JPH0720994B2 - 組織蛋白質ｐｐ▲下２▼▲下１▼およびその取得法 - Google Patents

組織蛋白質ｐｐ▲下２▼▲下１▼およびその取得法

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JPH0720994B2
JPH0720994B2 JP60055778A JP5577885A JPH0720994B2 JP H0720994 B2 JPH0720994 B2 JP H0720994B2 JP 60055778 A JP60055778 A JP 60055778A JP 5577885 A JP5577885 A JP 5577885A JP H0720994 B2 JPH0720994 B2 JP H0720994B2
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Description

【発明の詳細な説明】 本発明はPP21として表示される組織蛋白質ならびにその
取得法に関する。PP21は組織および体液中におけるPP21
の検出および測定に役立てられうる抗血清の調製に使用
されうる。PP21の検出および測定は診断上重要である。
これらはある種の器官の疾病診断、疾病経過の監視また
は治療の制御に役立てられうる。
従来組織蛋白も含めた蛋白質は知られているが、下記PP
21について記載される性質を有するものは何ら知られて
いない。
本発明は下記ａ）〜ｆ）項すなわち、 ａ）β1−グロブリンの範囲内にある電気泳動移動度、 ｂ）等電点4.6±0.3、 ｃ）沈降係数S20,w3.2±0.2S、 ｄ）超遠心器中で測定された分子量52,900±6,200、 ｅ）吸光率Ｅ▲１％１cm▼（280nm）10.5±1.0および ｆ）炭水化物含量19.2±5.2g/100g（マンノース1.8±0.
4g/100g、ガラクトース4.3±1.0g/100g、フコース1.3±
0.3g/100g、Ｎ−アセチル−グルコサミン6.5±2.0g/100
g、Ｎ−アセチル−ノイラミン酸5.3±1.5g/100g） を特徴とする蛋白質PP21に関する。
PP21のアミノ酸組成を下記の表に示す。アミノ酸 基100当りの基数 変動係数 リジン 8.75 3.91 ヒスチジン 1.58 6.81 アルギニン 2.75 6.07 アスパラギン酸 9.59 1.97 スレオニン 3.73 7.22 セリン 7.43 5.95 グルタミン酸 8.16 5.15 プロリン 11.34 9.36 グリシン 7.01 1.25 アラニン 4.98 3.62 シスチン1/2 5.50 0.84 バリン 8.14 1.42 メチオニン 0.00 0.00 イソロイシン 4.86 2.78 ロイシン 5.42 10.34 チロシン 5.01 5.01 フエニルアラニン 3.56 1.00 トリプトフアン 2.12 17.65 この組織蛋白質の特徴的指標を以下に説明する。
電気泳動移動度はベツクマン・インスツルメント（Beck
man Instruments）社製のミクロゾーン（Microzone）R2
00型装置を用いアセチルセルロース箔〔サルトリウス
（Sartorius）社製品〕上pH8.6ジエチルバルビツール酸
ナトリウム緩衝液を使用して微修正で測定された。
等電点はストツクホルムのエル・ケー・ビー（LKB）社
製のカラム（440ml）を用いて測定された。アムフオリ
ン（Ampholin ）混合物はpH4.0〜6.0を有した。
沈降係数はベツクマン社製の分析用超遠心器〔スピンコ
（Spinco）装置Ｅ型〕中においてダブルセクターセル中
60,000rpmにてUVスキヤンナー技術を用いて280nmで測定
された。溶媒としては水が用いられた。蛋白質濃度は0.
