JPS5942654B2 - 植物抽出物からの子宮−エバキユアント物質の単離方法 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 本発明はゾアパツル植物中に存在する生物学的に活性な
植物を単離及び精製する方法に関する。

特願昭５１−１０３２６２号（昭和５１年８月３１日出
願）において、有用な生物学的活性を有する精製された
化合物をもたらす、ゾアパツル（Ｚｏａｐａｔｌｅ）植
物の抽出物を単離及び精製する方法が記載されている。

この方法は上記粗製の原料を吸着剤物質のカラム中を通
してクロマトグラフィーにかけ、続いて有機重合体ゲル
のカラムを通してクロマトグラフィーにかけることを含
む。

本発明はヅアパツル植物中に存在する生物学的に活性な
物質を、硝酸銀で含浸したケイ酸を用いるクロマトグラ
フィーにより単離及び精製する方法に関する。

ゾアパツル植物はメキシコに野生する高さ約２ｍのかん
木である。

生物学的には、それはサーバンテス（Ｃｅｒｖａｎｔｅ
ｓ ）によってモンクノア佳メントサ（Ｍｏｎｔａｎｏ
ａ ｔｏｅｎｔ ０３ａ）として知られ。

キク科（Ｃｏｍｐｏｓ １ｔａｅ）、ヒマワリ族（Ｈｅ
ｌｉａｎｔ−ｈｅａｅ）に属する：他の変種はモンクノ
ア・フロリブンダ（Ｍｏｎｔａｎｏａ ｆｌｏｒｉｂｕ
ｎｄａ）である。

この植物については、「Ｌａｓ Ｐｌａｎｔａｓ Ｍｅ
ｄｉｃｉ−ｎａｌｅｓ ｄｅ ＭｅｘｉｃｏＪ、第３版
、エデイシオネス・ボタス（Ｅｄｉｃｉｏｎｅｓ Ｂｏ
ｔａｓ） （１９４４）に更に詳細に記述されている。

上記植物は茶又は他の粗製の水性調製物の形態で主とし
て人間に対する分娩誘発剤（ｌｏｂｏｒｉｎｄｕｃｅｒ
）又は月経誘発剤として数世紀間使用されてきた。

その使用は文献中に記載されているがはっきりした化学
的及び薬理学的研究はなされていない。

ゾアパツル植物の現在の民間での使用においては、使用
者は、一般に上記植物の葉を熱い飲料物を調製するのに
用いる方法と同一の方法で水と共に煮沸することにより
それから作られた苦い味の「茶」を飲んでいる。

女性は普通、月経期間のなくなった後即ち多分妊娠して
いる時にこれを飲むが、多くの明らかに妊娠している女
性は望ましからぬ妊娠を終らせるために上記の茶を飲む
ことも知られている。

この「茶」は明らかに複雑な物質の混合物を含有し、そ
の多くは所望の効果を引き起すには望ましくないか又は
不必要であるかも知れない。

類似した化学的及び物理的性質の多くの化合物及び除立
って似ていない性質を有する化合物が通常これらの物質
中に見出されそして一般に分離及び同定するのが困難で
ある。

前記同時係属中の出願には、ゾアパツル植物からの粗製
の抽出物を精製して、生物学的活性を有し且つ少なくと
も３種の化合物を含有する物質を得る方法が記載されて
いる。

この半精製物質は本発明のための出発物質である。

本発明によれば、上記半精製物質の硝酸銀を含浸したケ
イ酸上へのクロマトグラフィーにより子宮−エバキュア
ント（ｕ ｔｅｒｏ−ｅｖａｃｕａｎ ｔ ）性を有す
る２種類の化学的に異なる化合物が得られる。

子宮−エバキュアントとは、混血動物の子宮を収縮させ
るか又はその内容物を排出させる薬剤を意味する。

かかる薬剤は、一般に、月経を誘発せしめ、水胞形奇胎
（ｈｙｄａｔｉ ｆｏｒｍｍｏｌｅ）を排出させ、胎児
を排出又は再吸収（ｒｅｓｏｒｂ）せしめ、流産又は遅
れた分娩を誘発せしめ、及び子宮の内容物たとえば胎児
又は胎盤を排出すべき状態にするために用いられる。

本発明の方法を実施するに際しては、ケイ酸上に含浸さ
れた硝酸銀の量は約１％乃至約３０係まで変えることが
できる。

しかしながら、硝酸銀約１０％を含浸したケイ酸の混合
物を使用するのが好ましい。

硝酸銀とのケイ酸混合物は、適当な溶媒中の硝酸銀の溶
液とケイ酸のスラリーを先ずつくることにより製造する
ことができる。

使用し得る溶媒には水又は低級脂肪族アルカノール、た
とえばメタノール、エタノール又はプロパツール：低級
脂肪族ケトンたとえばアセトン、メチルエチルケトン、
ジエチルケトン及び同様なもの並びに低級脂肪族二ｌ−
ＩＪルたとえばアセトニドＩＪルが包含される。

