JPS588839B2 - アンジオテンシン変換酵素の活性測定法 - Google Patents
アンジオテンシン変換酵素の活性測定法Info
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- JPS588839B2 JPS588839B2 JP12256179A JP12256179A JPS588839B2 JP S588839 B2 JPS588839 B2 JP S588839B2 JP 12256179 A JP12256179 A JP 12256179A JP 12256179 A JP12256179 A JP 12256179A JP S588839 B2 JPS588839 B2 JP S588839B2
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- angiotensin converting
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- measurement method
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Description
【発明の詳細な説明】
本発明はアンジオテンシン変換酵素の活性を測定する方
法に関し、下記式で示される合成基質ヒプリルーＬ−ヒ
スチジルーＬ一ロイシン とヒプリカーゼを用いることを特徴とするアンジオテン
シン変換酵素の活性測定法に関する。
法に関し、下記式で示される合成基質ヒプリルーＬ−ヒ
スチジルーＬ一ロイシン とヒプリカーゼを用いることを特徴とするアンジオテン
シン変換酵素の活性測定法に関する。
アンジオテンシン変換酵素（以下ＡＣＥと略記する）は
、生体内においてアンジオテノシンｌに作用し、Ｃ一末
端のジペプチドすなわちＬ−ヒスチジルーＬ一ロイシン
を遊離せしめて、血圧上昇作用のあるアンジオテンシン
■を生成する酵素である。
、生体内においてアンジオテノシンｌに作用し、Ｃ一末
端のジペプチドすなわちＬ−ヒスチジルーＬ一ロイシン
を遊離せしめて、血圧上昇作用のあるアンジオテンシン
■を生成する酵素である。
この酵素はレニン・アンジオテンシン系あるいはキニン
・カリクレイン系と関連して生体内で重要な役割をして
いるが、この酵素の血中でのレベルによってサルコイド
ーシスの診断をすることができる。
・カリクレイン系と関連して生体内で重要な役割をして
いるが、この酵素の血中でのレベルによってサルコイド
ーシスの診断をすることができる。
従って上記ＡＣＥの酵素活性を測定することは生理的あ
るいは臨床的に有意義であり、従来その測定法として、
（１）放射性同位元素を用いる方法、（２）螢光を用い
る方法、（３）液体クロマトグラフイーによる方法など
が提案されているが、これらの方法は特殊な装置を必要
とするために一般的な方法として用いられていない。
るいは臨床的に有意義であり、従来その測定法として、
（１）放射性同位元素を用いる方法、（２）螢光を用い
る方法、（３）液体クロマトグラフイーによる方法など
が提案されているが、これらの方法は特殊な装置を必要
とするために一般的な方法として用いられていない。
また上記の方法のほかに、カツシュマンらの提案した方
法があり、この方法では合成基質ヒプリルーＬ−ヒスチ
ジルーし一口イシンを用い、これをＡＣＢを含有してい
る試刺（例えば血清、体液など）と所定時間反応せしめ
た後、反応停止剤例えば塩酸を添加し、生成したヒプリ
ル酸を酢酸エチルで抽出し、酢酸エチルを蒸発して乾固
した後、蒸留水に溶解し、紫外線において吸光度を測定
してヒプリル酸の濃度を求め、これから計算によってＡ
ＣＥの活性を求める。
法があり、この方法では合成基質ヒプリルーＬ−ヒスチ
ジルーし一口イシンを用い、これをＡＣＢを含有してい
る試刺（例えば血清、体液など）と所定時間反応せしめ
た後、反応停止剤例えば塩酸を添加し、生成したヒプリ
ル酸を酢酸エチルで抽出し、酢酸エチルを蒸発して乾固
した後、蒸留水に溶解し、紫外線において吸光度を測定
してヒプリル酸の濃度を求め、これから計算によってＡ
ＣＥの活性を求める。
本発明は上記の方法と異なり、ＡＣＦの活性を簡単に測
定する方法を提供することを目的として開発されたもの
であって、本発明の測定法の原理は次の通りである。
定する方法を提供することを目的として開発されたもの
であって、本発明の測定法の原理は次の通りである。
血清、体液などＡＣＥを含有する液体に、既述した式で
示されるヒプリルーし−ヒスチジルーＬ２−ロイシンを
加えるとヒプリル酸とＬ−ヒスチジルーＬ一ロイシンを
生じ、これにヒプリカーゼを加えると、ヒプリル酸から
グリシンと安息香酸を生ずる。
示されるヒプリルーし−ヒスチジルーＬ２−ロイシンを
加えるとヒプリル酸とＬ−ヒスチジルーＬ一ロイシンを
生じ、これにヒプリカーゼを加えると、ヒプリル酸から
グリシンと安息香酸を生ずる。
グリシンはグリシンオキシダーゼの存在下で、過酸化水
素、アンモニアおよびグリオキサル酸を生じ、過酸化水
素は、ベルオキシダーゼの存在下で、４−アミノアンチ
ピリンおよびフェノールと反応してキノンイミン色素を
生じ、この色素の濃度を比色によって測定し、上記Ａｎ
