JPS5923789B2 - 抗生物質ａ−２８０８６生産微生物 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、因子Ａ）因子Ｂおよび因子Ｄからなる抗生物
質Ａ−２８０８６複合体生産能を有する微生物に関する
。

抗生物質Ａ−２８０８６複合体およびその構成因子は、
抗細菌、抗糸状菌、抗ビールス、抗牛胸膜肺炎菌（抗Ｐ
ＰＬＯ）、抗コクシジウム、殺昆虫、および殺だに剤と
して有用であり、かつ反例動物類の飼料利用能率を増加
させるために有効である。

本発明はストレプトマイシス・オーレオフアシエンス（
Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓａｕｒｅｏｆａｃｉｅｎｓ）
ＮＲ−ＲＬ５７５８またはストレプトマイシス・オーレ
オフアシエンス（ Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓａｕｒｅ
ｏｆａｃｉｅｎｓ）ＮＲＲＬ８０９２などの抗生物質Ａ
−２８０８６複合体生産能を有するストレプトマイシス
・オーレオフアシエンスに属する微生物を提供するもの
である。

これらの菌株は、それらの利用可能な炭素源、窒素源お
よび無機塩類を含有する培養基中で培養し、該微生物に
よつて培地中に価値ある量の抗生物質活性が現われるま
で攪拌通気発酵条件下で培養することより、構成因子Ａ
ｌ因子Ｂおよび因子Ｄを含む抗生物質Ａ一２８０８６複
合体を生産する。抗生物質Ａ−２８０８６因子Ａは白色
の結晶状化合物（アセトン−水から結晶化）であり、低
級アルコール類、ジメチルホルムアミド、ジメチルスル
ホキシド、酢酸エチル、クロロホルム、アセトンおよび
ベンゼンに可溶であるが、ヘキサンには僅かに溶解し、
水には不溶である。

約９８〜１００℃で融解し、再凝固し、更に約１９５〜
２００℃で再融解する。この抗生物質は下記の理化学的
性状〔（ａ）〜―〕を持つている。（ａ）分子量７６４
（スペクトル測定法によつて測定）、（ｂ）元素分析値
（近似値〕、Ｃ，６６．６９％；Ｈ，９。

８５％；０，２３．１０％。

（ｃ）実験式：Ｃ４３Ｈ７２Ｏｌｌ（質量スペクトル分
析法により測定）、（ｄ） 〔α〕Ｄ２５：一５４゜（
Ｃ＝０．２，メタノール）、（ｅ）赤外線吸収スペクト
ル（クロロホルム中で測定）において下記の識別吸収帯
のピークが現れる。

２．８５，３．３４，５．８３，６．８２，７．２２，
７．５３（弱），７．７８（弱），８，７５（強），８
．９５（強），９．１５，９．５０（強），９．５５（
強），９．６０，９．８５，１０．１５，１０．４５，
１０．７０（弱）ミクロン。

（ｆ）紫外部吸収スペクトル（エタノール溶液）では２
００ｍμ以下に末端吸収を示すだけである。

（ｇ）核磁気共鳴スペクトル（重水素化クロロホルム中
で測定）の特徴：δ６．０１，４．２１，４．１１３．
９９３．８９３．８０３。６７３．６５３．５７３．５
５２．８３２．７６２．７４２．６８２．６６２．５８
２。

５６２．３０２．２２２．１７２．１０２．０５１．９
６１．９０１．８５１．７０１．６２１．６０１．４７
１．３９１．３１１．２５１．１８０．９５０．９３０
．９００．８８０．８５０．７７０．７５０．７３０．
６８０．６６ｐｐｍ．（ｈ） ８０％のジメチルホルム
アミド水中においてＰＫａ値７．９の滴定し得る基を有
する。

（１）以下のような格子間隔（単位：オングストローム
）を持つ特徴あるＸ一線粉末回析のパターン（Ｃｕ＋＋
照射、１．５４０５λ照射、ニツケルフイルタ一）を示
す。

）バチルス・ズブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓｓｕｂｔｉ
ｌｉｓ）ＡＴＣＣ６６３３株を検出生物とし、シリカゲ
ル上で、展開溶媒としてベンゼン一酢酸エチル（３：２
）の系で試みた薄層クロマトグラフ法で０．２４のＲｆ
値。

；）バチルス・ズブチリスＡＴＣＣ６６３３株を検出生
物として用いた下表のペーパークロマトグラフ系におい
て表に示すようなＲｆ値。

（１）塩類およびエステル誘導体の形成可能な酸基が１
つ存在する。

（ホ）エステル化の可能な水酸基が少くとも１個存在す
る。

本明細書において、（抗生物質Ａ−２８０８６）因子Ａ
なる用語は．前後の文章から矛盾のない限り、上記の因
子ＡおよびそのＣ２〜Ｃ６アシル・エステル誘導体なら
びにその生理学的に許容される塩類を包含するものとす
る。

抗生物質Ａ−２８０８６因子Ｂは白色の結晶状化合物（
アセトン一水から結晶化）で、低級アルコール類、ジメ
チルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、酢酸エチル
、クロロホルム、アセトンおよびベンゼンに溶解するが
、ヘキサンには僅かしか溶解せず、水には不溶である。

そして本物質は、下記（ａ）〜（自）の理化学的性状を
具えている。（ａ）約１５０〜１５３℃の融点、（ｂ）
分子量７６２（高分解能の質量分析器で測定）、（ｃ）
実験式Ｃ４３Ｈ７ＯＯｌｌ（高分解能の質量スペクトル
法により測定）、（１）赤外線吸収スペクトル（クロロ
ホルム中）において次の識別吸収帯のピークが出る：２
．８２，３．３０，５．７７，５．８５，６．８０，７
．２０，７．５０（弱），７．７２（弱），７．８０（
弱），８．５７（強），８．６８，８．９０（強）９．
１０，９．５０，９．８３（強），９．９０，１０．１
０，１０．１７（強），１０．４３（弱），１０．８０
（弱），１１．２０（弱），１１．３５（弱），１１．
７３（弱），１２．０３（弱）ミクロン。

（ｅ）紫外部吸収スペクトル（エタノール溶液）で１％
は２２０ｍμに最大吸収（Ｅ ＝１３７．５；１ｃｍ
ε＝１０，４７７）を示す。

（ｆ）核磁気共鳴スペクトル（重水素化クロロホルム中
）では次の特徴が見られる。

δ７，２０，７．０９，６．２６，６．１５，４．１９
，４．１２４．０５３．９５３．８９，３．７８３．６
２３．５９，３．５２３．４８，２．８１２．７３２．
６３２．５４２．５２，１．９９１．９１１．８４１．
７１１．６７．１．６４１．５５１．４３１．３３，１
．１８，１．１１０．９６０．９４０．９００．８７，
０．８４０．７７０．７４０．６８ｐｐｍ（自）バチル
ス・ズブチリスＡＴＣＣ６６３３を検出微生物として用
い、ベンゼン一酢酸エチル（３：２）の系で行つたシリ
カゲル上での薄層クロマトグラフイ一のＲｆ値は０，４
２である。

（ｈ）バチルス・ズブチリスＡＴＣＣ６６３３を検出微
生物として用いて行つたペーパクロマトグラフ系におけ
るＲｆ値は次の如くである。

（１）塩類およびエステル誘導体を形成しうる酸基が１
つ存在する。

（Ｊ）ケトン残基２個、 （ｋ）ヒドロキシル残基が少くとも１個存在する。

本明細書において、（抗生物質Ａ−２８０８６）因子Ｂ
なる用語は、前後の文章から矛盾のない限り、上記の因
子Ｂおよびその生理学的に許容される塩類を包含するも
のとする。抗生物質Ａ−２８０８６因子Ｄは白色の結晶
状の化合物（アセトン一水から結晶化）である。

このものはメタノール、エタノール、ジメチルホルムア
ミド、ジメチルスルホキシド、酢酸エチル、クロロホル
ム、アセトンおよびベンゼンに溶解するが、ヘキサンに
は僅かしか溶解せず、水には不溶である。本物質は９６
〜９８℃で融解し、かつ次記の（ａ）〜（ホ）の性状を
持つている。（ａ）分子量７７８（高分解能の質量スペ
クトル分析法で測定）（ｂ）元素分析値（近似値）Ｃ，
６７．５９％；Ｈ，９．３８％；０，２２．７７％６（
ｃ）実験式Ｃ４４Ｈ７４Ｏｌｌ（高分解能の質量スペク
トル法で測定）、（ｄ） 〔α〕甘 ：一５６゜（Ｃ＝
０．１、メタノール）．（ｅ）赤外線吸収スペクトル（
クロロホルム中で測定）では下記の吸収帯ピークが見ら
れる：２．８９，３．３９，３．４３，３．５０，５．
８８，６．９０，７，２７，１６０，７．８４，９．０
０，９．２６，９．６２，１０．３１，１０．５８，１
１．１０フ１１．４９ミクロン。

（ｆ） ９５％の含水エタノールで紫外部吸収は観察さ
れない。

（ｇ）クロロホルム中での核磁気共鳴スペクトルは次の
特徴がある、δ６．００，４．２０，４．１０，４．０
０３．９８，３．９２３．８６３．８３３．７９３．６
７，３．６４３．５７３．５４２．８８２．８１，２．
７１２．６２２．５８２．４８２．４３，２．３７２．
２９２．２１２．１５２．１０，２．０４１．９７１．
８９１．８３１．７６，１．６８１．６１１．５８１．
５５１．４７，１．３９１．３０１．２５１．１８０．
９５，０．９００．８８０．８４０，７４０．６８ｐｐ
ｍ０（ｈ） ８０％のジメチルホルムアミド水の中で、
８．６７のＰＫａ値を持つ一個の滴定し得る基を有する
。

（１）以下のような格子間隔（単位：オングストローム
）を有する特徴あるＸ一線粉末回折のパターン。

（Ｃｕ＋＋照射、１．５４０５λ、ニツケル・フイルタ
一）。（ｊ）バチルス・ズブチリスＡＴＣＣ６６３３を
検出生物として用い、下に示すようなシリカ．ゲル薄層
タロマトグラフ系に於て次の様なＲｆ値。

（ｋ）バチルス・ズブチリスＡＴＣＣ６６３３を検出生
物として用い、下に示すペーパークロマトグラフ系で求
められる次のようなＲｆ値。（１）塩類およびエステル
誘導体の形成可能な酸基が１個― エステル化の可能な
水酸基が少くとも１個本明細書において、（抗生物質Ａ
−２８０８６）因子Ｄなる用語は、前後の文章から矛盾
のない限り、上記の因子ＤおよびそのＣ２〜Ｃ６のアシ
ルエステル、ならびにその生理学的に許容される塩類を
包含するものとする。

今日、抗細菌剤は多数知られているが、なお弓続き新し
い進歩的な抗生物質が要求されている現状である。

現今の抗生物質療法上の一問題として、抗生物質の間で
病原生物に対する効力に差異があるという事実があげら
れる。またいま一つ、基準抗生物質に抵抗性を持つ生物
株の発生が問題とされている。さらに今一つの問題とな
るのは、罹病者が個別的に、特定の抗生物質から過敏症
や毒性などに基づいて、しばしば危険な副作用を受ける
という事実である。現今の療法にはこうした問題がある
ので、新抗生物質が要求され続けるのである。人間の病
気治療に有用な新抗生物質の要求に加えて、家畜病治療
の分野においてもまた進歩した抗生物質が必要となる。

重要な局面の一つとして、家禽や家畜類の生育を促進さ
せるのにも進歩した抗生物質が必要とされる。例えば、
生育の促進は病気を減少させることによつて、かつ飼料
利用効率を増加させることによつて達成される。家畜病
治療学上、さらに特に、家禽飼育産業上、経済的に重要
性を持つ疾患の一つが、原虫病コクシジウム症（ＣＯｃ
ｃｉｄｉＯｓｉｓ）であることは周知のところである。

コクシジウム症はエイメリア（Ｅｉｍｅｒｉａ）または
イソスポラ（ＩｓＯｓｐＯｒａ）の一種またに多種によ
る感染に起因する（概要は、米国アイオア州．アメス、
アイオア州立大学刊行，ピースタ一およびシユワルテ編
纂の“゜デイジージズ・オブ・ポウルトリ一゛第５版中
のルンドおよびフ了−を参照）。コクシジウム症に起因
する莫大な経済的損失ならびに既往の抗コクシジウム薬
剤の不利益性という見地から、さらに優れた抗コクシジ
ウム剤の探索が続けられている。

今一つ家畜業者に著しい経済的損失を与える疾患として
腸炎がある。

腸炎は幼鶏、豚、牛および羊に発生し、主として嫌気性
細菌、特にクロストリジウム・ペルフリンゲンス（ＣＯ
ｌｓｔｒｉｄｉｕｍｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）とビール
ス類に起因する。反動物における腸内中毒症、例えば羊
の過食症はクロストリジウム・ペルフリンゲンスの感染
で惹起される症状である。次に、牛のような反例動物の
生育を促進させることが獣医学での今一つの経済上の目
標とされている。

飼料の利用能率を高めることにより成育促進を達成する
ことが特に関心の的となつている。反剖動物の飼料の主
栄養物（炭水化物類）が利用される機構はよくしられて
いる。該動物の第１胃内の微生物が炭水化物類を分解し
て単糖類とし、更にこれらの単糖類をピルビン酸関連化
合物に変換するのである。ピルビン酸塩は微生物学的作
用により代謝されて酢酸、酪酸あるいはプロピオン酸な
ど、一括して揮発生脂肪酸（ＦＡ）として知られるもの
を生成する。更に詳細な論説についてはレング（フイリ
ツプソンら著：フイジオロジ一・オブ・ダイゼツシヨン
・アンド・メタポリズム・イン・ザ・ルミナント（英国
ニユーカツスル・アポン・タインオリエル出版社（１９
７０年）刊の４０８〜４１０頁））の論文がある。ＶＦ
Ａ利用の相対的効果は、フイードスタフス１９７１年６
月１９日号１９頁においてマツカラフにより、また、Ｊ
．Ａｎ．Ｓｃｉ．３３巻２８２頁（１９７１）において
エスケランド等により、また“ダイゼスチブ・フイジオ
ロジ一・アンド・ニユートリシヨン・オブ・ルミナンヅ
第２巻６２２〜６２５頁（１９７１）においてチヤーチ
等によつて議論されている。