ケイ酸は硝酸銀の溶液に少量ずつ分割して加える。

溶媒を得られるスラリーから、残留物がざらざらした粉
末性固体になるまで、成る適当な方法により除去する。

次いでこの物質を、好ましくは光を存在させないで数時
間乾燥する。

乾燥したケイ酸−硝酸銀混合物を使用して、たとえばカ
ラム、分取プレート（ｐｒｅｐａｒａｔｉｖｅ ｐｌａ
ｔｅ）、分取高性能液体クロマトグラフィー又は分取ガ
スクロマトグラフィーの如きクロマトグラフィーの保持
体をつくる。

説明の目的で本発明をカラムクロマ１〜グラフイーによ
り説明する。

しかしながら吸着剤に対して任意の適当な保持体を使用
し得ることが理解されよう。

本発明の方法を実施するに際し、ベンゼン、トルエン、
ジエチルエーテル、ヘキサン及び同様なものの如き適当
な溶媒中に溶解した半精製した子宮−エバキュアント物
質の試料を、硝酸銀で含浸したケイ酸のカラムに加える
。

カラムは乾燥状態で調製してもよいが、溶媒中でカラム
を調製するのが好ましい。

使用される溶媒れ一般に子宮−エバキュアン１〜物質を
溶解するために使用した溶媒である。

次いでカラムを溶媒で溶出しそしていくつかの両分を集
める。

カラムを溶出するのに使用し得る好適な溶媒には、メタ
ノール、エタノール、インプロパツール、アセトン及び
酢酸エチルの如き極性溶媒、クロロホルム、塩化メチレ
ン、ベンゼン、トルエン、ジエチルエーテル、ジイソプ
ロピルエーテル、ヘキサン、シクロヘキサン及び同様な
ものの如き比較的非極性の溶媒が包含される。

これらの溶媒のいろいろな組合せを所望により使用する
ことができる。

高い流速が所望される場合には、カラムは約１０ｐｓ
ｉまでの低い圧力をかけることにより溶出させることが
できる。

このことは、たとえば窒素の如き不活性ガスをカラムに
適用することにより達成することができる。

両分の組成は、硝酸銀を含浸したケイ酸を用いる薄層ク
ロマトグラフィー又はガスクロマトグラフィーにより監
視される。

上記の処理の結果、ガスクロマトグラフィー及びスペク
トル分析により証明される如く２種の化学的に異なる子
宮−エバキュアント化合物が得られる。

銀化合物として存在する少量の不純物を、精製された化
合物から除去することができ、その際ベンゼン又は塩化
メチレンの如き溶媒中の上記化合物の溶液を、たとえは
セライト又はケイ酸の短いカラム又はパッドを通して沢
過することにより行うことができる。

