JPS5935593B2 - アンジオテンシン変換酵素の活性測定法 - Google Patents
アンジオテンシン変換酵素の活性測定法Info
- Publication number
- JPS5935593B2 JPS5935593B2 JP11176080A JP11176080A JPS5935593B2 JP S5935593 B2 JPS5935593 B2 JP S5935593B2 JP 11176080 A JP11176080 A JP 11176080A JP 11176080 A JP11176080 A JP 11176080A JP S5935593 B2 JPS5935593 B2 JP S5935593B2
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- JP
- Japan
- Prior art keywords
- converting enzyme
- angiotensin converting
- measurement method
- enzyme activity
- glycyl
- Prior art date
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- Expired
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- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Description
【発明の詳細な説明】
本発明はアンジオテンシン変換酵素の活性を測：遍ハー
ＮＨ−ＣＨ２−〃一ｐ（式中ＸはＯＨ、ＮＨ２またはＮ
（ＣＨ３）２を示す）とヒプリカーゼを用いることを特
徴とするものであり、さらに詳しくいえば本発明の方法
は上記一般式で示されるＸ−ヒプリルーＬ−グリシルー
Ｌ−グリシン、ヒプリカーゼ、ペルオキシダーゼ、４−
アミノアンチピリンおよび過酸化水素から構成される試
薬を、アンジオテンシン変換酵素を含有する液体に混合
し、生成されるキノンイミン色素の・濃度を比色法によ
つて測定する段階を含定する方法に関し、下記一般式で
示される合成基質Ｘ−ヒプリルーＬ−グリシルーＬ−グ
リシン一ＣＨ２−Ｃ−ＮＨ−ＣＨ２−ＣＯＯＨむことを
特徴とするものである。
ＮＨ−ＣＨ２−〃一ｐ（式中ＸはＯＨ、ＮＨ２またはＮ
（ＣＨ３）２を示す）とヒプリカーゼを用いることを特
徴とするものであり、さらに詳しくいえば本発明の方法
は上記一般式で示されるＸ−ヒプリルーＬ−グリシルー
Ｌ−グリシン、ヒプリカーゼ、ペルオキシダーゼ、４−
アミノアンチピリンおよび過酸化水素から構成される試
薬を、アンジオテンシン変換酵素を含有する液体に混合
し、生成されるキノンイミン色素の・濃度を比色法によ
つて測定する段階を含定する方法に関し、下記一般式で
示される合成基質Ｘ−ヒプリルーＬ−グリシルーＬ−グ
リシン一ＣＨ２−Ｃ−ＮＨ−ＣＨ２−ＣＯＯＨむことを
特徴とするものである。
アンジオテンシン変換酵素（以下ＡＣＥと略記する）
は生体内においてアンジオテンシン１に作用し、そのＣ
−末端のジペプチドすなわちＬ−ヒスチジルーＬ−ロイ
シンを遊離せしめて、血圧上昇作用のある活性型のアン
ジオテンシン■を生成する酵素である。
は生体内においてアンジオテンシン１に作用し、そのＣ
−末端のジペプチドすなわちＬ−ヒスチジルーＬ−ロイ
シンを遊離せしめて、血圧上昇作用のある活性型のアン
ジオテンシン■を生成する酵素である。
この酵素はレニン・アンジオテンシン系あるいはキニン
・カリクレーン系と関連して生体内で重要な役割をして
いるが、この酵素の血中でのレベルによつてサイコイド
ーシスの診断をすることができる。従つて上記ＡＣＥの
酵素活性を測定することは生理的あるいは臨床的に有意