酢酸塩や酪酸塩も利用されるが、プロピオン酸塩の利用
には更に重要な意義があり、その利用能率が著るしく低
下すると動物はケトン症をひき起す。従つて動物を刺激
して炭水化物から高い比率でプロピオン酸を生成させ、
これが動物の炭水化物利用効率を高めさせ、かつまたケ
トーシス症の影響を低減させるのである。抗生物質Ａ−
２８０８６因子Ａ，ＢおよびＤはポリエーテル型抗生物
質群の新しいメンバーである。

この群のメンバーの例としては、モ不ンシン・（米国特
許第３，５０１，５６８号）、ダイアネマイシン〔ハミ
ル，Ｒ．Ｌ．；ホエーン，Ｍ．Ｍ．；ピツテンガ一，Ｇ
．Ｅ．；チヤンバリン，Ｊ．；およびゴーマン，Ｍ，；
ジヤーナル・オブ・アンテイバイオテイクス，２２巻１
６１頁（１９６９）〕ニゲリシン〔Ｌ．Ｋ．スタインラ
ウフ，マルーピンカートンおよびＪ．Ｗ．チヤンバリン
，ビォヒミカ・ビオフイジカ・リサーチ・コムニケーシ
ヨン．３３巻２９頁（１９６８）〕、およびサリノマイ
シン〔日本特許公告４７−２５３９１，１９７２年１０
月２０日付、出願番号１９６２０／１９７１；Ｄｅｒｗ
ｅｎｔ屋．７６９６０Ｔ，米国特許第３，８５７，９４
８号、およびＨ．キナシ、Ｎ．オタケ、Ｈ．ヨネハラ、
Ｓ．サト一およびＹ．サイト一、テトラヘドロン・レタ
ーズ、４９巻４９５５〜４９５８頁（１９７３）〕が含
まれる。

発酵学ならびに本明細書に於て使用せられるような“抗
生物質複合体（ＡｎｔｉｂｉＯｔｉｃｃＯｍｐｌｅｘ）
″という用語は、化学でいう錯体を指すものではなく、
相伴つて生成される個々の抗生物質因子の混合体を指す
ものである。抗生物質複合体中に生成される個々の因子
の比率が、発酵条件によつて変ることは、抗生物質の発
酵生産に精通する者なら是認できるであろう。Ａ−２８
０８６抗生物質複合体は、新規な菌株ストレプトマイシ
ス・オーレオフアシエンスＮＲＲＬ５７５８を抗生物質
活性が程よく発生するまで攪拌通気発酵条件下で培養す
ることによつて生産される。

Ａ−２８０８６抗生物質複合体は、また、ストレプトマ
イシス・オーレオフアシエンスの今一つの新菌株ＮＲＲ
Ｌ８Ｏ９２を培養することによつても生産される。スト
レプトマイシス・オーレオフアシエンスＮＲＲＬ５７５
８またはストレプトマイシス・オーレフアシエンスＮＲ
ＲＬ８Ｏ９２の何れによつて生産された場合でも、Ａ一
２８０８６抗生物質複合体は発酵プロスならびに菌糸体
から極性のある有機溶媒で抽出される。抽出された抗生
物質混合物は溶媒を濃縮して分離され、濃縮物に過剰の
石油エーテルを加えて不純物を沈降させ、濾過し、かつ
その濾液を蒸発させると、Ａ−２８０８６抗生物質混合
物が得られる。該抗生物質混合物はカラム・クロマトグ
ラフ法によつてさらに精製され、かつ個々の因子に分離
される。Ａ−２８０８６化合物類は動植物体の病原とな
る生物の生育を阻止する。

この阻止活性の一つの局面が、Ａ−２８０８６化合物類
の抗コクシジウム作用である。このほか、Ａ−２８０８
６化合物類は抗細菌−、抗ビールス一、抗牛胸膜肺炎菌
（抗−ＰＰＬＯ）、殺昆虫−、殺だに一作用物質であり
、かつ反別動物類の飼料利用効率を増加させる作用があ
る。クロロホルム中でとつた赤外線吸収スペクトルを図
で表わすと次のようである。

Ａ−２８０８６因子類は構造上互に関連性がある。

発酵の期間中に、少くとも４種類の抗生物質因子が一緒
に生産され、混合物として得られる。因子類は相互に分
離され、かつ因子Ａ，ＢおよびＤは、以下に記載するよ
うな個々の化合物として単離される。Ａ−２８０８６因
子類の混合物は大ていの有機溶媒に可溶性であるが、水
には不溶である。以下の項目にＡ−２８０８６因子Ａ，
ＢおよびＤＯ物哩的ならびにスペクトル的性質を記載す
る。

抗生物質Ａ−２８０８６因子Ａはアセトン一水から結晶
する。Ａ−２８０８６因子Ａは約９８〜１００℃で融解
し、再凝固して約１９５〜２００℃で再び融解する。因
子Ａの元素分析結果として、次のような平均百分組成が
得られている：Ｃ，６６．６９％；Ｈ，９．８５％；０
，２３．１０％。因子Ａには実験式Ｃ４３Ｈ７２Ｏｌｌ
が提案されている。質量分析法によつて決定された、見
かけ上の分子量は７６４である。クロロホルム中におけ
る因子Ａの赤外線吸収スベクトルは付図（第１図）に示
した。

次のような吸収帯のピークが観察される。２．８５，３
．３４，５．８３，６．８２，７．２２，７．５３（弱
），７．７８（弱），８．７５（強），８，９５（強）
，９．１５，９．５０（強），９．５５（強），９．６
０，９．８５，１０．１５，１０．４５，１０．７０（
弱）ミクロン。

因子Ａのエタノール中における紫外線吸収スベクトルは
２２０ｍμ以下に末端吸収があられれるだけである。重
水素化クロロホルム中で測定したＡ− ２８０８６因子Ａの核磁気共鳴スペクトルに次の特徴が
ある：δ６．０１，４．２１，４．１１，３．９９，３
．８９，３．８０３．６７３．６５３．５７３．５５２
．８３２．７６２．７４２．６８２．６６２．５８２．
５６２．３０２．２２２．１７２．１０２．０５１．９
６１．９０１．８５１．７０１．６２１．６０１．４７
１．３９１．３１１．２５１．１８０．９５０．９３０
．９００．８８０．８５０．７７０．７５０．７３０．
６８０，６６ｐｐｎ１０ アセトン一水から結晶させた抗生物質Ａ−２８０８６因
子Ａは次のような特徴のＸ一線粉末回析パターンを示す
。

（Ｃｕ＋＋照射、１．５４０５λ、ニッケル・フイルタ
一、ｄは格子間隔（単位：オングストローム））。抗生
物質Ａ−２８０８６因子Ａの比旋光度は、温度２．５℃
で測定した時、−５４゜（Ｃ＝０．２、メタノール）で
、この比旋光度は数回の測定に基づく平均値である。

８０％ジメチルホルムアミド水中における因子Ａの電気
滴定法では、ＰＫａ値７．９を持つ滴定し得る基の存在
を示した。

抗生物質Ａ−２８０８６因子Ａは種々の有機溶媒（メタ
ノール、エタノール、ジメチルホルムアミド、ジメチル
スルホキシド、酢酸エチル、クロロホルム、アセトンお
よびベンゼン）に可溶性であるが、ヘキサンの様な極性
のない有機溶媒には難溶であり、かつ水には不溶である
。

抗生物質Ａ−２８０８６因子Ａには、塩類およびエステ
ル誘導体の形成可能な一個の酸基が存在し、かつエステ
ル化の可能な水酸基が少くとも一つ存在する。

以上に列挙した物理学的性状に基づいて、抗生物質Ａ−
２８０８６因子Ａの構造が提案されうるのである。しか
しながら、その構造決定は単に推定されたものであり、
ここに提出された構造が単に一つの実験に基づく仮説に
基いて表現されたものであると理解されるべきである。
Ａ一２８０８６因子Ａの推定構造は式１に示されている
。抗生物質Ａ−２８０８６因子Ｂは白色結晶状化合物（
アセトン一水より）で、約１５０〜１５３℃の融点を持
つ。高分解能の質量分析法によつて測定された様に、因
子Ｂは見かけ上７６２の分子量を持ち、Ｃ４３Ｈ７ＯＯ
ｌｌなる実験式が提示されている。

クロロホルム中での因子Ｂの赤外線スペクトルは付図の
第２図に示されており、次のような吸収帯のピークが観
察さる：２．８２、３．３０、５．７７、５．８５、６
．８０、７．２０１７．５０（弱）、７．７２（弱）、
７．８０（弱）、８．５７（強）、８．６８、８．９０
（強）、９．１０１９．５０１９．８３（強）、９．９
０、１０．１０１１０．１７（強）、１０．４３（弱）
、１０．８０（弱）、１１．２０（弱）、１１．３５（
弱）、１１．７３（弱）、１２．０３（弱）ミクロン。
因子Ｂのエタノール中での紫外部吸収スペクトルは２２
０ｍμ最大吸収（Ｅ１！Ｌ＝１３７．５；ε＝１０，４
７７）を示す。

Ａ−２８０８６因子Ｂの核磁気共鳴スペクトル（重水素
化クロロホルム中）では次の特徴が現われる。

δ７．２０、７．０９、６．２６、６．１５、４．１９
、４．１２、４。

０５、３．９５、３．８９、３．７８、３．６２、３．
５９、３．５２、３．４８、２．８１、２．７３、２．
６３、２．５４、２．５２、１．９９、１．９１、１．
８４、１．７１、１．６７、１．６４、１．５５、１．
４３、 １．３３、１．１８、１．１１、０．９６、０
．９４、０．９０、０．８７、０．８４、０．７７、０
．７７、０．７４、０．６８ｐｐｍ０抗生物質Ａ−２８
０８６因子Ｂは、例えばメタノール、エタノール、ジメ
チルホルムアミド、ジメチルスルホキサイド、酢酸エチ
ル、クロロホルム、アセトンおよびベンゼンのような種
々の有機溶媒に可溶性であるが、ヘキサンのような非極
性有機溶媒には極めて僅かしか溶解せず、また水には不
溶である。

Ａ−２８０８６抗生物質因子Ｂの化学構造は明らかにさ
れていないが、これまでに得られた物理的化学的データ
は、因子Ｂには唯一のカルボン酸残基、２個のケトン残
基および１個以上のヒドロキシル残基のあることを示し
ている。

抗生物質Ａ−２８０８６因子Ｄは、ストレプトマイシス
・オーレオフアシエンスＮＲＲＬ５７５８によつて生成
される時には微量因子である。

しかし、ストレプトマイシス・オーレオフアシエンスＮ
ＲＲＬ８Ｏ９２によつて生成される場合には、Ａ−２８
０８６因子Ｄは回収された抗生物質活性の１０％に達す
る。抗性物質Ａ−２８０８６因子Ｄは約９６〜９８℃の
融点をもつ白色結晶状物質（水−アセトンから）である
。

高分解能質量分析により測定されたようにその見かけの
分子量は７７８である。Ａ−２８０８６因子Ｄのナトリ
ウム塩の質量スベクトル中のピークの分子量は８００．
５０５０であると観察された（Ｃ４４Ｈ７３Ｏ，ｌＮａ
一８００．５０５０が計算値）。Ａ−２８０８６因子Ｄ
の遊離酸の質量スペクトル中、７７８に小さいピークが
７６０．５１１７（Ｃ４４Ｈ７２Ｏ，Ｏ７６Ｏ．５ｌ２
５が計算値）に大きいピークが観察された。遊離酸の質
量スペクトルに於けるｍ／Ｅ７６Ｏは分子イオンから水
を失つた結果である。従つて因子Ｄの遊離酸の分子イオ
ン組成はＣ４４Ｈ７４Ｏｌｌである０ Ａ−２８０８６因子Ｄの実験式としては、Ｃ４４Ｈ７４
Ｏｌｌが提示されている。

因子Ｄの元素分析の結果は次の百分組成を示す：Ｃ，６
７．５９（！）；Ｈ，９．３８％：０，２２．７７％０
Ｃ４４Ｈ７４０１１としての理論的百分率組成は、Ｃ，
６７．８７（！）；Ｈ，９．５ｌ％；０，２２．７７％
である。

Ａ−２８０８６因子Ｄの赤外線スペクトル（第８図）に
は次の観察される極大吸収が含まれている。

：２．８９、３．３９、３．４３、３．５０、５．８８
、６．９０、７，２７、７．６０、７．８４、９．００
１９．２６、９．６２、１０．３１、１０．５８、１１
．１０１１１．４９ミタロン。９５％含水エタノール中
でＡ−２８０８６因子Ｄは全然紫外部に吸収帯を示さな
い。

重水素化クロロホルム中でのＡ−２８０８６因子Ｄの核
磁気共鳴スペクトルは次の特性を示した：δ６．００１
４．２０１４．１０、４．００１３．９８、３．９２、
３．８６、３．８３、３．７９、３．６７、３．６４、
３．５７、３．５４、２．８８、２．８１、２．７１、
２．６２、２．５８、２．４８、２．４３、２．３７、
２．２９、２．２１、２．１５、２．１０、２．０４、
１．９７、１．８９、１．８３、１．７６、１．６８、
１．６１、１．５８、１．５５、１．４７、１．３９、
１．３０１１、２５、１．１８、０．９５、０．９０、
０．８８、０．８４、０．７４、０．６８ｐｐｍ０アセ
トン一水から結晶させた抗生物質Ａ一２８０８６因子Ｄ
は下記の特徴あるＸ一線粉末回折のパターンをもつてい
る（Ｃｕ＋＋照射、１．５４０５λ、ニツケル・フイル
タ一，ｄ＝格子間隔（オングストローム））。

温度２５℃で測定した時、抗生物質Ａ ２８Ｏ８６因子Ｄの比旋光度は−５６ ０．１、メタノール）である。

８０％の含水ジメチルホルムアミド中におけるＡ−２８
０８６因子Ｄの電気滴定の結果、ＰＫａ値８．６７を持
つ滴定し得る基の存在を認めた。

抗生物質Ａ−２８０８６因子Ｄは、メタノール、エタノ
ール、ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、
酢酸エチル、クロロホルム、アセトンならびにベンゼン
のような種々の有機溶媒に可溶である。Ａ−２８０８６
因子Ｄは、ヘキサンのような非極性の有機溶媒には極め
て微量しか溶解せず、水には不溶である。抗生物質Ａ−
２８０８６因子Ｄは塩類およびエステル誘導体類を形成
しうる１個の酸基を有し、かつエステル化のできる水酸
基を少くとも一個有する。

以上に列挙した物理学的性状に基いて、抗生物質Ａ−２
８０８６因子Ｄの構造が提案されている。

しかしながら、その構造決定は単に推定されたものであ
るから、ここに提示された構造が単に一つの実験に基づ
く仮説を表したものであることを理解されるべきである
。Ａ−２８０８６因子Ｄの推定構造は式に示される。〔
式中、Ｒ１がＣＨ３，Ｒ２がＣ２Ｈ５であるかもしくは
Ｒ１がＣ２Ｈ５，Ｒ２がＣＨ３である。