2g/100mlであつた。
超遠心器中において分子量を測定するには、沈降平衡法
が用いられた。その際蛋白質の濃度は光学濃度（O.D.）
約1.0に調整された。溶媒としては0.2モル/lのNaClを含
有する0.05モル/lの燐酸塩緩衝液（pH6.8）が用いられ
た。測定は9,000rpmでとり行われた。記録は光電スキヤ
ンナーを使用してUV−光学装置を用い280nmで行われ
た。
吸光率の測定には物質を蒸留水中に1g/lの濃度まで溶解
させた。
炭水化物の分析は下記のようにして実施された。すなわ
ち配糖体結合を加水分解後遊離された中性糖をボレート
複合体として陰イオン交換体カラムで分離し〔ワイ・シ
ー・リー（Y.C.Lee）氏他の「アナル・バイオケム（Ana
l.Biochem。）」第27巻第567頁（1969年）参照〕、溶出
液中にビシンコニン酸第１銅試薬を混合することにより
着色させ〔ケー・モツパー（K.Mopper）およびエム・ギ
ンドラー（M.Gindler）氏の「アナル・バイオケム（Ana
l.Biochem.）」第56巻第440頁（1973年）参照〕そして
内部標準としてラムノースを使用して定量的に測定し
た。アミノ糖はニンヒドリンとのその反応により検出さ
れそして測定された。ノイラミン酸含量はウオレン（Wa
rren）氏による方法〔「メソツズ・イン・エンザイモロ
ジー（Methods in Enzymology）」第IV巻第463〜465頁
（1963年）参照〕を用いて測定された。
アミノ酸分析はエス・ムーア（S.Moore）氏等の「アナ
ル・ケム（Anal.Chem.）」第30巻第1185頁（1958年）に
記載された方法に従い、ベツクマン社（Firma Beckma
n）製の液体クロマトグラフイー用マルチクローム（Mul
tichrom）Ｂを使用して実施された。1/2−シスチンは蛋
白質を過蟻酸を用いて酸化し〔「アナル・ケム（Anal.C
hem.）」第30巻第1185頁（1958年）参照〕そして次にク
ロマトグラフイー〔「ジエー・バイオル・ケム（J.Bio
l.Chem.）」第238巻第235頁（1963年）参照〕した後シ
ステイン酸として測定された。トリプトフアン含量はエ
ツチ・エーデルホフ（H.Edelhoch）氏の「バイオケミス
トリ（Biochemistry）」第６巻第1948頁（1967年）記載
の方法により直接側光測定された。
種々の人間に器官からの抽出物を調査すると、PP21は胎
盤、胃、腸管（結腸、空腸）、膀胱ならにび脾臓中にお
いて検出できた。心臓、肺、肝臓、皮膚、腎臓、副腎お
よび子宮のような人間の他の器官からの抽出物はこの蛋
白質を含有しないかまたは痕跡しか含有しなかつた。
PP21を単離するにはこの蛋白質が存在する人間の器官が
用いられうる。これには特に多量に得られそしてこの蛋
白質を充分に高濃度に含有する成熟した人間の胎盤が適
当である。成熟した人間の胎盤（600g）から生理学的塩
溶液を用いて平均7mgのPP21が抽出されうる。
免疫化学的にPP21と同様の挙動をする抗原はその他に人
間の胎盤いわゆるMP2蛋白質の成分である。MP2蛋白質は
胎盤中において明らかに膜と会合している複雑な組成を
した組織蛋白質の群である。
これらは生理学的塩溶液で洗浄後胎盤の不溶性組織残留
物を可溶化剤例えば非イオン系洗浄剤トライトン（Trit
on ）Ｘ−100で処理することにより得られる。
それらの単離および特性化は1983年９月23日出願の西ド
イツ特許出願第33 34 405号に記載されている。MP2蛋白
質は200,000〜1,000,000以上の分子量を有する。それら
の構成にはそれらの抗原決定基が相異する少くとも合計
４個の異なる成分が関与している。これら成分のうちの
Ｃとして示される成分は本出願に記載される溶性組織蛋
白質PP21と免疫化学的に区別できない。
PP21は下記の性質を有し、これらの性質はそれらに対応
する措置を講ずることによりその単離法に使用されう
る。