義であり、従来その測定法として、（１）放射性同位元
素を用いる方法、（２）螢光を用いる方法、（３）液体
クロマトグラフイ一による方法などが提案されているが
、これらの方法は特殊な装置を必要とするために一般的
な方法として用いられていない。
・カリクレーン系と関連して生体内で重要な役割をして
いるが、この酵素の血中でのレベルによつてサイコイド
ーシスの診断をすることができる。従つて上記ＡＣＥの
酵素活性を測定することは生理的あるいは臨床的に有意
義であり、従来その測定法として、（１）放射性同位元
素を用いる方法、（２）螢光を用いる方法、（３）液体
クロマトグラフイ一による方法などが提案されているが
、これらの方法は特殊な装置を必要とするために一般的
な方法として用いられていない。
また上記の方法の他にガツシユマンらの提案した方法が
あり、この方法では合成基質ヒプリル一Ｌ−ヒスチジル
一Ｌ−ロイシンを用い、これをＡＣＥを含有している試
料（例えば血清、体液など）と所定時間反応せしめた後
、反応停止剤例えば塩酸を添加し、生成したヒプリル酸
を酢酸エチルで抽出し、酢酸エチルを蒸発して乾固した
後、蒸留水に溶解し、紫外部において吸光度を測定して
ヒプリル酸の濃度を求め、これから計算によつてＡＣＥ
の活性を求める。本発明は、上記の方法と異なり、ＡＣ
Ｅの活性を簡単に測定する方法を提供することを目的と
して開発されたものであつて、本発明の測定法の原理は
次の通りである。血清、体液などＡＣＥを含有する液体
に、既述した一般式で示されるＸ−ヒプリル一Ｌ−グリ
シル−Ｌ−グリシン（ＸはＨ，．ＯＨ，．ＮＨ２または
Ｎ（ＣＨ３）２を示す）を加えると、Ｘ−ヒプリル酸と
Ｌ−グリシル−Ｌ−グリシンを生じ、これにヒプリカー
ゼを加えると、Ｘ−ヒプリル酸からＸ−安息香酸とグリ
シンを生ずる。Ｘ一安息香酸は、ペルオキシダーゼの存
在下で、４−アミノアンチピリンおよびＨ２Ｏ２と反応
してキノンイミン色素を生じ、この色素の濃度を比色に
よつて測定し、上記ＡＣＥの活性を知ることができる。
従つて上記のＸ−ヒプリル一Ｌ−グリシル−Ｌ−グリシ
ン、ヒプリカーゼ、ペルオキシダーゼ、４−アミノアン
チピリンおよびＨ２Ｏ２を含有する溶液を試薬とし、こ
れをＡＣＥを含有する液体例えば血清に混合し、生成さ
れるキノンイミン色素の濃度を比色測定することによつ
てＡＣＥの活性を算出することができ、本発明の方法に
よれば極めて簡単にＡＣＥの活性を測定することができ
る。上記本発明の方法の原理を式をもつて示すと次の通
りである。
あり、この方法では合成基質ヒプリル一Ｌ−ヒスチジル
一Ｌ−ロイシンを用い、これをＡＣＥを含有している試
料（例えば血清、体液など）と所定時間反応せしめた後
、反応停止剤例えば塩酸を添加し、生成したヒプリル酸
を酢酸エチルで抽出し、酢酸エチルを蒸発して乾固した
後、蒸留水に溶解し、紫外部において吸光度を測定して
ヒプリル酸の濃度を求め、これから計算によつてＡＣＥ
の活性を求める。本発明は、上記の方法と異なり、ＡＣ
Ｅの活性を簡単に測定する方法を提供することを目的と
して開発されたものであつて、本発明の測定法の原理は
次の通りである。血清、体液などＡＣＥを含有する液体
に、既述した一般式で示されるＸ−ヒプリル一Ｌ−グリ
シル−Ｌ−グリシン（ＸはＨ，．ＯＨ，．ＮＨ２または
Ｎ（ＣＨ３）２を示す）を加えると、Ｘ−ヒプリル酸と
Ｌ−グリシル−Ｌ−グリシンを生じ、これにヒプリカー
ゼを加えると、Ｘ−ヒプリル酸からＸ−安息香酸とグリ
シンを生ずる。Ｘ一安息香酸は、ペルオキシダーゼの存
在下で、４−アミノアンチピリンおよびＨ２Ｏ２と反応
してキノンイミン色素を生じ、この色素の濃度を比色に
よつて測定し、上記ＡＣＥの活性を知ることができる。
従つて上記のＸ−ヒプリル一Ｌ−グリシル−Ｌ−グリシ
ン、ヒプリカーゼ、ペルオキシダーゼ、４−アミノアン
チピリンおよびＨ２Ｏ２を含有する溶液を試薬とし、こ