〕検出生物としてバスルス・ズブチリスＡＴＣＣ６６３
３を用いた時の種々の系の濾紙クロマトグラフイ一にお
ける抗生物質Ａ−２８０８６因子Ａ，ＢおよびＤのＲｆ
値を第１表に掲げる。第２表に、再び、バチルス・ズブ
チリス ＡＴＣＣ６６３３を検出生物として用い、シリカゲル（
層の厚さ０．２５ｍｍに予め塗布された平板、Ｆ−２５
４，Ｅ．メルタ社製品）上で行つた２種類の薄層クロマ
トグラフ系における抗生物質Ａ２８Ｏ８６因子Ａ，Ｂお
よびＤ（７）Ｒｆ値を掲げる。

Ａ−２８０８６−１と仮称した今一つの物質が抗生物質
Ａ−２８０８６複合体に伴つて副生する。このＡ−２８
０８６−１には微生物学的に活性はないが構造的にＡ−
２８０８６抗生物質類と関連性がある。Ａ−２８０８６
−１は白色結晶性化合物（アセトン・水より結晶化）で
あり、約１６０〜１６２℃の融点をもつている。Ａ−２
８０８６一と合成により調製したＡ−２８０８６因子Ａ
のメチルエステルのＮＭＲスペクトルや他の性質の比較
研究の結果、Ａ−２８０８６−１はＡ−２８０８６因子
Ａのメチルエステルないしは立体異性体のような近縁化
合物である証拠が得られた。Ａ−２８０８６−１は活性
のＡ−２８０８６抗生物質因子類に混ざつて最初に沈澱
してくるが、シリカゲル・クロマトグラフ法によつて他
から容易に分離される。溶出溶媒に酢酸エチルを用い、
検出にバニリン噴霧試薬（３％のバニリンのメタノール
溶液に、本液１００ｍ１につき濃Ｈ２ＳＯ４Ｏ．５ｍｌ
を添加したもの）を用いるシリカゲル薄層クロマトグラ
フ法での概略のＲｆ値は０．５３である。バニリンを噴
霧して加熱すると、Ａ−２８０８６−１は青色のスポツ
トを与えるが、一方Ａ−２８０８６抗生物質類は明るい
桃色のスポツトを与え、このものはすみやかに暗褐色昧
を帯びた青色に変る。

抗生物質Ａ−２８０８６因子Ａ，ＢおよびＤ１ならびに
本明細書記載の因子ＡおよびＤのアシル・エステル誘導
体は塩類を形成しうるものである。

生理学的に許容される塩は、薬理学的にも許容される塩
、すなわち、温血動物に対する全体としての毒性が、塩
でない状態と比較して増加しない塩を意味する。Ａ−２
８０８６因子ＡおよびＢの代表的な、かつ適切なアルカ
リ金属塩やアルカリ±類金属塩にはナトリウム、カリウ
ム、リチウム、セシウム、ルビジウム、バリウム、カル
シウム、およびマグネシウム塩等がある。またＡ２８Ｏ
８６因子ＡおよびＢの適切なアミン塩としてはアンモニ
ウム塩ならびに第四級のＣ１〜Ｃ４アルキルアンモニウ
ム塩およびヒドロキシ−Ｃ２〜Ｃ４−アルキルアンモニ
ウム塩等がある。

アミン塩の具体的な例としては、Ａ−２８０８６因子Ａ
およびＢが水酸化アンモニウム、メチルアミン、第２級
ブチルアミン、イソプロピルアミン、ジエチルアミン、
ジイソプロピルアミン、エタノールアミン、トリエチル
アミン、３−アミノ−１−プロパノール等と反応して生
成する塩がある。Ａ−２８０８６因子Ａ，ＢおよびＤ１
ならびに因子ＡおよびＢのアシル・エステル誘導体のア
ルカリ金属およびアルカリ土類金属のカチオン性塩類は
通常のカチオン性の塩類の公知の調製法によつて造られ
る。

例えば、遊離酸の状態の抗生物質因子ないしはエステル
誘導体を加温したメタノールまたはエタノールのような
適当な溶媒に溶解し、この溶液に、希望する無機塩基の
厳密な計算量をメタノール水に含ませた溶液を加えれば
よい。こうしてできた塩は、溶媒の濾過や蒸発のような
常套の方法によつて単離できる。有機アミン類との反応
で形成される塩も同様の方法で調製することができる。

例えば、アセトンのような適当な溶液中で、ガス状ない
しは液状のアミンを抗生物質因子の溶液に加え、溶媒と
過剰のアミンを蒸発除去すればよい。家畜病治療薬剤学
の技術でよく知られているように、抗生物質で家畜を治
療する場合、抗生物質の形状はあまり重要ではない。

大抵の場合には、動物の体内の状態によつて、薬物は服
用させられた状態以外の諸状態に変化する。

従つて、塩の形で服用させることは、治療法自体には意
義がない。

しかし経済上、便宜上、ならびに毒性の理由から塩の形
が選ばれることがある。Ａ−２８０８６因子Ａはアシル
・エステル誘導体を形成する。エステル化は任意のＣ２
〜Ｃ６一酸無水物ないしは酸クロライドで処理した時に
、Ａ−２８０８６因子Ａの水酸基群の一個所で起る。例
えば、このようなエステル類の典型的な調製法としては
Ａ−２８０８６因子Ａを、相手の酸の無水物と室温で反
応させる方法がある。これらのエステル誘導体はまた抗
生物質として有効であり、かつ飼料利用効率を増加させ
る薬剤としても有用である。以下の各項に、これらのＡ
−２８０８６因子Ａのアシル・エステル誘導体類の特性
を記述する。

Ａ−２８０８６因子Ａのアセチル・エステル誘導体は融
点約１００〜１０３℃の白色結晶性（アセトン一水より
）の物質である。Ａ−２８０８６因子Ａアセチル・エス
テル誘導体の実験式はＣ４５Ｈ７４Ｏｌ２で、分子量は
約８０７であるが、何れもＡ−２８０８６因子Ａに提案
された実験式を基礎にしたものである。因子Ａのアセチ
ル・エステル誘導体の元素分析値を示す。計算値、Ｃ４
５Ｈ７４Ｃｌ２として、Ｃ，６６．９７Ｏｌ）；Ｈ，９
．２４％；０，２３．７９％、実測値、Ｃ，６７．６７
％：Ｈ，８．７ｌ％；０，２３．１３０！）。

Ａ−２８０８６因子Ａのアセチル・エステル誘導体のク
ロロホルム中でとつた赤外線吸収スペクトルを第３図に
示した。下記の極大吸収帯が観察される。２．８５、３
．３６、３．３８（強）、５．８０、６．８３、７．２
５、７．５２（強）、７．６０（弱）、７．８０（強）
、８．４５（強）、８．８０（強）、８．９５（強）、
９．１０（強）、９．２０、９．６３、９．８０（強）
、１０．１２（弱）、１０．２５（弱）、１０．５０ミ
クロン。

エタノール中でのＡ−２８０８６因子Ａアセチルエステ
ルの紫外線吸収スペクトルでは末端吸収だけが観察され
た。

８０％の含水ジメチルホルムアミド中におけるＡ−２８
０８６因子Ａアセチルエステル誘導体の電気滴定の結果
８．５のＰＫａ値を持つ滴定し得る基の存在が示された
。

Ａ−２８０８６因子Ａのプロピオニルエステル誘導体は
、融点約９６〜９８℃の白色結晶性（アセトン一水から
）の化合物である。

Ａ−２８０８６因子のプロピオン酸エステル誘導体は、
Ａ２８Ｏ８゛６因子Ａについて提案された実験式に基く
と、その実験式はＣ４６Ｈ７６Ｏｌ２で、分子量は約８
２１である。

因子Ａのプロピオン酸エステル誘導体の元素分析値の結
果から下記の百分率組成の値が得られた。計算値、Ｃ４
６Ｈ７６Ｏ，２として、Ｃ，６７．２９％；Ｈ，９．３
３（Ｆｆ）；０，２３，３８％、実測値、Ｃ，６６．Ｏ
６Ｏｌ）；Ｈ，９．ｌ７％；０，２３．４１％０Ａ−２
８０８６因子Ａのプロピオン酸エステル誘導体のクロロ
ホルム中における赤外線吸収スベクトルを第４図に示し
た。

下記の極大吸収が観察された。２．８５、３．３３、３
．３８（強）、３．４５（強）、５．７５（強）、５．
８２、６．８１、７．２２、７．３０（強）、７．５０
（弱）、７．６０（弱）、７．８０１８．４３、８．７
５（強）、８．９０、９．０５、９．１５（強）、９．
５０（強）、９．６３、９．８３（弱）、１０．０５（
強）、１０．１３、１０．２０（強）、１０．４５、１
０．６８ミクロン。

エタノール中でのＡ−２８０８６因子Ａのプロピオン酸
エステル誘導体の紫外線吸収スペクトルでは末端吸収だ
けが観察された。抗生物質Ａ−２８０８６因子Ａの酪酸
エステル誘導体は、融点約９６〜９８℃の白色結晶性（
アセトン一水から）の化合物である。

Ａ−２８０８６因子Ａの酪酸エステル誘導体は、Ａ−２
８０８６因子Ａについて提案された実験式から推察され
るように、その実験式はＣ４７Ｈ７８Ｏｌ２で、分子量
は約８３５であり、Ｃ，６７，６Ｏ％；ＨＪ９．４ｌ％
；０，２２．９９％の近似的組成を持つている。Ａ−２
８０８６因子Ａの酪酸エステル誘導体のクロロホルム中
における赤外線吸収スペクトルを第５図に示した。下記
の極大吸収が観察された。２．８９、３．４０、３．４
５、３．５１、５．８５、５．９２（強）、５．９７（
強）、６．９０１７．３０１７．８４（弱）、８．５５
、８．８５（弱）、９．０１（強）、９．２６、９．７
６、９，９５、１０．３１、１０．６４ミクロン。

抗生物質Ａ−２８０８６因子Ａのきつそう酸エステル誘
導体は、約１７３〜１７５℃の融点を持つ白色結晶性化
合物（アセトン一水より）である。

Ａ−２８０８６因子Ａのきつそう酸エステル誘導体は、
Ａ−２８０８６因子Ａの実験式から推察した実験式は、
Ｃ４８Ｈ８ＯＯ，２、分子量約８４９でＣ，６７．８９
％；Ｈ，９．５Ｏ（ｆ／）；０，２２．６１％なる近似
元素組成を持つている。Ａ−２８０８６因子Ａのきつそ
う酸エステル誘導体のクロロホルム中における赤外線吸
収スペクトルを第６図に示した。

下記の極大吸収が観察された。２．９０、３．４０、３
，４５、３．５１、５．８７、５．９２（強）、５．９
９（強）、６．９１、７．３０、７．６９（弱）、７，
８７（弱）、８．１６、８．５８、８．８５（弱）、９
．２６、９．７６、１０．００（弱）、１０．３１、１
０．６４ミタロン。

抗生物質Ａ−２８０８６因子Ａのカプロン酸工スチル誘
導体は、約１６３〜１６７℃の融点を持つ白色結晶性化
合物（アセトン一水より）である。

Ａ−２８０８６因子Ａのカプロン酸エステル誘導体は、
Ａ−２８０８６因子Ａとして提示された実験式から推定
した実験式Ｃ４，Ｈ８２Ｏ，２、分子量約８６３および
Ｃ，６８．ｌ８％；Ｈ，９．５８％；０，２２．２４％
なる近似元素組成を持つている。Ａ−２８０８６因子Ａ
のカプロン酸エステル誘導体のクロロホルム中における
赤外線吸収スペクトルを第７図に示した。下記の極大吸
収が観察された。２．９０、３．４０、３。

４５、３．５１、５．８７、５．９２（強）、５．９７
（強）、６．９０、７．３０、７．６６（弱）、７．８
４（弱）、８．１６、８．５８、８．８５（弱）、９．
０５（強）、９．１７、９．７２、９．９５、１０．２
９、１０．６２ミクロン。

Ａ−２８０８６因子Ａをアシル化すると、１Ｈ核磁気共
鳴スペクトルにおいて次のような変化の起ることが分つ
た。カルビニル共鳴が約４ｐｐｍにおいて起り、約５．
３ｐｐｍだけ（正確な位置は種々のアシル誘導体で僅か
に変る）下の領域に移行（シフト）する。その結果ビニ
ル・プロトン・シグナルも移行する。このシフトは、下
に示した部分構造中に現わされている変化に特徴的であ
る。（この図ではＲはＣ１〜Ｃ，−アルキルを現わす。
）この部分構造は、１Ｈ一同一核内共役解除（ホモメク
レア・デカツプリング）実験結果ならびに、酢酸および
プロピオン酸・エステル誘導体からの１３Ｃ一核磁気共
鳴実験結果と完全に一致する。Ａ−２８０８６因子ＡＯ
Ｉ）Ｃ２〜Ｃ６−アシル・エステル誘導体類はメタノー
ル、エタノール、ジメチルホルムアミド、ジメチル・ス
ルホキシド、酢酸エチル、クロロホルム、アセトン、お
よびベンゼンのような種々の有機溶媒に溶解する。しか
しヘキサンのような非極性有機溶媒には僅かしか溶解せ
ず、かつ水には不溶である。Ａ−２８０８６のＣ２〜Ｃ
６−アシル・エステル誘導体はどれも塩やエステル誘導
体を形成しうる酸基を１個有する。

本発明における新規抗生物質は、ストレプトマイシス・
オーレオフアシエンスのＡ−２８０８６生産性を有する
菌株を、実質的に抗生物活性が産出されるまで、好気的
撹拌条件の下で適切な培養基中で培養することによつて
生産される。

生成した抗生物質類は公知の種々の分離精製法によつて
回収される。Ａ−２８０８６抗生物質の構造に有用な新
型微生物の一つは、トルコのアララト山上で採集された
士壊試料から分離された。