単離した物質の子宮エバキュアントの性質は子宮の収縮
の程度及び雌の動物における妊娠が中絶される度合を測
定することにより決定される。

精製した子宮−エバキュアント化合物は１．０■／ｋｙ
乃至約１００〜／ｋｙの範囲の投与量において投与され
る場合に有効である。

使用される実際の投与量は該化合物が投与される動物の
種に依存する。

化合物は製薬学的に許容し得る実施方法に従って調製さ
れた製剤において投与することができる。

好適な製剤には溶液剤、懸濁剤固体の投与形態が含まれ
る。

下記の記載は本発明をより特定的に説明するが、これら
は本発明を限定するものではなく説明するためのもので
あることを意図している。

出発物質の調製 ゾアパツルの葉（］、Ｏｋｇ）及び水（３０ガ泊ン）を
１００ガロンの水蒸気ジャケット付きステンレス鋼タン
クに加える。

混合物を周期的に撹拌しながら９８−１００°Ｃで２．
５時間加熱する。

熱い混合物をガーゼにより濾過して透明な暗色の茶（約
２５ガロン）を得る。

タンク中の固体の残留物を熱水（４力狛ン）で洗浄し、
濾過し、そして泥液を上記の得られた茶と一緒にする。

一緒にした水性抽出物を酢酸エチル（３０ガロン）で抽
出する。

混合物を激しく撹拌しそして沈降させる。

頂部のあわだった層をサケフオンで除去してエマルジョ
ンを破壊し、そしてできるだけ多くの酢酸エチルを分離
する。

追加的酢酸エチル（２０ガロン）を混合物に加えそして
上記の方法を繰り返す。

酢酸エチル抽出物を併せて真空下に５０℃で蒸発させる
。

残留物を熱い（７５−８０℃）ベンゼン（全量で１０１
）により３回抽出する。

ベンゼン抽出物を真空下に５０°Ｃで蒸発させ、そして
残留物を還流ヘキサン（全量でｌ）で３回洗浄する。

ヘキサンで洗浄した残留物をアセトン（２１）中に溶解
し、ヌチャー（Ｎｕｃｈａｒ） （１’Ｏｇ）を加え、
そして混合物を室温で１時間撹拌する。

濾過により木炭を除去し、そしてｒ液を真空下に３０℃
での蒸留により蒸発させて粗製の抽出物（６９ｇ）を得
る。

粗製の抽出物（５１）をエーテル（５１）中に溶解し、
そして得られる溶液を濾過しそして飽和重炭酸す１〜リ
ウム溶液（５００ｍｌ）で洗浄する。

エーテルを無水硫酸すｌ−ＩＪウム上で乾燥し、濾過し
そして乾固するまで濃縮して淡い黄色の油状物（４，４
，，６ｇ）を得る。

次いでこの油状物をクロロホルム（４００ｍｌ）中に溶
解し、そして溶液を、クロロホルム中に充填した中性ケ
イ酸２．５ ｋｇのカラム（４インチ×４フィート）に
加える。

カラムラクロロホルム、クロロホルム−イソプロパツー
ル混合物で溶出し、そして１１０の両分を集める。

この両分を真空中４０℃より低い温度で乾固するまで蒸
発させる。

カラムを下記の如ぐ溶出する両分の組成を、薄層クロマ
トグラフィー〔シリカケル、イソプロパノ−ルークロロ
ホルム（１：１２．５））及びガスクロマトグラフィー
・・・・・・３係０Ｖ１７（メチルシリコン：フェニル
シリコン（１：１））によりプログラムされた運転（１
５０−２５０°）を使用して監視する。

両分７８−８４を併せ、そして溶媒を真空中で除去して
半精製物質（５，１ｇ）の油状残留物が得られこのもの
はガスクロマトグラフィーにより示された少なくとも三
成分を含有する。

実施例 前記の如くして得られた半精製物質（５０５〜）をベン
ゼン（２ｍｌ）中に溶解し、そして溶液をベンゼン中で
調製した１０係硝酸銀で含浸されたケイ酸のカラム（２
５ｇ、２０ｍｍ ＩＤＸ６“）に加える。

カラムをベンゼン中におけるアセトンの割合を増加させ
て低圧の（５−７ｐｓｉ）窒素下に溶出する。

７１の両分（２５ｍｌ、各々）の総計を下記の如く併せ
る。

両分の組成は薄層クロマトグラフィー（２０％硝酸銀含
浸シリカＧＦ、アセトン：ベンゼン、５０：５０又はイ
ンプロパツール：アセトン：ＣＨＣｌ３．１：３０：５
０）により及びガスクロマトグラフィー−３％０Ｖ１７
（メチルシリコン：フェニルシリコン（１：１））カラ
ムによりプログラムされた運転（１５０−２５０°）を
使用して監視する。

画分 ３３−３９を蒸発させて下記のスペクトルデータ
を有する油状物（７３，３ｍｇ、１４．５％）を得る： １、Ｒ１（純粋）（Ｎｅａｔ） ２．９０μ、５．９６μ、及び６．２１μＮ、 Ｍ、
Ｒ，ＣＤＣ７３ ＭＳ ６．１１ ５，４８ ４．．２５ ４．．１３
３，５６２．１１ ２．０８ １．４８ １．１３
及び１．０１ ｐ ｐｍ。

両分 ４．６−５６を蒸発させて下記のスペクトルデー
タを有する油状物（１２２，７ｍｇ、２４．２％）を得
る。

１、Ｒ，（純粋） ２．９１μ 及び ５．８８μ
Ｎ、Ｍ、ＲＣＤＣ１３５，４１４，２６４，１５３，５
８μＭＳ ２．１８ １．７６ １，６７ １．１
５及び １．０４ｐｐｍ０ ＡｇＮＯ３−ケイ酸混合物の調製 ケイ酸（２５１）を、スラリーが得られるまで熱メタノ
ール（〜７００１ｒＬｌ）中の硝酸銀（２５ｇ）の溶液
に少量ずつ加えた。

