
カラム８での高ｒト能クロマトグラフィーにより沃素化
度１．シ混合物を分離することによって１２５１−標識
０ＦｌｉＡを種層する。
度１．シ混合物を分離することによって１２５１−標識
０ＦｌｉＡを種層する。
溶出緩イ町７１’！−： ０．０５ Ｍ ｌ、、、、’
術液７．０．１係のＮａＮ３流車：０．１ｍｅ／分 比活性：約３０ ｍＯｉ ｉｒｑ 免疫反応性：約９０部 ３３７−
術液７．０．１係のＮａＮ３流車：０．１ｍｅ／分 比活性：約３０ ｍＯｉ ｉｒｑ 免疫反応性：約９０部 ３３７−
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １）癌胚抗原（ＯＥＡ）含有過塩素酸抽出物から、←）
ゲル済過により比較的高い分子量の蛋白質を分離し、（
功その溶出液からＣＩＡ抗原性を有する蛋白質を免疫吸
着により選択的に分取し、゛そして（０）これらを高性
能カラムを用いた液体クロマトグラフィーにより分離す
ることによって得ることのできる癌胚抗原。 ２）癌胚抗原（ＣＩ！ＥＡ）含有過塩素酸抽出物から、
（ａ）ケ゛ルｐ過により比較的高い分子量の蛋白質を分
離し、（ｂ）その溶出液から０ＦｉＡ抗原性を有する蛋
白質を免疫吸着により選択的に分取し、そして（、）こ
れらを高性能カラムを用いた液体クロマトグラフィーに
より分離することを特徴とする。 ＯＥＡ含有過塩素酸
抽出物からのａｇＡ単離方法。 ３）比較的高分子量の蛋白質を架橋デキストランでのケ
゛ル濾過により分離する前記特許請求の範囲第２項に記
載の方法。 ４）抗ＣＥＡ−抗崩清°の工（ｙ、ａ−グロブリンを組
み込んだカラムを免疫吸着に用いる前記特許請求の範囲
第２項または第３項に記載の方法。 ５）ＣＥＡを高性能カラムを用いた液体クロマトグラフ
ィーにより２５０．ＯＤＤ 〜１５０，０ＤＤ（７）分
子量範囲の両分として分離する前記特許請求の範囲第２
項〜第４項の一つまたはそれ以上に記載の方法。 ６）液体クロマトグラフィーのＩＡ含有溶出液を濃縮後
放射性沃素化に用いる前記特許請求の範囲第２項〜第５
項の一つまたはそれ以上に記載の方法。 ７）放射性沃素化をクロラミン−Ｔ法によシ行なう前記
特許請求の範Ｖｆ５第６項に記載の方法。 ８）前記特許請求の範囲第６項または第７項に記載の如
°＜シて得られる放射性沃素化ＣＥＡ０９）前記特許請
求の範囲第１項に記載のＯＥＡの診断剤調製のための使
用。 １０）前記特許請求の範囲第８項に記載の放射性沃素化
○ｌを含有する診断剤。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE32302991 | 1982-08-14 | ||
| DE19823230299 DE3230299A1 (de) | 1982-08-14 | 1982-08-14 | Carcinoembryonales antigen, verfahren zu seiner isolierung und seine verwendung |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS5950360A true JPS5950360A (ja) | 1984-03-23 |
Family
ID=6170888
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP58146758A Pending JPS5950360A (ja) | 1982-08-14 | 1983-08-12 | 癌胚抗原およびその単離方法 |
Country Status (13)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0102008A3 (ja) |
| JP (1) | JPS5950360A (ja) |
| AU (1) | AU1796083A (ja) |
| DD (1) | DD211714A5 (ja) |
| DE (1) | DE3230299A1 (ja) |
| DK (1) | DK368783A (ja) |
| ES (1) | ES524909A0 (ja) |
| FI (1) | FI832899A (ja) |
| GR (1) | GR78692B (ja) |
| IL (1) | IL69476A0 (ja) |
| NO (1) | NO832905L (ja) |
| PT (1) | PT77199B (ja) |
| ZA (1) | ZA835947B (ja) |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB8317022D0 (en) * | 1983-06-23 | 1983-07-27 | Erba Farmitalia | Adenocarcinoma related new antigenic determinants |
| US6013772A (en) * | 1986-08-13 | 2000-01-11 | Bayer Corporation | Antibody preparations specifically binding to unique determinants of CEA antigens or fragments thereof and use of the antibody preparations in immunoassays |
| US6949629B2 (en) | 2002-03-13 | 2005-09-27 | Aspenbio, Inc. | Methods for purifying selected CEA family member proteins |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3663684A (en) * | 1970-06-01 | 1972-05-16 | Hoffmann La Roche | Carcinoembryonic antigen and diagnostic method using radioactive iodine |
-
1982
- 1982-08-14 DE DE19823230299 patent/DE3230299A1/de not_active Withdrawn
-
1983
- 1983-08-11 DD DD83253901A patent/DD211714A5/de unknown
- 1983-08-11 FI FI832899A patent/FI832899A/fi not_active Application Discontinuation
- 1983-08-11 EP EP83107954A patent/EP0102008A3/de not_active Withdrawn
- 1983-08-12 ES ES524909A patent/ES524909A0/es active Granted
- 1983-08-12 DK DK368783A patent/DK368783A/da not_active Application Discontinuation