の活性を知ることができる。
素、アンモニアおよびグリオキサル酸を生じ、過酸化水
素は、ベルオキシダーゼの存在下で、４−アミノアンチ
ピリンおよびフェノールと反応してキノンイミン色素を
生じ、この色素の濃度を比色によって測定し、上記Ａｎ
の活性を知ることができる。
従って上記のヒプリルーＬ−ヒスチジルーし一ロイシン
、ヒブリカカーゼ、グリシンオキシダーゼ、ベルオキシ
ダーゼ、４ーアミノアンチビリンおよびフェノールを含
有する溶液を試薬とし、これにＡＣＥを含有する液体例
えば血清を混合し、生成されるキノンイミン色素の濃度
を比色測定することによってＡＣＥの活性を算出するこ
とができ、本発明の方法によれば極めて簡単にＡＣＥの
活性を測定することができる。
、ヒブリカカーゼ、グリシンオキシダーゼ、ベルオキシ
ダーゼ、４ーアミノアンチビリンおよびフェノールを含
有する溶液を試薬とし、これにＡＣＥを含有する液体例
えば血清を混合し、生成されるキノンイミン色素の濃度
を比色測定することによってＡＣＥの活性を算出するこ
とができ、本発明の方法によれば極めて簡単にＡＣＥの
活性を測定することができる。
上記本発明の方法の原理を式をもって示すと次の通りで
ある。
ある。
上記においては（３）式によって生成されるＨ２Ｏ２を
利用する方法について述べたが、別法として（３）式に
おいて生成されるＮＨｓを利用し、グルタミン酸デヒド
ロゲナーゼの存在下で、α−ケトグルタル酸およびＮＡ
ＤＰＨ（ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドホスフ
ェートの還元型）とＮＨｓを反応せしめ、ＮＡＤＰＨの
減少を紫外線において測定し、ＡＣＥの活性を算出する
こともできるし、また（４）式の反応において４−アミ
ノアンチピリンとフェノールを用いる代りにロイコ染料
のような酸化還元型の色素を用い、酸化によって発色し
た色素の濃度を比色によって測定しＡＣＥの活性を知る
こともできる。
利用する方法について述べたが、別法として（３）式に
おいて生成されるＮＨｓを利用し、グルタミン酸デヒド
ロゲナーゼの存在下で、α−ケトグルタル酸およびＮＡ
ＤＰＨ（ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドホスフ
ェートの還元型）とＮＨｓを反応せしめ、ＮＡＤＰＨの
減少を紫外線において測定し、ＡＣＥの活性を算出する
こともできるし、また（４）式の反応において４−アミ
ノアンチピリンとフェノールを用いる代りにロイコ染料
のような酸化還元型の色素を用い、酸化によって発色し
た色素の濃度を比色によって測定しＡＣＥの活性を知る
こともできる。
下記に本発明の実施例を示す。
例
ピプリル−Ｌ−ヒスチジル−Ｌ−ロイシン５ｍＭ、４−
アミノアンチビリン０．５ｍＭ，フェノール１０ｍＭ、
ピブリカーゼ２Ｕ，グリシンオキシダーゼ３００Ｕ，ベ
ルオキシダーゼ０．５Ｕを含有する試薬（ｐＨ８．３）
０．２５ｍｌに対して血清０．０５ｍｌと稀釈用精製水
０．０４９ｍｌを加えて混合し、温度３７℃において波
長５０５ｎｍの光を用い、吸光度の変化すなわち反応速
度を測定した。
アミノアンチビリン０．５ｍＭ，フェノール１０ｍＭ、
ピブリカーゼ２Ｕ，グリシンオキシダーゼ３００Ｕ，ベ
ルオキシダーゼ０．５Ｕを含有する試薬（ｐＨ８．３）
０．２５ｍｌに対して血清０．０５ｍｌと稀釈用精製水
０．０４９ｍｌを加えて混合し、温度３７℃において波
長５０５ｎｍの光を用い、吸光度の変化すなわち反応速
度を測定した。
測定は遠心方式による自動分析機を用い、タイムラグを
５秒、反応時間を１０分とした。
５秒、反応時間を１０分とした。
ＡＣＥの活性単位ｍＵは、係数をインプットすると自動
的にプリントアウトされるのであるが、計算は次式によ
って行なわれる。
的にプリントアウトされるのであるが、計算は次式によ
って行なわれる。
２０回測定を行なつな結果は次に示す通りであった。
活性単位ｍＵ＝１５．０±０．４９（ｎｍｏｌ／ｍｌ／
ｍｉｎ） 変動係数ＣＶ＝３．０％ 本発明の方法と比較するために、上記例において用いた
血清と同じ血清を用い、次のようにしてカツシュマン方
法によって測定を行ない、下記に示す結果を得た。
ｍｉｎ） 変動係数ＣＶ＝３．０％ 本発明の方法と比較するために、上記例において用いた
血清と同じ血清を用い、次のようにしてカツシュマン方
法によって測定を行ない、下記に示す結果を得た。
ヒプリル−Ｌ−ヒスチジル−Ｌ−ロイシンを含むリン酸
緩衝液（ｐＨ＝８．３）０．２５ｍｌに血清０．１ｍｌ
を加えて混合し、３７℃において６０分間反応せしめた
後、塩酸を加えて反応を停止させ、反応生成物であるヒ
プリル酸を抽出するため酢酸エチル１．５ｍｌを加えて
ふりまぜ、上清を採取し、溶媒を除去した後、所定の精
製水で復元し、比色計によって波長２２８ｎｍの紫外線
の吸光度を測定し、ヒプリル酸の生成量を求め、ＡＣＥ
の活性単位ｍＵを計算した。
緩衝液（ｐＨ＝８．３）０．２５ｍｌに血清０．１ｍｌ
を加えて混合し、３７℃において６０分間反応せしめた
後、塩酸を加えて反応を停止させ、反応生成物であるヒ
プリル酸を抽出するため酢酸エチル１．５ｍｌを加えて
ふりまぜ、上清を採取し、溶媒を除去した後、所定の精