（１）硫酸アンモニウムを用いてpH6〜８および30〜60
％飽和で水溶液から沈殿する。
（２）水溶性アクリジン塩基例えば２−エトキシ−6,9
−ジアミノアクリジン乳酸塩を用いてpH7〜９および塩
基濃度４〜8g/lで沈殿し、これに対し塩基濃度4g/lまた
はそれより小さい場合はpH6.0で全くまたはほとんど沈
殿しない。
（３）それが溶解されている希塩溶液例えば10〜20g/l
のNaCl溶液にエタノールを添加すると、pH7でアルコー
ル濃度200ml/lまでは大部分が上澄み液中に留まる。
（４）電気泳動による分離に際してpH7〜９でβ1−グロ
ブリンの範囲内に見出される。
（５）等電集束においてpH4.3〜4.9主要量はpH4.4〜4.8
で出現する。
（６）セフアデツクス（Sephadex） を用いるゲル過
において分子量40,000〜100,000を有する蛋白質と同様
の挙動をする。
（７）弱塩基性イオン交換体例えばDEAE−セルロースま
たはDEAE−セフアデツクスに伝導率約０〜2mSおよびpH
約７〜９で結合しそして比較的濃い塩溶液例えば10〜50
g/lのNaCl溶液で溶離されうる。
（８）水溶液から免疫吸着により富化されそして単離さ
れうる。
それゆえ本発明はまたこの蛋白質PP21を含有する器官か
ら希塩溶液または緩衝溶液を用いて得られた抽出物を下
記ａ）〜ｈ）項記載の処置、すなわち ａ）pH6〜８および30〜60％飽和における硫酸アンモニ
ウムを用いる蛋白質PP21の沈殿、 ｂ）pH6および塩基濃度4g/lまたはそれ以下における水
溶性アクリジン塩基を用いる随伴蛋白質の分離またはpH
7〜９および塩基濃度４〜8g/lにおける水溶性アクリジ
ン塩基を用いる蛋白質PP21の沈殿、 ｃ）pH7で200ml/lまでのエタノールを添加することによ
る随伴蛋白質の分離、 ｄ）β1−グロブリンの範囲内にある移動度を有する蛋
白フラクシヨンが得られる調製用ゾーン電気泳動、 ｅ）pH4.4〜4.8の蛋白質が得られる等電集束、 ｆ）分子量40,000〜100,000を有する蛋白質が得られる
ゲル過または限外過、 ｇ）弱塩基性イオン交換体への吸着および蛋白質PP21の
溶離、 ｈ）免疫吸着的富化、 の１種類またはそれ以上にかけることを特徴とするPP21
の取得または富化法にも関する。
硫酸アンモニウムと並んで勿論他の調製的生化学に慣用
に用いられる中性塩もPP21の沈殿に使用されうる。アク
リジン塩基と並んで蛋白質の分別について知られている
ようなキノリン塩基の水溶性誘導体も本発明による方法
の範囲内において使用されうる。その電気泳動上の挙
動、その等電点またはその分子量に相応して、前記した
性質を有する蛋白質を他の蛋白質から分離するのに適し
た他の措置もこの蛋白質の単離に用いられうる。この目
的には調製用電気泳動、等電集束、ゲル過、ゲルクロ
マトグラフイーまたは限外過なる種々の方法または弱
塩基性イオン交換体に結合しそしてそこから再び溶離さ
れうるPP21の性質も用いられうる。
PP21の富化または他の蛋白質からのこの蛋白質の分離を
もたらす前記した処置の好都合な組み合せによりPP21が
単離されうる。
それゆえ本発明はPP21富化のための個々の工程および富
化のための操作の組み合せにより得られるPP21の精製法
に関するものと見做される。
実施例に示されるPP21の富化および単離のための工程は
すべて決して強制的なものではなくそしてまたそこに記
載される順序で実施されねばならぬものでもない。
免疫吸着には人間の胎盤からの抽出物が直接使用でき
た。しかしながら胎盤抽出物中におけるPP21濃度が比較
的低いので、蛋白質の比較的大規模な分別に適する方
法、例えば中性塩または有機陽イオンを用いる分別沈殿
によりあるいはゲル過によりあるいはイオン交換クロ
マトグラフイーにより抽出物を予め分別して蛋白質PP21
をはじめに特異的に富化することが好都合である。免疫
吸着の段階も他の分離法例えば調製的電気泳動または等
電集束を用いることにより置換できる。