この生物は、シヤーリング（Ｅ．Ｂ．）およびゴツトリ
ブ（Ｄ．）によつて“゜コオペラチブ・デスクリプシヨ
ン・オブ・タイプ・カルチユア一・オブ・ストレプトマ
イシス、Ｌアデイシヨナル・スペシーズ・デスクリプシ
ヨンズ・ブロム・フアースト・アンド・セコンド・スタ
デイズ′３インターナシヨナル・ビウレチン・オブ・シ
ステマテイツク・バクテリオロジ一．１８巻、２７９〜
３９２頁（１９６８）に記述されている如く、ストレプ
トマ・ｒシス・オーレオフアシエンス８ダツガ一（Ｓｔ
ｒｅｐｔＯｍｙｃｅｓａｕｒｅｓｆａｃｉｅｎｓＤｕｇ
ｇａｒ）の一菌株として分類されている。この分類法は
若干の付加的標準を添えてインターナシヨナル・ストレ
プトマイシス・プロジエクト〔シヤーリング（Ｅ．Ｂ．
）およびゴツトリープ（Ｄ）、メソツズ・フオア・キヤ
ラクタリゼーシヨン・オブ・ストレプトマイシス・スペ
ーシーズ・インターナシヨナル・ビユレチン・オブ・シ
ステマテイク・バクテリオロジ一、１６巻３１３〜３４
０（１９６６）〕で推挙されている方法に基づくもので
ある。色彩名はＳＣＣ一ＮＢＳ法に従つて選定した〔ケ
リ一（Ｋ．Ｌ．）およびジヤツド（Ｄ．Ｂ．）の゜“ザ
・ＩＳＣＣ−ＮＢＳ・メソツド・オブ・デジグネーチン
グ・カラー・アンド・ア・デイクシヨナリ一・オブ・カ
ラー゜ネームズ″Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐｔ．ＯｆＣＯｒｒｒｎ
ｅｒｃｅ，二Ｃｉｒｃ．５５３，ｌ９５５，Ｗａｓｈｉ
ｎｇｔＯｎ，Ｄ．Ｃ．）。括弧内の数字や記号はトレス
ナ一およびバツカス式の色彩系列を参照した〔トレスナ
一（Ｈ．Ｄ．）・アンド・バツカス（Ｓ．Ｊ．）、′６
システム・オブ・カラー・ホイールズ・フオア・ストレ
プトマイシ エス・タクソノミ一”アプライド・ミクロ
バイオロジ一・１１巻，３３５〜３３８（１９６６）〕
ｏ色命名表には下に線を引いた。メルツおよびポウルの
カラープロツクは括弧内に入れた〔メルツ（Ａ）アンド
・ポウル（Ｍ．Ｒ．）、゛゜デイクシヨ ３ナリ一・オ
ブ・カラー”マツクグロウニヒル・ブツク・コンパニ一
、インコーポレーシヨン、ニユーヨーク、Ｎ．Ｙ．，〕
ｏ培養菌は特に註を加えておらぬ限り３０℃で１４日間
生育させた。

５Ａ−２８０８６生産菌
株ＮＲＲＬ５７５８の特性記述。形態 胞子形成気菌糸は鉤状、輪状、および螺旋状のものから
成る。

典型的な屈曲直腸型の形態も観察 ４される。胞子は短
くかつ円筒形で、１０〜５０個の胞子が鎖状につながつ
ている。胞子は１．３μ×１．７５μの大きさである（
１．３μ〜１，９５×１．３μの範囲）。電子顕微鏡に
よつて観察したところ、胞子の表面構造は平滑である。
各種の培地上におけるＮＲＲＬ５７５８の培養的特徴・
ＩＳＰβ２（酵母エキズ−麦芽工キズ）培地：発育旺盛
、裏面は中位の黄色〔１１Ｋ３〕、気菌糸の発生は中位
ないし良好、胞子形成、白色（Ｗ）１２ｂａおよび暗灰
色（Ｇｙ）３１ｎ１溶解性色素なし。

・ＩＳＰβ３（オートミール）培地： 発育良好、裏面は灰黄色〔１１Ｂ２〕、気菌糸の生成は
十分、暗灰色（Ｇｙ）３１ｎ、褐色溶解性色素少々。

・ＳＰβ４（無機塩類一澱粉寒天）培地：発育旺盛、裏
面は淡黄褐色〔１２Ｅ５〕、気菌糸および胞子（Ｗ）紫
がかつた白色１３ｂａないし（Ｇｙ）明るい灰色ｄ１溶
解性色素なし。

・ＩＳＰβ５（グリセリンーアスバラギン寒天）培地：
発育良好、裏面は青昧がかつた黄緑色〔１０Ｂ０気菌糸
発生良好、胞子（Ｇｙ）黄灰色２ｄｃ、ない明るい灰赤
褐色５ｆｅ、溶解性色素なし。

・トマト・ペーストオートミール寒天培地：発育旺盛、
裏面は淡黄褐色〔１３Ｈ７〕、気菌糸および胞子生成中
位ないし良好（Ｗ）白色ａないし（Ｇｙ）培地は灰色ｇ
：極微量の褐色溶解性色素。

・グリセリン−グリシン寒天培地： 発育旺盛、裏面は暗灰黄色〔１２１６〕、気菌糸および
胞子形成良好（Ｙ）青昧ある黄色２ｄｂ、溶解性色素な
し。

・葡萄糠−アハスパラギン寒天培地： 発育旺盛、裏面は灰緑黄色〔１２Ｅ２〕、気菌糸および
胞子多し（Ｇｙ）黄灰色２ｄｃ、極微量の褐色溶解性色
素。

・普通寒天培地： 発育良好、裏面は灰黄色〔１２Ｂ２〕、気菌糸および胞
子あるも、生成貧弱のため色の指定なし、溶解性色素な
し。

・ベネツトの寒天培地： 発育旺盛．裏面は灰黄色〔１２Ｋ３〕、気菌糸および胞
子生成貧弱（Ｇｙ）黄灰色２ｄｃ、溶解性色素なし。

・リンゴ酸カルシウム寒天培地： 発育良好、裏面は灰褐色〔１５Ｃ８〕、気菌糸．および
胞子形成なし、褐色溶解性色素あり、接種位置透明。

・ツアベツタの寒天培地： 発育貧弱、生育貧弱のため色の指定なし。

・エマーソンの寒天培地： 発育旺盛、裏面灰黄色〔１１Ｊ５〕、気菌糸および胞子
なし、溶解性色素なし。

・チロシン寒天： 生育旺盛、裏面淡いオリーブ褐色〔１４Ｃ４〕、気菌糸
および胞子多し、（Ｗ）ｂ（中央部）ないし（Ｇｙ）淡
褐灰色３ｆｅ（周辺部）、僅かな褐色溶解性色素。

・トリフトン−酵母寒天培地： 生育貧弱、色の指定なし。

次に、標準処方に従つて、ＮＲＲＬ５７５８菌の生理学
的性質を調べた。

観察された性状と知り得た特徴は次の如くである。生育
温度（ＩＳＰ２６〜３０℃生育良好：培地β２酵母工キ
ズ、０〜３７℃生育旺盛かつ胞麦芽工キズ斜面） 子
形成：４５℃菌糸のみ僅かに生育、赤色溶解性色素生成 さらに、ＮＲＲＬ５７５８菌について行つた炭素源利用
能をしらべた結果は下に示す如くで、菌の生育の度合を
示すのに用いた記号は、＋ 生育良好、炭素利用陽性 （＋） 貧弱ないしまずまずの生育 （−） 生育微弱、炭素利用多分なし 生育せず、炭素利用せず、 今一つの新規のＡ−２８０８６生産微生物は、化学的な
変異処理を施した後、一連の自然淘汰法によつてストレ
プトマイシス・オーレオフアシエンスＮＲＲＬ５７５８
から誘導したものである。

ＮＲＲＬ８Ｏ９２として同一種と同定された本微生物は
まよストレプトマイシス・オーレオフアシエンス（Ｓｔ
ｒｅｐｔＯｍｙｃｅｓａｕｒｅＯｆａｃｉｅｎｓ）夕１
カーの一菌株として分類した。この分類は以前に記述さ
れたストレプトマイシス分類法ならびに類似の培養条件
を使用したＮＲＲＬ８Ｏ９２菌の研究に基づく。これら
の研究に於て観察されたＮ田也８０９２菌の特徴を以下
の諸項目に総括記述した。Ａ−２８０８６生産菌株ＮＲ
ＲＬ８Ｏ９２の特性記述形 態 ＩＳＰβ７培地（チロシン寒天）上で、本培養菌は往々
鉤状気菌糸（ＨＯＯｋ）を形成するが、主として短い直
立した胞子柄（ＳｐＯｒｅｐｈＯｒｅ）を形成する。

胞子鎖は一連あたり１０胞子以下で、通常は一連につき
４〜７胞子である。

短い、直立した胞子鎖が次の培地で観察された：ＩＳＰ
β３、ツアベツク溶液寒天およびＩＳＰβ５。またエマ
ーソンの寒天上では多数の集束菌糸が観察された。チロ
シン寒天（ＩＳＰβ７）と葡萄糖一アスパラギン寒天上
で電子顕微鏡観察を行つた。胞子は平滑で、長さ１．２
μ〜２．０μ、幅約１．０μの大きさの範囲で分布して
いる。平均的な胞子の大きさは１．６μ×１．０μｏ各
種培地におけるＮＲＲＬ８Ｏ９２の培養的特徴：・ＩＳ
Ｐβ２（酵母エキズ−麦芽工キズ）培地：発育十分、裏
面は淡黄褐色〔１２Ｈ８〕、気菌糸十分、胞子形成貧弱
、気菌糸は淡灰色〔１１Ａ１〕、溶解性色素なし。

・ＩＳＰβ３（オートミーノ（ハ）培地：生育まばら、
裏面透明、気菌糸なし。

溶解性色素なし。・ＩＳＰβ４（無機塩一澱粉寒天）培
地：発育中位、裏面灰黄色〔１１Ｂ２〕、気菌糸に乏し
くて、胞子形成す、気菌糸は青昧ある黄灰色〔１０Ａ１
〕、溶解性色素なし。

・ＩＳＰβ５（グリセリン−アスパラギン寒天）培地：
発育中位、裏面は青味ある黄色〔１０Ｆ２〕、気菌糸十
分、胞子形成貧弱、気菌糸は白色〔１０Ａ１〕、溶解性
色素なし。

・トマトペースト−オートミル寒天培地：発育中位、裏
面は灰色がかつた緑黄色、気菌糸十分、胞子形成中位で
淡青灰色〔５３Ａ２〕、溶解性色素なし。

・グリセリン−グリシン寒天培地： 発育旺盛、裏面は灰黄色〔１１ＥＡ〕、気菌糸中位で白
色〔１０Ａ１〕、胞子形成せず、溶解性色素なし。

・葡萄糖−アスパラギン寒天培地： 発育中位、裏面は淡黄色〔１０Ｆ２〕、気菌糸胞子形成
とも中位、白色〔１０Ａ１〕、溶解性色素なし。

・普通寒天培地： 生育まばら（Ｓｐａｒｓｅ）、裏面は青昧ある黄色〔１
０Ｂ２〕、気菌糸なし、溶解性色素なし。

・ベネツトの寒天培地：発育十分、裏面の培地黄桃色〔
１１Ａ７〕、気菌糸極めて貧弱、胞子形成なし、溶解性
色素なし。

・リンゴ酸カルシウム寒天培地：発育極めて不良、透明
、気菌糸なし、溶解性色素なし。

・ツアベツク液寒天培地： 生育極めて不良、裏面透明、気菌糸なし、溶解性色素な
し。

・エマーソンの寒天培地： 発育中位、裏面灰黄色〔１１１５〕、気菌糸点在す、胞
子形成なし、溶解性色素なし。

・チロシン寒天培地： 発育中位、裏面は淡黄褐色〔１２Ｈ６〕、気菌糸中位、
周辺は淡青灰色〔５３Ａ２〕、中心部は白色に近い、胞
子形成は中程度、溶解性色素なし。

・トリフトン一酵母寒天培地：生育極めて不良、透明、
気菌糸なし、溶解性色素なし。

ＮＲＲＬ８Ｏ９２菌はまた、標準処方に従つて、特定の
生理学的性質を調べた。

観察した性状と、知り得た特徴は次の如くである。生育
温度（ＩＳＰ培地β２酵母工キズ麦芽工キズ斜面）：２
５℃で旺盛に生育、十分（まずまず）な気菌糸生成、裏
面淡褐色、溶解性色素なし、３『Ｃで生育旺盛、気菌糸
十分、裏面淡褐色、溶解性色素なし、３７℃で生育旺盛
、気菌糸十分、裏面は褐色、溶解性色素褐色、４０℃、
生育旺盛、気菌糸はまばら、裏面は赤褐色、溶解性色素
深赤褐色あり、４５℃、生育十分、気菌糸なし、裏面は
赤褐色、中程度の赤褐色色素。

次に、ＮＲＲＬ８Ｏ９２菌について行つた炭素源利用能
を吟昧した結果は下に示す如くであり、用いた記号は生
育の度合を示す。

＋ 生育良好、利用能陽性 （＋） 生育弱ないし十分（まずまず） （−） 生育微弱、利用能なしと推定 生育せず、 利用能なし （炭水化物無添加） Ａ−２８０８６生産性のストレプトマイシス・オーレオ
フアシエンス株の若干の性質は、シヤーリングおよびゴ
ツトリーブにより記述されている生物の性質と異つてい
る。

これらの差異を第３表に総括表示した。ＮＲＲＬ５７５
８菌（５ＮＲＲＬ８０９２菌との特異性の差異を第４表
に総括した。

レプトマイシス・オーレオフアシエンスの培養物は、寄
託されて、米国イリノイ州ペオリア６１６０４にある米
国農務省の農業研究サービスの北方市場取引ならびに栄
養研究部（ＴｈｅＨＯｒ一ＴｈｅｒｎＭａｒｋｅｔｉｎ
ｇａｎｄＮｕｔｒｉｔｉＯｎＲｅｓｅ一ＡｒｃｈＤｉｖ
ｉｓｉＯｎ．Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐｔ．ＯｆＡｇｒｉｃｕｌ−
Ｔｕｒｅ．ＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＳｅｒｖｉｃｅ，
ＰｅＯｒｉａ，ｌｌｌｎＯｉｓ，６ｌ６Ｏ４）の保管収
集物の一部となつており、そこからＮＲＲＬ５７５８お
よびＮＲＲＬ８Ｏ９２なる寄託番号で入手できる。

また、ストレプトマイシン・オーレオフアシエンスＮＲ
ＲＬ５７５８およびストレプトマイシス・オーレオフア
シエンスＮＲＲＬ８Ｏ９２は千葉市稲毛東５丁目８番１
号に住所を有する工業技術院微生物工業技術研究所にそ
れぞれＦＥＲＭ−ＰＮＯ．３Ｏ９８号およびＦＥＲＭ−
ＰＮＯ．３Ｏ９９号として寄託されている。ストレプト
マイシス・オーレオフアシエンスＮＲＲＬ５７５８ある
いはストプトマイシン・オーレオフアシエンスＮＲＲＬ
８Ｏ９２の生育は、多くの培養基のうちの任意のものが
用いられる。