製水で復元し、比色計によって波長２２８ｎｍの紫外線
の吸光度を測定し、ヒプリル酸の生成量を求め、ＡＣＥ
の活性単位ｍＵを計算した。
２０回測定した結果は次の通りであった。
活性単位ｍＵ＝１５．８±０．９３（ｎｍｏｌ／ｍｌ／
ｍｉｎ） 変動係数ＣＶ＝５．８９％ 上記結果から判るように、本発明の方法はカツシュマン
の方法に比べてはるかに簡単であるが活性単位において
は、カツシュマンの方法の場合とほぼ同じ値が得られ、
変動係数においてはカツシュマンの方法の場合に比して
その値が小さく、再現性においてすぐれている。
ｍｉｎ） 変動係数ＣＶ＝５．８９％ 上記結果から判るように、本発明の方法はカツシュマン
の方法に比べてはるかに簡単であるが活性単位において
は、カツシュマンの方法の場合とほぼ同じ値が得られ、
変動係数においてはカツシュマンの方法の場合に比して
その値が小さく、再現性においてすぐれている。
Claims (1)
- １下記式で表わされるヒプリルーＬ−ヒスチジルーＬ一
ロイシン、ヒプリカーゼ、グリシンオキシダーゼ、ベル
オキシダーゼ、４−アミノアンチピリンおよびフェノー
ルから構成される試薬を、アンジオテンシン変換酵素を
含有する液体に混合し、生成されるキノンイミン色素の
濃度を、比色法によって測定する段階を含むことを特徴
とするアンジオテンシン変換酵素の活性測定法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP12256179A JPS588839B2 (ja) | 1979-09-26 | 1979-09-26 | アンジオテンシン変換酵素の活性測定法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP12256179A JPS588839B2 (ja) | 1979-09-26 | 1979-09-26 | アンジオテンシン変換酵素の活性測定法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS5648898A JPS5648898A (en) | 1981-05-02 |
| JPS588839B2 true JPS588839B2 (ja) | 1983-02-17 |
Family
ID=14838931
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP12256179A Expired JPS588839B2 (ja) | 1979-09-26 | 1979-09-26 | アンジオテンシン変換酵素の活性測定法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS588839B2 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS6393048U (ja) * | 1986-12-08 | 1988-06-16 |
Families Citing this family (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102087290A (zh) * | 2009-12-04 | 2011-06-08 | 苏州艾杰生物科技有限公司 | 甘氨酸的测定方法与甘氨酸测定试剂盒 |
| CN102298036A (zh) * | 2010-06-25 | 2011-12-28 | 苏州艾杰生物科技有限公司 | 甘氨酸的测定方法与甘氨酸测定试剂盒 |
| CN102298051A (zh) * | 2010-06-25 | 2011-12-28 | 苏州艾杰生物科技有限公司 | 甘氨酸的测定方法与甘氨酸测定试剂盒-9072 |
| CN102298041A (zh) * | 2010-06-25 | 2011-12-28 | 苏州艾杰生物科技有限公司 | 甘氨酸的测定方法与甘氨酸测定试剂盒 |
| CN102298040A (zh) * | 2010-06-25 | 2011-12-28 | 苏州艾杰生物科技有限公司 | 甘氨酸的测定方法与甘氨酸测定试剂盒 |
| CN102298042A (zh) * | 2010-06-25 | 2011-12-28 | 苏州艾杰生物科技有限公司 | 甘氨酸的测定方法与甘氨酸测定试剂盒 |
| CN102298045A (zh) * | 2010-06-25 | 2011-12-28 | 苏州艾杰生物科技有限公司 | 甘氨酸的测定方法与甘氨酸测定试剂盒 |
-
1979
- 1979-09-26 JP JP12256179A patent/JPS588839B2/ja not_active Expired
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS6393048U (ja) * | 1986-12-08 | 1988-06-16 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS5648898A (en) | 1981-05-02 |
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