- 1983-08-12 GR GR72215A patent/GR78692B/el unknown
- 1983-08-12 AU AU17960/83A patent/AU1796083A/en not_active Abandoned
- 1983-08-12 IL IL69476A patent/IL69476A0/xx unknown
- 1983-08-12 ZA ZA835947A patent/ZA835947B/xx unknown
- 1983-08-12 PT PT77199A patent/PT77199B/pt unknown
- 1983-08-12 JP JP58146758A patent/JPS5950360A/ja active Pending
- 1983-08-12 NO NO832905A patent/NO832905L/no unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| NO832905L (no) | 1984-02-15 |
| DE3230299A1 (de) | 1984-02-16 |
| PT77199B (de) | 1986-03-27 |
| DD211714A5 (de) | 1984-07-25 |
| DK368783A (da) | 1984-02-15 |
| AU1796083A (en) | 1985-02-21 |
| FI832899A0 (fi) | 1983-08-11 |
| IL69476A0 (en) | 1983-11-30 |
| GR78692B (ja) | 1984-09-27 |
| ES8404187A1 (es) | 1984-05-01 |
| EP0102008A3 (de) | 1987-01-28 |
| FI832899A (fi) | 1984-02-15 |
| PT77199A (de) | 1983-09-01 |
| ZA835947B (en) | 1984-04-25 |
| DK368783D0 (da) | 1983-08-12 |
| EP0102008A2 (de) | 1984-03-07 |
| ES524909A0 (es) | 1984-05-01 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Brandtzaeg | Human secretory immunoglobulin M. An immunochemical and immunohistochemical study. | |
| Muldoon et al. | Steroid-protein interactions: XV. Isolation and characterization of corticosteroid-binding globulin from human plasma | |
| Ishizaka et al. | Induction of erythema-wheal reactions by soluble antigen-γE antibody complexes in humans | |
| US4383985A (en) | Breast cancer antigens | |
| Mannik et al. | Antibody-agarose immunoadsorbents: complete removal of classes of immunoglobulins from serum | |
| Harboe et al. | Antigenic heterogeneity of Waldenström type γM‐globulins | |
| JPH0428718B2 (ja) | ||
| US4500451A (en) | New protein PP13 extracted from human placental tissues and use thereof | |
| CA1265048A (en) | Protein which is characteristic of rheumatoid arthritis | |
| US4468345A (en) | Protein (PP17), a process for concentrating and isolating it and its use | |
| JPS6345400B2 (ja) | ||
| US4746731A (en) | Isolated tissue protein PP18 | |
| Harvey et al. | Demonstration of two molecular variants of carcinoembryonic antigen by concanavalin A sepharose affinity chromatography | |
| US4962187A (en) | Common antigen for colorectal and mucinous ovarian tumors and process for isolating the same | |
| US4592863A (en) | Protein PP20, a process for obtaining it, and its use | |
| Fahey et al. | Separation of 6.6 S and 18S gamma globulins with isohemagglutinin activity | |
| JPH0154360B2 (ja) | ||
| JPS5950360A (ja) | 癌胚抗原およびその単離方法 | |
| EP0267601B1 (en) | Anti-pci monoclonal antibody | |
| Aalberse et al. | The purification of human polyclonal IgE by immunosorption | |
| Rits et al. | Rat C3 conversion by rat anti‐2, 4, dinitrophenyl (DNP) hapten IgA immune precipitates | |
| US3979507A (en) | Diagnostic system for organ abnormalities | |
| Kosaka et al. | Hyperviscosity syndrome associated with an idiopathic monoclonal IgA-rheumatoid factor | |
| JPH0720994B2 (ja) | 組織蛋白質ｐｐ▲下２▼▲下１▼およびその取得法 | |
| Gorsky et al. | A radioactive antibody binding-inhibition assay, for the detection of cell-membrane related antigens in body fluids |