しかしながら生産上の経済性、即ち収率の善し悪し、な
らびに生成物分離の難易をいう点で好適な培養基という
ものがある。大規模な発酵で好ましい炭水化物源は、例
えばタピオカのデキストリンと蔗糖であるが、その他葡
萄糖、とうもろこし澱粉、果糖、マンノース、麦芽糖、
乳糖等々もまた用いることができる。他にもコーン油、
ピーナツト油、大豆油および魚油が有利な炭素源となる
。

好ましい窒素源は酵素で分解されたカゼインであるが、
ペプトン大豆粉、綿実粉、グルタミン酸のようなアミノ
酸等々もまた用いられる。培養基に加えられる無機栄養
塩類としては、ナトリウム一、マグネシウム一、カルシ
ウム一、アンモニウム一、塩酸−、炭酸−、硫酸−、硝
酸−イオンの様なイオンを作るような従来の可溶性塩類
がある。微生物の生育と増殖に必要な微量要素もまた培
地に含有させるべきであり、かかる微量要素は通常、微
生物の生育要求に見合うだけの量は培地中の他の成分の
夾雑物として混入している。

大規模な発酵培養基において、泡立ちが問題となるなら
、ポリプロピレン・グリコールのような消泡剤を少量（
例えば０．２ｍ１／ｌ）添加することも必要であろう。

その他、絶対に必要ではないけれども、Ａ一２８０８６
生産性のストレプトマイセス・オーレオフアシエンス株
の該抗生物質生産は、大豆油のような油の少量の添加に
より増強される事を付記しておく。

次に、Ａ−２８０８６抗生物質の実質上有意義な量だけ
生産するためには、タンク内で通気攪拌発酵するのが好
ましいが、少量のＡ−２８０８６抗生物質なら振盪フラ
スコ培養によつて得られるであろう。

微生物を胞子の形態のままで大型タンクに接種すること
に伴なう抗生物質産生の時間的なずれ（１ａｇ）のため
、生育力のある種菌を接種することが好ましい。生育力
のある種菌とは、微生物の新鮮で、活発に増殖している
培養物のことで、これは、少量の培地に胞子形または菌
糸片を接種して調製される。この生育力のある種培養物
を、更に大型タンクに移殖する。生育力ある種培養物の
増殖に使用する培地は大型タンクに用いるものと同一で
あつてもよいが、またそれ以外の培地も用いられる。次
に、本Ａ−２８０８６生産微生物は約２０〜４０℃の温
度で増殖しうるが、約２７〜３０℃の温度に於てＡ−２
８０８６の最も好ましい生産が起るようである。

好気的攪拌培養では慣例として滅菌空気が培地に吹き込
まれる。

微生物を十分に増殖させるために、タンク生産で用いら
れる空気量は、通常毎分、培養液量の０．１容量以上で
あることが好ましいとされている。このＡ−２８０８６
抗生物質を効果的に生産させるための、タンク生産に使
用する空気量は、タンク中の培養プロスの０．２５容量
以上であることが殊に好ましい。高度の溶解酸素のため
に該抗生物質の生産が抑制され、低下するようなことは
ない。抗生物質生産は、発酵期間中、培養プロスないし
は培養菌苔固形物抽出物を試料として、目的とする抗生
物質類に感受性のあることが知られている微生物を対象
とした抗生物質活性試験によつて追跡することができる
。

本発明の抗生物質類の試験に有用な検定用生物の一つは
バチルス・ズブチリスＡＴＣＣ６６３３である。この生
物学的検定法は寒天平板上でペーパー・デイスク（Ｐａ
ｐｅｒ−Ｄｉｓｃ；濾紙平円板）を用いることにより好
適に遂行される。培養物無接種時の培地の当初のＰＨは
、使用する培地により多様である。

一般にそのＰＨは６．０〜７．５の範囲にあればよく、
発酵の終末期（生産物の収穫期）のＰＨはやや高まり、
６．５〜８．０の範囲となるのが普通である。一般に、
抗生物質活性が検出されてくるのは発酵の二日目からで
あり、通常約６〜１０日の間に最大の成果が現われてく
る。

前記のＡ−２８０８６抗生物質は、通常攪拌発酵条件下
での産生に続き、発酵技術上公知の方法によつて、発酵
液から回収することが出来る。

Ａ−２８０８６産生微生物の発酵中に出来る抗生物質活
性は菌糸塊および培養濾液の何れにも見出される。従つ
て、濾過、抽出ならびに吸着クロマトグラフ法を含む諸
方法を組合せることによつて、Ａ−２８０８６抗生物質
類の最大限度の回収が達成されるのである。発酵プロス
の全部ないしはその濾液からＡ−２８０８６抗生物質類
を分離するのに好ましい溶媒は酢酸エチルであるが、そ
の他、通常用いられている溶媒類でも十分である。Ａ−
２８０８６因子Ａ，ＢおよびＤを分離するのに特に有利
な方法の一つは全発酵プロスのＰＨを約３．０位に下げ
ることである。このＰＨ３．Ｏでは、Ａ−２８０８６因
子Ａ，ＢならびにＤは菌糸塊から都合よく濾別できる。
Ａ−２８０８６因子類を分離する今一つの有利な方法は
、例えば、重炭酸ナトリウムのような重炭酸塩をプロス
１リツトル当りほぼ１グラムの計算で全発酵プロスに添
加することである。それによつて、Ａ−２８０８６因子
類は塩の形で菌糸塊と都合よく分離されるのである。該
抗生物質類を菌糸塊から分離するためにメタノールは好
ましい溶媒であるが、その他の低級アルコール類やケト
ン類もまた用いられる。次に共沸蒸溜法もまたＡ−２８
０８６抗生物質類の回収に使用すると有利である。この
方法では、発酵プロスに、水と適当な共沸混合物を形成
する有機溶媒が加えられる。この溶媒−プロス混合液を
共沸蒸溜してプロスから少くとも半量の水を除すると、
Ａ−２８０８６抗生物質類が有機溶媒中に溶存している
水一溶媒混合物が得られる。不溶性の副生物は濾過また
は遠心分離法のような適当な方法で分離し、Ａ−２８０
８６抗生物質類は溶媒の蒸発、非溶媒の添加による沈降
あるいは抽出法のような公知の方法によつて有機溶媒か
ら回収される。かかる回収方法を行うために水と適当な
共沸混合物を形成する有機溶媒には、例えば、ブチルア
ルコール、アミルアルコール、ヘキシルアルコール、ベ
ンジルアルコール、酢酸ブチル、酢酸アミル、１，２−
ジクロロエタン、３−ペンタノン、２−ヘキサノン、ベ
ンゼン、シクロヘキサノン、トルエン、その他キシレン
類等がある。

大規模な発酵製造工程では共沸蒸溜法による回収が特に
有利である。

共沸蒸溜液として確保された水と溶媒の両液は既知の技
法で分離し、更に以后の使用にまわすことができる。ま
たこのようにして除かれた水には汚染物が含まれていな
いし、廃液処理操作を必要としない。また、このように
して分離された溶媒は同じ工程に再利用できる。次に、
抽出や吸着の操作を追加してＡ２８Ｏ８６抗生物質の純
化が進められるのである。

シリカ・ゲル、炭素、フロリジル（硅酸マグネシウムの
商標、フロリヂン社製品（米国フロリダ州タラハシ一私
書函第９８９在））その他が有利に用いられる。あるい
は、培養固形物に培養液の諸成分や菌糸が含まれている
ので、抽出や分離を行わず、出来れば水分だけ除いてＡ
−２８０８６抗生物質供給源として用いられる。

すなわちＡ−２８０８６の抗生物活性が出た後、培養プ
ロスを凍結乾燥して直接に飼料のプレミツクスに混合す
ることができるのである。今一つの着眼として、培地中
にＡ−２８０８６活性が生じた后に、菌体を分離乾燥し
たものは直接に飼料プレミツクスに使用できる製品とな
る。

こうした用途のための菌体を分離する場合に、炭酸石灰
（約１０９／ｌ）を加えると、濾過し易く、改良乾燥産
品となる。このように永年用いられて来た条件下で、前
記のＮＲＲＬ５７５８およびＮＲＲＬ８Ｏ９２と命名さ
れたストレプトマイシス・オーレオフアシエンス株は、
抗生物因子Ａ−２８０８６を主産物として産生するので
ある。

その時々の発酵条件によつて生成因子の比率は変つてく
るが、一般的には因子ＡはＮＲＲＬ５７５８株からの全
回収抗生物質活性の９９％以上を占め、ＮＲＲＬ８Ｏ９
２株からの全回収抗性物質活性の９０％以上を占めてい
る。Ａ−２８０８６因子ＢはＮＲＲＬ５７５８株からの
残りの抗生物活性部の大部を占め、因子Ｄは微量因子で
ある。

これに反して、Ａ−２８０８６因子ＤはＮＲＲＬ８Ｏ９
２株からの全回収抗生物活性の約８〜１０％に上り、こ
の時は因子Ｂが微量因子である。抗生物質Ａ−２８０８
６因子Ａ，ＢおよびＤは、カラムクロマトグラフ法、薄
層クロマトグラフ法、その他の公知の方法を用いて個々
の化合物として相互に分離される。

例えば、シリカ・ゲル土でのカラムクロマトグラフ法を
用い、ベンゼン一酢酸エチルのような、種々の溶媒混合
物でカラムを溶出することによつて、因子Ａ，Ｂおよび
Ｄが分離される。シリカゲルカラムにベンゼケ一酢酸エ
チル溶媒混合物を用いると、初めに因子Ｂが溶出し、因
子Ａ．（５Ｄはおくれて溶出される。これ迄に記述した
様に、薄層クロマトグラフ法は溶出過程を探知するのに
手軽な方法である。Ａ−２８０８６化合物類は動植物体
に病原性のある細菌や糸状菌の生育を阻止する作用があ
る。

下記の第５表にＡ−２８０８６の因子Ａ（５Ｂの微生物
活性を比較表示した。試験方法は通常のデイスク拡散法
（Ｄｉｓｃ−Ｄｉｆｆ−ＵｓｉＯｎｍｅｔｈＯｄ）、〔
６ｍｍの吸取紙を生産物１即／溶液１ｍ１の溶液に浸し
、被検生物を接種した寒天平板上にこの吸取紙を置く方
法〕てある。

次に重要なことは、Ａ−２８０８６化合物類が嫌気性細
菌の生育を阻止することである。Ａ−２８０８６因子Ａ
が種々の嫌気性細菌を阻止する最少阻止濃度（ＭＩＣ）
を、標準の寒天稀釈法で測定した結果を第６表に総括記
載した。

終末点は２４時間培養後に判定したものである。Ａ−２
８０８６因子Ａ（７）Ｃ２〜Ｃ６エステル誘導体類はま
た抗細菌ならびに抗糸状菌活性を持つものである。また
、ある観点からすると、これらの誘導体は、グラム陽性
菌に対する活性が因子Ａよりも増強されたという面も見
られた。そこで、これらの誘導体の若干のものの相対的
なグラム陽性菌活性を、因子Ａの持つ活性と比較した。
対照となる化合物類をＮ．Ｒ．クゼルおよびＦ．Ｗ．カ
バナウが、ジヤーナル・オブ・フアルマシユーチカル・
サイエンス６０巻（５）、７６４〜７６７頁（１９７１
年）に記載する半自動化されたシステム（エランコ社の
オートターブ８式の微生物試験システム）上で濁度測定
試験法によつて検査した。このＡ−２８０８６抗生物質
類の検定においては、次のようなテスト・パラメーター
を用いた。検定用の細菌スタフイロコツカス・アウレウ
ス（Ｈ−ヒートレ一）ＮＲＲＬＢ−３１４を栄養培地（
ＰＨ７）中で３７℃で４時間培養したものを使用した。
被検試料および標準品をメタノール一水（１０：９０）
に溶解した。標準品のＡ−２８０８６因子Ａを２，３，
４、，および５０ｇ／ｍｌの濃度でオートターブ８・カ
ラーセル（ＡｕｔＯｔｕｒｂ８ｃａｒＯｕｓｅｌ）にか
けた。検体化合物類は希釈して１ｍ１当り約３〜４ｍｃ
ｇの活性物質が含まれるようにしてからカラーセルにか
けた。標準品の活性と対比して求められた検体化合物の
相対的活性度を次に示す。Ａ−２８０８６化合物類の抗
微生物活性の今一つの有用な面はミコプラズマあるいは
マイコプラズマ（ＭｙｃＯｐＩａｓｍａ）に対する活性
である。

プロイロプロイモニア様（ＰＰＬＯ）としてもまた知ら
れているミコプラズマの種は人間や種々の動物に病原性
がある。このＰＰＬＯ生物に対して効果のある薬剤は特
に家畜生産業者から要望されている。生体外でのプロス
希釈研究法で測定した種々のミコプラズマに対する抗生
物質Ａ−２８０８６の最低阻止濃度（ＭＩＣ）を下の第
７表にまとめた。その１ｍ１あたりに１０ｍｃ９程度の
微量の抗生物質Ａ−２８０８６を含んだ溶液でも動物を
ミコプラズマ種から保護する外用消毒剤として有効であ
る。

次にＡ−２８０８６化合物類はまた、抗ビールス剤でも
ある。

Ａ−２８０８６因子Ａは型の小児麻痺ビールス（Ｔｙｐ
ｅｌｌｐＯＩｉＯｖｉｒｕｓ）、牛痘ビールス（Ｖａｃ
ｃｉｎｉａｖｉｒｕｓ）、泡疹ビールス（Ｈｅｒｐｅｓ
ｖｉｒｕｓ）およびセムリキ・フオトレスト・ビールス
（ＳｅｍｌｉｋｉＦＯｒｅｓｔｖｉｒｕｓ）に対して活
性的であり、これらはシミノフによつて記載された〔ア
プライド・ミクロバイオロジ一９巻（１），６６〜７２
頁（１９６１）〕試験法と類似の生体外プラーク抑制試
験（ＩｎｖｉｔｒＯｐｌａｑｕｅｓｕｐｐｒｅｓｓｉＯ
ｎｔｅｓｔｓ）により確証を得たものである。Ａ−２８
０８６因子Ａはまた、伝染性胃腸炎ビールス、ニユーカ
ツスル病ビールスおよび感染性牛属鼻孔性気管支炎ビー
ルスに対しても活性を示すが、これらも類似の組織培養
試験で確めたものである。従つて、ある面に於ては、Ａ
−２８０８６化合物はどれも皆、ビールスの抑制を目的
として、経口的にも、局所的にも、あるいは注射によつ
ても哺乳動物に投与することができるのである。