単離の最終段階におけるPP21の高度精製にはウルトロゲ
ル（Ultrogel ）AcA34でのゲル過および逆免疫吸着
が用いられうることが判明した。
例えば分離操作からのフラクシヨン中においてPP21を検
出および測定するには、前記したパラメーターと並んで
また免疫化学的方法も役立てられうる。何故ならPP21は
抗原性質を有するからである。
PP21の免疫化学的検出に適する抗血清は胎盤の膜と会合
した蛋白質MP2で家兎を免疫することによりはじめて得
られた。その際得られた抗血清はMP2蛋白質中の少くと
も４種類の異なる抗原成分（Ａ、Ｂ、ＣおよびＤ）に対
する抗体を含有した。成分Ｃに対する抗体はまた胎盤の
可溶性蛋白質すなわち本発明に記載の組織蛋白質PP21で
も沈殿することが見出された。
抗MP2家兎血清は一方では胎盤の可溶性蛋白質フラクシ
ヨン中のPP21の免疫化学的検出に、もう一方では可溶性
胎盤蛋白質フラクシヨンからのPP21の富化および単離の
ための免疫吸着剤の調製に用いられうる。
これは、MP2蛋白質の構成に関与している他の抗原成分
が可溶性胎盤蛋白質フラクシヨン中に全くかまたはあつ
ても痕跡にしか存在しないゆえ可能である。
本発明記載の方法により得られる精製されたPP21を用い
て知られた方法で動物を免疫することにより単一特異的
な抗血清が調製されうる。
PP21を免疫学的に検出するにはオウヒターロニイ（Ouch
terlony）によるゲル拡散技法〔シユルツエ（Schultz
e）およびヘアマンス（Heremans）両氏の「モレキユラ
ー・バイオロジー・オブ・ヒユーマン・プロテインズ
（Molecular Biology ef Human Proteins）」第１巻134
頁参照〕または必要な場合は、放射線免疫検定または酵
素免疫検定のようなより感度の良い方法も用いられう
る。
PP21の検出および測定は診断上重要である。PP21はある
種の器官中にのみ比較的高濃度に存在する組織蛋白質で
ある。それら器官の疾患においては、細胞破壊の増大に
より患者の血清中または他の体液中におけるこの組織蛋
白質PP21の濃度は正常値を越えて上昇しうる。それゆえ
体液中におけるPP21の検出および測定はそれら器官の疾
病の診断にとつてまたは疾病経過の監視のためおよび治
療制御のためのマーカーとして使用されうる。
それゆえPP21はPP21の検出および測定に役立てられうる
抗血清の調製にも使用されうる。
下記の実施例により本発明を説明する。
実施例１ Ａ）胎盤の抽出およびアクリジン誘導体および硫酸アン
モニウムを用いる抽出物の分別 冷凍された成熟した人間の胎盤1,000Kgを切断混合機中
で粉砕しそして4g/lの食塩溶液1,000lを用いて抽出し
た。この抽出液から遠心分離により組織残留物を分離し
たのち200ml/l酢酸溶液を用いてpH6.0に調整しそして攪
拌下に２−エトキシ−6.9−ジアミノアクリジン−ラク
テート（ヘキスト（Hoechst）社製品）の30g/l溶液200l
を加えた。沈殿を遠心分離により分離しそして捨てた。
上澄み液に10g/lのベントナイトＡ〔エルブスレー・ア
ンド・カンパニー（Erbslｈ ＆ Co.）、ガイゼンハ
イム（Geisenheim）／ライン（Rhein）〕を加えそして2
N NaOHの添加によりpH7.0に調整しそして過した。
液に攪拌下に300g/lの硫酸アンモニウムを徐々に加え
た。その際胎盤蛋白質PP21が他の蛋白質と一緒に沈殿し
た。沈殿を過した。以下にフラクシヨンＡとして表示
される湿つたペースト約12Kgが得られた。
Ｂ）セフアデツクス（Sephadex）Ｇ−150でのゲル過 フラクシヨンA500gを約400mlの水に溶解させそして１モ
ル/lのNaClおよび1g/lのNaN3を含有する0.1モル/lのト
リス−HCl緩衝液（pH8.0）（緩衝溶液II）で透析した。
蛋白質を含有する溶液をセフアデツクスＧ−150を充填
したカラム（20×100cm）に加えそしてゲル過した。