れをＡＣＥを含有する液体例えば血清に混合し、生成さ
れるキノンイミン色素の濃度を比色測定することによつ
てＡＣＥの活性を算出することができ、本発明の方法に
よれば極めて簡単にＡＣＥの活性を測定することができ
る。上記本発明の方法の原理を式をもつて示すと次の通
りである。
（上式中ｘは０Ｈ，．ＮＨ２またはＮ（ＣＨ３）２であ
る。
る。
）本発明において用いるｐ−ヒドロキシーヒプリル一Ｌ
−グリシル−Ｌ−グリシンは次のようにして合成するこ
とができる。
−グリシル−Ｌ−グリシンは次のようにして合成するこ
とができる。
ｐ−アセトキシ安息香酸１８ｒ２：．Ｎ−ヒドロキシス
クシンイミド１１ｒをジオキサン２００ｄに溶かし、氷
冷下でシンクロヘキシルカルボジイミド２０Ｐを加え、
１夜かきまぜをつつけて析出した沈殿を▲別し、▲液を
減圧下で留去して得た残渣にエーテルを加え、析出した
結晶をエーテルで洗浄し、乾燥する。
クシンイミド１１ｒをジオキサン２００ｄに溶かし、氷
冷下でシンクロヘキシルカルボジイミド２０Ｐを加え、
１夜かきまぜをつつけて析出した沈殿を▲別し、▲液を
減圧下で留去して得た残渣にエーテルを加え、析出した
結晶をエーテルで洗浄し、乾燥する。
このようにして得たｐ−アセトキシ安息香酸−スクシン
イミドエステル２２ｆをジメトキシエタン１５０ｄに溶
解し、これを、あらかじめグリシル−グリシル−グリシ
ン１８？と炭酸水素ナトリウム１４ｒを水１５０１！Ｌ
ｌに溶解した溶液に加え、１時間かきまぜを行なつた後
、▲過し、▲液に水３００ｄを加え、Ｏ℃に冷却し、１
夜放置した後、析出した結晶を▲別し、少量の冷水で洗
浄して乾燥する。この結晶すなわちｐ−アセトキシーヒ
プリル一Ｌ−グリシル−Ｌ−グリシン２０ｒをメタノー
ル５０ｍ１に溶解し、１Ｎ−ＮａＯＨ水溶液５０ａを加
え、１時間かきまぜた後、希塩酸を用いて溶液のＰＨを
２．５に調整し、減圧下で濃縮して水１００７！Ｌｌを
加え、０℃において２時間放置し、析出した結晶を▲別
し、水で洗浄した後、デシケーター中で乾燥し、ｐ−ヒ
ドロキシーヒプリル一Ｌ−グリシル−Ｌ−グリシンを得
る。下記に本発明の実施例を示す。例 ｐ−ヒドロキシーヒプリル一Ｌ−グリシル−Ｌ−グリシ
ン１２ｍＭ）ヒプリカーゼＩＵ）４−アミノアンチピリ
ン２ｍＭ）過酸化水素３ｍＭ）塩化ナトリウム０．５Ｍ
およびホウ酸０．ＩＭを含有する緩衝液（ ＰＨ８．３
）０．５ｍ１中に血清０．０５ｍ１を加え、温度３７℃
で２０分間反応せしめ、ついでこの反応液にエチレンジ
アミン四酢酸（ＥＤＴＡ）２ｍＭおよびペルオキシダー
ゼＩＵを含む反応停止液０．５ｍ１を加え、３７℃に１
分間放置した後、波長５０５ｎｍにおいて吸光度を測定
し、この値をＡとした。
イミドエステル２２ｆをジメトキシエタン１５０ｄに溶
解し、これを、あらかじめグリシル−グリシル−グリシ
ン１８？と炭酸水素ナトリウム１４ｒを水１５０１！Ｌ
ｌに溶解した溶液に加え、１時間かきまぜを行なつた後
、▲過し、▲液に水３００ｄを加え、Ｏ℃に冷却し、１
夜放置した後、析出した結晶を▲別し、少量の冷水で洗
浄して乾燥する。この結晶すなわちｐ−アセトキシーヒ
プリル一Ｌ−グリシル−Ｌ−グリシン２０ｒをメタノー
ル５０ｍ１に溶解し、１Ｎ−ＮａＯＨ水溶液５０ａを加
え、１時間かきまぜた後、希塩酸を用いて溶液のＰＨを
２．５に調整し、減圧下で濃縮して水１００７！Ｌｌを
加え、０℃において２時間放置し、析出した結晶を▲別
し、水で洗浄した後、デシケーター中で乾燥し、ｐ−ヒ
ドロキシーヒプリル一Ｌ−グリシル−Ｌ−グリシンを得
る。下記に本発明の実施例を示す。例 ｐ−ヒドロキシーヒプリル一Ｌ−グリシル−Ｌ−グリシ
ン１２ｍＭ）ヒプリカーゼＩＵ）４−アミノアンチピリ
ン２ｍＭ）過酸化水素３ｍＭ）塩化ナトリウム０．５Ｍ
およびホウ酸０．ＩＭを含有する緩衝液（ ＰＨ８．３