ビールス病の予防または治療上有効な投与量は対照とな
るビールスならびに薬物使用の目的が予防的か治療的か
に基き、哺乳動物の体重１ｋｇに対し約１〜５〜と変動
し、一定しないのが普通である。以上のほか、Ａ−２８
０８６化合物を含有する溶剤は、できれば界面活性剤と
共に、小児麻痺あるいは泡疹のような諸ビールスの存在
している生体外棲息地の消毒にも用いることができる。

かかる場合には約１〜１５００ｍｃＬ４１のＡ−２８０
８６化合物を含有させた溶剤がビールス類の抑制に効果
的である。抗生物質Ａ−２８０８６因子Ａの急性毒性は
、マウスの腹腔内注射による投与法でそのＬＤ５Ｏは７
．１５η／Ｋｇである。

次にＡ−２８０８６化合物類はまた殺虫剤でありかつ殺
だに剤でもある。

Ａ−２８０８６化合物類は昆虫類、例えばメキシコのビ
ーン・ビートル、ミルクウイード・バツクならびに家蝿
に対して効力があるし、ツ一・スポツテド・スパイダー
・マイト（ＴｗＯ−ＳｐＯｔｔｅｄｓｐｉｄｅｒｍｉｔ
ｅ）のようなダニ類にも有効であり、使用も５００ｐｐ
ｍ程度の少量で足りる。さらにまた、Ａ−２８０８６化
合物はぼうふら（ＭＯｓｑｕｉｔｅｌａｒｖａｅ）にも
有効で、使用量は１ｐｐｍの少量でよい。このＡ−２８
０８６化合物の重要な一性質は、その抗コクシジウム活
性である。

例えば、飼育実験の結果、このＡ−２８０８６のどの化
合物でも０．００３％という少量をひよこ（雛鶏）の餌
に人れてやると体重増加が改善され、さらに０．００５
％という少量では、コクシジウム症原体に犯されたひよ
この死亡を防ぎかつ損害数が減少する。各種のエイメリ
ア属の病原体を与えたひよこ群における因子Ａの効力試
験の諸結果を第８表から第１０表に示した。家禽のコク
シジウム症の予防ないし治療のため ｌには、Ａ−２８
０８６化合物のどれかを、毎日経口的に、無毒で而もコ
クシジウム原虫に有効な量を毎日経口的に鳥に投与する
のが好ましい。

鳥にＡ−２８０８６化合物を与える方法は多くあるが、
最も簡便なのは生理学的に許容できるような担体１，と
共に与えること、特に好ましいのは鳥の接種する飼相と
共に与える方法である。また、Ａ一２８０８６化合物の
適量を決定する上で種々の因子が考慮されねばならない
が、投与の割合は通常薬物無添加飼料の０．００３ない
し０．０４％の範囲、２，好ましくは０．００５〜０．
０２％の範囲にあるであろう。Ａ−２８０８６化合物類
の今一つの重要な性質は、動物の飼制利用効率を改善す
るという性能である。

２例え
ば、Ａ−２８０８６化合物類は発達した反別機能をもつ
反別動物類の飼料利用能率を改良するのである。これま
でにも論じて来た様に、反別動物類における炭水化物利
用効率は、その動物のルーメン ３（反別胃）内の分布
生物相を刺激してアセテートまたはブチレートよりもむ
しろプロピオネートを生成させるように操作することに
よつて高められる。

飼相の利用効率は、ルーメン中のプロピオネート化合物
の生成と濃度とを次の方法を用いて観５察することによ
り探知される。先ず、ルーメン分秘物は、棲管（Ｆｉｓ
ｔｕｌａ）を外科的にルーメン内に拡げて設置した雄の
子牛から得られる。

この子牛に穀類に富んだ飼料を与えて保育する。ルーメ
ン流動液の飼相は四枚重ねの。チーズクロス（Ｃｈｅｅ
ｓｅｃｌＯｔｈ）を透して浸み出させ、この濾液を収集
する。チーズクロスに残留した粒状物質は、初めのルー
メン液量にもどすのに十分な生理的緩衝液に浮遊させ、
再度浸出させる。ジヤーナル・オブ・デ一り一・サイエ
ンス、３８、巻１２２５〜１２３０頁（１９５５）中の
チユン等の記載によれば、この際用いられる緩衝液は次
の様な組成を持つている。この２つの濾液を混合して放
置し、浮遊物質を表面に浮遊分離させる。

透明層を分離し、同一緩衝液（１：１）で希釈し、しか
る後ＰＨ６．８〜７０の間に調節する。希釈されたルー
メン液（１０ｍ１）を、上記の飼相４０η、大豆蛋白質
追加分１７！１ｆ７、ならびに被検化合物を人れた２５
ｍ１フラスコに加える。一回の処理ごとに四個の反復フ
ラスコを用いる。また、２組の４個のフラスコがコント
ロールに用いられ、またＯ時間目のコントロールと培養
１６時間目のコントロールが使用される。試験フラスコ
は何れも３８℃で１６時間培養する。培養が終ると、各
フラスコのＰＨを測定し、２５％のメタ燐酸（２ｍ０を
各フラスコに加える。各試料は放置して沈澱させた後、
上澄液をガスクロマトグラフイで分析してプロピオネー
ト、アセテート、およびブチレート化合物類を測定する
。コントロール以上にプロピオネート生成の増加の認め
られたものか活性化合物としての意義がある。被験化合
物の結果は推計学的にコントロールの結果と比較する。

第１１表に処理フラスコ中の発性脂肪酸（ＦＡ）の濃度
とコントロール・フラスコ中の濃度との比を示す。炭水
化物利用効率は、ルーメン（反別胃）の内容物の標品を
抜きさることが出来るようにルーメン中に棲管（Ｆｉｓ
ｔｕｌａｓ）を装置した動物で行われた生体（Ｉｎｖｉ
ｖＯ）試験により更に解明される。

第１２表に表示する試験結果は、それぞれ目力か約１０
００１ｂｓ．の棲管を取り付けた成熟した層牛で行つた
ものである。２頭の層牛は正常食で飼育し、各処理群に
おける４頭はこれと同じ飼相にＡ−２８０８６因子Ａを
加えたもので飼育した。

とり出した各１００ｍ１づつのルーメン流動液に１００
１）のメタ燐酸（１００ｍ０を添加し、飼刺を静置し、
しかる後透明液をガスタロマトグラフ法で分析してプロ
ピオン酸濃度を測定した。第１２表の結果は１４日間の
処理期間中における５回以上の平均をとつたルーメン中
のプロピオン酸濃度の平均増率（パーセント）である。
この際のコントロールには大略２０モル・パーセントの
プロピ１オン酸があつた。なおそのうえに、羊の場合に
もＡ−２８０８６因子Ａが飼料利用効率を増進させる事
を証拠づけることが、ＩｎｖｉｖＯ試験で証明された。

これらは５６日間以上の期間をかけて実行し、その結果
を第１３表に総括した。Ａ−２８０８６一因子−Ｄ一化
合物類は抗ビールス剤である。

Ａ−２８０８６因子ＤはメリーランドＢ型ビールス、ｍ
型小児麻痺ビールス、ＣＯＥビールス、泡疹ビールス（
Ｈｅｒｐｅｓｖｉｒｕｓ）、およびセミリキ・フオレス
ト・ビールスに対して有 ．効である、これはシミノフ
の記載〔アプライド・ミクロビオロジ一、９巻（１）６
６〜７２頁（１９６１）〕と類似の生体外プラーク抑制
試験によつて確認された。Ａ−２８０８６因子Ｄはまた
、伝染性胃腸炎ビールス、ニユーカツスル病ビールス、
ならび ｌに感染性牛鼻孔気管支炎ビールスに有効であ
るが、これも同様の組織培養試験により確認したもので
ある。かくの如くＡ−２８０８６一因子−Ｄ化合物類か
ビールスならびに嫌気性細菌の両者に対して抑制活性を
有する事実は、該化合物類を雛鶏、豚、牛、ならびに羊
の腸炎の治療ないし予防用として有利ならしめるもので
ある。

該Ａ−２８０８６一因子−Ｄ化合物類はまた反別動物類
の腸内中毒症の治療にも有効である。次に本発明にかか
るＡ−２８０８６一因子−Ｄ化合物類の重要な性質の一
つとして抗コクシジウム症活性があげられる。

ＩｎｖｉｔｒＯでの実験の結果、Ａ−２８０８６因子Ｄ
はエイメリア・テネラに効く抗コクシジウム活性のある
ことが証明された。以下にその使用法を記載する〔詳細
に関しては、エクスペリメンタル・パラシトロジ一、３
４巻１８９〜１９６頁（１９７３）のＬ．Ｒ．マクダガ
ルドおよびＲ．Ｂ．ガロウエイの報告参照のこと〕。宿
主細胞の培養物はレイトン管（ＬｅｌｇｈｔＯｎｔｕｂ
ｅ）、プラスチツク製の皿ないしその他の適当な培養容
器類を用いる簡易法によつて調製する。

任意の適当な培地（イーグルの最少必要培地、アーレま
たはハングの調和食塩水中ラクトアルブミン加水分解物
を加えたもの、培地１９９等）で２〜３日間生長させる
と、通常、適当な単層が生成して感染処理や薬物処理が
容易になる。これらの研究にはひよこの腎臓細胞の一次
培養物を用いた。生活力を有するエイメリア・テネラ（
Ｅｉｍｅｒｉａｔｅｎｅｌｌａ）に感染したひな鳥の便
からその接合子襄を採取し、使用に先立つて清浄にして
殺菌する。この接合子襄を懸濁し、懸濁液に通気発泡さ
せるかまたは羽根付シューカーもしくはその他の適当な
装置でおだやかに浸透しながら室温に保持して発芽させ
る。発芽処理の間、細菌やかびの発育を防止するため、
ニクロム酸カリウム、硫酸または他の薬品を使用するこ
とができる。接合子襄の外壁を機械的に破り、子襄から
出た種虫を活動させるためにトリプシンおよび胆汁酸塩
で処理することにより、子襄から感染力を有する種虫を
完全にはい出させる。

容器中の細胞培養物に生活力のある種虫を導入すること
により、細胞培養物を感染させる。

次いでこれに試験化合物を導入することができる。試験
化合物は好ましくは生理的食塩水中、１０（！１Ｉジメ
チルホルムアミドを使用して導人する。試験の終了時点
における抑制は無性生殖段階に対する抑制である。感染
９６時間後、培養物を固定、染色し、顕微鏡で観察する
ことによりその終了時点を測定する。第２世代としての
シゾント（ＳｃｈｉｚＯｎＣが存在するか否か、単一細
胞層に対する毒性が明らかであるか否かにより、その結
果を活性伍）、不活性（Ｎ）または細胞毒性（Ｃ）とし
て記録する。上記試験により証明されるＡ−２８０８６
因子Ｄの抗コクシジウム活性を要約して第１４表に示す
。第１４表 抗生物質Ａ−２８０８６因子ＤＡ−２８０
８６因子Ｄ化合物の有する上記以外の特色は反別動物の
第一胃の機能を高めて飼相の利用効率を増大せしめ得る
ことにある。

反羽動物飼料中の主栄養成分（炭水化物）の利用機構は
よく知られている。動物の第一胃中の微生物が炭水化物
を単糖類に分解し、この単糖類をピルビン酸化合物に変
換する。ピルビン酸化合物は微生物による代謝作用によ
り、揮発性の脂肪機（ＶＦＡ）として知られたアセテー
ト、ブチレートまたはプロピオネートを形成する（より
詳細には、プーリプリンら著：フイジオロジ一・オブ・
ダイジエスチヨン・アンド・メタポリズム・イン・ザ・
ルミナント（英国ニユーカースル・アポン・ターン在オ
ーリエル・プレス（１９７０年）刊）４０８〜４１０頁
レングの記載参照）。ＶＦＡ利用の相対的効率について
は、マッググローブ（フードスタフス（１９７１年６月
１９日）１９頁）、エスクランドら（Ｊ．Ａｎ．Ｓｃｉ
．第３３巻２８２頁（１９７１年））、およびチヤーチ
ら（デジエステイブ・フイジオロジ一・アンド・ニユー
トリシヨン・オブ・ルミナンツ第２巻（１９７１年）６
２２および６２５頁の報告がある。

アセテートおよびブチレート化合物も利用されるが、プ
ロピオネート化合物の効率かより大である。加うるに、
プロピオネート化合物が非常に少ないときには動物がケ
トン症に羅患する可能性がある。それ故、有用な化合物
は動物体内の炭水化物からより高い量のプロピオネート
を産生するように刺激を与え、炭水化物の利用効率を増
大せしめ、またケトン症の羅患率を減少させる。有用な
化合物の第１胃中におけるプロピオネート化合物の生成
および濃度に対する影響を因子Ａの場合と同様の操作で
観察することにより、その有用な化合物の活性を測定す
ることができる。試験化合物の結果を対照化合物の結果
と統計学的に比較する。第１５表はＡ−２８０８６因子
Ｄで処理したノラスコ中の揮発性脂肪酸濃度と対照フラ
スコ中の揮発性脂肪酸濃度の比を示すものである。本発
明の化合物はプロピオネート化合物を増加させることに
おいて典型的効果を有し、それ故にこの化合物を約０．
０５〜５．０〜／Ｋｇ／日の割合で，反倒動物に経口的
に投与するとき、飼相利用効率を高めることができる。

本発明の化合物を約０．１〜２．５〜／Ｋｇ／日の割合
で投与することにより最もよい結果が得られる。本発明
目的化合物の好ましい投与方法は、これを動物飼制と混
合する方法であるが、これを他の方法、たとえば錠剤、
トレンチ剤、大丸薬、カプセル剤の剤型で投与すること
ができる。これら種々の投与剤型は獣医薬理学的によく
知られた方法により製剤化することができる。個々の投
与単位剤型は本発明化合物を処置すべき動物の１日当た
りの投与量に直接関連する量で含有させたものとすべき
である。家畜飼刺とそのトン当りＡ−２８０８６の３０
９から成る飼刺組成物を肥育用家畜に与えることにより
本発明に係る化合物を利用することができる。