溶媒を、残留物が自由流動性の粉末固体に変わるまで真
空中５０−６０°Ｃで回転蒸発器上でスラリーから除去
する。

この物質をトレー上に散布しそしてオーブン中１２０°
Ｃで１７時間光の不在下に乾燥した。

使用に先立ち、冷却し、乾燥した物質を光及び水分から
保護されたガラス容器中に貯蔵する。

雌の動物における子宮収縮を検出するために下記の一般
的方法を使用する。

方法 Ｉ 成熟した雌のニューシランドラビットをベンドパルビク
ール、ソジウムで麻酔しそして卵巣切除した（ｏｖａｒ
ｉ ｅｃｔｏｍｉ ｚｅｄ）。

１週間の回復期間後、連続して６日間１７β−エストラ
ジオール５μｇ／日Ｓ、Ｃで処理し続いて７日間連続し
てプロゲステロン１．０■／日Ｓ、Ｃで処理した。

ラビットの子宮及び卵管を、僅かに改良したハイルマ゛
ン他の方法（Ｆｅｒｔｉｌ ５ｔｅｒｉ１２３：２２１
−２２９）に従ってプロゲステロンの最後の投与の後７
２時間潅流する（ｐｅｒｆｕｓｅ）。

卵管及び子宮を５３μｌ／分の速度で潅流する。

子宮を、卵管端から子宮の内腔へと１．０ＣｒＩｌ伸び
ている管により潅流する。

子宮を子宮卵管結合部で結さつする。

他のカニユーレを膣中の小さな切開部を通して子宮中に
１．０函挿入して潅流液を集められるようにする。

ポリエチレングリコール２００、ポリエチレングリコー
ル４００、エタノール及び緩衝液を含有するビヒクルを
用いて、試験すべき物質を頚静脈を通して静脈内投与す
る。

カニユーレをＰ２３−Ｄｃスタサン（Ｓｔａｔｈａｎ）
変換器に連結し、これを順次グラスモデル５ポリグラフ
（Ｇｒａｓｓ Ｍｏｄｅｌ ５ｐｏｌｙｇｒａｐｈ）
に連結しそして子宮の収縮を測定する。

画分 ４６−５６から得られた化合物の静脈内投与は、
１．０−４．０■／ｋｙの投与量範囲で、７２時間プロ
ゲステロン投薬中断したラビツ’ｒ−（Ｐｒｏ−ｇｅｓ
ｔｅｒｏｎｅ ｗｉｔｈｄｒａｗｎ ｒａｂｂｉｔｓ）
における子宮収縮を誘発しそして卵管を弛緩させるのに
有効である。

画分３３−３９から得られた化合物は２５−４０１ｎ９
／ｋｇの投与範囲で投与する場合に有効である。

内移植（ｉｍｐｌａｎｔａｔ １ｏｎ）が起こった後の
妊娠の中絶を検出するために下記の一般的方法を使用す
る。

方法 ■ 成熟したハートレー系統の雌のモルモットを、かごの中
に腟栓（ｖａｇｉｎａｌ ｐｌｕｇ）（ｃｏｐｕｌａｔ
ｉｏｎｐｌｕｇ）が見られるまで雄と共に（−夫一妻的
に）連続的に一緒にしておいた。

この時期は妊娠の第１日であると考えられる。

５〜６匹の離解に、妊娠の第２２日用に方法Ｉに記載の
ビヒクルを用いて腹腔内に試験物質を与える。

モルモットを妊娠の２５日乃至４５日目の間に殺しそし
て再吸収又は吸収の証拠を検査する。

フラクション４６−５６から得られた物質の腹腔内投与
は２５−８５〜／ｋｙの投与量範囲で投与される場合に
妊娠を中絶するのに有効である。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ ゾアパツル植物から得られた子宮−エバキュアント
   物質を含有する抽出物を精製する方法において、半精製
   された子宮−エバキュアン１〜物質の混合物を水と非混
   和性の有機溶媒中に溶解し、得られる溶液を、硝酸銀で
   含浸されたケイ酸を用いてクロマトグラフィーにかけ、
   該ケイ酸を極性及び非極性の有機溶媒の混合物で溶出し
   、そして子宮−エバキュアン１へ物質を含有する両分を
   集める、ことを特徴とする上記精製方法。 ２ ゾアパツル植物がモンタノアトメントサ又はモンク
   ノアフロリブンダである特許請求の範囲第１項記載の方
   法。 ３ 水と非混和性の溶媒が、芳香族炭化水素、塩素化炭
   化水素又は脂肪族エーテルから選ばれたものである特許
   請求の範囲第１項記載の方法。 ４ 有機溶媒がベンゼン、クロロホルム及びエーテルか
   ら選はれたものである特許請求の範囲第３項記載の方法
   。