）０．５ｍ１中に血清０．０５ｍ１を加え、温度３７℃
で２０分間反応せしめ、ついでこの反応液にエチレンジ
アミン四酢酸（ＥＤＴＡ）２ｍＭおよびペルオキシダー
ゼＩＵを含む反応停止液０．５ｍ１を加え、３７℃に１
分間放置した後、波長５０５ｎｍにおいて吸光度を測定
し、この値をＡとした。
一方上記反応停止液０．５ｍ１に上記ホウ酸０．ＩＭ含
有緩衝液０．５ｍ１を加えた後、血清０．０５ｍ１を加
えて、ブランクテスト用試薬を調整し、この試薬を用い
て上記と同様にして吸光度を測定し、その値をＢとした
。
有緩衝液０．５ｍ１を加えた後、血清０．０５ｍ１を加
えて、ブランクテスト用試薬を調整し、この試薬を用い
て上記と同様にして吸光度を測定し、その値をＢとした
。
ＡＣＥの活性単位（ＭＵ）は次式によつて計算される。
測定を２０回繰返して得た結果は次の通りであつた。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １ 下記一般式で表わされるＸ−ヒプリル−Ｌ−グリシ
ル−Ｌ−グリシン、ヒプリカーゼ、ペルオキシダーゼ、
４−アミノアンチピリンおよび過酸化水素から構成させ
る試薬を、アンジオテンシン変換酵素を含有する液体に
混合し、生成されるキノンイミン色素の濃度を、比色法
によつて測定する段階を含むことを特徴とするアンジオ
テンシン変換酵素の活性測定法。 ▲数式、化学式、表等があります▼ 式中ＸはＯＨ、ＮＨ＿２またはＮ（ＣＨ＿３）＿２を示
す。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP11176080A JPS5935593B2 (ja) | 1980-08-15 | 1980-08-15 | アンジオテンシン変換酵素の活性測定法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP11176080A JPS5935593B2 (ja) | 1980-08-15 | 1980-08-15 | アンジオテンシン変換酵素の活性測定法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS5736996A JPS5736996A (ja) | 1982-02-27 |
| JPS5935593B2 true JPS5935593B2 (ja) | 1984-08-29 |
Family
ID=14569489
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP11176080A Expired JPS5935593B2 (ja) | 1980-08-15 | 1980-08-15 | アンジオテンシン変換酵素の活性測定法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS5935593B2 (ja) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5985299A (ja) * | 1982-11-05 | 1984-05-17 | Fujirebio Inc | カルボキシペプチダ−ゼａの活性測定方法 |
| JP4930718B2 (ja) * | 2007-09-13 | 2012-05-16 | セイコーエプソン株式会社 | 表示器支持装置、電子機器 |
-
1980
- 1980-08-15 JP JP11176080A patent/JPS5935593B2/ja not_active Expired
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS5736996A (ja) | 1982-02-27 |
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