この分野で知られているように、牛の飼刺は他の飼相た
とえば家禽の飼制とは異なる。

牛の飼料は粗飼相たとえば綿実穀、トウモロコシサイレ
ージなどを含む。加うるに、牛の飼相はより高率（しば
しば１５〜２５％）の非蛋白質性窒素源を含有する。通
常、この非蛋白質性窒素源は尿素である。前記のごとく
、本発明のＡ−２８０８６化合物は抗ビールス剤であり
、また嫌気性菌、特にクロストリジウム・ペルフリンゲ
ンス（ＣｌＯＳｔｒｉｄｉＵ［Ｔｌｐｅｒｆｒｉｎｇｅ
ｎｓ）に対して活性を有する。

それ故、にわとり、豚、牛、羊などの腸炎を処置し、予
防するため有用である。またＡ−２８０８６化合物は反
別動物の腸性中毒症を処置するために有用である。次に
実施例を挙げて本発明の具体的実施態様を説明する。

実施例 １ （４）ストレプトマイシス・オーレオフアシエンス（Ｓ
．ａｕｒｅＯｆａｃｉｅｎｓ）ＮＲＲＬ５７５８を使用
するＡ−２８０８６の振盪フラスコ発酵：下記操作に従
つてストレプトマイシス・オーレオフアシエンスＮＲＲ
Ｌ５７５８の培養物を作成した。

すなわち、上記組成を有する寒天斜面培地にストレプト
マイシス・オーレオフアシエンスＮＲＲＬ５７５８を接
種し、接種した培地を３０℃で６〜１０日間培養した。

菌体の生育した斜面培養物を牛血清で保護しながら減菌
した白金耳でこすつて胞子を散乱させた。こうして得ら
れた胞子と菌糸片の牛血清浮遊液を凍結乾燥して６個の
ペレツトを造つた。得られた凍結乾燥ペレツト１個を下
記組成の生育用培地５０ｍ１に接種した。

２５０ｍ１容のエルレンマイエルフラスコに収められた
上記の接種済みの生育培地を、直径２インチの円弧運動
をする振盪機上で２５０ｒｐｍの速度で旋回振盪しなが
ら３０℃で２４時間培養した。

（Ｂ）ストレプトマイシス・オーレオフアシエンスＮＲ
ＲＬ５７５８を使用するＡ−２８０８６のタンク発酵：
多量の接種菌を造るため、上記のようにして培養した生
育培養液１０ｍｊを前記の生育用培地と同じ組成をもつ
次の段階の生育培地４００ｍ１に接種し、この二度目の
接種培地を２１容のフラスコに人れ、直径２インチの円
弧運動式旋回振盪機上で２５０ｒｐｍで２４時間３０℃
で培養した。

この二度目の生育培養液１１を下記組成の減菌された生
産用培地１００１に接種するために用いた。

この培地は、１５〜２０ポンドの圧力で１２０℃に３０
分間加圧殺菌した後のＰＨが６．７であつた。

このように調整して菌を植えた生産用培地を１６５１の
発酵タンク内で２９℃の温度で１０日間発酵させた。

この間発酵液には、毎分培養液量の０．４容量の割合で
無菌空気を通気した。また培養液は２５０ｒｐｍの割合
で普通の攪拌器で攪拌した。実施例 ２ 下記組成のフラスコ培養基を用いること以外は実施例１
の方法に従い、Ａ−２８０８６抗生物質を生産した。

実施例 ３ ストレプトマイシス・オーレオフアシエンスＮＲＲＬ５
７５８によつて生産されたＡ−２８０８６抗生物質複合
体の分離：実施例１に記載した方法によつて得られた発
酵液１３２１全部を濾過助剤（ハイフロ・スーパーセル
、硅藻士の一種で、ジヨンズーマンビル製造会社製品）
で濾過し、濾液９７１が得られた。

この濾過液はほぼ同量の酢酸エチルで抽出を試みた。水
層から酢酸エチル抽出液を分離し、５００ｍ１ぐらいの
量に濃縮した。この濃縮酢酸エチル抽出物に過剰の石油
エーテル（ＳｋｅｌｌｙＳＯｌｖｅＦ；約１０１）を加
え、その結果できる不用物質を沈澱させて分離した。分
離後の濾液を減圧下で蒸発し、Ａ−２８０８６抗生物質
複合体６．９９を得た。次に、菌体部に含まれるＡ−２
８０８６抗生物質複合体は、濾過した菌体を約半量のメ
タノールで２回抽出（６２１と５９１）して得られた。

これらの２回のメタノール抽出液を合した後、減圧下で
メタノールを濃縮除去した。この濃縮後に約１０１の水
層が残つた。この水層を希薄な水酸化ナトリウム溶液で
ＰＨ約７５に調節した。かくして得られた溶液をほぼ同
量の酢酸エチルで２回（９１と１０１）抽出した。該酢
酸エチル抽出液を合した後、約４００ｍ１の量に濃縮し
た。この濃縮酢酸エチル抽出物を大過剰の石油エーテル
中に加えて不要物質を除去したが、その方法としては、
濾過培養液の濃縮抽出物について上に記載した方法を用
いた。濾液中の菌体部から得たＡ−２８０８６抗生物質
複合体の目方は２０．６９であつた。実施例 ４Ａ−２
８０８６中の個々の因子ＡおよびＢの単離；Ａ−２８０
８６抗生物質複合体（実施例３に記載したように調製し
たもの）２３５９を約８０ｄのベンゼンに溶解した。

このベンゼン溶液にシリカゲルカラムクロマトグラフ法
を応用した（９×１３０？、８１ｓＭａｔｈｅｓ０ｎｇ
ｒａｄｅ６２シリカゲル）。カラムは種々の割合のベン
ゼン一酢酸エチル混合液で溶出した。溶出挙動は薄層ク
ロマトグラフ法で追跡した。溶媒系としてベンゼン一酢
酸エチル（９０：１０）を用いると、因子Ｂが最初に溶
出し、個々の因子の一つとして単離された。因子Ｂ（４
３〜）はアセトン一水から結．晶させた。Ｍｐｌ５Ｏ〜
１５３℃。酢酸エチルの割合を徐々に増加しながらベン
ゼン一酢酸エチル混合液で溶出を継続すると、因子Ａが
溶出して来た。

因子Ａを含む種々の分画を合わせて減圧下で濃縮し、あ
とに残つた残留物をアセトン約１５０ｍ１に溶解し、こ
のアセトン溶液に水約１５０ｍ１を加えた。こうして得
られた溶液に１Ｎ塩酸を加えてＰＨ３に調節した。酸性
にした該混合液を約１時間攪拌すると、その間に沈澱が
出来る。この沈澱を濾別してアセトン約１５０ｍ１に溶
かし、水約６０ｍ１を加えて再結晶した。生成した結晶
は一夜真空乾燥し、因子Ａ約６．６９を得た。結晶の濾
液からアセトンを部分的に蒸発したところ、因子Ａの二
次的収得物約１．２９が得られた。実施例 ５Ａ−２８
０８６因子Ａのアセチル・エステル誘導体の製造：抗生
物質Ａ−２８０８６因子Ａ７．４９をピリジン１５０Ｗ
ＬＩに溶解、この溶液に無水酢酸５０Ｔｎ１を添加した
。

この溶液を十分に混和し、ついで室温で一夜放置した。
水２００ＴＬＩを加えて十分に混和し、この混合液を室
温で４時間放置した。白色の固形物が沈澱するので、こ
れを濾別し、水洗して風乾した。こうして得た固形物を
アセトン１００ｍ１に溶解し、次いでこのアセトン溶液
を真空下に蒸発乾燥した（この操作を３回くりかえした
。）。こうして得られた残渣はアセトン１００ｍ１一水
５０ｍ１から結晶させ、Ａ−２８０８６因子Ａのアセチ
ルエステル誘導体６．１４ｇを得た。融点１００〜１０
３誘Ｃ０実施例 ６〜９ 実施例５の力法により、ピリジンの存在の下で無水プロ
ピオン酸を因子Ａに反応させ、抗生物質Ａ−２８０８６
因子Ａのプロピオニル・エステル誘導体を得た。

融点９６〜９８゜Ｃ０実施例５の方法に従い、ピリジン
の存在の下で因子Ａを無水ｎ一酪酸と反応させ、抗生物
質Ａ一２８０８６因子Ａ（７）ｎ−ブチリル・エステル
誘導体を得た。

融点７９〜８１℃。実施例５の方法により、ピリジンの
存在の下で因子Ａを無水カプロン酸と反応させ、抗生物
質Ａ一２８０８６因子ＡＯ）ｎ−カプロイル・エステル
誘導体を製造した。

融点１６３〜１６７℃ｏ実施例５の方法に従い、ピリジ
ンの存在の下に因子Ａを無水吉草酸と反応させ、抗生物
質Ａ−２８０８６因子Ａ（７）ｎ−バレリル・エステル
誘導体を製造した。融点１７３〜１７５℃。実施例 １
０ Ａ−２８０８６因子Ａのナトリウム塩の製造：抗生物質
Ａ−２８０８６因子Ａ５ＯＯηをアセトン５０ｍ１に溶
解した。

この溶液に水５０ｍ１を加え、さらに５Ｎの水酸化ナト
リウム溶液を加えて液のＰＨを１０．５〜１１にした。
こうして得られた溶液を１時間撹拌し、次いで酢酸エチ
ルで抽出した。酢酸エチル抽出部を真空下に蒸発乾固し
た。残渣をアセトン一水の溶液から沈澱させ、Ａ一２８
０８６因子Ａのナトリウム塩３７８ηを得た。融点１２
０〜１２３℃。実施例 １１〜１５ 実施例１０の方法を用いて、抗生物質Ａ一２８０８６因
子（５００′１９）と飽和水酸化バリウム溶液とから、
抗生物質Ａ−２８０８６因子Ａのバリウム塩３６９ηを
製造した。

融点１８８〜１９０ウＣ０実施例１０の方法を用いて、
抗生物質Ａ一２８０８６因子Ａ（５００〜）と５Ｎの水
酸化カリウム溶液とから３６３〜のＡ−２８０８６因子
Ａのカリウム塩を製造した。

融点１６５〜１６７℃。実施例１０の方法を用い、抗生
物質Ａ−２８０８６因子Ａ５ＯＯηと１Ｎ水酸化セシウ
ムとから５４０〜のＡ−２８０８６因子Ａセシウム塩を
得た。融点１９０〜２１０℃ｏ実施例１０の方法により
、抗生物質Ａ−２８０８６因子Ｂと５Ｎ水酸化ナトリウ
ムとから抗生物質Ａ一２８０８６因子Ｂのナトリウム塩
を製造した。

実施例 １６ストレプトマイシス・オーレオフアシエン
ス（Ｓ．ａｕｒｅＯｆａｃｉｅｎｓ）ＮＲＲＬ８Ｏ９２
を用いるＡ一２８０８６の振盪フラスコ発酵：下記の組
成の寒天斜面培地でストレプトマイシス・オーレオフア
シエンスＮＲＲＬ８Ｏ９２の培養物を製造した。

Ｒ６８＼ｗつハ一Ｊｉノ ノ すなわち、この斜面培地にストレプトマイシス・オーレ
オフアシエンスＮＲＲＬ８Ｏ９２を接種し、接種培地を
３０℃で約７日間培養した。

菌の生育した斜面培養物を無菌の牛血清で保護しながら
殺菌した白金耳でこすつて斜面培養物から胞子と菌糸の
浮遊液を調製した。こうして出来た浮遊液を凍結乾燥し
６個のペレツトを調製した。こうして作つた凍結乾燥ペ
レツトの１個を下記組成の生育用培地５０ｍ１に接種す
るのに用いた。

′Ｊ）′シ；；′ＪＳ〜−ｂ′ｉζ―−一Ｃ１−、７ｐ
Ｈを稀薄なＨａＯＨで６．５に調節した。２５０ｍ１の
エルレンマイエル・フラスコ中の菌を接種した生育培地
を、２インチの円弧運動する旋回式振盪機上で２５０ｒ
ｐＩＩ１の速度で、４８時間３０℃で培養した。

次に、下記組成の発酵用培地５０ｍ１に、上記の菌体の
生育した培地（０．５ｍ１１１パーセント）を接種使用
した。

フ ＰＨ（未調整のまま）６．６ ※ＳｔａｌｅｙＤｅｘｔｒｉｎ＃１１（Ａ．Ｅ．Ｓｔａ
ｌｅｙＣＯ、（米国イリノイ州デカツール在）製）。

※※ＡｎｌｂｅｒＥＨＣ（ＡｍｂｅｒＬａｂＯｒａｔＯ
ｒｉｅｓ（米国ウイスコンシン州ジユニユウ在）製）。
※※※ＮＺ，．ＡＩＩｌｌｎＡ（ＳｈｅｆｆｉｅｌｄＣ
ｈｅｍｉ一ＣａＩＣＯｌ（米国ニユーヨータ州ノーウイ
チ在）製）。実施例 １７ ストレプトマイシス・オーレオフアシエンスＮＲＲＬ８
Ｏ９２を用いたＡ−２８０８６のタンク発酵： Ａ−２８０８６の振盪フラスコ発酵法として実施例１６
の冒頭に記載した方法をタンク発酵の場合にも適用した
。

多量の接種菌を作るために、菌を培養した生育培地１０
ｍ１を最初の生育培地と同じ組成の次の段階の生育培地
４００ｍ１に植えつけるのに使用した。２１容のエルレ
ンマイエル・フラスコに入れたこの第二段階の培養液を
、２インチの円弧で旋回する振盪機に載せ２５０ｒｐＩ
で２４時間３０℃で培養した。

この菌を培養した二次的生育培地８００ｍ１を下記の組
成をもつ無菌の発酵用培地１００１に接種するのに用い
た。※ＳｔａｌｅｙＤｅｘｔｒｉｎ＃１１（Ａ−Ｅ−Ｓ
ｔａｌｅｙＣＯ（米国イリノイ州デカツール在）製）。

※※ＡｍｂｅｒＥＨＣ（ＡｍｂｅｒＬａｂＯｒａｔＯｒ
ｉｅｓ（米国ウイスコンシン州ジユニユウ在）製）。※
※※ＮＺＡｍｉｎｅＡ（ＳｈｅｆｆｉｅｌｄＣｈｅｍｉ
ｃａｌＣＯ．（米国ニユーヨーク州ノーウイチ在）製）
。１５〜２０ポンドの圧力で３０分間１２１℃で加圧殺
菌した後のこの培地のＰＨは６．８±０．１であつた。

菌の接種された生産用培地は、要領１６５１の発酵タン
ク中で１０〜１２日間２８±１℃で発酵させた。

また該発酵培地には毎分培養液の０．４容量の割合で無
菌空気を通気した。またこの培養液は３００ｒｐ？の割
合で普通の攪拌器でかきまぜた。実施例 １８下記組成
の振盪フラスコあるいはタンクによる生産培地を使うこ
と以外は実施例１７の方法に従つてＡ−２８０８６抗生
物質を生産した。