溶離には１モル/lのNaClおよび1g/lのNaN3を含有するpH
8の0.1モル/lトリス−HCl緩衝液（緩衝溶液II）が用い
られた。溶出液はオウヒターロニー（Ouchterlony）に
よるゲル拡散試験において家兎の抗MP2血清を用いPP21
について検査した。PP21を比較的大量に含有するフラク
シヨン（分子量40,000〜100,000）を集めた。続いて300
g/lの固形硫酸アンモニウムを添加することにより蛋白
質を沈殿させた。この沈殿を水に溶解させそして緩衝溶
液IIで透析した（フラクシヨンＢ）。
Ｃ）免疫吸着によるPP21の富化 １）家兎の抗MP2血清の調製 PP21に対する抗体の取得 MP2蛋白質（西ドイツ特許出願第33 34 405号参照）の高
分子フラクシヨン（沈降係数約20Sまたはそれ以上）を
用いて家兎を免疫することによりPP21に対する抗体を含
有する抗血清が得られた。免疫賦与はアジユバントとし
て水酸化アルミニウムを用い６週間にわたり遂行されそ
して下記のようにして実施された。高分子MP2フラクシ
ヨンを生理食塩溶液中に溶解させ（濃度0.06mg/3ml）そ
して水酸化アルミニウムを添加して攪拌して懸濁液とな
す。家兎に連続する５日間１匹当り懸濁液3ml中の蛋白
質0.06mgずつを静脈注射した。次に９日間の休止をおい
た。次に再び連続する５日間上記した量の抗原で免疫
し、再び９日間の休止をおきそして終りにもう一回連続
５日間各0.06mgずつの抗原を注射した。新たに７〜９日
間の待機時間をおいたのち動物から採血した。血液が凝
固したのち血餅から血清を振り分けて取得した。
２）免疫吸着剤の調製 家兎の抗MP2血清300mlを0.02モル/l燐酸塩緩衝液（pH7.
0）で透析しそして免疫グロブリンを分離するためDEAE
−セルロースでクロマトグラフイーした。その際免疫グ
ロブリンはDEAE−セルロースに妨げられずに横切つて移
動し、一方残りの血清蛋白質は大部分がDEAE−セルロー
スに吸着された。操作（蛋白質4.78g）における免疫グ
ロブリンフラクシヨンを次にブロムシアン59.9gを用い
て活性化したビード形の特別に精製されたアガロース
〔スウエーデン、ウプサラのフアルマシア（Pharmaci
a）社製品、セフアロース（Sepharose ）4B〕478gと反
応させそして担体に共有結合させた。この方法は例えば
アキセン（Axen）氏他により「ネーチユア（Nature）第
214巻第1302頁（1967年）に記載されている。この方法
で調製された免疫吸着剤を用いて蛋白質PP21をその溶液
特にPP21が富化された胎盤フラクシヨンから単離でき
た。
３）免疫吸着の実施 免疫吸着剤を緩衝溶液IIに懸濁させ、クロマトグラフイ
ー用カラム（5.5×20cm）に充填しそして緩衝溶液IIで
洗つた。次にフラクシヨンＢの半量をカラムに適用する
とその際PP21が免疫吸着的に結合された。このカラムを
緩衝溶液IIで充分に洗浄した。次に吸着された蛋白質を
６モル/lの尿素溶液約600mlを用いてカラムから溶離さ
せた。PP21を含有する溶出液を緩衝溶液IIで透析しそし
て限外過器を用いて約10mlまで濃縮した。収量は１回
の吸着当りPP21約10mgであつた。
カラム中の吸着剤はPP21の溶離後直ちに再び緩衝溶液II
で充分洗つた。これはPP21の免疫吸着的結合に再使用で
きた。
Ｄ）PP21の高度精製 免疫吸着により得られた蛋白質はなお非特異的に結合し
た血清蛋白質およびその他の胎盤組織蛋白質によりしば
しば汚染されていた。これら血清随伴蛋白質の大部分の
除去はウルトロゲル（Ultrogel ）AcA34でのゲル過
により行われうる。次に残る随伴蛋白質は逆のまたは負
の免疫吸着、すなわちなお、不純物として存在する蛋白
質に対する担体と結合した抗体を用いて除去された。そ
の際、実質上は血清免疫グロブリンおよび痕跡の胎盤組
織蛋白質MP1が問題であつた。
【図面の簡単な説明】
第1a図は寒天含有ゲル中の電界での分離後におけるPP21