※ＳｔａｌｅｙＤｅｘｔｒｉｎＮＯ．ｌｌ（Ａ．Ｅ．Ｓ
ｔａｌｅｙＣＯ．（米国イリノイ州デカツール在）製）
。

※※ＡｒＩｌｂｅｒＥＨＣ（ＡＩｎｂｅｒＬａｂＯｒａ
ｔ一０ｒｉｅｓ（米国ウイスコンシン州ジユニユウ在）
製）。※※※ＮＺＡｒｒ）ＩｎｅＡ（Ｓｈｅｆｆｉｅｌ
ｄＣｈｅｍｉｃａｌＣＯ．（米国ニユーヨーク州ノ゛−
ウイチ在）製）。実施例１７に記載した如く、加圧法に
より殺菌した後の培地のＰＨは６．４であつた。

実施例 １９ ストレプトマイシス・オーレオフアシエンスＮＲＲＬ８
Ｏ９２によつて生成されたＡ−２８０８６抗生物質複合
体の分離：実施例１７に記載した方法によつて得られた
全発酵液６０リツトルに希ＨＣｌを加えてＰＨ３に調節
した。

こうして出来た溶液を濾過助剤（Ｈｙ一ＦｌＯＳｕｐｅ
ｒ−Ｃｅｌｌ硅藻土の一種、ＪＯｈｎｓ−Ｍａｎ−Ｖｉ
ｌｌｅｐｒＯｄｕｃｔｓＣＯｒｐ・）を用いて濾過した
。分離した菌糸塊を３０′のメタノーノレで抽出Ｌ抽出
液には１．５６１＜９のＮａＨＣＯ３を攪拌しながら加
えて行つた。この抽出液を分離した後、菌糸塊を更に３
０１のメタノールで再度抽出した。両メタノール抽出液
を合わせ、メタノールを除去するために真空濃縮した。
残留水溶液約７ｊを希ＨＣｌでＰＨ７，５に調節した。
こうして得られた溶液を酢酸エチル７ｌづつで２回抽出
した。この酢酸エチル抽出液を合わせ、真空濃縮して油
状の残渣を得た。この油状残留物をアセトン１５００ｍ
１に溶解し、このアセトン溶液に水１５００ｍ１を添加
した。こうして出来た溶液を希ＨＣｌでＰｈ３に調節し
て１時間攪拌した。生成して出来た沈澱を濾別し、次い
でアセトン１５００ｍ１に溶解し、この溶液に水４００
ｍ１を加えた。こうして出来た溶液を結晶を析出させる
ために１６時間放置した。

生成した結晶を濾別し真空乾燥したところ、Ａ−２８０
８６因子ＡおよびＤならびにその他の結晶状の不純物を
含んだ粗結晶状の生成物７４９を得た。この粗結晶状生
成物４０ｇを約２５０ｍ１のベンゼンに溶解した。

次いでこのベンゼン溶液にシリカゲルカラムクロマトグ
ラフ法を適用した（９一×１２０−？カラム；Ｇｒａｃ
ｅ−ＤａｖｉｄｓＯｎ等級６２のシリカゲル使用）。カ
ラムは下記の各溶媒４０１づつで順次溶出した。１）ベ
ンゼン ２）ベンゼン：酢酸エチル （９：１） ３） 〃 〃 （４：１） ４）ベンゼン：酢酸エチル （７：３） ５） 〃 Ｉ／ （１：１）６）酢酸エチ
ル ７）メタノール これらから１１づつの分画を収集した。

各部分毎に溶出化合物を同定するために、バチルス・ズ
ブチリスの生育阻止試験法と薄層クロマトグラフ法とに
より検査を行つた。Ａ−２８０８６はベンゼン：酢酸エ
チル（４：１）で溶出された。Ａ−２８０８６因子Ｂは
ベンゼン：酢酸エチル（７：３）で溶出された。Ａ−２
８０８６因子Ａ（５Ｄとはベンゼン：酢酸エチル（７：
３および１：１）で得られた部分（１１９〜１５６まで
の部分）に溶出された。これらの部分を合わせ、真空下
で蒸発乾燥した。こうして得られた残渣をアセトン５０
０ａに溶解した。このアセトン溶液に水５００ｍ１を加
え、且つ、この溶液を希ＨＣｌでＰＨ３に調節し、１時
間攪拌した。生成した沈澱を濾別し、さらにアセトン５
００ｍ１一水１８０ｍ１から結晶させた。こうして出来
た結晶は濾別して真空乾燥したところＡ−２８０８６の
因子ＡおよびＤの混合物２０．１ｇが得られた。

実施例 ２０ 因子ＡおよびＤの単体の分離と精製： 実施例１８で得られたＡ−２８０８６の因子ＡとＤの結
晶状混合物１８６８９をベンゼン５０ｄに溶解した。

このベンゼン溶液にシリカゲルカラムクロマトグラフ法
（７一×１００一礪カラム：Ｅ．Ｍｅｒｃｋ等級６０の
シリカゲル、２３０メツシユ（ＡＳＴＭ）より細かい）
を適用した。カラムは次の溶媒で毎時９０ｍ１の流速で
順次に溶出した。１）ベンゼン１２１ ２）ベンゼン：酢酸エチル（９：１）混合物３）ベンゼ
ン：酢酸エチル（４：１）混合物１２！４）ベンゼン：
酢酸エチル（７：３）混合物５）メタノール１０１溶出
の進行を監視するためにバチルス・ズブチリスによるバ
イオオートグラフ法を薄層セルロースクロマトグラフ法
（ＭｅｒｃｋＤａｒｍｓｔａｄｔセルロース、アルミニ
ウム支持板上）と共に行つた。

用いた溶媒系は次のものである。水：メタノールリアト
ン（１２：３：１）。初めにＮＨ４ＯＨでこの溶液をＰ
ＨｌＯ．５にしその後、ＨＣＩでＰＨ７．５に調節する
。活性が検出される迄の１〜２１分を集め、以後２００
ｍ１づつ収集した。

Ａ−２８０８６因子Ｄだけを含んだ部分を合し、真空蒸
溜して残渣を得た。この残留物はアセトン一水（１：１
）から結晶した。結晶を分離して真空乾燥し、結晶状の
Ａ一２８０８６因子Ｄｌ４Ｏ〜を得た。僅かにＡ−２８
０８６因子Ａの混つたＡ−２８０８６因子Ｄを含む部分
を同じやり方で処理すると、さらに少量のＡ−２８０８
６因子Ａを含む結晶状のＡ−２８０８６因子Ｄが１５０
Ｔｆ１９得られた。

同様の方法でＡ−２８０８６因子Ａだけを含む部分を処
理し結晶状のＡ−２８０８６因子４．７９を得た。実施
例 ２１ 下記組成の斜面培地を使用すること以外は、実施例１６
の方法に従つて、Ａ−２８０８６抗生物質類を生成した
。

ＰＨはＫＯＨで７．０に調節。

またこの場合は菌を植えた斜面を約７日間２８℃で培養
した。

実施例 ２２ フラスコ培地にも生産用培地にも下記組成のものを使用
すること以外は、実施例１７の方法に従つてＡ−２８０
８６抗生物質類を生産した。

※ＳｔａｌｅｙＤｅｘｔｒｉｎ＃１１（Ａ．Ｅ．Ｓｔａ
ｌ一ＥｙＣＯ．（米国イリノイ州デカツール在）製）。
※※ＡｍｂｅｒＥＨＣ（ＡｍｂｅｒＬａｂＯｒａｔＯｒ
ｉｅｓ（米国ウイスコンシン州ジユニユウ在）製）。実
施例 ２３下記組成の培地を中間の第三段階の生育培地
に用いること以外は実施例２１の方法に従つて、Ａ−２
８０８６系抗生物質を生産した。

実施例 ２４ コタシジウム症抑制を目的としたＡ−２８０８６で改良
されたひな鳥飼料の製造：体重が速く増加するようにひ
な鳥を飼育するのに適したバランスのとれた高性能な飼
料を次のような配合処方で作成する。

ノ これらの物質は標準飼料配合技法に従つて混合する。

投与する水には制限を加えない。こうした餌で飼育した
ひな鳥はコクシジウム症感染から保護され、体重増加も
コクシジウム症のない該薬剤無添加の類似の餌で飼育さ
れたひなに匹敵する。実施例 ２５Ａ−２８０８６で改
善した肉牛の飼料の製造：ーバランスのとれた高性能の
肉牛の飼料は次のように調製される。

※１ポンド当りの含量：２，０００，０００国際単位の
ビタミンＡｌ２２７，２ＯＯ国際単位のビタミンＤ２な
らびに１％の油を付加した大豆飼料３８５．７９。

※※トウモロコシ製ウイスキ一を作る時に、穀粒１ポン
ドにつき２０，０００国際単位のｄ−α−トコフエリル
ーアセテートを含む可溶物を添加して穀粒を乾燥する。

該混合飼料は圧縮して小塊にする。

動物１頭あたり１５ポンドの飼料を日々の平均摂取の割
合とすると、この飼料は１日に動物１頭あたり約３００
即のＡ−２８０８６因子Ａを供給していることになる。
実施例 ２６ Ａ−２８０８６因子Ｄのアセチル・エステル誘５導体の
製造：抗生物質Ａ−２８０８６因子Ｄをピリジンに溶解
する。

この溶液に無水酢酸の計算量を添加する。この溶液を十
分に混和してから一夜室温に放置する。ついで、水を過
剰に加えて混合物を室温に数１時間放置する。生成する
沈澱を濾別し、水洗乾燥する。こうして得られた固形物
をアセトンに溶解し真空下で蒸発乾固して、Ａ−２８０
８６因子Ｄのアセチルエステル誘導体が得られた。実施
例 ２７〜３０１ 実施例２６の方法に従い、ピリジンの存在下でＡ−２８
０８６因子Ｄを無水プロピオン酸と反応させることによ
り、抗生物質Ａ−２８０８６因子Ｄのプロピオニル・エ
ステル誘導体を製造した。

実施例２６の方法に従い、ピリジンの存在下で２Ａ−２
８０８６因子Ｄを無水ｎ一酪酸と反応させることにより
、抗生物質Ａ−２８０８６因子Ｄのｎ一酪酸エステル誘
導体を製造した。実施例２６の方法により、ピリジンの
存在下でＡ−２８０８６因子Ｄを無水カプロン酸と反応
さ，せ、抗生物質Ａ−２８０８６因子Ｄのｎ−カプロイ
ル・エステル誘導体を製造した。

実施例２６の方法に従つて、ピリジンの存在下でＡ−２
８０８６因子Ｄを無水吉草酸と反応させ、抗生物質Ａ−
２８０８６因子Ｄのｎ−バレリル・エステル誘導体を製
造した。

実施例 ３１ Ａ−２８０８６因子Ｄのナトリウム塩の製造：一抗生物
質Ａ−２８０８６因子Ｄをアセトンに溶解する。

この溶液に等量の水を加えこの溶液のＰＨが約１１にな
るのに十分な５Ｎ水酸化ナトリウムを加える。得られた
溶液を約１時間攪拌し、次いで酢酸エチルで抽出する。
真空下で酢酸エチルを蒸発させるとＡ−２８０８６因子
Ｄのナトリウム塩が得られる。実施例 ３２〜３４ 実施例３１の方法を用いてＡ−２８０８６因子Ｄと５Ｎ
水酸化カリウムとから抗生物質Ａ一２８０８６因子Ｄの
カリウム塩を製造した。

実施例３１の方法を用いてＡ−２８０８６因子Ｄと飽和
水酸化バリウムとから抗生物質Ａ一２８０８６因子Ｄの
バリウム塩を製造した。実施例３１の方法を用いてＡ−
２８０８６因子Ｄと１Ｎ水酸化セシウムとから抗生物質
Ａ一２８０８６因子Ｄのセシウム塩を製造した。実施例
３５コクシジウム症抑制を目的としたＡ−２８０８６
因子を含有させたひな鳥飼料の製造：体重が速く増加す
るようにひよこを飼育するのに適したバランスのとれた
高性能な飼料は次の様な配合処方で調製される。

｝ Ｊ覧一 乙 υ υ υ υに〜 』 ▲ノ
ν・ ｖ 一これらの物質を標準飼料配合技法
に従つて混合する。

投与する水には制限を加えない。こうした餌で飼育した
ひな鳥はコクシジウム症感染から保護され、体重の増加
はコクシジウム症にかかつていない該薬剤無添加の類似
飼料で飼育されたひなに匹敵する。実施例 ３６ Ａ−２８０８６因子Ｄを含有する肉牛の飼料の製造：バ
ランスのとれた高穀物の肉牛用の飼料は次のように製造
される。

ビタミンＤ２および１％の油を加えた大豆飼料３８５．
７９。

※※トウモロコシ製ウイスキ一製造時に穀類１ポンドに
対して２０，０００国際単位のｄ−α一トコフエリルア
セテートを含む可溶物質を添加して穀粒を乾燥する。

該混合飼料は圧縮して小塊とする。

動物１頭につき１５ポンドの飼料を日々の平均摂取の割
合とすると、この飼料は１頭につき約３００即のＡ−２
８０８６因子Ｄを供給していることになる。

【図面の簡単な説明】

図面はすべて本発明の抗生物質Ａ−２８０８６の赤外吸
収スペクトルを示す図面であつて、第１図は抗生物質Ａ
−２８０８６因子Ａ１第２図は抗生物質Ａ−２８０８６
因子Ｂ、第３図は抗生物質Ａ−２８０８６因子Ａのアセ
チルエステル誘導体、第４図は抗生物質Ａ−２８０８６
因子Ａのプロピオニルエステル誘導体、第５図は抗生物
質Ａ一２８０８６因子Ａのブチルリエステル誘導体、第
６図は抗生物質Ａ−２８０８６因子Ａのバレリルエステ
ル誘導体、第７図は抗生物質Ａ−２８０８６因子Ａカプ
ロイルエステル誘導体、第８図は抗生物質Ａ−２８０８
６因子Ｄのそれである。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. １ （イ）ｉ−イノシツトおよびラムノースは利用する
   が蔗糖は利用せず、（ロ）１４日間で３０％以上のゼラ
   チンを液化し、（ハ）ミルクをペプトン化して白色また
   は黄色の生長環を生じせしめ、（ニ）因子Ａ、因子Ｂお
   よび因子Ｄからなる抗生物質Ａ−２８０８６複合体生産
   能を有する、ストレプトマイシス・オーレオフアシエン
   スに属する微生物。