と家兎の特異的な抗血清（Anti−PP21）との免疫学的反
応を示す図である〔コレラ菌（Vibrio Comma）から得ら
れる酵素ノイラミニダーゼ（ND）で処理するかまたは処
理せず〕。処理されてない天然蛋白質はβ1−グロブリ
ンの範囲に見出される。ノイラミン酸の除去によりこの
蛋白質は塩基性が強くなりそしてγ−グロブリンの範囲
に現われる。 第1b図はヒト血清（HS）に対する家兎の抗血清（Anti−
HS）とのその免疫反応により視認可能になされた血清蛋
白質の分離を示す図である。
フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ａ６１Ｋ 35/50 7431−4Ｃ 38/16 Ｃ０７Ｋ 1/00 8318−4Ｈ 1/22 8318−4Ｈ 1/26 8318−4Ｈ 1/30 8318−4Ｈ 1/34 8318−4Ｈ

Claims (3)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】ａ）β1−グロブリンの範囲内にある電気
    泳動移動度、 ｂ）等電点4.6±0.3、 ｃ）沈降係数S20,w3.2±0.2S、 ｄ）超遠心器中で測定された分子量52,900±6,200、 ｅ）吸光率Ｅ▲１％１cm▼（280nm）10.5±1.0および ｆ）炭水化物含量19.2±5.2g/100g（マンノース1.8±0.
    4g/100g、ガラクトース4.3±1.0g/100g、フコース1.3±
    0.3g/100g、Ｎ−アセチル−グルコサミン6.5±2.0g/100
    g、Ｎ−アセチル−ノイラミン酸5.3±1.5g/100g） を有することを特徴とする蛋白質PP21。
  2. 【請求項２】ａ）β1−グロブリンの範囲内にある電気
    泳動移動度、 ｂ）等電点4.6±0.3、 ｃ）沈降係数S20,w3.2±0.2S、 ｄ）超遠心器中で測定された分子量52,900±6,200、 ｅ）吸光率Ｅ▲１％１cm▼（280nm）10.5±1.0および ｆ）炭水化物含量19.2±5.2g/100g（マンノース1.8±0.
    4g/100g、ガラクトース4.3±1.0g/100g、フコース1.3±
    0.3g/100g、Ｎ−アセチル−グルコサミン6.5±2.0g/100
    g、Ｎ−アセチル−ノイラミン酸5.3±1.5g/100g） を有する蛋白質PP21を含有する器官好ましくは胎盤、
    胃、腸、膀胱または脾臓から希塩溶液または緩衝溶液を
    用いて得られた抽出物を、 ａ′）pH6〜８および30〜60％飽和における硫酸アンモ
    ニウムを用いる蛋白質PP21の沈殿、 ｂ′）pH6および塩基濃度4g/lまたはそれ以下における
    水溶性アクリジン塩基を用いる随伴蛋白質の分離または
    pH7〜９および塩基濃度４〜8g/lにおける水溶性アクリ
    ジン塩基を用いる蛋白質PP21の沈殿、 ｃ′）pH7で200ml/lまでのエタノールを添加することに
    よる随伴蛋白質の分離、 ｄ′）β1−グロブリンの範囲内にある移動度を有する
    蛋白フラクションが得られる調製用ゾーン電気泳動、 ｅ′）pH4.4〜4.8の蛋白質が得られる等電集束、 ｆ′）分子量40,000〜100,000を有する蛋白質が得られ
    るゲル濾過または限外濾過、 ｇ′）弱塩基性イオン交換体への吸着および蛋白質PP21
    の溶離、 ｈ′）免疫吸着的富化 の１種類またはそれ以上の処置に付すことを特徴とする
    前記PP21の取得または富化法。
  3. 【請求項３】ａ）β1−グロブリンの範囲内にある電気
    泳動移動度、 ｂ）等電点4.6±0.3、 ｃ）沈降係数S20,w3.2±0.2S、 ｄ）超遠心器中で測定された分子量52,900±6,200、 ｅ）吸光率Ｅ▲１％１cm▼（280nm）10.5±1.0および ｆ）炭水化物含量19.2±5.2g/100g（マンノース1.8±0.
    4g/100g、ガラクトース4.3±1.0g/100g、フコース1.3±
    0.3g/100g、Ｎ−アセチル−グルコサミン6.5±2.0g/100
    g、Ｎ−アセチル−ノイラミン酸5.3±1.5g/100g） を有する蛋白質PP21を含有する抗原。
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
USRE42761E1 (en) 1997-12-31 2011-09-27 Crossroads Systems, Inc. Storage router and method for providing virtual local storage

Families Citing this family (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH0689014B2 (ja) * 1986-01-21 1994-11-09 興和株式会社 トロンビン結合性物質およびその製法
DE3750664T2 (de) * 1986-07-15 1995-06-22 Kowa Co Throminbindende Substanz und Verfahren zu ihrer Herstellung.
US4937324A (en) * 1987-02-06 1990-06-26 Zymogenetics, Inc. Chromatographic purification of human proteins having anticoagulant and anti-inflammatory activity
GB2291059B (en) 1993-03-19 1997-09-24 North Sydney Area Health Serv Papp-a,its immunodetection and uses
US5968477A (en) 1994-01-24 1999-10-19 Neorx Corporation Radiolabeled annexin conjugates with hexose and a chelator
US20030220233A1 (en) 1994-01-24 2003-11-27 Neorx Corporation Radiolabeled annexins

Family Cites Families (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE2221261A1 (de) * 1972-04-29 1973-11-15 Behringwerke Ag Ap-glykoproteine und verfahren zu ihrer isolierung
DE2718325C2 (de) * 1977-04-25 1986-09-25 Behringwerke Ag, 3550 Marburg Leucinreiches 3,1-S-α↓2↓-Glykoprotein sowie dessen Verwendung
DE2720704C2 (de) * 1977-05-07 1986-09-25 Behringwerke Ag, 3550 Marburg Neues Glycoprotein, Verfahren zu seiner Herstellung und seine Verwendung
DE3228503A1 (de) * 1982-07-30 1984-02-02 Behringwerke Ag, 3550 Marburg Neues protein (pp(pfeil abwaerts)1(pfeil abwaerts)(pfeil abwaerts)7(pfeil abwaerts)), verfahren zu seiner anreicherung und gewinnung sowie seine verwendung
DE3315000A1 (de) * 1983-04-26 1984-10-31 Behringwerke Ag, 3550 Marburg Gewebeprotein pp(pfeil abwaerts)4(pfeil abwaerts), verfahren zu seiner gewinnung sowie seine verwendung
DE3334405A1 (de) * 1983-09-23 1985-04-04 Behringwerke Ag, 3550 Marburg Membranassoziierte proteine (mp(pfeil abwaerts)2(pfeil abwaerts)), verfahren zu ihrer gewinnung sowie ihre verwendung
DE3338480A1 (de) * 1983-10-22 1985-05-02 Behringwerke Ag, 3550 Marburg Neues protein pp(pfeil abwaerts)2(pfeil abwaerts)(pfeil abwaerts)0(pfeil abwaerts), verfahren zu seiner gewinnung sowie seine verwendung
DE3418888A1 (de) * 1984-05-21 1985-11-21 Behringwerke Ag, 3550 Marburg Gewebeprotein pp(pfeil abwaerts)1(pfeil abwaerts)(pfeil abwaerts)8(pfeil abwaerts), verfahren zu seiner gewinnung sowie seine verwendung

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
USRE42761E1 (en) 1997-12-31 2011-09-27 Crossroads Systems, Inc. Storage router and method for providing virtual local storage

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